TCVN TIEU CHUAN QUOC GIA TCVN 6507-1:2019 ISO 6887-1:2017 Xuat ban lan 2 VI SINH VAT TRONG CHUOI THUC PHAM - CHUAN BI MAU THU, HUYEN PHU BAN DAU VA CAC DUNG DICH PHA LOANG THAP PHAN DE KIEM TRA VI SINH VAT - PHAN 1: CAC NGUYEN TAC CHUNG DE CHUAN BI HUYEN PHU BAN BAU VA CAC DUNG DICH PHA LOANG THAP PHAN Microbiology of the food chain - Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination -— Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions HA NOI - 2019TCVN 6507-1:2019 Loi noi dau TCVN 6507-1:2019 thay thé TCVN 6507-1:2005; TCVN 8507-1:2019 hoan toan twang durong ISO 6887-1:2017; TCVN 6507-1:2019 do Ban kj thuat tisu chudn quéc gia TCVNITCIF13 Phuong phép phn tich va ly mau bién soan, Tong cue Tiéu chudn Do lvong Chat lurgng thm dinh, BG Khoa hee va Céng nghé céng bé; 86 TCVN 6507 (ISO 6887) Vi sinh vat trong chudi thye phém — Chudn bj méu thi, huyén phu ban dau va cdc dung dich pha long thap phan dé kiém tra vi sinh vat bao gdm cac phan sau: — TCVN 6507-1:2019 (ISO 6887-1:2017), Phan 1: Cac nguyén téc chung dé chudn bj huyén phi ban dau va cdc dung dich pha lodng thap phan; ~ TCVN 6507-2:2019 (ISO 6887-2:2017), Phan 2: Cac nguyén tac cu thé dé chudn bj cdc mau thit va sdn phdm thit; ~ TCVN 6507-3:2019 (ISO 6887-3:2017), Phan 3: Cac nguyén tic cu thé dé chuén bj cdc mau thuy san va san pham thuy san, ~ TCVN 6507-4:2019 (ISO 6887-4:2017), Phdn 4: Cac nguyén téc cu thé dé chudn bj céc m&u san phém hin hop; = TCVN 8507-5:2013 (ISO 6887-5:2010), Phan 5: Céc nguyén téc ou thé dé chudn bi mu sifa va sin phém sita; ~ TCVN 8507-6:2015 (ISO 6887-6:2013), Phan 6: Céc nguyén tdc cu thé dé chudn bj mau due ldy tir giai doan sdn xuat ban dau.TCVN 6507-1:2019 Loi gidi thigu Do tinh da dang cla cac sin phdm thyc pham va thir &n chan nudi nén phuong phap nay cé thé khéng thich hop dén tizng chi tiét cho ting sdn phdm cy thé. Trong truéng hop nay, ¢6 thd sir dung cdc phuong phap khdc dac trung cho cdc sdn pham, néu hoan toan chi vi ly do kj thuat. Khi tigu chudn nay dug soat xét tip thi can phai tinh dén moi théng tin lién quan één pham vi ma Phuong phép nay phai tuan theo va cde nguyén nhan gay sai I@ch so voi phurong phap trong truréng hop cdc sain phdm cy thé. Viéc hai hoa cdc phurong phap thir c6 thé khang thuc hién duoc ngay va déi véi mot vai nhém san pham oy thé, ¢6 thé c6 céc tiéu chudn quéc té vathodc tiéu chuan quéc gia ma khéng phi hop vor tiéu chuan nay. Khi cdc tiéu chudn d6 duge soat xét, thi ching phai duge sira di dé phir hop voi tigu ‘chun nay, sao cho cubi cing chi cén cée sai éch voi phuong phap nay la cdc ly do ky thuat dure thira nha. ‘Tidu chudn nay dura ra nguyén tc chung 48 chun bi cdc dung dich huyn phir ban du va céc dung dich pha long thap phan 48 kim tra vi sinh vat. Cac phn cdn lai cila bd TCVN 6507 (ISO 6887) da ra cdc nguyén tc cu thé dé chudn bj mu thir va huyén phi ban dau, mdi phan cé tinh dén tinh da dang cla céc thyrc phdm, thize 4n chin nudi va mau mdi trong 4p dyng tiéu chudn 66. 186i voi mét sé céc sn phdm, c&n dua ra canh béo cu thé dé chudn bj huyén phii ban dau do trang thai vat lf cla sn phim (vi dy: san phim dé loai nus, san phdm o6 dg sénh cao) hoc sy c6 mat cia cc chat Ure ché (nhur cac loai gia vi, ham lung muéi cao), hoac do axit v.v... Bigu nay dug bao quét trong cac thuat ngiv cila tigu chuan nay. Bat ky dich pha long hodc yéu cu thyrc hanh dac biét nao due yéu cdu cho cdc sdn phdm hoa cdc vi sinh vat nhat dinh trong cae phuong phap chuan cy thé déu duge wu tién str dyng cdc nguyén tic ‘chung dug néu trong cdc phan cia b6 TCVN 6507 (ISO 6887). Didu nay cé thé bao gém: = quy trinh hoan nude cy thé déi vei thyc pham co host d nude thdp dé gidm thiéu séc thAm théu; — sit dyng nhiét &9 thich hop 68 h8 trey cho viée tao huyan phi: ca cao, gelatine, sia bat, v.v...; = quy trinh khéi phuc 4é cdi thién sy phuc hbi cila cdc vi sinh vat bj tre ché do ché bién va bao quan thy phdm; — guy trinh va théi gian ding héa cy thé a6i voi m6t sé sén phdm nhat dinh (vi dy: ng cbc) va/hode 468i voi mot s6 phép thir nhat dinh (vi du: ném men va nam méc).TIEU CHUAN QUOC GIA Vi sinh vat trong chudi thwe pham — Chuan bi mau thir, huyén phi ban dau va cac dung dich pha loang thap phan dé kiém tra vi sinh vat - Phan 1: Cac nguyén tac chung dé chuan bj huyén pha ban dau va cac dung dich pha loang thap phan Microbiology of the food chain — Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination - Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions CANH BAO: Viéc 4p dung tiéu chudn nay c6 thé lign quan dén cac vat ligu, thiét bj va cdc thao tac nguy hiém. Nguoi siv dyng tiéu chudn nay phai ty thiét lap cdc thao tac an toan thich hgp. va xac dinh kha nang ap dyng cac giéi han quy dinh truéc khi sir dyng tiéu chudn. 