14 Liberacion de transmisores in de transmisores esta regulada por ta despolarizacién de la terminal presinaptica La liberaciin de transmisores esti deseneadenada por la ‘entrada de calcio Los transmisores se liberan en unidades cuinticas Los transmisores se almacenan en las vesiculas sinapticas y son liberados por ellas Las vesiculas sinépticas liberan el transmisor mediante exocitosis La exocitosis implica la formaciin de un poro de fusién Las vesi ulas sinapticas son recicladas En la liberacion vesicular de transmisores estin implicadas diversas proteinas La cantidad de transmisor liberado puede ser regulada por la regulacién de Ia cantidad de calcio que entra durante el potencial de accién Los mecanismos celulares inteinsecos regulan la concentracion de calcio libre {Las sinapsis axo-axonales en las terminales presindpticas reguian et calcio libre intracolular Resumen LUGUNAS DE LAS CARACTERISTICAS MAS IMPORTANTES A& la funcién cerebral, como el aprendizaje y la memoria, parecen deberse a las propiedades ele- ‘mentales de las sinapsis quimicas. El rasgo caracteristico de estas sinapsis es que los potenciales de accién en tas terminales presindpticas inducen la liberacién de trans- misores quimicos. En los tres dltimos capitulos hemos visto cémo los receptores postsindpticas de estos trans- ‘misores controlan los canales idnicos que generan el po- tencial postsinéptico. Ahora centraremos nuestra aten- i6n en la célula presiniptica para considerar cémo los fenémenos eléctricos en la terminal se acoplan a la sec cién de neurotransmisores. En el siguiente capitulo estu- diaremos las caracteristicas quimicas de los propios neu- rotransmisores, La liberacin de transmisores esta regulada por la despolarizacién de la terminal pre: ap ¢Como un potencial de accién la presinaptica induce la liberacién del transmisor? La importancia de la despolarizacidn en la membrana presinaptica fue de- mostrada por Bernard Katz y Ricardo Miledi al utilizar la sinapsis gigante del calamar. Esta sinapsis tiene un tamano suficiente para permitir la insercion de dos elec- trodos en la terminal presinaptica (uno para estimula- cidn y otro para registro), asi como un electrodo en la célula postsinaptica para el registro del potencial sinap- tico, que proporciona un indice de a liberacion del transmisor. Normalmente, la célula presindptica genera un poten cial de accidn con una amplitud de 110 mY, lo que indu- ce la liberaci6n de! transmisor y la generacion de un in- tenso potencial sindptico en la célula postsinsptica. El potencial de accidn se debe a la entrada de Na’ ya la salida de K” a través de canales sensibles al voltaje. Katz, Y Miledi observaron que cuando los canales de Na” sen- sibles al voltaje se bloqueaban por la aplicacidn de tetro- dotoxina, los sucesivos potenciales de accién presinapti- cos se hacian progresivamente mas pequeiios debido al bloqueo progresivo de los canales del Na” durante el ini- cio del efecto de la tetrodotoxina. El potencial postsinap- tico se reduce en la misma cuantia. Cuando ef bloqueo del canal det Na” es tan intenso como para reducir laam- plitud del pico presinéptico por debajo de 40 mV, desa- parece por completo el potencial sindptico (Fig M-1B), Por tanto, la tiberacién del transmisor (medida segtin el254 Parte IIL / Interacciones elementales entre neuronas: transmisién sinipticn ‘A Dispasicion experimental 8 Poten bloqueades 10s canoles de Na , Curva de entrada sada de Ta iberacion de transmisor ego S = Terie oe 2 0 a. ; a i he i. be 2 é ot TX ta o ow mm 40 90 a TK; 15min i ; fags Le = 33° mem AO ae bea So @ Figura 14-1, La contribucién de los canales de Na” sensi bles al voltaje a la liberacién del transmisor se comprueba mediante el bloqueo de los canales y la medicién de la am- plitud del potencial de accion presinaptico. asi como det potencial postsinaptico resultante. (Adaptado de Katz y Mile i, 19673.) ‘A. Los electiodos de registro se insertan en las fibras pre y post- ‘sinapticas de la sinapsis gigante en el ganglio estrellado de! cala- mar B. Se ahade tetrodotoxmna (TTX) a la solucién que bata la célula con objeto de bloquear los canales de Na* sensibies al volte. Se produce una disminucién gradual de la amplitud de los poten- tales de accién presinaptico y postsinaptico. Al cabo de 7 mi rnutos, el potencial de accion presinaptico todavia puede gene- ‘ar un potencial sinaptico supraliminar que inicia un potencial de accion en la celula postsinaptica (1), Al cabo de 14 6 15 minu- tos. el pico presinaptico se hace gradualmente mas pequefio y tamaio del potencial postsinaptico) muestra una depen- dencia clara de la despolarizacién presinaptica {Como la despolarizacién de la membrana induce la liberacién del transmisor? Una posibilidad, sugerida por el experimento que acabamos de citar, es que la entrada de Na* puede ser el factor esencial. Sin embargo, Katz y Miledi demostraron que esta entrada de Na* no es nece- saria. Manteniendo los canales del Na” totalmente blo- ‘queados por la tetrodotoxina, Katz y Miledi produjeron, directamente la despolarizacién de la membrana presi- naptica al pasar una corriente de despolarizacion a tra- vés del segundo microelectrodo intracelular. Por encima de un umbral de aproximadamente 40 mV desde el po- tencial de reposo, se liberan cantidades progresivamente mayores de transmisor (a juzgar por el aspecto y la ampli- ‘Amol’! peo resraptco iV genera potenciales de accion mas pequenos (2 y 3). Cuando i pico presindptico se reduce a 40 mV o menos. és incapaz de ‘producic un potencial sindptico (4) C. Se puede inferir una curva entrada sala para la iberacion de ‘ansmisor a partic de la dependencaa de la arnpiitud de! potencial ‘sinaptico respecto a ia amplitud det potencial de accion presinapti co. Esta curva se obtene al estimular el nervo presinapica dado ‘ave los canales de Na* para el potenciat de accidn presinaprico son bloqueadas progresivamente. 1. Es necesaria una despoia za010n presinaptica de 40 mV para produc un potencial sinaptico, ‘Mas alld. de este umibral existe un incremento progresivo de Ia ‘amplitud del potencial sindptico en respuesta a pequenas modi caciones de la amplitud del potencial presinaptico. 2. La grafica Ssemilogaritmica de los datos en la curva entrada sala demuestra {ue la relacadn entre el picoppresinéptico y el potencial postsinapt 60 es lagaritmica Un incremento de 10 mV en el pico presin” ~\ ‘co produce un aumento de 10 veces en el potencial sinaptn tud del potencial postsinaptico). En el intervalo de despo- larizacién con el que se produce la liberacién det transmi- sor quimico (40-70 mV por encima del nivel de repos0), ‘un incremento de 10 mV en la despolarizacién provoca wn aumento de 10 veces en la liberacion del transmisor. Por tanto, las terminales presindpticas pueden liberar trans sor sin necesidad de que entre Na’. La entrada de Na sélo es importante porque despolariza la membrana en grado suficiente como para generar el potencial de accion. hecesario para la liberacién del transmisor. {Podria la salida de K* a través de canales sensibles al voltaje y desencadenada por el potencial de accidn ser la responsable de la liberaci6n del transmisor? Para es tudiar la contribucién de la salida de K* a la liberacion del transmisor, Katz y Miledi bloquearon los canalesA Disposicion expermental B Potenciales cuando estan bloquoados los canales de Nav Capitulo 14./ Liberacis de transmisores Potencales cuando ‘estén bioqueados los canaies de K° mx Se vansmisor © Curve de entrada-saida de a kberacion 255 oe vreaeheaes Pot ey corms Pe Peeeel a) Gonrew | , Zo Boo a Be mae a | Bo — imal ie aS ees 3 » a MPSS = A ma, i} Z . - : PMS ay = nee [ote oe é foals ses Js Figura 14-2. El bloqueo de los canales Na* y K’ sensibles al voltaje en las terminales presinapticas modifica {a amplitud, ¥y la duracién del potencial de accisn presinaptico, asi como 21 potencial postsinaptico resultante, pero no bloquea Ia Ii beracion del transmisor. (Adaptado de Katz y Miledi, 1967a.) A. La disposicion experimental es ol mismo que en la Figura 14 1. excepto porque en la Célula presinaptica se ha introducido un lectrodo con paso de corriente, (TEA = tetraetilamonio | 8. Los canales Na° sensibles al voltaje quedan completamente bloqueades al ahadi tetrodotoxina (TTX) ala soluci6n que bana la célula. Cada grupo de tres curvas representa (de abajo hacia arriba) e! puiso de cornente de despolarizacion inyectado en Ia terminal presinaptce (t), el potencial resultante en la terminal Presinaptca (Pre) y el potencial postsinaptico generado como resultado de la liberacién de transmisor en la célula postsinap. ica (Post) Se aplican pulsos de corriente progresivamente mas intensos para product una despolarizacion proporcio- nalmente mayor en Ia terminal presinaptica (2-4), Estas des: polarizaciones presinépticas causan potenciales postsinspticos \ncluso en ausencia de fiujo de Na* Cuanto mayor es la despo- 'arizacion presinaptica mayor es el potencial postsinaptico, 1o Ue indica que e! potencial de membrana ejerce un control di- ‘recto sobre la liberacion de transmisor. Las despolarizaciones del K* sensibles al voltaje utilizando tetraetilamonio al mismo tiempo que bloquearon los éanales del Na” sen- sibles al voltaje con tetrodotoxina. Después, estos inves- tigadores pasaron una corriente de despolarizacién a través de las terminales presinapticas y observaron que ain asi los potenciales postsindpticos eran de tamaio ormal, lo que indicaba que la liberacién del transmisor €ra normal (Fig. 14-2). En efecto, en las condiciones de este experimento, el potencial presinaptico se mantiene presinapticas no se mantienen durante toda la duracion def put so de corriente de despolarizacidn datudo al retraso en la activa- ‘16 de los canales K* sensibles al voltaje, que provoca la repo: larizacion C. Después de que los canales Na” sensibies a! voltaje corres: ondientes al potencial de accidn han sido blogueados, se inyec: ta tetraetiamonio (TEA) en ia terminal presinaptica para bloquear tambien los canales K* sensibles al voltaje. Cada grupo de tres ccurvas representa e! pulso de corriente, el potencial presinaptica ¥ el potencial postsinaptico, igual que en el punto B. Como los, canales K* presindpticos estan bloqueados, la desoolarizacion presinaptica se mantiene durante todo el pulso de corriente. Las despolarizeciones presindpticas intensas y pefsistentes produ cen grandes potenciales postsinapticos mantenidos (2-4) Esto indica que para ta liberacion efectiva de transmisor no son nace sarigs los canales de Na” ni los canales de K* 1D. El bloqueo de los canales de Na* y K* permite la medicwon de luna curva de entrada-salida mas completa que la de la Figura 14 1. Ademas de la parte gradual de la curva, se observa ahora una meseta, Por tanto, mas alla de cierto nwvel de despolarizacien presinaptica, la despolanzacion no induce una liberacion adicio: ‘al de transmisor EI nivel inicial del potencial de membrana pre sindpbco era de -70 mV. durante todo el pulso de corriente debido a que esta bloqueada la corriente de K* que normalmente repola za la membrana presindptica. El resultado es que se ‘mantiene la liberaciGn del transmisor (Fig; 14-2C). Los incrementos del potencial presinaptico por encima de un limite superior no aumentan adicionalmente el po- tencial postsindptico (Fig. 14-2D), Por tanto, para la libe racidn del transmisor no es necesario el flujo de Na° ni de K”256 Parte Ill / Interacciones elementales Laliberacién de transmisores esti desencadenada por la entrada de calcio Mas tarde, Katz y Miledi dirigieron sti atencién a los iones Ca**. Anteriormente, José del Castillo y Katz ha- bian observado que el incremento de la concenteacion extracelularde Ca” aumentaba la liberacidn del transmi- tras que la disminucién de dicha concentracién la transmision reducia y, en tltima instancia bloqueaba, sinJptica. Sin embargo, como la liberacién del transmisor es un proceso intracelular, estos hallazgos impticaban que el Ca® se debe introducir en la célula para influir en la liberacidn del transmisor. Los trabajos previos sobre el axén gigante del calamar hhabian identificado una clase de canales de Ca" sensi- bles al voltaje. Dado que existe una fuerza electromecani- ca muy intensa para la entrada del Ca” y a que la con- centracién extracelular de Ca? es normalmente 4 veces mayor que la concentracion intracelular, la apertura de Jos canales de Ca® daria lugar a una importante entrada de Ca’. Sin embargo, estos canales del Ca* estan distri- buidos de manera dispersa a lo largo del axén principal Katz y Miledi propusieron que los canales del Ca po- drian ser mucho mas abundantes en la terminal presi- naptica y que el Ca™ podria tener una funcién doble: como transportador de la carga de despolarizacion du- rante el potencial de accidn (igual que el Na’) y como seal especial portadora de informacion relativa a las modificaciones en el potencial de membrana dirigida a los mecanismos intracelulares responsables de la libera~ cig del transmisor. La pruebas directas de la presencia de una corriente de Ca* a través de canales sensibles al voltaje en la terminal presinaptica del calamar fueron aportadas por Rodolfo Liinds y colaboradores. Mediante un microelectrodo con pinza de voltae, Llinds produjo la despolarizacion de la terminal al mismo tiempo que bloqueaba los canales de Na* y K* sensibles al voltaje mediante tetrodotoxina y tetraetilamonio, respectivamente. Este investigador ob- serv que las despolarizaciones progresivas activaban una corriente de entrada de Ca° gradual que, a su vez, inducian ta liberacién gradual del transmisor (Fig, 14-3) La corriente de Ca’* es gradual porque los canales Ca” poseen puertas de activacién dependientes del voltaje, de la misma forma que los canales de Na" y K* sensibles al voltaje. Los canales de Ca en las terminates del cala- mar son, sin embargo, diferentes de los canales de Na” debido a que no se inactivan rapidamente sino que per- manecen abiertos mientras dura la despolarizacién pre- sinaptica. Una caracteristica sorprendente de la liberacién de transmisores en todas las sinapsis es su dependencia clara y no lineal de la entrada de Ca’*, de manera que un ineremento de dos veces en la entrada de Ca** puede aumentar la liberacién de transmisor hasta en 16 veces. Esta relacidn indica que en algtin punto, en el denomina- i a F Figura 14-3. Un experimento sencillo demuestra que la libe racién de transmisor es una funcion de la entrada de Ca” en la terminal presindptica. Los canales de Na" y K* sensiies al voltaje de la sinapsis gigante det calamiar son bloqueados tetrodotoxina y tetraetilamonio. La terminal presinéptica se pinza mediante voltae y el potencial de membrana se gradua en seis niveles diferentes de despolarizacion (trazados inferiores). La cantidad de corriente de entrada de Ca’ presinéptca \trazados centrales) que acompafia a la despolarizacion se correlaciona con la amplitud del potencial postsinaptico resultanie (trazados superiores!. Esto se debe a que la cantidad de corriente de Ca {que atraviesa los canales sensibles al voltaje determina la cari {dad de transmisor liberado que, a su vez, determina el tamano {del potencial postsinaptico. La muesca que se observa en el 1/3 zado del potencial postsinaptico es un artetacto que se debe a) apagado del potencial presinapnico. (Adaptado de Linas y Hew ser, 1977) do sensor de enlcio, es necesaria la unidn de hasta cuatro iones Ca™ para que se produzca la liberacion del trao— misor. Incluso en la terminal axonal, las corrientes de Ca son pequenas y normalmente estin enmascaradas por las corrientes de Na” y de K*, que son 10-20 veces mayo- res, Sin embargo, en la region de la zona activa (el punto en el que se libera el transmisor) la entrada de Ca” es 10 veces mayor que en otras zonas de la terminal. Esta loca- lizacién es compatible con la distribucién de las particu- las intramembranosas que se observan en las imagenes ultraestructurales por congelacién-fractura y se conside- ra que representan los canales del Ca’* (véase la Fig, 4-7 en el Recuadro 14-2). La localizacién de los canales clel Ca’ en las zonas activas proporciona una gran concentracién local de Ca" en el punto de liberacién del transmisor durante el po- tencial de accién. En efecto, durante un potencial de ac: ci6n la concentracién de Ca™ en la