 

 


 


‫ﺇﻋﺪﺍﺩ‬
‫ﺯﻳﺪﺍﻥ ﺧﻠﻴﻒ ﻋﻤﺮﺍﻥ‬.‫ﺩ‬ ‫ﺭﺟﺎﺀ ﻋﺒﺪ ﺍﻟﺮﺯﺍﻕ ﺍﻟﻌﻨﺒﻜﻰ‬
‫ﺃﺳﺘﺎﺫ ﻣﺴﺎﻋﺪ‬ ‫ﻣﺪﺭﺱ‬

2008
 ‫‪‬ﺍﻟﻤﺨﺘﺒﺮ ﺍﻟﺜﺎﻟﺚ ﻋﺸﺮ‪‬‬
‫ﺗﻘﺪﻳﺮ ﻗﻴﻢ )‪ (Km‬ﻟﻸﻧﺰﳝﺎﺕ ﺍﳌﺴﺘﺨﻠﺼﺔ ﻛﻤﻴﺎً ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﺑﻴﺎﻧﺎﺕ ﻟﻴﻨﻮﻳﻔﺮﺑﻮﻙ ﺍﳊﺪﻳﺚ‬

‫ﻏﺎﻟﺒﺎﹰ ﻤﺎ ﻴﻜﻭﻥ ﻤﻥ ﺍﻟﻤﻔﻴﺩ ﺍﻟﺘﻨﺒﺅ ﺒﻨﺸﺎﻁ ﺃﻨﺯﻴﻡ ﻤﺎ ﻋﺒﺭ ﺴﻠﺴﻠﺔ ﻤﻥ ﺘﺭﺍﻜﻴﺯ ﺍﻟﻤﺎﺩﺓ ﺍﻷﺴـﺎﺱ ﺍﻟﺘـﻲ‬
‫ﻴﻭﺍﺠﻬﻬﺎ ﺍﻷﻨﺯﻴﻡ ﻓﻲ ﺍﻟﺠﺴﻡ ﻭﺒﺎﻟﺘﺎﻟﻲ ﻴﻤﻜﻥ ﺩﺭﺍﺴﺔ ﺍﻟﺩﻭﺭ ﺍﻟﻔﺴﻴﻭﻟﻭﺠﻲ ﺍﻟﺫﻱ ﻴﻠﻌﺒﻪ ﺍﻷﻨﺯﻴﻡ‪ .‬ﻓﻨـﺴﺘﺨﺩﻡ‬
‫ﻟﻬﺫﺍ ﺍﻟﻐﺭﺽ ﺍﻟﺘﻲ ﺘﺼﻑ ﺍﻋﺘﻤﺎﺩ ﺴﺭﻋﺔ ﺍﻟﺘﻔﺎﻋل ﻋﻠﻰ ﺘﺭﻜﻴﺯ ﺍﻟﻤﺎﺩﺓ ﺍﻷﺴﺎﺱ ]‪ [S‬ﺇﺫﺍ ﺍﻓﺘﺭﻀـﻨﺎ ﺍﻥ‬
‫ﺍﻟﺘﻔﺎﻋل ﺍﻟﺫﻱ ﺤﻔﺯﻩ ﺍﻷﻨﺯﻴﻡ ﻴﻤﺘﺯﺠﺎ ﻤﻌﺎﹰ ﻟﻴﺸﻜل ﻤﺭﻜﺏ ﻤﻌﻘﺩ ﻤﻥ ﺍﻷﻨﺯﻴﻡ ﻭﻤﺎﺩﺘﻪ ﺍﻷﺴﺎﺱ ]‪ [ES‬ﺍﻟﺫﻱ‬
‫ﻴﺘﺤﻠل ﻓﻴﻤﺎ ﺒﻌﺩ ﺃﻤﺎ ﺇﻟﻰ ﺍﻷﻨﺯﻴﻡ ﻭﺍﻟﻤﺎﺩﺓ ﺍﻷﺴﺎﺱ ﺃﻭ ﺍﻷﻨﺯﻴﻡ ﻭﺍﻟﻤﺎﺩﺓ ﺍﻟﻨﺎﺘﺠﺔ‪.‬‬
‫‪K₁‬‬
‫‪K₂‬‬
‫‪E+S‬‬ ‫‪ES‬‬ ‫‪E+P‬‬
‫‪K-1‬‬