1 Pham vi ap dung Tiéu chuan nay da ra céc nguyén t&c chung dé chuan bj huyén phi ban dau va cdc dung dich pha loang dé kiém tra vi sinh vat trong cac san phdm thyre phdm hodc trong thie n chan nudi. Tigu chuan nay 06 thé Ap dung cho truéng hop chung va cde phan khéc ctia b§ TCVN 6507 dp dung cho cdc nhém sn pham oy thé nh duge a2 cap trong Idi ndi dau. Mét s6 ndi dung cing o6 thé duge ap dung cho cdc phwong phap phan tir khi nén mau lin quan dén sy te ché tai cdc bude PCR lam anh hung trye tiép dn két qua thir nghiém. Tiéu chuan nay khéng bao gdm viée chudn bj mau cho cA phuong phap thi dinh tinh va dinh lugng trong khi da c6 céc huéng dn chudn bj duge néu chi tiét trong tiéu chudn cy thé. 2 Tai ligu vién dan Céc tal liu vién d&n sau [a rdt cdn thiét cho viéc 4p dung tiéu chudn. B6i véi cc tai ligu vién din ghi nm céng bé thi ap dung phién ban dugc néu, 4i véi cac tal ligu vign dan khéng ghi nim céng bé thi &p dung phién ban mdi nhat, bao gém cd cdc siva adi, bd sung (néu 06),TCVN 6507-1:2019 TCVN 6404 (ISO 7218) Vi sinh vat trong thyc phdm va thire dn chdn nuéi— Yéu céu chung va huéng dn kiém tra vi sinh vat TCVN 8128 (ISO 11133) Vi sinh vat trong thye phdm, thae én chdn nuéi va nude - Chudn bj, sn xuat, bao quan va thir hiéu nang cile méi trursng nudi cdy. 3. Thuat ngi# va dinh nghia rong tiéu chudn nay str dung cde thudt ngo va inh nghta sau day: a4 Mu phéng thir nghiém (laboratory sample) Mau 6 dug chuan bi dé giti dén phdng th nghiém va duge ding dé kiém tra hodc thir nghigm [TCVN 10989:2015, A.19] 32 Mu két hyp (composite sample) Hn hop cia mét s6 don vi mau cing logi ota thire dn chan nusi, déng vat hoae moi trveng giéng nhau, tt 46 ly ra mot phan mu thé dé kiém tra trong phong thi nghigm CHU THICH: Xem hinh minh hga cia miu két hop trong Phy yc A. 33 Mau gp (pooled sample) Hn hop cla mot s6 dan vj mu cing loai ctia thie &n chain nudi, déng vat ho&c mai tru’ng giéng nhau, trong dé hén hyp hoan chinh la phan mau thir va duc fdy toan bd dé kiém tra trong phéng thir nghiém CHO THICH: Xem hinh minh nga cla mAu gp tong Phy Nc A. 34 Mau thiv nghigm (test sample) Mu dug chuan bj tir mu phing thir nghiém (3.1) theo quy trinh quy éinh trong phurong phép thir va tiv 4 cdc phan mBu ther (3.5) duge My ra CHU THICH: Chudn bi m&u phéng thir nghiém truée khilby phan mu thir duzoe sir dung khang thuréng xuyén trong kiém tra Wi sinh vat. {TCVN 10989:2015, A.47] 35 Phan mu this (test portion) Mau dai dign da due do thé tich ho&e kh6i Ivong léy tir mau phdng thir nghiém (3.1) d8 chuan bi ‘huyén phil ban dau (3.6)TCVN 6507-1:2019 CHU THICH: 846i khi cn chudn bi mdu phéng thir nghigm (3.1) truée khi dy phan mu thir, hung diéu nay duge siy dung khang thuréng xuyén trong kibm tra vi sinh vat 36 Huyén pha ban dau (initial suspension) Dung dich pha loang ban dau (primary dilution) Huyén phi, dung dich hoac nhG tuong thu duge sau khi trén mét lugng san phdm can kiém tra (hode méu duge lay tir san phdm) da dugc can hoae dong dich pha lang lén gp chin lan 68 cho cdc hat to lang xuéng, néu 06. (CHU THICH: Cc lrgng dich pha long gdp chin Ibn thuting éugc sir dyng tao ra mat dy dung dich pha lofing thep phn, nhurng di véi ec myc dich cy thé c6 thé cn dén cde tl pha lo8ng khéc, vl du: 48 dinh lugmg céc s6 démn thé. 37 Dung dich pha lofing tiép theo (further dilution) Cac huyén phir hogc c&c dung dich thu dugc bang cach tron mét thé tich x4c dinh cia huyén phd ban dau (3.6) véi dich pha long ¢6 thé tich 16n gap x lan va bang cach [ap lai thao tac nay voi cdc 4 pha Jong tiép theo cho dén Khi thu duge céc day dung dich pha long thich hep cho vie cdy trong méi trvéng. CHU THICH: Phuong phép pha loding mudi lan thuong éuec sir dung dé tao ra mot dy céc dung dich pha loang thép phan, hung cacy Ie khde 06 thé duge yeu clu cho cae myc dich ou thé, 38 Phan mu thir gép (pooled test portions) Hén hyp cla phan mau thir cing loai ota thire an chan nudi, déng vat hoae méi truéng giéng nhau, trong d6 hdn hyp hoaa chinh fa phan thir nghiém dug kiém tra CHO THICH: Xem hinh minh hga ca phiin mu thir gp trong Phy ic A. 39 Phan mau thir g$p a ting sinh so bé [pooled (pre-jenriched test portions) Cc phan mu thir riéng lé da tang sinh so’ bé tir mét s6 mau thye phdm, thire 4n chain nudi, dng vat hoc mdi truéng giéng nhau, tty dé ldy céc luong quy inh g6p lai 48 kiém tra tiép CHU THICH: Xem hinh minh hea cdc phan mu thir g6p 48 tang sinh so’ b6 trong Phu yc A. 3.10 Tiéu chuan riéng (specific standard) Tiéu chuan hod tai ligu huéng dan mé ta viée kiém tra mot san pham cy thé (hoa mot nhém san pham) 48 phat hién hac dinh long mét loai vi sinh vat cu thé (hodc mét nhom vi sinh vat)TCVN 6507-1:2019 4 Nguyén tac ‘Chuan bj huyén phi ban dau (3.6) sao cho thu duge sy phan bé vi sinh vat trong phan mau thir (3.5) ang ding déu cang t6t Néu cn, chun bj cdc dung dich pha long tiép theo (3.7) sao cho gidm bét sé lgng vi sinh vat ¢6 trong mét don vi thé tich, 8 sau khi d co thé quan sat gc c6 hay khéng 6 sy phat trién cla ching (trong éng hoac chai) hoac dém dugc cac khuan lac (trén cac dia) nhu trong tiéu chudn riéng. CHU THICH; 88 git han pham vi dh lxgrg d&n khodng th uu 38 dinh, hog nu du doén dye s6 ivan Kn wi sinh va, tl ob |th8 chi oly cc dung dich pha lodng (thép phan) cin thiét d& thu dugc 66 dm theo céng thir tinh trong TCVN 6404 ((SO 7218). 5 Dich pha loang 5. Nguy€n ligu co ban Bé tang 66 tai ap cia két qua thi, nén si dung cdc dich pha fodng cé ban s&n, c&c thanh phan oo ban khd hoe cdc méi truéng hon chinh khé. Trong t&t cd cdc trrémg hop, c&n tuan thi nghiém ngat cde huéng dan cla nha san xuat, (Cée hoa chét st? dung phai dat chét long phan tich va thich hop a phan tich vi sinh vat. Nuc sir dung phai ld nude ct hode nude 66 chét Iurgng trong durong [xem TCVN 6404 (ISO 7218) hode TCVN 8128 (ISO 11133)}. 