A. Tujuan Percdoaan 1. Mamu memahani dan melawusan penentuan axtivitas ekstrak Kas Protenle 2. Mampu momahami dan welakuKan yonentwain vader protein dowgan mmorstle Loory, 3. Maxnpu menantukan akkivitas spesigis estrone Kasare poweaig 1b. Dasar Veori Eyam protuare adaiah onzim exvtrasewular moka produtsi enzimn protease watllc Hejorluon isolasknya dilakukan dengan cara witba yar telah ditatalaai wg ran ckeare ditwmbubrkan yada medio cir (media produussi) « Setaina miteolna tasebut vorkambang Vick gada fase porrumbuhan Luror akan mangharilean protease . Vamomnya sbesny dilaucann wolast ene dilakUkan POUL ysaktn Yard, Alawwikan unto wunghasilean anzim cangan jumiah optimum, tex oh dalwulu - Reda garseaan Wh akon digunakan Reudowioras sp. yarg tah aikeraui akan morgharition protuase dalam wwmlah 42 jon serelals Pperambuan biakan starter yoda odio predues . Pidkan stater ( peecultur ) qunanya curt monporpondok 4os2 adap ari wiluoba - brakan starter digerleh dengan manumbulkan biakan, mari dalam skater (umumyja seyna dangan modka produky ) sama seman . Teolasi enzin dovi wadin predwien’ meng hasillean okstrale Kesar arvenun yale Compu dart porbagc porain Cencin). Salalr sata cam untule mongetahui agaica Osho Kasay ersdput Wargunditne 2nzim yang Kita nyinkan wotaui pongneuart yilod alcAitaS 2RTIN . ALAVIKAS arom dingatakan daloun wit tu), Pada umumnya | Unit protease didekmisitan wbagal jumlal onzam yaro, wonghasiven cetarn dangtn satu mileromo\ ATKosiln per manit dari \arutan casein peda pit 7.0 dan yoda 37°C - Pado powkitian ene dzeanadistlah arcivitas s(esitike . Whah arrcttos { posit songar diper tran unaic monenturon Bnofcect Kem Ma eMtan . Seman tnopyi jap naka KEMUNGKinoN seman ‘onggi pula Fomurnion eatin tercebut, » Tetapi caraan torsebut harus dikerefinmasi dengan metade yarg Iain seperti POEL SDS-PAGE PeANiKAS SpOSHfIK MoTUpAECN ferbandingan pili acsuitas eum per mg poten. Jumlah protein dapat dilitung jika rita mengetahui radar atau Kos cabasi protein data javuban onan tertobut.. Salah satu mote perantuan Kador prtdin yang diqunckan monde \wury Roda tahun 1451 lowry wengembargkan yerqukwran protein yong enderoksi qugus fendi soparti Rardaca soln cio Calteu. Pereatst ini dogo ondetoesi radu BOS YG tocdopat di alam proton tarona gugus Fenda yang Finite Beosm amu moreducs’ fos fotungstat dan fosfomdibdate eanpotan ut xsi Fa Co Calton) monjadi turgstendan Mmolipderum yar bewana bau ast reauest Ww epee absorbans\ yorg \ebor yada syektnun Shar - “nwa ( 00 nM), Sonsititi matede Wi maningtiat fa. digaburg dorciun ion C, —__—(mernde Biwrat). Kowploks cu -provein yang dihasiltah och poraaks Biurot akan heraduksi hampir 15 % fosfotungstat dan fosfomolibdat dalam poreaksi gon - Crocatteu Metede lowy tei digurakan Secara moluas untuk monentuccn Kador protan dalam laruton secota kuantiture Sensititieas ynctode Wi akira 5-100 gla , Kuemalnannyga adalah work porgukucn Win \owa , beverage percak.s\ yang digunakan harus %4ar, arcagat bolverapa zat ponoganggudan samyet protein langsung danosuari sabingga, horus dilvuang . C. Metode Rendition CA + Shokor © Tusuts gigi steril * Lamou spirtus * Gdlas Farwid 50 ml * Taloung raaxsi © Rak tabung reakst © SeeRuatdh + Renangas air 35°C # Vyet dur © Piper volumobits bat © Kortas saritig, * Tabuny senttuga * Sontiiguga rink + Pengadue Kecit + Kuve * Spektrofptometer Vis C.2. Bohan + Biaxon pseudomonas sf © larutan B+ 2 ‘fo NazC0s dalam OM © lowl media cair Nadu © 100 mit wedia cole © Porcatest buret © lorion TCA 20 + Peretti Folin - Cocalteu LN + (oruton Kosa 2 + Lautan sandar sum aiburin « Lonutan bufer fos fat ol 2.00 Mg me © Lasuton tipsin 0,4 ‘b © anton A+ 05% CuS04-St20 dalon \'f Na tarhat cs. Cara Kara 1. Penentuan axtvitas protease | icultur media produkst Drentrifugasidencon Kecpatan esvo ARM selma, = ment, | | Vstogtan 4 taburg rearsi 2 tobung wat wintuk menemturan Kuantites ludlis enzimatie yrotease souma 20 want ( AT eo dan AE)Ditombalican larutan tigsint 0.44 fe Sdpanyak (Wt pada ATO f Vitambolton (mL ekstruk Easar nv yoda ALO F Dtawbahkon Smt Vartan TCr 20 Yo di maring - moving taloung Pr Vivortek dan diiniuloasi solama onan dalam penangas 25°C P Dtambahkan Am larutan karan 2% dan divorces P Viren dam taloung dalom es sekonta 16 mani F Diventifuga solama © mont PF Vipndahkan supernotan ke dalam tabung reac Diukur sempannya pada yanjang qlowoang 280 nh Hasil 3. Axtivitas enzam protease retalah 20 monit rixoson P Dimaiuikan Aml kawin 2% rada dua tubung yoctesi (AT20 dan AE20) P Viltikutoasi colama s mantt paca. ponangas 3S °C fF DManbahkon 2 tartan bufer fexat 4M pt @ dan divortors p Ditawloohkan Ll larutan ARS O14 Ye yada AT 20 Ditambalkan Int ekster yastrenzm pada AEL0 dan divortek f Dinevbasi dilanurkon 2oment dalam penangas 35°C Dikambalxan 4 ml TCA 20% T Dwortexs lngga howmogen Drrendom taburc, dalam dires solama is mout , disentrfiga 5 mont Diaindabkan cupernatan Ke dalam tobung reaksi Ut na sorapannya pada parjang gelombang 280 1m ast 4. onentuon, si protein dengan mete Lavry Euro Kasor Viviayran 2 tobung 7 Yada Anloung 8 A mouean tml lanctan ApH Dwmasudtan Laat etstuk katar pada taloung 9 yp Dtsunboican 015 me peraaksi Folin - Clocatton fF Dirntubas pada whukamar solame So wosit [ Yiuewr sempanwa pada poxgung qelombang 160 mi Vitambahkan pereati Viurot ca dan diinkubasi suhukomar 0 wentD. Analisis _ Prosedur 1. Ronortuon aicsvitas protease Cara Kerja Dimawrkon sii lanton batter fos fob DUM pH & Ee Ditambahkon (mt lancom bipsin 0,4 %e Laruton buf far fuctat dengan pH 8 diguacian alan proses oxsturs karona dapat mong Windany Lujadinya Makkivast enzim akibat pH yang voubah - “Teqsin diguncieon Sebagad Kontrol petit aksvitas yotease Vitowloalkon Smt arctan tC 20% Asam anno dan pertidg akan dilarutkan dengan Te, Sedangkan protan yarg mask boloot, Mou yorg posar akan mengendap. TCA Joga borqurasi monginaktigxan yteate dan Marghontiton wars inkuloost protease Wneuoasi solowa sowenit dalam panangas asc Toray yainisahon asam aware dan poptica Yprg terlvantys 1elama weulasi dowejan grovel yprg magerday atau dengan tulovoat young bolum Ferlridroliss dilpantuctdh sonbifugai Svoma 30 mame - Ditambahkon Ami larutan tason 2% Koso sebagai substrut enzim Divandom pada ait 2s solama 1s Monit AY os borfungss wrtule mampor) ear, tontux dar ondapan “ka terdapet ondapayy 2. Renentuon Konranteast protean, Cora Kerja Ditoroalncon mi poreats\ purek Digunakan wiiuk wendoreKst KKatan peptide . | Kowaples Cu - protein yang dinasiikan oleh pereuksi Viuret akan moradursi 35% {vs fotungstot dan fosfonutibdat \neubar slama 2omomt Mutux melihat adanya endeipan Ditambahtan ois mi poreaksi Folin - Cio Calton Perak Wi soba yendebexst fori ' ae +}e. Had Pereabacn - Ronentuan Koncert poli peptida hasil hidrolisis tarlarut metode ANSON Kode tabung 4 Banko 0,000 St O13 Kr 0,081 SB 0,448 Ks 0,284 2. Ronontucn Konienrcast protein monggunakon moodle lowry Penambahan Lm} No Tabung_ ' a 3 4afs 6 Ee Gondor Kasein - | ov | az !o2fo4a las | Lo] - | - Sawpal \arutan onein} ~ - omnia - [7 a sagan, Samyal laruton enva} - | a oe i |e - leaf Provanie i HO \ m4 | od | oF} ob fos | - |= | - Reroaksi loyror. 