‫ﻴﻤﻜﻥ ﻭﺼﻑ ﺍﻟﻤﻌﺩل ﺍﻟﺫﻱ ﺘﺤﺼل ﻓﻴﻪ ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻼﺕ ﺍﻟﺠﺯﻴﺌﻴﺔ ﻟﻬﺫﺍ ﺍﻟﻨﻤﻭﺫﺝ ﺒﻭﺍﺴﻁﺔ ﻤﻌﺩل ﺜﻭﺍﺒﺕ‬
‫ﺍﻟﺴﺭﻋﺔ ‪ (K₂, K-1, K₁) Rate constants‬ﻭﺤﺴﺏ ﻫﺫﺍ ﺍﻟﻨﻤﻭﺫﺝ ﻓﺎﻥ ﺍﻟﺯﻴﺎﺩﺓ ﻓﻲ ﺍﻟﺴﺭﻋﺔ ﺍﻷﻭﻟﻴـﺔ‬
‫)‪ initial velocity (Vi‬ﺍﻟﺘﻲ ﻨﻼﺤﻅ ﻤﻊ ﺍﻟﺯﻴﺎﺩﺓ ﻓﻲ ]‪ [S‬ﺘﺭﺠﻊ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﺯﻴﺎﺩﺓ ﻓﻲ ﻜﻤﻴﺔ ﺍﻟﻤﻌﻘـﺩ ]‪[ES‬‬
‫ﺍﻟﻨﺎﺘﺞ‪ .‬ﻭﻋﻨﺩ ﺍﻟﺴﺭﻋﺔ ﺍﻟﻘﺼﻭﻯ ‪ Vmax‬ﻴﻜﻭﻥ ﺍﻷﻨﺯﻴﻡ ﺒﺄﺠﻤﻌـﻪ ﻤـﺭﺘﺒﻁ ﻋﻠـﻰ ﺸـﻜل ﻤﻌﻘـﺩ ‪ES‬‬
‫ﻭﺒﻤﻭﺠﺏ ﻫﺫﻩ ﺍﻟﻤﺼﻁﻠﺤﺎﺕ ﻭﺒﺎﻟﺘﻌﻭﻴﺽ ﻋﻥ ﺜﻭﺍﺒﺕ ﺍﻟﺴﺭﻋﺔ ‪ Velocity constants‬ﺒﺜﺎﺒﺕ ﻤﻴﻜـﺎﻟﺱ‬
‫ﻤﻨﺘﻥ )‪ Michaelis-Menten(Km‬ﻓﺎﻥ ‪-:‬‬
‫‪K-1+K₂‬‬
‫= ‪Km‬‬
‫‪K₁‬‬