186i véi cae nguyén tac chi tiét hon vé vige chuan bj va thir nghiém higu nang méi trurdng nudi cy, xem TCVN 8128 (ISO 11133). 5.2 Djch pha loang dé sir dung chung 5.2.4 Dung dich mudi pepton 5.24.1 Thanh phan ‘San pham thy phan casein bang enzym 1,09 Nati clorua 859 Nuée 1,000 mi 5.2.4.2 Chudn bj Hoa tan céc thanh phan trong nue dyng trong binh, chai hoac éng nghiém (6.4) bang c&ch dun néng, néu can. Chinh pH sao cho sau khi khir tring, pH /a 7,0 + 0,2 6 25°, néu can.TCVN 6507-1:2019 5.2.2. Dung dich dém pepton 5.2.2.1 Thanh phan Peptont 10,09 Natri clorua 509 Dinatri hydro phosphat ngam 12 phan tly née (NazHPO,.12H20)" + 9,09 Kali dihydro phosphat (KH2PO.) + 159 Nuge 4 000 mt * Vi dy, san pham thiy phan casein bang enzym ® Néu dinatri hydra phosphat c6 ham lugng nuéc khac dee sir dung thl chinh khdi kegng thanh phan tong ing. Vi dy, truémg hop dinatri hydrophosphat (NasHPOs) khan thi sir dung 3,57 9. $ cdc thanh phan dem, xem 5.2.3. 5.2.2.2 Chuan bj Hoa tan cc thanh phan trong nuéc ding trong binh, chai ho&c éng nghiém (6.4) bang cach dun néng, néu can. Chinh pH sao cho sau khi khir tring, pH ta 7,0 + 0,2 6 25°, néu can. 6.2.3 Dung dich dém pepton ndng 46 kép Dich pha long nay c6 thé cdn thiét d6i voi cdc mau cé tinh axit cao (xem 8.6) va duoc chuan bj bang cach hoa tan gp di lwgng mai turéng hon chinh khé trong 1 000 ml nuréc va xtr ly theo cach tuong ty. Néu dich pha long duge chudn bj tir cdc thanh phan riéng ré thi chi can tang gdp déi lugng cia hai thanh phan dém (danh dau +). 8.3. Dich pha loang ding cho cae myc dich dc biét Xem tiéu chun riéng hodc phan thich hgp cla bé TCVN 6507 (ISO 8887) phi hep voi san pham cb fién quan. 5.4 Phan phdi va khir tring dich pha loang Phan phéi dich pha loang tiép theo véi long can thiét d& chudn bi céc huyén phi ban dau vao céc binh (6.4) cé dung tich thich hop. Phan phéi dich pha lodng tiép theo voi Ivgng can thiét dé chuan bi céc dung dich pha lofing (thép phan hodic theo ty Ié khac) vao cae binh (6.4) 66 dung tich thich hep.TCVN 6507-1:2019 ‘Sai sé cho phép vé thé tich pha long cuéi cing sau Khi Khir tring khong duge vurgt qua #2 %. Dé dinh Ivong mét vai nhém vi sinh vat sir dung cac mai trvéng nudi cy khac nhau, thi cling c6 thé cn phdi phan phdi tat ca (hoa mat s6) cac dich pha loang véi cac lugng lon hon 9,0 ml vao cac binh (6.4) c6 kich c& thich hop. Noi l6ng nap binh, 4é cé thé gian né do nhigt. Khir tring 15 min trong ndi hap ap lye & 121 °C + 3 °C [xem TCVN 6404 (ISO 7218)}. ‘Sau khi hdp dp Iyc, kiém tra mét phan mé dich pha long dugc chudn bj nam trong sai sé cho phép + 2%. Cé thé kiém tra bang cach can binh truéc va sau khi h4p 4p lire hodc dd hat Iueng chia trong binh vao vat chifa da can bl sau khi hép 4p Ic. Si voi cdc ma nhé it hon 100 binh, kiém tra It nhdt mot binh, déi véi cdc mé lén han, kiém tra 3 % dén 6 % sé binh, Bé 64m bao cac lurgng pha loang dap tng sai s6 cho phép, hap ap lyrc cac lrgng lon va phan phéi cac lung can thiét vao cac binh vé triing. 5.5. Thi higu nang déi vi dich pha loang Kiém tra tat cd cdc dich pha loang truéc khi st? dung, theo Bang 1, bang phuong phap néu trong TCVN 8128 (ISO 11133), Tiéu chi nding sudt 46i véi dich pha lodng yéu cu sé lugng cdc khudn lac dém dug sau khodng thoi gian U quy dinh tai nhiét & méi truéng phéng thir nghiém (18 °C d&n 27 °C) phai n&m trong khoang #30 % s6 dém ban dau. Bang 1 - Vi sinh vat thir nghiém va tiéu chi nang sudt d4i voi dich pha loang ‘Méi trong u Visinh vat thir | Sétweng | Méi trvdng | Phuong phap| Tiéu chi nghigm: WOCM* | déichéng | kiém chimg Dung dich pha Jong mudi pepton Dung dich dem penton (nbng do | 45 mindén 1h 8) Escherichia col? | 00012 hod 30% s6 an va nbng do kep) ' nt ra 00013 | tsa | inh trong [oémban neeen "one ( Maro. | Staphylococcus | —oo034 ou én 27 °C) —_— Dich pha long em phosphat * Xem danh myc ching chudn 46 ching cb sin trén website hito-Mawwartes info vé thing tin 86 hagng b suu tép ching i ody va ci tin he, Ching ti thidu el si dung, Tyr do tya cron mgt rong cc ching th thidu ph sir dung, 10TCVN 6807-1:2049 6 Thiét bj, dung cu Si dung cdc thiét bi cla phdng thir nghiém vi sinh théng thuréng [xem TCVN 6404 (ISO 7218)] va cy thé nhu sau; 6.1 Thiét bi d& khie trong khé (td sdy) va thiét bj 48 khi> tring wt (ndi hap dp Ive) [xem TCVN 6404 (Iso 7218)] 6.2 Thiét bi déng héa 6.2.1 BG déng héa quay (b6 trn) Xem TCVN 6404 (ISO 7218). Néu c&n ddng héa lung mau [én, thiét bj can bao gdm binh 4 L vé trung. 6.2.2, BO déng héa kiéu nhu dong Xem TCVN 8404 (ISO 7218). Cé cc ti vo trung hoe cae tui loc 8 git tai cdc hat khi cn 6.3 May khudy co, xem TCVN 6404 (ISO 7218). 6.4 Binh, 6ng nghig¢m hoac chai co nap van, cd dung tich thich hyp. 6.5 Pipet xa hét, co dung tich danh dinh ¢ ml va 10 ml, dirge chia vach thea 0,1 ml va 0,5 ml twang mg. Cé thé str dung céc pipet ty dong co’ c6 46 chinh xéc thich hop [xem TCVN 6404 (ISO 7218)}. 6.6 May do pH, 06 thé doc éurge dén 0,01 don vi pH & 25°C, cé thé do chinh xéc dén +: 0,1 don vi pH {xem TCVN 6404 (ISO 7218)]. 6.7. Can va b@ pha loang, co thé can chinh xéc dén 1 % khéi lwong [xem TCVN 6404 (ISO 7218)}. 