 Chương 1: What do you understand about biotechnology ?

A collection of scientific techniques, including genetic engineering. Can modify

crops and livestock more precisely than traditional breeding methods. Used to
improve plants, animals and microorganisms.
 Biotechnology is technology based on biology, especially when used in
agriculture, food science, and medicine. -Biotechnology means any
technological application that uses biological systems, living organisms, or
derivatives thereof, to make or modify products or processes for specific
use What is the applications of healthcare biotechnology ? give
examples to demonstrate your opinions.
Improvement in Fermentation Products
Microbial Production of Synthetic Fuels
Microbial Mining or Bioleaching
Microbial Biomass and Single Cell Protein Production
Production of Enzymes and Human Proteins
Production of Secondary Metabolites from Cultured Plant Cell
Molecular Farming for Healthcare Products

Biotechonology can be applied to diagnose diseases, treat infectious diseases, treat

non- infectious diseases
Biotechnology enables scientists to make antibiotics, hormones, vaccines
Công nghệ sinh học và sức khỏe Công nghệ sinh học có thể được ứng
dụng để: l Chẩn đoán bệnh l Điều trị các bệnh truyền nhiễm l Điều trị các
bệnh không lây nhiễm Công nghệ sinh học cho phép các nhà khoa học
chế tạo: l Thuốc kháng sinh l Hormone l Vắc xin

 What is application of biotech in antibiotics production

Antibiotics are chemical subtances produced by microorganism which are
effective in dilute solution in preventing the spread of other microorganisms
Most inhinit growth rather than kill microorganisms
Antibiotics are made when growth of the producer organism is slowing down
rather it is at its maximun
They are secondary metabolites and their production takes longer than primary
mentabolites
 As a result only batch fermentation can be employed
Thuốc kháng sinh là những chất hóa học do vi sinh vật tạo ra, có tác
dụng ở dạng dung dịch loãng trong việc ngăn chặn sự lây lan của các
vi sinh vật khác. Hầu hết ức chế sự phát triển hơn là tiêu diệt vi sinh
vật. 
thuốc kháng sinh được tạo ra khi sự tăng trưởng của sinh vật sản xuất
đang chậm lại thay vì ở mức tối đa. Chúng là chất chuyển hóa thứ cấp
và quá trình sản xuất chúng mất nhiều thời gian hơn chất chuyển hóa
sơ cấp. Do đó, chỉ có thể sử dụng quá trình lên men theo mẻ.
Antibiotics are produced on a large scale infermenters
Thuốc kháng sinh được sản xuất trên quy mô lớn trong máy lên men.
Biotechnology of Marine Fungi for the Production of
New Antibiotics
Công nghệ sinh học nấm biển để sản xuất thuốc
kháng sinh mới
Có 2 phương pháp sản xuất thuốc kháng sinh thường được dùng trong thực tiễn:
+ Nuôi cấy nấm để chiết lấy dịch tiết của chúng trong môi trường nuôi cấy và tinh chế
để tạo ra kháng sinh.
+ Ứng dụng công nghệ gen để sản xuất.
- Ý nghĩa của việc ứng dụng công nghệ gen trong sản xuất thuốc kháng sinh: Ứng dụng
công nghệ gen để sản xuất thuốc kháng sinh không chỉ giúp tăng năng suất tổng hợp
kháng sinh mà còn có khả năng tạo ra được các loại kháng sinh mới.
There are 2 methods of manufacturing antibiotics that are commonly used in
practice:

+ Culturing mushrooms to extract their exudate in culture medium and purified to

create antibiotics.
+ Application of genetic technology for production.
- Significance of applying genetic technology in antibiotic production: Application
of genetic technology to produce antibiotics not only helps to increase the productivity of
antibiotic synthesis but also the ability to create antibiotics. new.

Applications of biotechnology
Medical Applications
 Production of antibiotics
Therapeutic polysaccharides
Gene therapy
Therapeutic proteins
Vaccines
Diagnostics
Vitamins
Insulin and growth hormones
Human safety precautions need to be taken
• Diagnostics of infectious diseases (SARS, bird flu, food-and-mouth diseases,
HIV), genetic disorders or other clinical conditions by monoclonal antibodies
(MAb) & DNA probes
• Medicines (insulin, pharming proteins, antibiotics, vitamins, enzymes, dextran)
• Vaccines
• Gene therapies
Chương 2
 Introduction of polymerase chain reaction

 List the steps of polymerase chain reaction and explain The application
of polymerase chain reaction

5) Application of microbial fermentation in environmental protection

Ứng dụng của quá trình lên men vi sinh trong bảo vệ môi trường
Application of microbial fermentation in environmental protection are
Fermentation destroys feces, urine. Reducing toxic gases and odors in livestock to create
a clean environment with no pollution, less flies and mosquitoes
waste treatment with microorganisms
lên men tiêu hủy phân, nước tiểu. làm giảm khí độc và mùi hôi trong chăn nuôi tạo
môi trường trong sạch không ô nhiễm, ít ruồi muỗi
xử lý rác thải bằng vi sinh vật

Microbes are omnipresent in the biosphere, and their presence invariably

affects the environment in which they grow. The effects of microbes on their
 environment can be beneficial or harmful or inapparent with regard to human
measure or observation. The most significant effect of the microbes on earth is
their ability to recycle the primary elements that make up all living systems,
especially carbon, oxygen, and nitrogen (N). 
Vi sinh vậ t có mặ t khắ p nơi trong sinh quyể n và sự hiệ n diệ n củ a chúng
luôn ả nh hưở ng đế n môi trườ ng mà chúng phát triể n. Tác độ ng củ a vi sinh vậ t
đố i vớ i môi trườ ng củ a chúng có thể có lợ i hoặ c có hạ i hoặ c không rõ ràng đố i
vớ i việ c đo lườ ng hoặ c quan sát củ a con ngườ i. Tác độ ng đáng kể nhấ t củ a vi
sinh vậ t trên trái đấ t là khả năng tái chế các nguyên tố chính tạ o nên tấ t cả các
hệ thố ng số ng, đặ c biệ t là carbon, oxy và nitơ (N).
Microbial Application to Environment (ứng dụng vsv vào
mtruong)
 Contribution of Microbes to Nutrient Cycling (sự đống góp của vsv vào chu
trình dinh dưỡng)
 Microbes in Carbon Cycle (chu trình carbon
Microbes in Methane Production(s ản xuất metan
Microbes in Nitrogen Cycle (chu trình ni t ơ)
Microbes in Sulfur Cycle( chu trình l ưu huỳnh
Microbes in Phosphorus Cycle (chu trình phospho)

Contribution of Microbes in Recycling Wastes and Detoxification

Bacteria and fungi are able to biodegrade or detoxify substances

through various ways; thereby, microbial processes are extensively
used for bioremediation.

Sự đóng góp củ a vi khuẩ n trong việ c tái chế chấ t thả i và khử độ c

Vi khuẩ n và nấ m có khả năng phân hủ y sinh họ c hoặ c giả i độ c các chấ t thông
qua nhiề u cách khác nhau; do đó, các quá trình vi sinh vậ t đượ c sử dụ ng rộ ng
rãi để xử lý sinh họ c.

