360 Informacién genética SECCION 3 Fig 14-11. Replicac6n dela molfoa de tae come me ton cadena completa srucetidos disponibles en la edule Iveta 2 rel melo de Wao Crt cadena upanen a rmper ls sede Progen gue manent wnidet (Gada wma de as cadena originales a formaciin de ruc com lo Sine pero: ben dat come roa spain pr dei te ‘roe como crema en Breve, pee epi [Ble bene na ba comb REPLICACION DEL DNA Una propiedad esencial del macerial genético es su capacidad para hacer copias exactas de si mismo, ;Satisface el modelo de Watson y Crick este requisito? En su ajo publicado, Watson y Crick escribieron: “No escapa a nuestro conoci- «nto que el aparcamiento espectfico que hemos postulado sugiere inmediata- mente un posible mecanismo de copiado del material genético”. [mplicito en la estructura doble y complementaria de la hélice de DNA esté cl mecanismo pot el cual puede teptoducirse. En el momento de la replicacién cromosémica, la mo- Ikeula de DNA se abre por el medio, separdndose las bases apareadas al nivel de los puentes de hidrogeno. A medida que las dos cadenas se separan, actan como ‘moldeso guias; cada una dirige la sintesis de una nueva cadena complementaria a lo largo de toda su extensién, utilizando las materias primas de la célula (fig. 14-11). Este mecanismo de replicacién del DNA, sugerido por Watson y Crick sobre la base de su modelo estructural del DNA, se llama replicacién semiconser- vativa, dado que se conserva la mitad de la molécula. Cada cadena vieja consti tuye el molde para la produccidn de una nueva. Si hay una T presente en la ca~ dena vieja, solamente puede ubicarse una A en ef lugar adecuado de la cadena nueva una G solo se apareard con una C, y asf sucesivamente. De esta manera, cada cadena forma una copia de su cadena complementaria original y se produ- cen dos réplicas exactas de la molécula. Esta era, aparentemente, la respuesta a la antiquisima pregunta acerca de cémo se duplica la informacién hereditaria y pa- sa de generacién en generacién. Una confirmacién de la replicacién semiconservativa El modelo de Watson y Crick de replicacién del DNA, no obstante, no era el tinico mecanismo propuesto (fig. 14-12). Matthew Meselson y Franklin W, Stahl, del Instituto de Tecnologia de California, EE.UU., desarrollaron un cle- _gante experimento para decidir entre los tres modelos posibles. Al disestar su experimento, utilizaron un isétopo pesado del nitrdgeno (""N) y tun método muy sensible para separar macromoléculas segiin su densidad. El mé- todo, que habia sido ideado por Meselson cuando era un estudiante graduado, consiste primero en colocar una solucién de cloruro de cesio (CsCl) en un tubo y luego ulcracentrifugarla. Las moléculas pequefias y densas de CsCl forman un grtadiente de densidad menos concentrado hacia la boca del tubo y mas congen- tado hacia el fondo. Cuando las moléculas de DNA se centrifugan en esta solu- cién, forman una banda en el punto del gradiente en el que el DNA y el CsCl tienen densidades iguales. Para el experimento (fig. 14-13), se cultivaron eélulas de E. coli durante varias generaciones en un medio cuya tinica fuente de nitrégeno contenia "N, por lo gue el DNA de esas bacteria finalmente contenia una gran proporcién de nitr6- geno pesado, Aunque la densidad de este DNA cra slo aproximadamente 1% mayor que la del DNA normal, formé una banda separada cuando fue centrifu- gada en el gradiente de CsCl. Luego, los cientificos colocaron una muestra de cé- Tulas que contenian DNA con nitrégeno pesado en un medio que contenia ni- togeno liviano,"*N. Las células quedaron en este medio sélo lo suficiente como para que el DNA se replicase una ver (segiin se determiné por la duplicacién del riimero de células) y luego se centrifugé una muestra del DNA de estas células. Con posterioridad se hizo crecer una segunda muestra de células en el medio con MN durante dos generaciones. Su DNA también fue contrifugado, ‘Como cabja esperar, cada nueva muestra de DNA contenia més DNA liviano_ ‘que el antetior ya que el DNA recién formado tenfa que incorporar el “N dispo- nible. Ademés, y est fue de importancia crucial, la densidad del DNA de la pri-CAPITULO 14 ELDNA, el cddigo genético y su traduccién 361 | ee "ig, 1412 Los tres mdelsbpadiederpliacén del DNA. El eperimento de Maslin y Sahl (gue se dribe n a fig 1413) fe realcud pare deerinar cud deca reposted or a Ceca. En ee dire, ls cdehas originates muctran en clo ola ls cadena ret e- ‘lcadas we msn prde 2) Replsstin emseratna Cada na del dos cadenas df DNA ‘roger se oplicen sn epaacn dels cadens nl primera gencacn, wna moka hie "DWA vig y aoe odo DNA nae. La segunda gnercn cone una dle be con oor cae py dale a compar oa sopra ‘pecans de spn on aia at ant toe tomo in olde par una cadena muena En le poner gencacn tae dable bli Bia tiene tina cadena wy wna mina. La wgunde geneacon ed formade pr dos alias de DNA hibri- ‘ds (one cade Vijay tna nae) 9 des lens de DNA consider completamente er cadena trcoa«) Repeal desea Dirant laren, las cadena progenitor sermon inter 100 lr ccgmenosepticadon we combinan on cadena com cegnentes d lx cudnas progenitor Tdat {es deb bcs ifm en parte ga ou pare mura De ner modo, Wao y Crk Bian peice gue teres ened) ‘mera generacidn era exactamente intermedia entre la densidad del DNA proge- nitor pesado y la del DNA liviano comin, como resultara si cada molécula con- ‘uviese una cadena vieja (pesada) y una cadena nueva (liviana). En la segunda ge- neraci6n, la mitad del DNA era semipesado y el resto era liviano, lo cual nueva- ‘mente confirmaba la hipécesis de Watson y Crick de replicacién semiconservati- va (fig. 14-12 b). El mecanismo general de la replicacién del DNA La replicacién del DNA es un proceso que ocurre sdlo una ver. en cada genera- cin celular y resulta esencial en la duplicacién de los cromosomas. En la mayorfa de las células eucariticas, la replicacién del DNA que ocurre durante la fase S del ciclo celular (cap. 10, pag. 274) conduce finalmente a la mitosis, pero en los es- permatocitos y ovocitos primarios conduce en cambio a la meiosis. La replicacién @8 un proceso notablemente ripido; en los humanos y otros mamiferos, la veloci- dad de sintesis del DNA es aproximadamente de 50 nucledtidos/segundo. En los procariotas es aun mas répida: alrededor de 500 nucleétidos/segundo. El principio de la replicacién semiconservativa, en la que cada cadena de la do- le hélice de DNA sirve como molde para la formacién de una nueva cadena, es362 Informacién genética Fig 1615 eperimesto de Morkony Soil) EIDNA totam oom an Benda bial ox ner prog wend ee pat wee pee col GUD lie EE cal dvr cn tx medio niiene pono (N) aur leven DAU peat gl a cage tin gait dented de Ck fps eA pony des Can Corrfig emcee de DNA pode sce let dda Eine) Cuando ks las ef ‘ence on am medi or ng On ape de ne CoN, DNA els ae nat de DNA pesado 7 ©) Cuando ls clades aco carer ede desde 2s de Watson y Crick acerca © DNA. DNA con dos @) vane ae Ea = § Steer © re g ey bs ae ea § ) rive g Prana” a = 33 : m= $288 © | es S S B relativamente simple y ficil de comprender. Sin embargo, el proceso real por el ‘cual