INSTITUTO UMIVERSETARIO DE LA PAZ CAPITULO 1 SIBLIOTECA | ERITROCITOS Charles W. Brockus, DVM, PhD, y Claire B. Andreasen, DVM , PhD CONCEPTOS BASICOS DE LA FUNCION, METABOLISMO, PRODUCCION Y ELIMINACION DE LOS ERITROCITOS. L El Eritrén (A, Eleritron es una masa de células eritroides, ampliamente dispersa, que incluye los eri- trocitos circulantes y los precursores, progenitores y células madre de la médula 6sea B. Su finci6n es el transporte de oxigeno, por medio de la hemoglobina. C. La hemoglobina es transportada en Jos eritrocitos cuya membrana, citoesqueleto y a las tensiones debi- procesos metabdlicos, aseguran la integridad de la célula frent das a la circulacién asi como a varias substancias perjudiciales. D. La hemoglobina esti constituida por el grupo hemo y por una globina, La molé- cula completa de hemoglobina forma un tetrimero: 1. Cada grupo hemo contiene un stomo de hierro en estado de valencia 2 2. A cada grupo hemo se le une uma cadena de globina con tina secuencia espe- cifica de aminoicido. 3, La hemoglobina completa es un tetrimero que contiene cuatro grupos hemos y cuatro cadenas de globina. Las cadenas de globina son idénticas a pares y se designan cadena o y cadena B. IL. Sintesis del hemo ‘A. La sintesis del hemo es unidireccional e irreversible, Esti controlada en wn primer nivel por el enzima fcido 8-aminolevulinico sintetasa, cuya sintesis se controla por retroa- limentacién negativa dependiente de la concentracién de hemo en el eritrocito 1. Elplomo inhibe, hasta cierto punto, la mayoria de los pasos de Ja sintesis del hemo, inhibiendo también el transporte de hierro a la zona de actividad ferro- quelastisic: El cloranfenicol puede inhibir la sintesis del hemo. B. Las porfirinas y sus precursores son los intermediarios de la biosintesis del hemo 1. Ciertas deficiencias enziméticas en la via de sintesis pueden dar lugar a una acu- mulacién de porfirinas y de sus preeursores, lo que se conoce como porfiriasPATOLOGIA CLINICA VETERINARIA * CAPITULO 1. ERITROCITOS Las portitias se diferencian en los productos intermedios que se acumulan en sus manifestaciones clinicas. 3. Los excesos de porfirinas salen del eritrocito pudiendo depositarse en los tcjidos o ser excretados por orina u otros fluidos corporales C: Después de la formacién de la protoporfirina, la ferroquelastasa inserta el hierro en a molécula dando lugar al grupo hemo. IIL. Sintesis de globina A. Cada molécula de hemoglobina esti formada por cuatro cadenas de globina, cada tuna de las cuales se encuentra unida a un grupo hemo 1. El tipo de hemoglobina depende del tipo de cadenas de globina, las cuales estin definidas por su secuencia de aminoacidos, a En diversos animales existen hemoglobinas embrionarias, fetales y adultas b. Ta presencia y nimero de cada hemoglobina es diferente en cad especie 2. Las sintesis del hemo y la globina estin equilibradas (el incremento de una da lugar a un aumento de la otra). B. En los animales domésticos no se han descrito anormalidades en la sintesis de glo~ bina, es decir hemoglobinopatias. IV. Metabolismo del hierro El contenido corporal de hierro se encuentra regulado sobretodo por la tasa de absorcion Ins que por la de excrecién. La absorcién se regula segiin la cantidad de reservas de hie Fro (unas reservas elevadas de hierto disminuyen la absorci6n) y segtin la tasa de eritropo- Yyesis (la eritropoyesis acelerada aumenta la absorcién). Menos del 0,05% del hierro total corporal se absorbe o elimina cada dia. A: El hierro se wansporta en sangre ligado a la transferrina, que es una B-globulina ico (HS). Esta medida es poco representativa de las reservas corporales totales de hierro: 4. Allteraciones que provocan disminucién del hierro sérico: (l) Deficiencia de hierto. (2) Enfermedad o inflamacién aguda y crénica (incluy enfermedad inflamatoria) (3) Hipoproteinemia. (4) Hipotiroidismo. Enfermedad renal. b. Alteraciones en las que se incrementa el hierro série: (1) Anemia hemolitica (2) Rotura accidental de los eritrocitos en el muestreo (heméliss) @) Exceso de glucocorticoides en perro y caballo. Contrariamente, el hierro sérico disminuye en vacuno con exceso de glucocorticoides @) Sobrecarga de hierro, La sobrecarga de hierro puede ser adquirida (P.¢j.. toxicidad por hierro) o hereditaria (p.ej., hemocromatosis en 1. El hierro ligado a transferrina se contabiliza como hietro ndo la anemia deCAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA vacuno de raza Salers). La sobrecarga de hierro en algunos p4jaros (p.gj.,Tucanes) también puede ser hereditaria, (3) Anemia no regenerativa. c. Elhierro sérico se puede expresar como el porcentaje de la capacidad total de fijacién de hierro (TIBC, ver siguiente pirrafo) y expresado como el porcentaje de saturacién. 2. TIBC (Capacidad total de fijacién de hierro) es una medida indirecta del hierro que fa transferrina puede ligar. Existe un método inmunolégico para cuantificar la transferrina, pero normalmente no se usa. a. En condiciones normales, s6lo una tercera parte de las zonas de fijacién de la twansferrina estin ocupadas por hierro, Esto se expresa en porcen~ taje de saturacién b. En caso de deficiencia de hierro, en la mayoria de las especies excepto en el perro, la TIBC est incrementada. La wansferrina puede unirse a més hierro del que normalmente hay. Por tanto, la diferencia numérica entre la TIBC y el HS es la capacidad rema- nente de ligar hierro © bien la capacidad de fijacién de hierro libre (UIBC). B. La hefaestina (anéloga intestinal de la ceruloplasmina) y Ja ceruloplasmina (sinteti- zada en el higado) son proteinas que contienen cobre y estin involucradas en el transporte de hierro. La Ferroportina 1 y el transportador de metal divalente 1 (DMT1) son necesarios para transferir el hierro del epitelio intestinal fagos a la transferrina, La ceruloplasmina también es un reactivo en la fase inflama- » los macré- toria aguda. C. El hierro se incorpora a la hemoglobina durante el tiltimo paso de la sintesis del hemo. La falta de hiérro intracelular genera un incremento de la concentracién de protoporfirina en el eritrocito. D. El hierro se almacena en los macr6fagos como ferritina y hemosiderina, La ferritina es un complejo de hierro y protefma, soluble en agua 1, La ferritina es la forma mis lébil de almacenamiento de hierro. 2. Existen pequeiias cantidades de ferritina sérica en la circulacion que pueden ser utilizadas como medida indireeta de la reserva férrica, Esta medici6n se realiza mediante un inmunoensayo especie-especifico. Bp a. La concentracién de ferritina sérica disminuye en la deficiencia de hierro. b. La concentracién sérica de ferritina aumenta en caso de: (1) Anemia hemolitica, (2) Sobrecarga de hierro. (3) Inflamacién aguda y crénica. (4) Enfermedad hepatica (5) Algunas neoplasias (p.¢j.,linfoma, histiocitosis maligna). (6) Malnutricién (en vacuno) FE Lahemosiderina es una forma mis estable, pero menos disponible, de almacenamiento de hierro, La hemosiderina esti formada por la ferritina desnaturalizada y por prote- {nas. No es soluble en agua y se puede tefiir con las téenicas de Perl o azul de Prusia,4 |_PsroLoGin CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1, ERITROCITOS J E] hicrro sérico presenta anormalidades relacionadas con problemas de absorcién, deficiencias nutricionales, pérdida de hierro por hemortagias y metabolismo abe rrante del hierro con desvio hacia macréfagos en detrimento de las células hema- topoyéticas, en caso de enfermedades crénicas V. Metabolismo eritrocitario Después del estado de reticulocito el metabolismo est’ limitado porque los eritrocitos maduros carecen de mitocondrias para el metabolismo oxidativo. Las vias bioquimicas pre sentes en los eritrocitos maduros se representan en la Figura 1,1. con sus fanciones y anor malidades asociadas. A. Via glucolitica de Embden-Meyerhof 1, Por esta via anaerobia, la gluedlisis genera adenosin-trifosfato (ATP) y NADH. EJATP es esencial para la funcidn ¢ integridad de la membrana, y el NADH se utiliza en la reduccién de la metahemoglobina. La piravato quinasa (PK) y la fosfofructoquinasa (PFK) son enzimas impor tantes de esta via. Las deficiencias enziméticas en esta ruta pucden dar lugar a. anemia hemolitica (p.ej., anemias por deficiencias de PK y PFK en perros). 3. La deficiencia de PK disminuye la produccién de ATP, produciendo una ane: 0% de reticulocitos, mielofibro- sis, hemocromatosis, disminucién de la vida étil de los eritrocitos y acumu- lacién de fosfoenolpiruvato (PEP) y acid 2,3-difosfoglicérido (DPG). La deficiencia de PK se ha descrito en perros (de raza Basenji, West Highland White Terrier, Cairn Terrier, Perro Esquimal Americano, Caniche Miniatura, Carlino, Chihuahua, Beagle) y gatos (Abisinio y Somali) 4, La deficiencia de PFK da lugar a una disminucién de la concentracién de N mia macrocitica € hipocrémica con un 15 2,3 DPG eritrocitaria, el hematocrito esti dentro de sus valores de referen- Gia o disminuido, reticulocitosis persistente, y alcalemia que produce hem6- lisis. Esta deficiencia enzimiitica se ha descrito en perros (de raza Springer Spaniel Inglés, Cocker Spaniel y en algunos perros mestizos) B. Via de la Pentosa Fosfato (Via de la hexosa-monofosfato) 1, La Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa es la limitante en esta via anaerobia 2. Esta via metabélica produce NADPH, que es el principal agente reductor del critrocito. El NADPH sirve de cofactor para la reduccidn del glutatin oxidado. E] glutatién reduc lizar a la hemoglobina. 3. Una deficiencia o defecto en la glucosa-6- a anemia hemolitica en condiciones moderadamente oxidantes (p.ej, de ciencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa en el caballo con excentrocitos y cuerpos de Heinz). C. Via de la Metahemoglobina reductasa 1. Mediante esta via la hemoglobina se mantiene en estado reducido (es decir, oxihemoglobina, Fe2+) necesario para el transporte de oxigeno. lo neutraliza oxidantes que pucden desnatura- sfato deshidrogenasa dard lugar6 | _PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA « CAPITULO 1. ERITROCITOS N La defi metahemoglobina (Fe2+) no puede transportar oxigeno, dando lugar a cia~ encia de enzima comporta la acumulacién de metahemoglobina. La nosis, Con la concentracién de metahemoglobina considerablemente aumen- tada, Ja sangre y las membranas mucosas pueden tener un aspecto marron, ‘También encontramos NADH y NADPH reductasas. La primera predomi- na en condiciones normales y la segunda se activa por colorantes redox (p.cj., azul de metileno). La deficiencia de Metahemoglobina reductasa da lugar a cianosis, metahe- moglobinemia, pO, en el intervalo de referencia ¢ intolerancia al ejercicio. Esta deficiencia se ha descrito en pertos (Perro Esquimal Americano, Caniche, cruce de Caniche con Cocker Spaniel, Chihuahua y Borzoi) D. Via de Rapoport-Luebering 1 3. Esta via permite la formacién de 2,3-difosfogliverato (2,3 DPG), que tiene un papel regulador en el transporte de oxigeno. El aumento de 2,3 DPG favorece la liberaci6n de oxigeno a los tejidos mediante la disminucién de la afinidad de la hemoglobina al oxigeno. Dependiendo de las especies, algunos animales anémicos tienen incremen- tada la concentracién de 2,3 DPG y entregan mis oxigeno a los tejidos con una menor cantidad de hemoglobina (mecanismo de compensaci6n). Hay variaciones en la concentracién de 2,3 DPG y su reactividad con la hemoglobina en los eritrocitos de Jos animales. Los eritrocitos del perro, caba- Ilo y cerdo tienen altas concentraciones y reactividad; los eritrocites del gato y rumiantes bajas concentraciones y reactividad. VI. Eritrocinética ‘A. Células madre, células progenitoras y células precursoras (Figura 1.2.) 1 2, Células madre Pluripotenciales y Multipotenciales (CFU-GEMM 0 células D344) a. Estas célul s tienen capacidad de autorrenovarse y diferenciarse en célu- las progenitoras. b. La diferenciacién esta controlada por estimulos promotores del mniento producidos por las células estromales de la médula 6sea. Diversos factores de crecimiento y IL-3, IL- 9,IL-I1 y eritropoyetina). Cuando una célula madre se diferencia, pierde parte de su capacidad para autoreplicarse y también parte de su potencialidad. Céhulas progenitoras a. Algunas de las primeras células progenitoras tienen la capacidad de dife- renciarse en mas de una linea celular (p.ej., Jas células CFU-GEMM tiene potencial para diferenciarse en granulocites, eritrocitos, monocitos 0 eci- itoquinas son las responsables (S megacariocitos). b. Quras células progenitoras son unipotenciales (p.¢)., CFU-E sélo puede diferenciarse en células eritroides)CAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA | 7 Célula madre Linfocito T pluripotencial Célula madre linfocitica BFU-E Eritrocitos, @—-@—_%, as Neutrétilo = —e—© Monocito CFU-Meg hia . Plaquetas L—-@— &@—w | ! aru, Eosinéflo. | Célula madre o— @ mieloide (CFU-GEMM ike Baséfilo. = @—@: Figura 1.2. Un modelo de hematopoyesis. La o&lula mace pluripotencial da lugar a células madre mulipotencia leslinfodes y mieloides. La céula madre linfoide se diferencia en linfocitos Ty 8. La célula madre mieloide forma los siguientes célles progenitoras:formadora de colonias ertrocitaries (BFU-E), que se diferencian a unidades for- rmadoras de colonia ettoides; Unidades formadoras de colonia Grenulocito/Monacito (CFU-GM) que se ciferen- cian a unidades formadoras de colonia granuloctica (CFU-G) y unidades formadores de colonia manoctica (CFU My; unidades formadoras de colonia megacatiocica (CFU-Meg); unidades formadoras de colonia eosindfa (CFU-E0); y unidades formadoras de colonia bastfla (CFU-B2s). Estas unidades formadoras de colonia se diferencian a célu- las precursoras y tego @ células maduras de las diferentes linews celularesPATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS 3. c. Las o6lulas progenitoras tienen una capacidad limitada para autorenovar~ se y diferenciarse en células precursoras de distintas lineas celulares, 4. Las células progenitoras no son identificables morfolégicamente con tin- ciones de Romanowsky; no obstante, se parecen a linfocitos pequefios, Células precursoras: a. Las células precursoras no tienen capacidad de autorrenovarse, pero pro- liferan mientras se diferencian en las células funcionales maduras bb, Estas son las primeras células que pueden reconocerse como miembros de una linea celular conereta. B. Britropoyesis (Figura 1.3.) 1. Bn los mamiferos, la eritropoyesis es extravascular y se realiza en el parén- guima de la médulla ésea, 2. Hay cambios morfoldgicos caracteristicos que se producen durante Ja madu- racién del rubriblasto hasta el eritrocito maduro: a. Las céhulas se hacen mis pequeiias, b. El ndicleo se reduce y su cromatina esta mas condensada, (J) La divisién celular se detiene en la éltima etapa del rubricito cuan- do se lega a una concentracién critica de hemoglobina intracelular 2) El micleo es extrudido en el estado de metarubricito formandose un reticulocito en mamiferos. En cambio, los reticulocitos y eritrocitos maduros de las aves mantienen su nicleo. ¢. Elcolor del citoplasma cambia de azul a naranja a medida que se forma hemoglobina y se pierde AR. Rubriblasio Prorubricito Rubricito Rubricito Rubricito Mietarubricito Reticulocito Eritrocito, Figura 1.3. Secuencia de la eritropoyesis.CAPITULO 1, ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA | 9 6. L_ En los mamiferos, reticulocitos y eritrocitos migran al interior del seno veno- so de la médula dsea a través de aberturas transitorias (temporales) en el cito- plasma de las células endoteliales. a. Los reticulocitos de la mayoria de especies permanecen en li médula ésea durante 2-3 dias antes de liberarse y acabar de madurar en sangre peri- fica o en el bazo. b. En vacuno y caballos sanos, los reticulocitos maduran en la médula ésea, liberindose eritrocitos maduros, ELtiempo que transcurre entre la estimulacién de la eéhula progenitora eritro- poyética hasta la liberacién de los reticulacitos es aproximadamente de 5 dias, Partiendo del rubriblasto, se producen 3-5 divisiones que dan lugar a 8-32 células diferenciadas La médula ésea tiene la capacidad de incrementar la eritropoyesis: a. La produccién de eritrocitos en humanos puede inerementarse hasta 7 veces respecto a su ritmo normal, siempre que se produzca la estimula~ Gién y se disponga de los nutrientes necesarios. Esta capacidad para inere- mentar la produccién es diferente en las distintas especies animales. Es yor en pajaros y perros y menor en vacuno y caballos. b. Elincremento del nimero de eritrocitos liberados a la sangre es debido al aumento de eélulas madre y en menor grado por una disminucién de su tiempo de maduracién. c. Los eritrocitos pueden ser liberados mis répidamente a la circulacién mediante dos fenémenos: por la liberacién temprana de reticulocitos y por una reduccién del niimero de divisiones celulares. Estos procesos no incrementan el nfimero total de eritrocitos producidos y son beneficio~ ma sos s6lo temporalmente. . Regulacién de la eritropoyesis: a. Eritropoyetina: (1) La mayor parte de la produccién de eritropoyetina se produce en las células intersticiales peritubulares del rifin como respuesta a la hipo- xia, aunque el higado puede aportar hasta un 10-15% de su produc cién por medio de hepatocitos especificos y células Ito. (2) Acciones de la Eritropoyetina: (a) Inhibicién de la apoptosis de células progenitoras y prorubrici- tos recién formados, permitiendo su diferenciacién a eritrocitos madaros. (b) Estimulacién de la sintesis de hemoglobina en las células eritroi- des en division, {c) Cambio de la sintesis de hemoglobina de tipo HgbA a HgbC de adulto en ovejas. b. Interleucina-3 (IL-3) y factores estimulantes de colonia (GM-CSF y G-CSF)PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA * CAPITULO 1. ERITROCITOS (1) La IL-3 es producida por linfocitos'T activados; la GM-CSE por lin focitos T activados, macréfagos, células endoteliales y fibroblastos; y la G-CSF por macrofagos, monocitos, neutréfilos, células endotelia- les y fibroblastos (2) Conjuntamente con ka eritropoyetina, estos factores estimulan la mul- tiplicacién de la unidad formadora de colonias eritrocitarias, BFU- E.y su diferenciacién a célula progenitora, CPU-E. (3) La célula progenitora BFU-E es bastante insensible a Ja estimulacién solamente por eritropoyetina. c. Los andrégenos incrementan la liberaci6n de eritropoyetina. Por lo con- trario, los estrdgenos y corticoesteroides disminuyen la liberacién de eri~ tropoyetina, aunque su efecto probablemente no tiene relevancia clinica d. Las hormonas tiroideas e hipofisarias modifican las demandas de oxigeno de los tejidos, cambiando de este modo las necesidades de eritropoyesis. VIL. Destruccién de los eritrocitos A. La vida media de un eritrocito en circulacién varia segéin las especies: vaca: 160 dias, oveja: 150 dias, caballo: 145 dias, perro: 110 dias, cerdo: 86 dias, gato: 70 dias, paja- ros:~35 dias. Por Jo tanto, el frotis sanguineo de rumiantes sanos suele presentar reti- culocitosis con muy poca frecuencia y el frotis sanguineo de aves sanas puede tener un 45% de reticulocitos. En ciertos estados de enfermedad, se pucde desarrollar anemia més ripidamente en aves y gatos que en grandes animales a causa del perio- do de vida més corto que tienen sus etitrocitos en condiciones normals B. Durante el envejecimiento de los eritrocitos, los cambios que se producen en el contenido enzimatico y en la estructura de la membrana celular, reducen la capa- Cidad de supervivencia de las células y las expone a ser eliminadas por el bazo. En animales sanos, los eritrocitos envejecidos se eliminan de la circulacion por dos vias 1. La fagocitosis por macrofagos es la via principal de eliminacién de eritroci- tos viejos (Figura 1.4.): a. Dentro del fagosoma, el eritrocito libera su hemoglobina, que es separa- da en hemo y globina. b. La son reutilizados. ¢. Después de liberar el hierro, el hemo por medio de la hemo oxigenasa se divide en mondxido de carbono y biliverdina, d. La biliverdina es reducida a bilirrubina por la biliverdina reductasa, que se excreta a la sangre, donde se une a albtimina para ser transportada al higado. Las aves carecen de biliverdina reductasa; por lo que tienen la bili- verdina como producto final y no la bilirrubina. La biliverdina es verde y da el color catacteristico de los hematomas en el tejido aviar globina es hidrolizada a los aminodcidos que la componen, los cuales Una via minoritaria de eliminacién de los eritrocitos viejos es la lisis intra vascular con liberacién de hemoglobina al plasma (Figura 1.5.)CAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA Ww Sangre Eritrocitos (agocitosis) : Macréfago - | Hemogtobina I ce See | Bilirubin e 1 no conjugada Figura 1.4. Vie de desiruccion fagoctica (edrevascular) de los entrocitos, Eritracitos | (hemdisis intravascular) \ Hemoglobina libre = ~ ~ ) 1 x r Metahemoglobina Hemoglobina-Haptoglobina [\~sctine ’ Hemo ad > J Hemopexina Sangre Haptoglobina Hemoglobinuria Bilirubina Hemo-Hemopexina Globina Bilirrubina no conjugada Figure 1.5. Via de destruccon intravascular de los eritrocits, a LUiTa youPATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1, ERITROCITOS 3. En la anemia hemolitica existen vias de destruc a. La hemoglobina libre en el plasma se une a la «.,-globulina (haptoglobi- na). El complejo Hemoglobina-Haptoglobina es eliminado del plasma por el higado, evitando la perdida de hemoglobina en la orina Normalmente hay suficiente cantidad de haptoglobina para ligar 150 mg/dl de hemoglobina. El plasma adquiere una tonalidad de rosada a roja cuando contiene 50 — 100 mg/dl de hemoglabina; por lo tanto el cam- bio de coloracién del plasma precede a la hemoglobinuria. En animales sanos no deben observarse cambios de coloracién del plasma b. Si se produce una lisis intravascular excesiva, la haptoglobina sérica puede llegar a saturarse. Entonces la hemoglobina libre se disocia en dimeros que pueden atravesar el filtro glomerular. Este proceso no se produce en animales sanos ¢. Con el tiempo la hemoglobina libre plasmitica se oxida a metahemoglo- bina, la cual se disocia dando grupos ferrihemo libres. Los grupos ferrihe- mo libres se unen formando complejos con la a-globul 4. Los complejos hemo-hemopexina son eliminados por el higado, evitan- do de nuevo la pérdida de hemoglobina en la orina. e. Lahemoglobina que pasa al filtrado glomerular es absorbida por los tibu- Jos proximales y catabolizada a hiero, bilirrubina y globina £. La hemoglobina no absorbida llega a la orina dando lugar a hemoglobi- nuria (hemopexina). g. Las células epiteliales tubulares que contienen hemosiderina pueden des prenderse pasando a la orina y generando hemosiderinuria on similares pero predominan tanto Ja hemélisis extravascular come la intravascular. FORMAS DE EVALUAR LOS ERITROCITOS I. El hematoerito (Het), la concentracién de hemoglobina (Hgb), y el recuento de glébulos rojos (RBC) Los grificos informatizados de los nuevos sistemas hematoldgicos automatizados pueden detectar cambios en el volumen etitrocitario 0 en las concentraciones de Hgb con sufi- ciente sensibilidad A, El Het es el porcentaje de sangre compuesto por los eritrocitos 1. Los métodos centrifigos nos dan el volumen celular aglomerado (VCA) 0 valor hematocrito, una medida muy precisa con un bajo error intrinseco (+ 1%): a. El plasma obtenido por este método puede usarse en otras determina ciones rutinarias: (1) Concentracién de proteinas plasmiticas por medio de refractometria. (2) Concentracién de fibrinégeno plasmatico usando precipitacién por calor y refractometia (3) Color y transparencia del plasma:CAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA (a) El plasma normal ¢s transparente e incoloro (en perro y gato) a lige- ramente amarillo (en caballo y vaca) (b) El plasma ictérico es transparente y amarillo. (0) Elplasma hemoglobingmico es de color entre rosado y rojo. con un aspecto transparente. ‘ (a) El plasma lipémico es de color entre blanguecino y rosado con un aspecto opaco. 