Аналітичний огляд на тему: “Біологічна фіксація азоту.

Бiологiчнi добрива
на основі діазотрофів”
з предмету: “Мікробні препарати для сільського господарства”
підготувала студентка групи ББ-19-М1(а)
Пиптенко Ганна

м. Дніпро, 2020 рік.

 Зміст
1. Вступ
2. Механізм біологічної фіксації азоту
3. Мікроорганізми, що здатні фіксувати нітроген у природі
4. Рослини,що здатні до азотфіксувальних симбіозів кореневого вузла
5. Добрива на основі діазотрофів
5.1. Препарати на основі бактерій роду Rhizobium
5.2. Препарати на основі бактерій роду Bradyrhizobium
5.3. Препарати на основі Azotobacter
5.4. Препарати на основі Sinorhizobium
6. Інші монобактеріальні препарати
7. Інші комбіновані бактеріальні препарати
8. Заключення
9. Список використаних джерел
 Вступ
Фіксація азоту - це процес, при якому молекулярний азот у повітрі
перетворюється на аміак, або споріднені азотисті сполуки в ґрунті.
Атмосферний азот - це молекулярний динітроген , відносно нереактивна
молекула, метаболічно не підходить для всіх, окрім кількох
мікроорганізмів. Біологічна фіксація азоту перетворює N2 в аміак, який
метаболізується більшістю організмів. Фіксація азоту має важливе
значення для життя, оскільки нерухомі неорганічні сполуки азоту
необхідні для біосинтезу всіх азотовмісних органічних сполук , таких як
амінокислоти та білки , нуклеозидні трифосфати та нуклеїнові кислоти .
Як частина азотного циклу , це важливо для сільського господарства та
виробництва добрив . Це також опосередковано стосується виготовлення
всіх хімічних сполук азоту.
Мета роботи: ​провести аналіз літератури та дослідити мікробні
препарати на основі різних видів мікроорганізмів для покращення
результатів урожаю сільськогосподарських культур.
 Механізм біологічної фіксації азоту
Фіксація азоту здійснюються природним чином в грунті з
допомогою мікроорганізмів , званих діазотрофами , які включають
бактерії , такі як Azotobacter і археї . Деякі бактерії, що фіксують азот,
мають симбіотичні зв’язки з групами рослин, особливо бобовими [1].
Послаблені несимбіотичні зв’язки між діазотрофами і рослинами часто
називають асоціативними, як це спостерігається при фіксації азоту на
коренях рису . Фіксація азоту відбувається між деякими термітами та
грибами [2]. Це відбувається природним чином у повітрі за блискавки
[3,4].
Вся біологічна фіксація азоту здійснюється ферментами під назвою
нітрогенази [5]. Ці ферменти містять залізо , часто з другим металом,
зазвичай молібденом, але іноді ванадієм .
Біологічну фіксацію азоту виявив німецький агроном Герман
Хеллрігель та голландський мікробіолог Мартінус Беєрінк . Біологічна
фіксація азоту відбувається, коли атмосферний азот перетворюється на
аміак ферментом нітрогенази Загальна реакція:
N2+16ATP+8e+8H=2NH3+H2+16ADP+16Pi
Процес поєднується з гідролізом 16 еквівалентів АТФ і
супроводжується спільним утворенням одного еквівалента гідрогену.
Перетворення N2 в нашатирний спирт відбувається металеве скупчення
під назвою FeMoco (кофактор нітрогенази), скорочення кофактора
заліза-молібдену . Механізм протікає через серію протонувань і
скорочення кроків в якому FeMoco активний сайт гідрування в N2субстрат
[6] . У вільно живучих діазотрофах аміак, що генерується нітрогеназою,
засвоюється в глутамат шляхом глутамін синтетази / глутамат-синтази.
Мікробні гени NIF , необхідні для фіксації азоту широко поширені в
різних середовищах[7] [8].
Нітрогенази швидко розкладаються киснем. З цієї причини багато
бактерій припиняють вироблення ферменту у присутності кисню. Багато
організмів, що фіксують азот, існують лише в анаеробних умовах,
починаючи знижувати рівень кисню або зв'язуючи кисень з білком, таким
як легемоглобін [9].
Мікроорганізми, що здатні фіксувати нітроген у природі
Діазотрофи досить поширені у природі , включаючи ціанобактерії
(наприклад Trichodesmium і Cyanothece), а також бактерії р. Chlorobiaceae,
Azotobacteraceae , Rhizobia і Frankia . Кілька облігатно анаеробних
бактерій фіксують азот, включаючи велику кількість (але не всіх)
Clostridium spp. Деякі археї також фіксують азот, включаючи декілька
метаногенних таксонів , які є істотним внеском у фіксацію азоту на
кисневих грунтах. [10]
Ціанобактерії населяють майже всі освітлені середовища на Землі і
грають ключову роль в вуглецевому і азотному циклі в біосфері . В цілому
ціанобактерії можуть використовувати різні неорганічні та органічні
джерела комбінованого азоту, такі як нітрати, нітрити, амоній, сечовина
або деякі амінокислоти . Кілька штамів ціанобактерій також здатні до
діазотрофного зростання (здатність , що, можливо, була присутня у їх
останнього спільного предка в Археї) [11]. Фіксація азоту ціанобактеріями
в коралових рифах може фіксувати вдвічі більше азоту, ніж на суші -
близько 660 кг /га на рік. Вважається, що колоніальна морська
ціанобактерія триходесмія фіксує азот в таких масштабах, що на нього
припадає майже половина фіксації азоту в морських системах по всьому
світу [12]. Саме тому так важливі сільськогосподарські мікробні добрива,
що допоможуть підвищити цей показник. .
Біологічна фіксація азоту є одним з найважливіших процесів
трансформації атмосферного азоту в біосфері та здійснюється вона тільки
за участю мікроорганізмів - азотфіксаторів, яких в агрономічному плані
можна розділити на три великі групи:
- бульбочкові, симбіотичні бактерії бобових рослин роду Rhizobium, що
інфікують коріння бобових з утворенням на них клубеньків і живуть в
симбіозі з вищою рослиною;
- асоціативні азотфіксатори роду Azospirillum та інші, які живуть за
рахунок, головним чином, кореневих виділень;
- несимбіотичні, вільноживучі бактерії, що мешкають в грунті (аеробні та
анаеробні фіксатори азоту), а також азотфіксатори, що мешкають на
поверхні ґрунту (синьо-зелені водорості або ціанобактерії) [13]. За даними
Є.П. Трепачева [14], біологічним шляхом зв'язується 169-269 млрд. Т азоту
в рік. мікробіологічна
Рослини,що здатні до азотфіксувальних симбіозів кореневого вузла
До таких рослин, що здатні вступати в симбіоз з азотфіксуючими
бактеріями відносяться, головним чином, бобові (Fabaceae: кудзу,
конюшина, соя, люцерна, люпин, арахіс та ройбуш). Ефективність фіксації
в ґрунті залежить від багатьох факторів, включаючи повітряні та ґрунтові
умови. Наприклад, фіксація азоту червоною конюшиною може становити
від 50 до 200 фунтів /акр [15].
