Industrial Crops and Products

Chemical constituents and biological activities of the Purple Perilla

essential oil against Lasioderma serricorne

Chun-xue You, Ying Wang, Wen-juan Zhang, Kai Yang, Yan Wu, Zhu-feng Geng, Hai-ping Chen ,
Hai-yan Jiang , Shu-shan Du , Zhi-wei Deng , Zhi-long Liu

THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA

TINH DẦU TÍA TÔ TÍM CHỐNG LẠI LASIODERMA
SERRICORNE

Created by Nhu Thi Hang Nga

1
PHỤ LỤC
I. Giới thiệu ............................................................................................................................................. 3
1. Cây Tía tô tím ................................................................................................................................... 3
2. Bọ thuốc lá (bọ xì gà)........................................................................................................................ 3
3. Đặt vấn đề ......................................................................................................................................... 3
II. Phương pháp ................................................................................................................................... 4
1. Phân tích GC/GC-MS ...................................................................................................................... 4
2. Tinh chế và xác định đặc tính của bốn hợp chất từ Tinh dầu tía tô tím ............................................ 5
3. Độc tính tiếp xúc ............................................................................................................................... 5
4. Độc tính tiêu diệt ............................................................................................................................... 6
5. Hoạt tính xua đuổi ............................................................................................................................. 6
III. Kết quả ............................................................................................................................................. 7
1. Thành phần hóa học của tinh dầu tía tô tím ...................................................................................... 7
2. Hoạt động diệt côn trùng................................................................................................................... 7
3. Hoạt tính xua đuổi ............................................................................................................................. 8
IV. Kết luận ............................................................................................................................................ 8

2
I. Giới thiệu

1. Cây Tía tô tím

Tên khoa học: Purple Perilla (Perilla frutescens (L.) Britt.)

Họ: Lamiaceae
Tía tô tím là một loại thảo mộc hàng năm thường được sử dụng như một
loại thuốc truyền thống Trung Quốc trong hơn 1000 năm.
Tinh dầu này bao gồm tổng số 47 thành phần được xác định, trong số đó
các thành phần chính gồm carvone (32,55%), perilla aldehyde (20,52%),
caryophyllene (9,85%), 2-furyl methyl ketone (7,53%), 2,6-dimethyl-6-(4-methyl-
3-pentenyl)-2-norpinene (5,17%), và 𝛽-terpinyl acetate (3,41%).
4 Thành phần hoạt động của tinh dầu là R-(+)-carvone, perilla aldehyde,
2-furyl methyl ketone, and 𝛽-caryophyllene được cho là có đặc tính diệt và chống
côn trùng, có tiềm năng phát triển thành thuốc trừ sâu tự nhiên hoặc thuốc chống
côn trùng .
2. Bọ thuốc lá (bọ xì gà)
Tên khoa học: Lasioderma serricorne

Họ: Ptinidae

Bọ thuốc lá là một trong những loài gây hại nghiêm trọng nhất của
thực vật được lưu trữ trên toàn thế giới.Chúng gây ra thiệt hại đáng kể trong
quá trình bảo quản các sản phẩm thực phẩm dễ hư hỏng như ngũ cốc, các loại
đậu, thuốc lá và dược liệu.
3. Đặt vấn đề
Hiện tại, các biện pháp kiểm soát dịch hại được khuyến nghị trong các
sản phẩm được bảo quản lâu chủ yếu dựa vào việc sử dụng thuốc trừ sâu hoặc
thuốc diệt côn trùng tổng hợp gây nguy hiểm sức khỏe, nguy cơ ô nhiễm môi
trường, sự phát triển kháng thuốc của côn trùng và sự tái sinh của sâu bệnh.

3
 Việc sử dụng các loại tinh dầu hoặc các thành phần của chúng có độc
tính có thể ngăn ngừa côn trùng dịch hại một cách hiệu quả. Các cuộc điều tra
ở một số quốc gia đã xác định rằng một số loại tinh dầu thực vật không chỉ xua
đuổi côn trùng mà còn có độc tính tiếp xúc và khử trùng chống lại các loài gây
hại cho sản phẩm lưu trữ cũng như cho thấy sự ức chế sự sinh sản của côn trùng.

