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    14 Liberacion de transmisores in de transmisores esta regulada por ta despolarizacién de la terminal presinaptica La liberaciin de transmisores esti deseneadenada por la ‘entrada de calcio Los transmisores se liberan en unidades cuinticas Los transmisores se almacenan en las vesiculas sinapticas y son liberados por ellas Las vesiculas sinépticas liberan el transmisor mediante exocitosis La exocitosis implica la formaciin de un poro de fusién Las vesi ulas sinapticas son recicladas En la liberacion vesicular de transmisores estin implicadas diversas proteinas La cantidad de transmisor liberado puede ser regulada por la regulacién de Ia cantidad de calcio que entra durante el potencial de accién Los mecanismos celulares inteinsecos regulan la concentracion de calcio libre {Las sinapsis axo-axonales en las terminales presindpticas reguian et calcio libre intracolular Resumen LUGUNAS DE LAS CARACTERISTICAS MAS IMPORTANTES A& la funcién cerebral, como el aprendizaje y la memoria, parecen deberse a las propiedades ele- ‘mentales de las sinapsis quimicas. El rasgo caracteristico de estas sinapsis es que los potenciales de accién en tas terminales presindpticas inducen la liberacién de trans- misores quimicos. En los tres dltimos capitulos hemos visto cémo los receptores postsindpticas de estos trans- ‘misores controlan los canales idnicos que generan el po- tencial postsinéptico. Ahora centraremos nuestra aten- i6n en la célula presiniptica para considerar cémo los fenémenos eléctricos en la terminal se acoplan a la sec cién de neurotransmisores. En el siguiente capitulo estu- diaremos las caracteristicas quimicas de los propios neu- rotransmisores, La liberacin de transmisores esta regulada por la despolarizacién de la terminal pre: ap ¢Como un potencial de accién la presinaptica induce la liberacién del transmisor? La importancia de la despolarizacidn en la membrana presinaptica fue de- mostrada por Bernard Katz y Ricardo Miledi al utilizar la sinapsis gigante del calamar. Esta sinapsis tiene un tamano suficiente para permitir la insercion de dos elec- trodos en la terminal presinaptica (uno para estimula- cidn y otro para registro), asi como un electrodo en la célula postsinaptica para el registro del potencial sinap- tico, que proporciona un indice de a liberacion del transmisor. Normalmente, la célula presindptica genera un poten cial de accidn con una amplitud de 110 mY, lo que indu- ce la liberaci6n de! transmisor y la generacion de un in- tenso potencial sindptico en la célula postsinsptica. El potencial de accidn se debe a la entrada de Na’ ya la salida de K” a través de canales sensibles al voltaje. Katz, Y Miledi observaron que cuando los canales de Na” sen- sibles al voltaje se bloqueaban por la aplicacidn de tetro- dotoxina, los sucesivos potenciales de accién presinapti- cos se hacian progresivamente mas pequeiios debido al bloqueo progresivo de los canales del Na” durante el ini- cio del efecto de la tetrodotoxina. El potencial postsinap- tico se reduce en la misma cuantia. Cuando ef bloqueo del canal det Na” es tan intenso como para reducir laam- plitud del pico presinéptico por debajo de 40 mV, desa- parece por completo el potencial sindptico (Fig M-1B), Por tanto, la tiberacién del transmisor (medida segtin el 254 Parte IIL / Interacciones elementales entre neuronas: transmisién sinipticn ‘A Dispasicion experimental 8 Poten bloqueades 10s canoles de Na , Curva de entrada sada de Ta iberacion de transmisor ego S = Terie oe 2 0 a. ; a i he i. be 2 é ot TX ta o ow mm 40 90 a TK; 15min i ; fags Le = 33° mem AO ae bea So @ Figura 14-1, La contribucién de los canales de Na” sensi bles al voltaje a la liberacién del transmisor se comprueba mediante el bloqueo de los canales y la medicién de la am- plitud del potencial de accion presinaptico. asi como det potencial postsinaptico resultante. (Adaptado de Katz y Mile i, 19673.) ‘A. Los electiodos de registro se insertan en las fibras pre y post- ‘sinapticas de la sinapsis gigante en el ganglio estrellado de! cala- mar B. Se ahade tetrodotoxmna (TTX) a la solucién que bata la célula con objeto de bloquear los canales de Na* sensibies al volte. Se produce una disminucién gradual de la amplitud de los poten- tales de accién presinaptico y postsinaptico. Al cabo de 7 mi rnutos, el potencial de accion presinaptico todavia puede gene- ‘ar un potencial sinaptico supraliminar que inicia un potencial de accion en la celula postsinaptica (1), Al cabo de 14 6 15 minu- tos. el pico presinaptico se hace gradualmente mas pequefio y tamaio del potencial postsinaptico) muestra una depen- dencia clara de la despolarizacién presinaptica {Como la despolarizacién de la membrana induce la liberacién del transmisor? Una posibilidad, sugerida por el experimento que acabamos de citar, es que la entrada de Na* puede