'b. El buffy coat es una linea blanca entre los eritrocitos y el plasma, esti com- puesta por Ieucocitos y plaquetas. La medida de su anchura se ha usado para estimar el recuento de células blancas. c. Las microfilarias se pueden detectar mediante examen microscépico del plasma de la zona inmediatamente superior a la capa leucocitica (buffy coat 2. La mayoria de contadores automiticos de células, diseftados para sangre huma- na, calculan el Het después de determinar el recuento de RBC y el volu- men corpuscular medio de la poblacién de hematies. La formula de este cal- cuilo es Het % = (RBC / jul) X VCM (fl). El error potencial de este método es mayor que el del método VCA, porque sélo el perro tiene un eritrocito que es comparable a los hematies humanos. Los otros animales domésticos tienen critrocitos mis pequefios que los humanos. No obstante, los sistemas hematolégicos mis nuevos y avanzados se pueden modificar ficilmente para identificar células sanguineas de muchas especies distintas. Las aves tienen nucleados Jo cual interfiere con los sistemas automati- cos de recuento de glébulos rojos. B. Concentracién de hemoglobina 1. El método mis frecuentemente usado es la determinacién colorimétrica por eritrocitos elipticos y la técnica de la cianometahemoglobina o el método del complejo de la hemo- globinahidroxilamina mis reciente y libre de cianuto. Los eritrocitos aviares deben romperse ¥ centrifugar la muestra para separar los restos libres de niicleo y asi poder hacer una determinacién precisa de la concentracién de Hb y calcular los respectivos indices a. Elcoeficiente de variacién es de aproximadamente + 5%. b. Los cuerpos de Heinz, la hemélisis, la lipemia y el tratamiento con oxi- globina pueden dar lugar a valores elevados falsos, 2, Algunos instrumentos automatizados miden directamente la densidad 6pti- ca de la oxihemoglobina 3. La concentracién de hemoglobina es el indicador mis directo de la capaci- dad de transporte de oxigeno de la sangre y puede ser aproximadamente de un tercio del hematocrito si los eritrocitos son de tamafio normal. 4. La determinacién de la concentracién de hemoglobina no aporta ninguna ventaja clinica sobre el hematocrito, pero nos permite calcular la hemoglo- bina corpuscular media (HCM) y la concentracién de hemoglobina corpus- cular media (CHCM) (véase los indices de células rojas sanguiineas, mas abajo) Recuento de glébulos rojos: *CRSTTARIN14 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA * CAPITULO 1. ERITROCITOS 1, Los recuentos de eritrocitos realizados con un hemocitémetro tienen un critrocitos realizados con un, mayor grado de error, Por eso los recuentos de hemocitémetro son de un valor relative, excepto en las especies aviares. Los recontadores automiticos, siempre que se hayan estandarizado para san- gre de mamiferos, permiten unos reeuentos de eritrocitos més precisos. Los recontadores automticos no estin correctamente validados para sangre aviar, porque cuentan todas las células nucleadas (eritrocitos, glébulos blancos trombocitos) El principal valor del recuento de glébulos rojos es que permite el cilculo delVOM y HCM (véase los indices de células rojas sanguineas, mis abajo) D, Factores que afectan al hematocrito, la concentracién de hemoglobina y el recuen~ to de eritrocitos 1 wv Los cambios en la masa de eritrocitos circulantes afectan a los tres parimetros: a. En la anemia se dan valores bajos. $i el tamaiio de la célula tenido de hemoglobina por célula también estén alterados, la disminu- y/o el con- cidn en los tres parimetros puede ser desproporcionada. b. El aumento de la masa de eritrocitos (policitemia absoluta) da lugar a valores elevados ©. Obtenemos valores elevados falsos con la deshidratacién y la contraccién esplénica debida a excitacién. Cambios en el volumen plasmitico afectan a los tres parimetros; por lo que la interpretacién de los resultados hay que hacerla siempre conociendo el estado de hidratacién del paciente (Casos 6, 9,18 y 24} a. La deshidratacién o el desplazamiento de fluidos a érganos viscerales pro- voca valores aumentados, b. La sobrehidratacién con fluidoterapia da lugar a valores disminuidos, simu- Jando una anemia IL. indices de las células sanguineas rojas Los indices de los glébulos rojos son titiles en la clasificacién de ciertas anemias, A. Volumen Corpuscular Medio (VCM) 1 3 (VEA X 10) + recuento de eritrocitos (millones) =VCM (femtolitros) EIVCM se determina directamente en recontadores automiticos de células. Factores que afectan a los valores del VCM: a. La reticulocistosis es la causa mas comiin de macrocistosis (VCM aumen- .tado) (Casos 1 y 2). Los reticulocitos, especificamente las formas jévenes, son células grandes b, Los animales inmaduros de la mayoria de las especies tienen eritrocitos pequeiios y microcistosis (VCM bajo). Esto tambien puede evidenciar una deficiencia de hierro, que es mis convin en animales jovenes. ¢. La deficiencia de hierto da lugar a microcistosis (Caso 5). Se produce una division celular extra antes de que se alcance la concentracién citoplas- mitica critica de hemoglobina, que es necesaria para detener la sintesisCAPITULO 1, ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA 15 de ADN y la divisién celular, dando lugar entonces a la produccién de células mas pequefias d. La microcistosis se presenta en perros con anastomosis portosistémica (Caso 13) €. Perros sanos de razas asiitieas (Akita, Chow Chow, Shar Pei, Shiba Inu) con frecuencia presentan eritrocitos microcisticos. Los perros Greyhounds normalmente tienen valores de VCM mayores que el resto de perros, Esto puede ser debido a que el periodo de vida de sus eritrocitos es considerablemente menor (~ 55 dias) La interferencia con la sintesis de Acido nucleico da lugar a una inhibi- 8 cidn de la divisién celular y consecuentemente a células mayores. En perros de raza Schnauzer Gigante se ha descrito anemia mactocitica por cctiva hereditaria de cobalamina (vitamina B,;) h, En Caniches se produce macrocistosis congénita. i. En Alaskan Malamutes, Drentse-Partrijshond y Schnauzer Miniatura se ha observado estomatocistosis hereditaria con macrocistosis. Los gatos infectados por VLFe tienen a menudo eritrocitos macrocisti- malabsorcién intestinal sel cos, seguramente debido a una maduracién asineréni k. La aghutinacién de eritrocitos puede dar higar a un falso aumento delVCM. B. Hemoglobina corpuscular media (HCM) (Concentracién de Hgb 10) + HCM (cn picogramos) Los factores afectan de forma similar a la HCM y la CHCM (véase mis abajo a concentracién de hemoglobina corpuscular media (CHCM)); en conse- cuencia, elVCM nos da cierta informacién hematoldgica adicional respec to al paciente. La hemoglobina corpuscular media esta influenciada por elVCM. Por ejem- plo, eritrocicos mas pequefios contienen menos hemoglobina, por tanto tie~ cuento de gldbulos rojos (en millones) nen una HCM disminuida En algunos casos de anemia por deficiencia de hierro, la hemoglobina cor puscular media puede disminuir antes que la CHCM disminuya. Este indice generalmente no se usa para la clasificacién de anemias. Si la con- centracién de hemoglobina corpuscular media y la de hemoglobina cor puscular media difieren, la interpretacién de la concentracién de hemoglo- bina debe basarse en la CHCM, porque este valor estandariza respecto al volumen celular. C. Concentracién de hemoglobina corpuscular media (CHCM) 1 Zi, {Concentracién de Hgb (pg) X 100] + Het (%) = CHCM (g/dl) La CHCM es el mi necesariamente el recuento de glébulos rojas. Sin embargo, si el hematocri- to es un valor calculado (como en el caso de los analizadores hematologicos automatizados), a precision de la concentracién de hemoglobina corpuscu- ar media puede disminuir. r PAB par mcne preciso de los indices, porque st cfleulo no requierePATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1, ERITROCITOS 3. La concentracién de hemoglobina corpuscular media se usa en la clasifica cidn de anemias. 4, Factores que afectan a la concentracién de hemoglobina corpuscular media: a. La hemblisis, in vitro o in vivo,o el watamiento con Oxiglobina, general- mente dan valores de concentracién de hemoglobina corpuscular media aumentados. Tanto la hemoglobina intracelular como la extracelular se valoran con el procedimiento de la hemoglobina, pero la formula supo- ne que toda la hemoglobina es intracelular, dando lugar a un resultado elevado falso (Caso 3). b. Normalmente no suele darse un incremento verdadero de la concentra cién de hemoglobina corpuscular media, dentro de la célula no pueden producirse aumentos de la concentracién de hemoglobina. Los reticulocitos no tienen completa su carga de hemoglobina; por tanto en la reticulocistosis la concentracién de hemoglobina corpuscular media puede estar disminuida (Casos 1 y 2) 4. La hipocromia (es decir, baja CHCM) se da en algunos casos de defi- ciencia de hierro (Caso 5) (1) Los gatos con deficiencia de hierro pueden no presentar critrocitos hipocrémicos. (2) La concentracién de hemoglobina corpuscular media de perros con deficiencia de hierro puede no dar valores bajos cuando se mide con algunos contadores electronicos. D. Ancho de distribucion del histograma de los eritrocitos (RDW) 1, Este parimetro eritrocitario lo pueden calcular algunos contadores automa- ticos de células. 2. ELRDW cs el coeficiente de variacién de la distribucién del volumen de los gldbulos rojos y se calcula por la formula RDW = (DEycy, +VEM) X 100. Es un indice del grado de anisocitosis o de la variacién del tamano de los eritrocitos. 3. Las anemias con considerable grado de microcistosis © macrocistosis tendrin un valor del ancho de distribucién del histograma de los eritrocitos aumen- tado. La reticulocistosis puede dar un aumento del RDW. ILL. Frotis de sangre periférica ‘A. Tincién y examen del frotis Nuevo Azul de Metileno. Una gota entre el frotis sanguineo secado al aire y el cubreobjetos, nos da una tincién ripida y significativa pero es una prepa~ racin no permanente. Los grupos acido se tifien de azul (es decir, el ADN y ARN del niicleo, el ARN citoplasmitico y los grinulos bas6filos) Dependiendo de la distancia entre los grupos cido, puede dar lugar a colo~ res azul 0 parpura, Los grinulos eosinéfilos quedan sin teftir. El reticulo de Jos reticulocitos se tifie de azul, aunque los reticulocitos se tiften mejor mez clando a partes iguales sangre y Nuevo Azul de Metileno, manteniéndoloCAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA durante 10 minutos a temperatura ambiente y después hacer la extensién. Tinciones de Romanowsky (p. cj, Tincién de Wright, Diff-Quik, Hemacolor, etc,). Estas preparaciones policrémicas tifien ciertos grupos icidos de azul (ARN) a pérpura (mastocitos, grinulos basdfilos y ADN del néicleo); os gru- pos basicos se tifien de rojo a naranja (proteinas, grinulos eosinofilos) 3. Evaluacién sistemitica del frotis sanguineo: ; a, A bajos aumentos. Escoger una area delgada del frotis donde las células estén uniformemente distribuidas y buscar los siguientes rasgos (1) Formaciones de glébulos rojos en pilas de monedas (descrito més v abajo en la morfologia eritrocitaria).. (2) Aglutinacién de eritrocitos (descrito mits abajo). (3) Agregacién plaquetaria, especialmente en el borde del frotis (wéase el Capitulo 4) (4) Néimero relativo de leucocitos. b. A altos aumentos (objetivo de 40 X). Confirmar las observaciones reali~ zadas a bajos aumentos y hacer lo siguiente: (1) Tomar nota de la concentracién de leucocitos y evaluar si el recuen= to de células blancas esta aumentado, disminuido o dentro del inter valo de referencia, lcular un recuento diferencial de leucocites. Se realiza mediante la observacién a altos aumentos, aunque para identificar ciertas célu- las se necesita inmersién en aceite. (3) Buscar eritrocitos nucleados y policromasia. c Aumentos en aceite de inmersi6n: (1) Examinar la morfologia eritrocitaria (descrita posteriormente) (2) Realizar el recuento diferencial de leucocitos si se ha encontrado difi- cultad para hacerlo a altos aumentos, (3) Examinar la morfologia leucocitaria (véase el Capitulo 2) (4) Estimar si el mimero de plaquetas es correcto y evaluar su morfolo- gia (véase el Capitulo 4) B. Morfologia eritrocitaria (Lamina 1.2.) 1. Morfologia normal: a, Los eritrocitos canines tienen un didmetro medio de 7 jum, son de tama- iio uniforme y presentan una zona pilida central (disco bicéncavo). 7 b, Los eritrocitos felinos tienen un difmetro medio de 5,8 jum, presentan una moderada anisocitosis (es decir, variacién en tamaiio) y una zona cen tzal muy poco pilida, Frecuentemente se observan hendiduras. En un 1% \ de los eritrocitos se encuentran cuerpos de Howell-Jolly (restos del nétcleo). ¢. Los eritrocitos del vacuno tienen un diémetro medio de 5,5 um. Es fre cuente la anisocitosis y la zona pilida central es normalmente poco mar- cada. Con frecuencia son indentados. d, Los eritrocitos equinos tienen un didmetro medio de 5,7 pum y no Ge nen zona pilida central. Es normal la formacién en pilas de monedas. @18 | PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS €. Los eritrocitos porcinos tienen un diimetro medio de 6,0 jum y a menu- do presentan poiquilocitosis. f. Los eritrocitos ovinos son similares a los bovinos pero mis pequeiios. Tienen un diametro medio de 4,5 pam. Los eritrocitos caprinos son los mas pequefios de los animales domésti- cos. Normalmente son de menos de 4 jum de didmetro. Son frecuentes la anisocitosis y la poiquilocitosis h, Los eritrocitos de la familia de los camélidos (camellos, llama, alpaca, etc.) son delgados (~ 1,1 um) y de forma elipsoidal con un difmetro medio de 6,5 jum y normalmente tienen un elevado recuento eritrocitario. Los eritrocitos aviares son ovales y nucleades con un tamatio medio de 12 X 6 pm. 2. Las formaciones en pilas de monedas son agrupaciones eritrocitarias que se asemejan a lo que su propio nombre indica. E] grado de grupacion tiende a correlacionarse positivamente con la tasa de sedimentacién eritrocitaria (ESR: eritrosedimentacién) y esti asociado normalmente con una carga superficial de membrana (potencial zeta) alterada. La intensidad de esta carga puede ser caracteristica de especies o consecuencia de una enfermedad. Esta formacién es frecuente en caballos, que en estado normal de salud, tienden a tener una carga de membrana disminuida, En ciertas enfermedades, la carga normal de la membrana puede estar parcialmente enmascarada por exceso de proteina (hiperfibrinogenemia, hiperglobulinemia) que disminuye las car- gas superficiales negativa ciones en pilas de monedas y aumento de la ESR Microscopicamente las pilas de monedas se pueden diferenciar de la autoa- ¢glutinacién por su dispersion en gota fresc solucién salina fisioldgica a. En Jos equinos sanos es fiecuente encontrar formaciones en pilas de mone- s y repulsivas del eritrocito. Observaremos forma- a cuando la sangre es diluida con das, pero puede que no se encuentren en la sangre de caballos gravemente anémicos 0 caquécticos. b, En cinidos y félidos sanos pueden encontrarse formaciones en pilas de monedas ligeras 0 moderadas, respectivamente. Podemos ver marcadas formaciones en pilas de monedas durante enfermedades inflamatorias neoplisicas. ¢. Las formaciones en pilas de monedas son raras en los rumiantes, tanto sanos como enfermos. 3. La aglutinacién es una agregacién de eritrocitos en forma de racimo de uvas que se puede ver en algunas muestras de animales con anemia inmuno-media- da (mediada por anticuerpos).A veces ¢s visible macroscépicamente (en las paredes del tubo de muestra sanguinea) 0 microscépicamente (en una gota sin teflir o en el frotis sanguineo tefiido). Hay aglutinacién si los eritrocitos permanecen agrupados al diluir la sangre 50:50 con solucién salina fisiol6- gica y observarlo microscpicamente en gota fresca. En animales anémicos,CAPITULO 1. ERITROCITOS = PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA 6. 19 Ja aglatinacién es un indicador de un efecto mediado por anticuerpos, aun que Ja ausencia de aglutinacién no excluye a la anemia inmuno-mediada. La anisocitosis es la variedad de tamaiios de los eritrocitos a causa de la pre- sencia de macrocitos y/o microcitos entre los normocitos (eritrocitos de tamaiio normal; Casos 1,2 y 5). : Los miacrocitos son eritrocitos grandes. Los reticulocitos normalmente son macrociticos y policromatofilicos. Los macrocitos normocrémicos se pue- den encontrar en ciertas circumstancias (p. ej., macrocistosis de los Caniches, infecciones por virus de leucemia felina, preleucemia en perros y gatos, apla~ sia eritroide de los gatos, deficiencia de vitamina B12 de los Schnauzer Gigantes). Si hay una presencia importante de macrocitos, el VCM se puede incrementar. Los microcitos son eritrocitos pequeitos. Se pueden observar en anemias por deficiencia de hierro y por deficiencia de piridoxina y estin asociados a una disminucién del VCM. Los microcitos pueden incluir restos celulares en cuer pos de Heinz y anemias de fragmentacién. Los microcitos también se aso- cian a la anastomosis portosistémica y la hiponatremia. Finalmente, podemos observar microcitos en perros sanos de algunas razas asidticas (Akita, Chow Chow, Shar Pei, Shiba Inu). Los esferocitos, que estén asociados a anemias inmunomediadas, tienen un VEM normal pero una disminucién de Ja superficie de membrana celular. Los esféracitos son globulares porque la membrana celular que les queda ha de contener una cantidad normal de hemoglobina. Debido a que no que~ dan bien extendidos en el frotis sanguineo, parecen mas pequefios que los eritrocitos de disco bicéncavo normocrémicos. La policromasia se refiere a los eritrocitos azul grisiceos con ARN residual que normalmente son grandes (macrociticos) y se ven en los frotis sanguine 05 tefidos rutinariamente. Los eritrocitos policromatofilicos (tal y como se observan con tinciones de Romanowsky) son sindnimos de reticulocitos (tal y como se observan con tincién del nuevo azul de metileno). El aumento del ndimero de estas células se asocia a un incremento de la actividad eritropoyé- tica y un intento de regeneracin como respuesta a uma atiemia (Casos 1, 5 y 25). El grado de regeneracién depende del niimero de eritrocitos poli- cromiticos (reticulocitos) respecto al grado de anemia, En perro y gato es nor~ mal encontrar alguna célula policrémica, es menos freeuente encontrarlas en rumiantes, y normalmente no se ve en caballos (ni sanos ni con anemia). La hipocromia es la disminucién de la intensidad de tincién del citoplasma y aumento de la palidez central del eritrocito a causa de la insuficiencia de hemoglobina en la célula. La causa mis frecuente de hipocromia es la defi- ciencia de hierro, pero también se puede dar en la intoxicacién por plome (saturnismo) por medio de la inhibicién de la sintesis de hemoglobina. La hipocromia en frotis sanguineos de aves se ha observado en la intoxicacin por plomo y en casos de inflamacion. ss, lA ™STTITA UNIVERSHARIO |PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS 10, Poiquilocito es un término general para nombrar a los eritrocitos que pre- sentan anormalidades en su forma. Si hay un periodo de tiempo considera ble entre la recoleccién de la muestra y el anilisis, los frotis sanguineos deben someterse a muestras de recuento sanguineo completo para evitar artefactos en la forma celular. Se pueden ver poiquilocitos en terneros jovenes sanos y en cabras (debido al cambio estructural de la hemoglobina) y también en cerdos de cualquier edad. Los poiquilocitos se consideran una anormalidad cen has otras especies donde pueden presentarse como consecuencia del trau- matismo de la membrana eritrocitaria asociado a flujos de sangre turbulen- tos 0 a depésitos de fibrina intravasculares. Los poiquilocitos se eliminan de la circulacién prematuramente, provocando anemia hemolitica. Los siguien~ tes son tipos espectficos de poiquilocitos a, Los equinocitos son critrocitos especulados con muchas proyecciones uni- formes y regularmente separadas, Los equinocitos de tipo | tienen espi- culas en la periferia del eritrocito. Son eritrocitos festonados y son un arte~ facto asociado a cambios de temperatura, de pH, secado, 0 otras interacciones entre la sangre y la preparacién del frotis in vitro, Los equi- nocitos de tipo IT y III (células de Burr) tienen espiculas en toda la super ficie del eritrocito que se atribuyen a flujos de electrolitos 0 electrolitos alterados que dan lugar a una expansién de la capa exterior de la mem- brana celular. También se han detectado en casos de uremia, reduccién de electrolitos, informa, toxicidad por doxorrubicina y glomerulonefritis. b. Los queratocitos ("“células casco”) son eritrocitos con una o dos proyec~ ciones que se forman de una vesicula herniada. Estas anormalidades sue~ len derivar de dafios oxidativos de la membrana eritrocitaria, formando parte de los cuerpos de Heinz €. Los esquistocitos son fragments irregulares de eritrocitos que se obtie~ nen como resultado de las tensiones soportadas en la circulacién y con la fibrina intravascular y los flujos de sangre turbulentos (Caso 11). Los esquistocitos se asocian, nombrando solo algunos ejemplos, a coagulacién intravascular diseminada (CID), hemangiosarcoma, glumeruloneffitis, fallo cardiaco congestive, mielofibrosis, toxicidad crdnica por doxorrubicina y vasculitis. 