‫= ‪Vi‬‬
‫)‪Vmax [S] ………….(1‬‬ ‫ﻤﻌﺎﺩﻟﺔ ‪Michaelis-Menten‬‬
‫‪[S] + Km‬‬

‫ﻴﻘﺼﺩ ﺒﻘﻴﻤﺔ )‪ (Km‬ﺘﺭﻜﻴﺯ ﺍﻟﻤﺎﺩﺓ ﺍﻷﺴﺎﺱ ﻋﻨﺩﻤﺎ ﺘﻜﻭﻥ ﺴﺭﻋﺔ ﺍﻟﺘﻔﺎﻋل ﺍﻟﺫﻱ ﻴﺴﺎﻋﺩﻩ ﺍﻷﻨـﺯﻴﻡ‬
‫ﻗﺩ ﺒﻠﻎ ﻨﺼﻑ ﺴﺭﻋﺘﻪ ﺍﻟﻘﺼﻭﻯ‪ .‬ﻟﻤﺎ ﻜﺎﻥ ﺍﻟﺸﻜل ﺍﻟﺫﻱ ﻴﻤﻜﻥ ﺍﻟﺤﺼﻭل ﻋﻠﻴﻪ ﻋﻨﺩ ﺭﺴـﻡ ‪ Vi‬ﻤﻘﺎﺒـل‬
‫]‪ [S‬ﺯﺍﺌﺩﻱ ﺍﻟﻤﻘﻁﻊ‪ ،‬ﻜﺎﻥ ﻤﻥ ﺍﻟﺼﻌﺏ ﻗﻴﺎﺱ ﺍﻟﺴﺭﻋﺔ ﺍﻟﻌﻅﻤﻰ ‪ Vmax‬ﻭﻤﻥ ﺍﺠـل ﺘـﺴﻬﻴل ﻋﻤﻠﻴـﺔ‬
‫ﻗﻴﺎﺱ ﺍﻟﺜﻭﺍﺒﺕ ﺍﻟﺤﺭﻜﻴﺔ ‪ Km‬ﻴﻔﻀل ﺭﺴﻤﻬﺎ ﺒـﺸﻜل ﺨﻁـﻲ ﺍﻋﺘﻤـﺎﺩﺍﹰ ﻋﻠـﻰ ﺭﺴـﻡ ﻟﻴﻨﻭﻴﻔﺭﺒـﻭﻙ‬
‫‪ Lineweaver-Burk‬ﻭﺒﺈﻋﺎﺩﺓ ﺘﻨﻅﻴﻡ ﻤﻌﺎﺩﻟﺔ ‪ Michaelis-Menten‬ﻭﺠﻌﻠﻬﺎ ﺒﺸﻜل ﺨﻁ ﻤﺴﺘﻘﻴﻡ = ‪y‬‬
‫‪ mx + b‬ﻓﺎﻥ ‪-:‬‬

‫‪55‬‬
 ‫‪Vi‬‬ ‫]‪[S‬‬ ‫)‪……….. (1‬‬
‫=‬
‫‪Vmax‬‬ ‫]‪Km + [S‬‬
‫ﺒﻌﻜﺱ ﺍﻟﻤﻌﺎﺩﻟﺔ )‪ (1‬ﻭﻀﺭﺏ ﺤﺩﻱ ﺍﻟﻤﻌﺎﺩﻟﺔ ﻨﺤﺼل ﻋﻠﻰ ﺍﻟﻤﻌﺎﺩﻟﺔ )‪(2‬‬

‫‪Vmax‬‬ ‫]‪Km + [S‬‬

‫=‬
‫‪Vi‬‬ ‫]‪[S‬‬

‫‪1 = Km X 1 + 1‬‬ ‫‪………… (2) Lineweaver-Burk‬‬

‫‪Vi‬‬ ‫‪Vmax [S] Vmax‬‬

‫ﻟﺫﺍ ﻓﻌﻨﺩ ﺭﺴﻡ ‪ 1 /v‬ﻀﺩ ]‪ 1 / [S‬ﻨﺤﺼل ﻋﻠﻰ ﺍﻟﻤﻴل ‪Slope‬‬

‫‪Slope = Km‬‬
‫‪Vmax‬‬
‫ﻭﻓﻲ ﻤﺨﻁﻁ ﻟﻴﻨﻭﻴﻔﺭﺒﻴﺭﻙ ﻓﺎﻥ ﺍﻟﻤﺤﻭﺭ ‪ Y‬ﻴﻤﺜل ‪ 1 / Vi‬ﻭﺍﻟﻤﺤﻭﺭ ‪ X‬ﻴﻤﺜل ]‪ 1 / [S‬ﻭﺍﻟﻘﺎﻁﻊ ﻟﻠﻤﺤـﻭﺭ‬
‫‪ Y‬ﻴﻤﺜل ‪ 1 / Vmax‬ﻭﺍﻟﻘﺎﻁﻊ ﻟﻠﻤﺤﻭﺭ ‪ X‬ﻴﻤﺜل ‪-1 / Km‬‬