ser el factor esencial. Sin embargo, Katz y Miledi demostraron que esta entrada de Na* no es nece- saria. Manteniendo los canales del Na” totalmente blo- ‘queados por la tetrodotoxina, Katz y Miledi produjeron, directamente la despolarizacién de la membrana presi- naptica al pasar una corriente de despolarizacion a tra- vés del segundo microelectrodo intracelular. Por encima de un umbral de aproximadamente 40 mV desde el po- tencial de reposo, se liberan cantidades progresivamente mayores de transmisor (a juzgar por el aspecto y la ampli- ‘Amol’! peo resraptco iV genera potenciales de accion mas pequenos (2 y 3). Cuando i pico presindptico se reduce a 40 mV o menos. és incapaz de ‘producic un potencial sindptico (4) C. Se puede inferir una curva entrada sala para la iberacion de ‘ansmisor a partic de la dependencaa de la arnpiitud de! potencial ‘sinaptico respecto a ia amplitud det potencial de accion presinapti co. Esta curva se obtene al estimular el nervo presinapica dado ‘ave los canales de Na* para el potenciat de accidn presinaprico son bloqueadas progresivamente. 1. Es necesaria una despoia za010n presinaptica de 40 mV para produc un potencial sinaptico, ‘Mas alld. de este umibral existe un incremento progresivo de Ia ‘amplitud del potencial sindptico en respuesta a pequenas modi caciones de la amplitud del potencial presinaptico. 2. La grafica Ssemilogaritmica de los datos en la curva entrada sala demuestra {ue la relacadn entre el picoppresinéptico y el potencial postsinapt 60 es lagaritmica Un incremento de 10 mV en el pico presin” ~\ ‘co produce un aumento de 10 veces en el potencial sinaptn tud del potencial postsinaptico). En el intervalo de despo- larizacién con el que se produce la liberacién det transmi- sor quimico (40-70 mV por encima del nivel de repos0), ‘un incremento de 10 mV en la despolarizacién provoca wn aumento de 10 veces en la liberacion del transmisor. Por tanto, las terminales presindpticas pueden liberar trans sor sin necesidad de que entre Na’. La entrada de Na sélo es importante porque despolariza la membrana en grado suficiente como para generar el potencial de accion. hecesario para la liberacién del transmisor. {Podria la salida de K* a través de canales sensibles al voltaje y desencadenada por el potencial de accidn ser la responsable de la liberaci6n del transmisor? Para es tudiar la contribucién de la salida de K* a la liberacion del transmisor, Katz y Miledi bloquearon los canales A Disposicion expermental B Potenciales cuando estan bloquoados los canales de Nav Capitulo 14./ Liberacis de transmisores Potencales cuando ‘estén bioqueados los canaies de K° mx Se vansmisor © Curve de entrada-saida de a kberacion 255 oe vreaeheaes Pot ey corms Pe Peeeel a) Gonrew | , Zo Boo a Be mae a | Bo — imal ie aS ees 3 » a MPSS = A ma, i} Z . - : PMS ay = nee [ote oe é foals ses Js Figura 14-2. El bloqueo de los canales Na* y K’ sensibles al voltaje en las terminales presinapticas modifica {a amplitud, ¥y la duracién del potencial de accisn presinaptico, asi como 21 potencial postsinaptico resultante, pero no bloquea Ia Ii beracion del transmisor. (Adaptado de Katz y Miledi, 1967a.) A. La disposicion experimental es ol mismo que en la Figura 14 1. excepto porque en la Célula presinaptica se ha introducido un lectrodo con paso de corriente, (TEA = tetraetilamonio | 8. Los canales Na° sensibles al voltaje quedan completamente bloqueades al ahadi tetrodotoxina (TTX) ala soluci6n que bana la célula. Cada grupo de tres curvas representa (de abajo hacia arriba) e! puiso de cornente de despolarizacion inyectado en Ia terminal presinaptce (t), el potencial resultante en la terminal Presinaptca (Pre) y el potencial postsinaptico generado como resultado de la liberacién de transmisor en la célula postsinap. ica (Post) Se aplican pulsos de corriente progresivamente mas intensos para product una despolarizacion proporcio- nalmente mayor en Ia terminal presinaptica (2-4), Estas des: polarizaciones presinépticas causan potenciales postsinspticos \ncluso en ausencia de fiujo de Na* Cuanto mayor es la despo- 'arizacion presinaptica mayor es el potencial postsinaptico, 1o Ue indica que e! potencial de membrana ejerce un control di- ‘recto sobre la liberacion de transmisor. Las despolarizaciones del K* sensibles al voltaje utilizando tetraetilamonio al mismo tiempo que bloquearon los éanales del Na” sen- sibles al voltaje con tetrodotoxina. Después, estos inves- tigadores pasaron una corriente de despolarizacién a través de las terminales presinapticas y observaron que ain asi los potenciales postsindpticos eran de tamaio ormal, lo que indicaba que la liberacién del transmisor €ra normal (Fig. 14-2). En efecto, en las condiciones de este experimento, el potencial presinaptico se mantiene presinapticas no se mantienen durante toda la duracion def put so de corriente de despolarizacidn datudo