6.8 Khay dyng mu v6 triing, cé kich thuéc thich hyp. 6.9 Kéo, kep hoe cap v6 tring, dao hogc thia det va dao tron. 6.10 Dyng cy ma dic bist, d& mé chai va np hép. 6.11. Dung cy thu nhan phan mau thie tir mu phdng thir nghigm déng lanh 6.11.1 May khoan dién cé thé thay ddi tée dé, thc do t6i da 900 rmin hodc khoan cdm tay. 6.14.2 Mai khoan gé v6 triing ding cho khoan dign, duéng kinh 14 mm ho&e 16 mm. 6.11.3 Duc gé vé tring, chiéu rong 20 mm va ba hoc duc bang chat déo. 6.14.4 Dyng cy khac khéng lam tang nhiét hoac nhiém ban mau. "1TCVN 6607-1:2019 6.11.5 Dung cu dét bé mat mdu, vi du: dén thdi khi cm tay. 6.11.6 Khuén ldy mau bé mat, c6 khung kim logi voi kich thud ph hop dé xéc dinh bé mat can dy mau, da kh? tring bang cach dét trén lira sau khi nhting trong cén 70 % (thé tich). 6.12 Ni cach thay, cé khd nang duy trl 6 44 *C dn 47 °C hoac phi hop voi céc myc dich cu thd. 6.13 Binh, vat chia hoe tui bang chdt déo cd réng v6 triing, dung tich §00 ml. 6.14 Hat hod bi thiy tinh v6 tring, d& phan tan cdc mau nhy gac. 7 Lay mau Tién hanh ky mau theo tiéu chudn cy thé tong ting véi san phdm hodic xem TCVN 11923 (ISO/TS 17728). Néu khéng c6 cae huéng dan fay mau cy thé thi cdc bén lién quan ty thoa thuan vé van dé nay. Mét sé hudng dan o6 trong cdc phan khdc cia TCVN 6507 (ISO 6887) vé viée lay mau cy thé doi voi cae san phdm nhat dinh [xem vi du trong TCVN 6507-3 (ISO 6887-3). 8 Chuan bj mau thir 81 Yéucdu chung Cac yéu cu déi véi danh myc ede loai san phém chung khac nhau cn kiém tra vi sinh duge néu trong ibu nay. B4i voi cdc yéu cau cy thé vé cdc loai san phdm nht dinh, xem phan thich hop cla TCVN 6507 (ISO 6887) dé biét thém théng tin, Trong cae truéng hyp khéc, xem tiéu chudin cy thé phi hyp véi san pham lién quan, Néu khéng c6 sn tidu chudn cy thé thi cdc bén c6 lién quan ty thod thugn vé van dé nay. 8.2. San phdm déng lanh 8.24 Yéu cau chung ‘Sn phdm déng lanh Auge xem xét nhu sau: — cae mau phing thir nghigm nhé 6 thé duge r déng ted khi thiy nghiém; — cc tang hog khéi lon dé téy ra mu phdng thir nghiém hoa phan méu thir ma khéng cn r& dong. 8.2.2 Cac mau nhé duge ra déng true khi thir nghi¢m Cac mau nay bao gdm cae san pham cia tat ca cdc loai Guge bao géi sn dng dé ban Ié (thurong dudi 2 kg), bao gém cac miéng cat va cdc phan cia thit, ca, rau, mén trang migng va cdc san phim nhiéu thanh phan da dure ché bién. 2Cée san phdm 6 trén dang déng lanh dug bao quan va giti dén phong thir nghigm can phai én dinh, cho phép dy mau trong bao bi géc. Diéu nay co thé dat dug bang cach dé mau & 18 °C dén 27 °C. (nhiét 4 méi truéng phong thir nghiém) trong téi da 3 h, hode & § °C #3 °C thi da 24h. Dé cdc mau ra dong trén cc khay riéng biét (6.8) dé tranh nhiém chéo ty chat ling ra dong ré ri qua bao bi. Cac mu phai duge thir nghiém cang nhanh cang tét ngay sau Khi ly phdn mau thir, tham chi khi san pham van c6n déng lanh mét phan, vi viéc thém dich pha long 6 nhit d6 phéng thiy nghiém sé dé dang cho qué trinh ra déng hoan toan. Khéng nén ra déng trong ndi cach thiy c6 kiém soat nhiét 46 ho&c dudi vai nude lanh vi didu nay cb thé dln één nhiém b&n mau néu bao bi khéng kin nuéc hoan toan. 8.2.3. Cac miéng hoac khdi lon dug lay mau trong khi déng lanh 8.2.3.1 Yéucdu chung Cac mau nay bao gém cac miéng hoac khdi kn cila cdc san phadm déng lanh (thueng trén 2 kg), bao gdm cé than thit va khéi cd dong lanh. Ding dao hofe kéo (6.9) tach m&u ra khéi bao géi va dat mAu lén khay (6.8) v6i mat phéng hung lén trén. Go ba Iya chon 48 ldy mu phy thudc vao myc dich thir nghiém va yéu cdu cila khach hang, Néu chura bidt yéu cdu My mu hoae chura duge quy dinh thi cdc bén cé lién quan ty théa thuan vé van 68 nay. 8.2.3.2 Tong lwgng mdu (bé mat va mau su) Si dung may khoan dién (6.11.1) o6 mdi khoan (6.11.2) thich hyp hoae dung cu bat ky khac (6.11.4) hoae may khoan cdm tay (6.11.1) khoan cac [8 tai cac diém xac dinh (xem Phy lye B). Cai dat téc dé cla may khoan hoae thiét bj khac khdng qué 900 r/min dé tranh lam néng chay hode phan tin céc miéng khoan, ‘Si dung thia vé tring (6.9), thu ly cac manh mau khoan cho vao hép dng hoe tui cht déo (6.13) da can bi, duige str dung 48 dbng nhat. Néu khéi lung ibn hon 50 g, tn déu cac manh khoan trong vat chira ho’c ‘tUi chat déo khae 48 cung cép mau thi, sau dé lay ra phan mu thir déng nhat cudi cling 6é thir nghiém. Toan bé hoat dong ldy mau khéng dugc lam tang dang ké nhiét dé ctla mau dé khéng lam dnh hudng bat ky vi sinh vat ndo c6 mat. 8.2.3.3 Chi ldy mau sau ‘St dung dye g& va bila (6.11.3), bd di kip bé mat day 2 mm dén 3 mm khéi ving dién tich khodng Gomxéom. 13‘TCVN 6507-1:2019 'Dét ving tiép xtc baing dung cy dét mdu b& mat (6.11.5) cho dén khi bé mat chay hoan toan. Sau 46 tién hanh theo 8.2.3.2, khoan cdc I6 trén ving 48 chay ma khéng su qué bé mat dui cila knéi. 8.2.3.4 Childy mu bé mat Khir tring khuén ldy mau (6.11.6) va duc gé (6.11.3) bang cach nhung trong cn 70 % (thé tich) va 6ét {rén ngon kira. Trong khi khuén mau van cén néng, ap lén bé mat cila sén phim déng lanh, SU dyng duc gd va bua v6 tring (6.11.3), léy {6p trén cla sain phdm dén do sau tl’ 2mm dén 3mm. Thu [dy cde miéng va cho vao hép dyng hoae tui bang chét déo (6.13.) d& can bl duge str dung 48 dng nhat. 8.3 San phim cong va khé ‘Bbng héa cae san phdm cieng hode khé trong bé ding héa quay khong qua 2,5 min 48 trénh tang nhiét qué mire. Bi voi mot s6 san phdm cing va