Tinh dầu và các thành phần của chúng trong nhiều loại thực vật như
dược liệu, gia vị và trái cây đã được đánh giá thành công cho các hoạt động diệt
côn trùng hoặc xua đuổi côn trùng trong sản phẩm được lưu trữ. Hơn nữa, tinh
dầu và các thành phần của chúng đã được chứng minh hiệu quả hơn so với
thuốc trừ sâu được sử dụng truyền thống.

Bên cạnh các hoạt động diệt và xua đuổi côn trùng tinh dầu từ các
nguồn thực vật khác nhau đã thể hiện một số hoạt tính sinh học, chẳng hạn như
kháng khuẩn và kháng nấm,..

Nghiên cứu này khảo sát thành phần hóa học và hoạt tính diệt và xua
đuổi bọ thuốc lá của tinh dầu cây tía tô tím .

II. Phương pháp

1. Phân tích GC/GC-MS

Thành phần tinh dầu của các bộ phận bên trên mặt đất của cây Tía tô tím
được xác định bằng :
+ Sắc ký khí - phát hiện ion hóa ngọn lửa (GC – FID)
+ Sắc ký khí – khối phổ (GC – MS)
+ Sử dụng máy sắc ký khí Agilent 6890N được nối với máy dò chọn lọc khối lượng
Agilent 5973N.
+ Cột mao quản HP-5MS (30 m × 0,25 mm × 0,25 mm)
+ Nhiệt độ cột được lập trình ở 50 ◦C trong 2 phút, sau đó tăng ở 2 C / phút đến nhiệt
độ 150 ◦C và giữ trong 2 phút, sau đó tăng ở 10 ◦C / phút cho đến nhiệt độ cuối cùng

4
là 250 ◦ C, giữ trong 5 phút.
+ Nhiệt độ kim phun được duy trì ở 250 ◦C
+ Thể tích bơm vào là 0,1 mL dung dịch 1% (pha loãng trong n-hexan).
+ Khí mang là heli ở tốc độ dòng 1,0 mL / phút.
+ Quang phổ được quét từ 50 đến 550 m /z.
→ So sánh chỉ số với mẫu chuẩn

2. Tinh chế và xác định đặc tính của bốn hợp chất từ Tinh dầu tía tô tím

Tinh dầu thô (5 mL) được sắc ký trên cột silica bằng cách rửa giải
gradient với n-hexan trước, sau đó với n-hexan-etyl axetat và cuối cùng với
etyl axetat.
+ Sử dụng phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC) để thu được 25 phân đoạn.
+ Tinh chế bằng sắc ký cột silica gel điều chế (PTLC) cho đến khi thu được
các hợp chất tinh khiết để xác định cấu trúc là R-(+)-carvone (0,66 gperilla
aldehyde (0,48 g), 2-furyl methyl ketone (0,16 g) và 𝛽-caryophyllene (4, 0,22
g).

3. Độc tính tiếp xúc

Độc tính tiếp xúc của tinh dầu đối với L. serricorne được theo phương pháp
của Liu và Ho (1999).
+ Pha loãng nối tiếp tinh dầu / hợp chất (nồng độ ve) được chuẩn bị trong n-hexan.
+ Một lượng nhỏ 0,5 µL của dung dịch pha loãng được bôi tại chỗ lên ngực lưng của
côn trùng. Mười loại côn trùng được sử dụng cho mỗi nồng độ và đối chứng, và thí
nghiệm được lặp lại nhiều lần, sau đó được chuyển vào lọ thủy tinh có môi trường
nuôi cấy và giữ trong tủ sấy
+ Tỷ lệ chết được ghi nhận sau 24 giờ. Dữ liệu quan sát được đối chứng bằng cách
sử dụng công thức của Abbott. Các giá trị LD50 được tính toán bằng cách sử dụng
phân tích Probit (IBM SPSS V20.0). Chất kiểm soát sau đó, pyrethrins (pyrethrin I,
24%; pyrethrin II, 13%; cinnerin I, 2%; cinnerin II, 2%; jasmolin I, 1%; jasmolin II,
1%) được mua từ Tiến sĩ Ehrenstorfer, Đức.