Інші небобові сімейства, що здатні до азотфіксації: Betulaceae,
Casuarinaceae, Coriariaceae, Datiscaceae, Elaeagnaceae, Myricaceae,
Rhamnaceae, Rosaceae, Gramineae [16].
Добрива на основі діазотрофів
 Основне призначення застосовуваних в досвіді діазотрофних
препаратів полягає в регулюванні ефективного родючості грунтів. З
одного боку, вони сприяють активізації процесів асоціативної азотфіксації
в посівах злакових культур, з іншого, служать фосфатмобілізаторами і
підвищують доступність грунтового фосфору культурним рослинам. У
зв'язку з цим істотний науковий інтерес представляють дані щодо зміни
змісту біогенних елементів в грунті під впливом діазотрофних препаратів.
Існують моно-препарати та комбіновані, на основі декількох видів
мікроорганізмів.
Препарати на основі бактерій роду Rhizobium
Випускаються під товарними назвами “Нітрагін”,” Нітрофікс”,
“Різоторфін”. Спосіб виготовлення “Нітрагіну” широко відомий та
запатентований у СРСР у 1968 році. Також існує спосіб отримання
торфяного Нітрагіна, на який теж є патент.
Перший спосіб виробництва відноситься до області виробництва
бактеріальних препаратів сільськогосподарського призначення і може
бути використаний на заводах, обладнаних сублімаційними сушарками.
В радянському патенті описаний спосіб виготовлення сухого Нітрагіна
шляхом вирощування бульбочкових бактерій в ферментерах, на
поживному середовищі, що містить кукурудзяний екстракт - 0,5%,
сірчанокислий аммоній- 0,05%, цукор - 1,0%, фосфорнокислий калій - 0,05
%, хлористий натрій - 0,02%, дріжджовий екстракт - 0,03%, агар-агар -
0,15% і кислий вуглекислий натрій - 0,03%. Вирощені бактерії
відокремлюють від живильного середовища сепаруванням,змішують із
захисним середовищем, заморожують і висушують під вакуумом. Як
захисне середовище використовують суміш цукру - 10% та желатину -
1,0% до ваги бактеріальної маси. Висушену масу бактерій подрібнюють до
порошкоподібного стану, змішують з наповнювачем, наприклад, каоліном,
розфасовують і етикетують.
Важливим є змішування бактерій перед сушінням із захисним
середовищем. Як захисне середовище застосовувалася желатину з цукром
в розчині. Захисне середовище підвищує стійкість клітин бактерій до
дегідратації при висушуванні і подальшому зберіганні в стані анабіозу.
Пропонується подальше удосконалення відомого способу. Воно полягає в
тому, що в якості захисного середовища беруть суміш меляси і
тіосечовини. Меляса використовується як речовина, що містить цукор і
колоїди. Застосування тіосечовини як захисної речовини обумовлено тим,
що тіосечовина є відновником і може гальмувати окислювальні процеси в
клітинах, що уповільнює їх відмирання[17].
Спосіб отримання торф'яного Нітрагіну включає культивування
бульбочкових бактерій на живильному середовищі, що містить бобовий
екстракт, мінеральні солі і джерело вуглецю, введення культуральної
рідини в торф з подальшим висушуванням суміші до повітряно-сухого
стану. Цей спосіб відрізняється тим, що з метою отримання Нітрагіна з
високою життєздатністю бульбочкових бактерій, в поживне середовище
вносять хлористий кобальт і дріжджовий екстракт з розрахунку 0,004-0,02
і 150-500 мг на 1 л культуральної рідини відповідно, а внесення
культуральної рідини в торф здійснюють дрібно і після кожного внесення
суміш висушують до повітряно-сухого стану.
При виготовленні торфяного нітрагіну торф готують заздалегідь:
подрібнюють, просівають через сито для видалення великих частинок.
Нейтралізують вапном до рН 6,4-7,2, висушують до 15-20% вологості і
стерилізують парою під тиском 1,5 атм протягом 1 год. Висушування
торфу до більш низької вологості (5-10%) недоцільно, так як це
призводить до зміни структури і адсорбційних властивостей, що згодом
згубно впливає на життєздатність бактерій. Змішування культуральної
рідини з торфом проводять безпосередньо в сушарці в співвідношенні 1:1.
Культуру вносять в торф не всю відразу, а частинами, що становлять
20-40% від загального обсягу культуральної рідини, призначеного для
внесення в торф. Після кожного внесення частини культуральної рідини
суміш підсушують до 15-25% вологості при 30- 35 ° С. Кінцеву сушку
суміші проводять також при 30-35 ° С до вологості 15-25%. Дробове
внесення культуральної рідини в торф забезпечує більш високу
виживаність бактерій, ніж одноразове. Дробове внесення культуральної
рідини в торф і підсушування сприяють збереженню життєздатності
бактерій в торф'яному Нітрагіні з порівняно низькою залишковою
вологістю [18].
Залежно від конкретного виду культури і умов навколишнього
середовища здатність до біологічного зв'язування азоту у зернобобових
культур становить від 50 до 200 кг на гектар на рік [19]. Ефективним
способом підвищення продуктивності сої є бактеризація насіння
препаратами, виготовленими на основі активних штамів. Наявність такого
явища як сорто-штамова специфічність дозволяє підібрати штами,
найбільш ефективно взаємодіють з певними сортами сої [20]. Симбіоз з
клубеньковими бактеріями здатний покрити потреби в азоті сої на 60-70%
[19]. Нітрагін на даний час широко використовується як допоміжний
препарат при вирощуванні сої, існує велика кількість досліджень, що
підтверджують його ефективність у даному напрямку, результати в
залежності від сорту різняться [22,23,24].
У дослідженнях, які стосувалися вибору оптимального часу, коли
обробка сої Нітрагіном буде найбільш ефективною, було встановлено,що у
порівнянні з контрольною групою, та групою, де застосовували лише
інокулят (Нітрагін) у контролі досягли збору соломи масою у 1,42 т/га, а
при обробці тільки Нітрагіном маса соломи збільшилась до 1,67 т/га, а
кількість насінин збільшилась на рослину з 39,1 до 39,4 відповідно. На збір
білка і жиру найбільше вплинула обробка насіння інокулянтом
(Нітрагіном). Вміст сирого протеїну в зерні сої в більш високій кількості
спостерігався на варіантах з інокуляцією Нітрагіном (різниця порівняно з
контролем склала 2,5%). Максимальна ефективність досягається при
комплексній обробці препаратами Нітрагіном та Фосфатовітом спільно з
протравлювачем і обробкою рослин в фазу 6-8 листків, дія яких
посилюється при обробці насіння інокулянтом - 11,3% в порівнянні з
контролем [22].