4. Los acantocitos son eritrocitos espiculados con dos 0 més proyecciones irregulares y normalmente redondeadas. Se cree gue estas céhulas se for man a consecuencia de alteraciones en la relacién entre lipidos y coles~ terol en la membrana eritrocitaria, En los animales, los acantocitos estan asociados a hemangiosarcoma (sobretodo si afecta al higado), glomeru- loneffitis, linfoma y enfermedades hepaticas. €. Los fusocitos son eritrocitos alargados que se encuentran en las cabras de angora sanas, £. Los eliptocitos son células ovales que encontramos en los camélidos sanos Se ha descrito eliptocitosis en una enfermedad hereditaria canina pocoCAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA 21 comin que cursa con deficiencia de la banda 4.1 de la membrana del citoesqueleto eritrocitario. A veces se pueden ver eliptocitos en la defi~ ciencia de hierro. g Los dacriocitos son eritrocitos de forma piriforme que aparecen a causa de la incapacidad del eritrocito para recuperar su forma normal después de haberse deformado en los vasos sanguineos (capacidad para deformarse disminuida). Este cambio puede estar relacionado con alteraciones en las proveinas del citoesqueleto. Si las colas de los dacriocitos estin todas orien- tadas en la misma direccién, probablemente serin debidos a un artefacto en la preparaci6n del frotis. Se observan dacriocitos en los frotis sangui- neos de lamas con deficiencia de hierro. h, Los leptocitos son células delgadas con una relacién aumentada entre membrana y volumen; pueden parecer doblados a causa del exceso de membrana. Los leptocitos se asocian a las anastomosis portosistémicas (Caso 13). Los eritrocitos policromatofilicos (reticulocitos) pueden pare cet leptocitos a causa de la membrana celular aumentada, i. Las células diana (codocitos) son un tipo de leptocito que tiene forma acampanada y parece una diana en el frotis a causa de la distribucién cen wal y periférica que presenta su hemoglobina en la célula, La formacién de células diana puede observarse por el incremento de la membi celular por insercién de lipidos y colesterol o por disminucién del volu- men citoplasmatico como en la hipocromia. Las células diana pueden aso- ciarse con enfermedad hepatica y deficiencia de hierro. 4. Los estomatocitos son un tipo de leptocito con forma de cuenco con reas centrales pilidas ovales en el frotis sanguineo. Este cambio de la forma ¢s causado por la expansién de la Mimina interna de la membrana celular. Estas células se encuentran en la estomatocitosis hereditaria de los Alaskan Malamutes, Drentse Partrijshond y Schnauzers Miniatura. Los estomatocitos también pueden ser artefactos en la zona gruesa del frotis k, Los esterocitos son microcitos pequefios y oscuros que carecen de pali- dez central y tienen una baja cantidad de membrana por unidad de volu- men, Se detectan ficilmente solo en el perro gracias a su abundancia nor mal de zona pilida central. Los esferocitos frecuentemente se observan en anemias hemoliticas inmunomediadas (Caso 2), pero también se pue- den ver después de transfusiones y en algunas fases de la anemia de cuer- pos de Heinz. Son el resultado de la eliminacién parcial por fagocitosis de la membrana recubierta de anticuerpos o por cambios en la membra~ na como los debidos a la presencia de cuerpos de Heinz. Los esferocitos son eliminados prematuramente de la circulacién por los macréfagos esplénicos a causa de su baja capacidad de deformacién (es decir, pérdi- da de flexibilidad de la céhula) y atravesar la red microvascular esplénica. 11.El punteado basdfilo son agregaciones de ARN residual en células teftidas con tincion de Romanowsky (tinciones de Wright o Diff-Quick). Stele aA — 7322 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1, ERITROCITOS Lf observarse en ovejas y ganado bovino anémico y ocasionalmente en la ane- mia felina; tiene el mismo significado que la policromasia (anemia regenera- tiva}, y puede ser una respuesta adecuada durante una anemia. El punteado basdfilo también puede ser indicador de toxicidad por plomo si se acompa- fia de una metarrubricitosis importante con una policromasia minima (una respuesta inadecuada) 12,Los cuerpos de Howell-Jolly son restos nucleares baséfilos en el citoplasma del eritrocito, Es mis frecuente observar estas estructuras en situacién de eri- tropoyesis acelerada o después de una esplenectomia. 13.El cuerpo de Heinz es una estructura redondeada que sobresale en la mem- brana del eritrocito o también puede parecer un pequeiio cuerpo refracta~ rio cn el citoplasma. Estin compuestos de hemoglobina desnaturalizada y precipitada a causa de la oxidacién.A menudo se encuentran adheridos ala parte interna de la membrana celular (Caso 3).Al ser derivados de la hemo- globina, son del mismo color que el resto del citoplasma y no se pueden dis tinguir con tinciones de Romanowsky. Utilizando la tincién de nuevo azul de metileno, los cuerpos de Heinz se ven como cuerpos basofilos oscuros. Los cuerpos de Heinz alteran la membrana celular y disminuyen la capaci- dad de deformacién del eritrocito al atravesar los capilares. Pueden causar hemélisis intravascular. Los cuerpos de Heinz pueden ser eliminados por macréfagos esplénicos dando lugar a esferocitos. Los gatos son mis propen- sos a la formacién de cuerpos de Heinz (a veces llamados cuerpos refracta- rios eritrocitarios en esta especie). La hemoglobina felina tiene un mayor nimero de grupos sulfhidrilo que incrementan su sensibilidad a la oxida cién. Ademis, el bazo felino es ineficiente para eliminar estos cuerpos. Hasta un 10% de los eritrocitos de felinos sanos pueden contener cuerpos de Heinz. En aves, dentro de los eritrocitos los cuerpos de Heinz son mas pequetios y nds numerosos 14, Los eccentrocitos (eritrocitos semi-fantasmas) son eritrocitos con la hemo- globina condensada en una parte de la célula, dejando el resto de la céluila vacfa © con aspecto de ampolla. Son consecuencia de daiios oxidativos con peroxi- dacién de los lipides y entrecruzamiento de la membrana celular (Caso 3) 15.En un frotis teaido, el grupo de los eritrocitos nucleados esté formado por metartubricitos, rubricitos y estados iniciales de desarrollo eritrocitico. El tér- mino metarrubricitosis hace referencia a la presencia de cualquiera dé las for- mas de eritrocitos nucleados y supone la liberaci6n precoz de estas células a la circulacién. En caso de enfermedad, esta liberacién de eritrocitos nuclea- dos se puede clasificar de dos maneras: respuesta apropiada o inapropiada. a. La liberacién de eritrocitos nucleados es una respuesta esperada o apro- piada en anemias altamente regencrativas con una intensa hiperplasia eri— troide. Los eritrocitos nucleados se acompaiian de reticulocitosis (Casos 1,2 y 5). La eritropoyetina también puede estimular la liberacin de eri- trocitos nucleados durante Ia hipoxia, sin estar relacionado a anemia.CAPITULO 1, ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA b. En los camélidos, las llamas fiecuentemente tienen un elevado néimero de critrocitos nucleados en las anemias regenerativas pero con ausencia 6 ligera policromasia ¢. Los metarrubricitos pueden ser liberados de forma inapropiada en la into- xicaci6n por plomo, deficiencia de hierro, deficiencia de cobre, hemangio- sarcoma, hematopoyesis extramedular, mieloptisis, sindrome del disco inter- vertebral, macrocitosis hereditaria del Caniche, endotoxemia, traumatismo de la médula 6sea, necrosis de la médula dsea, metistasis neoplisicas de la cavidad de la médula 6sea, mielofibrosis, infeccién por FeLV, sindrome mic- lodisplastico y leucemia, especialmente en miclosis eritrémica en gatos. . Los eritrocitos nucleados se pueden observar cn nimero elevado en cer- dos sanos, especialmente en lechones de menos de 3 semanas de vida €. En las aves, los eritracitos nucleados son normales, 16. Los eritroplistidos son fragmentos anucleados de citoplasma eritrocitario que a veces se encuentran en el frotis sanguinco de aves y los hematogones son niicleos eritrocitarios libres. 17. Podemos encontrar parisitos dentro del eritrocito (inmacelulates), en las depre- siones de la superficie de la membrana (epicelulares), 0 en el plasma (extra~ celulares): a. Parisitos intracelulares son Hemoproteus spp., Leukocytozoon spp. Plasmoditent spp. (aves); Cytanxzoon felis, Babesia cati, B. felis (gatos); Anaplasma margina- le, A. centrale (vacuno); Bahesia bovis, B. bigemina (vacuno); Theileria mutans, T. annulata (vacuno); Theileria cervi, (ciervo, alce); Babesia canis, B. gibsoni (perros); Babesia equi, B. caballi (caballos); y Babesia ovis, B. motasi (avejas). b. Son pardsitos epicelulares comunes: Trypanosoma johnbakeri (aves), Hemobartonelia felis (Mycoplasma haemofelis) (gatos), H. canis (Mycoplasma haemocanis) (perros), Eperyihrozoon suis (Mycoplasina haemosuis) (cerdos), Eperythrozoon wenyoni (bovino), y Eperythrozoon sp. (lamas). | ¢. Los parisitos extracelulares comunes estin formados por filiridos y wi- panosomas: (1) Microfilariae: Dipetalonema seconditun (perros), Dirofilaria init (perro, ocasionalmente gatos), y Setaria sp. (caballo) (2) Tripanosomas: Trypanosoma theileri, . congolense, T. vivax (vacuno); ‘Trypanosoma cruzi (perros); y Trypanosoma brucei, T: evansi (caballos) 18. Las inelusiones del moquillo en los eritrocitos caninos son irregulares, redon- das 0 con forma de anillo y se tifien de color magenta con las tinciones de Romanowsky y Diff-Quik (las inclusiones se tifien de azul con otras tin- ciones ripidas para sangre). También se pueden observar en los Ieucocitos. Las inclusiones del moquillo son transitorias. IV. Evaluacién de los reticulocitos sanguineos A. Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros y sin nficleo de los mamiferos, que con tienen restos de ARN y mitocondrias agrupados en un patr6n reticulado al teftir-24 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS los con tinciones supravitales (p. ¢j., tincién de nuevo azul de metileno) (Lamina 1.2). Los reticulocitos se corresponden a los eritrocitos policromatofilicos que se observan en preparaciones teitidas con tinciones de Romanowsky. Los reticuloci- tos liberados precozmente como respuesta a una anemia son de mayor tamafio y se denomina desviacién a la izquierda reticulocitica. En las aves, los reticulocitos son nucleados y a veces pueden parecer mas redondeados. B. La cuantificacién de los reticulocitos circulantes, mediante el cilculo del néimero absoluto de reticulocitos, es el mejor indicador de la respuesta eritroide de la médu- Ja 6sea frente a Ja anemia. C. Caracteristicas de los reticulocitos segiin especie 1. Bl perro sano tiene pocos reticulocitos con agregados (hasta un 1%). Estos agregados se tifien de azul con tinciones supravitales (Lamina 1.2.) En el gato encontramos dos tipos de reticulocitos: a, Reticulocitos agregados, que son similares a los de otras especies y que en cl animal sano representan hasta un 0,4% de los eritrocitos. Este po de reticulocito se recuenta hematoldgicamente, En aumento de reticu- locitos agregados implica una respuesta actual de la médula 6sea a una anemia (es decis, eritropoyesis aumentada 0 regeneracién). La reticuloci- v tosis es menos espectacular que en el perro. b, Reticulocitos punteados (que contienen pequefios puntos que se tifien de azul) que derivan de los reticulocitos agregados envejecidos y duran unas 2 semanas, Al igual que los reticulocitos agregados, aumenta su néime- 10 con el incremento de la eritropoyesis. Debido a su persistencia en cir culacién durante semanas y a que atin persisten cuando el recuento de reticulocitos agregados vuelve a niveles normales, su recuento es de poca utilidad para determinar respuestas regenerativas recientes. Los reticulo~ citos punteados indican una respuesta de la médula 6sea a una anemia ocurrida, como maximo, en las 3-4 semanas anteriores. 3. No se encuentran reticulocitos en la sangre de los rumiantes sanos a causa de la larga vida media de sus eritrocitos, hay ligeros aumentos en las respuestas a. anemias. 4. No hay reticulocitos en la sangre de caballos sanos ni en animales que sufran anemia regenerativa 5. La reticulocitosis es una caracteristica importante de la sangre de los cerdos lactantes, pero no es tan marcada en adultos (19%). Los recuentos de reticu- + locitos aumentan en las anemias regenerativas, 6. Elporcentaje de reticulocitos en la sangre de aves sanas es mayor (4-5%) que en la de mamiferos a causa de la baja vida media de sus eritrocitos (~ 35 dias). La policromasia es mis notable en aves jOvenes que en adultas pero no suele pasar del 5%. D. Formas de recuento de reticulocitos 1. Porcentaje de reticulocitos. Se cuentan los reticulocitos en un frotis de san- gre teftido con Nuevo Azul de Metileno y se expresan como porcentaje deCAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA la poblacién total de eritrocitos. Este parimetro puede sobreestimar la res- puesta de la médula 6sea por las siguientes causas: a. Los reticulocitos liberados de la médula dsea a la sangre de animales ané- mics se mezclan con un nimero bajo de eritrocitos maduros, dando lugar a un porcentaje relativo de reticulocitos elevado. : b. Se liberan reticulocitos inmaduros y de mayor tamaiio como respuesta a Ja anemia, Estos reticulocitos, a los que lleva més tiempo madurar, persis ten durante mas tiempo en Ja sangre. Esto da lugar a un porcentaje de reticulocitos mayor. Porcentaje de reticulocitos corregido: a, Férmula: Reticulocitos observados % % (Het % del paciente + Het % normal) = % de reticulocitos corregido. El hematocrito “normal” que se toma como referencia es de 45% en perro y 37% en gato. b. Este parimetro corrige la desviacién descrita en el apartado anterior 1a pero no la 1b, ©. Porcentajes corregidos de reticulocitos >1% en perro y > 0.4% en gato indican una respuesta de la médula ésea a Ja anemia. El porcentaje de reti- culocitos corregido no ha sido validado para otras especies animales dife- rentes al perro y al gato. Recuento absoluto de reticulocitos: a. Férmula: Porcentaje de reticulocitos (en forma decimal) X (recuento san guineo total/1l) = recuento absoluto de reticulocitos/ 1h b. Este parimetro corrige la desviacién descrita en el apartado Ia pero no cl efecto descrito en la 1b. Un recuento absoluto de reticulocitos > 80.000/yl en el perro y > 60,000/pal en el gato indican una respuesta regenerativa, Un hemato~ crito muy bajo puede tener un recuento absoluto de reticulocitos pro- porcionalmente mayor, 4d. Bstos son los grados de regeneracién estimados para perros: (1) Ninguna = 60.000/ul (2) Débil = 150.000/pA 3) Moderada = 300.000/p1 (A) Fuerte => 500.000/pl €. Los siguientes son los grados de regeneracién (reticulocitos agregados) estimados para gatos: (1) Ninguna = <15.000/p1 2) Débil = 50.000/p1 (3) Moderada = 100.000/p1 (4) Fuerte => 200.000/p £. Aunque no se suele usar, se estiman los siguientes grados para reticulo- citos punteados: (1) Ninguna = < 200,000/1 a - (2) Débil = 500.000/p * 2526 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA * CAPITULO 1. ERITROCITOS (3) Moderada = 1,000,000/p1 (4) Fuerte => 1.500.000/pl 4. indice de produccién de reticulocitos (IPR). Este indice de correccién se utiliza en humanos y también se ha usado en perro y gato para corregir las desviaciones definidas anteriormente en los apartados 1a y 1b. Este parime- to presenta controversia porque no se han realizado estudios de correlacién en animales: a. IPR = reticulocitos observados (9%) X [Het observado (%) + 45 (Het normal)] X [ 1 + tiempo de maduracién en sangre] b. Los tiempos de maduracién en sangre de los reticulocitos a varios Hets son 4596 = 1,0 dias, 35% = 1,5 dias, 25% = 2,0 dias y 15% = 2.5 dias ©. Los valores del indice de produccién de reticulocitos equivalen el incre- mento en la produccién de eritrocitos (p. ¢j., IPR. de 3,0 equivale a 3 veces la produccién normal de eritrocitos). Un indice de produccién de reticulocitos superior a 2 implica respuesta regenerativa. E. Interpretacién de los parimetros de reticulocitos 1. Un aumento absoluto de los reticulocitos indica que la médula ésea esté res pondiendo (anemia regenerativa) y que la causa de la anemia es extramedu- lar (es decir, hemorragia o hemélisis) 2. La reticulocitosis es mas intensa en las anemias hemoliticas que en las hemo~ rragicas, El hierro de los eritrocitos destruides esta més disponible para a eri~ tropoyesis que el hierro almacenado como hemosiderina. 3. La reticulocitosis no se evidencia de forma clara hasta las 48 -72 horas del inicio de Ja anemia, Con una respuesta medular normal, el nivel méximo de reticulocitosis se alcanza a los 7 dias. No obstante en animales con diferen- tes enfermedades sistémicas la reticulocitosis se puede retrasar, Los perros tienen una respuesta reticulocitica mayor que los gatos. 5. Enel ganado bovino no se desarrollan reticulocitosis significativas como res- puesta a anemias agudas, hasta que el hematocrito es muy bajo. 6. En caballos no aparece reticulocitosis en ningiin tipo de anemia. 7. Los lechones sanos presentan recuentes de reticulocitos altos, 8. Las aves sanas frecuentemente tienen recuentos de reticulocitos mis altos (-4-5%) gue los mamiferos a causa que la vida media de sus eritrocitos es més corta (25 - 40 dias). 9. La falta de reticulocitosis como respuesta a una anemia, hace suponer que la amédula 6sea no esti respondiendo (anemia no regenerativa) Esto puede ser causado por falta de tiempo para generar la reticulocitosis, por una deficiencia en la respuesta reticulocitica existente 0 debido a defectos en la eritropoyesis. V. Examen de la médula ésea A, Se debe realizar el examen ante: 1. Anemia no regenerativa o que no responde. 2. Neutropenia persistente,CAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA ‘Trombocitopenia no explicable Sospecha de neoplasia hematopoyética. Sospecha de osteomielitis, enfermedad infiltrativa o proliferativa de la médu- Ja ésea, yas 6. Fiebre de origen desconocido B. Técnica i 1. Se pueden obtener aspirados de médula 6sea por puncién de la cresta ilfaca, fosa trocantérica, esternén, himero o costilla de los mamiferos, usando una aguja especial para médula dsea o una aguja espinal de didmetro 18. En aves, Jos aspirados se obtienen de la quilla 0 el tibiotarso, Los otros huesos largos importantes de las aves estén lenos de aire y carecen de tejido hematopoyé- tico significativo, 2. Se prefiere el frotis de particulas porque tiene menos contaminacién por sangre 3. Las biopsias centrales, obtenidas de Jos sitios anteriormente indicados median te el uso de agujas especiales, ofrecen mejor informacion que los frotis cito- logicos C. Examen del fiotis de médula 6sea teftido 1. Observar el niimero relativo, tamaio y contenido celular de las particulas, incluyendo la proporcién de adipocitos (aproximadamente 50%) y células progenitoras hematopoyéticas (aproximadamente 50%). El mimero y conte- nido de células de las particulas es una estimacién del total de la médula dsea, sin embargo, pueden darse muestreos incompletos de la médula ésea con un bajo mamero de células aspiradas. El examen histologico de una biopsia del centro de la médula 6sea es mis preciso para evaluar el contenido celular de la médula ésea Ver si el niimero y estado de maduracién de los megacariocitos es el ade- cuado, Los megacariocitos inmaduros tienen el citoplasma azul y granuloso mientras que el de los maduros es rosado y granulado. 3. Hacer una relacién de células micloides con eritroides nucleadas (relacién M:E): a. Normalmente, la relacién McE se determina para valorar la respuesta eri- detectar reacciones del estroma (p. ¢j., mielofibrosis), tropoyética a una anemia. El recuento de células blancas, y mas concre- tamente de los neutréfilos, es necesario para una adecuada interpretacién de la relaci6n. b, Siel recuento de la serie blanca esta dentro de sus intervalos de referen- cia, los cambios que encontremos en la relacién M:E serin debidos a cam- bios en a seria eritroide. c. Valores altos de relacién M:E en animales anémicos que tienen recuen- tos de serie blanca normales hacen pensar en hipoplasia eritroide. d. Valores altos de relacién M:E en animales anémicos con recuentos de serie blanca aumentados son mis dificiles de interpretar porque la tela~ cién puede estar incrementada por hiperplasia mieloide (granulocitica) y/o por hipoplasia eritroide. [Pr usrrure mvsasiran |PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS €. Valores bajos de relaci res de la serie blanca normales o superiores al normal, puede indicar rege- neracién eritroide de la eritropoyesis inefectiva reciente. 4. Para valorar Ja maduraci6n, se pueden observar los porcentajes relativos de distintos estados de las diferentes series (Lamina 1.1.). En animales sanos, aproximadamente el 80% de las series micloides serin metamielocitos, ban das y segmentados (almacén de reserva, maduracién, no proliferante); el 90% de la serie eritroide serin rubricitos y metarubricitos. Un porcentaje eleva do de formas inmaduras se puede relacionar con hiperplasia, neoplasia 0 maduracién anormal de la serie respectiva. En las series mieloides, la reduc cién de la reserva de almacenamiento (que contiene las células mis madu- ras) puede causar un desvio hacia células inmadutas. 