-En qué consiste la dualidad musical de Silent Hill?

Qué estilo musical influencia principalmente la OST de donkey Kong? A qué compositor
homenajea? Qué elementos extramusicales suele incluir? A partir del minuto 8

-Cómo gebnera dinamismo el tema de batalla de FFVII

Bioceramics incorporating hydroxyapatite or calcium phosphates are able to integrate well with
bone tissue and have a high compressive strength. However, such ceramics do not in themselves
stimulate bone formation (osteoinductiv- ity), and while increased porosity facilitates greater
penetration of new bone formation, complete resorption of a ceramic scaffold material is rarely
observed.

Hydrogels—They are hydrated polymer chains, while alone they have not been shown to enhance
bone formation; they have been used effectively in the delivery of cells and growth factors

bone regeneration rates can be elevated by the upregulation of the HIF-1α/VEGF pathway. the
combination of BMP-2/VEGF (en biocomposites poe ejemplo) has the ability to influence stem cell
homing and differentiation leading to enhanced bone regenerative outcomes

the concomitant delivery of human osteoprogenitors and endothelial cells via an alginate
microsphere delivery system can promote sig- nificant bone healing

hydroxyapatite in combination with allograft and tricalcium phosphate/hydroxyapatite alone

(Whitehouse et al., 2013) are capable of producing good medium-term results

In summary, Clinical demands are diverse, and optimal properties for syn- thetic bone will vary
accordingly. While the use of synthetic engineered bone products in some clinical applications is
supported by randomized controlled trials, the development of cell loaded and vascularized
construct that could be implanted into a segmental bone defect remains a distant dream. Thus far
“low tech” approaches to bone engineering involving the intraoperative application of bone
marrow aspirate to synthetic graft material appear to have shown most success in clinical
translation.

the future chal- lenge for regenerative medicine will center on the ability to scale up bioengi-
neered vascularized grafts for clinical applications. The implantation of graft substitutes with
temporospatial growth factor release adaptations with seeded stem cells may well be the way
forward to promote revascularized bone regen- eration, but another strategy where bioartificial
bone grafts are prevascularized prior to implantation to the sites of a bone defect could have very
positive outcomes. iMPORTANCIA de un buen Blood Supply.

Pooling of zonal chondrocytes from different regions is an acceptable source for chondrocytes to
be used for cartilage tissue engineering. There is, as yet, no ideal scaffold for cartilage
engineering. In small

defects in vitro, developed mature osteochondral constructs may be used in the future instead of
autologous osteochondral plugs with or without cells. In larger defects, hyaluronan-based
scaffolds in combination with chondrocytes is an option that could be further evaluated.

to date, a single unique cell surface maker for the SSC remains elusive.

…..

In comparison to auto- grafts, allografts are less osteoconductive, less osteoin- ductive, and are
not osteogenic

DBM-based (matriz decelularizada) bone graft substitutes have limited osteo- conductivity, no
osteogenicity, and mechanical proper- ties that are less than the desirable range.

Natural polymers; collagen matrix that has been coated with hydroxy- apatite, coating it with bone
marrow aspirate. Osteogenic in addition to being osteoconductive. Not evidence of
osteoinductive, and it has poor mechanical properties. excellent osteoconduction; however,
osteoinduction, osteogenicity, and mechanical properties are less than those provided by
autograft tissue.

Synthetic Polymers; more control over the surface chemistry, degradation kinetics, and geometry.
Policaprolactona. the scaffolds degrade in a controllable manner and they are all osteoconduc-
tive. the resulting materials are not osteoinductive nor are they osteogenic without supplementing
the structure with growth factors or osteoblastic cells. nanofibers may promote osteoinduction.
improve the osteocon- ductivity of polymers through the incorporation of integrin binding
peptides, such as RGD. A noted drawback of poly(α-hydroxy esters) is that they degrade into
carboxylic acids, which can be immunogenic. An additional drawback to the usage of poly(α-
hydroxy esters) is that they undergo bulk degradation, which results in sudden failure of the
scaffold. Poly[(amino acid ester)phosphazenes] degrade into amino acids, which are much easier
for the body to metabolize.

These ceramic biomaterial are made from tricalcium phosphates, hidroxiapatita, and Bioglass,
wich is bioactive, and undergoes dissolution in the body. are also osteoconductive.
osteoinductive is a controversial topic. Osteoinduction appears to occur, it is a property of the
microstructure of the material not the ceramic itself. More osteoinduction with sub cellular
microsctructure. Bioglass® fiber mats have been shown to be osteoconductive, and promote
phenotype progres- sion of preosteoblast cells, which suggests they may be osteoinductive.

The transplantation of autogenous stem cells (bone marrow aspirates) provides osteogenic
potential to the defect, but does not provide osteoconductivity, osteo- inductivity or mechanical
strength. Si las cultivo in vitro para que hayan más, también aumento la probabilidad de infección
por bacterias. Si las modifico para que expresen BMP-2, entonces osteoinductive as well as
osteogenic. Lo mejor; usar un bioreactor to produce a viable piece of bone tissue ex vivo, but
there’s the issue of developing a vascularized construct, that has not been solved.