zona activa puede aumentar mas de mil veces (hasta aproximadamente100 ¢M) en unos pocos cientos de microsegundos. Este incremento rapido y de gran intensidad es necesario para Ia liberacién sincrdnica rapida del transmisor. Se supone que el sensor del calcio responsable de la ripida liberacién del transmisor tiene una afinidad baja por el Ca®. Para iniciar la liberacién es necesaria una cantidad de 50-100 1M de Ca” intracelular, mientras que para muchas reacciones enzimaticas sélo es necesaria una cantidad de aproximadamente 1M de Ca’. Debido a la baja afinidad del sensor del calcio, la liberacién sdlo tiene lugaren tna estrecha regién que rodea el orificio intrace- lular del canal del Ca", puesto que es el tinico lugar en el que la concentracién de Ca°* es suficiente para iniciar esta liberacién. El requisito de una gran concentracién de Ca también garantiza que la liberacién se interrumpe ripidamente tras la repolarizacién. Una vez que se cie- los canales del Ca’, la gran concentracién local de * desaparece rapidamente (en 1 milisegundo) por di- fusi6n. Los canales del calcio se abren mas lentamente que los del Na* y, por tanto, la entrada de Ca°* no se produce hasta que el potencial de accién en la célula presinéptica se empieza a repolarizar (Fig. 14-4). El retraso que es ca~ racteristico en la transmisin sindptica quimica —el tiempo que transcurre desde el inicio del potencial de ac- cidn en las terminales presindpticas hasta el inicio del po- tencial pastsinaptico— se debe en gran medida al tiempo «que necesitan los canales del Ca para su apertura en res- puesta a la despolarizacién. Sin embargo, dado que los canales del Ca™ sensibles al voltaje se localizan muy cer- cade los puntos de liberacién del transmisor, el Ca" s6lo necesita una difusién a corta distancia jlo que permite que la liberacién del transmisor se produzca al cabo de s6lo 0.2 milisegundos de la entrada del Ca® Como veremos mas adelante en este capitulo, la dura- cién del potencial de accién es un factor determinante importante de la cantidad de Ca’* que fluye hacia la ter minal. Siel potencial de accidn es prolongado, fluye mas Ca®* al interior de la célula y, por tanto, se libera una cantidad mayor de transmisor generando un potencial postsindptico mayor. Existen canales del calcio en todas las eélulas nervio~ sas y también en células que no pertenecen al sistema nervioso, como las células musculares esqueléticas y cardiacas, en las que estos canales son importantes para el acoplamiento excitacién-contraccién, y las células en- docrinas, en las que estos canales median la liberacién de hormonas. Existen muchos tipos de canales para el Ca®* —denominados L, P/Q, N, Rry T— con propieda- des biofisicas y farmacoldgicas especificas y con funcio- nes fisioldgicas diferentes. Las propiedades especificas de estos tipos de canales estan determinadas por la identidad de su subunidad formadora de poro (deno- minada subunidad 21) que esta codificada por una fa- milia de genes relacionados (Cuadro 14-1). Los canales del calcio también presentan subunidades asociadas Capitulo 14 / Liberacidn de transmisores 257 0) | || Aeron : | re 0 Potent elecrico mv) 0 300 Tempo —~ Figura 14-4. La evolucién temporal de la entrada de Ca en la célula presinaptica determina el inicio de la transmision sinaptica. Un potencial de accién en la célula presinaptica (1) hace que se abran los canales Ca?* sensibies al voltaye y que se produzca una corente de Ca** (2) hacia la terminal. (Se puede ‘observar que la corriente de Ca"* permanece activa durante la fase descendente del potencial de accion presinaptico debido al retraso en la apertura de los canales de Ca") La entrada de Ca”= inicia la iberacion del neurotransmisor. La respuesta postsinapti «a al transmisor se produce al poco tempo (3) y, si tiene una intensidad suficiente, inicia un potencial de accion en la celula postsinaptica (4). (PPSE = potencial postsinaptico excitador ) (Adaptado de Liinas, 1982.) (denominadas 22, p, y y 8) que modifican las propieda- des del canal formado por las subunidades 21. Todas las subunidades 21 son homélogas con las subunidades a del canal de Na* sensible al voltaje, y estan formadas por cuatro repeticiones de una regién basica que contie- ne seis segmentos transmembranosos (incluido un sen- sor de voltaje $4) y por una region P que recubre el poro, (véase la Fig, 9-14).258 Parte Il / Interacciones elementales entre neuronas:transmision sindptica Cuadro 14-1. Bases moleculares de la diversidad de canales del calcio ~— Tipode canal Tejidg Bloqueantes 7 ¥ ar Tae selectivos . A P/Q Neuronas ‘eragatoxina (veneno de arafa) —Liberacion répida 8 N Neuronas ‘exconotoxina (veneno de Liberacion ripida caracol) civis L Neuronas, células endocrinas Dihidropiridinas Liberacién lenta Corazén, misculo esquelético (Péptidos) E R Neuronas ? Liberacion cépida cit T Neuronas, corazin 2 Excitabilidad Gen para el ipo formador de poro principal de la subunidad 21 La mayor parte de las células del sistema nervioso con- tienen mas de un tipo de canal de Ca*. Los canales for- mados a partir de subunidades 21 diferentes se pueden distinguir por sus distintas propiedades de regulacion mediante voltaje, por su sensibilidad especifica a blo- queantes farmacol6gicos y por su funcin fisiol6gica es- pecifica. Los canales de tipo L son bloqueados selectiva- mente por las dihidropiridinas, un grupo de férmacos con gran importancia clinica en el tratamiento de la hi- pertensién. Los canales de tipo P/Q son bloqueados selecti vamente por la w-aga-toxina IVA, un componente del veneno de la tarantula del género Atrax. Los canales de tipo N son bloqueados selectivamente por una toxina ob- tenida del veneno del caracol marino en cono, la w-cono- toxina GVIA. Los canales de tipos L, P/Q, N y R necesi- tan una despolarizacién bastante intensa para su activacién (son necesarios voltajes positivos de hasta ~40 a -20 mV) y, por tanto, a menudo se denominan canales a’ activados mediante voltaje elevado. Por el contrario, los canales Ca” de tipo T son canales Ca?” activados mediante vollaje bajo y se abren en respuesta a pequenas despolari: zaciones préximas al umbral para la generacion de un potencial de accién (~60 a ~40 mV). Como son activados por pequertas modificaciones en el potencial de membra- 1a, los canales de tipo T son titiles para controlar ta ex: tabilidad durante el potencial de reposo y constituyen ‘una fuente importante de la corriente excitadora que di rige la actividad ritmica de marcapasos de ciertas células tanto en el cerebro como en el corazén, En las neuronas, la rapida liberacin de transmisores convencionales asociada a la transmision sindptica répi- da esté mediada por tres clases principales de canales Ca*: los canales de tipos P/Q, Ny R. Las canales de tipo L no contribuyen a la liberaci6n répida del transmisor pero son importantes para la liberacion lenta de neuro- éptidos a partir de las neuronas, y de hormonas a partit de las células endocrinas. El hecho de que la entrada de Ca** a través de sélo ciertos tipos de canales Ca™ permite controlar la liberacién del transmisor se debe supuesta- mente a que estos canales estén concentrados en las z0- nas activas. La localizacion de los canales Ca de tipo N en las zonas activas se ha visualizado mediante w-cono: toxina marcada con fluoresceina en la union neuromus- cular del sapo (Fig. 14-5). Por el contrario, los canales de tipo L pueden estar excluidos de las zonas activas, lo que limita su participacién a la transmisién sindptica lenta, Los transmisores se cudnticas eran en unidades eComo y dénde inicia la liberacién la entrada de Ca**? Para responder a esta pregunta debemos considerar en primer lugar el mecanismo por el que se liberan las sus- tancias transmisoras. A pesar de que la liberacién del transmisor sindptico parece uniformemente graduada, realmente el transmisor se libera en cantidades discretas denominadas cuantos. Cada cuanto de transmisor produ- ce un potencial sinaptico de tamano fijo denominado po- tencial sindptico cudntico. El potencial postsinéptico total esta constituido por un ntimero integral de respuestas ‘cuanticas (Fig. 14-6). Los