Biodegradation (Phân hủy (xử lý) sinh học)

Metal Detoxification (khử độc kim loại)

 6) The factors effect to fermentation process (including condition and
nutrition composition) **
- Ph, Temperature, Media and components (mineral, carbonhydrate, protein,
other.., Time of fermentation
6) Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình lên men (bao gồm điều kiện và
thành phần dinh dưỡng) ** - Ph, Nhiệt độ, Môi trường và các thành phần
(khoáng chất, carbonhydrat, protein, .., Thời gian lên men
FACTORS INFLUENCING MICROBAL GROWTH
+pH: Optimum pH for bacteria is , yeasts 4-5, molds 4-7. The pH of the medium
should be maintained at optimum level for the micro-organism being employed to
ensure better product yield
+Temperature: (nhietj độ) Optimum temperature for most of the bacteria is 370C
and the optimum temperature for most fungi is 250C
+Nutrients (chất dinh dưỡng)
Micro-organisms require optimum concentrations of nutrients like nitrogen,
vitamins, and minerals for maximum growth rate. This will be different for each of the
different types
Độ pH tối ưu cho vi khuẩn là nấm men 4-5, nấm mốc 4-7. Độ pH của môi trường phải được
duy trì ở mức tối ưu cho vi sinh vật được sử dụng để đảm bảo năng suất sản phẩm tốt hơn
Nhiệt độ
Nhiệt độ tối ưu cho hầu hết các vi khuẩn là 370C và nhiệt độ tối ưu cho hầu hết các loại nấm
là 250C
Chất dinh dưỡng
Các vi sinh vật yêu cầu nồng độ tối ưu các chất dinh dưỡng như nitơ, vitamin và khoáng
chất để có tốc độ phát triển tối đa. Điều này sẽ khác nhau đối với từng loại khác nhau
+Minerals (khoáng chất)
Calcium, chlorine, magnesium, phosphorous, potassium and sulfur are the
essential minerals for all media. Other minerals like copper, cobalt, iron, manganese,
molybdenum, and zinc
+Growth Factors(yếu tố tăng trưởng)
Vitamins, amino acids, and fatty acids are used as growth factors in the
fermentation
Khoáng chất
Canxi, clo, magiê, phốt pho, kali và lưu huỳnh là những khoáng chất cần thiết cho tất cả các
phương tiện truyền thông. Các khoáng chất khác như đồng, coban, sắt, mangan, molypden và kẽm
Yếu tố tăng trưởng
 Vitamin, axit amin và axit béo được sử dụng làm yếu tố tăng trưởng trong quá trình lên men
Carbon Sources (nguồn carbon)
Product formation is directly dependent on the rate at which the carbon source is
metabolized; also the main product of fermentation determines the type of carbon source
to be used.
Carbohydrates
These are the most commonly used carbon sources in the fermentation process.
Starch – maize, cereals, and potatoes
It is widely used in alcohol fermentation.
Malt and beer - barley grains contain high concentrations of different
carbohydrates like starch, sucrose, cellulose and other sugars
Sucrose - sugar cane and molasses
Nguồn cacbon
Sự hình thành sản phẩm phụ thuộc trực tiếp vào tốc độ chuyển hóa nguồn cacbon;  cũng là
sản phẩm chính của quá trình lên men xác định loại nguồn cacbon sẽ được sử dụng
.Carbohydrate
Đây là những nguồn cacbon được sử dụng phổ biến nhất trong quá trình lên men.
Tinh bột - ngô, ngũ cốc và khoai tây
Nó được sử dụng rộng rãi trong quá trình lên men rượu.
Mạch nha và bia - hạt lúa mạch chứa nồng độ cao các loại carbohydrate khác nhau như tinh
bột, đường sucrose, cellulose và các loại đường khác
Sucrose - đường mía và mật đường

Hydrocarbons
C12-C18 alkanes can be used as carbon sources. They are cheap, and have more
carbon and energy content per weight than sugars. They can be used in organic acids,
amino acids, antibiotics, enzymes, and proteins fermentation.
Hydrocacbon
C12-C18 ankan có thể được sử dụng làm nguồn cacbon. Chúng rẻ và có hàm lượng cacbon
và năng lượng trên mỗi trọng lượng nhiều hơn đường. Chúng có thể được sử dụng trong quá trình
lên men axit hữu cơ, axit amin, kháng sinh, enzym và protein.
Nitrogen Sources(nguồn nito)
Ammonia, ammonium salts, and urea are the most commonly used nitrogen
sources in the fermentation process. Ammonia also serves the purpose of pH control.
Other substances used as nitrogen sources are corn-steep liquor, soya meal, peanut
meal, cotton seed meal, amino acids, and proteins.
 Nguồn nitơ
Amoniac, muối amoni và urê là những nguồn nitơ được sử dụng phổ biến nhất trong quá
trình lên men. Amoniac cũng phục vụ mục đích kiểm soát độ pH.
Các chất khác được sử dụng làm nguồn nitơ là rượu ngô, bột đậu nành, bột đậu phộng, bột
hạt bông, axit amin và protein.

Unit 5: Enzymes
Catalysts for biological reactions
Most are proteins
Lower the activation energy
Increase the rate of reaction
Activity lost if denatured
May be simple proteins
May contain cofactors such as metal ions Có thể chứa các đồng yếu tố như
or organic (vitamins)
Chất xúc tác cho các phản ứng
sinh học
Hầu hết là protein
Giảm năng lượng kích hoạt
Tăng tốc độ phản ứng
Hoạt động bị mất nếu bị biến tính
Có thể là các protein đơn giản
ion kim loại hoặc hữu cơ (vitamin)

Names of enzim Tên của enzim

-End in –ase
-Identifies a reacting substance
sucrase – reacts sucrose
lipase - reacts lipid
-Describes function of enzyme
oxidase – catalyzes oxidation
hydrolase – catalyzes hydrolysis
-Common names of digestion enzymes -Tên thông thường của các loại
still use–in pepsin, trypsin
-Kết thúc bằng –ase
-Xác định chất phản ứng
sucrase - phản ứng với sucrose
lipase - phản ứng lipid
-Mô tả chức năng của enzym
oxidase - xúc tác quá trình oxy hóa
hydrolase - xúc tác quá trình thủy
phân
men tiêu hóa vẫn được sử dụng
-trong pepsin, trypsin

Classification of Enzymes Phân loại Enzyme

Pư đc xúc tác
class Reactions
catalyzed Các sản phẩm oxy hóa
Oxidoreductoase oxidation- quá trình oxy hóa-khử
s reduction
 Vận chuyển nhóm
Transferases transfer group of chuyển nhóm nguyên tử
atoms
Thủy phân hydrolases
Hydrolases hydrolysis
Phân cắt
Lyases add/remove atoms thêm / bớt nguyên tử đến / từ
to/from a double một liên kết đôi
bond

Isomerases rearrange atoms Đồng phân

sắp xếp lại các nguyên tử
Ligases combine
moleculesusing Tổng hợp
ATP kết hợp các phân tử sử dụng
ATP

Enzyme Action: Hành động Enzyme:

Lock and Key Model Mô hình khóa và chìa khóa

An enzyme binds a substrate in a region Một loại enzyme liên kết với một
called the active site cơ chất trong một vùng được gọi là
trang web đang hoạt động

Only certain substrates can fit the active Chỉ một số chất nền nhất định mới
site có thể phù hợp với trang web đang
hoạt động

Amino acid R groups in the active site Các nhóm axit amin R trong vị trí
help substrate bind hoạt động giúp ích chất nền liên
kết
Enzyme-substrate complex forms
Enzyme-cơ chất phức tạp
Substrate reacts to form product
Chất nền phản ứng để tạo thành
Product is released sản phẩm
Sản phẩm được phát hành

Enzyme Action:
Induced Fit Model Hoạt động Enzyme:
Mô hình phù hợp cảm ứng
Enzyme structure flexible, not rigid