1 M:E en animales anémicos que tienen los valo- Podemos identificar células anormales. 6. Para diferenciar la anemia por deficiencia de hierro (reservas de hierto dis~ minuidas) de la anemia por enfermedad crénica (reservas de hierro aumen- tadas), nos puede ser de utilidad aplicar tinciones de Perl’ o azul de Prusia para cl hierro, a los macrofagos de la médula ésea. Las tinciones de Perl's 0 azul de Prusia detectan la hemosiderina (hierro insoluble) pero no detectan la ferritina (hierro soluble que es eliminado durante el proceso de tincién). En la médula ésea felina normalmente no se observa hemosiderina, VI. Deteccién de antigenos y anticuerpos A. Conceptos generales de los antigenos y anticuerpos de los glébulos rojos 1, En los animales domésticos, los anticuerpos anti-erittocitarios son conse- cuencia de transfusiones, transmision trans-placentaria durante la gestacion en el caballo, vacunaci6n con productos de origen sanguineo, fenomenos autoinmunes y por sucesos naturales en el gato. La identificacién de antigenos es de utilidad para pruebas de parentesco, iden- tificacién de donantes de sangre compatibles (p. ej. perros DEA=I.1, 1.2 y 1.3 negativos son los mejores donantes de sangre) y para identificar aparea- mientos que puedan dar lugar a isoinmunizacién y consiguientemente el desarrollo de enfermedad hemolitica en los animales recién nacidos (isoeri- trolisis neonatal) (p. gj. yeguas Aa negativas cruzadas con sementales Aa posi tivos tienen un alto riesgo de manifestarlo en el segundo parto). 3. Para Ja identificacién se utilizan pruebas de aglutinacién y hemélisis con anti. suetos especificos para cada antigeno. Algunos antigenos (subtipos sanguine- os de grupo) son m4 riesgo a tener problemas hemoliticos. La sangre de animales con los antige- nos descritos a continuacién, tiene el mayor potencial para causar sensibili- zacién y consiguientes reacciones: a, Enel perro, los DEA (antigeno eritrocitario de perro) ~ 1.1 (Aa,), DEA- 13 los receptores, Anticuerpos anti-DEA 1.1 y anti-DEA1.2 no se encuen- 2 importantes que otros para determinar animales con (Aa.), DEA-1.3 (Aas) son altamente inmunogénicos y sensibilizaran aCAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA tran de forma natural, su presencia en sangre requiere una exposicién pre- via a estos antigenos. Los anticuerpos anti-DEA 1.1 y anti-DEA1.2 dan lugar a reacciones hemoliticas. Los anticuerpos anti-DEA-3 (Ba) que se dan de forma natural generan una eliminacién précoz del eritrocito o hemélisis. Los anticuerpos anti-DEA-5 (Da) y anti-DEA-7 (Ti) se presen- tan de forma natural y implican aumento de la eliminacién de eritrocitos. b. Los anticuerpos del calostro de la yegua para los tipos Aa y Qa son los is frecuentemente relacionados con Ia isoeritrolisis neonatal. ¢. El ganado bovino tiene mucha variabilidad de antigenos eritrocitarios con unos 70 factores de grupo sanguineo, 4d. Los anticuerpos de tipo A y B se presentan de forma natural en el gato. Los gatos de tipo B con anticuerpos anti-A presentaran reacciones hemo- liticas peligrosas para la vida si reciben transfusiones con sangre de tipo A. Si gatos de tipo A con anticuerpos anti-B si reciben sangre de tipo B tendrin una eliminacién precoz de los eritrocitos. B. Deteccién de los anticuerpos anti-eritrocitarios 1. Reaccién de sangre cruzada: a. Estos ensayos se utilizan para detectar anticuerpos y determinar si la sangre puede ser transfundida con seguridad, b. La reaccién cruzada principal cruza eritrocitos del donante con suero del receptor. Este ensayo se utiliza para detectar anticuerpos en el receptor que reaccionen a las células del donante. Las incompatibilidades en este ensayo son clinicamente importantes por la reaccién sistémica que causa la des- truccién masiva de las células transfundida c. La reaccién cruzada secundaria cruza suet del donante con eritrocitos del receptor. Es un ensayo para detectar anticuerpos en la sangre del donante. Las incompatibilidades no son tan peligrosas para la vida del receptor por que los anticuerpos transfundidos se diluirin en el paciente d. Reacciones cruzadas incompatibles pueden indicar sensibilizacién previa: (1) Los anticuerpos que se encuentran de forma natural normalmente no lo estin en concentracién suficiente para causar reacciones en wna transfiu- sién, excepto en los gatos A negativos (tipo B), que tienen de forma natu ral anticuerpos anti-A, (2) Una reaccién cruzada incompatible implica, por Jo tanto, una sensibili- zacion previa, excepto en el gato. ¢. La reaccién cruzada incompatible se refleja en la mayoria de especies por aglutinacion, aunque en el caballo y la vaca la hemélisis predomina, = 2. Prueba de antiglobulina (Test de Coombs): a. La prueba de la antiglobulina (prueba de Coombs) se utiliza para confirmar Ja hemélisis inmuno-mediada de eritrocitos, b. La prueba directa de la antiglobulina (PDA) detecta un anticuerpo y/o com- plemento fijado a la membrana de los eritrocitos lavados del paciente.PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1, ERITROCITOS (1) El reactivo da la antiglobulina (suero de Coombs) se debe preparar con tra cualquier tipo de anticuerpo (TgG, IgM) 0 complemento (C3) 0 puede ser una mezcla (IgG y C3). Los reactivos que evaliian frente un anticuerpo © complemento son monovalentes. Los reactivos que evaldan frente mail tiples anticuerpos © complementos son polivalentes. (2) Hay que usar sueros de Coombs especie-especificos (p.¢ {jo anticanina para el perro) c. Laprueba indirecta de la antiglobulina detecta anticuerpos anti-eritrocito en el sueto del paciente, En esta prueba se evaliia el suero del paciente frente a eritrocitos lavados del padre, de alguno de sus descendientes o de sangre de un donante potencial. En el posparto de yeguas o vacas se puede usar el suero del calostro en lugar del suero sanguineo para detectar posibles reacciones contra las células de la descendencia d. Se ha descrito un método basado en la prueba de inmunoabsorcién enzi- mitica (ELISA) (prueba directa de la antiglobulina unida a enzimas 0 prue- ba DELAT) y se ha usado satisfactoriamente para detectar anticuerpos en la anemia hemolitica autoinmune test de aglutinacién directo-negativa canina (AHIM). Se han detectado IgG, IgM, IgA y C3 recubriendo la membrana de los eritrocitos en perros, aunque esta prueba se ha usado bisicamente IgG de cone como herramienta de investigacién. ANEMIA: DIAGNOSTICO Y CLASIFICACION La anemia es una disminucién absoluta en el valor hematocrito, la concentracién de hemo- globina y/o el recuento de glébulos rojos. La anemia relativa puede darse por aumento del yolumen plasmético (p. ej. administracién de fluidos parenterales en exceso, gestacin, neo~ natos) 0 por obtencién inadecuada de las muestras de sangre de vias intravenosas de flui- doterapia (pseudoanemia). I. Determinacién de la causa de la anemia Como en cualquier enfermedad, el diagnéstico de la anemia se hace a partir de la infor- macién historica, sintomas fisicos y de resultados de laboratorio. ‘A. Anamnesis. Pueden ser importantes los siguientes hechos: 1. Vacunacién 0 administracién de farmacos 2. Exposicién a plantas o agentes quimicos téxicos. 3, Existencia de enfermedad en la familia o rebaio. 4, Ingestién reciente de calostro 0 transfusion. 5. Edad al inicio de los signos clinicos. 6. Historial de problemas sanguineos anteriores. 7. Dieta. 8. Raza, sefias 9. Gestaciones previas de la madre. 10. Estado reproductor (entero 0 castrado)CAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA B. Sintomas fisicos 1. Los signos clinicos que sugieren la presencia de anemia estin relaciona- dos con la merma de la capacidad de transporte de oxigeno y los reajus- tes fisiolégicos para aumentar la eficiencia del eritrén y reducir el nivel de trabajo del corazén. Los signos clinicos tipicos son los siguientes: a. Membranas mucosas palidas, b, Debilidad, pérdida de resistencia fisica, intolerancia al ejercicio, Taguicardia y polipnea, especialmente después del ejercicio, a. Sincope, depresién. Sensibilidad al frio aumentada, f. Murmullo cardiaco causado por la baja viscosidad y aumento de ur- bulencia del dujo sanguineo. g. Pulso débil o palpitante. h. Shock, si se pierde de forma répida mas de un tercio del volumen sanguineo. Dependiendo del mecanismo fisiopatoldgico involucrado podemos obser- var iotericia, hemoglobinuria, hemorragia, melena, petequias o fiebre. Si el establecimiento de la anemia es gradual y el animal se ha adaptado ala disminucién de la masa eritrocitica y a la baja capacidad de transporte de oxigeno, los signos clinicos seran menos evidentes. Xv e C. Resultados de laboratorio. Se necesita una confirmacién laboratorial porque las anemias no siempre se acompatian de los signos clinicos tipicos. Una ane= mia moderada fiecuentemente se diagnostica a partir de los datos analiticos de animales enfermos en los que no se habia sospechado de anemia 1. El valor hematocrito es el método mis ficil y preciso para detectar anemia. Siempre hay que interpretarlo conociendo el estado de hidratacién del ani- mal y considerando la posible influencia de una contraccién esplénica. 2. Laconcentacién de hemoglobina y el recuento de globules rojos se pue~ den usar para la posterior clasificacién de la anemia pero normalmente no son necesarios para confirmar su presencia, 3. Se pueden usar otros parimetros de laboratorio para caracterizar la ane- mia y legar a un diagnostico especifico, IL. Clasificacién ava #12 @ ?| TUISHIAINN OLNLILS Siempre que sea posible deberd identificarse la causa de la anemia, porque el término anemia por si solo no constituye un diagnostico definitivo, Para el diagnéstico defini- tivo se usan esquemas de clasificaci6n. Sin embargo, usar una sola clasificacion puede que no sea del todo adecuado. A. Clasificacién segtin tamaio (VCM) y concentracién de hemoglobina (CHCM) del eritrocito 1. ELVCM clasifica la anemia en normocitica, macrocitica o microcitica, dependiendo de si el volumen eritrocitario medio est dentro del inter- valo de referencia, aumentado o disminuido, respectivamente. 31PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS 2. La CHCM clasifica las anemias en normocrémica, hipocrémica o hiper crOmiica. Silos eritrocitos son normocrémicos, la concentracién de hemo~ globina esti dentro de su intervalo de referencia. Si son hipocrémicos esti disminuida. La hipercromasia esta relacionada mis frecuentemente con la hemblisis de eritrocitos o Ia administracién de oxiglobina, ya que Jos eri- trocitos no producen excesos de hemoglobina. En circunstancias excep~ cionales, la esferocitosis se puede asociar con la hipereromasia a causa de la disminucién de volumen del critrocito. B. Clasificacién en funcién de la respuesta de la médula sea 1, Anemia regenerativa: a. Lamédula ésea responde activamente a la anemia aumentando la pro- ducci6n de eritrocitos. b. Hallazgos que indican la regeneracién de los eritrocitos: (1) Policromasia 2) Reticulocitosis con anisocitosis y aumento del RDW. (3) Mactocitosis (aumento del VCM) ¢ hipocromasia (disminucién de HCM y CHCM) asociado a reticulecitosis, (4) Punteado baséfilo de los eritrocitos en rumiantes. (5) Médula ésea hipercelular con disminucién de la relacién M:E a causa de la hiperplasia eritroide. c. Las especies capaces de la méxima respuesta reticulocitica son las que tienen la regeneraci6n mis intensa; el hematocrito vuelve al interva- Jo de referencia mis ripidamente. La capacidad de Jas especies para organizar una respuesta regenerativa, en orden decreciente es: aves, perro, gato, vaca, caballo. d._ Lapresencia de regeneraci6n indica una etiologia externa a la médu- Ja 6sea, implicando pérdida (p. ej. hemorragia) o lisis (p. ¢j. cuerpos de Heinz, inmuno-mediada o fragmentacién) de los eritrocitos de suficiente duracién (2-3 dias) para que la respuesta regenerativa sea evidente en la sangre. El examen de la médula sea raramente es necesario para detectar la regeneracién de los etitrocitos; no obstante, si se toman muestras de aspirados la hiperplasia eritroide serd evidente, La regeneraci6n en el caballo es dificil de detectar, porque los reti- culocitos no se liberan a la circulacién. Un incremento del VCM y RDW puede indicar una respuesta regenerativa. El examen de la médula 6sea puede ayudar pero no siempre es concluyente; en los aspirados observaremos hiperplasia eritroide e incremento del néim: ro de reticulocitos. g. _Algunos ejemplos de anemia regenerativa son la hemélisis, la hemo- rmagia o la regeneraci6n una vez se ha resuelto la causa de una ane- mia no regenerativaCAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA 2. Anemia no regenerativa: a, La anemia no regenerativa indica la ausencia de respuesta eritroide en la médula 6sea. La falta de respuesta puede ser a causa de que no haya trans- currido el tiempo necesario para la respuesta, y también por otras cir- cunstancias como inflamacién cronica, enfermedad renal y desérdenes endoctinos, Los caballos no liberan reticulocitos a la sangre, por lo que en esta especie todas las anemias aparecen de tipo no regenerativo. b. La policromasia, reticulocitosis y punteado baséfilo (rumiantes) estin en bajo néimero 0 ausentes, c. La anemia puede parecer no regenerativa durante los primeros 2-3 dias del inicio de una hemorragia 0 hemélisis aguda 0 sobreaguda, d. Elexamen de la médula ésea en algunas ocasiones puede revelar el meca- nismo fisiopatol6gico o etiologia de algunos casos de anemia no regene- rativa. e. Algunos ejemplos de anemia no regenerativa son: anemia de la enfer- medad inflamatoria (AEI), fallo renal, anemia por deficiencia de hierto, anemia aplisica, aplasia pura de células rojas y desordenes endocrinos f Las causas de la anemia pueden ser multifictoriales y esto puede afectar a la respuesta regenerativa. Por ejemplo, una hemorragia aguda puede ser poco o nada regencrativa sila causa subyacente es una situaci toria que da lugar a una anemia de la enfermedad inflamatoria. n inflama- C. Clasificacién segiin los mecanismos fisiopatolégicos principales Pérdida de sangre (anemia hemorrigica) Destrucci6n acelerada de los eritrocitos (vida media de los eritrocitos dis- minuida) por hemélisis intra 0 extravascular. Eritropoyesis reducida o defectuosa ANEMIA POR PERDIDA DE SANGRE (ANEMIA HEMORRAGICA) (TABLA 1.1.) I. Garacteristicas de la pérdida aguda de sangre (Casos 1 y 25) A. Hallazgos clinicos 1 Normalmente hay una evidencia visual directa de ka hemorragia, pero puede haber hemorragias ocultas. Cuando los resultados de laboratorio nos indican una anemia hemorrigica pero no encontramos evidencias de ésta, hay que considerar la posibilidad de sangrados ocultos, como hemorragias gastroin- testinales. La trombocitopenia y anormalidades en las pruebas de coagula- cién indican hemorragias potenciales. La trombacitopenia por si sola rara~ mente da lugar a anemias hemorrigicas. La autotransfisién puede acompanar a hemorragias en cavidades corporales. Los signos clinicos dependen de la cantidad de sangre perdida, el periodo de tiempo que ha durado el sangrado y el lugar de la hemorragia, Las hemo- } | M>cinsrmmuto untversrranio | 3334 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA « CAPITULO 1 ERITROCITOS Hemorragia aguda Ulceras gastrointestinales, Defectos de hemostasia: Intoxicacion por helechos, Coagulacién intravascular diseinada, Deficiencia de factor X Hemoflia A y 8. Intoxicacién por rodenticidas Inioxicacion por trébol dulce Neoplasia: Hemangiosarcoma esplénico. Hemangioma esplénico. Trombocitopenia Traumatismos. Girugia. Hemorragia cronica Ulceras gastrointestinales, tumores. Hematuta. Hemofia Neoplasia Tumores gastrointestinales Tumores vasculares Parasitismo: Ancilostornosis. Coctidiosis. Pulgas, garapatas, piojo. Hemoncosis. Estrongiloss Deficiencia de vitamina K. rragias en nviltiples sitios 0 el inicio retardado de hemorragias en lugares de intervenci6n vascular indican problemas de coagulacién (véase el Capitulo 4), B. Resultados de laboratorio 1, El hematocrito inicialmente puede estar dentro del intervalo de referencia porque todos los componentes sanguineos (es decir, células y plasma) se pie den en igual proporcién. El animal puede entrar en shock hipovolémico si se pierde ripidamente més de un tercio del volumen sanguineo. La contraccién esplénica libera sangre esplénica con un alto valor hemato- crito (Het poralmente. El volumen sanguineo se restablece posteriormente por aporte de liquide intersticial empezando unas 2-3 horas después de iniciarse la hemorragia y 10%) a la circulacién, aumentando el valor hematocrito tem- desarrollindose durante 48 — 72 horas. Este movimiento de liquido causa dilucién de la masa de eritrocitos y genera signos laboratoriales de anemia (es decir: hematocrito, recnento de glébulos rojos y concentracién de hemo- globina disminuidos). También se puede observar hipoproteinemia (dismi- nuci6n de la concentracién de proteina plasmitica). 4. El niimero de plaquetas normalmente aumenta durante las primeras horas después de Ja hemorragia. Una trombocitosis persistente puede indicar pér~ didas continuas de sangre.CAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA Aproximadamente 3 horas después de la hemorragia se produce una leuco- citosis nentrofilica. Alas 48 — cién de eritrocitos (p.¢j., policromasia, reticulocitosis), llegando @ los niveles maximos aproximadamente a los 7 dias del inicio de la hemorragia. La hiper- plasia eritroide es evidente en los aspirados de médula dsea y precede a los cambios en la sangre La concentracién de proteina plasmética aumenta a los 2 -3 dias y vuelve a su nivel de referencia antes que se normalicen el hematocrito, el recuento de glabulos rojos y la concentracién de hemoglobina En el perro, después de un dnico episodio de hemorragia aguda, el hemo- grama en su globalidad volverd a los intervalos de referencia en 1-2 2 horas se hacen evidentes los signos de aumento de la produc- ema nas. Si se mantiene la reticulocitosis mis de 2 — 3 semanas, hay que sospe- char de sangrados continues. En el fallo primario de la médula ésea se pueden presentar trombocitopenia y una hemorragia posterior. En estos casos la anemia es no regenerativa, I. Caracteristicas de la pérdida de sangre crénica A. Hallazgos clinicos 2. La anemia se desarrolla lentamente y no hay hipovolemia. EI hematocrito puede llegar a valores bajos antes de que sean evidentes los signos clinicos de anemia, porque el inicio lento de la anemia permite adap- taciones fisioldgicas. B. Resultados de laboratorio 1 Hay una respuesta regenerativa pero normalmente no es tan intensa como en la pérdida de sangre aguda. Normalmente hay hipoproteinemia, Puede haber trombocitosis persistente. Con el tiempo pueden agotarse los depésitos de hierro y aparecer anemia por deficiencia de hierro, caracterizada por microcitosis e hipocromasia. IIL. Caracteristicas diferenciales de las anemias causadas por las hemorragias internas y externas A. La pérdida de sangre externa, incluyendo el sangrado gastrointestinal, impide la reu- tilizacién de ciertos componentes como el hierro y | proteina plasmitica. En el caso de hemorragias internas, estos se pueden reabsorber y reciclar. B. La hemorragia interna puede ser menos grave y mis marcadamente regenerativa. Después de una hemorragia interna, algunos eritrocitos son reabsorbidos por los vvasos linfiticos (autotransfusién), sobretodo cuando la hemorragia se localiza en las cavidades corporales. Bl resto de eritrocitos se lisan o son fagocitados, E] hierro y Jos aminoacidos del catabolismo de las protefnas se reciclan >PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA » CAPITULO 1. ERITROCITOS ANEMIA POR DESTRUCCION ACELERADA DE ERITROCITOS (ANEMIA HEMOLITICA) (TABLA 1.2.) I. Caracteristicas de la anemia hemolitica (Casos 2 y 3) A. Hallazgos clinicos 1. No hay signos clinicos de hemorragia 2, En la anemia hemolitica aguda, los signos clinicos relacionados con la gra vedad de la anemia pueden ser espectaculares porque los mecanismos com- pensadores se desarrollan mas lentamente, 3. En la anemia hemolitica aguda y grave se puede observar ictericia 4, Si hay una hemédlisis intravascular considerable se observari hemoglobinu- ria y hemoglobinemia (plasma rojo). La hemédlisis extravascular es mucho més frecuente que la hemélisis intra~ vascular. B. Resultados de laboratorio 1, Los recuentos de reticulocites son mis altos en las anemias hemoliticas que en las anemias hemorrigicas externas, El hierro procedente de los eritroci- tos lisados esta mas disponible para la eritropoyesis que el hierro almacena~ do o la hemosiderina. Cuando hay una pérdida externa de sangre que con- tiene hierro, hay que movilizar las reservas de hierro corporales para el incremento de la eritropoyesis, retrasindose la regeneracion. 2. La concentracién de proteina plasmatica esta dentro de su intervalo de refe- rencia o aumentada (hiperproteinemia). En la hemélisis intravascular puede haber hemoglobinemia, dando lugar a hipercromasia artificial (aumento de HCM y CHCM) e hiperproteinemia. 3. Puede existir leucocitosis neutrofilica y monocitosis. 4. Podemos encontrar signos de degradacién de la hemoglobina como hiper~ bilirubinemia y hemoglobinuria) 5. La morfologia anormal de los eritracitos (p. ¢j. cuerpos de Heinz, parisitos eritrocitarios, esferocitos © poiquilocitos) (Lamina 1.2.) nos puede indicar el mecanismo de hemélisis Il. Diferenciacién de las causas de anemia hemolitica Identificar el lugar y mecanismo de destruccién de los eritrocitos nos aproxima al diag- nostico de las anemias hemoliticas. La hemélisis puede ocurrir fuera de los guincos después de la fagocitosis de los eritrocitos por macrOfagos (hemilisis extravas- cular), 0 bien dentro de los vasos sanguineos (hemélisis intravascular). La hemélisis puede darse a la vez intra y extravascular; aunque normalmente predomina una de ellas, A. Hemdlisis extra sos san cular (fagocitosis) (Caso 2). Los eritrocitos son secuestrados en el higado o el bazo, donde son fagocitados o lisados procediéndose, en el lugar donde se destruyen, a la catabolizacién de la hemoglobina. 