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    Métodos y estrategias de investigacion let het Reus NY Bers teagnl veenn 1m Ablacion experimental m Registro y estimulacién = Métodos neuroguimicos Evaluacion de los efectos de la actividad neural Deteccién de neuconas que producen comportamentales del dafio cerebral Registro de la actividad neural sustanclas neuroquimicas especificas Produccién de lesiones cerebrales Registro de la actividad metabolica Localizacion de receptores especificos Cirugia estereataxica y sinaptica del cerebro Resumen intermedio Métodos histol6gicos Medida de las secreciones cerebrales _-_Métodos genéticos Marcado de conexiones neurales Estimulacion de la actividad neural __—_=Estudios con gemelos Estudio del cerebro humano Ffectos comportamentales dela Estudios sobre adopeion invivo cestimulacion eléetrca cerebral Mutaciones dirigidas Resumen intermedio Resumen intermedtio Resumen intermedio 144 Capitulo 5: Métodos y estrategias de investigacin Como se comenté en el capitulo 4, hace unos veinte afios vatios jovenes se inyectaron una droga ilicita que estaba contaminada con MPTP, una sustancia que destray6 las neuronas dopaminérgicas de su sistema nigroestriatal Consecuentemente presentaron un cuadyo grave de Par~ kinson. El trasplante de neuronas fetales, un método neu roquirtixgico experimental para tratar el Parkinson, ha resultado ser prometedor. El fundamento de este proce- dimiento es el siguiente: los sintomas de Parkinson, ya sean los de la enfermedad de Parkinson o los de los efec- tos toxicos del MPTP, se deben a la falta de dopamina en los ganglios basales —especialmente en el néicleo caudado yel putamen—. Por el momento no se puede inducir en el encéfalo la regeneraci6n de las neuronas dopaminérgi- cas del sistema nigroestriatal. Sin embargo, si se pueden implantar neuronas secretoras de dopamina en el niicleo caudado y el putamen, y si éstas sobreviven y segregan dopamina, entonces tal vez los sintomas de Parkinson dis- minuyan, Dado que las neuronas implantadas han de ser saludables y resistentes y no desencadenar la reaccién del sistema inmune del receptor, lo més razonable es obte- nerlas de fetos humanos abortados —o, quiza algin dia, de cultivos de hemocitoblastos (células madre) que han sido inducidos a convertirse en neuronas secretoras de dopamina—. ‘Al menos a uno de los afectados por la intoxicacion con MPTP se le realiz6 este tipo de trasplante (llamémosle Sx. B.), Antes de que tuviera lugar la intervencién, se le I estudio de Ia fisiologia de la conducta implica el E esfuerzo de cientificos de muchas disciplinas cien- tifices, incluyendo la fisiologia, la neuroanatomia, la bioquimica, la psicologia, la endocrinologia y Ia histologia. Llevar a cabo un proyecto de investigaci6n en Neurocien- cia comportamental requiere dominar muchas técnicas expe- rimentales. Puesto que diferentes procedimientos levan a ‘menudo a resultados contradictorios, los investigadores han de estar familiarizados con la ventajas y ls limitaciones de Jos métodos que emplean. La investigacin cienifica conlleva tun proceso de cuestionarse cuales la naturaleza de los fend- ‘menos. E| método que se utiliza enmarca la cuestién. Con frecuencia se obtiene una respuesta que extrafa, hasta que és tarde se eae en la cuenta de que no se estaba planteando la pregunta correcta. Como se ver, las mejores conclusio- nes sobre la fiiologia de la conducta no se extraen de un Linico experimento, sino de un programa de investigacién que permite comparar los resultados de estudios que abordan el mismo problema con métodos diferentes, Los investigadores disponen de una enorme —y sorprendente— serie de métodos de investigaci6n. Si se presentara aqui tan s6lo un inventario de ellos, no seria de sorprender que el lector se perdiera —o simplemente perdiera interés—. En vez de ello, se presentardn inica- inyecto L-dopa radiactiva, sustancia precursora de dopa- mina. Luego, una hora més tarde, se le condujo a una pequefia sala en la que habia un equipo de TEP. Se le puso la cabeza en el interior del aparato y durante varios minu- tos la maquina obtuvo datos de los positrones que se emi- tian, en forma de particulas radioactivas, en su perturbada cabeza. Unas cutantas semanas