5
 4. Độc tính tiêu diệt

Hoạt động xông hơi của tinh dầu đối với L. serricorne trưởng thành đã được
thử nghiệm như mô tả của Liu và Ho (1999).
+ Pha loãng nối tiếp tinh dầu được chuẩn bị trong n-hexan. Một giấy lót Whatman
(đường kính 2,0 cm) được ngâm tẩm với dung dịch pha loãng 10 µL và sau đó đặt
vào mặt dưới của nắp vặn của lọ thủy tinh (đường kính 2,5 cm, cao 5,5 cm, thể tích
25 mL).
+ Dung môi được để bay hơi trong 20 s trước khi đậy chặt nắp vào lọ thủy tinh, mỗi
lọ chứa 10 con côn trùng bên trong để tạo thành một nắp kín. Fluon (ICI America
Inc.) được sử dụng bên trong lọ thủy tinh để ngăn côn trùng tiếp xúc với giấy lọc đã
qua xử lý.
+ Lặp lại 5 lần cho tất cả các phương pháp và đối chứng. Tỷ lệ chết được xác định
sau 24 giờ điều trị. Các giá trị LC50 được tính toán bằng cách sử dụng phân tích
Probit (IBM SPSS V20.0).

5. Hoạt tính xua đuổi

Hoạt động xua đuổi L. serricorne đã được thử nghiệm theo phương pháp của
Zhang.
+ Đĩa petri (đường kính 9 cm) đã được sử dụng để bắt mọt thuốc lá trong quá trình
thử nghiệm. Tinh dầu thô và các hợp chất phân lập được pha loãng trong n-hexan,
và n-hexan được sử dụng làm đối chứng.
+ Giấy lọc (đường kính 9 cm) được cắt đôi và 500 µL của mỗi lượng được áp dụng
riêng biệt với một nửa giấy lọc. Nửa còn lại (đối chứng) được xử lý với 500 µL n-
hexan. Sau đó, cả nửa đã xử lý và nửa đối chứng đều được làm khô trong không khí
để làm bay hơi hoàn toàn dung môi (30 s).
+ Mỗi tờ giấy lót được đặt vào đĩa Petri với đường nối được định hướng theo một
trong bốn hướng khác nhau. Hai mươi con côn trùng được thả vào giữa mỗi đĩa giấy
lót, và một nắp đậy được đặt trên đĩa Petri.
+ Số lượng côn trùng có mặt trên mỗi dải được thực hiện sau 2 và 4 giờ.

6
III. Kết quả

1. Thành phần hóa học của tinh dầu tía tô tím

Tinh dầu tía tô có màu vàng với năng suất 0,079% (v/w) và tỷ trọng 0,89 g/mL.
Tổng số 47 thành phần của tinh dầu tía tô đã được xác định, chiếm 93,62% tổng số
dầu. Các hợp chất chính trong tinh dầu là carvone (32,55%), perilla aldehyde
(20,52%), caryophyl-lene (9,85%), 2-furyl methyl ketone (7,53%), 2,6-dimethyl-6-
(4-metyl-3-pentenyl)-2-norpinene (5,17%) và 𝛽-terpinyl axetat (3,41%).

