— . NORMA TECNICA COLOMBIANA,
(©) icontec NTC-ISO 20481
2008-21
CAFE Y PRODUCTOS DEL CAFE.
DETERMINACION DEL CONTENIDO DE
CAFEINA —_
USANDO CROMATOGRAFIA LiQUIDA DE
ALTO DESEMPENO (HPLC).
METODO DE REFERENCIA
E: COFFEE AND COFFEE PRODUCTS. DETERMINATION OF
‘THE CAFFEINE CONTENT USING HIGH PERFORMANCE
LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC). REFERENCE METHOD
CORRESPONDENCIA:extanarma ein por acuecn IT documento
eroerec 150 200812008
DESCRIPTORES. cae aly sus patos deteranecon de cafes cafes
coomstegafa liqats dao desenpene HPLC cate verde café tosted; bei de
af en pli; eae sclible maze soluble café desceerado, cate ofzade
cco caf instante, ebida de caf to capuchin
Lesseruez
Ets or CONTEC Apa ol, DE Tal sr eo
obidesierescen | ade206-2907 PROLOGO
EI Insitulo Colombiane de Normas, Técnicas y Catiicacién, IGONTEC, es ol organismo
nacional de normaizacién, segin el Decreto 2269 de 199.
ICONTEC 0s una entdad de carictorprivado, sin drimo de luo, euya Misién es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y proteccién al consumidor. Colabora con el
Sector gubernamental y apoya al sector prvado del pals, para lograr ventajas competivas en
foe mereados informa y extn,
La representacién de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalizacién Téenica
‘sti garantizada por los Comités Técnicos y el periodo de Consulta Publica, este itimo
caracterizado por laparticipacin del pablico en general
LaNNTC-ISO 2048! fue ratiicada por e! Consejo Directive de 2010-04-21
Esta norma esta eujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
edo momento a las necesidades y engeneias aclvale,
‘A continuacién se relacionan las empresas que colaboraron en ol estudio de esta norma a
tuavés de su parteipacion en el Comité Técnico 83 Caley sus productos.
AGENCIA LOGISTICA DE LAS FUERZAS HUGO PARDO.
MILITARES INDUSTRIAS ALIADAS S.A.
ALMACENES GENERALES DE DEPGSITO _INDUSTRIA COLOMBIANA DE CAFE S.A.
ALMAGRARIO S.A, -COLCAFE-
ALMACENES GENERALES DE —_INDUSTRIAS QUANTIKLLTDA,
DEPOSITOS DE CAFE S.AALMACAFE- MICOTOX LTDA.
BOLSA NACIONAL AGROPECLIARIA S.A. PRODUCTOS KIBONY LTDA.
CAFE MONTANA ROJA LTDA. PROQUIFAR S.A.
GASALUKER SA, TOSCAFE OMAS.A.
FEDERACION NACIONAL DE
GAFETEROS DE COLOMBIA - FABRICA
DE CAFE LIOFILIZADO BUEN CAFE
‘Ademés de las anteriores, en Consuika Pliboa el Proyecto sa puso a consideracién de las
siguientes empresas:
ASINAL LTDA. CARULLA VIVERO S.A.
ASOCIACION NACIONAL GILCARCAFE SA.
DE
EXPORTADORES DE CAFE DE
COLOMBIA -ASOEXPORT-
ASOCIACION NACIONAL
INDUSTRIALES -ANDI-
BASIC FARM S.A,
CAFE Y COMPANIA . CAFE MARISCAL
CAFE SIERRAZUL
GAFE UNIVERSAL S.A,
Cl, COLOMBIAN BOGOTA COFFEE
Gil, TRILLADORA DE CAFE POPAYAN
Urb,
GILRAGAFE &.CiA. SCA.
COLOMA LTDA.
GOOPERATIVA AGRICOLA CAFETERA -
COAGROCAFE-
CUNDICAFE LTDA. DECAFE S.A,
DIREGION DE IMPUESTOS Y ADUANAS
NACIONALES DIAN.
ECHEVERRI Y LOPEZ LTDA.
ECO BIO DE COLOMBIA.
EMPRESA EXPORTADORA COLOMBIANA
DE CAFE SA - ECOCAFE SA.