despues, el Sr. B. ingresé en el hospital para su intervencién quirirgica. Los téenicos extirparon las neuronas dopaminérgicas de la sustancia negra de varios fetos abortados y las prepararon para tras- plantarlas al cerebro del Sr. B. Este estaba anestesiado y el cirujano le hizo unas incisiones en el cuero cabelludo para dejar al descubierto partes del craneo. Unié el arma- z6n de un apatato esteteotaxico a su créneo, tomé algu- nas medidas y luego taladr6 varios orificios. Utiliz6 el aparato estereotixico para dirigir la inyeccién de neuro- nas fetales al nticleo caudado y el putamen del Sr. B, Una vez realizada la inyecci6n, el cinujano retiré el armazén estereotaxico e hizo puntos de sutura en las incisiones que habia hecho en el cuero cabelludo. a operacion tuvo un éxito considerable: el Sr. B. recuperé en gran parte el control motor. Poco mas de un afio después se le volvi6 a inyectar L-dopa radioactiva y de nuevo se le puso la cabeza en el aparato de escaner por TEP. Los resultados del segundo escaner revelaron lo que significaba su recuperacidn: las células habian sobrevivido yy estaban segregando dopamina. mente los procedimientos mas importantes y utilizados con mayor frecuencia, estructurados en toro a unos cuan- tos problemas que han estudiado los investigadores. De esta manera, deberia resultar mas facil darse cuenta del tipo de informacién que aportan los diversos métodos de Investigacion y entender sus ventajas y desventajas. Tam- bién permitira describir las ticticas de las que se valen los investigadores cuando siguen examinando los resultados de un experimento disenando y realizando otro jl i Ablacién experimental Uno de los principales métodos de investigaci6n utiliza- dos para estudiar las funciones cerebrales requiere destruir una parte del eneéfalo y evaluar la conducta subsecuente del animal, Este método se denomina ablacin experimental ablacién experimental Extirpacion o destruccin de una parte del encéfalo de un animal de laboratoro; supuestament, las funciones que ya no pueden ejecutarse son las que contslaba previamente la regién, Ablacion experimental 145 (del término latino ablatus, llevarse>). En la mayoria de los casos, dicha técnica no implica extraer el fejido cerebral, en vez de ello el investigador destruye algo de tejido y lo deja en su sitio. La ablacion experimental es el mas anti- guo de los métodos utilizado en Neurociencia, y sigue siendo uno de los mas importantes. Evaluacién de los efectos comportamentales del dano cerebral Una lesifn es una herida o un traumatismo, y un inves- tigador que destruye una parte del cerebro por lo gene- ral describe el daiio como una Lesién cerebral. Los experimentos en los que se dafia una parte del encéfalo y después se observa la conducta del animal se Haman estudios de lesi6n. Su fundamento teérico es que el fun- cionamiento de un rea cerebral puede deducirse basan- dose en las conductas que el animal ya no puede realizar después de que se haya destruido dicha area. Por ejem- plo, si después de que se haya destruido parte del encé- falo un animal ya no puede Hevar a cabo tareas que requieren poder ver, se puede concluir que el animal esta ciego —y que el érea dafiada desempena alguna funcién en la vision— Se ha de ser precavido al interpretar los efectos de las lesiones cerebrales. Por ejemplo, écdmo se puede estar seguro de que el animal esta ciego? éChoca contra los objetos, o no logra recorrer un laberinto en direcci6n a la luz que indica donde esta la comida, o ya no con- trae las pupilas ante la luz? Un animal puede chocar contra los objetos debido a una deficiente coordinacién motora, puede haber perdido el apetito de comer (y por tanto su motivacién para recorrer el laberinto), o puede ver bastante bien pero haber perdido los reflejos visua- les. A menudo los investigadores pueden equivocarse Hace afios pensaban que las ratas albinas eran ciegas, (No o son). Reflexionemos sobre ello: écomo se comproba- ria si una rata puede ver? Recuérdese que las ratas tie- nen vibrisas (bigotes) que pueden utilizarse para detectar una pared antes de chocar con ella o con el borde de una mesa antes de caerse de ésta. También pueden encon- trar su camino en una habitacion guidndose por pistas olfativas. Qué es en