У наступному дослідженні теж вивчалися показники продуктивності
сортів сої в залежності від інокуляції насіння та застосування азотних
добрив на наступних фонах: без добрива (контроль); інокуляція насіння
соєвим Нітрагіном; азотне добриво без інокуляції насіння. Визначали
тривалість вегетаційного періоду, висоту рослин, масу повітряно-сухої
речовини, число і масу активних бульбочок на коренях, елементи
структури продуктивності рослин і врожайність на трьох сортах. При
цьому найвищий позитивний еффект відмічений на тлі з інокуляцієй
насіння перед посівом Нітрагіном: рослини були вище в середньому на
2,6-7,0 см, число активних бульбочок і їх маса - на 8,5 штук і 0,08 г, число
бобів і насіння з однієї рослини - більше на 2,2 і 2,5 шт. відповідно.
Передпосівна інокуляція насіння соєвим Нітрагіном сприяла підвищенню
врожайності сої у всіх вивчених сортів 24,3-30,7 ц / га, із середньою
прибавкою 2,3ц /га (+9,1% до контролю). Більш високою чуйністю на
інокулюють насіння відрізнявся сорт Білгородська 8. Його врожайність
збільшилася на 3,2 ц / га, або 11,6% [23].
Показано позитивний вплив Нітрагіну на адаптацію трьох сортів сої
з різним вегетаційним періодом. Відзначена різна реакція сортів на
розподіл опадів протягом вегетаційного періоду. При нестачі вологи більш
скоростиглі сорти мали перевагу у формуванні врожаю. При сприятливих
водно-температурних умовах перевагу мали більш пізньостиглі сорти .
Порівняння застосування на соєбактеріальних добрив на основі штаму 634
і мінерального азоту в дозі 60 кілограм азоту на гектар виявило тенденцію
підвищення врожаю при інокуляції Нітрагином. Найбільш високий урожай
- 2,82 т / га (в середньому за 2 роки) сформував сорт Лідер10 [24].
Препарати на основі бактерій роду Bradyrhizobium
Для виготовлення добрив для сої на основі штамів Bradyrhizobium
japonicum - є 2 російські патенти 2013 та 2015 років [25,26]. Обидва штами
широко використовуються для обробки бобових, в тому числі - сої.
Штам бульбочкових бактерій Bradyrhizobium japonicum 859
використовується для отримання мікробіологічного добрива, підвищує
врожайність сої.
Відомий цілий ряд штамів бульбочкових бактерій для промислового
виробництва бактеріальних препаратів під сою, описаних в українських
патентах, наприклад:Bradyrhizobium japonicum М-8, Bradyrhizobium
japonicum КН 10, Bradyrhizobium japonicum Т66, Bradyrhizobium japonicum
36, Bradyrhizobium japonicum 46.
Їх недоліком є ​те, що зазначені штами відбиралися і
випробовувалися на сортах сої, культивованих в Україні, з огляду на
місцеві грунтово-кліматичні умови. При цьому відсутні дані по
ефективності цих штамів в грунтово-кліматичних умовах основних
регіонів культивування сої в Росії.
Так, з опису до Авторському свідченню СРСР №491695 відомий
штам Rhizobium japonicum 646, який використовується для виготовлення
Нітрагіна. Його недоліком є ​відносно невисока азотфіксувальна активність
і конкурентна спроможність.
Штам бульбочкових бактерій сої Rhizobium japonicum 614а, є
високоактивним симбіотичним азотфіксатором. Його недоліком є
чутливість до хімічних протруйників насіння, тому обробку насіння
​
бобових культур потрібно проводити безпосередньо перед посівом, не
поєднуючи її з хімічним протравленням.
Відомий також штам бульбочкових бактерій сої Rhizobium
japonicum 634Б, який використовується при промисловому виготовленні
бактеріального препарату Нітрагіна під сою. При цьому зазначений штам
634Б активно фіксує атмосферний азот в симбіозі з соєю, сприяє
активному накопиченню протеїну рослинами. Його недоліком теж є
відносно невисока ефективність.
​
Штам бактерій Rhizobium japonicum 71Т, що дозволяє отримувати
підвищений врожай зеленої маси і зерна сої в порівнянні з іншими
відомими аналогічними штамами. Його недоліком є низька
​
конкурентоспроможність з місцевими штамами бульбочкових бактерій сої.
Відоме також мікробіологічне добриво під сою Ризоторфін на основі
штаму бульбочкових бактерій сої Rhizobium japonicum 629а, що дозволяє
отримувати урожай сої з підвищеним вмістом білка в зерні. Зазначений
штам 629 а (87) придатний для промислового виготовлення препаратів
бульбочкових бактерій (ризоторфіном). Недоліком є відносно невисока
ефективність на основних виробничих сортах сої, вирощуваної на грунтах
Далекого Сходу.
Для виготовлення маткової культури штаму бульбочкових бактерій
Bradyrhizobium japonicum 859 використовують рідку
маннітного-дріжджове середовище, яке розливають по 100-150 мл в
качалочні колби. Після цього середу в кожній колбі засівали змивом з
однієї пробірки зі скошеним МДА з чистою культурою бактерій, після
чого колби поміщали на гойдалку на 72години при температурі 28-30 ° С.
Таким чином в колбах була отримана маткова культура з титром бактерій
(3-5) × 10 9 КУО / мл, яку зберігали в холодильнику для подальшого засіву
бутлів або ферментерів.
Для промислового культивування штаму Bradyrhizobium japonicum
859 використовували живильне середовище при рН = 6,8 ± 0,2 наступного
складу (з можливим відхиленням на ± 5% від зазначеної кількості), г / л:
кукурудзяний екстракт - 7,0; меляса - 5,0; (NH) 2 SO 4 - 1,0; K 2 HPO 4 -
0,35; KH 2 PO 4 - 0,35; MgSO 4 × 7H 2 O - 0,2; СаСО 3- 1,0. Приготоване
таким чином стерильне живильне середовище в ферментері засівали
матковою культурою штаму Bradyrhizobium japonicum 859, причому обсяг
посівного матеріалу становить 5-10% від обсягу засіваємого живильного
середовища і проводять культивування протягом 72 ± 3 годин при
температурі 28 ± 1 ° С і продування стерильним повітрям. Отриману
культуральну рідину штаму Bradyrhizobium japonicum 859 мікроскопують
і висівають на маннітного-дріжджовий агар (МДА) для підрахунку
чисельності бульбочкових бактерій і тріптік-соєвий агар (TSA) для
підрахунку чисельності сторонніх мікроорганізмів.