ESPECIALISTAS DEL GAFE S.A,
EXPOGAFE S.A,
EXPORTADORA DE CAFE CONDOR S.A.
-EXPOCONDOR-
FUNDACION UNIVERSIDAD DE LA
‘SABANA
J, ROMERO INGENIERIA
MEDIDORES TECNICA EQUIPOS S.A.C.L
MINISTERIO DE DEFENSA NACIONAL.
NESTLE DE COLOMBIA S.A.
PROFESIONALES —QUIMICOS oY
FARMACEUTICOS LTDA.
PROYECTOS —_Y__ SOLUCIONES
INDUSTRIALES PROYSOLIN SAS.
SECRETARIA” DE SALUD DE.
CGUNDINAMARCA,
SKN CARIBECAFE LTDA.
TOSTADORA DE GAFE DON PAGO
TRILLADORA COMERCIALIZADORA.
BROGESADORA COLOMBIANA DE CAFE
‘TULA EXPORTADORA DE CAFE S.A,
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
‘SEDE MEDELLIN
CONTEC cuenta con un Genito de Informacién que pone a disposicién de los interesados.
‘normas internacionales, regionales y nacionalesy ols documentos relacionados.
DIRECCION DE NORMALIZACION NORMA TECNICA COLOMBIANA _NTC4SO 20481
‘CONTENIDO
OBJETOY CAMPO DE APLICACION..
2, REFERENCIAS NORMATIVAS. cece
3. PRINCIPIO...
A REACTIVOS enn
5. EQUIPO
6. MUEST REQ. eee
7. PREPARACION DE LAS MUESTRAS DE ENSAYO ...ccccccecwevnenceel
74 CAFE VERDE..
1.2. CAFE TOSTADO weer
73 CAFE SOLUBLE
74 BEBIDAS MEZCLADAS.
8 PROCEDIMIENTO veer
9.1 DETERMINACION OPCIONAL DE LA MATERIA SECA EN EL CAFE
82 PORCION DE ENSAYO. ener
83 EXTRACCION DE LA CAFEINA cc ceseceerenenncn
84 DETERMINACION.
9. CALCUL. nnn NORMA TECNICA COLOMBIANA _NTC+1SO 20481
9.1 CONTENIDO DE CAFEINA EN LA MUESTRA...
92 DETERMINACION OPCIONAL DEL CONTENIDO DE CAFEINA
ENLAMUESTRA, ENBASE SECA...
10. PRECISION.
10:1 ENSAYO INTERLABORATORIO.
402 REPETIBILIDAD......
40.3 REPRODUCIBILIDAD
11. INFORME DE ENSAYO.
BIBLIOGRAFIA.. on
4"
DOCUMENTO DE REFERENCIA.... sence
ANEXO & (Informative)
DATOS DE PRECISION DEL ESTUDIO DE VALIDACION EN LA DETERMINACION
DE CAFEINA EN EL CAFE Y LOS PRODUCTOS DEL CAFE.
‘Tabla 1. Medias, limites de repetiilidad y de reproducibilidad NORMA TECNICA COLOMBIANA _NTC4SO 20481
‘CAFE ¥ PRODUCTOS DEL CAFE.
DETERMINACION DEL CONTENIDO DE CAFEINA
USANDO CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTO DESEMPENO (HPLC).
METODO DE REFERENCIA
1. OBJETOY CAMPO DE APLICACION
Esta norma oxpecifica un méodo de cromatografialiquida de alto desemporio (HPLC) para la
determinacidn del contenido de caleina en calé verde, café tostado, café soluble, sean estos
‘sn descafeinar regula) 0 descaleinado, y mezclas inctanineas de productos del ealé (por
«jemplo, mezcla de calSlachicoria, obebida de cafe tipo capuchino).
2. REFERENCIAS NORMATIVAS
Los siguientes documentos relerenciados son indispensables para la aplicacién de este
documento. Para referencias fechadlas se aplica tnicamenta la edcion cada. Para referencias
no fechadias, aplica la itima edicson del documento referenciado (incidas las enmiendas).