realidad lo que se puede aprender de los estudios de lesion? E] objetivo es descubrir cuales son las funciones que realizan las diferentes regiones cerebrales y luego entender como se combinan estas funciones para dar lugar a determinadas conductas. La distinci6n entre fancién cerebral y conducta es importante. Los circuitos que hay en el encéfalo efectiian funciones, no conduc- tas, Ninguna region cerebral o circuito neural es el nico responsable de una conducta; cada regién efectiia una funcion (0 una serie de funciones) que contribuye a la ejecucién de la conducta. Por ejemplo, el acto de leer implica funciones que requieren controlar los movi mientos oculares, enfocar la lente del ojo, percibir reconocer palabras y letras, comprender el significado de las palabras, etc. Algunas de estas funciones partici- pan también en otras conductas; por ejemplo, el control del movimiento de los ojos y del enfoque se necesitan para cualquier tarea que requiera mirar; y los mecanis mos cerebrales que se utilizan para comprender el sig- nificado de las palabras participan también en la comprensién del habla. La tarea del investigador es com- prender cuales son las funciones que se necesitan para evar a cabo una conducta especifica y determinar cua- les son los circuitos de neuronas cerebrales responsables de cada una de’esas funciones. Pongamos un ejemplo de cémo los investigadores intentan deducir la naturaleza de las funciones realiza- das por diversas partes del cerebro. Los circuitos neurales que se localizan en la corteza que recubre el lébulo parie- tal ejecutan funciones relacionadas con la percepcin espacial y la memoria. Las lesiones en esta regién alte- ran la capacidad de las personas para leer o dibujar mapas, para recordar la localizacion de objetos que aca- ban de ver, etc. Ademas, quienes sufren lesiones en el Iobulo parietal suelen tener dificultades para hacer cél- culos aritméticos. A primera vista, no parece haber una relaci6n entre este déficit y las funciones espaciales del lobulo parietal, pero en realidad estan relacionados casi con toda seguridad. Para demostrarselo a si mismo, intente multiplicar 55 por 12 sin papel ni lapiz. Cierre los ojos y dediquese a ello durante un rato. Intente ana- lizar cémo lo hizo. La mayoria de las personas dicen que intentan ima- ginarse los niimeros puestos uno encima del otro, como los estarian si utilizaran papel y kipiz. En otras palabras, «escriben» el problema en su mente. Al parecer, la lesion. del lébulo parietal dificulta poner cada mimero en un lugar determinado en un «espacio» imaginario y recor- dar en qué lngar estaba. La interpretacion de los datos de los estudios de lesién. se complica por el hecho de que todas las regiones del encé- falo estén interconectadas. Supongase que uno conoce bien las funciones requeridas para que se lleve a cabo una determinada conducta. Descubre que la lesion de la estruc- tura X altera una determinada funcion. ¢Ha de concluir for- ‘zosamente que los circuitos neuronales localizados en dicha. estructura realizan una funcién esencial en esa conducta? Por desgracia, no. Puede que, de hecho, la funcién que inte- esa sea llevada a cabo por circuitos neurales que se loca- lizan en otra parte del encéfalo. Puede que el daiio de la SSSR ‘estudio de lesi6n Sindnimo de ablacién experimental. orn annneEEEnnneemineememeenaiil 146 Capitulo 5: Métodos y estrategias de investigacién estructura X tan s6lo interfiera en el normal funciona- miento de los circuitos neurales de Ia estructura X: ‘Véamos un ejemplo concreto para ilustrar este incon- veniente. [a lesion de una parte del cerebro (el érea sep- tal) altera por completo la conducta maternal de un roedor hembra. El animal no construye un nido para sus crias ni las agrupa a todas en un lugar y las alimenta, Como consecuencia, éstas acaban dispersas por toda la jJaula, y finalmente pueden morir de hambre, a menos que cl experimentador las rescate, entregindoselas a una madre adoptiva. {Cual es la funcién del area septal, que resulta tan vital para la conducta maternal normal? Lo que sucede es que una conexién entre el area septal y la for- maci6n hipocampal controla la actividad de esta tiltima activa o desactiva ciertas funciones del hipocampo— Entre