la célula lleva a cabo la replicacién es considerablemente més complejo. Igual {que en otras reacciones bioquimicas de la célula, la replicacién del DNA requie- re un niimeto de enzimas diferentes, cada una de las cuales cataliza un paso par- ticular del proceso. La identificacién de las principales enzimas, sus funciones precisas y la secuencia de hechos de la replicacién han requerido atios de estudio y el esfurerzo de muchos cientificos de diferentes Jaboratorios. Aunque nuestra comprensi6n atin no es completa, los rasgos generales del proceso estén més cla- ros ahora, EI proceso general de la replicacién es comiin a las edlulas procaridticas y eu- cariéticas; sin embargo, el mecanismo difiere en algunos aspectos. La iniciacién dela replicacién del DNA, tanto en procariotas como en euicatiotas, siempre co- ‘mienza en una secuencia especifica de nuclestidos conocida como el origen de la replicacion, Requiere proteinas iniciadoras especiales, ademds de varias enzimas diferentes, Entre ellas, las helicasas rompen los puentes de hidrégeno que unen las. bases complementarias y abren la hélice en el origen de la replicacidn. Pero, a me- dida que las cadenas de la hélice se separan, las porciones contiguas de la doble hélice corren el peligro de enrollarse mas y més -es decir superenrollarse~. Otras cenzimas, las opoisemerasas, rompen y reconectan tuna 0 ambas cadenas de la hé- lice, permitiendo que giren y se aliviane la tensién. ‘Una vez que se separan las dos eadenas de la doble hélice, proteinas adiciona- Jes -las protefnas de unién a la cadena simple se uncn a las cadenas individuales, manteniéndolas sepatadas y evitando que se recuerzan. Esto posibilita el siguien- te paso, la sintesis real de las nuevas cadenas, catalizada por las enzimas conoci- das como DNA polimerasas. Si sc observa el DNA en replicacién con el microscopio electrénico, la zona de sincesis aparece como un “ojo” 0 burbuja de replicacién. En cualquier extremo de la burbuja, donde las cadenas viejas comienzan a ser separadas por la helicasa yOvigen de rep Replcscisn bidirecional dee el rigen CAPITULO 14 EIDNA, el eddigo genético y su traduccidn 363 Hongulla de replenisa ) ig HELA. Un panorama de opin del DNA, a) as doy ads el lade DNAs thon vgn ke pein. ora de leas de pts inane eee congener dpi ome nso, ant on recone ops A madi gu proce la replace foranea arbaga te rps Gees etd hrs Char sd li mes eae DN co ‘es cadena eed bi sparen ends mu doles hes H DNC cha mpl fona- ‘micomersting oss cud dbl ce ce frmada or wna cade ify te aes one Jas nuevas cadenas complementarias estén siendo sintetizadas, la moléeula parece formar una estructura en Y conocida como horguille de replicacién. La replicacion s bidireccional y hay dos horquillas de replicacién que se mueven en direccioncs ‘opuestas desde el origen (fig. 14-14), En los procariotas hay un tinico cromosoma con un tinico origen de replica- cin localizado dentro de una secuencia especifica de nuclestidos de aproximada- mente 300 pares de bases. Cuando las cadenas replicadas comienzan a separarse, se forma una estructura que recuerda la letra griega theta (), y finalmente se ori- ginan dos DNA circulares (fig. 14-15). En los eucariotas, en cambio, hay muchas moléculas de DNA lincales, cada una con varios origenes de replicacién. La repli- cacién se produce alo largo de las moléculas de DNA lineales a medida que ca- ta burbuja se expande bidireccionalmente, hasta que alcartza a una burbuja adya- cente (fg. 14-16). Cuando estas burbujas se fusionan, todo el cromosoma ha quc- dado replicado. Se cree que, en el curso de a evolucién, la existencia de mukiples orfgenes de replicacién habria favorecido, en los eucariotas, la adquisici6n de una mayor can- tidad de DNA total que en los procariotas. La evalucién posterior de los eucario- tus se habria visto beneficiada por este aumento de la cantidad de DNA. Elesta- blccimiento de un sistema de divisién organizada, como la mitosis, habria permi- sido mantener el aumento de complejidad del material genético y del nimero de cromosomas (véase cap. 10, pig. 273). Cebadores de RNA y la direccién de la sintesis Como vimos recientemente, para que ocurra la sintesis de una nueva cadena complementaria de DNA es necesatia la presencia de la cadena vieja que sirve de ‘olde, pero ademds debe estar presente una secuencia de inicio para la nueva c2-364 Informacién genética SECCION 3 4-15, Mirafogafa lbica de nos momenta dee npliaion doo ‘wma crear dE cole Bl ce mene. wna even pec de ae Tas el oign de plcacony vance end resus ofuas dae pt a) Be ls ‘taper temps dl peace bid sade de replicon qe ve aa fi on hens be la forma dale grige er. Lar ‘atl biieconal inde bate gue mon ha dal toto (otuefig 103). Fig, 14-16, La replica dele cromosomas SG ara eames pate ee ee sei ee Bs cee Seema gore @ dena. Esta secuencia de inicio es provista por un cebador o “primer”, formado por nucledtidos de écido ribomucleico (RNA). Como se recordars del capttulo 3 (pag. 95), el RNA cs un dcido nucleico estrechamente relacionado con el DNZ que se diferencia de este ihtimo en que contiene el azticar de cinco carbonos bosa en lugar de desoxirribosa y Ia base nitrogenada uracilo en lugar de timi Los nucledtidos de RNA pueden formar puentes de hidrégeno con los nuclesti- dos de la cadena de DNA; siguiendo un principio de complementariedad similar al del DNA, Ia guanina se aparea con la citosina, la adenina del RNA se aparea con la timina del DNA y el uracilo del RNA se aparea con la adenina del DNA. “Tanto en procariotas como en eucariotas, los cebadores de RNA tienen tipica-CAPITULO 14 FIDNA, el eédigo genético y su traduccién 365 En la cadena simple abierta de DNA, la sincesis del cebador de RNA es cata- lizada por una enzima conocida como RNA primasa. Con los cebadores de RNA. colocados en el lugar correcto y apareados @ la cadena complementatiay las DNA polimerasas comienzan a sintetizar nuevas cadenas complementarias de DNA alo largo de las cadenas molde, afadiendo nuclesridos, uno por uno, alas cadenas en Cuando se analizaron las primeras DNA polimerasas, se comprobé que sin- tetizaban nuevas cadenas de DNA solamente en la direccién 5” a 3°; 0 sea, los nucledtidos entrantes eran aftadidos solamente al extzemo 3’ de la cadena. Es- to creé un gran problema. Dada la estructura antiparalela de la doble helice de DNA, la replicacidn de las dos nuevas cadenas de DNA sobre los dos brazos de la horquilla de replicacién en Y parecta requerir no sélo la sintesis en la direc- cin 5’ a 3’, sino también en la direccién 3° a 5’. Durante varios aios, los in- vestigadores tracaron infructuosamente de identificar otra DNA polimerasa que pudiera funcionar en la direccidn 3° a 5’. La manera en que la célula “resuelve” este problema fue revelada, finalmente, por el cientifico japonés Reiji Okazaki, quién encontré que, aunque la cadena 5° a 3’ se sintetiza continuamente como tuna sola unidad, la cadena 3° a 5" se sintetiza de manera discontinta, como una serie de fragmentos, cada uno de los cuales es sintetizado en la ditecci6n 5” a 3°. La cadena que se sintetiza de manera continua se