ESTUDIO COMPARATIVO DE LA FERMENTACION EN CULTIVO SUMERGIDO Y EN ESTADO SOLIDO DELA GUAYABA DE DESECHO ‘Ing. Juan Jéuregui Rincén/Programa de Investigacionen Alimentos, yunaconcentracién ‘desustrato fermentable det2%, proporcioné menor cantidad ‘demiceto por ende, menor cantidad de proteina por gramo ‘de guayaba cmpleado, por lo que se concluye que el proceso fermentativo no es adecuado para realizario anivel planta pilot onus Selogr obtener un rendimicat de 12y ‘unaproductividad de 0.34 g/ia, que son menores que las de 1a fermentacién en estado s6lido. biorreactor decultvo: clio genmnchend damokr peer lagurate co, utilizando el en la fer- Seems om pissy pean tore eaicacoe paraciin, Se considerd que si ¢f Susirato sobre el cual acti el ‘usando una variedad diferente del mismo tipo de micro- ‘organismo aun nivel industrial, Allguno de esos proyectos en un momento dado adisminuiel qurslprodencr ex Dbl peta ecto teia tae: valoragregado, Objetivos del trabajo 1. Se obtendré un indculo de Aspergillus niger en wh ‘medio de cultivo sumergido usando un matraz agitado, 2.- Se encontraré la concentracién 6ptima de aziicares disueltos fermentablesenelmedio decubtive usando matraces agitados, 3.~ Se encontrarn las condiciones Sptimas para el crecimiento dethongo (fujo de aire, velocidad deagitacién fermentacion) ‘cuantificacion dela proteina: 5.~Serealizarin varias para obtener los ‘datos cinéticos del crecimiento del Aspergillus niger. {6 Se obtendriin datos de cinética del crecimiento, 7.-Secompararin ssobtenidos con os dela fermentaciémen estado MATERIAL YMETODOS Comercial .¥elmicroorganismo empleado fue Aspergithusn Pretratamiento delsustrato. La guayaba se tres (cnzima pectolitica) la segunda fue Termamil (enzima ‘amilolitica termoresistente) y la tercera una Glucoamilasa {Gesrdetors de oligorairboe do pcons obnkdn doa Ihdrétisiscon amilasa). EI producto obtenido fie wn jugo con ‘baja viscosidad y unmayor contenido de azicar a 13iTS 14 Anélisis dejugo deguayaba Losanilisis practicados fueron; concentracién deaziicaes fermentables( secmple6 elmétodo de Miller, 1959), proteinas, ‘grasa, cenizas yfibra cruda. Se usaron los métodos oficiales de A.0-A.C.(1980).. Preparacion delinéculo Lasesporas fueron propagadas en un medio de agar-jugo de guayaba y posteriormente transferidas aun tuboestéril usando solucién acuosa de twen 80 al 10% estéril. Las esporas se cuantificaron empleando cuenta directa al microscopio, ¥ posteriormente se inoculé con éstas tun matraz.con jugo de guayaba al2% y seincubé a 28"C en una chmara y seemple6 un ‘agitador orbital de matraces para mantener en agitacién constante a 100 rpm. Desarrollo delproceso fermentative ‘Seempled un biorreactor de? litros de volumen otal estrilizable, agitado con control de temperatura agitacion, clcual fue cargado con | litro de ugo de guayaba al 2% y se inoculaba con los pelet obtenidos en la etapa anterior. Las condiciones «dela fermentacién fueron: temperatura 28°C,,agitacién 75 rpm, ujo deaire 1.5 vm, pH3.5 y tempo de fermentacién 7 dias ‘Separaciény cuantificacién del producto final : ‘Para realizar esto el mosto fermentado se somete a un proceso de filtracién para separar cl micelio, el cual es secado y se Je determina el contenido de proteina y su peso seco, En el filtrado (liquido residual de la fermentacién) se cuantifican los aricares residuales disueltos. : ‘Cinética de crecimiento del hongo ‘Para calizarésta se prepard na corrida enelbiorreactor y se tomaron muestras dos veces al dia del caldo de fermentacién ¥y se analizaron los mismos compuestos que en el producto final. Esto se realiz6 varias veces manteniendo las mismas ‘condiciones, paraasi conocer el comportamicnto del microorganismo. RESULTADOS 1.