Ефективність штаму бактерій Bradyrhizobium japonicum 859
перевірена в вегетаційних і польових дослідах з використанням
мікробіологічного добрива на його основі, яке названо БісолбіРіз. При
вивченні ефективності штаму бактерій Bradyrhizobium japonicum 859 було
встановлено, що передпосівна обробка насіння сої добривом БісолбіРіз
впливає на їх схожість і врожайність сої. Цим добривом безпосередньо
перед посівом насіння сої обробляли з розрахунку 0,3-0,7 літра БісолбіРіз
на гектарну норму насіння сої, яка залежить від сорту сої і становить від
70 до 120 кг / га.
При обробці насіння сої добривом БісолбіРіз показник схожості
підвищився в порівнянні з контролем на 8,1%, а в порівнянні з добривом
ризоторфін - на 3,9%.
За рахунок застосування добрива БісолбіРіз перевищення по
довжині проростків в порівнянні з контролем досягало 14%, корінців - до
18%, а в порівнянні з добривом ризоторфін - до 4% і 7% відповідно. В
результаті обробки насіння сої добривом БісолбіРіз її врожайність
підвищилася в порівнянні з контролем на 19,8%, а в порівнянні з добривом
ризоторфін - на 2,5%.
Крім того, при обробці насіння сої добривом БісолбіРіз відзначалося
підвищення якості насіння сої у вигляді збільшення вмісту в них білка в
середньому на 0,9% в порівнянні з контролем, на 0,5% в порівнянні з
препаратом агростих Б і на 0,3% в порівнянні з добривом ризоторфін.
При цьому для досягнення аналогічних агротехнічних показників
(польової схожості і врожайності) сої за допомогою препарату агростих Б
потрібно обробляти їм не тільки насіння, але і обприскувати сходи на 7-й
день після посіву, що підтверджує більшу ефективність добрива БісолбіРіз
на основі штаму бульбочкових бактерій Bradyrhizobium japonicum 859 в
порівнянні з мікробіологічними препаратом агростих Б.
 Таким чином БісолбіРіз, отриманого на основі заявленого штаму
бульбочкових бактерій Bradyrhizobium japonicum 859, є ефективнішим не
тільки в порівнянні з препаратом агростих Б, що містить консорціум
штамів Pseudomonas fluorescens і Azotobacter spp., Але і в порівнянні з
добривом ризоторфін, отриманим на основі штаму-прототипу
бульбочкових бактерій Bradyrhizobium japonicum 629а . Все викладене
вказує на можливість використання штаму бульбочкових бактерій
Bradyrhizobium japonicum 859 для виготовлення препаратів - добрив під
сою [25].
Bradyrhizobium japonicum MM - 117, також використовується для
приготування соєвого Нітрагіна.При створенні винаходу ставилася задача
отримання штаму, що володіє більш високою ферментативною
активністю, стійкістю до високих доз аміачної селітри, що підвищує
насіннєву продуктивність рослини-господаря. Такі характеристики має
штам бульбочкових бактерій Bradyrhizobium japonicum MM - 117, який
виділений в 1996 році з клубеньков сої сорту Октябрь-70, вирощеної на
бурих лісових ґрунтах Амурської області.
Посівний матеріал отримують вирощуванням штаму в пробірках з
агаризованому живильному соєвої середовищем з манітом, г/л: K 2 HPO 4
- 0,5; KH 2 PO 4 - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO 4 - 0,1; CaSO 4 - 0,1; сіль
молібдену - сліди; маніт - 20,0; соєве борошно - 10,0; агар-агар - 15,0.
Після посіву пробірки з бактеріальною культурою виставляють в
термостати з температурою 27-28 ° C на 20 діб. За цей час в пробірках на
косяки щільного поживного середовища відзначається рясне наростання
бактеріальної маси випробовуваного штаму.
Для інокуляції насіння в день посіву сої готують
бактеріально-молибденовую суміш. Для цього в пробірки зі штрихом
випробовується штаму бульбочкових бактерій сої вносять по 2,5 мл
заздалегідь приготовленого 1,25% розчину молібдену (25 г / л молибдата
амонію). Штрих з косяка живильного середовища змивають розчином
молібдену. Шляхом струшування пробірки отримують однорідну
бактеріально-молібденову суміш, якої відразу ж обробляють насіння сої.
Отриманий обсяг суспензії (2,5 мл) використовують для передпосівної
обробки 250 г насіння сої. Після нанесення суспензії насіння сої ретельно
перемішують, підсушують в тіні і висівають в підготовлений грунт.
Для інокульованого насіння врожайність склала в середньому 23,8
ц/га, порівняно з контролем, де середнє значення склало 21,3 ц/га. Штам
Bradyrhizobium japonicum в порівнянні з контролем (фон - природна
інокуляція) стабільно підвищував врожайність насіння сої протягом трьох
років випробувань в середньому на 1,9 ц / га [26].
Препарати на основі Azotobacter
Azotobacter належить до грамнегативних бактерій і входить до групи
так званих вільноживучих азотфіксаторів.Також використовується
людиною для виробництва азотних біодобрив, є продуцентом деяких
біополімерів. Перший представник роду, Azotobacter chroococcum , був
відкритий і описаний в 1901 році голландським мікробіологом і ботаніком
Мартіном Бейеринком . На даний момент в рід входять шість видів. Також
представники роду синтезують деякі біологічно активні речовини, в тому
числі і деякі фітогормони , наприклад ауксини [27], тим самим
стимулюючи ріст і розвиток рослин [28], будучи біологічним
стимулятором росту рослин і синтезуючи фактори, необхідні для росту
рослин [29] . Екзополісахариди представників роду сприяють мобілізації
важких металів в грунті, сприяючи самоочищенню ґрунтів, забруднених
важкими металами, наприклад кадмієм , ртуттю і свинцем [30]. Деякі
представники роду Azotobacter також здатні до біодеградації деяких
хлорвмісних ароматичних сполук [31].
Азотобактерин ( азотоген ) готують з активних культур
мікроорганізму - азотобактера . Розрізняють азотобактерин грунтовий
(або торф'яний) і агаровий . За чинним в СРСР стандарту в 1 г грунтового
азотобактерин має бути не менше 50 млн клітин азотобактера.
Азотобактер активно розвивається лише в родючих, що містять багато
органічних речовин грунтах ; покращує азотне живлення і зростання
рослин [32] .