tales funciones figuran algunas de las necesarias para que los animales perciban su localizacién en el espa- cio. Cuando se lesiona el area septal, dichas funciones quedan permanentemente desactivadas. Asi pues, es bas- tante probable que el que nose den las conductas de cons- trucci6n de nido y de agrupar a las crias se deba a la desorganizaci6n de Ia percepci6n espacial de la madre. El érea septal no interviene directamente en la percep- cién espacial, pero debido a que controla circuitos neu- rales situados en el hipocampo, su lesion afecta a la conducta maternal. Lesién por radiofrecuencia. Las flechas sefialan las mindsculas lesiones producidas por el paso de corriente de radiofrecuencia a través de los extremos de electrodos de acero inoxidable, situados en el niicleo preéptico medial del encéfalo de una rata (Secci6n frontal, tincién de cuerpos celulares.) (De Turkenburg, 2. L; Swaab,D. Fz Endert, E. Louwerse, A. Ly van de Poll NE, Brain Reseach Bulletin, 1988, 21, 215-224.) Producci6n de lesiones cerebrales £Como se efectian las lesiones cercbrales? Destruir las partes del encéfalo que se encuentran justo debajo del craneo es facil: se anestesia al animal, se corta el cuero cabelludo, se extrae una parte del craneo y se corta la duramadre, dejando al descubierto la corteza. Se puede utilizar entonces un dispositivo de succion para aspirar el tejido cerebral. El tejido cerebral se extirpa situando una pipeta de vidrio sobre la superficie del encéfalo y suc: cionando el tejido mediante una bomba de vacio unida a la pipeta. Lo més frecuente es que la regién que se quiere des- truir esté oculta en el interior del encéfalo. Las Iesiones cerebrales de regiones subcorticales —regiones locali- zadas debajo de la corteza— se realizan por lo general haciendo pasar una corriente eléctrica através de un elec- trodo de acero inoxidable que, salvo en la punta, esta cubierto de un barniz aislante eléctrico, Se guia el elec- trodo siguiendo un método estereotaxico, de modo que su extremo legue al lugar adecuado. (La cirugia estere otaxica se describe en el proximo subapartado). Luego, se conecta el aparato de producir lesiones, que produce una corriente de radiofrecuencias (RF) —corriente alterna de frecuencia muy elevada—. El paso de la corriente a través del tejido cerebral produce una alta temperatura, que destruye las células cercanas a la region que rodea la punta del electrodo (véase la figura 5.1) Las lesiones producidas con este método destruyen todo lo que se encuentra en la vecindad de la punta del electrodo, incluyendo los somas neuronales y los axones de las neuronas que atraviesan la regién. Un método mas selectivo de producir lesiones cerebrales es emplear un aminoacido excitatorio como el dcido cainico, que destraye Jas neuronas estimulindolas hasta que mueren. (Como se vvio en el capitulo 4, el acido cainico estimula los recep. tores glutamatérgicos). A este tipo de lesiones se les llama lesiones excitotéxicas. Cuando se inyectaa través de una cénula un aminoécido excitatorio en una region cerebral, Jasustancia destruye los somas celulares vecinos pero res. petaa los axones de las diferentes neuronas que pasan por los alrededores (véase la figura 5.2). Esta selectividad le permite al investigador determinar si los efectos compor- famentales de la destruccién de una estructura cerebral concreta se deben a la muerte de las neuronas que alli se localizan o a la lesi6n de los axones de paso. Por ejemplo, unos investigadores descubrieron que las lesiones por RF de una region determinada del tronco del encéfalo abo- lian el sueiio REM, por lo tanto creyeron que esa region Lesin excitot6xica Lesign cerebral producida por inyeccién intracere- bral de un aminoscido excitatoro, tal como el cido canico. eR Lesién excitotoxica. (a) Seccion a través del hipocampo del encéfalo de una rata normal. (b) Lesion producida por la infusion de un aminodcido excitatorio en una region del hipocampo. Las puntas de flecha sefalan los limites de la recién en ta que se han destruido las neuronas. (Cortesia de Genno Roozendaal, Universidad de California, Irvine) participaba en la generacién de dicha fase del suefo. (EL suefio REM es la fase del suefto en Ta que tienen lugar los ensuefios). Pero estudios