5 cS 5 s | seis 5 |p |s Aduix hingga ter combur meruta, WnKuloas suhu Kamar selama lormanit, Roogqan Twin —Cocaren| of | as | os [os [os [os | os bs Jos Adak S20 Winaga merata , iWKUbAsi pada suhu KoMar selama 40 manit. Baca Seragan dengan seektromk 20 pada porjang gdlomibang 10 nin % Vagonm ] Arronm O — Jor004 Jo1004 ]01033 J0,054 ]O,050 fo, HF Jou | 0,08 Ao [me © no | 40 eo | 80 joo | 200 | I +. Analisis Data TERerdacarkon dara hail pengamotan dengan metode ANSON © Abkivitas tripsin = At -Ak . 0153-0087 - 0,006 = 0/0033 U At 20 20 + AKAVIKUS Proteaie=Ar-Ak 2 OM4S -0,284 Let 2 0,00805 & at 20 TE) berdosarkon data dari yerqomeatan Mengquiatan metode lowry diperoieh Grodik Sebagph verikut -014 ——___— 0,12 0,1 0,08 0,06 + y = 0,0006x - 0,0069 R? = 0,9759 —Series1 Linear (Series1) — Linear (Series1)Dari qrafik diporoleh persamoan > y + 0,0006 X - 0, 0064 Sdhingga Aaja perhiturgan kadar 4ripsin dan Kedar esta Karsan protease Sebagai beriwur . © Kadar ‘tripsit © Kadar eKstrar Kasar proven YrA = Ol yYrA = 0,063 Y, = 0,0006 K ~ 0,0004 Y= 0,0006K - 0,000g Or = 0,0006% - 0,00694 0,063 = 0,0006x ~ 90,0064 Or M+ 0,0064 = 0,0006% 0,063 + 0,0064 + 0,0006% OMT = 0,0006 K 01069 = 0,000b* x = O,NT9 ¥ = 0.0699 09,0006 0, 0006 = 1965 = NGS Ay {EA Tumiah protein dalam larutan orca kacar yroteane Kodar proton dari exstrak Kasar protease = WO. F Ag Volume total = yor. sampol + vol pordaks biuret + vol pereaksi folin ~ Chocaitey SM eS ML FOE ML = 6S ml Tula protein dalam lorutan erst kasar protease = Kedar proton % V totay a MGs Ay «Ge mL ~ OM \Ag = 0,75 725 ng « Aitivitas speutik enzim protease ARAVIRAS Spesitik = akliultas enzin protease Jumich provein protease = 0,00805 U 015725 mg, = 0,01 U/mg TEA Tumlah protein dala loxutan psin | Tumioh yrotain = Kodar % VU tetal | = AMS Ag ¥% Gs mL 1O7?mg 9 = 127725 mg + ABAUTROS SRaT4IK enzim ‘psin cAI das spositix = artivitas enzim _ 0,0033 U = 0,0025 U 109, pron protan 1 27726 MgG. Pembahasan - Poresbaan iscasi dan torakterisast exstrak kasar proteate wi merupakan per dbaan yorg (bertujuan urtuc mergerahul artivitas spasifix exstrak rosar protease Pada Rercobacin niaxan cgunakan Pradomonas 1p yang talah dikctahui akan morghasilkan frotease dalam jumlah optimum, 48am setetah paxaibahan biakan carter pada madia Produk . Buakan starter Lerecuiture] gunanya untuk momper perdak masa adaptasi Trikroba. Binkan starter diverolh dengan mehuinbuhkan biakan mumi dalam media Stortar( umumnya sama dorgan media produicst) selma sonmatam -Tahap portama dalam fereoaan adalah dengan paniowatan madia starter, pembuatan media yrocuksi , Rembuatan starter dan produwri oxstak kasar proveaie dilawukan och arisen sequal dengan jadwat yong telah dé tontukan sehingga paktiban tidak porta meakuiconaya Nomun harus mongusalui tukapan ter sebut . Tahap Kedua adalah penontuan axti vite.s Protease pada manit Odan mont 20. Ponantuan acsvitas protease dilakukan oldh fraiikan dongan wotecle AWION, Partawa yertobaan peda mont ke . Disiaptan 2 tuburg Kowwdton dis oh bupter fosfab berguna untuk meMpertalnantan pt optimum enzim agar tidak mudah beruluh aba’ ponambalnan ceditit asam dan loaa . Lalu ditembalkan (mt larukan psin Ord te pada ATO ,tripsin disint borperan Sebagpl encima . Dinara fungsi enzin amipsin, adalah untuk menguiadh ‘aipsinocan menjadi -tipsin aktit, dan wenghidiolisis protean