Enzyme and active site adjust shape to cứng
bind substrate
Increases range of substrate specificity
Shape changes also improve catalysis nền
during reaction
Factors Affecting Enzyme Action:
Temperature
Little activity at low temperature
Rate increases with temperature
Most active at optimum temperatures
(usually 37°C in humans)
Activity lost with denaturation at high
Temperatures
Factors Affecting Enzyme Action:
Substrate Concentration
Increasing substrate concentration
increases the rate of reaction (enzyme Tăng nồng độ cơ chất làm tăng
concentration is constant)
Maximum activity reached when all of
enzyme combines with substrate
Factors Affecting Enzyme Action: pH
Maximum activity at optimum pH
R groups of amino acids have proper Hoạt động tối đa ở pH tối ưu
charge
Tertiary structure of enzyme is correct
Narrow range of activity
Most lose activity in low or high pH
Cấu trúc enzyme linh hoạt, không
Enzyme và vị trí hoạt động điều
chỉnh hình dạng để liên kết cơ chất
Tăng phạm vi độ đặc hiệu của chất
Thay đổi hình dạng cũng cải thiện
xúc tác trong quá trình phản ứng
Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt
động của enzym: Nhiệt độ
Ít hoạt động ở nhiệt độ thấp
Tỷ lệ tăng theo nhiệt độ
Hoạt động mạnh nhất ở nhiệt độ tối
ưu (thường là 37 ° C ở người)
Hoạt động bị mất khi biến tính ở
mức nhiệt độ cao
Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt
động của enzym: Nồng độ cơ chất
tốc độ phản ứng (nồng độ enzyme
là không thay đổi)
Hoạt động tối đa đạt được khi tất
cả các enzym kết hợp với chất nền
Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt
động của enzyme: pH
R nhóm axit amin có điện tích
thích hợp
Cấu trúc bậc ba của enzyme là
đúng
Phạm vi hoạt động hẹp
Hầu hết mất hoạt tính ở độ pH thấp
Enzyme Inhibition hoặc cao
Inhibitors cause a loss of catalytic
activity Ức chế enzym
Chất ức chế làm mất hoạt tính xúc
Change the protein structure of an tác
enzyme Thay đổi cấu trúc protein của một
loại enzyme
May be competitive or noncompetitive Có thể cạnh tranh hoặc không cạnh
tranh
Some effects are irreversible Một số hiệu ứng không thể thay
đổi
Competitive Inhibition
A competitive inhibitor Ức chế cạnh tranh
Has a structure similar to substrate Một chất ức chế cạnh tranh
Occupies active site Có cấu trúc tương tự như chất nền
Competes with substrate for active site Chiếm đóng vùng hoạt động
Cạnh tranh với chất nền ở vùng
Has effect reversed by increasing hoạt động
substrate concentration Có tác dụng đảo ngược bằng cách
tăng nồng độ cơ chất
Noncompetitive Inhibition
A noncompetitive inhibitor Sự ức chế không cạnh tranh
Does not have a structure like substrate Một chất ức chế không cạnh tranh
Binds to the enzyme but not active site Không có cấu trúc như chất nền
changes the shape of enzyme and active Liên kết với enzym nhưng không
site phải vị trí hoạt động thay đổi hình
Substrate cannot fit altered active site dạng của enzyme và vị trí hoạt
động
Chất nền không thể phù hợp với
No reaction occurs trang web đang hoạt động đã thay
Effect is not reversed by adding substrate đổi
Không có phản ứng xảy ra
Hiệu ứng không bị đảo ngược bằng
Application cách thêm chất nền
Enzyme isolation from organism
Enzyme engineering and modeling Ứng dụng
Research on enzyme for production of Enzyme phân lập từ sinh vật
enzyme Kỹ thuật và mô hình hóa enzyme
Application in Agrilculture, medicine, Nghiên cứu enzyme sản xuất
food industry, enzyme
Ứng dụng trong nông nghiệp, y
học, công nghiệp thực phẩm,
Unit 13:fermentation Sự lên men

General principal of Fermentation
definition
The process by which living cells
obtain energy through the breakdown
of glucose and other molecules. (That
8,000 year old process, remember?)
Fermentation is part of what is known
as “upstream processing,” literally
engineering and growing the cell line to
be used.
Nguyên tắc chung của quá trình lên
men
Định nghĩa
Quá trình mà các tế bào sống thu được
năng lượng thông qua sự phân hủy
glucose và các phân tử khác. (Quá
trình 8.000 năm tuổi đó, nhớ không?)
Quá trình lên men là một phần của cái
được gọi là “xử lý ngược dòng”, theo
nghĩa đen là kỹ thuật và phát triển
dòng tế bào sẽ được sử dụng.

Fermentation Lên men

The growth of a microorganism may
result in the production of a range of
metabolites but to produce a particular
metabolite the desired organism must
be grown under precise cultural
conditions at a particular growth rate.
Sự phát triển của vi sinh vật có thể tạo
ra một loạt các chất chuyển hóa nhưng
để tạo ra một chất chuyển hóa cụ thể,
sinh vật mong muốn phải được nuôi
trong các điều kiện nuôi cấy chính xác
với tốc độ tăng trưởng cụ thể.

If a microorganism is introduced into a
nutrient medium that supports its
growth, the inoculated culture will pass
through a number of stages and the
system is termed batch culture
Nếu một vi sinh vật được đưa vào môi
trường dinh dưỡng hỗ trợ sự phát triển
của nó, quá trình nuôi cấy được cấy sẽ
trải qua một số giai đoạn và hệ thống
được gọi là nuôi cấy theo lô

Difference of Bioreactor vs. Fermentor

Sự khác biệt của Bioreactor so với
Fermentor
Fermentors are used to cultivate Máy lên men được sử dụng để nuôi
microbes. cấy vi sinh vật.
Once fermentation is complete, the Khi quá trình lên men hoàn tất, sản
desired product must be recovered, phẩm mong muốn phải được thu hồi,
separated out, and purified. tách ra và tinh chế.

the separation of crude product from
microbial mass and other solids and
liquid medium, to prepare it for
purification.
Bioreactors are used to cultivate animal
cells.
tách sản phẩm thô từ khối vi sinh vật
và các chất rắn khác và môi trường
lỏng, để chuẩn bị cho quá trình tinh
chế.
Lò phản ứng sinh học được sử dụng
để nuôi cấy tế bào động vật.
Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình
The factors effect to the fermentation lên men
ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY: PH, NHIỆT
CONDITIONS CULTURE: PH, ĐỘ, ĐỘ TUỔI, THỜI GIAN
TEMPRATURE,
ARGITATION,TIMES NUÔI CẤY THÔNG THƯỜNG:
MEDIUM CULTURE: CARBON, CACBON, NITƠ, KHOÁNG SẢN,
NITROGEN, MINERAL, OTHERS CÁC CHẤT KHÁC

lò phản ứng sinh học / lò lên men

industrial bioreactors/fermentors công nghiệp
Quy trình cơ bản
The Basic Process Các yếu tố cho hoạt chất sinh học
Elements for bioactive substances (thuốc, sản phẩm trung gian)
(medicine, intermediate products) Phân tích sinh học
Bioanalysis Chuẩn bị môi trường nuôi cấy, điều
Preparation media culture, condition for kiện để lên men
fermentation hạt giống microoganims
seed microoganims Lên men
Fermentation Tách biệt
Separation Thanh lọc
Purification đổ đầy
Filling
Phục hồi sản phẩm
Product recovery Thường yêu cầu phá vỡ tế bào.
Usually requires cell disruption. tách sản phẩm thô từ khối vi sinh vật
the separation of crude product from và các chất rắn khác và môi trường
microbial mass and other solids and lỏng, để chuẩn bị cho quá trình tinh
liquid medium, to prepare it for chế.
purification. Sự gián đoạn tế bào
Cell Disruption • Phi cơ học
• Nonmechanical - Đóng băng
– Freezing - Chất tẩy rửa
– Detergents - Enzyme
– Enzymes • Áp suất cao
• High pressure - Ly tâm
– Centrifugation • Đồng nhất hóa
• Homogenization • Mài cơ học
• Mechanical grinding
Tách biệt
Separation Chiết xuất & lượng mưa
Extraction & Precipitation Lọc
Filtration Vi lọc
Microfiltration Siêu lọc
Ultrafiltration Thanh lọc
Purification Sắc ký
Chromatography Lọc gel
Gel filtration Trao đổi ion
Ion exchange Tương tác kỵ nước (HIC)
Hydrophobic interaction (HIC) Sự giống nhau
Affinity
Làm đầy hàng loạt
Bulk Filling Đổ hàng loạt được định nghĩa là việc
Bulk filling is defined as the placement đặt số lượng lớn hơn (5L - 100L) sản
of larger quantities (5L – 100L) of phẩm vào các thùng chứa để vận
product into containers for chuyển / lưu kho.
shipment/storage.
Làm đầy cuối cùng
Final Filling Việc chiết rót lần cuối được định
Final filling is defined as the placement nghĩa là việc đưa sản phẩm thuốc vô
of the sterile drug product into its final trùng vào thùng chứa / hệ thống đóng
container/closure system. gói cuối cùng của nó.
Bao gồm các:
These include: - Lọ
– Vials - Ampoules
– Ampoules - Ống tiêm
– Syringes - Hộp mực nha khoa
– Dental Cartridges
Ứng dụng của quá trình lên men
Application of fermentation Quá trình lên men vi sinh vật có thể
Microbial fermentations may be Nuôi cấy tế bào: Nuôi cấy tế bào là
Cell Culture: Cell culture is a specific một loại lên men cụ thể áp dụng các
kind of fermentation that applies kỹ thuật tương tự để nuôi cấy tế bào
similar techniques for growing cells từ thực vật và động vật
from plants and animals
Lên men
Fermentation • Những sản phẩm tạo ra tế bào vi
•Those that produce microbial cells sinh vật (sinh khối). Lên men đề cập
(biomass) as the product. Fermentation đến việc nuôi cấy quy mô lớn của vi
refers to the large scale cultivation of sinh vật.
microorganisms. Những chất tạo ra các chất chuyển
Those that produce microbial hóa của vi sinh vật.
metabolites . Những chất tạo ra các enzym vi sinh
Those that produce microbial enzymes. vật.
Những chất làm thay đổi một hợp chất
Those that modify a compound which được thêm vào quá trình lên men các
is added to the fermentation the quá trình biến đổi.
 transformation processes.
đổ đầy
Filling • Chiết rót là quá trình đưa sản phẩm
• Filling is the process of putting the thuốc vào vật chứa vô trùng.
drug product into a sterile container.