conoce como cadena adelan- ada, y la cadena que se sintetiza como una serie de fragmentos se conoce co- mo cadena rezagada, Para la sintesis de la cadena adelantada es necesaria la pre- sencia de un tinico cebador en un tinico sitio. Pero para la sintesis de los frag- ‘mentos que forman la cadena rezagada, los fragmentos de Okazaki, se necesi- tan miiliples cebadores, dispuestos a intervalos (Fig. 14-17). Los fragmencos de Okazaki tipicamente constan de 1.000 a 2.000 nucledtides en procariotas y de 100 2 200 nucledridos en eucarioras. El papel de los cebadores de RINA, ranto en la cadena adelantada como en la cadena rezagada, es suministrar cadenas de nucledtidos correctamente apareadas, con grupos 3'OH expuestos a los cuales las DNA polimerasas pucdan comenzar 4 uni nuclestidos de DNA en forma secuencial. La DNA polimerasa, tanto la due sintetiza la cadena adelantada como la reragada, comienta en un cebedor de RRNA y se mueve a lo largo de una cadena de DNA, afiadiendo nuclestidos al ex- ‘remo 3° de la cadena en crecimiento, hasta que encuentra el extremo 5° de otro cebador de RNA. En la cadena rezagada, en la cual la sintesis se produce desde la horguilla de replicacién, este cebador representa el inicio de otro fragmento de Okazaki. La sintesis de la cadena adelantada, por otra parte, se produce en la mis- ‘ma direccién que avanza la horquilla de replicacién y progresa hasta que su extre- mo 3" se ropa con el cebador del primer fragmento de Okazaki de la siguiente burbuja de replicacién. Cuando la DNA polimerasa hace contacto con el extre- mo 5’ de un cebador de RNA, otra DNA polimerasa elimina los nucleécidos de RNA y los reemplaza con nucleétides de DNA. Otra enzima, la DNA ligasa, co- rnccta los sucesivos fragmentos, catalizando la reaecién de condensacién que une grupos fosfato y azticar contiguos. Este complejo proceso de replicacién del DNA curre antes de cada divisién celular. Las restricciones de las DNA polimerasas para sintetizar DNA -necesidad de un cebador apareado a la cadena molde y diteccién 5’ a 3” de sintesis~ hacen que estas enzimas no puedan complerar la sintesis de los extremos de las molé- culas de DNA lineal. Este problema se evidencia en la cadena rezagada, cuan- do se remueve el cebador apareado al extremo 3° de la cadena molde. Este no puede ser sustituido por DNA —como ocurre en cualquier otra porcién del cro- ‘mosoma~, Esto se debe a que, por tratarse del extremo del cromosoma, no pue- de haber otro cebador previo para gue la DINA polimerasa inicie la sintesis de esa secuencia. Por esta razdn, los extremos de los eromosomas se acorvan en ca- da ciclo de replicacién.365. Informacién genética SECCION 3 Disa i a ice onl de peas Poca de ni cadens imple DNA. a Fagnenios (Coden resca ‘on egrets aden “ie OF Cadena Fig 117. Replccion del DNA. Las dos cadoas dea dbl ice de DNA cepa ye ce we elena Teas heat ensina ue open tc deplcacbn,panon Lt do cudena dee dble ‘ie original Las wptomenaae evan el agree tan a ormatonyo reli ‘do decor en tao cas eens dead lar orgie de mpl. pra de n 1 cadena simple ebilcan ecden abies La DNA pole sine adn de acd hy a ama ana geen son diecln a3 Pea camera shar nal, eo ‘Sn ure sr enc snd fon dees en el gue leo es replcado or nl de DNA cba de RNA ecbtioada ore RNA ‘rasa cae adelante econ 303" en orn coma Bec nc ebador de RNA cd cand enc igen dentin, uc nd eee oy ee ea Ea ‘edema vce tambon sin on Ue inci 5a 3 es de ures hin Opa & Gt movimton de le hope de replicon El proba te renee edness os rang ite fg age Oa Cae fe fe ha ‘doef ca fant ences ear de BNA por dette de a BNA poles reemplce abn mela de RNA dl cba com meio cde DXA. Lang la DN lio set cada ngmenta cone fant contig mén cao on le dens Los organismos procaridticas no tienen este problema, ya que su cromosoma es circular. Los cromosomas eucariéticos, que son moléculas de DNA lineal, pre- sentan secuencias especiales en sus exttemos, repeticiones de una secuencia de seis nucledtidos lamadas teldmeros que, en la mayor parce de las células, se acortan en has sucesivas divisiones y se van perdiendo. Como vimos en el capitulo 10, en al- gunos tipos celulares, como las células germinales, el problema de la pérdida de nucledtidos de los extremos de los cromosomas en las sucesivas divisiones celula- res “se resuelve” mediante la actividad de la telomerasa. Esta enzima consiste en tuna proteina con actividad de DNA polimerasa y una molécula de RNA que lle- vva en su secuencia los seis nuclestidos repetidos en los telémeros. La telomerase agrega nucleétidos a una de las cadenas del extremo del cromosoma, usando co- ‘mo molde la molécula de RNA que porta (fig. 14-18). Este proceso se repite va-i min eb sr ata rae Tipe Eee eer HED ED Sprint incase abr brie oad i fe ri lp le re omnes Ss iy SUN rece ola pt ech Tine CAPITULO 14 ELDNA, el cédigo genético y su traduccién 367 tias veces. La elongacién del cromosoma se completa por la actividad de la RNA primasa y de la DNA polimerasa. Estudios acruales sugieren una correlacién entre el acortamicnto de los teléme- tos y el mimero de divisiones que puede suftir una célula. En ese caso, los tel6- ‘meros podrfan desempefiar el papel de relojes biolgicos celulares, impidiendo di- visiones ilimitadas. Es interesante notar que las células cancerosas, que pueden di- viditseilimitadamente, poseen una telomerasa activa. Correccién de errores Si bien la supervivencia a largo plazo de una especie puede verse favorecida por cambios en su informacién genética, a corto plazo se requiere que esta in- formacién se conserve. Para esto es necesario un mecanismo preciso de copia- do previo a la divisién celular y también un mecanismo de reparacién de los dafios accidentales que pueden ocurrir en el DNA, Muchos de estos cambios espontineos son transitorios ya que inmediatamente son “reparados”. Ya men- cionamos que en la replicacién del DNA, la DNA polimerasa sdlo puede afia- dir nucledtidos al extremo 3’ de una cadena si los nucledtidos previamente afiadidos estn corteccamente apareados con sus nucledtidos complementarios en le cadena molde. Como hemos visto, Ia funcién del cebador de RNA es su- ‘ministrar una secuencia de nuclestidos correctamente apareada en la que pue- da comenzar la sintesis de DNA. Durante la sintesis, se pueden cometer erro- tes al afiadirse un nucle6cido incorrecto ala nueva cadena en formacién, es de- cit, un nucledtido no complementario al de la cadena molde. Cuando esto cocurre, la DNA polimerasa retrocede y elimina nucledtidos hasta que encuen- tra un nucledtido correctamente apareado (se dice entonces que esta enzima tiene actividad de exonucleasa 3’ 5’). Entonces, cuando aleanza el tilkimo nu- cleétido apareado correctamente, la enzima detiene su movimiento de retroce-Fig, 14-21, Resltades dela eecrforess de a) hemoglobina normal. b) bemeglobina de ‘ng poroe an tons fr 0 ev tna dena penona beige 1h de neni fone. flo ‘area ind ented dehemeg bina en ads une Debden erence ‘tap ler le Boned poral le Jalifirme re mucven «tna eoidade ‘se upanon enn campo era Late? imglobina normale cide mas negative ecg emo me smelt bonnglig athe begers here