‫‪1‬‬ ‫‪Slope = Km‬‬

‫‪Vi‬‬ ‫‪Vmax‬‬

‫‪1‬‬
‫‪Vmax‬‬
‫‪-‬‬ ‫‪1‬‬
‫‪Km‬‬ ‫‪1‬‬
‫]‪[S‬‬

‫ﺸﻜل )‪ (16‬ﺭﺴﻡ ﻟﻴﻨﻭﻴﻔﺭﺒﻭﻙ ‪Lineweaver-Burk plot‬‬

‫ﻋﻨﺩﻤﺎ ﺘﻜﻭﻥ ﻗﻴﻤﺔ ‪ = 1/Vi‬ﺼﻔﺭ ‪ ،‬ﻓـﺎﻥ ‪ 1/ [S] = -1/Vmax‬ﻀـﺭﺏ ‪ Km/Vmax‬ﻭﻴﻜـﻭﻥ ‪-‬‬

‫‪ 1/[S] = 1/Km‬ﻟﺫﺍ ﺘﺒﻠﻎ ﻗﻴﻤﺔ ﺍﻟﻘﺎﻁﻊ ‪ -1/Km‬ﻋﻠﻰ ﺍﻟﻤﺤﻭﺭ ‪ X‬ﺍﻟﺫﻱ ﻴﻤﺜل ]‪. 1/[S‬‬
‫ﺍﻥ ﺍﻟﺘﺭﺍﻜﻴﺯ ﺍﻟﻤﺎﺩﺓ ﺍﻷﺴﺎﺱ ﺍﻟﻤﺨﺘﺎﺭﺓ ﻟﺘﻜﻭﻴﻥ ﺍﻟﺭﺴﻡ ﺍﻟﻌﻜﺴﻲ ‪ Reciprocal plot‬ﻴﺠﺏ ﺍﻥ ﺘﻜﻭﻥ‬
‫ﻗﺭﻴﺒﺔ ﺇﻟﻰ ﻗﻴﻤﺔ ‪ ، Km‬ﻓﺈﺫﺍ ﻜﺎﻨﺕ ﺍﻟﺘﺭﺍﻜﻴﺯ ﻋﺎﻟﻴﺔ ﺠﺩﺍﹰ ﻨﺴﺒﺔ ﺇﻟﻰ ﻗﻴﻤﺔ ‪ Km‬ﺃﺼﺒﺢ ﺍﻟـﺸﻜل ﺍﻟﺒﻴـﺎﻨﻲ‬
‫ﺃﻓﻘﻴﺎﹰ ﻓﻴﺼﻌﺏ ﻗﻴﺎﺱ ﺍﻟﺴﺭﻋﺔ ﺍﻟﻌﻅﻤﻰ ‪ . Vmax‬ﻭﻋﻨﺩﻤﺎ ﻴﻜﻭﻥ ﻤﻴل ﺍﻟﺨﻁ ﻗﺭﻴﺒﺎﹰ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﺼﻔﺭ ﻴـﺼﻌﺏ‬
‫ﻗﻴﺎﺱ ﺍﻟﺸﻜل ﺍﻟﺒﻴﺎﻨﻲ ﻗﺎﻁﻌﺎﹰ ﻜﻼ ﺍﻟﻤﺤﻭﺭﻴﻥ ﺒﺼﻭﺭﺓ ﻤﺘﻘﺎﺭﺒﺔ ﻤﻥ ﻨﻘﻁﺔ ﺍﻟﺒﺩﺍﻴﺔ ‪،‬ﻋﻨﺩﺌﺫ ﻴﻤﻜﻥ ﺤـﺴﺎﺏ‬
‫ﻗﻴﻤﺘﻲ ﻜل ﻤﻥ ‪ Km‬ﻭ ‪ Vmax‬ﺒﺼﻭﺭﺓ ﺩﻗﻴﻘﺔ‪.‬‬