potenciales sinépticos aparecen ‘como una escala uniformemente graduada en los regis- tros porque cada potencial (o unidad) cuadntico es dema- siado pequeto en relacién con el potencial total Paul Fatt y Bernard Katz obtuvieron la primera clave respectoa la naturaleza cudntica de la transmisi6n sinap- tica cuando realizaron registros de la sinapsis neuromus- cular del sapo sin estimulacién presinaptica y observa- ron pequeios potenciales postsinapticos espontineos de aproximadamente 0.5 mV. De la misma forma que los potenciales de placa motora provocados por estimula ‘cidn nerviosa, estas pequeftas respuestas de despolariza- ‘cin eran mayores en la zona de contacto nervio-muiscu- oy disminuian electronicamente con la distancia (véase la Fig, 11-5). Desde entonces, se han obtenido resultados similares en el muisculo y las neuronas del sistema ner- vioso central de mamiferos. Como los potenciales sinap. ticos en las sinapsis nervio-muisculo de los vertebradosFigura 14.5. Los canales del calcio se concentran en la unién neuro: muscular en las regiones de la termi nal nerviosa presinaptica opuestas a los grupos de receptores de acetilco- lina ACh) en la membrana postsi naptica. La imagen muestra los canales a presinapticos rojo tras el marcado con una toxi plada a rojo Tejas, une a los canales de Ca’ Los jores ACh postsinapticos apare nen verde 9% n diluor fe borondipi nes aparecen normalmente superpues: 10'se han separado para poder di erenciar los colores. Los pattones de arcado con ambas s responden con toda precision, lo que indica que la zona activa de la neur presinaptica esta casi perfectamente sineada con la membrana postsinapt 3, que contiene la ion de receptores de ACH, (Tomado de 1990.) Robitaille y cols se denominan potenciales de placa motora, Fatt y Katz denominaron a estos potenciales espontaneos potenciales de placa motora en miniatura. La evolucién temporal de los potenciales de placa mo: tora en miniatura y los efectos de diferentes farmacos 50 bre los mismos son indistinguibles de las propiedades de los potenciales de placa motora provocados por la esti ‘mulacién nerviosa. Puesto que la acetilcdlina (ACh) es el transmisor en la sinapsis nervio-miisculo, los potenciales de placa motora en miniatura —de la misma forma que los potenciales de placa motor wentan y se prolon gan bajo la accién de la prostigmina, un farmaco que in hibe la hidrétisis de la ACh por la acetilcolinesterasa, De manera similar, los potenciales de placa motora en mi hiatura son reducidos y finalmente abolidos por los far macos que bloquean el receptor de la ACh. En ausencia Capitulo 14 / Liberacién de transmisore de estimulacién, los potenciales de placa motora en mi niatura aparecen con intervalos aleatorios; sti secuencia puede aumentar por la despolarizacién de la presindptica. Estos potenciales de: motor presin4ptico degenera, pero reaparecen cuando se forma una nueva sinapsis motora, lo que indica que estos fenémenos representan pequefias cantids sor liberadas de manera continua a partir de la terminal nerviosa presinaptica, {Qué podria explicar el tamaito fijo (aproximadamen: te, 0.5 mV) del potencial de placa motora en miniatura Del Castillo y Katz fueron los primeros que estudiaron la posibilidad de que cada cuanto represente una respuesta fija como consecuencia de la apertura de un timico canal receptor ACh. Al aplicar pequefas cantidades de ACh a la placa motora del misculo del sapo, estos investigadores parecen si el nervio jes de transmi260 A Respuesta 8 s 5 1 — cosduite ro =n ; 18 je tan oole Numero de obsenvaciones 8 ° eoie 4 2 ° Parte III / Interacciones elementales entre neuronas: transmisién sinéptica tara Numero 08 coseraccones 8 eee tat 0 02 04 06 08 ‘plitude os potencies teapontanes de pldea motor3 ae ote to Tew : eine Hon Figura 14-6. El nourotransmisor es liberado en incrementos fijos, o cuantos. Cada cuanto de transmisor genera un potencial jpostsindptico unitario de amplitud fija. La amplitud del potencial postsindptico provacado por la estimulacién nerviosa es igual ala ‘amplitud unitaria muitipicada por el numero de cuantos de trans- misor liberado, ‘A. Los registros intracelulares de una fibra muscular en la placa motora muestran la modificacién postsindptica en el potencial ‘cuando se aplican 8 estimulos consecutivos del mismo tamanio ‘al nervio motor. Para reducir la salida de transmisor y mantener fen un tamario pequefa el potencial de la placa motora, el tejido se band en ura solucion con déficit de Ca’ (y rica en Mg). Las respuestas postsindpticas al estimulo son variables. Dos impul- 08 presinapticos no generan una respuesta postsinaptica (fa- los); dos producen potenciales unitarios, y los otros producen tespuestas que son aproximadamente 2 a 4 veces la amplitud del potencial unitario. Se puede observar que los potenciales es- ponténeos de placa motora en miniatura (S) tienen el mismo ta mao que el potencial unitario. (Adaptado de Liley, 1956.) B. Despues del registro de multiples potenciales de placa moto- ra se conte y represent6 ol numero de respuestas de cada am- ‘obtuvieron respuestas de despolarizacion mucho meno- res de 0.5 mV. Desde entonces, queds claro que el poten- cial de placa motora en miniatura debe reflejar la apertu- rade mas de un canal-receptor de AGh. De hecho, Katz y Miledi pudieron calcular posteriormente que la corriente elemental a través de un tinico canal-receptor de ACh era de aproximadamente 03 ,tV (véase el Capitulo 6). Esta ifra representa alrededor de 1/2000 de la amplitud de tun potencial de placa motora en miniatura. Por tanto, un potencial de placa motora en miniatura de 0.5 mV re- quiere la suma de corrientes elementales de aproximada- mente 2000 canales. Este cdlculo fue confirmado poste- Cy a rT ar ey Amplitude os potencies de paca rotors Vt 28 plitud en el histograma que aparece en la figura. La distnibucién {de las respuestas genera varios picos. El primer pico, 3 0 mV, representa los fallos. El primer pico de respuesta. a 0.4 mV. re- [presenta el potencial unitario, que es la respuesta mas pequena. Esta respuesta unitana tiene la misma ampilitud que el potencial espontaneo de placa motora en miniatura (recuadro}. Los otros ppicos que aparecen en e! histograma corresponden a amplitudes ‘que son miltiplos integrales de la amplitud del potencial unitano La linea roja muestra una distribucion tedrica compuesta por la ‘suma de varias funciones gaussianas ajustadas a los datos del histograma. En esta distnbucion cada pico aparece ligeramente abierto, fo que refieja el hecho de que la cantidad de transmisor fen cada cuanto —y, por tanto, la amplitud de Ia respuesta post. sindptica— varia aleatoriamente alrededor del pico. E! numero de sucesos bajo cada pico dividido por e! numero total de suce: ‘$08 en el histograma es la probabiidad de que la terminal presi ‘ndptica libere el nimero correspondiente de cuantos. Esta proba bilidad sigue una distribucion de Poisson (vease ol Recuacro 14-1, La distribucion de las amplitudes de los potenciales esponta ‘neos en miniatura, que aparece en el recuadro de la figura. tam bién se ajusta a una curva gaussiana, (Adaptado de Boyd y Mar: tin, 1956.) Fiormente cuando se midieron directamente las cortien- tes a través de canales de ACh activados tinicos median- te técnicas de registro de zona (véase el Recuadro 6-2). Como la apertura de un tinico canal requiere la unidn, de dos moléculas de ACh al receptor (una molécula en cada una de las dos subunidades 2) y que parte de la ACh liberada nunca aleanza las moléculas receptoras (debido a que se difunde fuera de la hendidura sindptica © a que se pierde mediante hidrdlisis), son necesarias aproximadamente 5000 moléculas para producir un po- tencial de placa motora en miniatura. Este ntimero se ha confirmado mediante la determinacién quimica directaRecuadro 14-1. Calculo de la probabilidad de liberacién del transmisor Laliberacién de un cuanto de transmisor es un fendmeno alea- torio, La respuesta del transmisor aun potencial de aceidn sdlo tiene dos posibilidades: se lbera o.n0 se libera un cuanto, Este fenimeno sigue una distribucién de tipo binomial o de Ber- ‘oul (similar a tirar una moneda