tn do pscons dente fein que ak conan po beragbbina normal faster CAPITULO 14 ELDNA, el eddigo genético y su traduccién 373 diferencia real entre las moléeulas de hemoglobina normal y las de la falciforme 3, como vimos previamente (cap. 3, pg. 92), un cambio en un solo aminodcido entre trescientos. DEL DNA A LA PROTEINA: EL PAPEL DEL RNA Como resultado de todos los estudio realizados para dilucidar la relacién en- tre DNA y proteinas ~incluyendo los experimentas con bacteriéfagos-, hubo un acuerdo general en que la molécula de DNA contiene instrucciones codificadas para las eseructuras y las funciones biolégicas. Ademés, estas instrucciones son lle- vyadas a cabo por las proteinas, que también contienen un “lenguaje” biolégico al- tamente especifico. La cuestidn entonces se convirtié en un problema de traduc- cién: zde qué manera el orden de las bases en el DNA especifica la secuencia de aminoécidos en una molécula de protelna? La buisqueda de la respuesta a esta pregunta condujo al écido ribonucleico (RNA), cl pariente quimico cercano al DNA que ya hemos mencionado (fig. 14-22). Varias pistas seialaban al RNA como un buen candidato para desempefiar un papel en la traduccidn de la informacién genécica del DNA a una secuencia de aminoscidos. En primer lugar, habfa cicrta cvidencia circunstancial suministrada por las células eucariéticas. A diferencia del DNA, que se encuentra principalmente en el nticlo, ef RNA se encuentra fundamentalmente en el citoplasma, y ¢ alli donde se produ- ce la sintesis de proteinas. Los embridlogos habfan notada que las edlulas de mu- chos tipos diferentes de embriones en desarrollo contienen altos niveles de RNA. Por otra parte, vanto las cdlulas procatiscicas como las eucatiéticas que fabrican grandes cantidades de proteinas tienen mumerosos ribosomas. Una célula de E. «oli que crece velozmente contiene aproximadamente 15.000 ribosomas, lo que constituye alrededor de la mitad de la masa total de fa célula, Los ribosomas, a sa vez, estén constiuidos por 2/3 de RNA y 1/3 de proteina. Esto sugerfa un papel pa- ra el RNA ribosémico en la traduccién de la informacién genética La evidencia adicional provino de experimentos con virus. Cuando una célula bacteriana es infectada por un bacteriéfago que contiene DNA, se sintetiza RNA a partir del DNA vital antes de que comience la sintesis de protefnas virales. Al- gunos virus no contienen DNA, s6lo RNA y proteina; el virus del mosaico del ta- baco (TMV) es un ejemplo (fig. 14-23). Si se separa el RNA de su cubierta pro- tcinica y se lo frota sobre lesiones hechas en una hoja de tabaco, ese RNA entia a las células. Luego, se forman nuevas particulas de TMV completas, con nuevas cubierras proteinicas y los dems componentes virales. En otras palabras, el RNA, al igual que el DNA, parecia contener informacién sobre las proteinas. El dogma central Basindose en las evidencias acumuladas hasta el momento, Crick proclamé lo que él llamé el “dogma central”, segin el cual la informacidn fluye del DNA a las protcinas en una tinica direccién (Fig. 14-24). As{, el genotipo (DNA) determi- na el fenotipo, dictando la composicién de las proteinas, Sin embargo, las protef- nas no alteran el genotipo, es decir, las proteinas no envian instrucciones de re- greso al DNA. Poco después se descubsrié el papel del RNA, Después de haber publicado su teoria, Crick fue criticado por usar la palabra “dogma” ya que un dogma es algo que no se pone en duda. Crick reconocié més tarde que deberta haberlo llamado “hipétesis central”, Aunque en ese momento habia poca evidencia que apoyase este dogina, una diversidad de experimentos hhan demostrado desde entonces que se cumple, salvo algunas pocas excepciones. ‘Como veremos en el capitulo 16, la principal excepcién al dogma central es un50 melds de prt ides fe mse itn pr 158 amine SECCION 3 D RNA 22 Quiionme, NA ma omit DNA, po ay dian al fg re etn pomp Boge eds of Bot ‘a, la ual el grup hdl eps a Hdrgeno ne cardone 9” B) Es oou dfovnese ‘een lugar de tina, e RNA conte una prin iiomamentsrelaconade conde ace (0), Brat, a igual quel min, apa sl con le adenine. Una tcery may inporon ‘Sfinecia ene ley ds dds macaque, ola mayoria deseo el BNA cence come ca ingly ma in rc hares DNA par dee ‘moj di adeanc, ls mole de RNA prntin ero secundaria dacs eta soa, ‘Et mala cen formar nla s ncn cme debe can, or past ba de tno dela mioms mobo, Fi proceso llamado éranscripeién inversa, en el cual la informacién codificada por ciertos virus que contienen RNA se transcribe al DNA por la accién de la enzi- ma transeriptaca inversa E hecho de que la informacién fluye del DNA al RNA, y de éste a las protef nas, suministré una importante confirmacién de la teorfa darwinista de la evolu- cin. Como se mencioné en la Introduccién (pag. 6), segtin esta teorfa, la selec- cién natural acuta sobre las variaciones heredables que, a esta alrura, podemos afirmar que se encuentran en el DNA. Por otra parte, el “dogma” suministrd una refuracién a la opinidn de Lamarck, quien proponta que las caracteristicas adqui- ridas durante la vida de un individuo podian ser heredadas. Hoy sabemos que «sas variaciones sdlo pueden ser heredadas si son debidas a cambios en el DNA que puedan ser transmitidos a la siguiente generacién, ELRNA como mensajero: la transcripeién Como se descubrié posteriormente, no hay una, sino tres clases de RNA que desempefian funciones distintas conio intermediarios en los pasos que llevan del DNA a las proteinas. En este punto de nuestro relato, desctibiremos solamente auno de ellos, el RNA mensajero (mRNA); nos referiremos a los otros dos ti- pos de RNA -RNA de transferenciay RNA ribosémico— més adelante en este capiculo.Fig 14-24 £1 dogma coral de a gontica mo- ‘ilar: “Le informacion fle del BNA a rtcinas” La repli del DNA oar le ‘a eso adel ce dara le fe eg a alma. Las tin la reduc, sn embargo, caren Fd amor wa dt line dH lilo Néae gue rege degnas bs praca, coronene ls dieson Fig 14-25, Reprotacién expuemética de la inten GL RNA En punt de union encima BNA pliner le db hice 4 Dates tlie Timer ema DNA, spon es dea an eel cil. Les oracle, ue ont os Vogue: eractres 3 entanblen ena di recln 5 a3'« medida gue lt encima lel Sadana male de DNA eh le dicibn a5: "Nags qe le adena de RNA const eda complomenara no idea ace hve mode pert de al ribs Ie scuci embargo eons I a oe ad DR ip Sion gue rpc el romplac den 1 CD portale (0). LRA ec se Sendo repre dee cadena mae de BI CAPITULO 14 ELDNA, 4! cédigo genético y su teaduccin 375 Las moléculas de mRNA son largas copias (0 transcriptos) de secuencias —de 500 a 10.000 nucledtidos— de una cadena simple de DNA pero, a diferencia de das moléculas de DNA, las de RNA se encuentran en su mayoria como molec las de cadena tinica (véase fig. 3-30 b). Cada nueva molécula de mRNA se con pia =o transcribe— de una de las dos cadenas de DNA (la cadena molde) seguin el mismo principio de apareamicnto de bases que gobierna la replicacidn del DNA (fig. 14-25), Al igual que una cadena de DNA, cada molécula de RNA. tene un extremo 5" y un extremo 3”. Como en la sintesis del DNA, los ribonu- cledridos, que