‫‪56‬‬
 ‫ﻤﺴﺄﻟﺔ‪-:‬‬
‫ﺘﻡ ﻗﻴﺎﺱ ﺍﻟﺴﺭﻋﺔ ﺍﻷﻭﻟﻴﺔ ‪ Vi‬ﻟﻠﺘﻔﺎﻋل ﺍﻷﻨﺯﻴﻤﻲ ﻋﻨﺩ ﺍﺴﺘﻌﻤﺎل ﺘﺭﺍﻜﻴﺯ ﻤﺨﺘﻠﻔﺔ ﻤﻥ ﺍﻟﻤﻭﺍﺩ ﺍﻷﺴـﺎﺱ‬
‫ﻭﻴﻭﻀﺢ ﺍﻟﺠﺩﻭل ﺍﻟﺘﺎﻟﻲ ﻨﺘﺎﺌﺞ ﻫﺫﺍ ﺍﻟﺘﻔﺎﻋل‪ .‬ﺍﺤﺴﺏ ﻗﻴﻡ ﻜل ﻤﻥ ‪ Km‬ﻭ ‪ Vmax‬ﻤﻥ ﺍﻟﺸﻜل ﺍﻟﺒﻴﺎﻨﻲ ﺍﻟﺫﻱ‬
‫ﻴﺭﺒﻁ ‪ 1/Vi‬ﻀﺩ ]‪ 1/[S‬ﺤﺴﺏ ﻁﺭﻴﻘﺔ ‪.Lineweaver-Burk‬‬

‫]‪[S‬‬ ‫‪Vi‬‬ ‫]‪1/[S‬‬ ‫‪1/Vi‬‬

‫‪Moles/liter-‬‬
‫‪M‬‬
‫‪min‬‬
‫‪8.35x10⁻⁶‬‬ ‫‪13.8‬‬ ‫‪12x10⁴‬‬ ‫‪7.24x10⁻²‬‬
‫‪1.00x10⁻⁵‬‬ ‫‪16.0‬‬ ‫‪10x10⁴‬‬ ‫‪6.25 x10⁻²‬‬
‫‪1.25x10⁻⁵‬‬ ‫‪19.1‬‬ ‫‪8x10⁴‬‬ ‫‪5.23 x10⁻²‬‬
‫‪1.67x10⁻⁵‬‬ ‫‪23.8‬‬ ‫‪6x10⁴‬‬ ‫‪4.20 x10⁻²‬‬
‫‪2.0x10⁻⁵‬‬ ‫‪26.7‬‬ ‫‪5x10⁴‬‬ ‫‪3.75 x10⁻²‬‬
‫‪2.5x10⁻⁵‬‬ ‫‪30.8‬‬ ‫‪4 x10⁴‬‬ ‫‪3.25 x10⁻²‬‬
‫‪3.3x10⁻⁵‬‬ ‫‪36.2‬‬ ‫‪3 x10⁴‬‬ ‫‪2.76 x10⁻²‬‬
‫‪5.0x10⁻⁵‬‬ ‫‪44.5‬‬ ‫‪2 x10⁴‬‬ ‫‪2.25 x10⁻²‬‬
‫‪1.0x10⁻⁴‬‬ ‫‪57.2‬‬ ‫‪1 x10⁴‬‬ ‫‪1.75 x10⁻²‬‬
‫‪2.0x10-⁴‬‬ ‫‪66.7‬‬ ‫‪0.5 x10⁴‬‬ ‫‪1.50 x10⁻²‬‬
‫ﺍﻟﺤل‪-:‬‬
‫ﻋﻨﺩﻤﺎ ﻴﺒﻠﻎ ﺘﺭﻜﻴﺯ ﺍﻟﻤﺎﺩﺓ ﺍﻷﺴﺎﺱ ‪ 8.35x10⁻⁶‬ﻤﻭل ﻓﺎﻥ‪-:‬‬
‫‪1‬‬ ‫‪1‬‬
‫=‬
‫]‪[S‬‬ ‫‪8.35x10⁻⁶‬‬
‫‪= 0.12 x 10⁶‬‬
‫‪= 12 x 10⁴‬‬

‫ﻭﺒﺎﻟﻁﺭﻴﻘﺔ ﻨﻔﺴﻬﺎ ﻴﻤﻜﻥ ﺤﺴﺎﺏ ﻗﻴﻤﺔ ‪ 1/Vi‬ﻓﻤﺜﻼﹰ ﻋﻨﺩﻤﺎ ﻴﻜﻭﻥ ﺍﻟﺘﺭﻜﻴﺯ ]‪ 5.0x10⁻⁶ = [S‬ﻤﻭل ﺘﺼﺒﺢ‬
‫ﻗﻴﻤﺔ ‪ 44.5 = Vi‬ﻤﻴﻜﺭﻭﻤﻭل‪/‬ﻟﺘﺭ‪/‬ﺩﻗﻴﻘﺔ‪.‬‬
‫‪1‬‬
‫‪= 1 = 0.0225 = 2.25x10⁻²‬‬
‫‪Vi‬‬ ‫‪44.5‬‬