Grow factors; recombinant human bone morphogenetic proteins 2 and 7, rhBMP-2 and rhBMP-7.
osteoinductive potential. packaged with some sort of carrier, often as simple as a collagen
sponge, mejor que un autograft. The primary limitation es el coste alto del producto.

La mejor combinación de todo lo anterior; composite encountered consists of a biomaterial

structure seeded with osteoblasts or osteo- blastic cells. DBM with bone marrow aspirate from
the patient ex vivo. combines the osteo- genic potential of the progenitor cells in the bone mar-
row aspirate with the osteoinductive and osteoconductive properties of the DBM. comparable to
an autograft in formation of bone. Another is seeding a porous polymer scaffold created by
selective laser sintering of poly(caprolactone) with fibro- blasts transfected to express bone
morphogenetic pro- tein-7, BMP-7

MIcroesferas; Gas foaming and porogen leaching do not have the same level of reproducibility,
due to variation intro- duced by having multiple phases.

Evidence suggests that nanofibers exhibiting a three-dimensional spatial arrangement promote

phenotype progression of osteoblasts, and may be osteoinductive. Producing a three-dimensional
nanofibrous mechanically viable implant could be a tremendous leap forward in the field of bone
tissue engineering.

Cerámicas porosas son extremadamente fragiles. Se usan para liberar facteoes de crecimiento
pero de forma maciza, sin el poro.

Alginato interacciona poco con las células, pocas secuencias de adhesión, pero retiene muy bien
las células. Lo bueno que tiene es que es reversible con el Calcio. Puedes liberar células. Usado
en Cartílago y biopancreas artificial.

HA gran peso molecular, gelifica solo con poca cantidad. En implante neural.

Colageno, se parece mucho entre especies. Tiene a formar fibras a PH7.

Fibrina-coagulo natural. Fibrina se degrada rapido, pero expresa integrinas, funcionalizando la

célula en un principio aunque luego se degrade.

PAra que el acido láctico y glicolico no cristalicen con facilidad, se utilizan de manera conjunta
como copolimeros porque para cristalizar necesita regularidad, así que degrada más rapido,
biodegradables más veloces (suturas).

Policaprolactona es como el anterior pero con muchos más grupos metilo. Resultado; degrada
mucho más lento.

……

Los polímeros por lo general no son miscibles entre ellos.

Copolimeros en bloque con capacidades distintas; absorber agua y no. AAABBBB. Parte hidrófila
parte hidrofoba que se esconde formando micelas. Proteínas autoensamblables; proteina-
polimero-ligando, se pliega.

Liberación de fármacos al intestino que pase por el PH del estomago sin liberarse. Liberación
insulina sensible a la glucosa.

Cuanto mayor es el peso molecular, cuando se disuelve en un disolvente Mas viscosa resulta la
disolución. Los muy grandes con muy poca cantidad son viscosos o pegajosos, moco. Hialuronic
Acid. Con poca concentración retiene mucha agua que circula por el organismo.

Movilidad conformaciones; existe un isomerismo rotacional, las estructuras que se conforman no

son las de minima energia, sino las que se alcanzan con mayor facilidad. El resultado es que los
polímeros cuando tienen capacidad espacial para saltar estas barreras e energia, van cambiando
de unas posiciones a otras y al girar en torno a los enlaces de la cadena principal, todo lo demás
se mueve y se forma como un ovillo al estilo movimiento browniano. Si das un paso al azar en un
sentido y luego al azar en otro estadísticamente acabas donde has empezado. Esta es la
estructura del polímero en fase LIQUIDA, cuando no está en estructura cristalina.

Si tenemos una cadena muy larga cuando se ovilla forma estructuras mas grandes y al revés.

Se entrelazan unos con otros. Madeja de hilos de coser más que plato de spaguettis (no deslizan
a no ser que los disolvamos).

Esto quiere decir que Polímeros de alto peso molecular en bloque son como las redes
poliméricüas. Se forman uniones entre las cadenas.

El polimero no tiene libertad de movimiento suficiente para cristalizar solo. Habría que desovillar
el ovillo y ponerlo en paralelo a otra cadena que ademas no es irregular (imperfecciones) y
longitudes distintas, jodido para la red cristalina.

Nunca será 100% cristalina, siempre tendrá una parte amorfa que es LÍQUIDA.

Los polímeros se organizan intentando hacer los ue hace. El texano opero de forma imperfecta.
Estira la cadena lo que puede, pero no puede del todo, más bien ZigZag. De esta manera todo lo
que es imperfecto en la cadena lo deja fuera. Queda una lamina de un espesor X con zonas
amorfas en medio de las capas cristalinas.

El polifacético cristaliza un 30%.

La forma de que no cristalice es hacerlo irregular, meterle a la cadena imperfecciones. Nos puede
interesar que el acido polilactico cristalice menos para tener más flexibilidad, enfriándolo a una
velocidad mayor. Si introducimos cadenas de polifacético D entre el L ya cristaliza menos. Si le
cuelgas ramificaciones también.