estén presentes en la célula como trifosfatos, se afiaden uno por vex al extremo 3’ de la cadena en crecimiento de RNA, Fl proceso, conocido como transcripcién, es caralizado por la enzima RNA polimerasa, Esta encima opera de la misma forma que la DNA polimerasa, moviendose en direccién 3° a 5’ a lo largo de la cadena molde de DNA, sintetizando una nueva cadena complementaria de nucleétidos ~en este caso de ribonucledtides~ en la direc. cidn 5’ a 3’. Ast, la cadena de mRNA es antiparalcla a la cadena molde de DNA de la cual es transcripta. La RNA polimerass, a diferencia de la DNA polimerasa, no requiere cebador ara comenzat la sintesis de RNA, ya que es capaz de iniciar una nueva cadena uuniendo dos ribonucledtidos. En procariotas, hay un Gnico tipo de RNA poli- -merasa que, en realidad, es un gran complejo multienzimético asociado con va. ras proteinas que participan en diferentes momentos de la rranseripeién. Cuan. do va a iniciar la transcripcién, la RNA polimerasa se une al DNA en una se- ‘cuencia especifica denominada secuencia promotora o promotor, abre la doble he. fice en una pequena regién y, asi, quedan expuestos los nucleétidos de una se cuencia corta de DNA. Luego, la enzima va afiadiendo ribonucleécidos, movién- dose a lo largo de la cadena molde, desenrollando la hdlice y exponicndo asf nue. vas regiones con las que se aparearin los ribonucledtidos complementarios. EL proceso de clongacién de la nueva cadena de mRNA contin hasta que la en- zima encuentra otra secucnecia especial en el transeripto naciente, la seal de ter. minacién. En muchos casos, esta sefial est4 dada por la estructura secundaria del RNA. En otros, interviene, ademés, un factor proteico (rho). En este momento, Ja polimerasa se detiene y libera a la cadena de DNA molde y a la recign sinter. zada cadena de mRNA. Sabemos que s6lo una de las cadenas es transcripra para cada gen. Qué es lo que indica a la RNA polimerasa cual cadena copiar? Se ha demostrado que la responsable de esta decisidn es la secuencia promotora cuya orientacién parti- cular “apunta’ a la RNA polimerasa en la direccién en que debe efectuat la sin El proceso de transcripcidn del mRNA que acabamos de describir para proca riotas es similar en eucarioras, aunque presenta algunas diferencias importantes, Entre ella, vale la pena mencionar que, si bien en procariotas las moléeulas de mRNA se producen direccamente por transcripcién del DNA, en eucatiotas su Periores, la mayor parte de los transcripros suften tn procesamicnto posterior a la transcripcién —llamado splicing del RNA— antes de dejar el micleo e ingresar al ci toplasma. Profundizaremos sobre este proceso en el capitulo 17.SS El mensajero evasivo El citoplasma de las células que estin sintetizando. proteinas estéIleno de RNA. Esta observaciéa fue la pis- te principal acerca del papel que desempesa el RNA di rigiendo el ensamblado de las proteinas. Aunque se ha- bia propuesto la hipétesis de Is existencia de moléculas de RNA que llevaban la informacién genética del DNA a las proteinas, la confirmacién requiris la deteccién y el aislamiento de Ise moléculas de mensajeros. El problema Se complicaba por el hecho de que Ia mayor parte del RNA de la célula estd integrado en los ribosomas y, co- ‘mo veremos en breve, el RNA ribosémico no es hetero- sgénco. Por lo tanto, el RNA era un candidato improba- ble como portador de la informacién genética. Esta pa- radoja incrigé a los biGlogos moleculares durante casi tuna década. “E.coli sas fagos suministraron, una ver mis, las he rramientas para el descubsimiento. Como se sabe, el ma- terial genético de los bacteridfagos es DNA y sus cubicr- tas estan hechas de proteina. Cuando estos virus infectan tuna célula bacteriana, se sintetizan nuevas proteinas de ‘cubierta, Si la hipétesis del mensajero fuera verdadera, se formaria nuevo RNA entre el momento de la infeccién celular y Ia aparicién de las nuevas particulas virales. Pa- +4 probar la hipstesis, se infectaron células de F. coli con fagos y luego se expusieron brevemente al nucledtido turicilo marcado con carbono radiactivo. Posteriormen- te, en las célnlas se detectaron moléculas de RNA de vi- dda corta con marcas radiactivas que estaban asociadas 2 ibosomas pero no eran parte de ellos. :Eran ellas los ‘mensajeros largamente buscados? Para contestar esta segunda pregunta fue necesario demostrar que el RNA radiactivo era complementario al DNA del fago. El método wsado fue simple pero ingenio- 0, Sise calientan suavemente moléculas de DNA en s0- lucida, entonces los puentes de hidedgeno se rompen ¥ las dos cadenas de la doble helice se separan. Acto segui- do, cuando Ia solucién se enfia lentamente, las cadenas complementarias se aparcan nuevamente y los puentes de hidrégeno yuclven a formarse. Los investigedores ppensaron que si el RNA radiactivo recién formado fuera ‘Complementario al DNA del fago, formaria una molécu- Ia hibrida con ese DNA. Esta técnica, conocida como hi- bridaci6n, fue desarrollado por S. Spiegelman, en la dé cada de 1960. ‘Como control, las molécalas de RNA radiactivas del fago se mezclaron primero en wn vaso de precipitados ‘con una solucién de DNA de £. coli; cuando esta mezcla se calenté y luego se enftid, no pudieron decectarse hi- brides que contuvieran radiactividad. No se habian for- mado moléeulas hibridss RNA-DNA. Después, las mol alas radiactivas de RNA se mezclaron con una solucién, de DNA del fagos cuando esta mezcla se calenté y luego se enftié, los sesultados fucron claros. Se habian forma- do hibridos que contenian radiactividad, lo cual indica tba que el RNA se habfa unido a su cadena complemen: ‘aria de DNA viral. El mensajero habia sido descubierto. ‘La hibridacign del DNA con el DNA y del RNA con. cL DNA se ha transformado desde entonces en una herra- ‘mienta enormemente poderosa, tanto en genética mole- cular como en taxonomia evolutiva. Se usa en una gran 1d de estudios que van desde Ia deteccisn de genes expecificos responsables de enfermedades particulares en el ser humano (cap. 19, pag. 527) hasta la solucién de ‘enigmas evolutivas (cap. 26, pag. 730) SE Ee 376 EI mRNA transcripto a partir del DNA es, entonces, Ja copia activa de la in- formacién genética. Incorporando las instrucciones codificadas en el DNA, el mRNA dicta la secuencia de aminoécidos en las proteinas (véase el ensayo: El smensajeroevativo). EL CODIGO GENETICO Lai lentificacién del mRNA como copia activa de las instrucciones genéti- cas todavia dejaba sin resolver una gran cuestién. Los cientificos de muchas disciplinas estaban intrigados por el rompecaberas del cédigo genético. Uno de ellos era George Gamow, un astrénomo norteamericano de origen ruso queLov bibri de A DNA rn mene ‘mater ls complemented de See giao eee leds BNAy le oli de DNA dele val a ido transrip, ) La formate ‘hana medica bride entre ut mole ul aia de BNE (ot) yen ‘maldede DNA (end 8) ilo mole © RNA x mez con DNA no cone 2, nose forman malcaashibridas que contengan rade onda won veoen | coesenieno @ & fue el padre de la teorta de Ja Gran Explosién ("Big Bang”) en cosmologfa (véa- se el cap. I, pag. 