al aire para determinae si sale cara 0 cruz). La probabilidad de que se libere un cuanto, por un potencial de accién es independiente de la probabil. dad de que sean liberados otros cuantos por el mismo poten. cial de accidn, Por tanto, para una poblacion dada de cuantos {que pueden ser liberados, cada potencial de accion representa una serie de ensayos binomiales (comparables a tia un peu po de monedas para ver cuantas salen cara y cuantas salen cruz) En una distribucién binomial p epresenta la probabilidad Promedio de éxito (es decir la probabilidad de que se pro- - minal sino que estan fijadas 0 ancladas a una tram. se filamentos del citoesqueleto por accidn de las sinapsinas, tuna familia de cuatro proteinas (la, Ib, Ila y IIb). De estas cuatro, las sinapsinas Ia y Ib son las mejor estudiadas ‘Ambas proteinas son sustratos para la proteina cinasa dependiente del AMPc y para la cinasa dependiente de Ca’*/calmodulina. Cuando la sinapsina I no esta fosfori- lada se supone que inmoviliza las vesiculas sindpticas ‘mediante fijaci6n con filamentos de actina y otros com- ponentes del citoesqueleto. Cuando la terminal nerviosa esta despolarizada y entra el Ca’, la sinapsina I parece ‘quedar fosforilada por la proteina cinasa dependiente de Ca®*/calmodulina. La fosforilacién libera las vesiculas de su anclaje al citoesqueleto y las permiten dirigirse a la zona activa (Fig. 14-14) El desplazamiento de las vesiculas sinapticas hasta sus puntos de acoplamiento para la liberacién del transmisor Jo pueden llevar a cabo Rab3A y Rab3C, dos miembros de una clase de pequefias proteinas relacionadas con la superfamilia del protooncogén ras que se unen al Cy lo hidrolizan hacia GDP y fosfato inorganico (Fig. «4 148), Estas proteinas Rab se unen a las vesiculas sinapti- cas a través de un grupo hidrocarbono hidréfobo que esté unido de manera covalente al extremo carboxilo de la proteina Rab. La hidrdlisis del GTP unido a Rab, con su conversién a GDP, puede ser importante para el des~ plazamiento correcto de las vesiculas sinapticas hasta sus zonas apropiadas de acoplamiento. Durante la exo citosis, las proteinas Rab son liberadas desde las vesicu- las sinapticas hacia el citoplasma Tras el desplazamiento de una vesicula hasta su lugar de liberacién se produce un complejo grupo de interac ciones entre las proteinas de la membrana de la vesicula sinaptica y las proteinas de la membrana presinaptica Estas interacciones parecen completar el acoplamiento de las vesiculas y su preparacién para fusionarse en res~ puesta a la entrada de Ca". Este tipo de interacciones es acumulen cerca deCapitulo 14 / Liberaciin de transmisores 271 i \ Av. FON Ton betula eLaretonna Figura 14-13. En el esquema se muestran las proteinas de vesicula sinaptica que han sido caracterizadas, asi como al- ‘unos de sus receptores y sus funciones, Se supone que exis- ten compartimentos separados para el (1) almacenamiento (donde las vesiculas estan anciadas al citoesqueleto}, (2) el movi miento y desplazamiento de las vesiculas hasta las zonas acti vas, (3) lacoplamiento de las vesiculas en las zonas activas y su ‘estimulacion para la liberacién del transmisor, y (4) la iberacicn del transmisor. Algunas de estas proteinas representan el obje- vo de las neurotoxinas que actuan modificando la liberacién del {ransmisor. La VAMP (sinaptobrevina), [a SNAP-25 y la sintaxina ‘Son objetivo de las toxinas del tétanos y el botulismo, dos meta- ‘oproteasas dependientes del cinc, y son fragmentadas por es: tas enzimas, La watrotoxina, una toxina de la ara que provoca ‘agotamiento masivo de las vesiculas con liberacién del transm- 50r, Se une a las neurexinas. 1. Las sinapsinas son proteinas aso- Cladas a fa vesicula que parecen gobernar las interacciones entre 'a vesicula sindotica y los elementos del citoesqueleto en la importante para la exocitosis en todas las eélulas, no so- amente en las terminales sinapticas de las neuronas. Como ya hemos visto en el Capitulo 4, todas las protei- ‘nas secretorias son sintetizadas en los ribosomas y dirigi das a la luz del reticulo endoplésmico (RE). Cuando estas Proteinas abandonan el RE son dirigidas al aparato de Golgi en vesiculas formadas a partir de la membrana del terminal nerviosa 2. Les proteinas Rab (véase'la Fig. 14-148) 2 ‘Fecen estar implicadas en el movimiento de las vesiculas en el Interior de la célula y también en el desplazariento de las vesicu las dentro de la terminal nerviosa. 3. Elacoplamiento. a fusion y la iberacién de las vesiculas parecen implica’ diferentes imerac: ‘ones entre las proteinas de la vesicula y las proteinas de |a ‘membrana plasmatica correspondiente a la terminal nerviosa VAMP (sinaptobrevinal y sinaptotagmina (p65) en la membrana e la vesicula, y sintaxinas y neurexnas en a membrana de la terminal nervosa, Las tlechas indican posibles interacciones su: Geridas en estudios in vitro. 4. La identidad de las proteinas de vesicula y de membrana plasmatica que constituyen el poro de fysi6n no ha sido aclarada, La sinaptofisina, una proteina integral ‘de membrana en las vesiculas sinapticas, es losforiads 00° tio sina cinasas y puede regular la liberacion del transmisor Los transportadores de vesicula estén implicados en la acumuiacion de neurotransmisor en el interior de la vesioula sinantica (véase Capitulo 18) RE, Después, las vesiculas se agrupan y s¢ fusionan con la membrana del aparato de Golgi, descargando su con: tenido proteico en la luz del mismo, donde las proteinas son modificadas. Otras vesiculas transportan la proteina secretoria entre los compartimientos cts y trams (las dife- rentes cisternas) del aparato de Golgi hasta que la protei: ‘na queda completamente modificada y madura. La pro-272 Parte IIL / Interacciones elomentales entre neuronas: transmision sinsptica Figura 14-14. La movilizacién, el aco: plamiento y la funcion de las vesiculas sindpticas estén controlados por el Ca ¥ por proteinas de unién a GTP de bajo peso molecular. A. Las vesiculas sindpticas de las termina: les nerviosas estén secuestradas en un ‘compartimiento de almacenarmento donde permanecen ancladas al citoesqueleto, ¥ también en un compartimyento de lbera con donde estan aguupadas y unidas a la ‘membrana presinaptica La entrada de Ca” en la terminal nerwiosa provoca la apertura rna que se deben a cambios en el potencial de repose. en los potenciales de accién, y 2) procesos extrinsecos, como la senal de entrada sinaptica, procedente de otras, neuronas. Los cambios a largo plazo en la accién sindptica quimi- cason cruciales para el desarrollo y-el aprendizaje, y con- sideraremos estos cambios en detalle en un capitulo pos- terior. Aqui describiremos en primer lugar los cambios a corto plazo, es decir, modificaciones en la cantidad de transmisor liberado como consecuencia de la terminal presinaptica 0 de factores extrinsecos La concentracién de calcio libre esta regulada por mecanismos celulares intrinsecos Como ya hemos visto al inicio de este capitulo, la libera- cin del transmisor depende fundamentalmente de la concentracién intracelular de Ca". Por tanto, los meca- rnismos de la neurona presinéptica que alteran la concen: tracién de Ca® libre en la terminal presinaptica tambie~ influyen en la cantidad de transmisor liberado. En aly nas células existe un pequefto flujo continuo de Ca’ a través de la membrana terminal presinaptica, incluso con potencial de membrana en reposo. Este Ca’* fluye a través de canales Ca" de tipo L sensibles al voltaje, que se inactivan poco, si es que lo hacen. El flujo continuo de Ca® esta potenciado por la despo- larizacion y disminuido por la hiperpolarizacién, Una li- ‘gera despolarizacién de la membrana puede incrementar la entrada continua de Ca* y, de esta manera, aumentar la cantidad de transmisor liberado por los potenciales de accién subsiguientes. Una ligera hiperpolarizacién tiene el efecto contrario (Fig. 14-16). Al alterar la cantidad de Ca¥ que entra en la terminal, las pequeiias modificacio- res en el potencial de membrana en reposo pueden pro- vocar que una sinapsis efectiva no sea operativa 0 bien que una sinapsis débil sea muy eficaz. Estas modificacio- rnes en el potencial