La movilidad conformaciones es lo que le da la capacidad de estirarse y volver al sitio.

Vítreo; un líquido que sus partes no tienen energía suficiente para desplazarse y actuar como
solido. Paciencia de algo que es solido pero en realidad es líquido (vídrio). Transición vítrea entre
el estado de goma (líquido) y vítreo. Cada polímero tiene la suya.

Pequeños cambios en la estructura química hacen grandes cambios en la movilidad (transcicion

vítrea) de un metilo a un hidrogeno la transición. Pasa de 110º a solo 10º ya pasa a vitreo, PVC
por encima de 80º es una goma, cuando sube la temperatura por encima de la transición vitrea,
enfriar y se queda en esa posición; memoria. Solo por aumentar la temperatura recupera la forma
de antes de que la hayas estrado.

Policaprolactona; La parte cristalina es rigida, pero la parte amorfa es goma (se pueden mover los
cristales) ya que su transición vítrea esta en -60º. Es mas moldeable. Ácido polifacético es todo
rigido.

Viscoelasticidad; los polímeros responden poquito a poquito a la deformación por una fuerza
externa, no se deforman en el momento y ya esta como el metal. SE producen giros en torno a
sus enlaces, aquello que tropieza (cadenas laterales) se apartan y permite mas deformabilidad. Si
lo dejamos mas tiempo las cadenas principales también se mueven y toda la estructura se
deforma (relajacion principal). Depende del tiempo, y se comportará como una goma o como aun
vídrio. Si le doy mucho tiempo (aprieto con la mano) lo modelo irreversiblemente, si le doy poco
tiempo (lo lanzo contra el suelo y rebota) estoy en escala de goma, si la disparo por un fusil estoy
en escala de vidrio.

Biodegradable.

………

Cultiva varios tipos celulares y en scafflods 3D. Lo más difícil es conseguir la hematopoyesis y
stem cells indiferenciados estable en el tiempo.

….PIEL

El problema de extraer células madre de la piel de biopsia, es que hay muy pocas, tenemos que
cuotivarlas. También podemos sacarlas del bulbo del pelo.

Método Rheinwald¬green (epicel), tarda 3 semanas y es muy fragil, a veces se ponen fibroblastos
de raton para que proliferen más, posible contaminación. NO conecta bien la epidermis con la
dermis y se puede desprender.mpoca matriz secretada.

Usar algo de matriz extracelular para dar consistencia suspendiendo los keratinocitos en geles de
fibrina, que cubren la herida. O embeber las células en gel de fibrina, o crear el gel de fibrina,
poner la capa de células hasta que lleguen a confluencia e implantar.

Spray de keratinocitos con fibrinogeno que coagula en forma de fibrina, los mantiene pegados
para asistir.

La fibrina degrada muy rapido y no tiene mucha consistencia, se buscan alternativas de

membranas polimericas como transporte que luego se quitan. O scaffolds biodegradables que no
hay que quitar porque se absorben.

Membranas polimericas para sustituir la fibrina->soportes porosos mayor en la zona profunda y

capa sin porosidad en la superficie (membranas semipermeables de silicona a veces) para hacer
de barrera y evitar colonización de bacterias. Las células penetran hasta los poros o se siembran
ahi, tiene flexibilidad mecanica y permeables al O2, absorben el exudado de la herida. Diferencia
con fibrina, el soporte mecánico que da a los keratinocitos (Hyalomatrix). Basado en HA.
Protegen hasta que regenera y luego se QUITA.

Spray de fibrina (Recell) busca células autologas los prolifera, se ponen en jeringas de spray
suspendidas en fibrina, y se sueltan en la herida para ayudar a regenerar.

Para la DERMIS->necesitas más propiedades mecánicas y prevenir la contracción de la herida.

Biobrane; membrana exterior de silicona (que es permeable al O2) que protege, capa maraña de
Nylon debajo con pepitos de colageno I para favorecer la adherencia a la herida. Esto favorece la
proliferación de fibroblastos y capilares. NO sembramos células, solo protege la herida y le da
integridad mecánica, los fibroblastos del tejido huésped la invaden para regenerar la piel.
Conforma la piel se va regenerando, la membrana se va pelando y se quita. NO biodegradable,
solo asiste la regeneración.

Transcyte->misma membrana de nylon+silicona, pero van precolonizados por células y

fibroblastos allogenicos que hacen matriz extracelular. Luego se congela para destruir esas
células y au, así promueves la regeneración y vascularización. La parte no biodegradable
(silicona+nylon) se va pelando. Tienes los pepitos de colageno del nylon + matriz.

Dermagraft->Polimeros PLGA biodegradables para no tener que pelar. Recubrimiento

antibacteriano.