27). [Las protefnas contienen 20 aminoécidos diferentes (fig. 3-18), pero el DNA y el RNA contienen, cada uno, s6lo cuatro nucledxidos diferentes. Como sefalé Gamow, si un solo nucledtido “codificara” un aminodcido, entonces sélo cuatro aminodcidos podsian ser especificados por las cuatro bases nitrogenadas, Si dos aucleétidos especificaran un aminodcido, entonces podria haber, usando todos los arreglos posibles, un mimero maximo de 4 X 4, 0 sea 16 aminoécidos, lo cual cra insuficiente para codificar los veinte aminodcidos. Por lo tanto, siguicndo la analogia del cédigo, por lo menos tres nucledtidos en secuencia debian especifi- car cada aminodcido, Esto daria como resultado 4 x 4 x 4, o sea, 64 combinacio- 1nes posibles -los codones—lo cual, claramente, es més que suficiente, 377378 Informacién genética SECCION El cédigo de tres nucledtides, 0 cddign de riplees, fue ampliamente adoprado como hipdresis de trabajo. Sin embargo, su existencia no fite realmente demos- sada hasta que el e6digo fue finalmente descifrado, una década después que Wat- son y Crick presentaran por primera vex su modelo de Ia estructura del DNA. Los cientificos que llevaron a cabo los experimentos iniciales y cruciales para descifiar el cédigo fueron los norteamericanos Marshall Nirenberg y Heinrich Matthaei. Descifrando el eédigo ELRNA mensajero, por ese ensonces recién descubierto, dio a Nirenberg kt herra- ienta que necesitaba. Nirenberg zompié células de E.coli, extrajo sus contenidos y Juego les afiadié aminodcidos marcados radiactivamente y muestras crudas de RNA de diferentes fuentes celulares. Todas las muestras de RNA estimularon la sintesis de proceinas; las cantidades de proteina producidas eran pequefies, pero mensurables. En otras palabras, el material extraido de las cflulas de-E. col era capaz. de producit ‘moléculas de proteina, aun cuando las “6rdenes” de RNA que recibia fueran de un “completo exttafio”. Incluso el RNA del virus del mosaico del tabaco, que en condi- ciones naturales se multiplica slo en las eflulas foliares de la planta del tabaco, pu- do ser utiizado para sintetzar proteinas por la maquinaria de la célula bacteriana. Nirenberg y Macthaei probaron luego con un RNA artificial. Si los extractos libres de edlulas podtan leer un mensaje extraiio y traducislo a proteina, quizd po- drian leer un mensaje totalmente sintético, dictado por los propios cientificos Severo Ochoa, de la Universidad de Nueva York, habja elaborado un proceso en- imatico para acoplar ribonucledtidos en una cadena larga de RNA. Con este proceso, levado a cabo en un tubo de ensayo, habia producido una molécula de RNA que contenia solamente un tipo de base nitrogenada -el uracilo— repetida muchas veces. Esta secuencia fue llamada “poli-U”. ‘Nirenberg y Matthaei prepararon veinte tubos de ensayo diferentes, cada uno con extractos libres de células de E. coli que incluian ribosomas, ATP, las enzimas necesarias y todos los aminodcidos. En cada tubo de ensayo, un solo tipo de ami- nnodcido levaba una marca radiactiva. A cada tubo de ensayo se le aftadié la se- ccuencia poli-U sintética. En diecinueve tubos de ensayo no hubo produccién de polipéptidos radiacti- vvos, pero en el vigésimo tubo, al que se habia afadido fenilalanina radiactiva, los investigadores pudieron detectar cadenas polipeptidicas radiactivas recign forma- das. Cuando se efectué el anilisis de los polipéptidos, se encontrd que consistfan s6lo en fenilalaninas, una tras otra. Nirenberg y Matthaei habjan dictado el men- saje “uracil... uracil... uracilo.. uracil... uracilo..” y habian recibido una res- puesta clarat “fenilalanina.. fenilalanina..”. El experimento no sélo definié la primera palabra del cédigo UUU como fenilalanina (phe), sino que también fa- cilicé un método para definir ls restantes. Como resultado de experimentos posteriores (véase el ensayo: AGA-GAG-AGA: Descftando el cédige), se pudieron descubir los codones del mRNA para todos los aminodcides (fg. 14-26). De las 64 combinaciones posibles de ripletes, 61 especi- fican aminodcidos particulaes y 3 son codones “sin sentido” o de terminacién. Da- do que 61 combinaciones codifican 20 aminescidos, puede verse que debe haber mds de un codén para la mayorfa de los aminoscidos, por esta raz6n, se dice que el cédigo genético es degenerado,” * Degeneracién en est eso n0 indica juiclo moral. Es un vocablo usado por los fiscos para descri- bir los esidos malkiples que se referen a la misma cos. La palabra persiste en biologia como ces- timonio del pape de los fisicos Delbaick, Wilkins, Crick, Gamow y otzes en la investigacién que Finalmente levé a descifar el ebdigo genéxico.Enure los muchos experimentos que contribuyeron a Aescfrar el eédigo genético estuvieron los de H. G. Kho- sana, de la Universidad de Wisconsin, FE.UU., realizados cen Ia década de 1960, Khorana sintetiz6 un mensajero artificial en el cual se repetian dos nuclestidos una y otra yer, en una secuencia conocida: AGAGAGAGAG, UCU- CUCUCUG, ACACACACAC y UGUGUGUGUG. Cada tuna de estas cadenas de RNA, cuando se usaban como ‘mensajeros en cl sistema libre de eclulas, producfan cade nas polipeptidieas de aminodcidos alternados. Poli-AG producia arginina y deido glutimico una y otra vers TeUC producfa serina y Ieucina; poli-AC, treonina ¢ his- tidings y poli-UG, cistefna y valina. Por supucsto, sto c= lo que se esperaria de un cédigo de tripletes. Un mensa- als exgerimanin de Kran, an mRBA aii on al ds rae lass opt oe rod wna xe lee dente ora Un efi can te males iets pra ep Be sna ea formats prot ipa de nina, rr AGA-GAG-AGA: descifrando el cédigo je de poli-AG, por ejemplo, seria Iedo como AGA. GAG... AGA... Khorana también sinteti2d mensajecos arificales en los cuales se repetian tres nucledcidos una y otra er. Ex tos mensajeros producrian tes polipéptides difercates, ‘ada uno formado por sélo un aminodcido, repetide nm. Imerosas veces. Cada tipo de polipeptide producide de- pendia de donde comensaba el proceso de lectura. Estos estudiosdieron la primera demostracibn lara de que 1) el mRNA se lee secuencialmente(o sea un codon {tas ot; 2) el modo en que se lee depende del masco de lectura, 0 sea, el nuclestido en el cual comienza la taduce ‘idm, y 3) el codén esd formado por un nimero impar de rnaclestides lo que apoya la hipdeess del riplete. mRNA ‘Se lee como ‘obtenida | (AG), ~~ (NGA GN AGH (GRG) arg gear gle (60, RENESAS = sere oo GG exe -gin-gin-ghn. As{ se establecié la correspondencia entre el lenguaje de nuclestidos en el DNA. yeel lenguaje de aminodcidos cn las protesnas: el cddigo genético consiste en el sis- tema de tripletes en el RNA -copiado a partir del DNA~ que especifica cl orden de Ios aminodcidos en una cadena polipeptidica. SINTESIS DE PROTEINAS Conociendo el eédigo genético, podemos ahora centrar nuestra atencién en. el problema de cémo [a informacién codificada en el DNA y transcripta en el mRNA cs luego traducida a una secuencia especifica de aminodcidos en una ca dena polipeptidica, En la actualidad, la respuesta a esta cuestidn se comprende con gran derale. Los principios basicos de la sincesis de