1, Mecanismos de hemélisis extravascular: a. Mediada por anticuerpos y/o C3b (Caso 2)CAPITULO 1 ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA Bc PaO Sea eRRire oe} 37 Hemélisis intravascular* Bacteria: Clostridium hemolyticum Cl nowy Cl perfingens E coli (sindrome hemoltica urémieo) Leptospira spo. Parasites de los glébulos rojo Babesia spp. Plantas y productos quimicos: Oxidantes: Acetarinofeno, Benzocaine Brassica spp. Deficiencia de cobre, molibdeno. Cebollas. Fenotiacina Fenazopiidina, Propilengiicol Ace rojo. Césped. Vitarina K. Cefalosporinas. Ricno. Venenos de serpientes Zine Inmuno-mediada: ‘Anemia heraltica autoinrnune (caballos, bovinos). Enfermedad hemollica del neonato (soeritolsis neonatal. Tiansfusiones incompatibles Hipoosmolaridad: Deficiencia de selenio (bovine). Hemogibinura fia Fiuidos hipoténicos. Intoxicacién por agua, Fragmentacién: Sindrome de la vena cava Hipofosfateria: Hiperalimentacion, Hemoglobinuria posparto, Deficiencia de C-6-PD. Deficiencia de GSH (glutation reducido). Fallo hepético (caballo). Deficiencia de fosfofructoquinasa (pemros) Hemédlisis extravascular (fagocitica) Parasitos de los globulos rojos: Anaplasma spp. Gtawxz00n spp. Epenythrozoon (Mycoplasma) spp. Hemobartonella (Mycoplasma) spp. Theileria spp. Trypanosoma spp. Inmmuno-mediada: Anemia hemoltice autoinmune (Petros, gatos). Virus de la anemia infecciosa equina, Ehichio spp. Virus de lz leucemia felina, Lupus etitematoso. Hemangiosarcoma, Neoplasia hematopoyética Peniciina Parasitos de los glébulos rojos. Sarcocysts spp. Defectos intrinsecos de los ertrocitos: Porfiia eritroctica, Estomatocistosis herecitara Deficiencia de pirwato quinasa (perros). Fragmentaci: Coagulacién intrevascular diserninade, Gusanos del corexén (dirofilaa). Hemangiosarcoma. Vasculitis Sindrome hemofagoctico. Hiperesplenismo. Histiocistosis maligna de hemdlss predominant de as suaciones de esa tbl een ambos componentesinvavasculrfagoctice por lo que se han ciiado sag el po38 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS (1) El anticuerpo se une aun antigeno de la membrana eritrocitaria 0 a otro antigeno (incluyendo haptenos) fuertemente adsorbidos a la membrana del eritrocito, Los complejos antigeno-anticuerpo no eri trocitarios pueden estar adsorbidos de forma no especifica a la mem- brana celular, Los antigenos de membrana que normalmente reco- nocen los anticuerpos son las glicosporinas, banda 3, y la espectrina. El C3b esta unido a la membrana del eritrocito por una reaccion antigeno-anticuerpo. Se pueden unir inmunocomplejos adsorbidos a C3b y después eluirse de la célula, dejando al C3b sdlo en la mem- brana. El eritrocito es un mero espectador, pero queda marcado para su posterior eliminacién fagocitica (3) Los macréfagos tienen receptores para los componentes Fc de los anticuerpos y el C3b. Estos receptores facilitan el reconocimiento y unin de los macréfagos a la membrana del eritrocito que est recu- bierta con anticuerpos y/o C3b. Los eritrocitos afectados son fago- citados completamente o parcialmente. Se forman esferocitos a causa de la fagocitosis parcial, con el consiguiente cierre de la membrana del eritrocito. Los esferocitos son mis pequefios, esféricos y sin pali dez central porque se elimina una mayor cantidad de membrana que de contenido celular (Lamina 1.2.) (4) Cuando los eritrocitos, y menos frecuentemente k troides, son destruidos por una respuesta de hipersensibilidad de Tipo II, las anemias hemoliticas inmuno-mediadas pueden estar causadas s precursores eri- por los siguientes mecanismos: (a) Mecanismos desconocidos: se denominan anemias hemoliticas autoinmunes idiopaticas (AHA) (b) Agentes infecciosos: como el VLFe, Virus EIA, Ehilichia spp., 0 Hemobartonella felis (Mycoplasina haesnofelis: i) Estos agentes pueden alterar la membrana del eritrocito, dejando expuestos antigenos escondidos contra los que el huésped produce anticuerpos, ii) Algunos patégenos forman inmunocomplejos que se adsor- ben a la célula y se unen al complemento (Cb). iii) Se puede formar anticuerpos de reaccién cruzada como res puesta a una infeccién. (6) Férmacos: como la penicilina, se adsorben a la membrana del eri- trocito y actéian como haptenos generando anticuerpos anti-fir- maco. (@) Alteraciones del sistema inmunitario: i) Trastornos de la fiancién de las célulasT pueden alterar la regulaci6n inmunitaria. Las célulasT de perros con AHAI 0 hermanos de perros con AHAI, presentan un grado de reac- tividad mayor.CAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA 39 ii) Se ha observado anemia positiva a la prueba de Coombs en algunos casos de malignidad linfoide, enfermedades por pro- 102008, enfermedades por rickettsias, H. felis (Mycoplasma hae~ anofelis), VIF, PIF y otras enfermedades inflamatorias cronicas. (©) También se puede presentar anemia inmunomediada como sin- drome paraneoplisico en linfomas y mieloma de células plasmi- ticas (S) La prueba directa de la antiglobulina o prueba de Coombs detecta las IgG activas a temperatura ambiente exclusivamente; las IgG con C3, C3 solo;y raramente las IgM activas en fio en la membrana del critrocito. Las IgM frias reactivas pueden unirse al complemento en ausencia de IgG. Esta enfermedad de Ja aglutinina fria se asocia fre- cuentemente con la autoaglutinacién, hemélisis intravascular, inicio agudo y signos clinicos graves. Una nueva prueba mis sensible, la prucba directa de la antiglobulina unida a enzimas (DELAT) ha iden- tificado miiltiples tipos de inmunoglobulinas (IgG, IgM, IgA) y com- ponentes del complemento (C3) en la superficie de la membrana del eritrocito. Puede darse un efecto sinérgico entre los tipos de anti- cuerpos y el complemento, (6) Las IgM activas en fifo algunas veces se unen al compemento C9; al activarse el complejo de ataque de membrana se produce una hemé- lisis intravascular grave (7) Las autoaglutininas frias (crioautoaglutininas) que se unen ala mem- brana del eritrocito a menos de 10 — 15°C normalmente no son importantes y se encuentran en muestras de sangre de muchos ani- males sanos Deformabilidad del eritrocito disminuida: (1) Los cambios en la membrana del eritrocito, el aumento de la visco- sidad interna o disminucion de la relacién entre la superficie y el yolumen, predisponen a la eliminacién precoz de los eritrocitos afec- tados, Estos eritrocitos menos deformables son secuestrados en el bazo y fagocitados por macrofagos. (2) Ejemplos de eritrocitos con la deformabilidad disminuida (Lamina 1.2): (a) Esquistocitos de la anemia microangiopitica. (b) Esferocitos de la anemia inmunomediada () Eritrocitos parasitados. (d) Excentrocitos o eritrocitos con cuerpos de Heinz. Reduccion de la glucolisis y contenido de ATP del eritrocito (1) Los eritrocitos afectados tienen predisposicién a ser climinados de la circulacién por los macrofagos esplénices. (2) Con el envejecimiento, es normal que aparezca una disminucién de la glucoliss.PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS (3) En las anemias por deficiencia de piruvato quinasa y por deficiencia de fosfofructoquinasa hereditarias, la reducci6n esti acelerada. d. Aumento de la actividad fagocitaria de los macréfagos: (1) Los eritrocitos normales pueden ser fagocitados cuando hay activi- dad fagocitica excesiva de los macréfagos. 2) Blaumento de la actividad fagocitaria se asocia a las condiciones que causan esplenomegalia. La esplenomegalia favorece el secuestro exce- sivo de eritrocitos y su exposicidn a los macrfagos. (3) Esta situacién, en humanos, se denomina hiperesplenismo. (4) También hay aumento de la actividad fagocitaria de los macr6fagos en el sindrome hemofagocitico y la histiocitosis maligna, dando lugar a citopenias. 2. Caracteristicas clinicas y de laboratorio de la hemélisis extravascular (fago- citica): a. El curso clinico de la enfermedad normalmente es erénico con wn ini- cio insidioso. b. Hay una respuesta regenerativa asociada a una concentracién de protei~ na plasmética normal o aumentada c_No hay hemoglobinemia ni hemoglobinuria. d. Hay hiperbilirubinemia si el nivel de hemélisis supera a la captacién, jugacién y excrecién de bilirrubina por parte del higado. La bilirrubina no conjugada normalmente predomina en los primeros estadios de la enfermedad, mientras que al final destaca la bilirrubina conjugada. ©. En los casos de bajo grado de hemélisis, la respuesta de Ja médula 6sea puede compensar la destruccién de eritrocitos. En estos casos, el hema- toctito se mantiene en el intervalo de referencia. Esta situacién se deno~ mina “anemia hemolitica compensada” f, La neutrofilia, monocitosis y trombocitopenia generalmente acompaiian a la hemolisis extravascular. g. Elaumento de actividad de los macréfagos y la hematopoyesis extrame- dular pueden dar lugar a esplenomegalia. h. En muchas anemias que principalmente no son hemoliticas, hay un bajo grado de hemélisis extravascular (p. ¢j. anemia de la enfermedad renal cr6nica, anemia por carencia de hierro). Nos referimos a esto como el “componente hemolitico” de estos otros tipos de anemia 3. Ayudas a la identificacién de la causa especifica de la hemélisis extravascular a, El historial de una raza en particular y/o de otros miembros de la cama- da afectados puede indicar causas hereditarias de la hemolisis. Algunos ejemplos son: (1) Deficiencia de fosfofructoquinasa de los perros de raza Cocker Spaniel, Springer Spaniel Inglés y razas cruzadas. (2) Deficiencia de piruvato quinasa en perros (Basenji, Beagle, Chihuahua, ‘Teckel, Carlino, Caniche Miniatura, West Higland White Terrier yCAPITULO 1, ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA | 41 Cairn Terrier) y gatos (Abisinio, Somali, Doméstico de pelo corto) (3) Posible predisposicién hereditaria a anemia hemolitica que puede existir en otras razas de perros como Border Collie, Cocker Spaniel, Springer Spaniel Inglés, Pastor Aleman, Setter Irlandés, Bobtail, Caniche, Whippet. b. Otros hallazgos de laboratorio: (1) Prueba directa de la antiglobulina (de Coombs) positiva a una inmu- noglobulina especifica 0 Cy en eritrocites de pacientes con anemia inmunomediada 0 prueba DELAT positiva aunque la prueba direc- ta de la antiglobulina sea negativa. (2) En diversas anemias se encuentra una morfologia anormal de los eri- trocitos (Lamina 1.2.). Pardsitos eritrocitarios, esferocitos, esquistoci- tos y queratocitos indican una excesiva fagocitosis de los eritrocitos. B. Hemélisis intravascular (Caso 3) Los eritrocitos son destruidos en el torrente sanguinco, liberando hemoglobina al plas- ma, la cual seri eliminada por el higado o excretada por los rifiones. 1. Mecanismos de hemédlisis intravascular. La membrana del eritrocito debe estar muy alterada para permitir la salida de hemoglobina al plasma. La mayoria de los mecanismos de hemélisis intravascular son defectos extrinsecos o extra~ corpusculares (es decir, el eritrocito inicialmente es normal) a, Lisis mediada por el complemento: (1) El complemento (C,) es depositado sobre la superficie de la mem~ brana eritrocitaria por reacciones antigeno-anticuerpo superficiales. Si el complemento es activado a Cy, se forma el complejo de ataque de membrana produciendo alteraciones de membrana suficiente- mente grandes para que se escape la hemoglobina, (2) La lisis mediada por el complemento se observa con mis frecuencia en anemias inmunomediadas cuando esti involucrada la IgM. Las IgM son muy efectivas para fijar al complemento. Por el contrario, las IgG fijan poco el complemento pero pueden causar ocasional- mente lisis mediada por el complement. (3) La lisis del complemento mediada por IgM es el mecanismo de la mayoria de casos de enfermedad hemolitica de los potros recién naci- dos (isoeritrolisis neonatal) y de las reacciones a transfusions (en gatos y grandes animales). Un mecanismo similar que esti implicada la IgM puede darse,a veces, en la anemia hemolitica autoinmune, (4) La fijacién del complemento a C; estimula la fagocitosis pero no la lisis intravascular. b. Daiio fisico: (1) La akteracién traumitica de la membrana del eritrocito se puede dar por el efecto de cizalla de las hebras de fibrina intravasculares. (2) Este tipo de anemia se denomina anemia microangiopitica, porque Ja fibrina normalmente se forma en los vasos sanguineos pequeiios. INSTTITA UNIVERSHTARIN |42 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS c d. (3) Los ejemplos de anemia microangiopitica incluyen coagulacién intra~ vascular diseminada, vasculitis, hemangiosarcoma y enfermedades por gusanos cardiacos, (4) Los esquistocitos son eritrocitos fragmentados, las membranas de los cuales han sido alteradas traumiticamente (Lamina 1.2.). Su presen= cia indica cizallamiento de la membrana de los eritrocitos y presen- cia de anemia microangiopitica. Daiios por oxidacién (Caso 3) (1) Los oxidantes afectan al eritrocito de tres formas. (a) Desnaturalizacién de la hemoglobina con formacién de cuerpos de Heinz, (b) Oxidacién y unién cruzada de proteinas de la membrana con formacién de excentrocitos (Q) Oxidacién del hierro (Fe2+) de la hemoglobina con la forma- cién de metahemoglobina (Fe)*). Esto interfiere el transporte de oxigeno pero no causa anemia. 2) La formacién de cuerpos de Heinz y la oxidacién de la membrana celular pueden afectar a la célula lo suficiente como para permitir la salida de hemoglobina citoplasmatica (3) Sino se produce lisis intravascular de estas células alteradas, los fago- citos las eliminan precozmente de la circulacién, (4) Eleritrocito esta protegido de la exposicién a agentes oxidantes por dos vias mayoritarias: (a) El glutation reducido, que neutraliza a los oxidantes, se produce y mantiene en estado reducido por la via de Ja pentosa fosfaco (hexosa monofosfato). La deficiencia de enzimas ¢ intermedia rios (p. ¢j. glucosa-6-fosfato deshidrogenada) de esta via puede dar lugar, con la presencia de demasiados oxidantes exdgenos, a oxidacién de la membrana y formacién de cuerpos de Heinz (b) El hierro se mantiene en estado reducido por la metahemoglo- bina reductasa; se minimiza el acimulo de metahemoglobina. La deficiencia de metahemoglobina reductasa se ha descrito en perros y caballo, (5) En la mayoria de los casos, el agente oxidante proviene de la dieta 0 de farmacos. El oxidante, o sus intermediarios metabélicos, oxidan directamente o interfieren en la formacién del glutation reducide. (©) Los cuerpos de Heinz o los excentrocites indican daiios oxidativos (Lamina 1.2.) Lisis osmética: (1) La hemélisis puede estar relacionada con la hipofosfatemia. La diu- resis osmética en la diabetes mellitus puede dar lugar a disminucién del fosfato corporal aunque la concentracién de fosfato sérico puede estar dentro del intervalo de referencia,CAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA w 43 (2) Alveraciones de Ja membrana insuficientes para permitir la pérdida de hemoglobina, pueden alterar la permeabilidad hasta un grado en que entre una cantidad excesiva de agua al interior de la célula, que normalmente es hipert6nico, dando lugar a lisis celular. 3) Los fluidos intravenosos hipoténicos causan lisis osmética. * (4) La hemoglobinuria fila de los bovinos parece que es debida a este mecanismo. (8) Muchas de las causas enumeradas como hemélisis extravascular (Tabla 1.2.) pueden alterar la membrana de algunas céhulas hasta el grado en que aparezca lisis osmética antes que la fagocitosis €. Alteraciones de la membrana por otros mecanismos (1) Elricino (contenido en Ja semilla de la planta) causa directamente lisis de la membrana. (2) Los venenos de serpiente tienen propiedades liticas. (3) Toxinas bacterianas, como la fosfolipasa del Clostridium novyi, atacan directamente a los lipidos de la membrana. (4) La Babesia spp. se multiplica en el eritrocito y rompe la membrana para salir de la eélula, £ Las causas de hemélisis intravascular no lisan a todos los eritrocitos afec- tados; algunas células alteradas se mantienen en la circulacién y son pos- teriormente eliminadas por fagocitosis Caracteristicas clinicas y de Iaboratorio de la anemia hemolitica intravascular: a. La hemélisis intravascular generalmente da lugar a una enfermedad sobre- aguda o aguda. b. La anamnesis puede revelar la exposicién a firmacos o plantas que puc~ den causarla, transfusiones recientes de sangre incompatible o ingestion reciente de calostro. c. Hay una respuesta regenerativa que puede no ser visible en los primeros momentos, porque se necesitan 2 ~3 dias antes de que se manifieste una reticulocitosis, d. La hemoglobinemia (hemoglobina libre en el plasma) es la caracteristica principal de la hembdlisis intravascular. La hemoglobinemia se detecta nor- mualmente por: (1) Alteracion cromitica rojiza del plasma. (2) Aumento de la CHCM y la HCM (3) Disminucién de las concentraciones séricas de haptoglobina y hemo- ¢. Puede aparecer hemoglobinuria durante las 12-24 horas posteriores a la hemélisis sila concentracién de hemoglobina libre satura a la haptoglo-~ bina y hemopexina disponibles y la hemoglobina que pasa el filtro glo- merular, sobrepasa la capacidad de absorcién y metabolizacion de las célu- las epiteliales de los tibulos renales, £. Se presenta hemosiderinuria si las células epiteliales de los tiibulos rena- NF | | QIYUISHIAINA OULLii5'an PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS les absorben y metabolizan suficiente hemoglobina para formar cantida- des detectables de hemosiderina § Hiperbilirrubinemia (1) La bilirrubina no se forma hasta 8 ~ 10 horas después del inicio de Ja hemélisis. (2) La hiperbilirrubinemia se dard si la formacién de bilirrubina es de tal magnitud que excede a la capacidad del higado para eliminarla del plasma, conjugarla y excretarla a la bilis (3) Al principio de la enfermedad predomina la forma no conjugada de a bilirrubina. La bilirrubina conjugada aumenta con el tiempo y en ocasiones puede llegar a ser la forma mayoritaria. La hiperbilirrubi- nemia conjugada se acompaiari de bilirrubinuria (véanse los Capitulos 7 y 9) h. Otros hallazgos de laboratorio pueden ser: esquistocitos, queratocitos, cuerpos de Heinz, excentrocitos, pardsitos eritrocitarios (Lamina 1.2.), prueba directa de la antiglobulina (de Coombs) positiva en los eritroci- tos del paciente o titulo de anticuerpos o cultivo de organismos poten- cialmente etiolégicos. ANEMIA POR ERITROPOYESIS REDUCIDA O DEFECTUOSA (TABLA 1.3.) Las anemias causadas por una disminucién o defectos de la eritropoyesis son del tipo no regenerativo. Se caracterizan por tener una médula ésea anormal que no puede mantener una eritropoyesis efectiva. El curso clinico es normalmente largo y el inicio insidioso, En medicina veterinaria se observan con frecuencia anemias no regenerativas, como la ane- mia de la enfermedad inflamatoria. I. Consideraciones generales A. Mecanismos i. 2 Para que la capacidad de la médula ésea para mantener la masa eritrocitica sea adecuada, se requieren los siguientes factores: a. Células precursoras (es decir, células madre multi y unipotenciales) b. Nutrientes (p. ej. hierro y vitaminas del grupo B). c. Estimulacién (p. ej. Epo, IL-3, G-CSE GM-CSF). d. Microambiente, Fallo primario y secundario de la médula ésea: a. E] fallo primario de la médula ésea, por una enfermedad interna, da como resultado una produccién inadecuada de céhilas madre y progenitoras. b, El fallo secundario de la médula sea se produce por causas externas a la médula, como carencias de nutrientes 0 factores de crecimiento (Epo, factores estimulantes de colonia o citoquiinas).CAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA Pome CeCe Oa Eritropoyesis reducida ‘Anemia por trastomos crénicos: Inflamaci6n erénivca, Neoplasia, Dano citotéxico de la médula dsea: Helecho comin Farmacos anticancerigenos citot6xicos. Estrogenos. Furazolidona. Fenilbutazona Radiacion Carencia de eritropoyesis: Enfermedad renal crénica, Hipoadrenocorticisme. Hipoandrogenismo. Hipopituitarismo. Hipotiraidismo. Inmuno-mediado: Aplasia pura de glébulos rojo, Infecciones: Enlchia spp. Vitus de la leucemia felina Virus de la panleucopenia felina Parvovirus. Ticostrongilios (no chupando sangre, tichuris) Mieloptsis: Leucemia linfoctica, Neoplasia metastatica Mielofibrosis Tiastornos mieloproliferativos, Osteopetrosis, osteoclerasis. Eritropoyesis defectuosa Maduracion anormal: Disertropoyesis congénita en bovinos Hereford. Diseritropoyesis en pettos Springer Spaniel Inglés. Miclosis ertrémica 0 evitrernia aguda: Ertroleucemia, Macrocistosis del perro Caniche. Sindrome mielocisplasic. Trastornos de la sintesis del hemo: Toxicidad por cloramfenical Deficiencia de cobre. Deficiencia de hiert. Envenenamiento por plomo. Enyenenamiento por molibdeno. Deficiencia de piridoxina, Trastornas de la sintesis de dcido nudeico: Deficiencia 0 malabsorcién de Bia, Deficiencia de Acido folco | 45 | 3. El fallo de la médula ésea puede ser selectivo para las series eritroides (p. ¢j. aplasia pura de células rojas) 0 puede afe: a los granulocitos y/o a los mega~ cariocitos productores de plaquetas conduciendo a bicitopenia © pancitope- nia. En la pancitopenia (anemia aplisica), hay una anemia no regenerativa simultinea a una granulocitopenia y wombocitopenia B. Respuesta de la médula ésea 1. Cuando el niimero de células precursoras 0 Ja estimulacién eritropoyética son insuficientes, Ja médula eritroide es entre normocelular ¢ hipocelular Las anormalidades en la maduraci6n se asocian con una médula hipercelular y una critropoyesis ineficaz, es decir, incapacidad de los eritrocitos produci- dos para madurar correctamente o para ser liberados a Ja sangre. Las desvia~ aunsicusen “946 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS ciones de la maduracién son especialmente importantes en las deficiencias nuutricionales, sindrome miclodisplésico (SMD), leucemias y diserotropoyesis hereditaria. Normalmente se observan células anormales (como microcitos, mactocitos o glébulos rojos nucleados) en las extensiones tefiidas de sangre. 