Азотобактерин сухий являє собою активну культуру висушених
клітин азотобактера в суміші з наповнювачем. При цьому використовують
ліофільну або вакуумну сушку при 30 - 35С і залишковому тиску 10 - 13
кПа. В 1 г сухого препарату повинно міститися не менше 0,5 млрд
життєздатних клітин.
Культуру мікроорганізмів вирощують методом глибинного
культивування на середовищі, що містить мелясу, кукурудзяний екстракт,
цукор і мінеральні солі; сульфати амонію, заліза, магнію, марганцю,
складну сіль молібденової кислоти, крейда, хлористий натрій і
двозаміщений фосфат калію. При цьому pH середовища підтримують на
рівні 5,7 - 6.5; аерацію - 1 об'єм повітря на 1 обсяг середовища в хв.
Процес ферментації проводять до початку стаціонарної фази
зростання культури. У цей період з клітин в культуральну середу
починають виділятися біологічно активні речовини, тому існує небезпека,
що після внесення препарату в грунт клітини можуть втратити здатність
фіксувати азот. Біологічні речовини можуть також частково руйнуватися в
процесі висушування клітин. Однак встановлено, що життєздатні клітини
після виходу зі стану анабіозу відновлюють здатність продукувати
біологічно активні речовини Висушену культуру стандартизують шляхом
добавки необхідної кількості наповнювача (каоліну або бентоніту) і
фасують в поліетиленові пакети по 0,4 - 2 кг. Пакети зберігають при
температурі не вище +15 "С протягом не більше 3 міс.
Спосіб застосування сухого азотобактерину залежить від
особливостей посівного матеріалу. Насіння зернових опудрюють
препаратом з розрахунку 100 млрд клітин на 1 гектарну порцію насіння.
Картоплю, кореневу систему розсади овочевих культур рівномірно
змочують водною суспензією бактерій. Для отримання суспензії 1
гектарну норму препарату (300 млрд клітин) послідовним розведенням
суспендують в 15 мл води.
Торф'яний або грунтовий препарат являє собою активну культуру
азотобактера, розмножену на твердому живильному середовищі. При
цьому в 1 г препарату повинно міститися не менше 50 млн життєздатних
клітин. Для приготування даних препаратів використовують родючий
грунт або торф високого ступеня розкладу з нейтральною реакцією
середовища. До просіяти твердому субстрату додають до 2% вапна і 0,1%
суперфосфату. Отриману суміш в кількості 500 г переносять в 0,5 л
пляшки, зволожують на 40 - 60% за обсягом водою, щільно закривають
ватяними пробками і стерилізують. Посівний матеріал готують на щільних
середовищах, що містять до 2% сахарози і мінеральні солі, культуру
вирощують при 27С приблизно 3 - 5 діб. Отриманий посівний матеріал
стерильно змивають з поверхні агару водою і переносять в підготовлені
пляшки з субстратом. Вміст пляшок перемішують і термостатують при
25-27С. культивування триває до тих пір, поки в 1 г грунту або торфу
кількість бактерій досягне 50 млн клітин. Препарат зберігає свою
активність протягом 2 - 3 міс.
 При обробці насіння торф'яним або грунтовим азотобактерин
насіння перемішують з зволоженим препаратом і для подальшого
рівномірного висіву підсушують. Під час висадки розсади овочевих
кореневу систему рослин змочують приготовленої суспензією з
необхідним титром клітин або вносять суспензію безпосередньо в
заздалегідь підготовлені лунки [33].
Щодо використання препарату на практиці - порівняльна оцінка
впливу мікробіологічних препаратів на розвиток симбіотичного апарату
свідчить про їх високу ефективність по всіх культурах. Наприклад, на
контролі без обробки насіння люцерни в фазі бутонізації-цвітіння,
загальне число бульб склало в середньому 30,0, а з обробкою препаратами
- 39,0-47,0 шт. За конюшини і козлятнику отримані навіть більше рельєфні
дані на контрольних варіантах клубеньків взагалі не було, а при
застосуванні препаратів їх число змінювалося від 37,5-41,0 до 38,0-47,5
шт. на рослину [34].
Встановлено позитивний вплив мікробіологічних препаратів на ріст,
розвиток і формування врожаю суниці садової в умовах Криму.
Застосування препаратів Фосфоентерін, Біополіцид, Азотобактерин і
Аурілл сприяло 100% приживлюваності рослин суниці сортів Кримська
рання і Юніол, а Діазофіт, Аурілл, Фосфоентерін сортів Кримчанка і
Кримська ремонтантна. Найбільш ефективними на досліджуваних сортах є
препарати Аурілл і Діазофіт, які забезпечують відповідно збільшення
врожаю ягід на 2,8 і 8,3 сорту Кримська рання, на 7,7 і 6,8 сорту
Кримчанка, на 13,0 і 2,9 Кримська ремонтантна і 6,6 і 6,0 т / га сорту
Юніол. Дослідження показали, що Аурілл і Діазофіт роблять позитивний
вплив на збільшення генеративних органів (кількість квітконосів і ягід на
кущ на 23 68%) і, отже, на врожайність на 33-60%, а також відмічено
підвищення стійкості рослин до хвороб і шкідників. Як видно,
Азотобактерин поступається у даному досліджені показникам інших
мікробних добрив [35].
На тлі компостів азотобактерин підвищує урожай картоплі на 14-16
ц/га і урожай цукрових буряків на 17-18 ц/га. За торфу в чистому вигляді
збільшення врожаю від азотобактерин становить 8-9 ц/га [36].
За літературними даними збільшення врожаю від Азотобактерину
коливається в широких межах; у багатьох випадках воно вище, ніж у
вказаних вище дослідах [37], [38], [39], [40].
Препарати на основі Sinorhizobium
Отриманний штам Sinorhizobium fredii ТБ-643, що володіє стійкістю
до високих доз аміачної селітри і використовується для виготовлення
“Нітрагіну”. Виділений в 2007 році з клубеньков сої сорту Гармонія,
вирощеної на луговому чорноземовидному грунті Тамбовського району
Амурської області.
Бактерії Sinorhizobium fredii ВКМ B-2633D добре ростуть на
поживних середовищах: м'ясо-пептоний агар, середовище Норріса, соєве
середовище з манітом, соєве середовище з глюкозою, соєве середовище з
сахарозою, соєве середовище з мальтозою, соєве середовище з лактозою.
Штам Sinorhizobium fredii ВКМ B-2633D відрізняється від
штаму-прототипу (штам Sinorhizobium fredii КБ-11 ВКМ B-2457D)
стійкістю до високих доз аміачної селітри (дає зростання на
маннітно-соєвому твердому живильному середовищі з вмістом NH4NO3
40 г/л ).