Integra (dermis+Keratinocitos)->No tiene el nylon, así que es todo biodegradable. Solo parte de
silicona+colageno (o CS) para proteger de bacterias. Se puede hacer autoinjerto de keratinocitos
transplantados para regenerar también epidermis. Como los keratinicitos tardaban 3 semanas en
cultivarse, primero pones Integra y mientras vas proliferando keratinocitos, cuando quitas la capa
de silicona porque la dermis ha regenerado, pones los keratinocitos.

Alloderm->Matriz de cerdo decelularizada para dermis, promueve colonización fibroblastos y

vascularización, y luego se ponen keratinocitos como siempre para epidermis.

Regeneración 1 etapa pensando en las 2 capas (epi+dermis)->COMPOSITES. Fibroblastos

embebidos en scaffold biodegradable para dermis cultivados con keratinocitos en capa
superficial. Apligraft; membranas colageno para epidermis, Demagraft; PLGA scaffold para la
dermis a la vez.

De biopsia extraigo keratinocidos para cultivar en membrana y fibroblastos para cultivar en

scaffold y los cocultivo para que secreten matriz.

Trabajar más en costres, vascularización, bioimpresión para personalizar. No esta resuelta la

aparición de nervios, pelos, etc. Tacto. Mejorar el poder antibacteriano. Evitar las membranas que
hay que quitar porque quede evitar. Regeneración de epidermis, sustancias antibacterianas en
vez de membranas.

…..HUESO

Policaprolactona y poliláctico degradan lento. Se degrada primero la parte amorfa del polímero
antes que la cristalina.

Tamaño de poro grande para favorecer la vascularización (300-400micras). Acompañar con BMP
y VEGF. Cocultivo de 2 tipos celulares, uno para vascularizar y otro para hueso.

Se suelen usar MSC o del tejido adiposo a sembrar en el scaffold más rápido que esperar
migración del tejido huésped (más lenta y pobre).

Scaffolds de Huesos de humano/bovino->Material acelular preservando la matriz, pero se pierden

factores de crecimiento. Más disponible que autoinjertos, pero puede haber infección y se
reabsorbe a toda leche. NO ostegenicos, menos osteoconductivos-inductuvos que autoinjertos.

Sustitutos cerámicos->Fosfato de sodio/calcio imitando hidroxiapatita. Beta fosfato tricalcucico

(TCP) o bioglass. Muy bioactivos sin formación de cápsula fibrosa. Lo malo es que son más
frágiles (son ceramicas) y se absorben a tiempos inadecuados; hidroxiapatita sintética nada y el
trifosfato clásico a toda leche. Se combinan para paliar esos tiempos.

Mastergraft->15%HAp y 80% TCP. Granos con porosidad. Diametro de poro grande para
vascularizacion y gargantas de conexión.

Fallan en la parte elástica que les conferiría rigidez de matrices orgánicas (colágeno).

Membranas de origen natural (gelatina, quitosano)->Productos blandos. Fallan en las

propiedades mecánicas adecuadas, ahora no son frágiles sino demasiado blandas.Pueden tener
ligadnos de unión a integrines para adherir celulas. Se pueden cargar con BMP-2.

Membranas osteoregenerativas mejor porque regeneran, mientras que las partículas de colageno
solo preservan.

Lo mejor Scaffolds de polímeros sintéticos semicristalinos con capacidad para moldearse en

impresión 3D->Intentan imitar la matriz natural (colágeno+Hap) Juntan la dureza de la Hap con la
elasticidad del colágeno. Policaprolactona con Hap o con TCP. PLC otorga las propiedades
mecánicas que otorgaría el colágeno (flexibilidad) y la Hap o el TCP la bioactividad.

La impresión 3D permite adaptarse al defecto y adaptar el tamaño del poro. Compras PLC la
fundes y la mtes al 3D. Poros favorecen la mineralización.

Materiales bioactivos (que se unen al hueso)->Cuando tienen Hap o TCP. Comprobarla con test
de SBF (suero fluido humano). Empiezan a precipitar sales de este fluido en el scafold de forma
ordenada (Ca y fosforo), formando Hap natural. Cómo? Protones saltan y se cargan
negativamente el O para que precipite el Ca+, ahora precipitan fosfatos cargados negativamente,
y eso atrae al Ca+ otra vez… etc. Estos recubrimiento de Hap es lo que se une al hueso.

Scaffolds de PLLA (ácdido polilactico)->rellenos de Hap para ser bioactivos. Pones los scaffolds
en SBF antes de implantarlos para comprobar que es bioactivo. Cuando tenían Hap le forman
más estructuras de coliflor ricas en Ca y Phosforo.

Si el scaffold es puramente PLLA se forma sobre todo colágeno tipo 1, pero desorganizado.

Si el scaffold lleva también Hap relleno pero no recubierto, el colageno se organiza un poco mejor.

Si la superficie de los poros del scaffold se hizo bioactivo porque se sumergió el PLLA/Hap en
SBF, el colageno del interior de los poros se organiza en ostiones formando hueso compacto.