3. Pueden existir todos los grados de fallo de la médula ésea, desde una res~ puesta subéptima de Ja médula eritroide a una hemorragia o hemélisis hasta Ja aplasia absoluta. II. Diferenciacién de las anemias causadas por una eritropoyesis disminuida o defectuosa Esta aproximacién prictica al diagnéstico de las anemias no regenerativas se basa en la morfologia eritrocitaria, niimero de neutréfilos y plaquetas en sangre y la composicin celular de la médula ésea. Estas anemias se pueden dividir en los patrones hematolégi- cos siguientes: A. Anemia normocitica y normocrémica con recuentos de plaquetas y neutréfilos nor- males o elevados y relacién M:E aumentada a causa de una médula eritroide hipo- celular (esto es lo previsible aunque no siempre se aprecia de forma clara). Estos tipos generales de anemia incluyen a los siguientes: 1. Anemia por carencia de eritropoyetina causada por ciertas enfermedades: a. Enfermedad renal erdnica (Casos 15 y 19): (J) El grado de anemia es mis 0 menos proporcional a la gravedad de la uremia, 2 Causas del desarrollo de la anemia: (@) Deficiencia de eritropoyetina causada por la destruccién de las células intersticiales peritubulares secretores de Epo. (b) Hemélisis causada por factores del plasma urémico, (6) Hemorragia gastrointestinal por funcién plaquetaria anormal y lesiones vasculares. (d) Inhibidores de la eritropoyesis en el plasma urémico, b. Endocrinopatias (p. ej. hipoadrenocorticismo, hipoandrogenismo y hipo- pituitarismo): (1) Algunas de estas hormonas (p. ¢j. andrégenos) pueden potenciar la accion de la eritropoyetina, (2) En otros casos el mecanismo exacto de la anemia es desconocido, 2. Anemia de la enfermedad inflamatoria (AED) (Casos 7, 8, 10 y 11): a. La AEI (anemia de la enfermedad crénica, anemia de los trastornos cr6- nicos) se produce en trastornos infecciosos, inflamatorios o neoplésicos crénicos. La anemia se inicia en 3 -10 dias. b. La anemia de la enfermedad inflamatoria esta mediada por diversas cito- quinas involucradas en Jos procesos inflamatorios 0 neoplisicos, inclu- yendo el factor de necrosis tumoral (ENT), IL-1et, IL-1 e interferén-y. c. En la patogénesis de la anemia intervienen factores como la disminucién de la liberacién de eritropoyetina, la disminuci6n de la respuesta de laCAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA | 47 médula a Ja eritropoyetina y la merma de disponibilidad de hierro para el eritron, Se reduce la vida media del eritrocito. e. Hallazgos de laboratorio en la anemia de la enfermedad inflamatoria: (1) Concentracién sérica de hierro disminuida © normal. (2) Capacidad total de ligamiento del hierro disminuida,o normal. (3) Concentracién de ferritina sérica normal o aumentada (A) Reservas de hierro de los macréfagos de la médula ésea normales 0 aumentadas (8) Anemia ligera o moderada (valor hematocrit en valores de 20 — 30%) que normalmente no aumenta. (©) Indices eritrocitarios normociticos y normocrémicos. (7) Ratamente encontramos microcitosis ¢ hipocromia. El secuestro de hicrro debe ser muy prolongado para llegar a causar micracitosis € hipocromia en la AEI. (8) Concentraciones séricas de cobre y zine aumentadas, (9) Concentracién de eritropoyetina sérica variable. £. Los signos de enfermedad inflamatoria o neoplisica frecuentemente pre- dominan en el cuadro clinico, enmascarando los signos de anemia g. Sihay una alivio de la enfermedad primaria, le seguiré una recuperacién de la AEI 3, Anemia no regenerativa asociada al virus de la leucemia felina (FeLV) a. El virus de la leucemia felina destruye selectivamente a las células madre y progenitoras de la serie eritroide. b. La anemia puede ser macrocitica debido a la maduraci6n asincrénica. 4. Aplasia pura de células rojas (APCR): a, La anemia se caracteriza por una pérdida selectiva de los precursores eri- troides en la médula ésea. — b. LaAPCR parece ser inmunomediada porque puede responder a un tra~ < tamiento con corticosteroides y/o firmacos linfocitotéxicos. o cc. Algunos casos de aplasia pura de células rojas han sido positivos a la prue~ Ww ba de Coombs y se han denominado como “anemia hemolitica autoin— e mune no regenerativa”’ ¢ d. Raramente se observa una APCR secundaria a un linfoma. 5. Mecanismos desconocidos de anemia no regenerativa: a. Infeccién por tricostrongilios (que no chupan sangre) en bovino y ovino. b. Enfermedad hepitica c. Deficiencia de vitamina E: (1) En cerdos la deficiencia de vitamina E en la dieta puede producit una anemia no regenerativa. (2) La médula eritroide es hiperplisica con indicios de diseritropoyesis. B. Anemia normocitica y normocrémica con neutropenia (excepto en ¢l caso de tras- tornos micloproliferativos) y/o trombocitopenia, relacién M:E variable. Puede haber48 | PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS hipocelularidad generalizada de la médula 6sea y/o proliferacién de células anor males, Estos tipos de anemias incluye 1. Anemia aplisica o pancitopenia (Caso 4) a. b. Esta es una enfermedad de la célula madre multipotencial 0 del micro ambiente de la médula ésea que conduce a una pancitopenia y a una médula 6sea acelulada y grasa Hay deficiencias concomitantes de eritropoyesis, granulopoyesis y trom- bopoyesis. Normalmente la leucopenia y trombocitopenia preceden al desarrollo de la anemia a causa del periodo de vida corto de los leucoci- tos y las plaquetas. Causas de anemia aplisica: (1) Reacciones predecibles o idiosincriticas a firmacos que pueden variar segiin las especies (p. ¢j. Toxicidad tardia a estrogenos en perros, toxi- cidad a cloranfenicol en gatos, fenilbutazona, trimetoprim-sulfadia~ zina, albendazol) (2) Toxicidad por exposicién a plantas y a productos quimicos (p. ¢j.hele~ cho comin en rumiantes y caballos). (3) Inradiacién, (4) Células T citotéxicas o anticuerpos (pueden estar involucrados en algunas anemias aplisicas en humana) (5) Agentes infecciosos (p. ej. FeLV en gatos, Erlichiosis en perros) 2. Anemia mielotisica: En la anemia miclotisica, la médula 6sea es remplazada fisicamente por una proliferacion anormal de células del estroma, inflamatorias o neo- plisicas. Algunos ejemplos de enfermedades que conducen a anemia mie- lotisica son: (1) Trastornos mieloproliferativos (p. ej. Neoplasias malignas hematopo- yéticas, leucemias) (2) Miclofibrosis. (3) Osteoclerosis. (4) Osteomielitis granulomatosa difusa, (5) Cincer metastitico, En segin que condiciones, los aspirados de médula ésea pueden propor cionar escasas células (p. ej. mielofibrosis) o demasiadas (trastornos mie- Joproliferatives). La biopsia central de la médula es el mejor método para diagnosticar reacciones del estroma. ; Las reacciones leucoeritroblisticas (metarubricitosis sin reticulocitosis y una neutrofilia con desviacién a la izquierda en ausencia de inflamabién) puede producirse a causa de alteraciones de la arquitectura de la médula con liberacién desordenada de células precursoras mieloides y eritroides. En los primeros estadios de la anemia mielotisica se puede observar una respuesta regenerativa ligera causada por focos eritroides aislados, Se encuentran dacriocitos (poiquilocitos piriformes) en frotis sanguine-CAPITULO 1, ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA 49 os humanos, pero no se han encontrado de forma fiable en frotis de san gre de animales. £, La anemia mielotisica causada por trastornos mieloproliferativos suele presentar leucocitosis y un cuadro sanguineo leucémico. 3, Anemias no regenerativas causadas por agentes infecciosos: a. La erlichiosis aguda se puede presentar como una pancitopenia. En ka er nica, slo podemos encontrar una ligera trombocitopenia en el hemo- grama. b. La infeccién por virus de la leucemia felina puede causar, ocasionalmen- te, anemia y leucopenia que den lugar a pancitopenia. Las anemias indu- cidas por virus de la leucemia felina pueden ser macrociticas. ¢. Las infecciones por parvovirus en perros y gatos destruyen las células hematopoyéticas, linfoides y las células epiteliales de la cripta gastroin— testinal. Frecuentemente se encuentra neutropenia en el leucograma. A pesar de la destruccién de las eélulas hematopoyéticas por el parvovirus, Ja anemia se encuentra normalmente enmascarada por la policitemia rela tiva causada por la deshidratacién secundaria a los vomitos, diarrea y falta de ingesta de fluidos. d. La parvovirosis canina, si tiene una duracién larga, puede producir neu- tropenia y anemia no regenerativa concurrentes. C. Anemia microcitica ¢ hipocrémica con recuentos variables de neutrofilos y pla~ BIBLIOTECA | v quetas y normalmente médula hipercelular con relacién ME variable. Las siguien tes son causas de este tipo de anemia: Deficiencia de hierro (Caso 5): a. La causa mis comiin de deficiencia de hierro es la hemorragia crénica, por lo general con pérdida externa de sangre. b. Los animales jovenes de crecimiento répido que tienen una dieta exclu- sivamente lictea, pueden tener una deficiencia dietética y transitoria de hierro que provoca una ligera anemia c, La anemia por deficiencia de hierro se asocia con una eritropoyesis inefi- caz y una hiperplasia de la médula en el inicio de la enfermedad. Al cro- nificarse, la médula dsea se vuelve hipoplisica y tanto la microcitosis como a hipocromia son més evidentes. d. Hallazgos de laboratorio en la anemia por deficiencia de hierro: (1) Disminucién de la concentracién sérica de hierro. (2) La capacidad total de ligamiento de hierro es variable, aunque esti frecuentemente dentro de su intervalo de referencia o aumentada, (3) Porcentaje de saturacién de transferrina bajo. (4) Disminucién o ausencia de almacenes de hierro en macréfagos de la médula. (8) Concentracién de ferritina sérica disminuida (6) Aumento de la protoporfirina eritrocitaria libre. () Mictocitosis. Se desartolla microcitosis porque no se alcanza la con-PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA * CAPITULO 1. ERITROCITOS centracién erftica de hemoglobina necesaria para detener la division celular y existen divisiones adicionales. La microcitosis a menudo pre- cede a la hipocromasia. (8) En la mayoria de especies hay hipocromasia, aunque puede no obser varse en el gato. (9) Poiquilocitos (p. ¢j. esquistocitos, queratocitos). Se piensa que son con- secugacia de la oxidacién de las protefnas de la membrana. (10)Médula ésea hipercelulada, al principio de la enfermedad, con un niimero desproporcionado de rubricitos y metarubricitos debido a las. divisiones celulares adicionales. 2. Deficiencia de piridoxina. Esta vitamina es un cofactor de la sintesis del hemo. La deficiencia de piridoxina da lugar a fallo en la utilizacién del hierro ya una anemia similar a la causada por falta de hierro. 3. Deficiencia de cobre. La ceruloplasmina y la hefaestina, que contienen cobre, son importantes en la absorcién y transporte de hierro entre el intestino, macro- fagos y transferrina. Por lo tanto, la deficiencia de cobre conduce a una defi- ciencia de hierro. 4. La diseritropoyesis en los perros de raza Springer Spaniel Inglés. Esta enfer- medad esti asociada con polimiopatia y enfermedad cardiaca y se caracteriza por una anemia microcitica y no regenerativa con metarrubricitosis y cambio displisico de las células eritroides nucleadas. 5. Hay mictocitosis sin anemia en razas de perro asidticas como Akita, Chow Chow, Shar Pei y Shiba Inu. También se ha descrito microcitosis en un perro con eliptocitosis hereditaria 6. En las anastomosis portosistémicas en el perro (Caso 13) es comin encontrar microcitosis con ligera anemia. Las alteraciones del metabolismo del hierto se presentan de forma similar a la anemia de la enfermedad inflamatoria, En casi Ja mitad de los perros afectados aparece una disminucién de la concentracion de hierro sérica y TIBC. Las concentraciones de ferritina sérica son normales © altas juntamente con los depdsitos tedibles de hierro de la médula y hepi- ticos. Un tercio de los gatos con anastomosis portosistémica presenta micro- citosis, pero no suele observarse anemia. 7. Los miembros de la familia Camelidae, incluyendo las llamas, tienen eritroci- tos elipticos. En la deficiencia de hierro, estos eritrocitos son microciticos y presentan areas de hipocromasia irregulares o excéntricas que representan la distribucién irregular de la hemoglobina en la célula. ‘ 8. Firmacos o productos quimicos, incluyendo el cloramfenicol y las intoxica~ ciones por plomo, pueden bloquear la sintesis del hemo. a D. Anemia macrocitica y normocitica con recuentos de neutr6filos y plaquetas variables. La relacién M:E normalmente es baja a causa de la médula eritroide hipercelular. Las causas de anemia macrocitica y normocrémica inclayen las siguientes: 1. Rumiantes que pastan en praderas deficientes en cobalto o ricas en molibdeno.UTO UNI LA PAZ BIBLIOTECA VERSITARIO CAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA 51 Deficiencias de vitamina By, y écido folico: a. Este tipo de anemia no se ha producido experimentalmente en anima- les, pero se han descrito anemias macrociticas que responden a estas vita~ minas (p. ¢j. perros de raza Schnauzer Gigante) En a médula ésea se observan precursores eritroides megaloblastoides. c. Se pueden observar neutréfilos aumentados ¢ hipersegmentados en el frotis sanguineo, . d. La médula 6sea hipercelular indica eritropoyesis ineficaz 3. Mielosis eritrémica o eritroleucemia (véase el Capitulo 3). 4. Diseritropoyesis congénita y alopecia progresiva de los bovinos Hereford des- cornados. Esta enfermedad se caracteriza por anemia macrocitica y no rege nerativa con eritropoyesis ineficaz. 5. Infeccién por virus de la leacemia felina, Los gatos pueden presentar una anemia macrocitica, aunque la médula eritroide normalmente es hipocelu- lar. 6. Macrocitosis de los perros Caniches. Esta enfermedad hereditaria es poco comtin. No hay ni anemia ni reticulocitosis, Los recuentos de eritrocitos est en el limite bajo del intervalo de referencia. POLICITEMIA La policitemia es un aumento del hematocrito, recuento de globules rojos y concen- tracién de hemoglobina. I. Policitemia falsa o relativa La masa total de glébulos rojos es normal. Las causas de policitemia relativa son: A. Deshidratacin (Casos 6,9, 18 y 24) 1. Una disminucién del volumen plasmitico causa un aumento relativo del valor hematocrito, recuento de gldbulos rojos, concentracién de hemo- globina y concentracién de proteina plasmatica 2. La determinacién de la deshidratacién se basa en el examen fisico y no en pruebas de laboratorio. 3. Mecanismos de policitemia relativa: a. Pérdida de agua causada por vomitos, diarrea, diuresis excesiva, pri- vacién de agua, transpiracion 0 deshidratacion febril. b. Pérdida interna de fluidos por incremento de la permeabilidad vas~ cular en caso de shock. c.Pérdida de fluidos por efuusién a las cavidades corporales 4. El valor hematocrito de animales enfermos puede fluctuar diariamente un 2~ 5% a causa de los cambios del estado de hidratacién del paciente. B. Redistribucién de eritrocitos 1. La excitacién da lugar a liberacién de epineftina y contraccién esplénica52 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS La contraccién esplénica envia a la cixculacién general sangre esplénica con un valor hematocrito alto (Het 0%). 2, Este efecto es frecuente en el caballo y el gato. Il. Policitemia absoluta Aumento de la masa total de glébulos rojos por incremento de la eritropoyesis. El volu- men plasmitico y la concentracién de proteina plasmatica estin dentro del intervalo de referencia. ‘A. La policitemia absoluta primaria (policitemia verdadera o eritrocitosis pri~ maria) es un trastorno mieloproliferativo de las células madre. La concentra cién de eritropoyetina esta dentro de su intervalo normal o disminuida, La PO, esti dentro de su intervalo de referencia, Ocasionalmente, acompafian a la eritrocitosis, trombocitosis y leucocitosis La policitemia absoluta secundaria esté causada por un aumento de la secre cién de Epo 1. Hay una secrecién compensatoria y apropiada de Epo durante la hipo- xia (baja PO,), que se da en las siguientes situaciones: a, Altitud elevada b, Enfermedad pulmonar crénica c. Anormalidades cardiacas con paso de sangre de derecha a izquierda, Hay secrecién de Epo inadecuada (PO, normal, no hay hipoxia), en algu- nos casos de hidroneftosis o quistes renales, tumores secretores de Epo (nefroma embrionario, carcinoma renal, leiomioma uterino, hemangio~ ma cerebelar, hepatoma, otros tumores endocrinos) y ciertas endocrino- patias (Caso 27) Los animales con policitemia grave pueden presentar convulsiones a causa del aumento de viscosidad de la sangre e isquemia del sistema nervioso central R BIBLIOGRAFIA Abboud CN, Lichtman MA: Structure of the bone ‘marrow. In Beutler E, Lichtman MA, Coller BS,Kipps Ty (eds): Williams Hematology, Sch ed, New York, McGraw-Hill, Inc, 1995, pp. 25-38. 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Los heterdfilos son los equivalentes en las aves de los neutréfilos de los mami feros, Todos los leucocitos participan en la defensa del organismo, aunque cada uno tiene fanciones independientes. Un perfil general de la hematopoyesis, incluyendo los leucoci- tos se presenta en el Capitulo 1, Figura 1.1. I. Neutréfilos y heteréfilos aviares A. Morfologia (Lamina 2.1.) 1, Los neutréfilos maduros de los mamiferos tienen miiltiples lobulaciones en el niicleo, separadas por constricciones (polimorfonucleares). Los heterdfilos aviares tienen menos lobulaciones nucleares pero poseen una importante gra- nulaci 2. Los granules son de dos tipos: a. Grénulos prim: 1) Los grinuilos primarios se tifien de color rojo pirpura con la tincién de Romanowsky pero en general no se tifien y no son visibles des- pués de la fase de desarrollo de promielocito. 1 citoplasmitica. rios © azurofilicos: 2) Su formacién se para pronto y a continuacién van siendo diluidos por las divisiones celulares, 3) Son lisosomuas y contienen elementos microbicidas (mieloperoxid: sa, isozima, defensinas y proteina inductora de permeabilidad bacte- riana) y enzimas (hidrolasas acidas, proteasas neutras, esterasa naftol AS-D cloroacetato y elastasa). 4) Los heterdfilos aviares carecen de actividad mieloperoxidasa signifi- cativa. BIBLIOTECA |56 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 2. LEUCOCITOS 5) Uluaestructuralmente, los granules primarios son mas grandes y mis electrodensos que los grinulos secundarios. b. Granulos secundarios o especificos: 1) Los grinulos secundarios de los neutréfilos no suelen ser visibles con la tincién de Romanowsky. 2) Los granulos secundarios de los heterdfilos aviares se ven de color rojo pilido, alargados y con bordes puntiagudos. 3) El contenido de los granules incluye elementos microbicidas (lactofe- trina, lisozima, catelicidinas) y enzimas (colagenasa, apolactoferrina, activador del plasminégeno) 4) La actividad de la fosfatasa alcalina (ALP) esta presente en los neutré~ filos de ganado vacuno sano y caballos; los neutréfilos de otros mami- feros domésticos y de pajaros carecen de actividad ALP. 5) Ultiaeseructuralmente, los grinulos secundarios son més electroliici- dos que los grinulos primarios. 3. Fases de maduracién de los neutrOfilos (Fig. 2.1.; véase también el Capitulo 1, Lamina 1.1) a, Mieloblasto: 1) El nticleo es de redondo a oval con cromatina dispersa y nucleolos. 2) El mieloblasto de tipo I carece de granulos visibles; el mieloblasto de tipo II puede tener algunos grénulos citoplasmiticos azurofilicos visibles (<15) b. Promiclocito (progranulocito): 1) El nticleo es de redondo a oval con cromatina dispersa; puede haber nucleolos © anillos nucleolares. ‘Mieloblasto Mielocito Mielocito Miclocto Metamielocito Banda Segmentado Figura 2.1, Seouencia de granulopoyestsCAPITULO 2. LEUCOCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA SOLU rR 57 2). Esta fase de desarrollo se caracteriza por Ja presencia de numerosos grinulos citoplasmiticos (azurofilicos) cc. Mielocito: 1) El ndcleo es oval con la cromatina un poco agregada; no se observan nucleolos 2) Los grinulos primarios (azurofilicos) pierden sus caracteristicas tipi- cas de tincién y no son visibles a partir de esta fase de maduracién. d. Metamielocito 1) El nicleo es grueso e indentado y con bordes redondeados 2) La cromatina esti miis agregada que en fases previas del desarrollo. e. Bandas: 1) Elnacleo tiene forma de U 0 de S y es de grosor uniforme, pero no tanto como el de los metamielocitos. 2) La cromatina esta mas agregada que la de los metamielocitos. f. Segmentado: 1) El nficleo esti dividido en 2-5 lébulos por constricciones. Los fila~ mentos entre segmentos nucleares, los cuales son habituales en los neutréfilos humanos, son raros en Jos neutréfilos y heteréfilos ani- males. La cromatina se encuentra agregada de forma muy densa. 2) Los neutréfilos segmentados equinos pueden tener membranas nucle ares afiladas y dentadas, y lébulos nucleares indistintos. 3) Elcitoplasma de los neutr6filos bovinos es rosa anaranjado con la tin- sn de Romanowsky. El citoplasma de los neutréfilos de otros mami- feros sucle ser incoloro, pero en ocasiones puede tener una muy leve granulacién rosada, 4) Los heterdfilos aviares poseen 2-3 lobulos nucleares y grinulos cito- plasmiticos de color rojo palido, en forma de aguja. B. Regulacién de la granulopoyesis GA | a n Durante una invasién microbiana u otta lesién de tejidos, se produce una demanda de neutrofilos, linfocitos T, macrofagos y células estromales que se activan y liberan factores de crecimiento entre los que se incluyen: a. Factores estimulantes de colonias (CSF) como el factor de células madre (SCF), CSF de granulocitos (CSF-G), y CSF de granulocitos/macréfa- gos (CSF-GM). b. Citoquinas, incluyendo linfoquinas ¢ interleuquinas (IL-3, IL-6 e TL-11), que estimuilan a las células endoteliales y a los fibroblastos para producir CSE Los CSF son glucoproteinas que actéan directamente sobre subpoblaciones hematopoyéticas en la médula 6sea, lo cual deriva en lo siguiente: a. Aumento de la proliferacién celular. b. Diferenciacién celular. c. Induccién y potenciaci6n de la funci6n celular, Funciones de otros mediadores de la respuesta inflamatoria: a. Estimular la liberaci6n de neutréfilos en la médula 6sea.PATOLOGIA, CLINICA VETERINARIA * CAPITULO 2. LEUCOCITOS 4. b. Promover la marginaci6n y adhesién de neutréfilos al endotelio de los tejidos afectados. ¢. Estimular la migracién de neutréfilos a través del endotelio al lugar de inflamacién, d._Inducir la quimiotaxis hacia el lugar de la lesién tisular ¢. Potenciar la fagocitosis y la actividad microbicida. El resultado final es un aumento en el ntimero de neutréfilos funcionales en el lugar de la lesién tisular. C. Funeién i v 3 Las fisnciones principales de los neutréfilos son la fagocitosis y la accion microbicida, Esta actividad se lleva a cabo eficazmente en los tejidos pero no en la sangre: a. Procesos metabélicamente activos para estas funciones: 1) Adherencia y migracién a través de la pared vascular. 