khd, ¢6 thé cn phai bam hoae nghién mau phéng thir nghiém. Trong trudng hop nay, dé trénh tang nhiét qua mize, khong nghién hod xay qua 1 min. 8.4 San phdm da loai nuéc hoac cé 49 Am thap khac Tron kj céc sn phdm dang bét trong bao bl va sau dé can ching bang cdc kj thuat v6 tring. Cac sn pham khdc c6 thé can lam va hoe cat thanh céc manh nhé bang dyng cy v6 tring (6.9) tude khi ly mau. Oi véi cdc san phdm da loai nuéc va san phdm cé d6 dm th4p khdc, diéu quan trong la can dich pha long va sau 46 thém phan mu thi? 48 gidm séc thém thu ai véi bat ky vi sinh vat nao 66 mat. Cac san pham cé a6 dm thép co thé can mét khang théi gian (lén dén 1h) 48 ngam trong dich pha long durge sir dung cho huyén phit ban dau dé lam mém trudc khi dng nhdt va céc thao tac tiép theo. Xem TCVN 6507-4 (ISO 6887-4) déi voi cdc yéu cu chi tiét cho cdc loai sin pham d &m khae nhau. Xem TCVN 6507-4 (ISO 6887-4) dé biét thém théng tin v8 viéc chu&n bj cdc san phdm 06 a6 Am th4p. true khi thir aghigm cae nhém vi sinh vat cy thé, vi dy nhu ndm men va ném méc. 8.5 San phdm léng va khéng sanh ‘Trade khi ldy phn mau thir, mu phng thir nghiém phai durgc lc bing lay (vi dy: 25 Lan v6i bién a 25 om) hodc bang phvong tin co hoe dé dam bao rng cae vi sinh vat dugc phan bé ddng du. 4‘TCVN 6507-1:2019 8.6 San phdm cé tinh axit iéu quan trong khi chudn bj huyén phi céc sn pham cé tinh axit la dua pH dén gan mic trung tinh (PH7,0£0,5). Vigc sir dung dung dich dém pepton (5.2.2) la di cho hau hét cac san phdm o6 pH lon hon hoae bang 4,5. Cae san pham cé tinh axit cao (lon hon hode bang pH 3,5) co thé duge dva tre lai pH can thiét bing cdch sir dung dung dich dm pepton néng do kép (5.2.3.), nhung can kiém tra d6 pH ola cdc san pham 46 khi chting dure thir nghiém [An dau tién 48 dam bdo dat due dai yéu cau. Cac mau tiép tuc durge axit héa trong qua trinh u cdc ching cy tang sinh so’ b6 khéng chon loc, vi dy: sta chua "men séng" va cdc san phdm nuéi c4y turong ty, ¢6 thé gidm pH nuéi cy trong qua trinh Uva can dug theo déi d8 kiém tra pH van trén 4,5. Cé thé st? dung lueng chat dém tang lén, nhung vic tang sinh so bg d& duge diéu chinh cla cdc san phdm 46 phdi duge xac nhan dé dam bao céc didu kién dap dng duc cho sv phat trién cla cdc vi sinh vat cy thé can tim, Xem TCVN 6507-4 (ISO 6887-4) 48 biét thém théng tin v8 vige chuan bj cdc san phdm cé tinh axit true khi thir nghiém vé cdc nhém vi sinh vat cy thé nhu acidophil, 8.7 Thyc phdm giau chat béo (trén 20 %) Tuy theo mirc chét béo, c6 thé cai thién qué trinh nhii héa trong qua trinh tao huyén phil bang céch si dung dich pha lo&ng tw 1 g/L dén 10 gil. polysorbat 80 [polyoxyetylen (20) sorbitan monooleat). Nhin chung, véi ham lung chat béo 10 % thi bé sung 1 g/L la thich hop (vi dy: déi vei ham Igng chat béo la 40 %, thi thém 4 g/L). Xem TCVN 6507-4 (ISO 6887-4) 44 biét thém théng tin vé vie kiém tra cac thye phdm giau chat béo.. 8.8 San phdm nhiéu thanh phan. ‘bi v6i cc san phdm nhidu thanh phan (c6 chira céc miéng thyc ph&im khac nhau), can lay mau bang cach lay cdc lugng cia tling thanh phan dai dién theo ty 16 cua ching trong san phdm ban dau. Nén ddng héa toan bd mu phdng thir nghiém vi ditu nay sé cho mau thiy ding nhat hon 46 kiém tra tiép phan m&u thi? (xem Phy lye C). Néu can, xay hoc nghién mu phéng thir nghiém. Trong truéng hop nay, thei gian xay hoe nghidn khong qua 1 min 08 trénh bi qua nhiét. 89 San phdm déng géi Cac san phdm déng géi durge giti dén phéng thir nghiém cé nhigu loai nhung ching duge chia thanh hai nhém nh sau: 16TCVN 6507-1:2019 = bao bl mém: dugc 9& bd hodc mé vo tring bang kéo hoac dao (6.9); ~ bao bi cting (lon, hép thiy tinh, v.v..) duge mé bang cae dung cu thich hyp (6.10) trong diéu kign v6 tring. Tit cd céc thao tac, tute va sau khi m& cdc thyre phdm déng géi, phai duro thye hién vo tring 68 trénh nhiém chéo tiv ben ngoai. Néu cé thé, sau khi mé ly lung bén trong mét cach vé tring ma khéng kam nhiém chéo tiv bén ngoai, khong cn lam sach va khir tring bao bi. Lam sach bé mat bao bi cing hode niva cimg bang chat tay riza nhe trong nude, sau dé lau khé bang khan sach ho&c gidy thm méi. Néu bao bi qué méng va cé thé bj hang do lam wet (vi dy: cde miéng thyre phdm duge déng géi trang mang hod vat chiza d&o) thi bé qua buéc nay va chi khir tring. Cn than khir tring bén ngoai bao bi bing cin 70 % (thé tich) hodc khéin lau v6 trung 48 trénh 6 nhiém hime. ‘Cdn than me mang boc thy phém trén cdc khay bang cdch béc lop mang dong g6i dé Ié ra thyc phdm dn lay mau. ‘86i voi thre phdm durge ééng géi trong méi truvvng o6 kiém soat va thye ph4m dang géi chan khong, m@ bao bi kin bang dao hoac kéo va kep hoc c&p (6.9) v6 tring. 8.10 Mau bé mat (gac va céc dung cu khac) Tron cae miéng gac ho&c cdc dung cy khac nhur vai hod khén lau, trong cling dich pha long nhur duc sir dung 48 bao hda ching khi lay mu varhoac van chuyén ching, dé phn tan cde vi sinh vat bam vao [xem TCVN 8129 (ISO 18593). 