de membrana también pueden serNorma Despoionzad prosmaptes =v) o Capitulo 14 / Liberacion de transmisores 275 Estemagoontetnca Bo “40 Potencates de aceon presngotics inv 8 Potenea: Potereacin 260 osteanea 25 ‘osterdpnce wom Potencat 4 Lh Figura 14-16. Las modificaciones en e! potencial de mem- brana de Ia terminal presinaptica influyen en la concentra cin intracelular de Ca" y, por tanto, en la cantidad de trans- ‘misor liberado. Cuando la membrana presinaptica esté en su ppotencial de reposo normal, un potencial de aceién (trazado su: pperior) genera un potencial postsinaptico de un tamafo determ- ‘nado Itrazado inferior) La hiperpolarizacién de la terminal presi dptica mediante 10 mV antes de un potencial de accion disminuye la entrada constante se Ca’, de manera que un po- tencial de accion del mismo tamafo origina un potencial posts Iéptico mas pequefio. Por el contraro, la despolanzacicn de la ‘eurona presinaptica en 10 mV incrementa la entrads constante de Ca, de manera que un potencial de accién del mismo tametio Produce un potencial postsindptico de tamafio suficiente como ara iniciar un potencial de accion en la célula postsinaptica producidas por otras neuronas que liberan transmisoren sinapsis axo-axonales que regulan los canales iGnicos Presinapticos, como se describe mas adelante. Estas mo- dificaciones también se pueden producir experimental mente inyectando una corriente. Laeeficacia sinaptica también se puede modificar en la mayor parte de las neuronas mediante una actividad in- tensa. En estas células, una cadena de alta frecuencia de Potenciales de accidn se sigue de un periodo durante el cual los potenciales de accion generan potenciales postsi- ‘apticos sucesivamente mayores. La estimulacion de alta frecuencia de la neurona presindptica (que en algunas células puede generar 500-1000 potenciales de accién por segundo) se denomina estimulacion tetdnica. El incremen- to del tamafo de los potenciales postsinapticos durante la ‘estimulacién teténica se denomina potenciacién; el aumen- {0 que persiste tras la estimulacién tetinfica se denomina Potenciacién postetinica. Habitualmente, este incremento dura varios minutos, pero puede persistir durante una hora o mas (Fig. 14-17) La potenciacién postetanica parece obedecer a una sa- {uracién transitoria de los diferentes sistemas de tampo- Ramiento del Ca’ en las terminales presinapticas, princi- Palmente et reticulo endoplasmico liso y la mitocondria Figura 14-17. Una tasa elevada de estimulacion de la neuro. 'na presinaptica induce un incremento gradual de la ampli tud de los potenciales postsinapticos. Este incremento de la fuerza de la sinapsis representa el almacenanvento de informa ‘on sobre una actividad previa, lo que constituye una forma ele ‘mental de memoria. La escala de tiempo en el registro exper: ‘mental ha sido comprimida (cada potencial pre y postsinéptico ‘aparece como una linea simple que indica su amplitud). Para es tablecer un valor basal (control) la neurona presinaptica es est rmulada con un ritmo de 1 por segundo, generando un potencial postsinéptico de aproximadamente 1 mV Después, la neurona presinaptica es estimulada durante varios segundos a un ntmo ‘mayor de 5 por segundo, Durante esta estimuiacdn tetanica e! potencial postsindptico aumenta de tamaho, un fenémeno que: ‘Se conoce como potenciacion. Tras varios segundos de estimu lacion, fa neurona presinaptica vuelve al valor basal 0 control de estimulacion 1 por segundo). Sin embargo. ios potenciales post ‘sindpticos permanecen aumentados durante varios minutos. en algunas células durante varias horas Este incremento mante: inido Se denomina potenciacidn postetdnice Esto causa tn exceso temporal de Ca, denominado C. residual, que es el resultado de la entrada relativamente grande de Ca** que acompana a la cadena de potenciales de accién. El incremento de la concentracién de Ca" Ii bre en reposo aumenta la transmisién sindptica durante muchos minutos, o més, al activar ciertas enzimas que son sensibles a los mayores niveles de Ca** en reposo, por ejemplo, la proteina cinasa dependiente de Ca" /cal- ‘modulina. La activacién de estas vias enzimaticas depen- dientes del calcio parece incrementar la movilizacion de las vesiculas sindpticas en las terminales, por ejemplo a través de la fosforilacién de las sinapsinas. La fosforila- ién de la sinapsina permite la separacién de las vesiculas sinapticas de st anclaje al citoesqueleto, y su movilizacion hacia las zonas de acoplamiento para su liberacion. Como, consecuencia de ello, cada potencial de accién que alcanza las terminales de la neurona presinaptica libera una canti- dad de transmisor mayor que el anterior276 Parte IIL / Interacciones elementales entre neuronas: transmisién sinsptica A Inhibicon presinaptica Potencial freee on veo Postrace presmaptca Presmapnca Postsnapvca Ne ba conto! 8 Facitacon peesnaptca Faciass root Con enees —— / deacon presinggtico —~ oA a Nek rong Presindptica 7 Postsindotea N Aa Nenmecicte coo EP irae nia nowera Proongactin de Figura 14-18. Las sinapsis axo-axonales pueden inhibir 0 fa- cilitar la liberacién de transmisor por la célula postsinaptica ‘A. Una neurona inhibidora(c,) establece contacto con la terminal de una segunda neurone presinaptica (a). La liberacién de trans- ‘musor por la célula c, disminuye la comiente Ca** en la célula a teduciendo por tanto la cantidad de transmisor liberado por la Ccélula a, El resultado es que queda deprimido el potencial posts naptico en la cella b jAqui tenemos un tipo simple de memoria celular! La ccélula presinaptica almacena informacién relativa a la his- toria de su actividad en forma de Ca residual en sus ter- ‘minales. El almacenamiento de informacién bioquimica en la neurona, tras un breve periodo de actividad, provoca un refuerzo de la conexién presinaptica que persiste durante ‘muchos minutes. En el Capitulo 62 veremos cémo la poten- ciacién postetanica en ciertas sinapsis contintia con un pro- ceso de duracién incluso mayor (también iniciado por la entrada de Ca™) denominado potenciacién a largo plazo, que puede durar muchas horas o incluso dias. Las sinapsis axo-axonales en las terminales presindpticas regulan el calcio libre intracelular Las sinapsis se forman en las terminales axonales y tam- ign en el cuerpo celular y las dendritas de las neuronas (véase el Capitulo 12). Asi como las acciones sindpticas axosométicas afectan a todas las ramas del axén. neu- presniotica B. Una neurona faciltadora (c,) establece contacto con fa term ‘nal de una segunda neurona presinaptica (a), La liberacion de ‘ransmisor por parte de la célula c, induce una depresion de ia Corriente K* en la célula a, prolongando de esta manera el poten ‘ial de accién en la célula a e incrementando ta entrada de Ca?” a través de los canales Ca** sensibles al voltaje. El resultado es ‘que se incrementa el potencial postsingptico en la cella b. ronal postsinaptico (porque modifican la probabilidad de que la neurona desarrolle un potencial de accién), las acciones axo-axonales controlan selectivamente r= > individuales del axén. Una accién importante de las napsis axo-axonales es el control de la entrada de Ca en las terminales presindpticas de la célula postsinspt ‘a, disminuyendo 0 aumentando la liberacién de trans- misor. Como vimos en el Capitulo 12, cuando una neurona hiperpolariza el cuerpo celular (o las dendritas) de otra, disminuyen las probabilidades de que la célula pos! naptica se active; esta accién se denomina inhibicin post- sinéptica. Por el contrario, cuando una neurona contacta con la terminal axonal de otra puede reducir la cantidad de transmisor liberado por la segunda célula sobre una tercera neurona; esta accién se denomina inhibicién prest néptica (Fig. 14-18A). Asimismo, las acciones sindpticas axo-axonales pueden incrementar la cantidad de trans- misor liberado por la célula postsinéptica; esta accidn se denomina facilitacién presindptica (Fig. 14-18B). Por raz0-nes no bien conocidas, la regulacion presinaptica se pro- duce al principio en las vias sensitivas. Los mecanismos mejor analizados de inhibicidn y faci- litacién presinptica son los de las neuronas de los