2) Quimiotaxis, una respuesta motora hacia un atrayente (p. ej. C5a, pro- ductos bacterianos, metabolitos del Acido araquidénico) en el tejido. 3) Ingestién y desgranulaci6n. 4) Destruccién bacteriana, b. Estas funciones pueden verse comprometidas por deficiencias en varios componentes humorales o celulares, firmacos o productos bacterianos t6xicos, aumentando la susceptibilidad a enfermedades. Cuando se exponen a bacterias o a sus productos, los neutr6filos sufren una explosién respiratoria y secretan ciertas sustancias que pueden tener las siguientes fanciones: a. Digestién extracelular del fibrinégeno y de componentes del comple mento. b. Estimulacién de la produccién de mediadores inflamatorios. , Los neutdtiles también queden contribuir a grocesos gatolégicos de diver- sa naturaleza (p. e.. glomeruloneftitis por inmunocomplejos y artritis reu- matoide) mediante la liberacién de mediadores inflamatorios en los tejidos adyacentes. 4. Se han descrito alteraciones en la funcién de los neutréfilos en relacion a adherencia y quimiotaxis, fagocitosis y destruccion celular en animales. Estas alteraciones funcionales en los neutréfilos pueden predisponer a Jos anima- les afectados a enfermedades 5, Ademis de su actividad bactericida, los neutréfilos pueden destruir o inac~ tivar algunos hongos, levaduras, algas, parisitos y virus 6. Otras fanciones de los neutréfilos incluyen climinacién de células transfor- D. Pro ‘madas, amplificacién y modulacién de la inflamaci6n aguda y un papel menor en la regulacion de la granulopoyesis, duecién 1. La produecién y maduracion de los neutréfilos tiene lugar en la médula ésea, Un proceso similar ocurre con los heterétfilos.CAPITULO 2. LEUCOCITOS + PATOLOGIa CLINICA VETERINARIA 59 2. En la médula 6sea los neutréfilos se dividen conceptualmente en dos com- partimientos, aunque no hay una distincién fisica entre ellos: a Compartimientos de proliferacién o de mitosis: 1) Micloblastos, promielocitos y mielocitos son capaces de dividirse y componen este compartimiento, 2) Tienen lugar de 4 a 6 divisiones, produciendo 16-32 células a partir de una célula madre, Hay tres mitosis en la fase de mielocito; por lo tanto, la mayor parte del incremento del niimero de célullas se pro duce en esta fase. 3) En este compartimiento, la maduracién se produce al mismo tiem= po que la proliferacién. 4) El tiempo tanscurrido en este compartimiento es de unos 2,5 dias aproximadamente. 5) En estado sano, aproximadamente el 20% de los neutréfilos de la médula 6sea se encuentran en el compartimiento de proliferacién 6) Hasta un 20% de la granulopoyesis es ineficaz en el perro sano. Se producen muertes prematuras, especialmente de metamielocites. Este grado de ineficacia en la granulopoyesis no se ha documentado en otras especies, Compartimiento de maduracién y de almacenamiento: 1) Este compartimiento esti constituide por metamielocites, bandas y segmentados. Estas células no pueden replicarse pero son funcional- mente maduras 2) El tiempo normal transcurrido en este compartimiento se estima en 2.3 dias en el perro, pero puede acortarse mediante la liberacién tem- prana de neutréfilos inmaduros a la sangre en situaciones en que hay demanda marcada de estas células en los tejidos, 3) En estado sano, aproximadamente el 80% de los neutréfilos de la médula ésea se encuentran en el grupo de almacenamiento. Esto representa un aporte de neutréfilos de unos 5 dias en estado sano, dado que el ritmo de renovacién celular permanece inalterado. 4) Laliberacién de neutréfilos desde la médula ésea a la sangre es orde~ nada y en funcién de la edad; las células mis maduras (segmentados) son liberadas primero, 5) Durante un aumento de Ia demanda tisular de neutréfilos, desde la médula ésea pueden liberarse bandas y formas juveniles premavura~ mente, dando lugar a una desviacion a la izquierda, 3. Mecanismos para aumentar la produccién de neutréfilos: a Aumento del reclutamiento de células madre: 1) Esto ocurre probablemente en la fase mas temprana de la demanda de neutréfilos. 2) Se necesitan al menos 3-5 dias para que este incremento influya en el niimero de neutréfilos circulantes.60 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 2. LEUCOCITOS 3) Bajo condiciones adecuadas, las reservas de la médula ésea de peque- fos animales se reponen mis rapidamente que las de grandes anima- les debido a una mayor capacidad de proliferacién, b, Aumento de la eficacia de la granulopoyesis: 1) Dentro del compartimiento de proliferacién pueden producirse divi- siones adicionales cada una de las cuales duplica la salida de céhulas 2) El aumento de la salida de células puede ocurrir mediante la reduc cién del desgaste de los mielocitos (granulopoyesis ineficaz), lo cual tiene lugar en perros sanos en condiciones normals. 3) Este efecto se refleja en sangre en 2-3 dias. Disminuci6n del tiempo de transito en la médula o del tiempo de madu- racion: 1) Los neutréfilos se liberan a Ja circulacién desde la médula ésea a un ritmo més ripido. 2) Elincremento de mitosis de las eélulas progenitoras de los neutr6filos y el acortamiento en la maduracién de su progenie en la médula ésea, pueden cubrir temporalmente el ineremento de la demanda en los tejidos. 4, Liberacién de neutréfilos desde la médula 6sea: a. La liberaci6n est mediada por el CSF-G, CSF-GM, Ca, el factor de necro- sis tumoral (FN'T-e. y FNT-B) y posiblemente un factor derivado del ter~ cer componente del complemento, los cuales provienen de los macréfa- gos y otras células. b. El aumento de la tasa de liberacién desde el compartimiento de almace- namiento provoca el desarrollo rapido de una neutrofilia (antes de 2 dias) que sigue a la demanda inicial de neutrdfilos por parte de los_tejidos. ¢. La médula granulocitica en este punto muestra una desviacién hacia la inmadurez con un incremento relativo del geupo de proliferacién ya que las células maduras (segmentados) de las reservas de almacenamiento han sido movilizadas. 4. A medida que aumenta la demanda tisular de neutréfilos y disminuyen las reservas almacenadas de segmentados, empiezan a aparecer neutrofilos en banda en la sangre (desviacién a la izquierda). En situaciones graves, pue- den ir seguidos por metamielocitos neutrofilicos (juveniles) 0 incluso célu- las mis inmaduras. Una desviacién a la izquierda indica una disminucién de las reservas de neutr6filos y normalmente denota una demanda tisular de neutréfilos E. Cinética de los neutrofilos en Ia sangre 1 En el interior de las vénulas poscapilares los neutréfilos se mueven mis lenta~ mente que los eritrocitos y el plasma, debido a la existencia de moléculis de adhesin tanto en los neutrofilos como en las eélulas endoteliales. Esto da lugar a.una distribucién desigual de neutréfilos dentro de los vasos sanguineos. La con- centracién de neutréfilos en vénulas poscapilares es mayor que en grandes vasos:2 CAPITULO 2. LEUCOCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA a, Los neutréfilos que se adhieren a la superficie del endotelio vascular cons- tituyen el grupo de neutréfilos marginales (GNM) y no se contabilizan en los recuentos rutinarios de glébulos blancos (GB). b, Los neutrdfilos que se mueven por arterias y venas periféricas 0 centra~ les tan répido como los eritrocitos y el plasma constituyen eb grupo de neutréfilos circulantes (GNC): 7 1) El néimero de neutréfilos derivado del recuento rutinario de GB y el recuento diferencial representan cl tamafio aproximado del GNC. 2) EIGNC mis el GNM dan el nfimero total de neutréfilos en sangre. c. E1 GNM es igual al GNC en el perro, el caballo y el ganado vacuno. En el gato el GNM es aproximadamente 3 veces superior al GNC: 1) El tiempo de trinsito en la sangre de un neutréfilo en condiciones normales ¢s de 10 horas aproximadamente. 2) Todos los neutrafilos de la sangre son reemplazados unas 2,5 veces al dia Los neutréfilos emigran al azar de la sangre al espacio intersticial indepen dientemente de su edad. La migracién es unidireccional; no vuelven a la c culacién, En condiciones normales, los neutr6filos pueden sobrevivir en los tejidos 24- 48 horas. En dltimo término, los neutréfilos gastados son eliminados por los macréfagos de bazo, higado, médula ésea y otros tejidos. Algunos neutréfi- Jos pueden perderse del cuerpo via secreciones, excreciones 0 migracién a través de membranas mucosas. I. Monocitos-Macréfagos SiSLIGTECA 1 A. Morfologia (Lamina 2.1.) Monocito. La secuencia de maduracién del monocito es: a. Monoblasto: 1) Esta célula es poco fiecuente en la médula dsea 2) Es indistinguible del mieloblasto con la tincién de Romanowsky. b. Promonocito: 1) Elniicleo es indentado e irregular, con una cromatina finamente agre- gada. 2) Ultracstructuralmente, hay filamentos citoplasmiticos agrupados 0 dispersos, c. Monocito 1) Como se evidencia con ha tincién de Romanowsky, los monocitos son generalmente las células circulates mas grandes en estado sano. 2) El micleo es oval, reniforme, bilobulado 0 trilobulado, con cromati- na agrupada 3) El citoplasma es azul grisiceo (ms oscuro que el de los neutréfilos inmaduros como mielocitos, metamielocitos y bandas), granular y puede tener 0 no vacuolas: 6162 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 2. LEUCOCITOS a) La presencia de vacuolas redondeadas, definidas, de diferentes tama- jios en monocitos suele ser un artefacto debido a un almacena- miento prolongado en tubos de EDTA (etilendiaminotetraaceta- to) previa a la preparacion de las extensiones hematologicas. b)_En extensiones de sangre fresca, la vacuolizacién en los mono- citos puede indicar activacién celular. e) Las vacuolas de los monocitos son relativamente grandes y defi- nidas comparadas con el aspecto espumoso de los neutrdtilos con vacuolizacién téxica. 4) Los grinulos citoplasmaticos rosas son lisosomas que contienen pero- xidasa, hidrolasas Acidas, esterasas de _-naftil acetato y butirato, aril sulfatasa y lisozima 5) Pueden proyectarse pseudopodos de los margenes celulares (proyec- ciones cortas y finas de la membrana plasmitica), 6) Las caracteristicas ultraestructurales incluyen fragmentos cortos de reticulo endoplasmatico rugoso (RER), lisosomas, vacuolas y haces de microfilamentos, 2. Macréfagos: a b, o Los macréfagos derivan de los monocitos de la sangre. Los monocitos transformados en macrdfagos raramente se localizan en la sangre, pero se pueden observar en extensiones de sangre capilar en enfermedades como la erlichiosis, la histoplasmosis, a leishmaniosis y la anemia hemolitica inmunomediada, Los macréfagos contienen mas granulos y mas enzimas proteoliticos que Jos monocitos. Los monocitos o macréfagos reclutados de la sangre hacia los lugares de inflamacién tienen una vida corta, pero los macréfagos que residen en, Jos tejidos pueden sobrevivir por largos periodos ( de semanas a meses), son capaces de dividirse y son fagocitos funcionales. Los macr6fagos derivados de monocitos son los siguientes: 1) Macrdfagos o histiocitos de exudados. 2) Macréfagos pleurales y peritoneales. 3) Macrfagos pulmonares y alveolares. 4) Histiocitos del tejido conjuntivo. 5) Macréfagos del bazo, linfonodos y médula dsca. ©) Células de Kupffer del higado. Los monocitos-macr6fagos constituyen el lamado “sistema reticuloen- dotelial”; sin embargo, estas células no producen fibras reticulares ni son células endoteliales. B. Produccién y cinética 1, Los monocitos derivan de una célula progenitora bipotencial (CFU-GM) que es comin para monocitos y neutréfilos 2. La produccién y maduracién de monocitos esti regulada por factores de creCAPITULO 2, LEUCOCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA oe 6. cimiento y citoquinas, que incluyen SCE M-CSE GM-CSE IL-1, IL-3 e IL-6. Probablemente hay al menos tres divisiones desde el monoblasto hasta la tilei- ma division de promonocito. La maduracién es ripida, requiriendo tan sélo 24-36 horas. Los monocitos son liberados directamente a la sangre desde un! grapo de proliferacién de promonocitos en la médula ésea poco tiempo después de la ltima divisi6n (equivalente en edad a la primera generacién de mielocitos neutrofilicos). No existe un grupo de almacenamiento de los monocitos a diferencia del que hay para neutrOfilos. Hay evidencias de que existe un grupo de monocitos marginales El tiempo medio de trinsito en la sangre de los monocitos es mas largo que el de los neutréfilos, aproximadamente 18-23 horas. C, Funcién 1 Los monocitos fagocitan y digieren particulas de material extrafio y desechos celulares, Los monocitos son fagocitos menos eficaces que los neutréfilos en la defen sa contra la invasién microbiana: a. Ciertos microorganismos fagocitados por los macréfagos pueden sobre vivir y replicarse en su interior (p. ej. Mycobacteria spp., Rickettsia spp.. Leishmania spp. y Toxoplasma spp.) b. Los macréfagos pueden ser activados por productos de los microorga- nismos, algunas citoquinas y algunos agentes inorginicos. La activacién consiste en un aumento del metabolismo, de la actividad de los enzimas lisosomales, de la movilidad y de la actividad microbicida y citocida Los monocitos son una fuente importante de CSFs y citoquinas (p. ¢j., G CSE M-CSE IL-1, IL-3, NT) implicadas en la hematopoyesis. Los macrOfagos secretan diversas sustancias que modulan la respuesta infla~ matoria (p ej. factores quimioticticos, activador del plasminégeno,colagena~ sa, clastasa, factores del complemento, inhibidores de la plasmina) Los macréfagos actiian en el reconocimiento inmunitario fagocitando y pro- cesando sustancias extrafias para la presentacién de antigeno a los linfocitos T. Los macréfagos eliminan células infectadas por virus y células tumorales via citotoxicidad mediada por anticuerpos. Los macréfagos son activamente pinocitéticos y catabolizan proteinas séricas IIL. Eosinéfilos: A. Morfologia (Limina 2.1.) 1 2 Los eosinéfilos no pueden ser identificados antes de la fase de miclocito, La célula se caracteriza por la presencia de grinulos eosinofilicos bien defi- nidos: a, Estos son los grinulos secundarios o especificos. b. Los grinulos secundarios varian en tamaiio y forma entre especies (gran des y redondos en el caballo, de tamatios variables y redondos en el perro, ASM At 63PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA * CAPITULO 2. LEUCOCITOS pequefios, redondes y uniformes en rumiantes y cerdos, con forma de baci- Jo en el gato y moderadamente grandes y redondos en la mayoria de aves). c. Estos grinulos son lisosomas que contienen la protefna bisica principal, hidrolasas dcidas y una peroxidasa especifica de los eosinéfilos, que juega un papel importante en la funcién de los eosinéfilos. La proteina basica principal se localiza en el miicleo del grinulo y la peroxidasa en la matriz circundante del granulo. d. Ultraestructuralmente, puede observarse un niicleo electrodenso o cris taloide en los granulos secundarios de los eosindfilos de gatos, perros, caballos y algunos pijaros. También puede haber periodicidad del nacleo central. Los grinulos secundarios de los eosinéfilos bovinos son homo- géneos (carecen de cristaloides). B, Produccién y cinética 1. La produccién y maduracién de eosinéfilos en la médula ésea es paralela a Ia del neutrofilo. Existe un grupo de almacenamiento de cosinéfilos. La IL-5 es la citoquina principal que controla la produccién de eosinéfilos Influye en gran medida en la proliferacion, diferenciacién, maduracién y fin cién de los eosinéfilos. E] GM-CSF y la IL-3 jugaran un papel menor en el desarrollo de los cosinéfilos. 3. La produccién en la médula ésea requiere de 2 a 6 dias. 4, El ciempo de trinsito en sangre es corto (Ty (0 minutos en el perro) y existe un grupo marginal de cosinéfilos. 5. Los eosinéfilos migran desde la sangre preferentemente a zonas subepitelia~ les de la piel, el higado, el tracto gastrointestinal y el endometrio. La recir- culacién de eosin6tilos es minima. 6. En la mayoria de especies de aves ~excepto las rapaces-, los eosindfilos son Jos leucocitos menos frecuentes en la circulacién C. Funcién 1. Los eosinéfilos atacan y destruyen helmintos en un proceso mediado por anticuerpos, complemento y perforinas de los linfocitos T. Los eosin6filos liberan la proteina bisica principal y gencran radicales de oxigeno téxicos por la accién de la peroxidasa. Los cosinéfilos pueden suprimir reacciones de hipersensibilidad. Son atrai- dos por mediadores quimicos liberados por los mastocitos y los inhiben duran te reacciones alérgicas y anafilicticas. 9 3. Los eosinéfilos pueden promover la inflamacién, especialmente en procesos Se unen a la IgE y son activados por complejos anti- geno-IgE para liberar el contenido de sus granulos, que contribuyen a la asmiticos y alérgicos. lesiGn tisular en reacciones alérgicas. El reclutamiento de eosindfilos esta mediado por interleucinas (IL-5, IL-2, IL-6). 4, Las capacidades fagocitica y bactericida son similares a las de los neutréfilos, pero este proceso no es eficaz. Los eosinofilos no protegen frente a infec ciones bacterianas.CAPITULO 2. LEUCOCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA 5. La cosinofilia asociada a tumores se ha descrito en mastocitomas, linfoma de células T, fibrosarcoma y carcinoma en animales. La infiltracién de eosinofi- Jos en neoplasias puede ser un factor de buen pronéstico IV. Baséfilos A. Morfologia (Lamina 2.1.) LIC TECA | 1, La maduracin de baséfilos es paralela a Ia de los neutréfilos; los bas6filos no pueden ser identificados antes de la fase de mielocito. 2. Los grinulos se hacen visibles en la fase de miclocito: a. Los granulos son redondos y se tifien metacromaticamente (parpura), pero en el gato los baséfilos maduros de la sangre pierden esta caracte- ristica en la tincién b. Los grinulos ocupan todo el citoplasma de las células en la mayoria de especies pero son menos numerosos en el perro ©. Ultraestructuralmente, los grinulos suelen ser homogéneos; en la mayo- tia de especies son indistinguibles de los grinulos de los mastocitos. En algunas especies los grinulos pueden contener formas de mielina, reas electrokicidas,o cristaloides; una mala fijacién puede provocar la disolu- cién de la matriz, de los grinulos, d._Los grinulos de los baséfilos contienen histamina, heparina y mucopoli- sacdridos sulfatados, pero no poseen hidrolasas 4cidas, B. Produccién y cinética 1. Los baséfilos son escasos en la mayorfa de mamiferos pero se encuentran mas a menudo en péjaros. La produceién y liberacién de basétfilos requiere aproximadamente 2,5 dias. Su almacenamiento en Ia médula 6sea es minimo. v » La IL-3 es la principal citoquina que controla el crecimiento y diferencia ci6n de los baséfilos. El GM-CSF y la IL~5 juegan un papel menor en el des~ arrollo de los bas6filos 4. A pesar de desempefiar fumciones similares, los bas6filos son independientes de los mastocivos tisulares y no comparten el progenitor. C, Funcion 1. Bn los recuentos diferenciales de leucocitos, los baséfilos, si es que se detec~ tan, suelen estar presentes en bajo mimero. Los recuentos diferenciales dan resultados fiables slo en casos en los que el niimero de basdfilos esté signi- ficativamente incrementado (2% 0 mas respecto del total de leucocitos) 2. Los baséfilos y los mastocitos comparten muchas propiedades y desempefian funciones parecidas. Las fimnciones especificas de los basdfilos incluyen las siguientes: a. Participacién en reacciones de hipersensibilidad inmediata y retardada mediante la liberacién de mediadores (p. ¢j., liberacién de histamina en reacciones alérgicas) b. Estimulacién del metabolismo lipidico mediante la activacién de la lipo- proteina lipasa, 65PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 2. LEUCOCITOS c. Prevencién y estimulacién de la hemostasia mediante la liberacién de heparina y la activacién de la calicreina, respectivamente d. Rechazo de parisitos (p. ¢j., garrapatas) ¢. Posible citotoxicidad contra células tumorales 3. El néimero de baséfilos puede aumentar en ciertas alteraciones mieloproli- ferativas, V. Linfocitos ‘A. Morfologfa (Lamina 2.1.) 