2. Hoạt động diệt côn trùng

Tinh dầu của các bộ phận trên mặt đất của Tía tô tím có độc tính khi tiếp xúc
đối với L. serricorne với giá trị LD50 là 3,13 µg/con. Perilla aldehyde có độc tính
cao hơn gần 2, 3 và 9 lần tương ứng so với 2-furyl methyl Ketone, R-(+)-carvone,
và 𝛽-caryophyllene. Người ta cho rằng Perilla aldehyde là một đóng góp chính trong
hoạt động tiếp xúc của tinh dầu đối với L. serricorne trưởng thành.
2-furyl methyl ketone (LC50 = 0,86 mg/L) thể hiện độc tính tiêu diệt đối với
L. serricorne mạnh hơn R-(+)-carvone (LC50 = 1,83 mg/L), perilla aldehyde (LC50
= 3,03 mg/L), và tinh dầu thô (LC50 = 4,16 mg / L).
𝛽-caryophyllene không cho thấy độc tính khi tiêu diệt ở các nồng độ thử
nghiệm. 2-Furyl methyl ketone cho thấy độc tính xông hơi mạnh hơn gần 2, 4 và 5
lần so với R-(+)-carvone, perilla aldehyde, và tinh dầu thô chống lại L. serricorne
trưởng thành. Tuy nhiên, so với các loại tinh dầu khác trong tài liệu, tinh dầu của
các bộ phận trên mặt đất của Purple Perilla có độc tính tiệu diệt mạnh hơn đối với L.
serricorne trưởng thành, ví dụ như tinh dầu của Agastache foeniculum (LC50 =
21,57 µL /L), tinh dầu của L. cubeba (LC50 = 22,97 mg / L).
Các chất hiện đang được sử dụng là thuốc trừ sâu tổng hợp và các chất khử
trùng hiệu quả nhất (ví dụ, phosphine và methyl bromide) cũng rất độc đối với con
người và các sinh vật khác. Tinh dầu của các phần trên mặt đất của Tía tô tím và các
hợp chất cô lập của nó cho thấy có khả năng được phát triển như thuốc hun hoặc

7
thuốc diệt côn trùng tự nhiên có thể để kiểm soát L. serricorne.
3. Hoạt tính xua đuổi

Tinh dầu tía tô tím và các thành phần phân lập có hoạt tính chống lại L.
serricorne có thể so sánh được. Dữ liệu cho thấy ở nồng độ thử nghiệm là 39,32
nL/cm2, tinh dầu thô, R-(+)-carvone, và perilla aldehyde cho thấy khả năng xua đuổi
mạnh (loại V) (tương ứng là 80%, 82% và 82%) và độ xua đuổi trung bình (loại IV)
(lần lượt là 72%, 78% và 74%) đối với L. serricorne ở 2 giờ và 4 h sau khi phơi
nhiễm, trong khi 2-furyl methyl ketone thể hiện tính xua đuổi vừa phải (Loại IV)
(tương ứng là 70% và 76%) đối với L. serricorne ở 2 giờ và 4 giờ sau khi tiếp xúc.
So sánh các hợp chất được phân lập ở trên, hoạt động diệt côn trùng và xua
đuổi của chúng rất khác nhau. Điều này có thể là do số lượng và vị trí của liên kết
đôi trong cấu trúc hóa học. Các hợp chất càng có nhiều liên kết đôi, chúng thường
có hoạt động diệt côn trùng và xua đuổi côn trùng tốt hơn.
Các kết quả trên chỉ ra rằng các đặc tính hoạt tính sinh học của tinh dầu có
liên quan đến tác dụng hiệp đồng của các thành phần chính và phụ đa dạng của nó.
Do đó, không thể phân lập các thành phần hóa học ở cả tỷ lệ phần trăm cao và thấp
đối với hoạt tính sinh học đáng kể của chúng.

IV. Kết luận

Nghiên cứu chỉ ra rằng tinh dầu của các phần trên mặt đất của Tía tô tím và các
hợp chất cô lập có các hoạt động diệt và xua đuổi côn trùng đáng kể đối với L.
serricorne và cho thấy tiềm năng phát triển như thuốc trừ sâu tự nhiên hoặc chất xua
đuổi côn trùng .
Sự phát triển của thuốc trừ sâu tự nhiên sẽ giúp giảm tác động tiêu cực của các
chất diệt và xua đuổi côn trùng tổng hợp, chẳng hạn như dư lượng thuốc trừ sâu, sức
đề kháng và ô nhiễm môi trường. Hơn nữa, nguồn nguyên liệu tự nhiên của Tía tô
rất dồi dào nên có góc độ ứng dụng rất tốt. Tuy nhiên, cần có những nghiên cứu sâu
hơn để khảo sát cơ chế diệt và xua đuổi côn trùng của tinh dầu Tía tô tím.