al retraso en la activa- ‘16 de los canales K* sensibles al voltaje, que provoca la repo: larizacion C. Después de que los canales Na” sensibies a! voltaje corres: ondientes al potencial de accidn han sido blogueados, se inyec: ta tetraetiamonio (TEA) en ia terminal presinaptica para bloquear tambien los canales K* sensibles al voltaje. Cada grupo de tres ccurvas representa e! pulso de corriente, el potencial presinaptica ¥ el potencial postsinaptico, igual que en el punto B. Como los, canales K* presindpticos estan bloqueados, la desoolarizacion presinaptica se mantiene durante todo el pulso de corriente. Las despolarizeciones presindpticas intensas y pefsistentes produ cen grandes potenciales postsinapticos mantenidos (2-4) Esto indica que para ta liberacion efectiva de transmisor no son nace sarigs los canales de Na” ni los canales de K* 1D. El bloqueo de los canales de Na* y K* permite la medicwon de luna curva de entrada-salida mas completa que la de la Figura 14 1. Ademas de la parte gradual de la curva, se observa ahora una meseta, Por tanto, mas alla de cierto nwvel de despolarizacien presinaptica, la despolanzacion no induce una liberacion adicio: ‘al de transmisor EI nivel inicial del potencial de membrana pre sindpbco era de -70 mV. durante todo el pulso de corriente debido a que esta bloqueada la corriente de K* que normalmente repola za la membrana presindptica. El resultado es que se ‘mantiene la liberaciGn del transmisor (Fig; 14-2C). Los incrementos del potencial presinaptico por encima de un limite superior no aumentan adicionalmente el po- tencial postsindptico (Fig. 14-2D), Por tanto, para la libe racidn del transmisor no es necesario el flujo de Na° ni de K” 256 Parte Ill / Interacciones elementales Laliberacién de transmisores esti desencadenada por la entrada de calcio Mas tarde, Katz y Miledi dirigieron sti atencién a los iones Ca**. Anteriormente, José del Castillo y Katz ha- bian observado que el incremento de la concenteacion extracelularde Ca” aumentaba la liberacidn del transmi- tras que la disminucién de dicha concentracién la transmision reducia y, en tltima instancia bloqueaba, sinJptica. Sin embargo, como la liberacién del transmisor es un proceso intracelular, estos hallazgos impticaban que el Ca® se debe introducir en la célula para influir en la liberacidn del transmisor. Los trabajos previos sobre el axén gigante del calamar hhabian identificado una clase de canales de Ca" sensi- bles al voltaje. Dado que existe una fuerza electromecani- ca muy intensa para la entrada del Ca” y a que la con- centracién extracelular de Ca? es normalmente 4 veces mayor que la concentracion intracelular, la apertura de Jos canales de Ca® daria lugar a una importante entrada de Ca’. Sin embargo, estos canales del Ca* estan distri- buidos de manera dispersa a lo largo del axén principal Katz y Miledi propusieron que los canales del Ca po- drian ser mucho mas abundantes en la terminal presi- naptica y que el Ca™ podria tener una funcién doble: como transportador de la carga de despolarizacion du- rante el potencial de accidn (igual que el Na’) y como seal especial portadora de informacion relativa a las modificaciones en el potencial de membrana dirigida a los mecanismos intracelulares responsables de la libera~ cig del transmisor. La pruebas directas de la presencia de una corriente de Ca* a través de canales sensibles al voltaje en la terminal presinaptica del calamar fueron aportadas por Rodolfo Liinds y colaboradores. Mediante un microelectrodo con pinza de voltae, Llinds produjo la despolarizacion de la terminal al mismo tiempo que bloqueaba los canales de Na* y K* sensibles al voltaje mediante tetrodotoxina y tetraetilamonio, respectivamente. Este investigador ob- serv que las despolarizaciones progresivas activaban una corriente de entrada de Ca° gradual que, a su vez, inducian ta liberacién gradual del transmisor (Fig, 14-3) La corriente de Ca’* es gradual porque los canales Ca” poseen puertas de activacién dependientes del voltaje, de la misma forma que los canales de Na" y K* sensibles al voltaje. Los canales de Ca en las terminates del cala- mar son, sin embargo, diferentes de los canales de Na” debido a que no se inactivan rapidamente sino que per- manecen abiertos mientras dura la despolarizacién pre- sinaptica. Una caracteristica sorprendente de la liberacién de transmisores en todas las sinapsis es su dependencia clara y no lineal de la entrada de Ca’*, de manera que un ineremento de dos veces en la entrada de Ca** puede aumentar la liberacién de transmisor hasta en 16 veces. Esta relacidn indica que en algtin punto, en el denomina- i a F Figura 14-3. Un experimento sencillo demuestra que la libe racién de transmisor es una funcion de la entrada de Ca” en la terminal presindptica. Los canales de Na" y K* sensiies al voltaje de la sinapsis gigante det calamiar son bloqueados