1. Los linfocitos se diferencian por la presencia o ausencia de antigenos de super- ficie celular espectficos y por la produceién de anticuerpos, lo cual puede detectarse mediante anticuerpos monoclonales. Sélo las células plasméticas y algunos linfocitos T citotéxicos (linfocitos granulares) pueden ser identifi- cados sélo por su morfologia. Los érganos linfoides primarios son el timo y Ja médula sca o la bursa de Fabricio: a. Los linfocitos T derivan embriologicamente del timo y se encargan de la inmunidad celular. b. Los linfocitos B derivan embriolégicamente de la médula ésea en los mamiferos o de la bursa de Fabricio en las aves y se encargan de la inmu- nidad humoral (anticuerpos). . Linfocitos maduro a. En los mamiferos adultos, la mayorfa de los linfocitos se originan en los tejidos linfoides secundarios que incluyen tonsilas, linfonodos, bazo, teji- do linfoide asociado a los bronquios (BALT) y tejido linfoide asociado al §intestino (GALT). Los tejidos linfoides secundarios de las aves incluyen bazo, tejido linfoide asociado a la conjuntiva (CALT) o tejido linfoide asociado a la cabeza (HALT), GALT, y agregados linfociticos de otros teji- dos. Las aves no tienen ganglios linfiticos. b, Los linfocitos maduros son células pequeiias con citoplasma azul excaso. El niicleo es redondeado con cromatina agregada; puede estar presente una ligera indentacién del nficleo. Los nucleolos no suelen ser visibles con las tinciones habituales. Los linfocitos del perro y en ocasiones también del gato y del caballo, pueden tener grinulos citoplasmiticos de color rojo oscuro (linfocitos gramulares) en el lugar de indentacién nuclear. Se trata principalmente de . _ linfocitosT citotéxicos d. Los linfocitos son los principales leucocitos circulantes en rumiantes adul- tos y en muchas especies de aves. Tanto los linfocitos pequetios como los grandes con citoplasma mas abundante, niicleo indentado y cromatina mis laxa, aparecen en la sangre. Los grénulos citoplasmaticos son habi- tuales en los linfocitos bovinos. e. Elalmacenamiento en sangre con EDTA durante 30-60 minutos puede causar lobulacién del nacleo, vacuolizacién del citoplasma o manchadoCAPITULO 2. LEUCOCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA de linfocitos en extensiones tefidas. Una marcada hinchazén celular puede ir asociada a un almacenamiento prolongado de la sangre. £ Los linfocitos maduros no son necesariamente células definitivas; en easo de una estimulacién adecuada, pueden tansformarse en irimunoblastos y célu= las plasmacitoides. La transformacién suele ocurrir en los tejidos linfoides pero en ocasiones puede observarse en la sangre (linfocitos reactives). Ultraestructuralmente, los linfocitos contienen muchos ribosomas libres. Las células plasméticas tienen un RER abundante, Los cuerpos de Russell, derivados del RER, son vesiculas dilatadas que contienen inmunoglo: bulina floculada. 3. Unos pocos linfocitos reactivos (inmunocitos o linfocites transformados) pueden encontrarse ocasionalmente en Ja sangre en periodos de estimula- cidn antigénica: a, Se trata probablemente de linfocitos T, pero podrfan ser linfocitos B. b. Los linfocitos reactivos (inmunocitos) son células grandes con un cito- plasma bas6filo intenso, una zona pilida que corresponde al aparato de Golgi y/o vacuolas citoplasméticas finas, El nficleo tiene la cromatina agregada; no suele haber nucleolos ni anillos nucleokares. 4. Las células plasmticas representan la tiltima etapa de desarrollo de los linfo- citos B en respuesta a una estimulacién antigénica. Aparecen mis frecuente- mente en nédulos linfiticos, médula sea y otros tejidos. Raramente se obser~ van en sangre, Las caracteristicas de la cincién nuclear son las mismas que las de otros linfocitos reactivos, pero lo que identifica a esta célula es el niicleo excéntrico, redondo, con cromatina condensada y una zona pélida del apa~ rato de Golgi en el citoplasma. 5. Los linfoblastos son grandes células con un nitcleo redondeado, cromatina dispersa, miltiples mucleolos anillos nucleolares y un borde delgado de cito- plasma azul y granular. No son necesariamente precursores 0 células poco diferenciadas, pero representan estadios pre- o post-mitdticos en el cielo de los linfocitos. Se observan raramente en sangre excepto en leucemia linfo- blistiea aguda y linforma, te B. Produccion 1, La linfopoyesis (es decir, division y transformacién de linfocitos) se leva a cabo en los tejidos linfoides y depende del grado y tipo de estimulacién anti- génica,asi como de la influencia de un conjunto de interleucinas (IL-1, IL~ 2, IL-4, IL-3, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11) y citoquina (interfern-y).. Determinados antigenos estimulan a los linfocitos B a dividirse y/o trans- formarse en células efectoras que producen inmunoglobulinas (es decir, 1g G, IgA, Ig M, IgE); las células plasmiticas son las diltimas derivadas de los lin~ focitos B. 3. Determinados antigenos estimulan a los linfocitos T a dividirse y/o trans- formarse en células efectoras (Th1/Th2) que producen linfoquinas y median Ja inmunidad celular. w 67PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA » CAPITULO 2. LEUCOCITOS C, Distribucién y circulacién de linfocitos 1. Los linfocitos se distribuyen por nédulos linfaticos, bazo, timo, tonsilas, GALT, BALT, médula ésea y sangre de los mamiferos. Las aves no poseen ganglios linfiticos pero tienen CALT, HALT y agregados linfoides en numerosos teji- dos y érganos. El GALT es particularmente prominente en aves acuaticas. Comparados con otros leucocitos, los linfocitos son de vida larga y son capa~ ces de mitosis y/o transformacién en formas fancionalmente mis activas: a. La expectativa de vida de los linfocitos se define como el intervalo de tiem- po entre mitosis sucesivas o el tiempo entre la iltima mitosis y la muerte celular. b. La mayorfa de linfocitos tienen una vida corta (unas 2 semanas); sin embar- go, otros linfocitos, como las células de memoria, pueden cener intervalos intermitdticos de semanas, meses 0 aiios. De entre los leucocitos, los linfocitos son tinicos porque recirculan: a. La ruta principal de recirculacién son los conductos eferentes de los linfonodos— conducto toricico o conducto linfitico derecho sangre—> b, vénulas postcapilares del cértex de los linfonodos parénquima linfoide — linfa eferente de nuevo. La activacién de receptores en las vénulas postcapilares y la consiguiente unién celular es la responsable del movimiento de linfocitos desde la circulacién hacia los tejidos. b. La recirculacién de linfocitos esplénicos es mas directa, desde la sangre bazo— sangre de nuevo. La recirculacién estimula la sensibilizacién antigénica de linfocitos inacti- vos y la deteccién de células transformadas d. La recirculacién no es al azar. Los linfocitos muestran preferencia por su. tejido de origen en estado sano. Los patrones normales de recirculacién pueden estar alterados en caso de enfermedad, El tiempo de recirculacién oscila entre una y varias horas aproximada- mente, dependiendo del tipo de célula (linfocitos'T © B) y de la ruta a tra vés de tejidos y Srganos. La mayoria de linfocitos recirculantes son células'T de memoria, de vida larga. La mayoria de linfocitos B de la sangre son miembros transitorios de la an poblacién de linfocitos recirculantes. La mayoria de células B permanecen en Jos tejidos linfoides. h. Los linfocitos del GALT y del BALT entran en la linfa aferente. En un ani- mal sano, la linfa aferente de otros tejidos esta relativamente libre de célu- las, con excepcidn de la migracién de macréfagos presentadores de anti- geno que drenan de los tejidos a los ganglios linfiticos D. Funcién, 1. Producci6n de anticuerpos: a. Los linfocitos B estimulados antigénicamente se transforman en células plasmiticas, las cuales secretan inmunoglobulinas.CAPITULO 2. LEUCOCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA | 69 b. Los macréfagos y los linfocitos T también regulan la produccién de anti- cucrpos. 2. Actividad reguladora: a. Los linfocitos T estimulados adecuadamente y, en menor medida los lin- focitos B, secretan moléculas mensajeras biologicamente activas llamadas interleuquinas, linfoquinas o citoguinas. ; b. Funciones de las interleuguinas derivadas de linfocitos: 1). Mediacién de Ia inmumidad humoral 2) Mediacién de la inmunidad celular. 3) Activacién de céhulas inflamatorias. 4) Regulacién de la produecién, activaci6n y diferenciacién de linfocitos. 5) Estimulacién y regulacién de la hematopoyesis. 3. La citotoxicidad es una manifestacin de la inmunidad mediada por células a. Algunos subtipos de linfocitos T (CD8+) son citoréxicos para células infectadas por virus y células transformadas. b. Las células asesinas naturales (linfocitos citoliticos) también son citordxicas pero no requieren de sensibilizacién previa para desempefiar su fancién. EVALUACION LABORATORIAL DE LOS LEUCOCITOS I. Recuento de glébulos blancos A. Métodos de determinacién 1. Los recuentos manuales se llevan a cabo con un diluyente empaquetado (sis- tema Unopette), hemocitémetro y microscopio. El error intrinseco es de aproximadamente el 20%, incluso con herramientas técnicas excelentes. Este método es el preferido para los recuentos de células sanguineas en las aves. Contadores automiticos de céhulas: ry a. Los resultados son mis reproductibles que con los recuientos manuales, El error intrinseco es de aproximadamente el 5%, pero puede ser mayor si los recuentos celulares son extremadamente bajos o altos. b, Algunas anomalias en la sangre pueden introducir errores de recuento: 1) La presencia de leucocitos aglutinados o frigiles dara resultados fal- samente bajos. - ) La presencia de plaquetas anormalmente grandes © agregadas eleva- v4 erréneamente el recuento automético de globulos blancos. 3) Unexceso de cuerpos de Heinz, especialmente en las muestras de san- | gre felina, puede provocar aglutinacién y dar un recuento errénea- | mente alto de gldbulos blancos. Los cuerpos de Heinz no se desinte- gran cuando los eritrocitos se lisan durante el proceso de recuento. 4) Los agentes para lisar los eritrocitos de algunos instrumentos pueden ser demasiado débiles para lisar los eritrocitos animales, dando un | recuento de leucocitos falsamente elevado, 8[7 | LJ PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA * CAPITULO 2. LEUCOCITOS c. Las plaquetas felinas normales poseen el mayor volumen plaquetar medio (VPM) de los animales domésticos. Las plaquetas no se lisan durante el pro- ceso de recuento leucocitario y pueden elevarlo erréneamente. Este pro- blema se presenta mis a menudo en enfermedades con un incremento del recambio de plaquetas;las plaquetas jévenes tienen un VPM todavia mayor. d. Ademés de una correcta estandarizacién y un buen control de calidad, debe llevarse a cabo un ripido examen del contador automitico compa- tando los resultados de éste con los de un recuento manual estimado a partir de un frotis sanguinco Todas las células nucleadas, incluyendo los eritrocitos nucleados (GRn), son. enumeradas por los métodos manuales y por algunos métodos automiticos de recuento: a. Los eritrocitos nucleados se identifican examinando un frotis sanguineo: teftido; el mémero de GRn por cada 100 leucocitos se registra al mismo. tiempo que se realiza el recuento diferencial de leucocitos. b. El recuento de glébulos blancos se corrige entonces con la formula siguiente: recuento corregido de GB = (recuento inicial de GB X 100)/ (100+ GRn) Elrecuento de GB puede ser estimado mediante una tincién de Romanowsky bien preparada de un fiotis sanguine, en situaciones de emergencia: 0x campo a. El recuento estimado de GB = (ntimero medio de GB/+ de visién) X (1500). b. Tambi niimeros de leucocitos a partir de frotis sanguineos teftidos para conocer reculentos cuantitativos hasta conseguir prictica en la estimacién del néime- ro de leucocitos. c. Los recuentos estimados de leucocitos son inferiores a los recuentos cuan- titativos de GB obtenidos manualmente o con un contador automitico. n puede aprenderse a estimar el nimero de GB comparando los B. Alteraciones en el recuento total de GB (leucocitos) 1. La leucocitosis es un aumento en el recuento total de GB. Esta producido por un aumento en el némero de cualquier leucocito; sin embargo la neu- trofilia (aumento del nfimero de neutréfilos) suele ser la responsable. La leucopenia es un descenso en el recuento total de GB. Suele ser causada por neutropenia (disminucién de los neutr6filos), e algunas especies de a epto en rumiantes y es en los que predominan los linfocitos en la sangre en estado sano. Il. Evaluaci6n del frotis sanguineo (Lamina 2.1.) 4 A. En el capitulo 1 se describe un abordaje sistemitico para el examen microscépicd* del frotis sanguineo. B. Recuento diferencial de leucocitos 1. El frotis tefiido con Romanowsky se examina a grandes aumentos (45x) 0 con aceite de inmersidn (50-100x), y se identifican los leucocitos hasta obte-CAPITULO 2. LEUCOCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA 3. 4 ner 100-200 células clasificadas segiin el tipo. El ntimero de GRn por cada 100 leucocitos se cuenta por separado. El porcentaje de un determinado tipo de leucocito multiplicado por el recuento de GB, da el niimero absoluto de ese tipo de leucocito/l de san- gre.A modo de comprobacién, la suma de porcentajes de todos los’subtipos de leucocitos deberia ser igual a 100%, La suma de los recuentos absolutos de todos los subtipos de leucocitos deberia ser igual al recuento total de GB. La interpretacién del leucograma deberia basarse en el recuento absoluto de células/ tl de sangre y no en los porcentajes relativos: a. Los sufijos “filia” u “osis” (p. ¢j., neutrofilia, eosinofilia, basofilia, linfoci- tosis y monocitosis) indican un incremento en el niimero de un tipo par ticular de leucocitos b. Los sufijos “penia” 0 “citopenia” (p. ¢j., neutropenia, eosinopenia, baso- penia, linfopenia y monocitopenia) indican una disminucién en el nime- ro de un tipo particular de leucocitos. Los neutrafilos inmaduros se cuentan en el recuento diferencial de leucocitos: a. Cuando encontramos en sangre un nimero significativo de bandas 0 for- mas mas inmaduras de neutréfilos, decimos que hay una desviacién a la izquierda. Una desviacién a la izquierda clinicamente significativa se defi- ne por lo siguiente: 1) >1.000 bandas/jul en perros y gatos cuando el recuento de neutr- filos esta dentro del intervalo de referencia 0 hay neutrofilia, 2) >300 bandas/j1l en vacuno y caballos cuando el recuento de neu- wofilos esti dentro, del interval de referen 3) >10% de bandas y neutréfilos mas inmaduros en presencia de neu- tropenia. Esta regla se aplica a todas las especies. b. Los bandas son el tipo habitual de neutréfilos inmaduros que se observan enna desviaci6n a la izquierda, pero formas mis tempranas (metamielo- citos, mielocitos, ete.) se observan ocasionalmente en enfermedad grave: 1) Progresivamente pueden ir apareciendo en la sangre neutréfilos mis inmaduros (metamielocitos, mielocitos © promiclocitos) en ciertas situacis ja o hay neutrofilia mnes (p. ¢j., inflamacién grave, leucemia mieloide) 2) Una desviacidn a la izquierda degenerativa se presenta cuando el néimero de bandas y de neutréfilos mis inmadures es mayor que el néimero de neutr6filos segmentados. “G. Alteraciones en la morfologia leucocitaria (Lamina 2.1.) Cambios téxicos en los neutréfilos (Casos 6,8, 14, 21): a, La toxemia puede perturbar la maduracién de los neutréfilos, causando cambios citoplasmiticos denominados colectivamente cambios taxicos. Existen cuatro manifestaciones de cambios téxicos en los neutréfilos de los mamiferos: 1) Basofilia citoplasmitica. El citoplasma de los neutrofilos téxicos tiene una coloracién azul difiisa que proviene de ribosomas retenidos. Esta nrR PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA * CAPITULO 2. LEUCOCITOS es la filtima forma de cambio téxico en desaparecer al recuperarse de una enfermedad. 2) Vacuolizacién citoplasmética. Este cambio sucle ocurrir concurren- temente con la basofilia citoplasmatica, pero la vacuolizacién cito~ plasmatica (aspecto espumoso) es una manifestacién mas grave de cambio téxico. 3) La vacuolizacién se produce durante una bacteriemia o infeceién generalizada en la mayoria de especies, pero no es siempre expecifi- ca de infeccién, Este cambio se produce por la disolucién de los gré- nulos citoplasmiticos. 4) Cuerpos de Déhle. Estas estructuras son inclusiones citoplasmaticas de color azul a gris, angulares, que representan agregados de reticu- lo endoplismico rugoso retenidos. Se observan mis frecuentemente en frotis sanguineos de gatos. 3) Granulacién téxica. Esta forma de cambio téxico se observa con poca frecuencia en frotis sanguineos de caballos y gatos, y es indicativa de toxemia grave. La granulacién téxica se catacteriza por una promi- nente granulacién del citoplasma de color de rosa a parpura. La per- meabilidad alterada de los grinulos citoplasmiticos primarios per- mite Ja penetracién de la tincién de Romanowsky. La granulacién téxica no debe confundirse con la tincién marcada de los grinulos secundarios, la cual no es un signo de toxemia. Los cambios toxicos de los heterdfilos aviares incluyen basofilia citoplas~ matica, desgranulacién variable, vacuolizacién y presencia de grinulos rojos y parpuras en la misma célula, Los neutréfilos y los heteréfilos txicos suelen tener la funcién celular alterada, 2. Hipersegmentacién nuclear de los neutréfilos: a Se observan cinco o més lobulaciones nucleates. b, Causas de la hipersegmentacién de los neutréfilos: 1) Aumento de la vida media en sangre en tratamientos con corticos- teroides, hiperadrenocorticismo, o fases tardias de enfermedad infla- matoria erénica. 2) Hallazgo idiopitico en caballos y eabras. 3) Deficiencia de cobalto en vacuno. 4) Macrocitosis hereditaria en Caniches. 5) Absorcién anormal de la vitamina B,) en Schnauzers Gigantes, 6) Sindrome mielodisplisico y algunas formas de leacemia, 3. Hiposegmentacién nuclear de los neutréfilos: a, La forma del niicleo es tipica de bandas (margenes nucleares paralelos), metamielocitos (ligera indentacién nuclear) o mielocitos (néicleo redon- deado u oval). El patrén de cromatina sugiere posibles causas para este cambio en la morfologia nuclear:CAPITULO 2. LEUCOCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA 6. 73 1) Un patrén de cromatina menos agregada puede observarse en la tipi- ca desviaci6n a la izquierda de la infecci6n, en reacciones leucemoi- des y en algunos tipos de leucemia granulocitica, En raras ocasiones, los neutréfilos pueden tener un nticleo en forma de anillo, indican- do granulopoyesis intensa o alteracién en la maduracién nuclear 2) Un patrén de cromatina agregada de forma basta, puede observarse en los siguientes casos: a) Anomalia de Pelger-Huét. Este problema hereditario se ha des- crito en perros (especialmente Pastor Australiano, Coonhound y Foxhounds), gatos, conejos y un caballo, La anomalfa se transmi- te por via autosémica dominante y puede tener penetrancia incompleta en algunas razas de perros (Pastor Australiano). Los eosinéfilos y los bas6filos también tienen hiposegmentacion nuclear. La funci6n celular no se ve alterada b) La anomalia de pseudo-Pelger-Hueét tiene una apariencia simi- lar a la anomalia congénita pero ésta es adquirida y transitoria Puede ir asociada a infeccién crénica, especialmente en vacuno, y ala administracién de ciertos farmacos. Maduracién nuclear asinerénica, La maduracién nuclear desordenada puede acompaiiar a la granulopoyesis resurgente, la leucemia granulocitica y el sin- drome mielodisplisico. Este cambio se caracteriza por la presencia de lobu- laciones nucleares con cromatina dispersa (signo de inmadurez) conectadas por constricciones o filamentos muy finos (signo de madurez) Linfocitos reactivos (inmunocitos). Estas células se observan a menudo tras una estimulacién antigénica (p. ¢j., infecci6n, vacunacién) Linfoblastos (linfocitos inmaduros). Cuando los encontramos en el frotis san guineo suelen indicar linfoma maligno con un perfil sanguineo de leucemia 0 de leucemia linfoblistica agnda. Eosin6filos desgranulados. Estas células se activan durante la enfermedad y parecen “apolilladas” por la vacuolizacién y desgranulacién del citoplasma. Los Greyhounds pueden tener eosinéfilos vacuolados en condiciones nor- males Basfilos desgranulados. Las células afectadas aparecen vacuoladas y carecen de grinulos parpura. Este cambio se observa sobretodo en frotis sanguineos de aves teftidos con Diff-Quick. Ill. Examen de la médula ésea En el capitulo 1 se presenta 1m abordaje sistematico para evaluar aspirados de la médu- Ia 6sea74 | _PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 2. LEUCOCITOS INTERPRETACION DE LAS RESPUESTAS LEUCOCITARIAS La concentracién en sangre de los diferentes granulocitos (neutréfilos, eosindfilos y bas6- filos) y monocitos resulta de cambios en el ritmo de liberacion de estas células desde la médula dsea a la sangre, en la distribucién de estas células entre los grupos circulante y marginal dentro de los vasos, y en el ritmo de migracién de células de la sangre a los teji- dos. En esencia, los granulocitos y los monocitos de la sangre estin en camino desde la médula ésea hacia los tejidos donde Hlevan a cabo sus fanciones. La concentracién de lin- focitos en la sangre, sin embargo, es en primer lugar un reflejo de los cambios en la cing tica de recirculacién y redistribucién de linfocitos. I. Neutrofilia en mamifferos y heterofilia en aves (Tabla 2.1., Fig. 2 A. Neutrofilia y heterofilia fisiol6gicas 1. Hallazgos en el leucograma: a. Una ligera neutrofilia en mamiferos o heterofilia en aves se asocia a un recuento total de células hasta dos veces mis alto sin desviacién a la izquierda b. La linfocitosis esta presente y en algunas especies (p. ¢j.. gatos, caballos). Los recuentos de monocitos, eosinéfilos del intervalo de referencia d. La duracién de la leucocitosis fisiolégica es de aproximadamente 20-30 minutos. puede ser mis dramitica que la neutrofilia y basétilos se mantienen dentro Hallazgos clinicos posibles en el momento de la recogida de sangre: a, Animal joven sano, pero excitado 0 asustado en el momento de la reco- gida. b. Evidencia de frecuencia cardiaca aumentada, presién arterial elevada, aumento de la actividad muscular 0 ataques. 3. Mecanismo a, La liberacién de epineftina en respuesta a miedo, excitacién o ejercicio stibito es la responsable de la leucocitosis y Ja neutrofilia fisiolégica. b, La neutrofilia es una pseudoneutrofilia: 1) Blaumento de la frecuencia cardiaca, la presién arterial y el flujo san— guineo causa movilizacién de los neutréfilos con redistribucién del compartimiento marginal al circulante. 2) El nfimero total de neutréfilos en sangre no varia c. La linfocitosis concomitante se explica mediante dos teorias: 1) La epinefrina bloquea los receptores de las células endoteliales de las vénulas postcapilares en los ganglios linfiticos, alterando el patron normal de recirculacién e impidiendo la reentrada de linfocitos de la . sangre hacia el tejido linfoide \ 2) Una fuente no identificada de linfocitos, posiblemente del conducto toracico, se libera a la circulacién general en respuesta a la epinettinaCAPITULO 2, LEUCOCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA 75 SALUD Médula Espinal Sangre Tejido | GNM | »O» Mielocitos Segmentados GNC Promielocitos Bandas Mieloblastos Metamielocitos Proliferacién Almacenamiento Células madre RESPUESTA A LA EPINEFRINA i

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