UNIT 6
BIOPROCESS AND FERMENTATION - QUÁ TRÌNH SINH HỌC VÀ SỰ
HẤP THỤ
INTRODUCTION
Microorganisms are capable of growing on a wide range of substrates and
canproduce a remarkable spectrum of products. The relatively recent advent of
invitro genetic anipulation has extended the range of products that may
beproduced by microorganisms and has rovided new methods for increasing the
yields of existing ones. The commercial exploitation of the biochemical diversity
of microorganisms has resulted in the development of the fermentation industry
and the techniques of genetic manipulation have given this well-established
ndustry the opportunity to develop new processes and to improve existing ones.
The term ermentation is derived from the Latin verb fervere, to boil, which
describes the appearance of the action of yeast on extracts of fruit or malted grain
during the production of alcoholic everages. However, fermentation is interpreted
differently by microbiologists and bio- chemists. To a microbiologist the word
means any process for the production of a product by the mass culture of
microorganisms. To a biochemist, however, the word means an energy-generating
process in which organic compounds act as both electron donors and acceptors,
that is, an anaerobic process where energy is produced without the participation of
oxygen or other inorganic electron acceptors. In this chapter fermentation is used
in its broader, microbiological context.
GIỚI THIỆU
Các vi sinh vật có khả năng phát triển trên nhiều loại chất nền và có thể tạo ra
nhiều loại sản phẩm đáng chú ý. Sự ra đời tương đối gần đây của phương pháp
điều chế di truyền invitro đã mở rộng phạm vi các sản phẩm có thể được sản xuất
bởi vi sinh vật và đã tạo ra các phương pháp mới để tăng năng suất của các sản
phẩm hiện có. Việc khai thác thương mại sự đa dạng sinh hóa của vi sinh vật đã
dẫn đến sự phát triển của ngành công nghiệp lên men và các kỹ thuật thao tác di
truyền đã tạo cơ hội cho ngành công nghiệp lâu đời này phát triển các quy trình
mới và cải tiến những quy trình hiện có. Thuật ngữ lỗi có nguồn gốc từ động từ
tiếng Latinh fervere, để đun sôi, mô tả sự xuất hiện của tác động của nấm men đối
với các chất chiết xuất từ trái cây hoặc hạt mạch nha trong quá trình sản xuất đồ
uống có cồn. Tuy nhiên, quá trình lên men được giải thích khác nhau bởi các nhà
vi sinh vật học và nhà hóa học sinh học. Đối với một nhà vi sinh vật học, từ này có
nghĩa là bất kỳ quá trình nào để sản xuất một sản phẩm bằng cách nuôi cấy hàng
loạt vi sinh vật. Tuy nhiên, đối với một nhà sinh hóa, từ này có nghĩa là một quá
trình tạo ra năng lượng, trong đó các hợp chất hữu cơ hoạt động như cả chất cho
và nhận điện tử, tức là một quá trình kỵ khí trong đó năng lượng được tạo ra mà
không có sự tham gia của oxy hoặc các chất nhận điện tử vô cơ khác. Trong
chương này, quá trình lên men được sử dụng trong bối cảnh vi sinh học rộng hơn.

MICROBIAL GROWTH
The growth of a microorganism may result in the production of a range of
metabolites but to produce a particular metabolite the desired organism must be
grown under precise cultural conditions at a particular growth rate. If a
microorganism is introduced into a nutrient medium that supports its growth,
the inoculated culture will pass through a number of stages and the system is
termed batch culture. Initially, growth does not occur and this period is referred to
as the lag phase and may be considered a period of adaptation. Following an
interval during which the growth rate of the cells gradually increases, the cells
grow at a constant, maximum rate and this period is referred to as the log or
exponential phase, which may be described by the
equation where x is the cell concentration (mg ml-';), t is the time of incubation
(h), and p the specific growth rate (h-'). On integration equation (1) gives
As already stated, the cessation of growth in a batch culture may be ue to the
exhaustion of a nutrient component or the accumulation of a oxic product.
However, provided that the growth medium is designed uch that growth is limited
by the availability of a medium component,
VI KHUẨN PHAT TRIỂN
Sự phát triển của vi sinh vật có thể tạo ra một loạt các chất chuyển hóa nhưng để
tạo ra một chất chuyển hóa cụ thể, sinh vật mong muốn phải được nuôi trong các
điều kiện nuôi cấy chính xác với tốc độ tăng trưởng cụ thể. Nếu một vi sinh vật
được đưa vào môi trường dinh dưỡng hỗ trợ sự phát triển của nó,
nuôi cấy được cấy sẽ trải qua một số giai đoạn và hệ thống được gọi là nuôi cấy
theo lô. Ban đầu, sự tăng trưởng không xảy ra và giai đoạn này được gọi là giai
đoạn tụt hậu và có thể được coi là giai đoạn thích nghi. Sau một khoảng thời gian
mà tốc độ phát triển của các tế bào tăng dần, các tế bào phát triển với tốc độ không
đổi, tốc độ tối đa và giai đoạn này được gọi là giai đoạn log hoặc hàm mũ, có thể
được mô tả bằng
trong đó x là nồng độ tế bào (mg ml- ';), t là thời gian ủ (h) và p là tốc độ tăng
trưởng cụ thể (h-'). Trên phương trình tích phân (1) cho
Như đã nêu, việc ngừng phát triển trong nuôi cấy theo lô có thể là do thành phần
dinh dưỡng bị cạn kiệt hoặc tích tụ sản phẩm độc hại. Tuy nhiên, với điều kiện là
phương tiện tăng trưởng được thiết kế vì tăng trưởng bị giới hạn bởi sự sẵn có của
thành phần trung bình,

growth may be extended by addition of an aliquot of fresh medium to the vessel. If