Scaffolds biocompatibles de huesos de sepia->Alta porosidad de gran tamaño, pero tiene

aragonita en vez de Hap, el humano rechaza la aragonita. Descelularizar y convertir aragonesa en
Hap compatible. Se cubre de policaprolactona para conferir características mecánicas. Reciclado
de la naturaleza en scaffolds de PLC/Hap. Si salen coliflores es que la Hap se ha convertido bien
desde la aragonita. La PLC es como una piel fina recubriendo la Hap que aumenta las
propiedades mecánicas sin colapsar los poros.

El hueso de sepia original colapsa piso a piso. Si solo lo convirtiera en Hap, perdería toda
propiedad mecánica (no resiste nada). Con el refuerzo de PLC me aguanta.

….

En cartílago no necesito un scaffold que degrade de todo. Implante.

Scafolds porosos->Si tengo poros muy pequeños, el scaffold me aguanta mejor, pero la
vascularización se ve comprometida, así como la penetración celular y la creación de ECM. 90%
de porosidad es lo ideal, en hueso 200-400micras, si el poro es más grande empiezan a crecer
como si estuvieran en monocapa y pierden el 3D.

Scafolds fibrosos->Para piel, cartilago, hueso… morfologia celular similar a in vivo dado al
pequeño tamaño de las fibras. Guias para regeneración neural. Formadas por electrospinning y
autoensamblaje, que requiere de poner cuidado a la hora de diseñarlo pero se controla mejor el
tamaño que en separación de fases.

Fibras random mejoran la solidez, pero fibras guiadas ordenan el tejido. Alineadas inducen MSC y
random inducen osteoblastos. Podemos combinar ambas para generar tejido tendon-hueso.

Debemos funcionalizarlas con ligadnos debido a la falta de grupos funcionales de las fibras.

En general las fibras suelen pecar de poco grosor y tamaño de poro pequeño.

MIcroesferas->Utilizados en drug delivery por su capacidad smart release gracias a stimulus

biomoleculares. Bajo peso molecular, release más rapido, alto peso, más lento. Hay que ponerlas
con factores que estimulen la vascularización.

Scafolds diseñados por ordenador permiten adecuarse a defectos del paciente. Caro y difícil
manejar celulas.

Scaffolds sintetico 3D->permiten control de propiedades mecánicas y arquitectura que los

naturales no permiten. Polímeros sintéticos, metales, ceramicas, ciomposites… Biodegradables o
no.

Hydrogeles->Cadenas de Polímeros hidrofílicos unidas (covalentemente o no). Absorben mucha

agua sin disolverse, a diferencia de los polímeros que son más solidos. En el estado de absorción
son suaves y elásticos. Cuanto más cross-linking, menos se hinchan. Lo malo que tienen que a
veces pueden ser inunogenicos, citotoxicos, transmitir patógenos, difíciles de purificar y
propiedades mecánicas limitadas y no tienen motivos de unión aunque se pueden añadir. Se
pueden inyectar para adaptarse al defecto.

Los smart pueden responder a estímulos físico-químicos que determinan su hinchado, y pueden
actuar por ejemplo como músculo artificial. Pueden inmune-aislar células transplantadas mientras
permiten intercambio gaseoso. Su putada es la toxicidad.

Scaffolds naturales->Lo bueno es que ya tienen factores de señalización (para interinas) y grow
factors en las ECM. Decelularización deja el camino hecho para vascularización y dirige migración
celular. El problema que si lo haces de humano normalmente esta la matriz vieja o enferma y si lo
haces de animal tienes inmunogeneicidad posible. Otro problema la poca homogeneidad en
distribución celular. Lo bueno que produce sustancias quimiatractoras de stem cells mientras se
degradan en el defecto. . The fetal ECM provided a better microenvironment for pro- liferation,
while adult ECM was advantageous for chondrogenic and adipogenic differentiation. However, all
these costly and time-con- suming.

Ventaja de la PLC; PCL has a total degradation of two to four years.

thinning of the polymer over time without affecting the molecular weight of the internal bulk of the
polymer which would generally remain unchanged over the degradation period (Figure 3a). The
advantage to this type of erosion is the predictability of the process, giving desirable release
vehicles for drugs as release-rates can be predetermined.

The rate of hydrolysis can be altered by copolymerisation with other lactones or glycolides/
lactides.

The days of its utilization as a drug delivery device have been surpassed by the realization that
PCL may be processed into composite structures with superior mechanical and biocompatible
properties compared to the polymer on its own.

production of longer-term degradable implants which may be easily manipulated physically,

chemically and biologically to possess tailorable degradation kinetics to suit a specific anatomical
site

Se usaba mucho en drug delivery y como ya estaba aprobada por la FDA, de lujo.

bone regeneration within mPCL-TCP scaffolds implanted alone and those implanted in
combination with autologous bone marrow precursor cells was significantly different – with
enhanced bone regeneration observed via the incorporation of cells. PLC otorga las propiedades
mecánicas que otorgaría el colágeno (flexibilidad) y la Hap o el TCP la bioactividad.

….