6 lam vigc nay, bé que, cho gac vao Ide v6i dich pha long quy dinh d& tao huyén phil ban dau. CO thé cho hat hoac bi thy tinh nhé (6.14) 68 hé tre phan tan cdc sinh vat bi gid Iai trén gac hoac c&e dung ey kha. ‘Sir dung huyén phi tao thanh lam huyén phi ban du, Béi voi cde mau be mat, cn ghi lai dd pha loZing ban dau. Vi dy, tir mu (gac hoa loi khac) tir dign tich b& mat 26 cm? va duge pha loding trong tng thé tich 25 ml dich pha loang, 1 ml huyén phir ban du nay tuong teng vai 1 cm’, 16‘TCVN 6507-1:2019 9 Céch tién hanh 9.1. Phan mau thir va huyén phir ban dau (dung dich pha loang ban dau) C&n hoac dong phan mau thir, voi sai sé cho phép + § % cho vao vat chira hoc ti cht déo (6.13) vo tring. Phan khéi lugng la mg hod phan thé tich V ml (t6i thigu la 10 g hodc 10 ml, trey khi cé quy dinh khae) dai dign cho phan mau thr phong thir nghiém duge str dung (xem idu 8). CHU THICH: Sir dyng céc phan m&u thir Ién hom lvong quy dinh t6ithiéu s8 tang 69 tin cay ota ce két qua dinh Ivong (xem vl dy trong Phy lye C). Bd sung mét Iueng dich pha loding 9 x mg hoac 9 x Viml dé chuan bj dung dich pha long thap phan ban dau. Lung thém nay c6 thé dugc can hodc dong tét nhat la theo khdi lung vai sai sé cho phép la 2 %, nhumng cé thé thue hién phép do theo thé tich, min Ia sai sé cho phép khéng wot qua + 2%. Cé thé can cac dung dich pha loaing ban dau khac, cé ty 18 d6 pha lodng phan mau thir thap hon ho&c cao hon cho cic myc dich dc bigt; céc dung dich nay duge chuan bi sir dung cing sai s6 cho phép. Khi chun bj 46 pha loding 1:10, théng thuéng huyén phir cla mét sé san phim nht dinh cé thé bj sdnh ho&c dc, vi vay c&n bd sung dich pha long 48 tao thuan Iai cho thir nghiém tiép theo. Trong cde trong hop nhy vay, dich pha lo&ng phai durgc bd sung véi cae ty 18 khdc (vi dy: 1:20, 1:50, 1:100) cho én khi thu due huyén phil ban dau thich hyp cho cac thao tac tiép theo. Cn tinh dén cdc ty 6 cha chudn héa trong cdc thao tac tip theo, dac biét la trong vigc tinh va biéu thi két qua. Trong cdc trvdng hgp khdc, sdn phim dugc thiv nghiém cé lugng vi sinh vat thap va huyén phd ban au dang léng phi hgp, thi nén chudn bj huyn phi & ty 16 thdp hon (vi dy: 4:2 hoe 1:6). Tuy nhién, vige sir dung huyén phi ban dau vi ty 1é thdp hon nhu vay cé thé dan dén mt cn bang ty Ié gitra lugng cdy va méi trvéng, & giai doan cdy chon Iec tiép theo trong hogc trén mdi trréng dac hoae vao méi trwdng ldng (vi dy: e ché sy phat trién cUa vi khuan do néng 46 cila céc thanh phan thyc pham tang), céich nay cn due stv dung than trong va dugc kiém tra xe nhan cho tirng trvwng hop. Dé tranh Ue ché cdc vi sinh vat do thay ddi nhiét 46 dot ngét, nhiét do olla tt ca cdc dich pha loang phai gan giéng nhiét 4 mai truéng phdng thir nghiém, trir khi cé quy dinh khac déi voi cac san pham cu thé (xem tigu chudn cy thé). ‘Déng héa hn hp theo céc yéu cu trong TCVN 6404 (ISO 7218), sir dyng cac thiét bi nhu trong 6.2. 4 cho cac hat lon lng xudng, tdi da 15 min, néu can. Cé thé st dung hé théng loc cho két qua tuong durong, nhur thi chét déo c6 lap Iét loc thich hyp. Dé dém cac bao tir, viée xir ly nhiét huyén phi ban dau (vi dy 10 min £ 1 min & 80 °C +5 °C) phai duge thyc hign ngay sau khi chudn bj huyén phi, sau d6 lam lanh nhanh (vi dy: duéi nuéc lanh) a& gidm thiéu sy hao hut cdc bao tlr dich sau 6. 17TCVN 6507-1:2019 9.2. Thoi gian tién hanh Thdi gian tinh ter Iie chudn bj xong huyén phir ban dau (9.1) cho dén khi két the qua trinh cay khong duge vugt qua 45 min, Ngodi ra, thoi gian ké tir khi chun bi huyén phir ban du (9.1) dn khi bat du chudn bi cdc dung dich pha long thap phan tiép theo (Bigu 10) khéng due wot qué 30 min, Néu nhiét d6 mdi truéng phong thir nghiém cao va n&m ngoai dai quy dinh (> 27 °C) thi hai khoang thdi gian t6i da néu trén phai rit ngan 48 giam thiéu khd nang phat trién cia vi sinh vat va lam cho két quad cao hon. Néu théi gian phuc hdi d& téi da héa d6 thu hdi cdc vi sinh vat bj Uc ché durgc yéu cu theo tiéu chuan cu thé, thi phai tinh thei gian khi huy&n phi ban dau é& dug chudn bi va cdc bude pha long tiép theo bat dau ngay sau khi giai doan nay két thie. 9.3. Quy trinh gép va két hop d6i voi céc phép thir dinh tinh Cé bén gidi phap dé két hop cac bude kiém tra dinh tinh cc mau sin phim ho&e mau méi trong cling loai tir cling mét ngudn hoac cling mot xudt xi, 48 giam khéi long céng vie khi cn kiém tra mot s6 lugng lon mau (xem Biéu 3 vé cdc dinh nghia). Biéu nay 06 thé can thiét dé phan anh chat lugng cia mét mé [én mau san phdm hoge mau mdi trudng ve vi sinh vat hode déi khi theo yéu cau ctia luat phap. Mat 56 mu cing loai cb thé duoc két hop hodc gép lai & gial doan lay mau va khach hang phai lam 3 diéu nay khi nhan mu phang thir nghigm 48 dm bdo quy trinh thir nghigm tiép theo Guegc thyec hién chinh xac, Viéc két hop cdc mau riéng Ié oting co thé duc thyc hién tai phong thir nghiém néu khéch hang khang dinh diéu nay la bat buéc. Hai quy trinh nay dugc minh hoa trong Hinh A.1 va Hinh A.2 (xem Phy Iuc A). Viéc gdp cac phan mau thi? cling cd thé dugc thuc hién trong phéng thir nghiém va viéc kiem tra tiép tuc vai sé Iugng Ién hon cdc méi truéng 43 lam 4m tre nhu minh hea trong Hinh A.3 (xem Phy iyo A). Can theo doi nhiét 49 va théi gian Ui t6i da cho phép duge str dung dé tranh két qua 4m tinh gia gay ra do 6 tré hit 46 trong cdc thé tich Ién hon. Cach khéc, gdp céc chiing cy tang sinh so’ b6 clla cdc phan mau thir riéng Ié 6 thé (xem Hinh A.4) va dug thyc hign theo phép thi riéng, Tat ca cdc quy trinh nay phai dugc kiém tra xéc nhan truéc Khi sir dung d@ khng lam tng nguy cor két qua Am tinh