the fresh medium is added continuously, at an appropriate rate, and the culture
vessel is fitted with an overflow device, such that culture is displaced by the
incoming fresh medium, a continuous culture may be established. The growth of
the cells in a continuous culture of this type is controlled by the availability of the
growth limiting chemical component of the medium and, thus, the system is
described as a chemostat. In'this system a steady-state is eventually achieved
and the loss of biomass via the overflow is replaced by cell growth. The flow of
medium through the system is described by the term dilution rate, D, which is
equal to the rate of addition of medium divided by the working volume of the
culture vessel. The balance between growth of cells and their loss from the system
may be described as
dx/dt = growth -output or dx/dt = ,YX – DX
sự tăng trưởng có thể được kéo dài bằng cách bổ sung một lượng môi trường tươi
vào bình. Nếu môi trường mới được bổ sung liên tục, với tốc độ thích hợp và bình
nuôi cấy được lắp thiết bị chống tràn, sao cho dịch cấy bị thay thế bởi môi trường
mới vào, thì có thể thiết lập quá trình nuôi cấy liên tục. Sự phát triển của các tế
bào trong môi trường nuôi cấy liên tục kiểu này được kiểm soát bởi sự sẵn có của
thành phần hóa học hạn chế tăng trưởng của môi trường và do đó, hệ thống này
được mô tả như một chất điều hòa. Trong & # 39; hệ thống này cuối cùng đạt
được trạng thái ổn định và sự mất sinh khối do tràn được thay thế bằng sự phát
triển của tế bào. Dòng môi chất qua hệ thống được mô tả bằng tốc độ pha loãng,
D, bằng tốc độ bổ sung môi trường chia cho thể tích làm việc của bình nuôi cấy.
Sự cân bằng giữa sự phát triển của các tế bào và sự mất mát của chúng khỏi hệ
thống có thể được mô tả là
dx / dt = growth -output hoặc dx / dt =, YX – DX

APPLICATIONS OF FERMENTATION
Microbial fermentations may be classified into the following major group
(i) Those that produce microbial cells (biomass) as the product.
(ii) Those that produce microbial metabolites.
(iii) Those that produce microbial enzymes.
(iv) Those that modify a compound which is added to the fermenta- tion – the
transformation processes.
(v) Those that produce recombinant products.
Quá trình lên men vi sinh vật có thể được xếp vào nhóm chính sau
(i) Những sản phẩm tạo ra tế bào vi sinh vật (sinh khối).
(ii) Những chất tạo ra các chất chuyển hóa của vi sinh vật.
(iii) Những sản phẩm tạo ra các enzym vi sinh vật.
(iv) Những chất làm thay đổi một hợp chất được thêm vào quá trình lên men - các
quá trình biến đổi.
(v) Những sản phẩm tạo ra sản phẩm tái tổ hợp.

3.1 Microbial Biomass

Microbial biomass is produced commercially as single cell protein (SCP) for
human food or animal feed and as viable yeast cells to be used in the baking
industry. The industrial production of bakers’ yeast started in the early 1900s and
yeast biomass was used as human food in Germany during the First World War.
However, the development of large-scale processes for the production of microbial
biomass as a source of commercial protein began in earnest in the late 1960s.
Several of the processes investigated did not come to fruition owing to political
and economic problems but the establishment of the ICI
Pruteen process for the production of bacterial SCP for animal feed was
amilestone in the development of the fermentation industry. This process utilized
contin- uous culture on an enormous scale (1 500 m3) and is an excellent example
of the application of good engineering to the design of a microbiological process.
However, the economics of the production of SCP as animal feed were marginal,
which eventually led to the discontinuation of thePruteen process.
The technical expertise gained from the Pruteen process assisted ICI in
collaborating with Rank Hovis MacDougall on a process for the production of
fungal biomass to be used as human food? A continuous fermentation process for
the production of Fusarium grami- nearum biomass (marketed as Quorn@) was
developed utilizing a 40 m3 air-lift fermenter. This process was based on sound
economics and has proved to be a major economic success.
3.1 Sinh khối vi sinh vật
Sinh khối vi sinh vật được sản xuất thương mại dưới dạng protein đơn bào (SCP)
dùng làm thực phẩm cho người hoặc thức ăn chăn nuôi và như các tế bào nấm men
sống được sử dụng trong ngành công nghiệp nướng. Công nghiệp sản xuất men
làm bánh bắt đầu vào đầu những năm 1900 và sinh khối nấm men được sử dụng
làm thực phẩm cho con người ở Đức trong Chiến tranh thế giới thứ nhất. Tuy
nhiên, sự phát triển của các quy trình quy mô lớn để sản xuất sinh khối vi sinh vật
như một nguồn protein thương mại đã bắt đầu một cách nghiêm túc vào cuối
những năm 1960. Một số quá trình được điều tra đã không thành công do các vấn
đề chính trị và kinh tế nhưng việc thành lập ICI
Quy trình Pruteen để sản xuất SCP vi khuẩn làm thức ăn cho gia súc là chất tạo
nền cho sự phát triển của ngành công nghiệp lên men. Quá trình này sử dụng quá
trình nuôi cấy liên tục trên một quy mô rất lớn (500 m3) và là một ví dụ tuyệt vời
về việc áp dụng kỹ thuật tốt để thiết kế một quy trình vi sinh. Tuy nhiên, tính kinh
tế của việc sản xuất SCP làm thức ăn cho gia súc là không đáng kể, điều này cuối
cùng đã dẫn đến việc ngừng quy trìnhPruteen.
Chuyên môn kỹ thuật thu được từ quy trình Pruteen đã hỗ trợ ICI hợp tác với Rank
Hovis MacDougall về quy trình sản xuất sinh khối nấm dùng làm thực phẩm cho
người? Một quy trình lên men liên tục để sản xuất sinh khối Fusarium grami-
nearum (tiếp thị là Quorn @) đã được phát triển bằng cách sử dụng máy lên men
nâng không khí 40 m3. Quá trình này dựa trên nền tảng kinh tế học đúng đắn và đã
được chứng minh là một thành công kinh tế lớn.

Microbial Metabolites
The kinetic description of batch culture may be rather misleading whenconsidering
the product-forming capacity of the culture during thevarious phases, for, although
the metabolism of stationary phase cells isconsiderably different from that of
logarithmic ones, it is by no meansstationary. Bu’Lock et aL6 proposed a
descriptive terminology of the behaviour of microbial cells which considered the
type of metabolism rather than the kinetics of growth. The term ‘trophophase’ was
suggested to describe the log or exponential phase of a culture during which
the sole products of metabolism are either essential to growth, such as amino
acids, nucleotides, proteins, nucleic acids, lipids, carbohydrates, etc. or are the by-
products of energy-yielding metabolism such as ethanol, acetone and butanol. The
metabolites produced during the trophophase are referred to as primary
metabolites. Some examples of primary metabolites of commercial importance are
listed in Table 1. Bu’Lock et al. suggested the term ‘idiophase’ to describe the
phase of a culture during which products other than primary metabolites are
synthesized, products which do not have an obvious role in cell metabolism. The
metabolites produced during the idiophase are referred to as the secondary
metabolites. The interrelationships between primary and secondary metabolism are
illustrated in Figure 2, from which it may be seen that secondarymetabolites tend
to be synthesized from the intermediates and end-products of primary metabolism.
Although the primary metabolic routes shown in Figure 2 are common to the vast
majority of microorganisms, each secondary metabolite would be synthesized by
very few microbial taxa. Also, not all microbial taxa undergo secondary
metabolism; it is a common feature of the filamen-tous fungi and bacteria and the
sporing bacteria but it is not, for example, a feature of the Enterobacteriaceae.
Chất chuyển hóa của vi sinh vật
Mô tả động học của quá trình nuôi cấy theo mẻ có thể khá sai lầm khi xem xét khả
năng tạo thành sản phẩm của quá trình nuôi cấy trong các pha khác nhau, vì mặc
dù sự trao đổi chất của các tế bào ở pha tĩnh khác biệt đáng kể so với sự chuyển
hóa của tế bào logarit, nhưng nó không có nghĩa là ở trạng thái tĩnh. Bu’Lock và
aL6 đã đề xuất một thuật ngữ mô tả về hành vi của các tế bào vi sinh vật được coi
là kiểu trao đổi chất hơn là động học của sự phát triển. Thuật ngữ 'trophophase'
được đề xuất để mô tả giai đoạn log hoặc hàm mũ của một nền văn hóa trong đó
các sản phẩm duy nhất của quá trình trao đổi chất hoặc là cần thiết cho sự tăng
trưởng, chẳng hạn như axit amin, nucleotit, protein, axit nucleic, lipid,
carbohydrate, v.v. hoặc là sản phẩm phụ của quá trình chuyển hóa năng lượng như
etanol, axeton và butanol. Các chất chuyển hóa được tạo ra trong quá trình
trophophase được gọi là chất chuyển hóa chính. Một số ví dụ về các chất chuyển
hóa chính có tầm quan trọng thương mại được liệt kê trong Bảng 1. Bu’Lock et al.
đã đề xuất thuật ngữ 'idiophase' để mô tả giai đoạn nuôi cấy trong đó các sản phẩm
không phải là chất chuyển hóa chính được tổng hợp, các sản phẩm không có vai
trò rõ ràng trong chuyển hóa tế bào. Các chất chuyển hóa được tạo ra trong quá
trình idiophase được gọi là chất chuyển hóa thứ cấp. Mối quan hệ qua lại giữa
chuyển hóa sơ cấp và thứ cấp được minh họa trong Hình 2, từ đó có thể thấy rằng
các chất chuyển hóa thứ cấp có xu hướng được tổng hợp từ các chất trung gian và
sản phẩm cuối cùng của quá trình chuyển hóa sơ cấp. Mặc dù các con đường trao
đổi chất sơ cấp thể hiện trong Hình 2 là phổ biến đối với đại đa số vi sinh vật,
nhưng mỗi chất chuyển hóa thứ cấp sẽ được tổng hợp bởi rất ít đơn vị phân loại vi
sinh vật. Ngoài ra, không phải tất cả các đơn vị phân loại vi sinh vật đều trải qua
quá trình trao đổi chất thứ cấp; đó là đặc điểm chung của nấm và vi khuẩn dạng
sợi tơ và vi khuẩn tạo bào tử nhưng nó không phải là đặc điểm chung của
Enterobacteriaceae.