proteinas son los mis- mos cn las edlulas eucaridticas y en las procariéticas, pero hay algunas diferen- 379380 Informacién genética 14-26. EleSdigo genio cont on ‘combinaciones de ipleer (cada) 9s saminodcides correspondiente. Los codorics wes pn at space pre mar le ° fore mole ot mN s mes, 61 epecfcan aminadcides particle ter Las ome codoes sea Oe deo in, que decrminan ls fnaiscion de Le ‘aden. Dado que ls 61 ripe codificx pert 20 aminodcides, hay “snnimes” come ‘por cin, ls 6 cadones diferenses pars Le SECCION 3 a w wwe vce cw sare CS | aah e - vw J, {ves ow wus wos ua 2 2 : a: j aly j “ A | i : a] ja: : = 1a a g cc AAC a ‘ a ss la) i zen, 4 wie ie es eo wo]. |e is * ‘oe ece wc acc a feu |" feca |“. Jou cca | a 5 | ae lA cus 6c ens oct . cias en la localizacién de los procesos (véase fig. 14-27), ademés de algunos de- talles sobre los que profundizaremos en los eapitulos posteriores. Auf enfocare- ‘mos la sintesis de proteinas tal como tiene lugar en los procariotas, particular mente en E. coli. Participantes clave en la sintesis de proteinas La sintesis de proteinas requicre, ademds de las moléculas de mRNA, otros dos tipos de RNA: el RNA ribosémico (rRNA) y el RNA de transferencia (tRNA). ‘Ambos se transcriben a partir de la cadena molde de DNA de la misma manera que el mRNA. Estas moléculas differen del mRNA tanto en su estructura como en su funcién, En la mayorfa de las células, el rRNA ¢s el tipo més abundante, un hecho que dificult la biisqueda del mRNA, gue tipicamente tiene una exis- tencia muy transitoria en una eélula de F. coli. Como vimos en el capitulo 5, el RNA junto con un grupo de protefnas asociadas forma los ribosomas, Cada ti- bosoma es una gran maquinaria de sintesis de protefnas. Los ribosomas consisten Fig 14-27. Exquea grea de fj de normacin en procera yexcarits. a) Ex procariis, Pele eee ere eet tee aedicewreearll melt ‘lina prtuce le rashectn ene nov carpartsaenn. 8) Bacar le rami eure tnal mle cRNA, legs dr an procamtet se dig al ctoplama donde paulo eeepc Comandante xb ‘hrs ota on lc ue etn adr eed ndoplien.CAPITULO 14 FIDNA, el eddigo genético y su traduccién 381 Riborom prcarion sas NAS on sxe a5 ($20 nce ANASaS G6t'nadesde) NA 35 —. 2900 mls s ; ‘ mar! (120 aucledtides) i wo FRNA 285 3 pros {6700 mates) Aproximadamene Bormchas Si 40S Si 30S RNA IAs RNA Ls, {i300 sues) BM mbsten Apcosinadamene 21 pote Brora . Compara del crac des riba en procera yeearons La compo ‘iden te eomanet eid pro eo detent (Sen tea reer fener finde oo mek ya rm de eae Ela to ‘oman no ae Los ba ca forade pds bed, a popula) fe ands cade una de clas compu de un BNA cece de deme len pty Coma Sorrel cum bs ret eS or despot ade po Oe braided y¢ tee sire tie ope nary une pe tc ge (oe aunt jem, le heoaads nba spe ioas va eee eepercopt ee fs corsereatgencely femdom Lp copurmes eidisenionler di le rent fiona ooerodi tee en frac bide pr ntfs tis en dos subunidades (fig. 14-28). En los ribosomas de E. coli, la subunidad més pequetia (30S) tiene un tipo de rRNA, conocido comiinmente como #RNA 16S, yuna sola molécula de cada una de 21 proteinas diferentes. La subunidad de ma- yor ramafio (50S) tiene dos tipas de rRNA, uno conocido como rRNA 5S y el otro como RNA 235, ademds de 34 proteinas diferentes. La subunidad ribosémica més pequefia tiene un sitio de unién para la molé- cala de mRNA. En F. eoliy otros procariotas, el extremo conductor (5') de la mo- lécula de mRNA se une a este sitio por una secuencia espectica -llamada seruen- cia de Shine y Dalgarno- que es complementaria del extremo 3° del RNA 16S. La unién del extremo 5° del mRNA al ribosoma ocurre aunque el resto de la mo- Kecula atin esté siendo transcripea. El ribosoma tiene dos sitios de unién para el tRNA, denominados sitios P (peptidilico) y A (aminoacilico). Las moléculas de tRNA son, en efecto, el diccionario por medio del cual se tra- duce el lenguaje de los dcidos nucleicos al lenguaje de las proteinas. Estas molécu- las, comparadas con los otros tipos de RNA, son relativamente pequefias. Hay més de 20 tipos diferentes de (RNA en cada célula, por lo menos uno para cada uno de los tipos de aminodcidos que se encuentran en las protefnas. Cada mokkcula de tRNA tiene dos sitios de unién importantes. Uno de ellos, conocido como el an- ticodén, se acopla al codén de la molécula de mRNA. El otro, en el extremo 3° de la molécula de «RNA, se acopla a un amino‘cido particular. Ast, las moléculas de tRNA permnizen que los aminodcidos se alineen de acuerdo con la sccuencia de nu- cleétidos en el mRNA y, de esta manera, suministran el eslabén crucial entre los 4cidos nucleicos y las proteinas, los dos lenguajes de la célula viva, ‘Todas las moléculas de tRNA presentan una estructura tridimensional (estruc- tura secundaria) similar a una hoja de trébol con regiones de la moléeula forman-382 Informacién genética 5 90 re in ea ga ae sede seeds teas sera ps pms ge rg ele mie, fee cemrare [eerie peony erp pre erp tere fenmacrar eg ntact fe deli oa Site aopead a ce act eae etd ine ae iis hy ae a ae an ae per gaimine SECCION 3 Extremo 3 Fig. 1429.6) Mol del cracur de sna mola de :RNA bass onan ands de dlifacn ‘ry X Era molt conse en aprosinadamte 80 naceeidor ides en ana calena tee {cadena pre seria nw vues BCA) Un acd canine au BNA ‘epecfin ent exrms Aes mcleides son fo irs en td RN. tf crn en rn Les rrr de curd cn cade RNA pare Les bles. Wy T= en iia ap cr de a ane eV Bs eon os de nuceidos norma gue leg de aan dln NA a paride DNA, nen ge (lon ens ha nttpnedl pO mais tn sd cone per pss ‘een sen vinden guint En alana eons lt mule spraar rman ee 0 backs Se pea gu ela ol serch de edging. tnd como ut TC dpe a poten etn ol mala de RNA el peri del noma. Te desma nose (tx on el ct dl parte inferior del agama Gnade clo nares) rman chants ‘que pormite copra ola de ‘RN econ dela olen de mA, B) La mea se Wicge tie tia podusonde nee eras timenona do doble cadena (fig. 14-29). De este plegamiento depende su funcién. El extre- mo 3° de la molécula, el que se acopla al aminoscido, siempre termina en una se- cuencia (5°)-CCA-(3}), La unién de las moléculas de CRNA a sus aminoécidos es producida por un grupo de enzimas conocidas como amninoacil-sRNA sinserasas. Hay al menos veinte aminoacil-¢RNA sintetasas diferentes, una o mas para cada aminodcido, Cada una de estas enzimas tiene un sitio de unién para un aminos- cido particular y otro para su molécula de tRNA correspondiente y cataliza la unin entre ambos. El complejo aminoacido-«RNA se denomina ayninoacil-RNA. La reaccidn enzimética que une un aminoacido con su molécula de tRNA ocu- sre en dos pasos como se observa en la figura 14-30. Posteriormente, el comple- jo aminoacil-tRNA se une por puentes de hidrégeno a la molécula de mRNA, anticodén con codén, lo que posibilita que el RNA coloque al aminodcido es- pecificado en su lugar: Luego, sélo cuando se hubo formado un nuevo enlace —un enlace peptidico- que une el aminoacido recién Hegado con la cadena polipepti- dica en crecimiento, se rompe el enlace entre el RNA y el aminoacido. Enton- ces, se desprende la molécula de «RNA, que queda libre para unirse a