En HUESO; In particular, the supply of oxygen and nutrients to the cells in the inner part of the
implanted scaffolds remains a major concern,

The use of human cadaver or animal bone grafts from bone banks prevents the problem of the
donor site morbidity, but presents the potential risk of viral or bacterial infections and of an
immune response of the host tissue

Para evitar infecciones; Using an antibacterial biodegradable PLLA coating on titanium plates,
although biocompat- ibility of the coatings still has to be fully exploited. Addition of antibiotics to
bone cement.

Otros scaffolds; calcium phosphate ceramics and bioglasses, which have also the advantage of
an unlimited availability. good osteoconductive properties, but they are not osteoin- ductive, thus
limiting their application to repair large bone defects.

The four major categories of BMP carrier materials are natural polymers, inorganic materials,
synthetic polymers and composites of these materials. BMP fail if the vitality and the number of
the patient’s multipotent cells are insufficient or if the patient is aged. Problemas BMPs; higher
concentrations are needed, unstable chemistry (dificultades para incorporarse en carriers), short
time of residence at the site of the lesion (se van al flujo sanguineo), severe limitations in the gene
therapy. Contraindicated in patients who are pregnant, who may be allergic al carrier, que tienen
infección, tumor en la zona o inmaduros esqueleticamente hablando.

Scaffold + Stem cells->osteogenic committed cells are combined with an osteoconductive

scaffold. HAp and other calcium phosphate- based ceramics por su capacidad de integrarse con
el hueso.

the way in which the cells are distributed over the scaffold affects the ultimate bone-forming
ability of the transplant. Constructs where seeding of the cells was restricted to the outmost
peripheral layer of the scaffold formed more bone than constructs in which the cells were
distributed throughout the implant.

A progressive growth of bone from the periosteum remnants to the inner part of the scaffold was
observed. At the same time a progressive reduction in the quantity of the scaffold material was
also observed, suggesting that these two processes were inter- related in a similar way to the
normal bone remodeling process. sIN EMBARGO; absence of scaffold resorption in the cell-
empty constructs. PARA QUE SE REABSORBA NECESITO CELULAS PLANTADAS.

bone formation occurred preferentially at the periphery of the scaffold. This may reflect the slow
and inadequate vascularization of the inner portions of the constructs.

in vitro osteogenic induction of BMSC, prior the implantation, facilitated bone formation in the
implanted constructs.

Se puede implantar el scafold en una parte para que vascularice como biorreactor y luego
transplantar a donde sea. Se pueden usar mandibular periosteal cells aparte de las MSC.

Aún hay que comparar entre etween unfractionated bone marrow and in vitro expanded BMSCs

Coger células de la Bone Marrow mola, pero es complicado. harvest pluripotent mesenchymal
cells from other tissue sources, such as periosteum or adipose tissue via liposucción.

EQUILIBRIO HAP/TCP: Biocera- mics composed of 100% HA provide high strength to loading
but are not resorbed and reside in the defect for several years after callus formation. On the
contrary, scaffolds mainly composed of tri-calcium phosphate have a greater capacity to be
resorbed but they are too fragile to sustain the weight load.

Alternativa para vascularizacion correcta; the bone–muscle-flap in vivo prefabrication technique

can be considered in place of the direct implantation of a ceramic scaffold seeded with
osteogenic cells.

….Practicas

Importancia de evitar grow factors en condrogenesis; rowth factors can also induce osteogenesis,
cost inefficient and not clinically attractive, the release of growth factors from hydrogels is usually
not sustained unless they are chemically modified. Cuantos más kPa apliques, mas osteogenico y
menos condrogenico, rigidez de 0,5 kPa ideal. Cambiando la rigidez del gel cambiamos el linaje
de diferenciación.

The hybrid Gel−HA matrices mimic the composition of the ECM and combine the cell adhesive
chains of Gel (containing RGD sequences) with HA chains that are more rigid than Gel, provide
stiffness, have a lower degradation rate than Gel, and induce chondrogenesis.

The mechanical stiffness of hydrogels depends on the cross- linking degree, the water content,
the chemical composition, the rigidity of the chains, and the water permeability coefficient.
Because HA has a lower cross-linking degree, it would be expected that hydrogels with a higher
HA content would have a lower shear modulus. However, this is not the case because hydrogels
with a higher HA content have a higher mechanical modulus and a higher swelling degree (Figure
2A,D). The rigidity of HA chains in water and the lower hydraulic permeability of water from HA
would explain an increase in the storage modulus of the hydrogels from 172 Pa for pure Gel to
789 Pa for pure HA (Figure 2A)21,25 as the ratio of HA in the mixtures increases.

Overall, the 30/

Diferenciación in vitro de MSCs a condrocitos

Factor de transcripción SOX-9 à primera

evidencia de diferenciación condrogénica

Colágeno tipo II y agrecano à proteína y

glicoproteína características de la ECM del

100 μm

Matriz extracelular rica glicosaminoglicanosàCondrocitos maduros (Tinciones Alcian Blue)

cartílago, secretadas por los condrocitos. Proceso de diferenciación avanzado

La expresión de interinas ß1 hace que las células se queden detenidas en G0 o G1 y se protegen

de fármacos antimitoticos. Fármacos inhibidos de integrinas.