Microbial Enzymes
The major commercial utilization of microbial enzymes is in the food and
beverage industriesI6 although enzymes do have considerable application in
clinical and analytical situations, as well as their use in washing powders. Most
enzymes are synthesized in the logarithmic phase of batch culture and
may, therefore, be considered as primary metabolites. However, some, for
example the amylases of Bacillus stearothermophilus,” are produced by idiophase
cultures and may be considered as equivalent to secondary metabolites. Enzymes
may be produced from animals and plants as well as microbial sources but the
production by microbial fermentation is the most economic and con- venient
method. Furthermore, it is now possible to engineer microbial cells to produce
animal or plant enzymes, as discussed in Section 3.5.

Enzyme vi sinh vật

Việc sử dụng thương mại chính của enzym vi sinh vật là trong ngành công nghiệp
thực phẩm và đồ uốngI6 mặc dù enzym có ứng dụng đáng kể trong các tình huống
lâm sàng và phân tích, cũng như việc sử dụng chúng trong bột giặt. Hầu hết các
enzym được tổng hợp trong pha logarit của quá trình nuôi cấy theo lô và
do đó có thể được coi là chất chuyển hóa chính. Tuy nhiên, một số, ví dụ như
amylase của Bacillus stearothermophilus, ”được tạo ra bởi quá trình nuôi cấy tự
chuyển hóa và có thể được coi là tương đương với các chất chuyển hóa thứ cấp.
Enzyme có thể được sản xuất từ động vật và thực vật cũng như các nguồn vi sinh
vật nhưng sản xuất bằng phương pháp lên men vi sinh là phương pháp hiệu quả và
kinh tế nhất. Hơn nữa, hiện nay người ta có thể thiết kế các tế bào vi sinh vật để
tạo ra các enzym động vật hoặc thực vật, như đã thảo luận trong Phần 3.5.

unit 6: THE FERMENTATION PROCESS quá trình lên men

Inoculation starters.
Although the central component of the system is obviously the fermenter itself, in
which the organism is grown under conditions optimum for product formation,
one must not lose sight of operations upstream and downstream of the fermenter.
Before the fermentation is started the medium must be formulated
and sterilized, the fermenter sterilized, and a starter culture must be available in
sufficient quantity and in the correct physiological state to inoculate the production
fermenter. Downstream of the fermenter the product has to be purified and further
processed and the effluents produced by the process have to be treated.
Người bắt đầu cấy.
Mặc dù thành phần trung tâm của hệ thống rõ ràng là bản thân thiết bị lên men,
trong đó sinh vật được phát triển trong các điều kiện tối ưu để hình thành sản
phẩm, người ta không được để ý đến các hoạt động ở thượng nguồn và hạ nguồn
của thiết bị lên men. Trước khi bắt đầu lên men, môi trường phải được xây dựng
và tiệt trùng, thiết bị lên men đã được khử trùng, và môi trường nuôi cấy khởi
động phải có đủ số lượng và ở trạng thái sinh lý thích hợp để cấy vào chất lên men
sản xuất. Ở hạ lưu của máy lên men, sản phẩm phải được làm sạch và xử lý thêm
và nước thải tạo ra từ quá trình này phải được xử lý.
Medium component

Although the fermentation industry has been reluctant to adopt continuous culture
for the production of microbial metabolites, very considerable progress has been
made in the development of fed-batch Fed-batch culture may be used to achieve a
considerable degree of process control and to extend the productive period of a
traditional batch process without the
inherent disadvantages of continuous culture described previously. The major
advantage of feeding a medium component to a culture, rather than incorporating
it entirely in the initial batch, is that the nutrient may be maintained at a very low
concentration during the fermentation. A low (but constantly replenished) nutrient
level may be advantageous in:
(i) Maintaining conditions in the culture within the aeration capacity
(ii) Removing the repressive effects of medium components such as
(iii) Avoiding the toxic effects of a medium component.
(iv) Providing a limiting level of a required nutrient for an auxoof the fermenter.
Rapidly used carbon and nitrogen sources and phosphate trophic strain. The
earliest example of the commercial use of fed-batch culture is the production of
bakers’ yeast. It was recognized as early as 1915 that an excess of malt in the
production medium would result in a high rate of biomass production and an
oxygen demand which could not be met by the fermenter. This resulted in the
development of anaerobic conditions and the formation of ethanol at the expense
of biomass. The solution to this problem was to grow the yeast initially in a weak
medium and then add additional medium at a rate less than the organism could use
it. It is now appreciated that a high glucose concentration represses respiratory
activity, and in modern yeast production plants the feed of molasses is under strict
control based on the automatic measurement of traces of ethanol in the exhaust gas
of the fermenter. As soon as ethanol is detected the feed rate is reduced. Although
such systems may result in low growth rates, the biomass yield is near that
theoretically obtainable.
Thành phần trung bình