Посівний матеріал отримують вирощуванням штаму в пробірках з
агаризованому живильному соєвої середовищем з манітом. Після посіву
пробірки з бактеріальною культурою виставляють в термостати з
температурою 27-28 ° C на 5 діб. За цей час в пробірках на косяку
щільного поживного середовища відзначається рясне наростання
бактеріальної маси випробовуваного штаму.
Для інокуляції насіння в день посіву сої готують
бактеріально-молібденову суміш. Для цього в пробірки зі штрихом
випробовується штаму бульбочкових бактерій сої вносять по 2,5 мл
заздалегідь приготовленого 1,25% розчину молібдену. Штрих з косяка
живильного середовища змивають розчином молібдену. Шляхом
струшування пробірки отримують однорідну бактеріально-молібденову
суміш, якою відразу ж обробляють насіння сої. Отриманий обсяг суспензії
(2,5 мл) використовують для передпосівної обробки 250 г насіння сої.
Після нанесення суспензії насіння сої ретельно перемішують, підсушують
в тіні і висівають в підготовлений грунт.
Досліди проводили на лугових черноземовідниє грунтах, з сортом
сої Гармонія. Бактеризоване насіння висівають в день обробки. Штам
Sinorhizobimn fredii ВКМ У-2633D в порівнянні з контролем
(фон-природна інокуляція) стабільно підвищував врожайність насіння сої
протягом 2-х років з трьох років випробувань, в середньому на 1,1 ц / га.
Середня врожайність для сої без обробки склала 24,0 ц/га, а для сої,
обробленої штамом Sinorhizobium fredii ВКМ В-2633D - 25,1 ц/га. Прирост
складає 4,5% [41].
Інші монобактеріальні препарати
Азотовіт - натуральне добриво на базі ґрунтових мікроорганізмів, які
фіксують атмосферний азот і переводять його в біо-доступну форму для
рослини. Деякі інші штами можуть бути використані для P-, K -
мінералізації. Живі клітини і спори бактерій Beijerinckia fluminensis Bf
2806 є діючим мікроорганізмом у препараті, в концентрації не менше 1
млрд / см3. Заселяючи прикореневий простір, мікроорганізми сприяють
розвитку вегетативної системи (лист, стебло, суцвіття). Пригнічують
розвиток патогенної флори грибів, відновлюють родючість ґрунту.
Синтезують вітаміни і біологічно активні речовини, які регулюють
процеси ділення клітин, цвітіння і плодоношення. Підходить для будь-якої
культури [42].
В результаті досліджень на озимій пшениці сорту Грація виявлено,
що кустистість порівняно з контролем зросла в середньому з 3,2 до 4,7 на
рослину, врожайність в цілому зросла на 8% [43].
Фосфатовіт - натуральне добриво на базі ґрунтових мікроорганізмів
Paenibacillus mucilaginosus, які сприяють вивільненню фосфору і калію з
складних з'єднань з переведенням їх в біо-доступні легко засвоювані
форми для рослини. За біологічними властивостями цей препарат
аналогічний Азотовіту.
Азоризин. У складі цього мікробного препарату мікроорганізм
Azospirillum brasilinse. Ці бактерії підвищують здатність коренів
утримувати воду і посилюють ріст кореневої системи в цілому.
Зустрічаються в грунті як вільноживучі форми або асоціації з корінням
трав, злакових і бульбові рослин. Це дозволяє використовувати їх не
тільки як препарат для рослин, що здатні утворювати симбіотичні
взаємозв'язки з азотфіксуючими мікроорганізмами, але й також
підвищити отримання азотовмісних сполук, наприклад, декоративними
рослинами.
При інокуляції насіння на всіх фонах внесення добрив і без добрив в
зерні ячменю має місце тенденція підвищення вмісту сирого білка (0,7
0,8%). За рахунок використання біопрепарату зростає окупність
мінеральнихдобрив надбавкою урожаю зерна з 1,42 до 8,93 кг / кг.
Ефективність біопрепарату збільшується на тлі стартового внесення азоту
в дозі 30 кг / га [44].
Мізоризин використовується як біостимулятор росту для технічних і
бобових культур. За рахунок фіксації атмосферного азоту і виділення
ростостимулюючих речовин прискорює розвиток кореневої системи і
підсилює мінеральне живлення культури. Бактерії колонізують кореневу
систему і тканини рослин, викликаючи збільшення врожаю, а також
знижує активність патогенів. Препарат рекомендується на додаток до
стандартних технологій вирощування технічних культур з метою зняття
стрес-факторів після обробок хімічними засобами захисту рослин, істотно
стимулює розвиток симбіотичного апарату (утворення бульб) на коренях
бобових рослин. Значно підвищує ефективність інокулянту «Ризоторфін»
(на 30-60%). Накопичує 20-30 кг атмосферного азоту на гектар з повітря,
що еквівалентно внесенню 100 кг мінеральних добрив [45].
Флавобактерін. Діючий мікроорганізм - Flavobacterium sp. L-30.
Препарат азотфіксуючих бактерій фунгицидно-стимулюючої дії
рекомендується для передпосівної обробки насіннєвого матеріалу
технічних кормових, овочевих і зернових культур, а також картоплі,
буряка і моркви перед закладкою на зберігання. Синтезує ряд антибіотиків
феназинового типу, що пригнічують ріст і розвиток фітопатогенних грибів
роду Fusarium, Gaeumannomyces, Helmintosporium, Pythium, Erysiphe,
Septoria, Uncinula necator Burril. Пригнічує розвиток захворювань:
антаркноза у 1,5-3 рази, фітофторозу в 3-7 разів, борошниста роса у
зернових в 3-5 разів, парші в 2-6 разів, кореневі гнилі в 3-10 разів, плодові
гнилі в 1,5-4 рази, склеротинії в 1,5-3 рази. Продукує сідерофори, які
зв'язують залізо і роблять його недоступним для ґрунтових патогенів.
Мікроорганізми даного препарату здатні продукувати високоактивний
антибіотик «флавоцін» з широким спектром дії на фітопатогенні гриби і
бактерії. Відрізняється коротким терміном зберігання - в сухій формі він
не перевищує 6 місяців [46].