posteriores demostraron que ‘cuando se utiliza 4cido cainico para destruit las neuronas que contiene esa region, el sueio de los animales no resulta afectado, De modo que las lesiones por RF debie- ron alterar el sueiio al destruir los axones que atraviesan el area. Se dispone de métodos para producir lesiones toda: ‘via mis especificos. Por ejemplo, la G-hidroxidopamina (GHD) ¢s similar a las catecolaminas noradrenalina y dopamina. Debido a esta semejanza, la 6-HD es captada por los transportadores de moléculas de los axones y los botones terminales de las neuronas dopaminérgicas y noradrenérgicas. Una vez dentro, la sustancia intoxica y destruye las neuronas. Asi, la G-HD puede inyectarse directamente en regiones determinadas del encéialo para Ablacon experimental 147 climinar poblaciones especificas de neuronas dopami. nérgicas y noradrenérgicas. Reparese en que cuando se producen lesiones sub: corticales mediante corriente de RF a través de un elec- trodo o por infusién de una sustancia quimica a través de ‘una cinula, siempre se eausan dafos adicionales en el ‘encéfalo. Cuando se introduce un electrodo 0 una cénula ‘en el enceéfalo para alcanzar el objetivo que se pretende, inevitablemente se produce un cierto grado de lesion incluso antes de activar el dispositive de lesion 0 de ini- iar la infusi6n. Por lo tanto, uno no se puede limitar a comparar la condueta de los animales lesionados con la de animales de referencia no operados; el dato asociado, producido en las regiones cerebrales situadas por encima de la lesion puede, de hecho, ser lo que causa alguno de los deficits comportamentales que se observan. Lo que se hace es operar a un grupo de animales y producitleslesio- nes falsas (ska). Para ello, se anestesia a cada animal, se le coloca en el aparato estereotaxico (descrito més ade~ Tante), se le abre el cuero cabelludo, se le trepana el cri- neo y se inserta el electrodo 0 la canula, haciendo que penetren hasta la profundidad adecuada. En otras pala- bras, se hace lo mismo que se haria para producir la lesién, excepto activar el dispositive de lesion o iniciar la infu- sion. Este grupo de animales sirve de grupo de referen- cia; sila conducta de los animales con una lesién cerebral cs diferente de la de los animales de referencia con una lesién falsa, se puede conchuir que las lesiones son respon- sables de los deficits comportamentales. (Como se puede advertir, una lesion falsa cumple el mismo cometido que un tratamiento placebo en los estudios farmacolégicos) La mayoria de las veces, los investigadores producen lesiones cerebrales permanentes, pero en algunas ocasio- nes resulta provechoso impedir temporalmente la activi dad de una determinada regién del encéfalo, La forma mis sencilla de hacerlo es inyectar un anestésico local o un far ‘maco llamado muscimolen el lugar adecuado del encéfalo. El anestésico bloquea los potenciales de accidn en los axones que entran o salen de esa regién, y es eficaz para producir una lesion temporal (llamada corrientemente lesion cerebral reversibld. E] muscimol, un farmaco que est mula los receptores GABA, inactiva una region del en- céfalo inhibiendo a las neuronas alli localizadas. (Se recordara que el GABA es el principal neurotransmisor inhibitorio en el encéfalo). Las lesiones reversibles tam: bién pueden conseguirse enfriando el tejido nervioso lo oe 6 hidrexidopamina (6-H) Sustancia que es captada selectivamente por los axonesy los hotones terminales de as rneuronae noradrenérgicas o éopaminérgicas y acta como wna tina, ddaidndolas © destruyéndolas Lesfon flsa Procedimiento xplacebo» que reproduce todos os pasos te realizaciOn de una lesion cerebral salvo el que realmente la causa. EERE 148 Capitulo 5: Métodos y estrategias de investigacion Criodo, instrumento que produce lesiones temporales en la corteza cerebral. El instrumento se implanta quirirgicamente entre el craneo y el encéfalo, y a lesién temporal puede producirse mientras el animal esta despierto y alerta. Se hace Circular un liquido frio a través de los tubos de acero ‘noxidable. El criodo que se ve en la fotografia se colocé en tuna region de la corteza visual de asociacion del hemisferio ‘aquierdo del encéfalo de un mono. (Cortesta de James Horel, SUNY