inver- tebrados y los de las neuronas mecanorreceptoras (cuyos cuerpos celulares se sitian en los ganglios de las raices dorsales) de los vertebrados. En estas células se han identificado tres mecanismos para la inhibicién presi naptica. Uno de ellos esta mediado por la activacién de receptores metabotrépicos que provocan simulténea- mente el cierre de los canales de Ca” y la apertura de los canales de K° sensibles al voltaje, de forma que ambas acciones disminuyen la entrada de Ca® y potencian la repolarizaciGn de la célula. El segundo mecanismo esta mediado por la activacién de los canales de CI ionotrspi- cos con apertura mediante GABA, lo que induce un cremento de la conductancia para el Cl’ con disminucién (0 cortocircuites) de la amplitud del potencial de accién en la terminal presindptica, El resultado es que se produ- ce una despolarizacién menor y se activan menos canales de Ca* por el potencial de accién. El tercer mecanismo también estd mediado por la activacién de receptores metabotrépicos que implican la inhibicién directa del mecanismo de liberacién del transmisor, independiente- mente de la efitrada de Ca*. Este mecanismo parece ac- tuar mediante la disminucién de la sensibilidad para el Ca°* de una © mas etapas implicadas en el proceso de liberacién. Por el contrario, la faclitacién presinaptica puede estar producida por una mayor entrada de Ca". En ciertas neu- fonas de molusco, la serotonina acti a través de un me- canismo de fosforilacién proteica dependiente del AMPe para cerrar los canales de K*, ampliando de esta manera el potencial de accién y favoreciendo la persistencia de la entrada de Ca®* durante un periodo més largo (véase el Capitulo 13). Ademas, la proteina cinasa dependiente del AMPe también actia diectamente sobre el mecanismo de ‘exocitosis para incrementar de forma independiente la libe- sacin de la cantidad de Ca’* que entra. En otras células, la activacion de canales presindpticos sensibles al ligando, como los receptores de ACh 0 los receptores de glutamato dle tipo cainato, aumenta la liberacién de transmisor, posi- bblemente por despolarizacion de las terminales presinapti- cas ¢ incremento de la entrada de Ca Por todo ello, a regulacién de la concentracién de Ca** libre en la terminal presinéptica constituye un importante factor en los diversos mecanismos que facilitan la plastici- dad de las sinapsis quimicas. Aunque sabemos muchas ‘cosas acerca de las modificaciones a ecrto plazo en la efec- tividad sindptica —modificaciones que duran minutos horas— estamos empezando a conocer las modificacio- es que persisten dias, semanas, o incluso més. Estas mo- dlificaciones a largo plazo suelen requerir una alteracién «le la expresién génica y del crecimiento de las sinapsis, ademas de la alteracién en la entrada de Ca y el aumen- to de la liberacién a partir de sinapsis preexistentes. Resumen En su libro lonic Channels of Excitable Membranes, Bertil Hille resume la importancia del calcio en fa funcién neu- ronal Laelectricidad se utiliza para abrir los emplean para producir electrividad. Sin embargo, el sistema erviose no es principal vor parte d cidn eldcteica en c un dispositive electricn, La me las excitables a la larga traducen su excita iguna otra forma de actividad. Gene las células excitables traducen st electricidad twel flujode Co eset je: Los iones de calcio son mensajeros intraceh activar muchas tunciones celulares. Los ¢ thian como el un lizando, decion median * regulade por sensibles al volta ares capaces le ales del calcio ac 10 enlace para traducir In despolarizacion en vidades no eléctricas controladas por ly excitacien, in canales para el Ca’, nuestro sistema nervioso no proxluciria senales de salida todas Ins act Para la liberacién de neurotransmis 10 Son necesarias la entrada de Na’ ni la salida de K Sélo el Ca‘, que entra en la célula a través de los canales sensibles al voltaje en la terminal presinaptica, es esen: cial. El intervalo sindptico, que representa el tiempo transcurtido entre el inicio del potencial de accion y la liberaci6n del transmisor, refleja principalmente el tiem- po que tardan en abrirse los canales de Ca sensibles al voltaje y que tarda el Ca en iniciar a descarga del trans- misor a partir de las vesiculas sinapticas EL transmisor esta empaquetado en vesiculas, y cada vesicula contiene aproximadamente 5000 moliculas de transmisor. La liberacién del transmisor de una tinica ve- sicula genera un potencial sinaptico cuantico. Los poten Ciales sinapticos esponténeos en miniatura se deben a la fusion espontanea de vesiculas sinapticas aisladas. Los potenciales sinpticos provocados por Ia estimulacion nerviosa estén compuestos por miltiples integrates del potencial cusntico, El aumento del Ca’* extracelular no modifica el tamano del potencial sinaptico cuantico. En vez de ello, incrementa las probabilidades de que una vesicula experimente la liberacidn de su transmisor. EL resultado es un aumento del niimero de vesiculas libera das y un mayor potencial postsinaptico. Los experimentos con el método de congelacion rapi- da han demostrado que la vesicula se une con la mem- brana plasmatica presinéptica en la vecindad de la zona activa. Los estudios con técnicas de congelacién-fractura tambien han revelado la presencia de filas ce particulas intramembranosas.a lo largo de la zona activa, particulas que se considera corresponden a los canales para el Ca Estos canales muy localizados pueden ser los responsa~ bles del rpido incremento (hasta 1000 veces) de la con- centracién de Ca" en la terminal axonal durante un po- tencial de accidn, Una hipstesis para explicar la {usin de las vesiculas inducida por el Car" es que este ion permite la formacién de un poro de fusién que atraviesa tanto la vesicula como la membrana plasmatica. Este poro provo- Fes en una sinap-278 Parte lil / Interacciones elementales entre neuronas: transmisin sinaptica ‘ca que el contenido de la vesicula sea liberado en el espa- cio extracelular y se puede dilatar de manera que toda la vesicula se fusione con la membrana plasmatica presi- naptica. El calcio también regula la movilizacion de las vesicu- las sindpticas hasta la zona activa. Estas vesiculas pare- cen estar unidas al citoesqueleto mediante sinapsina, y se considera que el Ca** libera las vesiculas al activar la pro teina cinasa dependiente de Ca™ /calmodulina, que in- duce la fosforilacién de las sinapsinas. Se han identificado varios candidatos moleculares para explicar los otros dos componentes de la liberacién: el desplazamiento y el acoplamiento. El desplazamiento parece estar mediado por las pequenas proteinas fijado- ras de GTP, Rab3A y Rab3C. Bl acoplamiento y la fusién. parecen estar en relacién con la v-SNARE VAMP (0 si- naptobrevina) y con las {SNARES de membrana plas- matica sintaxina y SNAP-25, La unién del calcio a la si- naptotagmina puede facilitar activamente la fusién de la vesicula o eliminar una pinza de tipo inhibitorio que nor- malmente bloquea la fusién. Finalmente, la cantidad de transmisor liberado por tuna neurona no es fija sino que puede ser modificada por procesos reguladores intrinsecos y extrinsecos. La esti- mulacién de alta frecuencia induce un incremento en la liberacién de transmisor denominado potenciacién pos- tetanica. Esta potenciacién (intrinseca), que dura unos po- cos minutos, est producida por el terminal después de la gran entrada de Ca" durante la ca~ dena de potenciales de accién. La despolarizacién cré hhiperpolarizacién de la neurona presinaptica también pue- de regular la liberacién al modificar la entrada mantenida y constante de Ca”. La accién extrinseca de los neurotrans- mmisores sobre los receptores en la terminal axonal de otra rneurona puede facilitar o inhibir laliberacién de transmisor al alterar el nivel de entrada constante de Ca” en reposo 0 la entrada de Ca" durante el potencial de accion. En el siguiente capitulo proseguiremos con la exposi- cidn de la transmisidn sinéptica mediante el estudio de la naturaleza de las moléculas de transmisor que se utilizan en la transmisién quimica. Eric R. Kandel Steven A. Siegelbaum Lecturas seleccionadas Dunlap K, Luebke Jl, Turner