Інші комбіновані бактеріальні препарати
До таких препаратів відноситься “БіоВайс” - мікробіологічний
препарат-добриво, що містить ряд основних бактерій (Azotobacter
chroococcum, Bacillus mucilaginosus, Bacillus mega-terium subtilis
phosphaticum), сприятливо впливають на рухливість азоту, фосфору і
кремнію в грунті і на ростові процеси рослин, а також володіють
фунгіцидними властивостями [47]. У одному з досліджень цей препарат
застосовувався разом з мінеральним добривом “ТурМакс”. Дія цих добрив
вивчалася на озимій пшениці різних сортів в умовах дослідно-селекційної
станції. Було встановлено, що врожайність сортів озимої пшениці від
біопрепарату “БіоВайс” знижувалася на 5,8-18,7%. Дія добрива “ТурМакс”
була ефективною і давала прибавку врожаю на 0,04-0, 99 т/га вище
контролю. Однак, помічено, що спільне застосування препарату
“БіоВайс” і комплексного добрива “ТурМакс” на 1,0-1,2 т/га підвищувало
врожайність у всіх досліджуваних сортів [48]. У іншому досліджені
дійшли висновку, що поєднання діазотрофних препаратів з мінеральним
азотом не сприяло подальшому зростанню врожайності [49].
Мікробіологічний препарат “агростим Б”, що містить консорціум
штамів Pseudomonas fluorescens і Azotobacter spp. Зазначений препарат
може використовуватися як для передпосівної обробки насіння, так і для
обприскування грунту і вегетуючих рослин. Він володіє
ростостимулючиою дією і переважною пригніченням шкідливої
мікрофлори. Недоліком є ​те, що при обробці зазначеним препаратом на
коренях рослин не відбувається утворення бульб, які фіксують необхідний
для живлення рослин атмосферний азот.
В результаті проведених в лабораторних умовах досліджень
встановлено, що препарат агростих Б має виражену ростостимулюючу
дію, що проявляється значним збільшенням енергії проростання та
лабораторній схожості. Обробка насіння зернобобових культур
Агростімом Б значно впливає на енергію проростання (підвищення на 5 -
10%) і на лабораторну схожість (зростання на 3-7%). При цьому кращі
результати спостерігаються на сої. За впливом на цей показник агростих Б
значно ефективніше Азотовіта. При вивченні в польових умовах
встановлено, що обробка насіння гороху, сої та кормових бобів
Агростімом Б призводить до суттєвого підвищення посівної схожості і
прискорення появлення сходів зернобобовик культур (на 2-3 дні) [50].
Висновки
Фіксація молекулярного азоту - процес, що допомагає рослинам
отримувати неорганічні сполуки у доступній формі. Відзначається
здатність діазотрофів постачати у грунт більшу кількість азоту та більш
поступово, ніж це можна забезпечити мінеральними добривами. У
природних біоценозах біологічної фіксації атмосферного азоту належить
виняткова роль в постачанні рослин азотом. Д. Н. Прянишников
наголошував на важливості технічного і біологічного джерел азоту в
живленні рослин цим елементом і вважав, що вони взаємно доповнюють
один одного. Внесок біологічного азоту в сільське господарство є досить
високим і, за даними ФАО, приблизно вдвічі перевершує внесок хімічних
азотних добрив і в щорічному потоці азоту на земній суші майже в три
рази більше, ніж азот мінеральних добрив. На частку фіксованого
асоціативними і свободноживучими мікроорганізмами припадає 30% від
загальної кількості біологічного азоту [51].
Активність асоціативної азотфіксації залежить від комплексу
факторів, в якому рослині належить провідна роль. Але і такі абіотичні
фактори середовища, як грунт, атмосфера, додавання мінеральних добрив
впливають не тільки на рослину, а й на мікроорганізми в ризосфері.

Заключення
1. Zahran, HH (December 1999). "Rhizobium-legume symbiosis and
nitrogen fixation under severe conditions and in an arid climate".
Microbiology and Molecular Biology Reviews​, 63 (4): 968–89.
doi:10.1128/MMBR.63.4.968-989.1999.
2. Sapountzis, P (2016). "Potential for Nitrogen Fixation in the
Fungus-Growing Termite Symbiosis". ​
Frontiers in Microbiology​, - (7) -
1993. doi:10.3389/fmicb.2016.01993.
3. Slosson, Edwin (1919). Creative Chemistry. ​
New York, NY: The Century
Co​, 19–37.
4. Hill, R. D.; Rinker, R. G.; Wilson, H. Dale (1979). "Atmospheric
Nitrogen Fixation by Lightning". ​
J. Atmos. Sci,​37 (1), 179–192.
5. Wagner SC (2011). "Biological Nitrogen Fixation". ​
Nature Education
Knowledge​, 3 (10): 15.
6. Hoffman, B. M.; Lukoyanov, D.; Dean, D. R.; Seefeldt, L. C. (2013).
"Nitrogenase: A Draft Mechanism". ​
Acc. Chem. Res​, 46 (2), 587–595.
7. Gaby, J. C.; Buckley, D. H. (2011). "A global census of nitrogenase
diversity". ​Environ. Microbiol, 13(7), 1790–1799.
doi:10.1111/j.1462-2920.2011.02488.x.
8. Hoppe, B.; Kahl, T.; Karasch, P.; Wubet, T.; Bauhus, J.; Buscot, F.;
Krüger, D. (2014). "Network analysis reveals ecological links between
N-fixing bacteria and wood-decaying fungi". ​
PLOS ONE, 9(2), 141.
doi:10.1371/journal.pone.0088141.
9. Postgate, J. (1998). Nitrogen Fixation. ​
Cambridge: Cambridge University
Press,​(3), 56-60.
10. Bae, Hee-Sung; Morrison, Elise; Chanton, Jeffrey P.; Ogram, Andrew
(2018). "Methanogens Are Major Contributors to Nitrogen Fixation in
Soils of the Florida Everglades". ​
Applied and Environmental
Microbiology,​84 (7), 2222. doi:10.1128/AEM.02222-17.
11. Latysheva, N.; Junker, V. L.; Palmer, W. J.; Codd, G. A.; Barker, D.
(2012). "The evolution of nitrogen fixation in cyanobacteria".
Bioinformatics​, 28 (5), 603–606. doi:10.1093/bioinformatics/bts008.
12. Bergman, B.; Sandh, G.; Lin, S.; Larsson, H.; Carpenter, E. J. (2012).
"Trichodesmium – a widespread marine cyanobacterium with unusual
nitrogen fixation properties". ​
FEMS Microbiol,​ Rev. 37 (3), 1–17.
doi:10.1111/j.1574-6976.2012.00352.x. PMC 3655545. PMID 22928644.
13. Мішустін EH, Черепков Н.І. (1979) Біологічний азот як джерело
білка і добрив. ​Известия АН СРСР. Серія Біологія, (5​), 656-676.
14. Базік Є.П. (2005) Агрохімічні аспекти біологічного азоту в
сучасному землеробстві. ​
Агроконсалт, (​1),​​532.
15. "Nitrogen Fixation and Inoculation of Forage Legumes" (PDF).
Archived from the original (PDF) on 2 December 2016.