-Losprimeros resultados obtenidos son: ‘Bsquema general del tratamicnto enzimético que se dio a las guayabas, ver el diagrama presentado en Ia figura 1. ‘Pesar una cantidad “Molerutilizando: Ajustar pH= 5.5 incubar a 50°C y cconeidadeguayaba———P.motinomanualoticuadora. ———P adcionar0.01% de Viscose v ‘Ajusarel pias Bafana 30°C Soneneret Catentar 90°C oe S hestamietoperti. A acne 033400 t ‘Teemamil enzima) Adicionar 0.06% sp» Sostenerlatemp. > Fite ‘Jugo de guayaba deamiloglocosidasa por Ihr. eh tcartoaree (cozimma) ‘AjustarelpHia3.5 nacre Figura 1.-Rsquema deltratamiente enzimético deluge de gusyaba. Elrendimiento obtenido por este método enzimAtico es del 72%.2.- Andlisisdeljugo de guayaba. Utitizando métodosestadisticos se calculé la desviacién Losvalorespromedio delos diferentes componentesdel__estindar, la varianza, la media de los datos obtenidos del jugo de guayaba con el tratamiento enzimético se muestran icnto de! micelio y a continuacién se presentan los cen la tabla 1 resultados. ‘valormedio=2.43101 g/t desy.estindar = 0.0267 varianza=0.000713 " 4. Cinética del crecimiento Resultados de la cinética de crecimiento de A. niger ree ce Sppahos Lacaees ae eacapOncaie tovee é ; anteriores. Las muestras fueron tomadas. durante Tabla 1 composicion promedio deljugodeguayaba jos 7 dias que dura el experimento y sé analizaron los | AS ‘siguientes parametros a) cantidad de micelio producido, b) t lacantidad de aziicarresidualen elmedio, y c)el%deproteina ‘Seutiliz6 el jugo de guayaba.a diferentes concentraciones en el micelio. Los tomuindoe 0 menetaren aiable No. parasaber qué concentraciénde azicarcs cralamds Optima. éstos fueron graficados para conocer el comportamicnto cn funcion deltiempo. —_—_—_—__——— ‘Prot. Tempo —_Conoentmacin. Conventracién de endias —biomasamg/m! ——aticarresidual mg/ml ° ous 076 1.50 $15 3 Tabla 2.obtenciéndelaconc. 6ptimade azticar, con 300 ml de medio, agitacién de 75 rpm y 1 vvmde aire, Tabla 4, datos de lacinética de crecimiento y consumo de sustrato, procedié acscalarel proceso anivelde 1000 mlutiizandoun ——_Lasgrificas 1 y 2se muestran en las siguientes paginas. fermentador para cultivo batch con agitacié mecinica, La gréfica | muestra elcomportamiento delaconcentracion, ‘medicion de pH, control de temperatura, Los resultados de biomasa en funcién del tiempo y la grifica2 muestracéimo obtenidos acstenivel fueron losmostradosen latablaNo.3. varia la concentracin del sustrato (azicar) también en _imrincetticmpe obtenidaen gr. LagrificaNo, 3 muestralosdatoscinéticos delcrecimiento. de. nigerexpresadoscomo %de proteinaal crecer sobre el 1 24338, -sustrato s6tido, z 24981 3 caf ‘Lagrifica No.4 muestra las grificas comparativas delos 4 dos tipos de fermentaciones. s 2aiss : tae Elrendimiento fue del0.12 y laproductividad fuede0.34 ‘ia, 8 24350. = 9 24425 an Lone Enlas fotografia y2 se muestran los equiposutitizados paral preparacién de indculo y el biorreactor usado. Tabla 3. produccién de micelio de A. niger, wilizando 1000 mldejugo de guayabaal2%en fermentador agitado, Con ‘umtiempo de fermentacién de 7 dias a 28°C de temperatura,Gréfica 1.