tetrodotoxina y tetraetilamonio. La terminal presinéptica se pinza mediante voltae y el potencial de membrana se gradua en seis niveles diferentes de despolarizacion (trazados inferiores). La cantidad de corriente de entrada de Ca’ presinéptca \trazados centrales) que acompafia a la despolarizacion se correlaciona con la amplitud del potencial postsinaptico resultanie (trazados superiores!. Esto se debe a que la cantidad de corriente de Ca {que atraviesa los canales sensibles al voltaje determina la cari {dad de transmisor liberado que, a su vez, determina el tamano {del potencial postsinaptico. La muesca que se observa en el 1/3 zado del potencial postsinaptico es un artetacto que se debe a) apagado del potencial presinapnico. (Adaptado de Linas y Hew ser, 1977) do sensor de enlcio, es necesaria la unidn de hasta cuatro iones Ca™ para que se produzca la liberacion del trao— misor. Incluso en la terminal axonal, las corrientes de Ca son pequenas y normalmente estin enmascaradas por las corrientes de Na” y de K*, que son 10-20 veces mayo- res, Sin embargo, en la region de la zona activa (el punto en el que se libera el transmisor) la entrada de Ca” es 10 veces mayor que en otras zonas de la terminal. Esta loca- lizacién es compatible con la distribucién de las particu- las intramembranosas que se observan en las imagenes ultraestructurales por congelacién-fractura y se conside- ra que representan los canales del Ca’* (véase la Fig, 4-7 en el Recuadro 14-2). La localizacién de los canales clel Ca’ en las zonas activas proporciona una gran concentracién local de Ca" en el punto de liberacién del transmisor durante el po- tencial de accién. En efecto, durante un potencial de ac: ci6n la concentracién de Ca™ en la zona activa puede aumentar mas de mil veces (hasta aproximadamente 100 ¢M) en unos pocos cientos de microsegundos. Este incremento rapido y de gran intensidad es necesario para Ia liberacién sincrdnica rapida del transmisor. Se supone que el sensor del calcio responsable de la ripida liberacién del transmisor tiene una afinidad baja por el Ca®. Para iniciar la liberacién es necesaria una cantidad de 50-100 1M de Ca” intracelular, mientras que para muchas reacciones enzimaticas sélo es necesaria una cantidad de aproximadamente 1M de Ca’. Debido a la baja afinidad del sensor del calcio, la liberacién sdlo tiene lugaren tna estrecha regién que rodea el orificio intrace- lular del canal del Ca", puesto que es el tinico lugar en el que la concentracién de Ca°* es suficiente para iniciar esta liberacién. El requisito de una gran concentracién de Ca también garantiza que la liberacién se interrumpe ripidamente tras la repolarizacién. Una vez que se cie- los canales del Ca’, la gran concentracién local de * desaparece rapidamente (en 1 milisegundo) por di- fusi6n. Los canales del calcio se abren mas lentamente que los del Na* y, por tanto, la entrada de Ca°* no se produce hasta que el potencial de accién en la célula presinéptica se empieza a repolarizar (Fig. 14-4). El retraso que es ca~ racteristico en la transmisin sindptica quimica —el tiempo que transcurre desde el inicio del potencial de ac- cidn en las terminales presindpticas hasta el inicio del po- tencial pastsinaptico— se debe en gran medida al tiempo «que necesitan los canales del Ca para su apertura en res- puesta a la despolarizacién. Sin embargo, dado que los canales del Ca™ sensibles al voltaje se localizan muy cer- cade los puntos de liberacién del transmisor, el Ca" s6lo necesita una difusién a corta distancia jlo que permite que la liberacién del transmisor se produzca al cabo de s6lo 0.2 milisegundos de la entrada del Ca® Como veremos mas adelante en este capitulo, la dura- cién del potencial de accién es un factor determinante importante de la cantidad de Ca’* que fluye hacia la ter minal. Siel potencial de accidn es prolongado, fluye mas Ca®* al interior de la célula y, por tanto, se libera una cantidad mayor de transmisor generando un potencial postsindptico mayor. Existen canales del calcio en todas las eélulas nervio~ sas y también en células que no pertenecen al sistema nervioso, como las células musculares esqueléticas y cardiacas, en las que estos canales son importantes para el acoplamiento excitacién-contraccién, y las células en- docrinas, en las que estos canales median la liberacién de hormonas. Existen muchos tipos de canales para el Ca®* —denominados L, P/Q, N, Rry T— con propieda- des biofisicas y farmacoldgicas especificas y con funcio- nes fisioldgicas diferentes. Las propiedades especificas de estos tipos de canales estan determinadas por la identidad de su subunidad formadora de poro (deno- minada subunidad 21) que esta codificada por una fa- milia de genes relacionados (Cuadro 14-1). Los canales del calcio también presentan subunidades asociadas Capitulo 14 / Liberacidn de transmisores 257 0) | || Aeron : | re 0 Potent elecrico mv) 0 300 Tempo —~ Figura 14-4. La evolucién temporal de la entrada de Ca en la célula presinaptica determina el inicio de la transmision sinaptica. Un potencial de accién en la célula presinaptica (1) hace que se abran los canales Ca?