Upstate Medical Center suficiente para suprimir le actividad neural. La figura 5.3 muestra un instrumento llamado criodo, el cual puede uti lizarse para producir lesiones temporales en una region de la corteza cerebral del encéfalo del mono. El utensilio consiste en una serie de tubos de acero inoxidable a tra- vés de los cuales puede hacerse circular un liquido enfriado. Se implanta entre el craneo y la superficie del encéfalo (véase la figura 5.3). Cirugia estereotaxica éCémo puede situar la punta de un electrodo 0 una cAnula en un luger preciso del interior del encéfalo de un animal? La respuesta es mediante cirugia estereotaxica. Steretaxis significa literalmente «disposicion s6liday; en concreto, se refiere a la capacidad de localizar objetos en elespacio. Un aparato estereotéxico consta de un soporte, que inmoviliza la cabeza del animal en una posicién estable- ida, y un brazo que desplaza el electrodo o la ednula en ee irugia estereotsxice Cirugia cerebral que utiliza un aparato estore. otixico para situar un electrodo 0 una cinula en un lugar especifico el encéfalo. bregma Confluencia de las suturas sagital y coronal del créneo: suele utilizarse como punto de referencia en ciruaia estereotéxica cetebral, re los tres ejes espaciales a lo largo de distancias cuantifica bles. No obstante, para realizar una intervencién estereo- téxica primero se ha de consultar un atlas estereotdxica. El atlas estereotaxico No existen dos encéfalos de animales de una determi- nada especie que sean completamente idénticos, pero la semejanza entre los individuos es suliciente para predecir Ja Jocalizacion de una estructura cerebral concreta respecto a las caracteristicas externas de la cabeza. Por ejemplo, un iiicleo subcortical de la rata puede estar a tantos milime ‘ros en los planos ventral, anterior y lateral de un punto for- mado por la confluencia de varios huesos del erineo. La figura 5.4 muestra dos vistas del créneo de una rata: un dibujo de la superficie dorsal y, debajo, una vista sagital medial {véase a figura 5.4) El créneo se compone de varios huesos que crecen juntos y forman suturas (puntos de unién) En Ia cabeza de los niftos recién nacidos hay un punto blando en donde se unen las suturas sagital y coronal, ll mado fontanela. Cuando esta abertura se cierra, la union se denomina bregma, de la palabra griega que significa «parte anterior de la cabeza». También se observa bregma en el ‘craneo de una rata, y sirve como un itil panto de referen- ia, Siel crdneo del animal esta orientado tal como se repre- sentaen la ilustracion, una determinada region del encéfalo siempre se encuentra en tna posicién bastante constante en el espacio, tomando bregma como referencia. Contorno de la incision en la piel Se pertora un agujero por encima del objetivo Se la lesion Relacién entre las suturas del crineo y el encéfalo de una rata, y localizaci6n del objetivo donde situar el electrodo. Arriba: Vista dorsal, Abojo: Vista sagital medial. Objet dela etn Ejemplo de pagina de un atlas estereatxico del encéfalo de rata, El objetivo (fornix) se ha resaltado en rojo. Se han suprimido los rotulos identificativos para mayor claridad. ((Adaptado de Swanson, LW. Brain Maps: Stucture of the Rat Brain. Nueva York: Elsevier, 1992.) Un atlas estereotaxico incluye fotografias 0 esque- mas que corresponden a secciones frontales, tomadas a diferentes distancias rostrales y caudales a bregma. Por ejemplo, en la pagina representada en la figura 5.5 hay un esquema de una seccién del encéfalo en la que se halla una estructura cerebral (que se ve en rojo) que le interesa al investigador Si éste quisiera colocar la punta de un elecirodo en dicha estructura (el fornix), tendria que per- forar el craneo justo por encima de ella (véase la figu- 7a5.5), Cada pagina del atlas estereotéxico esta identificada conforme a la distancia de la secci6n anterior © posterior respecto a bregma. La cuadricula de cada pagina indica las coordenadas de las estructuras cerebra- les en el plano ventral ala parte superior del craneo y late~ ral a la linea media. Para situar la punta de un electrodo en el fornix habria que hacer un agujero por encima del objetivo y luego bajar el electrodo por el orificio hasta que su punta esté en la