-CINETICA DE CRECIMIENTO, A. niger en jugo de guayaba 2% 28 2a 22 2 18 16 16 ta 12 1 on os on 2 ° ° 1 2 3 ‘ 8 . 7 ‘Tiempo en dias Grafica 2. CINETICA DE CONSUMO DE AZUCAR. A. niger en jugo de guayaba 2%vege Grafica 3.~CINETICA DECRECIMIENTO DE A. niger. sobre guayaba y por fermentacién sélida 17 Gréfica 4. GRAFICA COMPARATIVADELA FERMENTACION en sustrato sélido y liquidoFotografia 2.- B1\OREACTOR EMPLEADO EN EL PROCESO FERMENTATIVO.ANALISIS Y DISCUSION DE RESULTADOS: 1. E1 tratamiento enzimatico que recibe la pasta de guayaba, permite la obtenciGn de un jugo fécil de filtrar y ‘ademas con un incremento del tres al cuatro por ciento mis de azticares fermentables. Respecto al rendimiento éste también se increment6, obteniéndose menor cantidad de residuos después dela fittraci, 2.- La produccién de biomasa se debe realizar con ta ‘concentracién de sustrato més adecuada, de manera que la cantidad residual de éste sea minima y permita obtener la mayor cantidad de micelio, El valor de la concentracién cescogido fue el de dos por ciento, en elreporte de avance se coment que la concentracién dptimaera seis porciento, pero pruebas posteriores y anlisis demas mucstras nos dicron ol {dedos porciento, Asi,con unlitro de medio con dos porciento ‘desustrato dard igual cantidad de micetio que 125ml dejugo ‘con 16%de sustrato,encaso deno haber nhibickin porsustrato ‘oalginmetabotto. 3.-Lafermentacién enmatraces agitadosen formaorbi- tal, permitié obtener una buena cantidad de biomasay conocer qué cantidad de aire hiimedo a emplearse, asi como la velocidad de agitacin. 4.- Respectoalacantidad demicelio obtenido,¢l proceso result con bastante éxito yaque étos son muy cercanos alos reportados conotros sustratos. 5. La comparacién de los datos cinéticos de ambos ‘procesos fermentativos, os resultados presentados permiten ‘observar que la fermentacion en sustrato solido da mejores rendimientos y mayor productvidad queel proceso de cukivo ‘sumergido medio iquido). CONCLUSIONESY RECOMENDACIONES Del trabajo realizado podemos conchuir: 1. Bs indispensable darle el tratamiento enzimético a la ‘guayaba molida para btencr eljugo'y adems que es mis fcil de bombear,filtrar ya fermentaciénserealiza en condiciones bien asépticas 2,- La fermentacién en estado sblido de la guayaba de ‘desecho es mis conveniente ya que se logra un mayor ‘ncremento dela cantidad de proteina queen la fermentacion ‘en cultivo sumergido, como lo muestra la grifica No. 4. Por Jo que la hip6tesis planteada fue parcialmente falsa, ya que ‘hay que realizar otras fermentaciones con otras condiciones. 3.- Serecomienda realizar la fermentacion utilizando la adicién de cloruro férrico que en trabajos anteriores ha per- mitido incrementar la cantidad de micelio y por lo tanto la ccantidad de proteina también 4. Se recomienda también el cambio del movil de agitacién, ya que en el fermentador donde se realizé cl cexperimento se tenia que dejar deagitar pus elmicelio erece ‘enelmévil deagitacion (turbina Rubston 6 paleta), se debe ‘cambiar por un agitador deheticoidal BIBLIOGRAFIA 1 Primrose, $.B.,Modem Biotechnology”, Blackwell scten- tiflepublicatons, 1989. 2, Demain, Salomén, “Biology of Industrial Microorgan- isms”, butterwoths, 1985. 3. 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