16. Dawson, J. O. (2008). "Ecology of actinorhizal plants". Nitrogen-fixing
Actinorhizal Symbioses. Nitrogen Fixation: Origins, Applications, and
Research Progress. 6. Springer​,
​ 199–234.
doi:10.1007/978-1-4020-3547-0_8. ISBN 978-1-4020-3540-1.
17. https://patenton.ru/patent/SU206945A1
18. https://patenton.ru/patent/SU540852A1
19. Зотиков В.І., Наумкіна Т.С., Грядунова Н.В., Сидоренко В.С.,
Наумкин В.В. (2016) Зернобобові культури - важливий фактор
сталого екологічно орієнтованого сільського господарства.
Зернобобові і круп'яні культури​, 1(17), 7-8.
20. Тільба В.А., Шабалдас О.Г. (2015) Використання біологічного азоту
як засобу біологізації системи землеробства. Вісник
​ АПК
Ставропілля,​(2), 96-100.
21.Мішустін Е.Н., Шильникова В.К. Біологічна фіксація атмосферного
азоту. Наука, - 1968, - 531.
22. Оразаева И.В., Муравьев А.А. (2018) ​
Показатели продуктивности
сортов сои в зависимости от инокуляции семян и азотного
удобрения​. ​Земледелие и растениеводство​, (4), 34-36.
23. Н.Н. Беляев, Е.А. Дубинкина. (2019) Эффективность
микробиологических удобрений при обработке семян и растений сои
на северо-востоке ЦЧР. ​
Зернобобовые и крупяные культуры, 2​(30),
30-34.
24. А. Г. Васильчиков, Г. П. Гурьев. (2018) Адаптация сортов сои с
различным вегетационным периодом к почвенно-климатическим
условиям Орловской области. ​
Зернобобовые и крупяные культуры​,
4(28), 15-19.
25.https://patenton.ru/patent/RU2487932C1
26.https://patenton.ru/patent/RU2568067C1
27. Ahmad F., Ahmad I., Khan M. S. (2005) Indole Acetic Acid Production
by the Indigenous Isolates of Azotobacter and Fluorescent Pseudomonas
in the Presence and Absence of Tryptophan. ​
Turkish Journal of Biology,​
29, 29—34.
28. Oblisami G., Santhanakrishan P., Pappiah C. M., Shabnugavelu K. G.
(1985) Effect of Azotobacter Inoculant And Growth Regulators on the
Growth of Cashew. ​Acta Horticulturae (ISHS)​, 108, 44—49.
29. Rajaee S., Alikhani H. A., Raiesi F. (2007) Effect of Plant Growth
Promoting Potentials of Azotobacter chroococcum Native Strains on
Growth, Yield and Uptake of Nutrients in Wheat. ​
Journal of Science and
Technology of Agriculture and Natural Resources,​11(41), 297.
30. Chen J. H., Czajka D. R., Lion L. W., Shuler M. L., Ghiorse W. C.
(1995) Trace metal mobilization in soil by bacterial polymers.
Environmental Health Perspectives,​103(1), 53—58.
31. Li D. Y., Eberspächer J., Wagner B., Kuntzer J., Lingens F. (1991)
Degradation of 2,4,6-trichlorophenol by Azotobacter sp. strain GP1.
Applied and Environmental Microbiology, ​57(7), 1920—1928.
32. Журин А. Б., Капцінель М. А., Капцінель А. П. (1959)
Календар-довідник садівника-любителя. М.,
​ Міністерство
сільського господарства СРСР​, (1), 107
33. Терещенко Н.Н. (2003) Биоудобрения на основе микроорганизмов
научный справочник. Томск
​ : Томский государственный
университет,​4-9.
34. Пехота А.П. Полторак Д.С. (2014) Влияние микробиологических
препаратов на симбиотическую деятельность и продуктивность
многолетних бобовых трав. ​
Веснік МДПУ​, (2), 3-8.
35. Арифова З.И. (2017) Продуктивность сортов земляники садовой
(fragaria ananassa Duch.) в зависимости от применения
микробиологических препаратов. ​
Бюллетень Государственного
Никитского ботанического сада, ​(122), 1634-1639.
36. Е.Н. Седова и Т.П. Огольцова. (1999) Программа и методика
сортоизучения плодовых, ягодных и орехоплодных культур.
ВНИИСПК, (1), 608.
37. Г.Н. Блинков. (1937) Применение азотобактера под овощные
культуры. ​Бактериальные удобрения​, (1), 36.
38. М. Доросинский. (1965) Бактериальные удобрения —
дополнительное средство повышения урожая. ​
Россельхозиздат.
Москва,​(1), 230-238.
39. Е.Н. Мишустин. (1956) Микроорганизмы и плодородие почвы. Изд.
АН СССР. Москва, 40-43.
40. Л.И. Рубенчик. (1960) Азотобактер и его применение в сельском
хозяйстве. Изд. АН УССР. Киев, 50-57.
41. ​
https://patenton.ru/patent/RU2586519C1
42. Алметов Н.С., Габдуллин В.Р., Алферов А.А. (2016) Применение
биопрепарата Азоризин - надежный способ повышения
продуктивности и качества урожая ячменя. ​
Агрохимический
вестник​, (4), 13-17.
43. https://ekosspb.ru/catalog/microbiologicheskie-preparaty/mizorin
44. https://biopreparaty.ru/flavobakterin/
45. Lu, J., Xue, A., Cao, Z. et al. (2014) Diversity of plant growth-promoting
Paenibacillus mucilaginosus isolated from vegetable fields in Zhejiang,
China. ​Ann Microbiol, (64), 1745–1756. .
https://doi.org/10.1007/s13213-014-0818-y
46. https://patents.google.com/patent/WO2017043998A1/ru
47. Кузікеева А.П., Литвинцев П.А. БіоВайс і ТурМакс на посівах ярої
пшениці // Аграрна наука - сільському господарству: матер. VI
Міжнар. наук.-практ. конф. - Барнаул: Изд-во Агау, 2011 року.
48. Шевчук Н.І., Александрова Т.М. (2012) Дія мікробіологічних,
комплексних мінеральних добрив і засобів захисту на врожайність
озимої пшениці. ​Аграрна наука - сільському господарству: матер.
VII Міжнар. наук.-практ. конф​, (2), 472-474.
49. Бугаев П.Д., В.Г. Сычев, О.В. Тарасенкова (2003) Эффективность
обработки семян ячменя биопрепаратами. ​
Плодородие​, (5). 35-36.
50. Кірсанова О.В., Дарюга К.В. (2008) «Підвищення врожайності
зернобобових культур за рахунок застосування препарату агростим
Б». ​Вісник Орел ГАУ,​4, 29-33.
51. Карашаева, А.С. (2016) Ассоциативные диазотрофы и их
взаимодействие с растениями. ​
Молодой ученый​, 6(110), 350-353.