gid; vi du vé quy trinh kiém tra xa¢ nhn phi hgp, durge néu trong Phy Iye D. 1810 Dung dich pha long tiép theo 40.1 Day dung dich pha loang thép phan ‘86i v6i day dung dich pha loang thap phan dé sir dung trong cdc phép thir dinh lugng, siy dung pipet (6.5), chuyén 1 ml + 0,02 ml huyén phi ban dau vao éng nghiém chtra 9 ml + 0,2 ml dich pha loang vo tring & nhigt 6% mai truzdng phang thir nghiégm (trv kh c6 quy dinh kh trong tiéu chun cy thé). Trénh moi tiép xtc gitra pipet chira chat cdy va dich pha loang vé tring dé gidm thiéu kha nang nhiém chéo. CHU THICH: Néu chn mgt thé tich ln hon a8 thye hign mat sé png ln ef phép thi hog pheép thi 8p lal, th thé tic xde inh (hon 1 mI) ca huyén phi ban dau, voi dung sal cho phép + 2 %, c6 thé duoc thém vao éng nghiém chiza chin lan thé tich dich pha loang vé tring. é c6 d chum tdi Wu, khéng dura pipet sau qua 1 em vao huyén phi ban dau va trénh lay cdc hat san. phdm thuc phdm trong chat cdy. ‘Tron ky, tot nhat la bang cach si? dung may khudy co hoc (6.3) trong 5s dén 10 s, dé thu dugc do pha loang 102. Néu cn, lap Iai cdc bu nay bing cach sir dung cdc dung dich pha long 10 va dung dich pha loding tiép theo va siv dung mét pipet hodc dau tip vé tring méi cho méi thao tac, 48 thu duge di 6 pha loding (10°, 104, v.v...) dém dug 6 lvong vi sinh vat thich hep & dai tdi wu cho viée dém (xem Bidu 4). Trinh ty thao t&c 48 chuan bj nhigu dung dich pha lo&ng thap phan thich hyp cho cac mirc 6 nhiém dur don khde nhau va si’ dung kj thuat dé dia duge thé hién trong Hinh 1. Pndlirg —labing Petry Ping Amt Amt (=\ eS eS fl mt im Amt Amt ~oraedyt0*\ [ia edyt0* | /-biacdyt0* | / -oracdy10*\/ - ora edy 10° Bla Pet Bla Pets Bia Pete Bia Petr Bia Pete oy oH Cy mr om scien care a0 tee cred sins 200 Hinh 4 -Trinh ty chudn bj cdc dung djch pha loang thap phan — Vidy vé ky thuat 48 dia 19‘TCVN 6507-1:2019 10.2 Cac day dung dich pha loang khac ‘Chuan bi cde day dung dich pha loging khac duge yéu cdu cho cdc muc dich dac biét, vi dy: 1 trong 2 (1 mil vao 1 mi), 1 trong 5 (1 mi vao 4 ml), theo céch twang ty bang cach st dung cdc ty Ié khac nhau cla huyén phi ban dau 4@ pha loang. Ghi lai ty 1é va tinh één trong cdc bude tiép theo, nhu tinh va biéu thi két qua, 20TCVN 6507-1:2019 Phy luc A (Tham kho) Minh hoa vé quy trinh gop va kat hop AA Yéu cu chung Nhting minh hoa nay cho thay céc quy trinh gép va két hop, dure néu trong Didu 3, chi cé thé dug sir dung d8 thir nghiém dinh tinh. Quy trinh thir nghigm durge du ra trong TCVN 8507-1 (ISO 6579-1) 8 phat hign Salmonella la mét vi dy, nhung cing ¢6 thé ap dung céc quy trinh tuong tyr cho cae phuong phép phat hién khac. Cé thé két hop cdc mau (xem Hinh A.1) hodc gép (xem Hinh A.2) ciing loai, dé gidm khdi lvgng céng viée khi can phai kiém tra mét sé Iegng lon mu. Biéu nay co thé cn dé phan anh chat lvgng vi sinh ‘lia mot mé san phdm kin hoc mau mbi tru’ng hoc theo quy dinh. Tuong ty, 66 thé gp mét s6 phan mau thir (xem Hinh A.3) va kiém tra cling nhau trong mét lang lon mdi trrémg, hoa gop cdc nudi cy Bing sinh sor bé cila cdc phan méu thir lai va tién hanh nhur voi mat phan mau thir. Tat ca cae quy trinh nay phai duge kiém tra xdc nhan true khi str dung dé khéng lam tang nguy co” két qua am tinh gia. Vi dy va quy trinh kiém tra xe nhn phi hop dure néu trong Phy lye D. A2 Mau kéthop Mot sé don vj mau dug két hop thanh mot mau va trén du true khi Ky ra phn mu thir nhu trong Hinh A.1, a8 Teinctc onde Bee | Bee | (Bt apy! ral a 3 Miu du tno Prin mise BPW = RVS(10 ml) ly capnan (3g) 225m) MKTTN Om) Py Hinh A.1 - Mau két hop. aTCVN 6507-1:2019 A3 Mau gdp Mét s6 don vj mau cling loai duc gép thanh mot mau va trén tree khi lay ra phan mau thi nhy trong: Hinh A.2. Mu a5 trp kg 18 phan mu thor Miu Miu g¢p duge ding lar phn th (ich cb thay 6 Hinh A.2— Mau gop A4 Phan mau thir gop Cac phan mau thir tiy mat s6 don vi mu cing loai dug trén ln thanh m6t phan mu thi sir dung cho bude kidm tra tiép theo (xem Hinh A.3). p R o Be R R e je y R a Be \ i0] \ (m Phan CANON RVS (10m) Cy dial meat oomy MTT (10m) han Hinh A3- Phan mdu thir gop 22TCVN 6507-1:2019 AS) Phan miu thir da tang sinh so’ b6 Cac phan méu thir cia mét s6 don vj mau cilng loai da dug tang sinh so’ bé va tir mai phan tang sinh nay [dy ra mt long xac dinh dich tang sinh két hop lai dé kidm tra tiép theo (xem Hinh A.4). 28g & 259 & —§ 8 25g 59 | Chytrong «AVS (Om) Cly cial BPW MKTTn (40 mi) phn do (225m) Hinh AS ~ Phan méu thir tang sinh so bd gdp lai 23TCVN 6507-1:2019 Phy ye B (Tham khdo) Phwong phap ldy mau cac ming thir hoac khdi déng lanh Bt Khéi khéng déng nhat {B61 v6i cdc khdi khéng ddng nhét (48 nén, ép déng lanh ho&c dng lanh su) cd khdi lung 25 kg dén 30 kg, c&c diém khoan phai nhu trong Hinh 8.1. Hinh B.1 - Quy trinh déi voi khéi san phdm da loi nwécng déng nhat B.2_ Miéng thir nghiém dong nhat ‘Déi véi cdc miéng thi nghiém dong nhdt, cdc diém khoan va gidi han d6 sau nhu trong Hinh B.2. " Kich ture tnh bag miimet ‘CHU DAN 1 ving 66t 2 hay dyng Hinh B.2 ~ Quy trinh déi véi cdc mu thir déng nhat 24TCVN 6507-1:2019 Phu luc C (Tham khdo) Dir ligu cho thay dé tin cay cla cdc két qua thir nghiém theo c& mau phan méu th C1 Yéu cu chung Di ligu 06 san cho thay rang, sir dung phan mau thir cang lén thi cang it phurong sai xdy