* sensibies al voltaye y que se produzca una corente de Ca** (2) hacia la terminal. (Se puede ‘observar que la corriente de Ca"* permanece activa durante la fase descendente del potencial de accion presinaptico debido al retraso en la apertura de los canales de Ca") La entrada de Ca”= inicia la iberacion del neurotransmisor. La respuesta postsinapti «a al transmisor se produce al poco tempo (3) y, si tiene una intensidad suficiente, inicia un potencial de accion en la celula postsinaptica (4). (PPSE = potencial postsinaptico excitador ) (Adaptado de Liinas, 1982.) (denominadas 22, p, y y 8) que modifican las propieda- des del canal formado por las subunidades 21. Todas las subunidades 21 son homélogas con las subunidades a del canal de Na* sensible al voltaje, y estan formadas por cuatro repeticiones de una regién basica que contie- ne seis segmentos transmembranosos (incluido un sen- sor de voltaje $4) y por una region P que recubre el poro, (véase la Fig, 9-14). 258 Parte Il / Interacciones elementales entre neuronas:transmision sindptica Cuadro 14-1. Bases moleculares de la diversidad de canales del calcio ~— Tipode canal Tejidg Bloqueantes 7 ¥ ar Tae selectivos . A P/Q Neuronas ‘eragatoxina (veneno de arafa) —Liberacion répida 8 N Neuronas ‘exconotoxina (veneno de Liberacion ripida caracol) civis L Neuronas, células endocrinas Dihidropiridinas Liberacién lenta Corazén, misculo esquelético (Péptidos) E R Neuronas ? Liberacion cépida cit T Neuronas, corazin 2 Excitabilidad Gen para el ipo formador de poro principal de la subunidad 21 La mayor parte de las células del sistema nervioso con- tienen mas de un tipo de canal de Ca*. Los canales for- mados a partir de subunidades 21 diferentes se pueden distinguir por sus distintas propiedades de regulacion mediante voltaje, por su sensibilidad especifica a blo- queantes farmacol6gicos y por su funcin fisiol6gica es- pecifica. Los canales de tipo L son bloqueados selectiva- mente por las dihidropiridinas, un grupo de férmacos con gran importancia clinica en el tratamiento de la hi- pertensién. Los canales de tipo P/Q son bloqueados selecti vamente por la w-aga-toxina IVA, un componente del veneno de la tarantula del género Atrax. Los canales de tipo N son bloqueados selectivamente por una toxina ob- tenida del veneno del caracol marino en cono, la w-cono- toxina GVIA. Los canales de tipos L, P/Q, N y R necesi- tan una despolarizacién bastante intensa para su activacién (son necesarios voltajes positivos de hasta ~40 a -20 mV) y, por tanto, a menudo se denominan canales a’ activados mediante voltaje elevado. Por el contrario, los canales Ca” de tipo T son canales Ca?” activados mediante vollaje bajo y se abren en respuesta a pequenas despolari: zaciones préximas al umbral para la generacion de un potencial de accién (~60 a ~40 mV). Como son activados por pequertas modificaciones en el potencial de membra- 1a, los canales de tipo T son titiles para controlar ta ex: tabilidad durante el potencial de reposo y constituyen ‘una fuente importante de la corriente excitadora que di rige la actividad ritmica de marcapasos de ciertas células tanto en el cerebro como en el corazén, En las neuronas, la rapida liberacin de transmisores convencionales asociada a la transmision sindptica répi- da esté mediada por tres clases principales de canales Ca*: los canales de tipos P/Q, Ny R. Las canales de tipo L no contribuyen a la liberaci6n répida del transmisor pero son importantes para la liberacion lenta de neuro- éptidos a partir de las neuronas, y de hormonas a partit de las células endocrinas. El hecho de que la entrada de Ca** a través de sélo ciertos tipos de canales Ca™ permite controlar la liberacién del transmisor se debe supuesta- mente a que estos canales estén concentrados en las z0- nas activas. La localizacion de los canales Ca de tipo N en las zonas activas se ha visualizado mediante w-cono: toxina marcada con fluoresceina en la union neuromus- cular del sapo (Fig. 14-5). Por el contrario, los canales de tipo L pueden estar excluidos de las zonas activas, lo que limita su participacién a la transmisién sindptica lenta, Los transmisores se cudnticas eran en unidades eComo y dénde inicia la liberacién la entrada de Ca**? Para responder a esta pregunta debemos considerar en primer lugar el mecanismo por el que se liberan las sus- tancias transmisoras. A pesar de que la liberacién del transmisor sindptico parece uniformemente graduada, realmente el transmisor se libera en cantidades discretas denominadas cuantos. Cada cuanto de transmisor produ- ce un potencial sinaptico de tamano fijo denominado po- tencial