Separarmos celulas con CD34+ para celulas madre.

Hay que hacer cocultivo de los distintos tipos celulares y usar modelos 3D. Hayq eu equilibrar la
velocidad de expansion de las células hematopoyeticas (poquitas) con la de las mesenquimales,
osteoblastos y demás.

Scaffolds hechos con esferas de poliestireno que tienen todas el mismo diametro. Pegadas para
que tengan gargantas de conexión. Luego meto el material y disuelvo las esferas.

Primero pongo en el scaffold el tipo celular que mas cuesta expandir (células mesenquimales) y
las pongo a expandoir, luego pongo las hematopoyeticas para conseguir que algunas se
diferencien (linfo B) y otras se mantengan hematopoyeticas. Cultivo secuencial.

En un aspirado de medula ósea tiene solo una pequeña parte de MSCs que separas por adhesión
de mononucleadas. Los medios adecuados para las hematopoyeticas no son adecuados para las
mesenquimales, así que tenemos que elegir qué expansionar.

Modelo de enfermedad->Hacer esferoides heterotípicos, y que las interacciones entre las células
formen su propio entorno. Aspirado de medula ósea del paciente para células tumorales, MSCs
de lineas celulares (no son del paciente) y células endoteliales de linea celular.

Podemos hacer lo mismo pero con un Scaffold->Céliulas adherentes, + endoteliales de huvec

+cmesenquimales e linea celular (por cuestiones de tiempo de expansión, ya que si no las del
cancer proliferan). NO se suelen coger lineas celulares del mieloma (cancer) por la
heterogeneidad del tumor. Scafold de fibrina de hilos de seda. Las mesenquiumales se adhieren a
las paredes del poro,ylas plasmaticas a las mesenquimales, inhibiendo la osteogenesis debido a
los grow factos que sueltan, yn les obligan a soltar IL6 a loas MSCs induciendo resistencia a
farmacos.

Modelo en microesferas->estudiar la interacción de las plasmáticas con la ECM. Cultivo en

suspensión le metemos un microgel en bolitas funcionalidad con biomoleculas de la ECM de la
medula osea (colageno, HA, CS… candidatos a generar resistencia a farmacos) comprobamos si
la presencia de una molécula u otra hace que la supervivencia de las plasmáticas aumenta o
disminuye. El HA aumenta la resistencia al farmaco, la fibronectina también, para los ciclos
celulares. La idea es identificar con claridad que moléculas interfieren. Luego microcarriers
adherentes donde se puedan sembrar MSCs para ver como afectan estas tambien. Célukla-ceula
o celula-matriz.

….

El problema de polímeros sintéticos es que no tienen las moléculas de adhesiones de superficie

de los naturales, razón por la cual a los naturales se les hace más caso, aunque son
mecánicamente inferiores. Se hidrolizan rápido y se desplazan de donde los pusiste. Para
compensar se añade gelatina con RGD (atrae fibroblastos) que da mas consistencia; ejemplo
Gelatin-HA polymer-

Alginato no tiene motivos RGD así qu ele tenemos que poner si queremos adherencia. Se puede
abrir y cerrar con quebrantes de calcio.

La actividad biologica del HA depende de su peso molecular. Si es grande, es más anti-

inflamatorio y anti-angiogénico, mientras que si es pequeño es más pro-inflamatorio y pro-
angiogénico. Unir HA a un scafold aumenta su biocompatibilidad y acción pro-angiogenica.
Puede favorecer el hinchado del scaffold y aumentar la resistencia mecánica de este.

Se usa para mejorar la resistencia a la compresión.

Cambia si están mojados o secos.

….

Preguntas:

-Artículo Fisher&Mauck.

-Cartílago.

-Cartilago.

-Scaffolds.

-Polimeros como biomateriales.

-Ósea.

-Piel.

-Mieloma.

….POlimeros

Biocompatibilidad depende de si lo quiero permanente o no; si lo quiero permanente significa que

quiero minimizar la interacción con el tejido y no me lo joda, lo quiero estable a largo plazo.

Si quiero que se degrade al revés, no lo quiero estable, sino que vaya degradándose. Tengo que
tener ojo con los productos de degradación. Si el tejido circundante esta poco vascularizado, o
poco activo metabolicamente, costara más deshacerse de los subproductos. Problema con
poliestere alifaticos

EQUILIBRIO entre velocidad de degradación y velocidad de deshacerme de los deshechos.

Parece que PLA produce más inflamación que PLC. El problema de PLC es que degrada tan
lento que no se pueden hacer estudios a largo plazo porque los animales se suelen sacrificar
antes.

PCL–TCP/rhBMP2 para hueso.

Degradation kinetics are highly dependent upon the molecular weight of the polymer(s).

High molecular weight structures take much longer to degrade, as mediated through the chain length of the
polymer. Alto peso molecular, mas enlaces de ester, se degrada mas lento los monomeros.

Hydrolysis intermediates 6-hydroxyl caproic acid and acetyl coenzyme A are formed which in turn enter the
citric acid cycle and are eliminated from the body [33].