‫‪57‬‬
 ‫‪10‬‬
‫‪9‬‬
‫ﻗﺎﻃﻊ ‪y‬‬
‫‪1 (M.min⁻¹)⁻¹x10⁷ 8‬‬ ‫= ‪Slope = Km‬‬
‫‪7‬‬ ‫‪Vmax‬‬ ‫ﻗﺎﻃﻊ ‪-x‬‬
‫‪V‬‬
‫‪6‬‬
‫‪5‬‬
‫‪4‬‬
‫‪3‬‬
‫‪1‬‬
‫‪1‬‬ ‫‪2‬‬ ‫= ‪1.25x10⁷‬‬ ‫اﻟﻘﺎﻃﻊ =‬
‫‪ 1‬اﻟﻘﺎﻃﻊ = ‪-2.5x10⁴ = - Km‬‬ ‫‪Vmax‬‬
‫‪1‬‬
‫‪M⁻¹ x 10⁻⁴‬‬
‫‪-10‬‬ ‫‪-8‬‬ ‫‪-6‬‬ ‫‪-4‬‬ ‫‪-2‬‬ ‫‪0‬‬ ‫‪2‬‬ ‫‪4‬‬ ‫‪6‬‬ ‫‪8‬‬ ‫‪10‬‬ ‫]‪[S‬‬

‫ﺸﻜل )‪ (17‬ﺍﻟﺭﺴﻡ ﺍﻟﺒﻴﺎﻨﻲ ﺒﻁﺭﻴﻘﺔ ‪ Linewearver-Burk‬ﻟﻠﺘﻔﺎﻋل ﺍﻷﻨﺯﻴﻤﻲ ﺒﻭﺠﻭﺩ ﺘﺭﺍﻜﻴﺯ ﻤﺨﺘﻠﻔﺔ ﻤﻥ ﺍﻟﻤﺎﺩﺓ‬
‫ﺍﻷﺴﺎﺱ‪.‬‬

‫ﺍﻟﻤﺤﻭﺭ ]‪ 1/[S‬ﻴﻘﺼﺩ ﺒﻪ ﺍﻟﻤﻭﻻﺭﻴﺔ ﺍﻟﻌﻜﺴﻴﺔ ﻭﺍﻟﻌﺎﻤل ﺍﻟﻤﻀﺎﻑ ‪ 10⁻⁴‬ﻴﻘﺼﺩ ﺒﺄﻨﻪ ﻜل ﻗﻴﻤﺔ ﻤﻥ ﺍﻟﻘـﻴﻡ‬
‫ﺍﻟﻌﻜﺴﻴﺔ ﻗﺩ ﺘﻡ ﻀﺭﺒﻬﺎ ﻓﻲ ﺍﻟﻘﻴﻤﺔ ‪ 10⁻⁴‬ﻭﺤﺴﺏ ﺍﻟﺸﻜل )‪ (17‬ﻓﺎﻥ‪-:‬‬

‫‪1‬‬
‫‪10⁷x1.25 =Vmax‬‬
‫=‬ ‫ﺍﻟﻘﺎﻁﻊ‬
‫‪1‬‬
‫‪= Vmax‬‬
‫‪10⁷x 1.25‬‬

‫= ‪10⁻⁷x 0.80‬‬
‫= ‪ 10⁻⁹x80‬ﻤﻭل ‪ /‬ﻟﺘﺭ‪ .‬ﺩﻗﻴﻘﺔ‪¹⁻‬‬

‫‪1‬‬
‫‪10⁴x 2.5 -= Km‬‬
‫‪-‬‬ ‫ﺃﻤﺎ ﺍﻟﻘﺎﻁﻊ‬
‫‪1‬‬
‫‪10⁴ x 2.5 = Km‬‬

‫= ‪10⁻⁴x 0.4‬‬
‫= ‪ 10⁻⁵x 4‬ﻤﻭل‬

‫‪58‬‬