sindptico cudntico. El potencial postsinéptico total esta constituido por un ntimero integral de respuestas ‘cuanticas (Fig. 14-6). Los potenciales sinépticos aparecen ‘como una escala uniformemente graduada en los regis- tros porque cada potencial (o unidad) cuadntico es dema- siado pequeto en relacién con el potencial total Paul Fatt y Bernard Katz obtuvieron la primera clave respectoa la naturaleza cudntica de la transmisi6n sinap- tica cuando realizaron registros de la sinapsis neuromus- cular del sapo sin estimulacién presinaptica y observa- ron pequeios potenciales postsinapticos espontineos de aproximadamente 0.5 mV. De la misma forma que los potenciales de placa motora provocados por estimula ‘cidn nerviosa, estas pequeftas respuestas de despolariza- ‘cin eran mayores en la zona de contacto nervio-muiscu- oy disminuian electronicamente con la distancia (véase la Fig, 11-5). Desde entonces, se han obtenido resultados similares en el muisculo y las neuronas del sistema ner- vioso central de mamiferos. Como los potenciales sinap. ticos en las sinapsis nervio-muisculo de los vertebrados Figura 14.5. Los canales del calcio se concentran en la unién neuro: muscular en las regiones de la termi nal nerviosa presinaptica opuestas a los grupos de receptores de acetilco- lina ACh) en la membrana postsi naptica. La imagen muestra los canales a presinapticos rojo tras el marcado con una toxi plada a rojo Tejas, une a los canales de Ca’ Los jores ACh postsinapticos apare nen verde 9% n diluor fe borondipi nes aparecen normalmente superpues: 10'se han separado para poder di erenciar los colores. Los pattones de arcado con ambas s responden con toda precision, lo que indica que la zona activa de la neur presinaptica esta casi perfectamente sineada con la membrana postsinapt 3, que contiene la ion de receptores de ACH, (Tomado de 1990.) Robitaille y cols se denominan potenciales de placa motora, Fatt y Katz denominaron a estos potenciales espontaneos potenciales de placa motora en miniatura. La evolucién temporal de los potenciales de placa mo: tora en miniatura y los efectos de diferentes farmacos 50 bre los mismos son indistinguibles de las propiedades de los potenciales de placa motora provocados por la esti ‘mulacién nerviosa. Puesto que la acetilcdlina (ACh) es el transmisor en la sinapsis nervio-miisculo, los potenciales de placa motora en miniatura —de la misma forma que los potenciales de placa motor wentan y se prolon gan bajo la accién de la prostigmina, un farmaco que in hibe la hidrétisis de la ACh por la acetilcolinesterasa, De manera similar, los potenciales de placa motora en mi hiatura son reducidos y finalmente abolidos por los far macos que bloquean el receptor de la ACh. En ausencia Capitulo 14 / Liberacién de transmisore de estimulacién, los potenciales de placa motora en mi niatura aparecen con intervalos aleatorios; sti secuencia puede aumentar por la despolarizacién de la presindptica. Estos potenciales de: motor presin4ptico degenera, pero reaparecen cuando se forma una nueva sinapsis motora, lo que indica que estos fenémenos representan pequefias cantids sor liberadas de manera continua a partir de la terminal nerviosa presinaptica, {Qué podria explicar el tamaito fijo (aproximadamen: te, 0.5 mV) del potencial de placa motora en miniatura Del Castillo y Katz fueron los primeros que estudiaron la posibilidad de que cada cuanto represente una respuesta fija como consecuencia de la apertura de un timico canal receptor ACh. Al aplicar pequefas cantidades de ACh a la placa motora del misculo del sapo, estos investigadores parecen si el nervio jes de transmi 260 A Respuesta 8 s 5 1 — cosduite ro =n ; 18 je tan oole Numero de obsenvaciones 8 ° eoie 4 2 ° Parte III / Interacciones elementales entre neuronas: transmisién sinéptica tara Numero 08 coseraccones 8 eee tat 0 02 04 06 08 ‘plitude os potencies teapontanes de pldea motor3 ae ote to Tew : eine Hon Figura 14-6. El nourotransmisor es liberado en incrementos fijos, o cuantos. Cada cuanto de transmisor genera un potencial jpostsindptico unitario de amplitud fija. La amplitud del potencial postsindptico provacado por la estimulacién nerviosa es igual ala ‘amplitud unitaria muitipicada por el numero de cuantos de trans- misor liberado, ‘A. Los registros intracelulares de una fibra muscular en la placa motora muestran la modificacién postsindptica en el potencial ‘cuando se aplican 8 estimulos consecutivos del mismo tamanio ‘al nervio motor. Para reducir la salida de transmisor y mantener fen un tamario pequefa el potencial de la placa motora, el tejido se band en ura solucion con déficit de Ca’ (y rica en Mg). Las respuestas postsindpticas al estimulo son variables. Dos impul- 08 presinapticos no generan una respuesta postsinaptica (fa- los); dos producen potenciales unitarios, y los otros producen tespuestas que son aproximadamente 2 a 4 veces