…Fisher&Mauck

La edad de las stem cells afecta. Peor regeneracion. Corazón regenera bien al nacer, pero a la semana ya como
un adulto de mal. Stem cells de un sitio regeneran celulas de ese sitio, diferentes poblaciones de stem cells.

endogenous stem cell differentiation toward a specific phenotype of interest by modulating physical attributes of
the scaffold (including stiffness, topography, and porosity)

stem cells with a specific propensity towards a defined lineage may have different physical properties71 and
have used these differences to select them.

Con Embrionic Stem cells si no controlo bien la diferenciación puedo producir teratomas. iPSC lo bueno es que
me evito problemas éticos al usarlas. Se pueden conseguir con los factores de yamanaka o con miRNA, para
evitar el problema de meter vectores virales con los factores de transcripción para reprogramarlas (integración
genómica, mutagénesis, ineficiencia…). mRNA sintético resultó ser más eficiente, con patrones transcripciones
similares a ESC. Heterocariontes tibien fundionan.
Repueden inyectar retrovirus con factores yamanaka para inducir iPSCs en el sitio, sin traslación in vitro.
Potencial terapeutico. También se pueden usar estos retrovirus o miRNAs para cambiar un tipo celular
(fibroblasto) a otro (myocitos). EL problema es que no siempre se pueden transformar “del todo”.

Otro problema es que iPSCs reprogramadas in vitro y reimplantadas han dado inmunogenicidad, cosa que las
ESC no hacen, debido a expresiones genicas anormales. El problemas es que las iPSCs a veces no
sereprograman del todo bien hacia la linea parental que queremos (variabilidad en sus vidas de diferenciación).
Pasar filtros de selección de diferenciación antes de utilizarlas. Usar microambientes para tunear la
diferenciación de las iPSC.

….Scaffolds

The scaffolds provide a template for the reconstruction of defects while promoting cell
attachment, proliferation, extracellular matrix generation, restoration of vessels

mechanical support of the tissue but also serve as a delivery vehicle for bioactive molecules, and
ECM formation

characteristics of bio- materials such as surface chemistry, charge, roughness, reactivity, hy-
drophilicity, and rigidity need to be considered.

withstand the external loads and stresses caused by the formation of the new tissue while
preserving mechanical properties. Scaffold designs are able the control biodegradation.

The degradation of biomaterials could be surface or bulk. In contrast to bulk degradation that
breaks the internal structure of the material, the surface degradation maintains the bulk structure.

biodegradable components in the construct trig- gers hydrolytic degradation while processes
such as enzymatic diges- tion and cell-driven degradation biologically change the implant
material.

Nanostructured surfaces demon- strate high surface energy as opposed to polished materials that
result in enhanced hydrophilicity and, therefore, improved adhesion of pro- teins and cell
attachment.

the scaffold with its topography and me- chanical features controls cellular behaviour.

equires the development of inter- connected neurovascular networks between the mature and
sur- rounding tissue. autologous neurovascular bundles integrated by microsurgery during
scaffold implantation is a potential concept.

POROS->highly useful in bone re- growth, vascularization and ECM deposition. channel network.
Cuidar interconectividad de poros, compromiso intercambio nutrientes-estabilidad. En poros muy
gordos las celulas se comportan como en 2D.

FIBRAS->nanofibres mimic the structure and properties of the ex- tracellular matrix. Pro
nanospinning y self assembly, para neurales. aligned PLLA scaffolds in- duced endogenic
differentiation in MSCs while the cells cultured on randomly orientated fibres displayed enhanced
osteogenic differentia- tion.

MICROESFERAS->drug and growth factor delivery y gen therapy. Smart release por molecular
interaction. Dependedel peso molecular el ratio de soltar la droga. 3D porous structure suitable
for bone regeneration, hay que funcionalizar para vascularización con VEGF, endotelial cells o
angiogenic factors.

IMPRESIÓN 3D->The whole 3D scaffold is obtained by successive printing of 2D layers. patient-

specific information in a uniquely designed micro-environment de magnetic resonance o
tomografias. La accuracy de esto depende de la tecnologia. Cellular 3D printing.

Pregunta scaffolds soft tissue:::::::::::

PLGA - mix para que el láctico no sea tan acido y la degradación sea mas lenta. En microesferas son
semipermeables y pueden pasar nutrientes. Mantener el fenotipo. También se puede hacer una capa de fármaco
dexametasona antiinflamatoria que se va liberando poco a poco para proteger las celosas embebidas. En
nanofibras crean guias topograficas a las que puedes poner en el centro BSA PARA QUE SE VAYA
LIBERANDO E INDUCIENDO DIFERENCIACION.

However, many synthetic polymers demonstrate low cell-affinity sur- faces [174], hard to control degradation
rate, and in vitro cytotoxicity [159]. Other problems encountered are lack of hydrophilicity, bioac- tivity, and
release of acidic by-products that lower pH values and trigger inflammatory response

Self assembly peptides en hidrogel.