NTO.2325, Café verde, Determinacién dela pérdila de masa a 105 °C (ISO 6573)
INTC 2737, Industias agricolas. Café instanténeo. Determinacién de la périda de masa a 70 °C
bajo presionreducida (ISO 3728).
ISO 11817, Roasted Ground Coffee. Determination if Moisture Content. Karl Fischer Method
(Reference Method).
180 2606, Water for Analytica Laboratory Use. Spocfcation and Tast Methods.
3. PRINCIPIO
La cafeina se extrae de musstras con agua a 90 °C en presencia de éxido de magnesio.
Después de fitrada ef contenido de cafeina del extacto se determina mediante HPLC en una
columna RP-18 usando elusion icra con detecoién UV a aproximaciamenta 272 nm.
Cuando sea apropiado, el contenido de cafeina se puede expresar en base seca lo cual
require la datorminacsén de humedad con un métedo normalizade adoouado.
1 do 12 NORMA TECNICA COLOMBIANA _NTC4SO 20481
4. REACTIVOS
‘A menos que se especifique algo diferente, use solamente reactvos de grado analico
reconooido,y solamente agua conforme con los requsitos de la norma ISO 3686, Grado 1
41 Metanol, grado HPLC.
42 Osido de magnesia (MgO), pesado grado alto.
NNOTA.__£1 so do MgO oe important para a vida Gt da coluna ana, oepscmont para café vos. La
{atta go 1490 aaa dopense ot ein del ip oe prouso oe cle. Les ales ae ecstn Sel ATaIO A Se
‘stureron usanao a poceament suo chia osere nema.
La presencia de pices de interferencia en el cromatagrama se pueden deber a adsorcién
inapropiada. En estos casos, someta a examen ol MgO utlizado.
43 Cofeina (1,37-4imotkantina; 1,8,7-timeti-tH-purina. 2.8 (3H.7H)- dona:
metiteobromina; CsHicNOs), anhiro puro.
44 Fase mévil, raccién en volumen de 24 % de metanol en agua.
Precauciones de sequrdad. Utiice quantes, proteccién para los ojos, y manipule los reactivos
fen una cabina para extraccién de vapores..
Transtiera 240 ml de metanol (véase el numeral 4.1) a un matraz volumético aforado 1 L
(vease ef numeral 5.11). Complete a volumen con agua y paseo a través de un fio de 0.45 jm
(véase el numeral 5.2)
Norham sn ge mean ep tert de ein ep ta
45 Soluciones de cafeina normalizadas
45.1 Solucion patron correspondiente a 200 mg!
ese (0,200 + 0.001) g de cafeina anhidra (véase el numeral 4:3) en un mataz volumético
alorado a 1 | (véase el numeral 8.11). Agregue suliciente agua tba para lenar ef matraz hasta
la mitad. Agite para disor la calsina, enfiea temperatura ambiente, complete a volumen con
agua y mezde
|Lasolucién es estable a + 4°C durante un mes. Almacene en un rerigerador.
452. Solucion normalizada diluida para calé sin descafeinar, correspondiente a 40 mg/l
aproximadamente
Con una pipota (véaso el numeral 512) tome 60 ml de solucén palrén normalizada do eafeina
{(ySaee ol numeral 4.5.1) y Rvela aun mraz vluméticn aforado de 250 ml (vase el numeral 511),
‘Complete a volumen con agua y mezcl. Prepare ciaamerte una nueva soluciin normaizada did.
45.3. Solucién normalizada diluida para café descafeinado, correspondiente a 4 mg/l
aproximadamente
Con una pipeta (véase el numeral 512) tome 5 ml de soluciSn patrén normalizada de cafeina
(wéage el numeral 4.5.) ¥ vielalos en un mataz volumético alorado de 250 mi (vease NORMA TECNICA COLOMBIANA _NTC-ISO 20481
numeral 5.17). Complete a volumen con agua y mezcle. Prepare diariamente una nueva
Seluein normalizada diuida.
454 Grafica de calbracion
El uso de una grifica de calbracién de tres a cinco puntos es opcional. El rango de
concentracén recomendado es § mgil a 25 mg/l para café regulary 0.6 mgl a 2.5 mgll para
mmuseiras descaleinadas,
5. EQUIPO
Elequipo usual de laboratara,y al siguiont:
5.1 Balanza analtica con capacidad para pesar con una precisin de + 0,1 ma.
5.2 _Filtro de membrana con tamafi de pero de 0.45 um. para lafitracién de fases méviles y
tractos de mostra diuidos.