la amplitud del potencial unitario. Se puede observar que los potenciales es- ponténeos de placa motora en miniatura (S) tienen el mismo ta mao que el potencial unitario. (Adaptado de Liley, 1956.) B. Despues del registro de multiples potenciales de placa moto- ra se conte y represent6 ol numero de respuestas de cada am- ‘obtuvieron respuestas de despolarizacion mucho meno- res de 0.5 mV. Desde entonces, queds claro que el poten- cial de placa motora en miniatura debe reflejar la apertu- rade mas de un canal-receptor de AGh. De hecho, Katz y Miledi pudieron calcular posteriormente que la corriente elemental a través de un tinico canal-receptor de ACh era de aproximadamente 03 ,tV (véase el Capitulo 6). Esta ifra representa alrededor de 1/2000 de la amplitud de tun potencial de placa motora en miniatura. Por tanto, un potencial de placa motora en miniatura de 0.5 mV re- quiere la suma de corrientes elementales de aproximada- mente 2000 canales. Este cdlculo fue confirmado poste- Cy a rT ar ey Amplitude os potencies de paca rotors Vt 28 plitud en el histograma que aparece en la figura. La distnibucién {de las respuestas genera varios picos. El primer pico, 3 0 mV, representa los fallos. El primer pico de respuesta. a 0.4 mV. re- [presenta el potencial unitario, que es la respuesta mas pequena. Esta respuesta unitana tiene la misma ampilitud que el potencial espontaneo de placa motora en miniatura (recuadro}. Los otros ppicos que aparecen en e! histograma corresponden a amplitudes ‘que son miltiplos integrales de la amplitud del potencial unitano La linea roja muestra una distribucion tedrica compuesta por la ‘suma de varias funciones gaussianas ajustadas a los datos del histograma. En esta distnbucion cada pico aparece ligeramente abierto, fo que refieja el hecho de que la cantidad de transmisor fen cada cuanto —y, por tanto, la amplitud de Ia respuesta post. sindptica— varia aleatoriamente alrededor del pico. E! numero de sucesos bajo cada pico dividido por e! numero total de suce: ‘$08 en el histograma es la probabiidad de que la terminal presi ‘ndptica libere el nimero correspondiente de cuantos. Esta proba bilidad sigue una distribucion de Poisson (vease ol Recuacro 14-1, La distribucion de las amplitudes de los potenciales esponta ‘neos en miniatura, que aparece en el recuadro de la figura. tam bién se ajusta a una curva gaussiana, (Adaptado de Boyd y Mar: tin, 1956.) Fiormente cuando se midieron directamente las cortien- tes a través de canales de ACh activados tinicos median- te técnicas de registro de zona (véase el Recuadro 6-2). Como la apertura de un tinico canal requiere la unidn, de dos moléculas de ACh al receptor (una molécula en cada una de las dos subunidades 2) y que parte de la ACh liberada nunca aleanza las moléculas receptoras (debido a que se difunde fuera de la hendidura sindptica © a que se pierde mediante hidrdlisis), son necesarias aproximadamente 5000 moléculas para producir un po- tencial de placa motora en miniatura. Este ntimero se ha confirmado mediante la determinacién quimica directa Recuadro 14-1. Calculo de la probabilidad de liberacién del transmisor Laliberacién de un cuanto de transmisor es un fendmeno alea- torio, La respuesta del transmisor aun potencial de aceidn sdlo tiene dos posibilidades: se lbera o.n0 se libera un cuanto, Este fenimeno sigue una distribucién de tipo binomial o de Ber- ‘oul (similar a tirar una moneda al aire para determinae si sale cara 0 cruz). La probabilidad de que se libere un cuanto, por un potencial de accién es independiente de la probabil. dad de que sean liberados otros cuantos por el mismo poten. cial de accidn, Por tanto, para una poblacion dada de cuantos {que pueden ser liberados, cada potencial de accion representa una serie de ensayos binomiales (comparables a tia un peu po de monedas para ver cuantas salen cara y cuantas salen cruz) En una distribucién binomial p epresenta la probabilidad Promedio de éxito (es decir la probabilidad de que se pro- - minal sino que estan fijadas 0 ancladas a una tram. se filamentos del citoesqueleto por accidn de las sinapsinas, tuna familia de cuatro proteinas (la, Ib, Ila y IIb). De estas cuatro, las sinapsinas Ia y Ib son las mejor estudiadas ‘Ambas proteinas son sustratos para la proteina cinasa dependiente del AMPc y para la cinasa dependiente de Ca’*/calmodulina. Cuando la sinapsina I no esta fosfori- lada se supone que inmoviliza las vesiculas sindpticas ‘mediante fijaci6n con filamentos de actina y otros com- ponentes del citoesqueleto. Cuando la terminal nerviosa esta despolarizada y entra el Ca’, la sinapsina I parece ‘quedar fosforilada por la proteina cinasa dependiente de Ca®*/calmodulina. La fosforilacién libera las vesiculas de su anclaje al citoesqueleto y las permiten dirigirse a la zona activa (Fig. 14-14) El desplazamiento de las vesiculas sinapticas hasta sus puntos de