Mặc dù ngành công nghiệp lên men đã miễn cưỡng áp dụng phương pháp nuôi
cấy liên tục để sản xuất các chất chuyển hóa của vi sinh vật, nhưng tiến bộ rất
đáng kể đã đạt được trong quá trình phát triển nuôi cấy theo lô Fed có thể được
sử dụng để đạt được mức độ kiểm soát quy trình đáng kể và để mở rộng thời gian
sản xuất của quy trình hàng loạt truyền thống mà không có
những nhược điểm cố hữu của nuôi cấy liên tục đã được mô tả trước đây. Ưu
điểm chính của việc cung cấp thành phần trung bình cho môi trường nuôi cấy,
thay vì kết hợp hoàn toàn trong lô ban đầu, là chất dinh dưỡng có thể được duy trì
ở nồng độ rất thấp trong quá trình lên men. Mức dinh dưỡng thấp (nhưng được bổ
sung liên tục) có thể có lợi trong:
(i) Duy trì các điều kiện nuôi trong khả năng sục khí
(ii) Loại bỏ các tác động kìm hãm của các thành phần trung bình như
(iii) Tránh các tác động độc hại của một thành phần trung bình.
(iv) Cung cấp mức giới hạn của chất dinh dưỡng cần thiết cho chất hỗ trợ lên
men.
Nguồn cacbon và nitơ được sử dụng nhanh chóng và chủng dinh dưỡng photphat.
Ví dụ sớm nhất về việc sử dụng thương mại phương pháp nuôi cấy theo mẻ là sản
xuất men làm bánh. Ngay từ năm 1915, người ta đã nhận ra rằng lượng malt dư
thừa trong môi trường sản xuất sẽ dẫn đến tốc độ sản xuất sinh khối cao và nhu
cầu oxy không thể đáp ứng được cho thiết bị lên men. Điều này dẫn đến sự phát
triển của các điều kiện yếm khí và hình thành etanol với chi phí sinh khối. Giải
pháp cho vấn đề này là ban đầu phát triển nấm men trong môi trường yếu và sau
đó thêm môi trường bổ sung với tốc độ thấp hơn sinh vật có thể sử dụng. Hiện nay
người ta đánh giá cao rằng nồng độ glucose cao ngăn chặn hoạt động hô hấp, và
trong các nhà máy sản xuất nấm men hiện đại, thức ăn của mật đường được kiểm
soát chặt chẽ dựa trên việc đo tự động dấu vết của etanol trong khí thải của máy
lên men. Ngay khi phát hiện thấy etanol, tốc độ cấp liệu sẽ giảm. Mặc dù các hệ
thống như vậy có thể dẫn đến tốc độ tăng trưởng thấp, nhưng năng suất sinh khối
gần như đạt được về mặt lý thuyết.

3. The Mode of Operation of Fermentation Processes

As discussed earlier, microorganisms may be grown in batch, fed-batch, or
continuous culture, and continuous culture offers the most control over the growth
of the cells. However, the commercial adoption of continuous culture is confined
to the production of biomass and, to a limited extent, the production of potable and
industrial alcohol. The superiority of continuous
culture for biomass production is overwhelming, as may be seen from the
following account, but for other microbial products the disadvantages of the
system outweigh the improved process control which the technique offers.
Productivity in batch culture may be described by the equation

where Rbatch is the output of the culture in terms of biomass concentra- tion per
hour, xma, is the maximum cell concentration achieved at stationary phase, xo is
the initial cell concentration at inoculation, ti, is the time during which the
organism grows at pmax and tii is the time during which the organism is not
growing at pmax and includes the lag phase, the deceleration phase, and the
periods of batching, sterilizing and harvesting.

The productivity3 of a continuous culture may be represented as

where R cont is the output of the culture in terms of cell concentration per hour,
tiji is the time period prior to the establishment of a steady-state and includes time
for vessel preparation, sterilization and operation in batch culture prior to
continuous operation, T is the time period during which steady-state conditions
prevail, and X is the steady-state cell concentration Maximum output of biomass
per unit time (i.e. productivity) in a chemostat may be achieved by operating at the
dilution rate giving the highest value of DX, this value being referred to as Batch
fermentation productivity, as described by equation is an average for the total time
of the fermentation. Because dx/dt=px, the produc- tivity of the culture increases
with time and, thus, the vast majority of the biomass in a batch process is
produced near the end of the log phase. In a steady-state chemostat, operating at,
or near, Dma, the productivity remains constant, and maximum, for the whole
fermentation. Also, a continuous process may be operated for a very long time so
that the non- productive period, tiii in equation (6), may be insignificant. However,
the non-productive time element for a batch culture is a very significant period,
especially as the fermentation would have to be re-established many times during
the running time of a comparable continuous process and, therefore, ti; would be
recurrent. The steady- state nature of a continuous process is also advantageous in
that the system should be far easier to control than a comparable batch one. During
a batch fermentation, heat output, acid or alkali production, and oxygen
consumption will range from very low rates at the start of the fermentation to very
high rates during the late logarithmic phase. Thus, the control of the environment
of such a system is far more difficult than that of a continuous process where, at
steady-state, production and consumption rates are constant. Furthermore, a
contin- uous process should result in a more constant labour demand than a A
frequently quoted disadvantage of continuous systems is their susceptibility to
contamination by foreign organisms. The prevention of contamination is
essentially a problem of fermenter design, construction, and operation and should
be overcome by good engineering and microbiological practice. ICI recognized the
overwhelming advantages of a continuous biomass process and overcame the
problems of contam-ination by building a secure fermenter capable of very long
periods of aseptic operation, as described by Smith.
3. Phương thức hoạt động của các quá trình lên men
Như đã thảo luận trước đó, vi sinh vật có thể được nuôi cấy theo lô, mẻ, hoặc nuôi
cấy liên tục, và nuôi cấy liên tục giúp kiểm soát tốt nhất sự phát triển của tế bào.
Tuy nhiên, việc áp dụng thương mại phương pháp nuôi cấy liên tục chỉ giới hạn
trong việc sản xuất sinh khối và ở một mức độ hạn chế, sản xuất rượu uống được
và rượu công nghiệp. Tính ưu việt của liên tục
Việc nuôi cấy để sản xuất sinh khối là quá sức, như có thể thấy ở phần sau, nhưng
đối với các sản phẩm vi sinh vật khác, những nhược điểm của hệ thống vượt trội
hơn khả năng kiểm soát quá trình cải tiến mà kỹ thuật mang lại. Năng suất trong
nuôi cấy lô có thể được mô tả bằng phương trình

Trong đó Rbatch là đầu ra của quá trình nuôi cấy về nồng độ sinh khối mỗi giờ,
xma, là nồng độ tế bào tối đa đạt được ở pha tĩnh, xo là nồng độ tế bào ban đầu
khi cấy, ti, là thời gian sinh vật phát triển ở pmax và tii là thời gian mà sinh vật
không phát triển ở pmax và bao gồm giai đoạn trễ, giai đoạn giảm tốc, và các giai
đoạn phân phối, khử trùng và thu hoạch.