53 _Cromatégrato liquido de ato desempeto, equipado para realizar una elucién iseritica,
fan un dotector UV ajustado a 272 nm (270 nm a 280 nm) o detector do fitros (areglo de
‘diodos) (254 nm), y con un sistema de recoleeciénintegraciin de dates. El uso de un
‘deogasificador as opeional.
54 Columna eromatogréfica para HPLC con una langitud minima de 125 mm, empacada
on material C18, preferblomento particulas esférieas de 5 ym, con una oficioncia de
Separacién de al menos § 000 platos teéricos. El numero de plaos t26icos, Nears. dé la
columna, se puede calcular determinando la forma del pico después de la inyeosiin de la
solucién normalizada de cafeina, mediante la Ecuacin (1)
enone
= esettenpe ae rtancton ce ico, en aguas,
W = os oarcho ot po, on soguntos a una ats moda dopo.
5.5 Agitador magnético con calefactor y baho de agua,
56 Bano ulrasénica
5.7 Jeringa de microivo.
5.8 Molino para café adecuado para moler granos de café tostado.
15.9. Molino con rueda dentada, con chaqusta de enitiamionto © moline analtico con
ails ychaquea de erfiamorto, 0 cualquier ovo dspntiveadecuo para moer anos
5.10 Tamiz de tamao normal con aberturas de 630 um, que cumpla los requisitos de la
rrorma ISO 565, sere R20, NORMA TECNICA COLOMBIANA _NTC-1S0 20481
5.11. Matraces atorados con capacidades de 1 ly 250 mi, que cumplan los requisites de la
1S0 1082, clase A
15.12 Pipotas con capacidades do 6 ml y 60 mi, quo cumplan los roquiitos do la NTC 2082,
Chase A
6. MUESTREO.
‘Se deboria enviar una muestra representatva al laboratorio, y esta no deberd sur dano
durante l wansporte o almacenamiento.
El muestreo no es parte del método especticado en la presente norma. El procedimiento de
‘muesiteo se debe someter a acuerdo entre las partes inietesadas,
‘Almacene la muesta de ensayo de manera que se evite el deterioro y cambio en su
‘composicin
En caso de bebidas en polvo mezcladas. se requiere un minimo de 50 g del producto (para
‘empaques por porcién: minimo cinco porciones)
7. _ PREPARACION DE LAS MUESTRAS DE ENSAYO.
71 CAFE VERDE
Mucla(véase ol numeral 5.9) granos de café verde de manera que mée de una fraccin del 50%
fen masa pase a través del tamiz (véase el numeral 5.10). Lusgo tome la muestra de ensayo del
‘ealé malo total, bien mezclado,
72 CAFETOSTADO
‘Mola (véaso ol numeral 5.8) granos do café testado de manera que mis da una fraccién dol
150 % en masa pase a vavés del tamiz (véase el numeral 5.10). Use el café tostado y molido de
fempaques comerciales que no haya sido somelido a talamiento adcional, excepto
hhomogensizacién.
73 CAFE SOLUBLE
[No se requiere moler el calé soluble.
7.4 BEBIDAS MEZCLADAS
Homogeneice as bebidas mezcladas de café en povo, usando el motno (wéase ol numeral 5.8)
inmediatamente antes dela extracoén, para evi segregacién, NORMA TECNICA COLOMBIANA _NTC-1S0 20481
8. PROCEDIMIENTO
4 DETERMNACION OPCIONAL DE LA MATERIA SECA EN EL CAFE (vinse el
numeral 9,
CGalcule el contenido de materia seca en el café, que se va a usar en el numeral 8.2, a parr det
Contato de humedad dotorminado on una porcin de la mussira de ensayo (véaso el numeral 7)
se acuerdo con:
= NTC 2395 para café verde,
NTC 2737 para café instantinoo,
180 11817 para café tostado.
Para otros tipo de café y derivados de éste, la determinacién del contenido de materia seca se
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