otra mole cula del aminodcido correspondiente y repetir as el ciclo. Traducida La sintesis de proteinas se conoce también como traduccién, dado que es la transferencia de informacién del lenguaje de los nucledtidos al de los aminodci- dos. Ocurte en tres etapas: iniciacién, elongacién y terminacién (fig. 14-31).GTPcon Ficrocde dongaciin (© Terminasisa Fig 143: Ti epson des ae prt 4) icici, Labia iborinica ms popu se nea exremo 5 dena mols de Ys mm eke 4 ne ainda mae ee pl on etn aca AUG de nae WI, Edad ino grind bia lags ol compl RNA fer ompa it Ppp) ae A laminae) od ae ano ed geet Boga. Un egns NA co ania de x cy ity antec epee dni Sit Ss anoae rt bs das ania ean on bcm A ona tempo, crepe ele ence pine anodes NE, H vhs ee ee ade de mRNA on aa ren 523, el aundo HANA, eon el ppd andes rare de eA oD mae we dp AA sea Apna cast a ene yf men pope Ln pint pl sa gee ead mind del iio Aa to Py el 2RNA ent gue lee clique aminaie sempre axial oA Ec pose tole oa ore ha ‘a gue comple ol polppti °F un io a main deme empl edd pip i IP sRNA yl RNA depended to P Esti cpa pore fcr de Ween gu patie Le hoc de lb ribooms,384 Informacién genética aaue* 3. Micofraalednice que Sordi on le i= mde BNC. Br gap aman mma poliomes SECCION 3 ‘én comienza cuando la subunidad ribossmica menor se acopla a 2 de mRNA cerca de su extremo 5’, exponiendo su primer codén 0 iadot. Como ya mencionamos, en £, coli, el extremo 3” del mRNA. +d unido a la hélice de DNA, y la transcripeién continéa aunque comien- cduccién en el extremo 5’, A continuacién, el primer tRNA ~el tRNA iniciador— se coloca en su lugar y se aparea con el codén iniciador del mRNA. xe codén iniciador, que habitualmente es (5")-AUG-(3'), se aparea en forma pparalela con el anticodén del tRNA (3')-UAC-(5’). El tRNA iniciador en- ante, que se une al codén AUG, lleva una forma modificada del aminodcido metionina, N-formilmetionina o (Met (fig. 14-32). Esta (Met serd el primer aminodcido de la cadena polipeptidica recién sintetizada que, en general, es ré- pidamente removido. La combinacién de la subunidad ribosémica pequefia, el mRNA y el RNA iniciador se conoce como complejo de iniciacién, La forma- cidn de este complejo requiere proteinas adicionales, los factores de iniciacién, que se encuentran s6lo en la subunidad menor del ribosoma y catalizan varios de estos pasos. El tRNA iniciador esté ubicado en el sito P de la subunidad ma- yor, uno de los dos sitios de unin para las moléculas de RNA. Luego, se li- beran estos factores de iniciacién y la subunidad ribos6mica mayor sc une a la subunidad menor. La energia para este paso la suminisera la hidrélisis del erifos- fato de guanosina (GTP). Una vez que el ribosoma completo se ha ensamblado en el codén de inicia- cién, comienza la etapa de elongacién. Durante esta etapa, el sitio A de un ribo- soma (cuyo sitio P est ocupado por un tRNA con la cadena peptidica en creci- micnto 0 por el RNA iniciador) seré ocupado transitoriamente por sucesivos aminoaciltRNA. Los aminoacil-tRNA que ocupen el sitio A serin aquellos cuyo anticodén sea complementario al codén que queda expuesto en ese sitio, La en- trada del aminoacil-tRNA al sitio A del ribosoma requiere su unién previa con tuna proteina llamada factor de elongacién, que en su forma activa esti unida al GTP. Al aparearse el :RNA con el mRNA, se dispara la hidedlisis del GTP por parte del factor de clongacién que luego se disocia, permitiendo que el aminoa- cil-RINA permanezca unido por un corto periodo al mRNA. Cuando tanto los sitios A como P estin ocupados, una enzima, la peptiil sransferasa, que es parte de la subunidad mayor del ribosoma, cataliza la forma- cidn de un enlace peptidico entre los dos aminoscidos, acoplando el primero (Met) al segundo. El primer tRNA, entonces, se libera. El ribosoma se mueve un cod6n a lo largo de la cadena de mRNA; en consecuencia, el segundo (RNA, al cual ahora se encuentran acoplados la fMet y el segundo aminoacido, se transfie- re de la posicién A a la posicién P. Un tercer aminoacil-tRNA se ubica en la aho- ra vacante posicién A, apareado al tercer codén del mRNA, y se repite el paso. La posicién P acepta al eRNA que carga con la cadena polipeptidica creciente; la po- siciSn A acepta al tRNA que porta el nuevo aminodcido que seré afadido a la ca- dena. A medida que el ribosoma se mueve a lo largo de la cadena del mRNA, la porcién iniciadora de la molécula de mRNA es liberada y otro ribosoma puede formar con ella un complejo de iniciacién. Un grupo de ribosomas que leen la misma molécula de mRNA se conoce como polisoma (figs. 14-33 y 14-34). Hacia el final de la secuencia de la molécula de mRNA, hay un codén que sir- vve como seiial de terminacién, Se conocen tres codones de terminacién -UAG, UAA y UGA- y frecuentemente hay mas de uno presente en un mRNA dado No existe ningiin (RNA cuyo anticodén se aparee con estos codones, de manera que no entraré ningiin (RNA al sitio A para aparcarse con ellos. Existen ciertas proteinas citoplasmaticas, los factores de liberacién que se unen a cualquier codén de rerminacién que alcanza el sitio A del ribosoma. Estas proteinas alteran la ac- tividad de la peptiil transferasa, lo que provoca que el polipéprido se separe del &RNA. Ast, cuando se alcanza un codén de terminacién, se detiene la raduccién, la cadena polipeptidica se desprende y las dos subunidades ribosémicas se sepa~CAPITULO 14 EIDNA, l cédigo genético ym tradaccién 385 cote : ai since > me act — ‘melds oe ? eel RNA polimessa cout i a art a Diteceiéa de ly Fig. 14-34. Gen bacteriano en accién. En ta ran, Se estima que E. coli puede sintetizar hasta 3.000 proteinas diferentes, cada TaN free ere ater co una de las cuales es nsamblada de esta misma forma (véase fig. 14-35). ‘emel diggrama) que estin siendo traneriphas La dilucidacién de los detalles de este preciso y armonioso proceso de traduc- Teer at eae ee bn potas tox cant vslnente on tala ada de mRNA se separe dele moles de ctulas de nuestros propios cuerpos. Como ya mencionamos, el DNA tiene la in- DNA, le ribeomas unen al mRNA radu formacién para la sintesis de proteinas y las proteinas, a su vez, paricipan en la aie ee ee ddekctoe. _sintesis de DNA y de RNA. Parece poco probable que pueda existir uno sin los mera, ls encima gue etaliza la ranerip- __ottos. Sin embargo, como vimos en el capitulo 4, en épocas prebidticas habria ee aN eae ene posses existido un “mundo de RNA” en el cual los RNA habrian tenido capacidad cata~ Sontnddamomerneiponn te wets ‘\tica'y habrian llevado a cabo su propia duplicacién. ‘romeripctén Lar moliulr dele proteins {fee endo sneticads no se en et iniefogri. eGo s * - QOS SE eimasusnt \ “ea DNA ig 14-35. Remen gener del ss de poeta em wna bacteria A part del DNA eromo- moe rananbe Tepes alin TR gu comb on pts apes ‘man os ribosonas.Tamicn se sranseriben los disines spas de moléculs de RNA correspondicnes tas distnzosamtinadcides,y ls mRNA, que leva la informacion para la secwencia de aminaicidos de las prostinas, Cuanae un mRINA se wre ala subsnidad menor del ribosoma,comienza el proceso de Sindee procetnas que se describe en decal en etext