TJ. 1995. Exocytotic Ca’ chan els in mammalian central neurons. Trends Neurosci 18:89-98, Hanson Pl, Heuser JE, Jahn R. 1997. Neurotransmitter release—four years of SNARE complexes. Curr Opin Neurobiol 7(3):310-315, Jessell TM, Kandel ER. 1993, Synaptic transmission: a bidi: rectional and self-modifiable form of cell-cell communica tion. Cell 72:1-30. Katz B. 1969. The Release of Newral Transmitter Substances Springtield, IL: Thomas Lindau M, Almers W. 1995, Structure and function of fusion pores in exocytosis and ectoplasmic membrane fusion, Cure Opin Cell Biol 7:509-517. Matte: 1996. Synaptic exoeytosis and endocytosis: capacitance measurements Curr Opin Neurobiol 6(3) 358-364 Schweizer FE, Betz H, Augustine GJ. 1995. From vesicle docking to endocytosis: intermediate reactions of exo. eytosis. Neuron 14(4):689-696. Smith 5}, Augustine GJ. 1988. Calcium ions, active zones and synaptic transmitter release, Trends Neurosci 11:458-464 Sudhot TC. 1995, The synaptic vesicle cyele: a cascade of pro- tein-protein interactions. Nature 375:645-653, Referencias ~ Alberts B, Bray D, Lewis , Raff M, Roberts K, Watson JD. 19>. Molecular Biology of the Cell, 3rd ed. New York: Garland Almers W, Tse FW. 1990. Transmitter release from synapses: Does | preassembled fusion pore initiate exocytosis? Neuron 4:813-818. Bihler M, Greengard P. 1987. Synapsin I bundles F-actin in a phosphorylation-dependent manner. Nature 326:704-707. Baker PE, Hodgkin AL, Ridgway EB. 1971. Depolarization and calcium entry in squid giant axons. | Physiol (Lond) 218:709-755, Boyd IA, Martin AR. 1956. The end-plate potential in mam- ‘malian muscle. J Physiol (Lond) 13274-91 Breckenridge LJ, Almers W. 1987. Currents through the fusion pore that forms during exocytosis of a secretory vesicle, Nature 328814-817. Bruns D, Jahn R. 1995, Real-time measurement of transmitter release from single synaptic vesicles. Nature 377:62-65. Couteaux R, Pecot-Dechavassine M. 1970. Vésicules synap: tiques et poches au niveau des «zones actives de la jonc- tion neuromusculaire. C R Hebd Séances Acad Sci Sér D ‘Sei Nat 271:2346-2349, =~ Del Castillo J, Katz B. 1954. The effect of magnesium on activity of motor nerve endings. | Physiol (Land) 124:553-559, ErulkarSD, Rahamimoff R. 1978. The role of calcium ions in tetanic and post-tetanic increase of miniature end-plate potential frequency. J Physiol (Lond) 278:501-511. ‘aber DS, Korn H. 1988. Unitary conductance changes at teleost Mauthner cell glycinergic synapses: a voltage- clamp and_ pharmacologic analysis. | Neurophysiol 60:1982-1999. Fatt P, Katz B, 1952. Spontaneous subthreshold activity at ‘motor nerve endings. J Physiol (Lond) 117:109-128. Fawcett DW. 1981. The Cell, 2nd ed. Philadelphia: Saunders. Feendndez JM, Neher E, Gomperts BD. 1984. Capacitance ‘measurements reveal stepwise fusion events in degranu- lating mast cells. Nature 312:453455 Geppert M, Sudhof TC. 1998. RABS and synaptotagmin: the yin and yang of synaptic membrane fusion. Annu Rev Neurosci 21:75-95,Heuser JE, Reese TS. 1977, Structure of the synapse. In: ER ‘Kandel (ed). Handbook of Physiology: A Critical, Comprehen- sive Presentation of Physiological Knowledge and Concepts, Sect. 1, The Nervous System. Vol. 1, Cellular Biology of New- rons, Patt 1, pp. 261-294. Bethesda, MD: American Physi- ological Society Heuser JE, Reese TS. 1981. Structural changes in transmitter release at the frog neuromuscular junction. J Cell Biol 88:564-580, Hille B. 1992, fonic Channels of Excitable Membranes, 2nd ed. Sunderland, MA: Sinauer. Himing LD, Fox AP, McCleskey EW, Olivera BM, Thayer SA, Miller Rj, Tsien RW. 1988. Dominant rote of N-type Ca" channels in evoked release of norepinephrine from sym- pathetic neurons. Science 239(4835):57-61 Jones SW, 1998. Overview of voltage-dependent Ca chan- nels. J Bionerg Biomembr 30(4}:299-312. Kandel ER. 1976. The Cellular Bass of Behavior: An Introduction 1 Behavioral Newrobiology. San Francisco: Freeman. Kandel ER. 1981, Calcium and the control of synaptic strength by learning. Nature 293:697-700. Katz B, Miledi R, 1967a. The study of synaptic transmis sion in the absence of nerve impulses. J Physiol (Lond) 192:407436. Katz B, Miledi R. 1967. The timing of calcium action during, neuromuscular transmission. | Physiol (Lond) 189-535-544. Kelly RB. 1993, Storage and release of neurotransmitters, Cell 72:43:53. Klein M, Shapiro E, Kandel ER. 1980. Synaptic plasticity and the modulation of the Ca** current. J Exp Biol 89:117-157. Kretz R, Shapiro E, Connor J, Kandel ER: 1984. Post-tetanic potentiation, presynaptic inhibition, and the modulation of the free Ca level in the presynaptic terminals. Exp Brain Res Suppl 9:240-283. Kuffler SW, Nicholls JG, Martin AR. 1984, From Neuron to Brain: A Cellular Approach to the Function ofthe Nervous Sys- tem, 2nd ed. Sunderland, MA: Sinauer. Lawson D, Raff MC, Gomperts B, Fewtrell C, Gilula NB 1977. Molecular events during membrane fusion. A study ‘of exocytosis in rat peritoneal mast cells. Cell Biol 72:242-59. Liley AW. 1956. The quantal components of the mammalian ‘end-plate potential. J Physiol (Lond) 133:571-587. LUinds RR. 1982. Calcium in synaptic transmission. Sci Am 247(8) 56-65. Linas RR, Heuser JE. 1977. Depolarization-release coupling, systems in neurons. Neurosci Res Progr Bull 15:555-687. LLings R, Steinberg 1Z, Walton K. 1981. Relationship between presynaptic calcium current and postsynaptic potential in squid giant synapse. Biophys J 33:323-35I. Martin AR. 1977. junctional transmigsion, Il, Presynaptic mechanisms. In: ER Kandel (ed). Handbook of Physiology: A Capitulo 14 / Liberacién de transmisores 279 Critical, Comprehensive Presentation of Physiological Know! edge and Concepts, Sect. 1, The Neroous System. Vol. 1, Cell lar Biology of Neurons, Part 1, pp. 329-355. Bethesda, MD: ‘American Physiological Society. Monck JR, Fernandez JM. 1992. The exocytotic fusion pore. J Cell Biol 119:1395-1404. Neher E. 1993, Cell physiology. Secretion without full fusion Nature 363:497-498, Nicoll RA. 1982. Neurotransmitters can say more than just xyes or «no», Trends Neurosci 5:369-374 Peters A, Palay SL, Webster H deF. 1991. The Fine Structure of the Neroous System: Neurons and Supporting Cells, 3rd ed Philadelphia: Saunders Redman S. 1990, Quantal analysis of synaptic potentials in neurons of the central nervous system. Physiol Rev 70:165-198. Robitaille R, Adler EM, Charlton MP. 1990. Strategic location of calcium channels at transmitter release sites of frog neuromuscular synapses. Neuron 5:773-779. Scheller RH. 1995, Membrane trafficking in the presynaptic nerve terminal. Neuron 14:893-897. Smith S], Augustine GJ, Charlton MP. 1985. Transmission at voltage-clamped giant synapse of the squid: evidence for cooperativity of presynaptic calcium action. Proc Natl ‘Acad Sci US A 82:622-625. Sollner T, Whiteheart SW, Brunner M, Erdjument-Bromage H, Geromanos §, Tempest P, Rothman JE. 1993. SNAP re- ceptors implicated in vesicle targeting and fusion, Nature 362:318-324 Spruce AE, Breckenridge LJ, Lee AK, Almers W. 1990. Prop erties of the fusion pore that forms during exocytosis of a mast cell secretory vesicle. Neuron 4:643-654. Stidhof TC, Czernik AJ, Kao H-T, Takei K, Johnston PA, Horiuchi A, Kanazir SD, Wagner MA, Perin MS, De Camilli P, Greengard. P. 1989, Synapsins; mosaics of shared and individual domains in a family of synaptic vesicle phosphoproteins. Science 245:1474-1480. Sutton RB, Fasshauer D, Jahn R, Brunger AT, 1998. Crystal structure of a SNARE complex involved in synaptic exo cytosis at 24 A resolution. Nature 395(6700):347-353 von Gersdorff H, Matthews G. 1994, Dynamics of synaptic vesicle fusion and membrane retrieval in synaptic termi nals. Nature 367:735-739. Weber T, Zemelman BV, MeNew JA, Westermann B, Gmacht M, Parlati F, Soliner TH, Rothman JE. 1998. SNAREpins: minimal machinery for membrane fusion. Cell 92(6) 759-772 Wernig A. 1972. Changes in statistical parameters during facilitation at the crayfish neuromuscular junction. J Phys iol (Lond) 226°751-759. Zucker RS. 1973. Changes in the statistics of transmitter re- lease during facilitation. J Physiol (Lond) 229:787-810.