profundidad correcta, en relacién a la alkitud del craneo en bregma (véanse las figuras 5.4) 5.5) Asi, localizando una estructura neural (que no se puede ver en ¢l animal de experimentaciOn) en una de las pagi- nas de un atlas estereotiixico, se puede determinar su loca lizacién respecto a bregma (que sise puede ver). Hay que ee atlas estereotéxico Recopilacion de esquemas de secciones det ‘encéfale de un determinado animal con medidas que proporcionan las coordenadas para realizar (a cirugia estereotaxica aparato estereataxico Dispositivo que permite al crujano situar tun electrodo o una cinula en un lugar especifico del encéfalo. a Ablacién experimental 149 tener en cuenta que, debido a variaciones en la cepa y edad de los animales, la localizacion que proporcionan los atlas, es s6lo aproximada. Siempre hay que probar con una nueva serie de coordenadas, seccionar y tefir el encéfalo del animal, comprobar la localizaci6n exacta de la lesi6n, (Los métodos de in mas adelante.) El aparato estereotaxico Un aparato estereotaxico funciona segiin principios sencillos. El dispositivo incluye un soporte para la cabeza, ‘que mantiene el créneo del animal en la ubicacién ade- cuada, un soporte para el electrodo y un mecanismo de graduacién por el se mueve este iiltimo soporte en dis- tancias ponderadas a lo largo de los tres ejes espaciales: anterior-posterior, dorsal-ventral y lateral-medial. En la figura 5.6 se presenta un aparato estereotixico diseniado para animales pequetios; se pueden utilizar varios tipos de soportes de cabeza con el fin de adaptar este instrumento a diferentes especies, como ratas, ratones, hamsteres, palo- mas y tortugas (véase Ia figura 5.6). ‘Una vez que se han obtenido las coordenadas este- reotixicas a partir de un atlas estereotaxico, se anestesia al animal, se le coloca en el aparato y se le hace una inci- sin en el cuero cabelludo, Se localiza bregma, se marcan os mimeros apropiados en el aparato de estereotaxia, se taladra el crineo y se introduce el dispositivo en el encé- falo hasta las coordenadas correcias. Ahora la punta dela Tuoreas de aiuste Eleotradd ‘on el encétalo Aparato estereataxico para realizar cirugia cerebral en ratas. 150 _Capitale 5: Métods y estrategias de investigacion, camula 0 del electrodo esti donde se queria que estuviese yy se puede practicar la lesi6n. Evidentemente, la cinugia estereotaxica puede utili- 2zarse para otros fines distintos que producirIesiones. Los ‘electrodos situadas en el encéfalo pueden emplearse tanto ‘para estimular neurooas como para destruirlas, y se pue~ ‘den inyectar farmacos que estimulen neuronas obloqueen receptores especificos. Se pueden implantar cénulas 0 electrodos permanentes, siguiendo un procedimiento que ‘se describira lnego en este capitalo. En cualquier caso, una ‘vez finalizada la intervenciGn quinirgica, se cose la herida, ‘se retira al animal del aparato estereotaxico y se deja que se recupere de la anestesia. _A propésito, también hay aparatos estereotaicicos para seres humanos. A veces, los neurocirujanos efectiian Jesiones subcorticales —por ejemplo, para reducir los sin- tomas de la enfermedad de Parkinson—. Por lo general, ‘se valen de miiltiples puntos de referencia y verifican la localizacién del electrodo (0 de otro dispositivo) insertado en el encéfalo tomando imagenes de RM antes de producir Ja lesi6n cerebral (véase la figura 5.7). Métodos histolégicos Después de haber producido una lesin cerebral. y ‘observado sus efectos en la conducta del animal, hay que seccionar y ter el tejido cerebral de modo que se pueda, Jinspeccionar con el microscopio y localizar el lugar de la Jesi6n. A menudo, las lesiones cerebrales yerran su obje- tivo, por lo que hay que verificar la localizaci6n exacta del dao cerebral después de examinar el comportamiento del animal. Para ello se necesita fijar, seccionar, teiiir y examinar el encéfalo. Tomados en conjunto, estos pro cedimientos se denominan métedas histolégicos. (El prefijo kisto-hace alusién al tejido corporal). Fijacién y obtenciéa de secci Si se pretende estudiar el tejido tal como era en el ‘momento de la muerte del organismo, se han de destruir Jas enzimas autoliticas (axuéliss significa

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