yang, dihasilkan oven pankroas, seperti Aeort yang di sampaikan Roadiiadi (2006) dan Inet ekrtat| Kotor enzimm pada AEO, Sdanjutnys ditambahkah mating maxing tabung 3 mL jarvtan TCA 20% ini barguna scbagal zat yar dagat morghantikan moxanistne Pong tat heim] dan substrort,sartar pH optimasi enzim tiesinadalah gitar 7.8-8,7 CAnonim?, r015 } Di vores dangin Kuort compuran WWingga Wemogen dan inmubast sama 30 wonit dalam ganangas 35°C - Sul 30°C iti MoMMPAKAN suk optimum bor}q enaim ips. Sotelah {weulas Aalaung diambil dan di tambahkan 4m later asin 2% coun berperan doug substrat icasain merupakan golongan proton yarg remporisitiya moncagas Bo % dar owporisi Yasdlaruian poke susu CAnoram 2014) . Dwort@k- dan di vondam tab dalam air es shawa IF ment dengan -tYguan momper elas bentuk dart endapan so ten val andagan , Untriguga 5 wont. Tahar clariyutnya , disontxituga dan disaring wrtur eats mondapaticon sapernatannye . Masi Attest (dah lait dilavuKan dongan cara, ARSON . Metnda ANSON mamilita prinsig kex\a spextrofotomers' ua vtrumand ViS- UU. Urbuk 4 dota sdragan dari Panchen ad harus ditambaian Autu leh WAH, yang bergura wrluk wondtrakan tca- 4nd oa toasigat astm dar di tara ian reagon felin~ coca yang berguna sebagai end iromag anit sekaligus Senyaion yang akan moncarigugus aromatik. pada enriwe sn SUA Menjou porada di supexnatan agar dagat worgubah ‘psfotungstat dan ynalibda eee don matibdonuin yang hasiinya monpakcin senycuna borwarna ‘be Yeh quan eeir geste KAS Aor dap at di bahwa en eaonnia wal i hanes Re ee Sperry foremet 4h bor hams momilify pea con sks ae it warner eee a di tunggu Sela segera dilakukan age Snpenehiee Sra cin x Bihetc Pencartan nila abtrbanst yang Wee ao a Whargop timalkan ‘ ea nya, heuru: enentUan OKKvi jujian cilakukan es are aera Witas Protease kedua Legs oe ares oe = ROVASWICKAN, rr , ie tea ) ere a eeu ene em ca ae wnt as ert 8.0 ee begi enzam bipsin a ae ras is Onsbale Kasdir a Tabanan vt etc aeates = fee dalam penangas i oes AE20, vorbOe Saree san talah iS 35°C Koren, iwi ee ste - a ee toguikan Yaka 7 substrot dita NAA sui yang dis ig ncaa la iene Jngga Wornogen Wain \axutan TCA 20 % es margin rn ea wntuk mg + Sdlaunjytayor taloung vont re Smuyye ae 3 hon i msnpuran pergendapan, ‘ ‘. — ar se iam feolbung, 1 aaiesi iuga 5 menit.- Pirdakkan sue ee a i “ Cyoptida P Tripin , Two , Triptofan 2. Joaikon mantuct dari tartan planko? Pelehkah Lautan lank ciganti dengan ___ Okada, ¢uja.7. — Towolo : Laruban blanko diqunoian icalibtas sebagai \arutan pembancting _ dalom analisis foromert dan untuk mengerahud berarnyr sorapan zat yong Dukananalat dan seeagai Fone! dalam cuatu porcobcan . Pada sucrtu portobcin Corton blanto Wael diganks aquodes dorgan syorat gelarut yarg diqurakan _ pga. aquadgs . endim 1. Jowale : : A - Vit ovis onzim (Wu) morupaxan sotuan ats nam. Unit aKtiftar enam didofwnistean sebagai jwniah mol wbstat yarg dikdnversikan marjecate _ produx persatucyn waktu , aietivitan eho monguKUr Juma Mel oni arf __ dala reakad be meh a morupakan succtu wkuran kemuritan yong weurcan WlaINYa axon meringkat seloma froses permunicin ,DAFTAR PUSTAKA Hermancyah, dk. 2012 .Pemuniun Pravticun progim . \rdermlaya : MPA UNS RL Murray. -K dick. 2003. Harper's Tlustraterd Biachemistry 26 edition . USA = Mc. Gaus - HIM Companies Doadjiadi, Anna. 2007. Dasar BioWwmia. Jasorta > ur Press Ramadhani,PM.@.T,R-,KS,P (20187. Produiesi Enza Protease Dari niger gamiea Dengon Voriati 7H Dan waicku taluban. Tumat Asda Biol, a2) as-s4.