Năng suất3 của nuôi cấy liên tục có thể được biểu thị bằng

Trong đó R cont là đầu ra của quá trình nuôi cấy tính theo nồng độ tế bào mỗi
giờ, tiji là khoảng thời gian trước khi thiết lập trạng thái ổn định và bao gồm thời
gian chuẩn bị bình, khử trùng và vận hành trong lô nuôi cấy trước khi vận hành
liên tục, T là khoảng thời gian trong đó các điều kiện trạng thái ổn định chiếm ưu
thế và X là nồng độ tế bào ở trạng thái ổn định Sản lượng sinh khối tối đa trên
một đơn vị thời gian (tức là năng suất) trong máy điều hòa nhiệt độ có thể đạt
được bằng cách vận hành ở tốc độ pha loãng cho giá trị cao nhất của DX , giá trị
này được gọi là năng suất lên men theo mẻ, như được mô tả trong phương trình là
giá trị trung bình cho tổng thời gian của quá trình lên men. Bởi vì dx / dt = px,
năng suất của quá trình nuôi cấy tăng lên theo thời gian và do đó, phần lớn sinh
khối trong quy trình hàng loạt được tạo ra gần cuối giai đoạn log. Ở trạng thái ổn
định chemostat, hoạt động tại hoặc gần Dma, năng suất không đổi và tối đa cho
toàn bộ quá trình lên men. Ngoài ra, một quá trình liên tục có thể được vận hành
trong một thời gian rất dài để thời gian phi sản xuất, tiii trong phương trình (6),
có thể không đáng kể. Tuy nhiên, yếu tố thời gian phi sản xuất đối với một mẻ nuôi
cấy là một giai đoạn rất quan trọng, đặc biệt là quá trình lên men sẽ phải được
thiết lập lại nhiều lần trong thời gian vận hành của một quy trình liên tục có thể
so sánh được và do đó, sẽ được lặp lại. Bản chất trạng thái ổn định của một quá
trình liên tục cũng có ưu điểm là hệ thống sẽ dễ kiểm soát hơn nhiều so với một
quá trình theo lô tương đương. Trong quá trình lên men theo mẻ, sản lượng nhiệt,
sản xuất axit hoặc kiềm, và tiêu thụ oxy sẽ dao động từ tốc độ rất thấp khi bắt đầu
lên men đến tốc độ rất cao trong giai đoạn cuối của giai đoạn logarit. Do đó, việc
kiểm soát môi trường của một hệ thống như vậy khó hơn nhiều so với một quá
trình liên tục mà ở trạng thái ổn định, tốc độ sản xuất và tiêu thụ không đổi. Hơn
nữa, một quá trình liên tục sẽ dẫn đến nhu cầu lao động liên tục hơn là một nhược
điểm thường được trích dẫn của các hệ thống liên tục là tính dễ bị nhiễm bẩn bởi
các sinh vật ngoại lai. Việc ngăn ngừa ô nhiễm về cơ bản là một vấn đề của thiết
kế, xây dựng và vận hành máy lên men và cần được khắc phục bằng kỹ thuật tốt
và thực hành vi sinh. ICI đã nhận ra những ưu điểm vượt trội của quy trình sinh
khối liên tục và khắc phục các vấn đề ô nhiễm bằng cách xây dựng một thiết bị lên
men an toàn có khả năng hoạt động vô trùng trong thời gian rất dài, như Smith
mô tả.
The production of growth-associated by-products, such as ethanol, should also be
more efficient in continuous culture. However, continuous brewing has met with
only limited success and UK breweries have abandoned such systems owing to
problems of flavour and lack of flexibility. The production of
industrial alcohol, on the other hand, should not be limited by the problems
encountered by the brewing industry and continuous culture should be the method
of choice for such a process. The adoption of continuous culture for the production
of biosynthetic (as opposed to catabolic) microbial products has been extremely
limited.
Việc sản xuất các sản phẩm phụ liên quan đến tăng trưởng, chẳng hạn như
ethanol, cũng sẽ hiệu quả hơn trong nuôi cấy liên tục. Tuy nhiên, việc sản xuất bia
liên tục chỉ đạt được thành công hạn chế và các nhà máy bia ở Anh đã từ bỏ hệ
thống như vậy do các vấn đề về hương vị và thiếu tính linh hoạt. Sản lượng của
Mặt khác, cồn công nghiệp không nên bị giới hạn bởi các vấn đề mà ngành sản
xuất bia gặp phải và phương pháp nuôi cấy liên tục nên là phương pháp được lựa
chọn cho quá trình như vậy. Việc áp dụng phương pháp nuôi cấy liên tục để sản
xuất các sản phẩm vi sinh vật sinh tổng hợp (trái ngược với dị hóa) còn rất hạn
chế.
Although, theoretically, it is possible to optimize a continuous system such that
optimum productivity of a metabolite should be achieved, the long-term stability
of such systems is precarious, owing to the problem of strain degeneration. A
consideration of the kinetics of continuous culture reveals that the system is highly
selective and will favour the propagation of the best adapted organism in a culture.
Best-adapted in this context refers to the affinity of the organism for the limiting
substrate at the operating dilution rate. A commercial organism is usually highly
mutated such that it will produce very high amounts of the desired product.
Therefore, in physiological terms, such commercial organisms are extremely
inefficient and a revertant strain, producing less of the desired product, may be
better adapted to the cultural conditions than the superior producer and will come
to dominate the culture. This phenomenon, termed by Calott as contamination
from within, is the major reason for the lack of use of continuous culture for the
production of microbial metabolites.
Mặc dù về mặt lý thuyết, có thể tối ưu hóa một hệ thống liên tục để đạt được năng
suất tối ưu của chất chuyển hóa, nhưng tính ổn định lâu dài của các hệ thống đó
là bấp bênh do vấn đề thoái hóa biến dạng. Việc xem xét động học của quá trình
nuôi cấy liên tục cho thấy rằng hệ thống này có tính chọn lọc cao và sẽ tạo điều
kiện thuận lợi cho việc nhân giống sinh vật thích nghi tốt nhất trong môi trường
nuôi cấy. Thích nghi tốt nhất trong bối cảnh này đề cập đến ái lực của sinh vật đối
với chất nền giới hạn ở tốc độ pha loãng hoạt động. Một sinh vật thương mại
thường bị đột biến cao để tạo ra lượng sản phẩm mong muốn rất cao. Do đó, về
mặt sinh lý, các sinh vật thương mại như vậy cực kỳ kém hiệu quả và một dòng
hoàn nguyên, tạo ra ít sản phẩm mong muốn hơn, có thể thích nghi tốt hơn với các
điều kiện văn hóa so với các nhà sản xuất cao cấp và sẽ thống trị nền văn hóa.
Hiện tượng này, được Calott gọi là ô nhiễm từ bên trong, là nguyên nhân chính
dẫn đến việc không sử dụng phương pháp nuôi cấy liên tục để sản xuất các chất
chuyển hóa của vi sinh vật.
The penicillin fermentation provides a very good example of the use of fed-batch
culture for the production of a secondary metabolite. The penicillin process is a
two-stage fermentation; an initial growth phase is followed by the production
phase or idiophase. During the production phase glucose is fed to the
fermentation at a rate which allows a relatively high growth rate (and therefore
rapid accumulation of biomass) yet maintains the oxygen demand of the culture
within the aeration capacity of the equipment. If the oxygen demand of the
biomass were to exceed the aeration capacity of the fermenter anaerobic
conditions would result and the carbon source would be used inefficiently. During
the production phase the biomass must be maintained at a relatively low growth
rate and, thus, the glucose is fed at a low dilution rate. Phenylacetic acid is a
precursor of the penicillin molecule but it is also toxic to the producer organism
above a threshold concentration. Thus, the precursor is also fed into the
fermentation continuously, thereby maintaining its concentration below the
inhibitory level.

1. Definition of microbial fermentation or biomass industrial scale

2. Application of microbial fermentation in food technology
3. Application of microbial fermentation in biomedicine technology
4. Application of microbial fermentation in agriculture production
5. Application of microbial fermentation in environmental protection
6. The factors effect to fermentation process (including condition and nutrition
composition) **
Quá trình lên men penicillin cung cấp một ví dụ rất tốt về việc sử dụng phương
pháp nuôi cấy theo mẻ nạp để sản xuất chất chuyển hóa thứ cấp. Quá trình
penicillin là một quá trình lên men hai giai đoạn; giai đoạn tăng trưởng ban đầu
được theo sau bởi giai đoạn sản xuất hoặc giai đoạn tự phát triển. Trong giai
đoạn sản xuất, glucose được cung cấp cho
lên men với tốc độ cho phép tốc độ tăng trưởng tương đối cao (và do đó tích lũy
sinh khối nhanh chóng) nhưng vẫn duy trì nhu cầu oxy của nuôi trong khả năng
sục khí của thiết bị. Nếu nhu cầu oxy của sinh khối vượt quá khả năng sục khí của
các điều kiện kỵ khí của thiết bị lên men và nguồn carbon sẽ được sử dụng không
hiệu quả. Trong giai đoạn sản xuất, sinh khối phải được duy trì ở tốc độ tăng
trưởng tương đối thấp và do đó, glucose được cung cấp ở tỷ lệ pha loãng thấp.
Axit phenylaxetic là tiền chất của phân tử penicillin nhưng nó cũng độc đối với
sinh vật sản xuất
trên một nồng độ ngưỡng. Vì vậy, tiền chất cũng được đưa vào quá trình lên men
liên tục, do đó duy trì nồng độ của nó dưới mức ức chế.

1. Định nghĩa về quá trình lên men vi sinh hoặc quy mô công nghiệp sinh khối
2. Ứng dụng của quá trình lên men vi sinh vật trong công nghệ thực phẩm
3. Ứng dụng lên men vi sinh trong công nghệ y sinh
4. Ứng dụng của quá trình lên men vi sinh trong sản xuất nông nghiệp
5. Ứng dụng của quá trình lên men vi sinh trong bảo vệ môi trường
6. Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình lên men (bao gồm điều kiện và thành phần
dinh dưỡng) **