acoplamiento para la liberacién del transmisor Jo pueden llevar a cabo Rab3A y Rab3C, dos miembros de una clase de pequefias proteinas relacionadas con la superfamilia del protooncogén ras que se unen al Cy lo hidrolizan hacia GDP y fosfato inorganico (Fig. «4 148), Estas proteinas Rab se unen a las vesiculas sinapti- cas a través de un grupo hidrocarbono hidréfobo que esté unido de manera covalente al extremo carboxilo de la proteina Rab. La hidrdlisis del GTP unido a Rab, con su conversién a GDP, puede ser importante para el des~ plazamiento correcto de las vesiculas sinapticas hasta sus zonas apropiadas de acoplamiento. Durante la exo citosis, las proteinas Rab son liberadas desde las vesicu- las sinapticas hacia el citoplasma Tras el desplazamiento de una vesicula hasta su lugar de liberacién se produce un complejo grupo de interac ciones entre las proteinas de la membrana de la vesicula sinaptica y las proteinas de la membrana presinaptica Estas interacciones parecen completar el acoplamiento de las vesiculas y su preparacién para fusionarse en res~ puesta a la entrada de Ca". Este tipo de interacciones es acumulen cerca de Capitulo 14 / Liberaciin de transmisores 271 i \ Av. FON Ton betula eLaretonna Figura 14-13. En el esquema se muestran las proteinas de vesicula sinaptica que han sido caracterizadas, asi como al- ‘unos de sus receptores y sus funciones, Se supone que exis- ten compartimentos separados para el (1) almacenamiento (donde las vesiculas estan anciadas al citoesqueleto}, (2) el movi miento y desplazamiento de las vesiculas hasta las zonas acti vas, (3) lacoplamiento de las vesiculas en las zonas activas y su ‘estimulacion para la liberacién del transmisor, y (4) la iberacicn del transmisor. Algunas de estas proteinas representan el obje- vo de las neurotoxinas que actuan modificando la liberacién del {ransmisor. La VAMP (sinaptobrevina), [a SNAP-25 y la sintaxina ‘Son objetivo de las toxinas del tétanos y el botulismo, dos meta- ‘oproteasas dependientes del cinc, y son fragmentadas por es: tas enzimas, La watrotoxina, una toxina de la ara que provoca ‘agotamiento masivo de las vesiculas con liberacién del transm- 50r, Se une a las neurexinas. 1. Las sinapsinas son proteinas aso- Cladas a fa vesicula que parecen gobernar las interacciones entre 'a vesicula sindotica y los elementos del citoesqueleto en la importante para la exocitosis en todas las eélulas, no so- amente en las terminales sinapticas de las neuronas. Como ya hemos visto en el Capitulo 4, todas las protei- ‘nas secretorias son sintetizadas en los ribosomas y dirigi das a la luz del reticulo endoplésmico (RE). Cuando estas Proteinas abandonan el RE son dirigidas al aparato de Golgi en vesiculas formadas a partir de la membrana del terminal nerviosa 2. Les proteinas Rab (véase'la Fig. 14-148) 2 ‘Fecen estar implicadas en el movimiento de las vesiculas en el Interior de la célula y también en el desplazariento de las vesicu las dentro de la terminal nerviosa. 3. Elacoplamiento. a fusion y la iberacién de las vesiculas parecen implica’ diferentes imerac: ‘ones entre las proteinas de la vesicula y las proteinas de |a ‘membrana plasmatica correspondiente a la terminal nerviosa VAMP (sinaptobrevinal y sinaptotagmina (p65) en la membrana e la vesicula, y sintaxinas y neurexnas en a membrana de la terminal nervosa, Las tlechas indican posibles interacciones su: Geridas en estudios in vitro. 4. La identidad de las proteinas de vesicula y de membrana plasmatica que constituyen el poro de fysi6n no ha sido aclarada, La sinaptofisina, una proteina integral ‘de membrana en las vesiculas sinapticas, es losforiads 00° tio sina cinasas y puede regular la liberacion del transmisor Los transportadores de vesicula estén implicados en la acumuiacion de neurotransmisor en el interior de la vesioula sinantica (véase Capitulo 18) RE, Después, las vesiculas se agrupan y s¢ fusionan con la membrana del aparato de Golgi, descargando su con: tenido proteico en la luz del mismo, donde las proteinas son modificadas. Otras vesiculas transportan la proteina secretoria entre los compartimientos cts y trams (las dife- rentes cisternas) del aparato de Golgi hasta que la protei: ‘na queda completamente modificada y madura. La pro- 272 Parte IIL / Interacciones elomentales entre neuronas: transmision sinsptica Figura 14-14. La movilizacién, el aco: plamiento y la funcion de las vesiculas sindpticas estén controlados por el Ca ¥ por proteinas de unién a GTP de bajo peso molecular. A. Las vesiculas sindpticas de las termina: les nerviosas estén secuestradas en un ‘compartimiento de almacenarmento donde permanecen ancladas al citoesqueleto, ¥ también en un compartimyento de lbera con donde estan aguupadas y unidas a la ‘membrana presinaptica La entrada de Ca” en la terminal nerwiosa provoca la apertura

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