ra gitra cdc. két qua thir Kip lai cla cing loai mau 1, Dir ligu néu trong phy luc nay dua trén hd so’ thi nghigm urge xay dyng va str dung 6 Ha Lan va Phap. ¢.2 Nghién ciru ciia Ha Lan so sanh cdc c& mau khde nhau va anh hung cia qué trinh ddng nhat mau Tir ba logi mAu mdi mau fy 600 g (rau thai s4n, com dia Trung Quoc va sira lac hod kem mém) dug sir dung 48 so sdnh sy khdc biét vé tinh déng nhat cilia tizng loai mau, cling v6i bén quy trinh chuan bj mau khac nhau. Cac phan mau thir cho hai mau dugc lay ma khéng can déng nhét tree, trong khi hai mau thir dug dng nhat tree khi ldy cdc phan mau thi (xem Bang C.1). Bang C.1 ~ Thiét ké nghién céru higu qua cla phuong phap chudn bj mau va kich cd phan mau thy Phuong phép | Béngnhat mau | Phan mau ther) Pha loang phan chuan bj mau ‘mha ine 4 " Khéng 109 4 trong 10 ” £6 (100 9) 109 1 trong 10 3 C6 (100g, 1 voit dich pha loang) 209 1 trong § ™ Khong 36g 1 trong 10 86i véi cdc m4u duge chudn bj ma khéng ding nhét, hai kich c& phan thiéu 10 g quy dinh cho céc phép thir dinh Iugng trong nhibu ti tén hon la 35 g (TA). thir duge sir dung: t6i chudn cu thé (11) va phan mau thiy ‘Béi véi hai mau duge chudn bi cé ddng nhdt, ly c& mau thy 100 g va ddng nhdt: mot mAu (T2) duge dng nhat trye tiép, trong khi mu cdn fai (T3) durge pha long vdi dich pha long ty If 1:1 trude Kkhi déng nhat. 25TCVN 6507-1:2019 Quy trinh chun bi méu thir kiém tra sé dém khudn lac hiéu khi, sir dung hé sé pha loding cudi cling [a 1 trong 10. Kt qua nghién ctu da duec kiém tra phuong sai bang cach st» dung phép thir F va dug thé hién trong Bang C.2 Bang C.2 - Anh hwong cia bén ky thugt chudn bi mau dén phwong sai két qua tt ba loai mau r Chuan bj | Chudn bj | Chuan bj | Chuan bj Nin mie Két qua mut? | méut2 | omiut3s | muta soma (10g | coo | 009 | 59) : Trung bin 0.150 0,164 ont 0.72 Raut | Belech chudn 0.128 0.179 oort 0,183 Phuong sai 0,016 0,032 0,005 0,003 Trung binh 0,285 0,218 0,104 0,216 ese (aaye| Pbléohchubn 9261 | 0,259 0072 0.237 Phuong sai 0,068 0,057 0,005 0,056 é. ‘Trung binh 0,094 0,064 0,069 0,115 seatienotc| orgcnenin | ane | ome | om | cove Phuong sai 0,020 0,001 0,002 0,008 ‘Trung binh 0,201 0174 0,101 0,182 Tong 86 léch chudn 0,212 0,200 0,068 0,199 Phuong sai 0,045 0,040 0,005 0,040 Cac di liu nay phi: hop véi cée céng trinh duge céng bé Khac * cho thdy phurong sai it nhat cho cd ba logi mau ding nhat khéc nhau thu duge khi cde mau ton nhat (100 g) due déng nhdt, 6 hose khong pha loang truéc theo ty le 1:1. C.3. Nghién cGu clla Phap so sanh bay ky thuat chudn bj mau khac nhau (Cac mau cia ba loai mu khdc nhau (pate, phomat va salad tron} da dure chuan bj bang bay kj thuat khac nhau (T1 dén 17) lién quan dén cdc co mau khéc nhau va qua trinh déng nhat nhu trong Bang C.3. Bang C.3 - Thiét ké nghién cizu cho thay higu qua cla phuong phap chuan bj mau va co mau thir Phuong php Pha loang chudn bj miu ‘Béng nhét mau Phan mu thir phin mau thir 74 Khong Tog my tet ving T trong 70 2 Khong 70 9 yt ving Tiong 10 3 6 (toan b6 mau) ie trong 10, 6 (loan bo mu, 1 vor v4 4 dich pha lo&ng) ma ‘tong 5 5 Khong 35 g lay ttr 1 ving 1 trong 10 | Te ‘hong 35 9 Gy WS ving T trong 10 600g, 4 vei dich W pntoengh 209 41 trong 5 26TCVN 6507-1:2019 Nghién edu nay tvong ty nhu mé ta trong C.2, vai bién thién tiép theo khi lay cac phan mu thir tir mét vung duy nhét cia mau (T1 va TS) hod tir nam ving khéc nhau (T2 va 7) trén ton bp mau. Ky thuat TT tuong ty nhu ky thuat T4 ngoai trie mau 100 g dug si dung thay vi toan bd mau. Tat ca cdc phan mau chudn bj dugc kiém tra vé sé dém khuan lac hiéu khi, si dyng hé sé pha long cudi ciing la 1 trong 10, Cac két qua nghién ctu dug kiém tra phuong sai va dugc néu trong Bang C.4. Bang C.4 - Anh hwéng cila bay ky thuat chudn bj mau dén phwong sai cia cdc két qua thiv nghiém tiv ba loai mau m | m2 | 13 v4 1s | 16 7 Ky thuat (co mau thir) | (10g) |(10.g) | (10g) | (20g) | (35g) |(35g) | (20g) Toan be Co mau Toan bof Toan bg) Toan BO |,,20 99 g| Toa bd |Teanbs} 100.9 Beng héa C6 (1 v6i C6 (1 voi os Khong | Khong} cd | 1 dich pha | Khong | Khong |1 dich pha| {cd/khéng) loang) tong) sé mau 129 | 124 | 130 135 6 10 16 Loal mau Pate, | Pate, | Pate, | Pate, | pate | Pa®; [Pate, sala a phomat| phomat| phomat | phomat hénthop| 8° POP Két qua si | os | og9 | 038 | 017 Jo33 | 00 | 015 (650 m&u tap lai] phuong sai] 0,68 | 0,35 | 013 | 0,03 | 0,17 | 009 | 0,02 Di ligu nay cling cho thay rang, ba loal mau cé tinh déng nhat khac nhau cé gia tr phuorng sai nhé nhat Khi lvgng mau déng nhat la lon nhat (100 g) ca khi c6 pha loang hoe khéng pha long 1:1. 7TCVN 6507-1:2019 Phy lye D (Tham khao) Quy trinh kiém tra xac nhan déi véi cdc mau gdp cho cac phép the dinh tinh D1 Phép thir nghigm gop D.1.1. Yéu cau chung Hai quy trinh ai v6i cde phan mau thir gép 6 cdc giai doan khac nhau cila phép thir dinh tinh duoc néu chi tiét trong phan ndi dung chinh (xem 9.3). Phu lye nay mé ta quy trinh thich hop dé kiém tra xde nhan rang quy trinh gép khong anh huéng dén sé két qua am tinh gid thu dug sau khi kiém tra céc nén mau khée nhau bang cdc phurong phép dinh tinh, Chi céc phan thir nghiém ti cing loai san phdm hogc mau méi trong moi duoc gép chung va quy tinh g6p duoc chon phai duoc danh gid xéc nhan truéc khi sir dung tigp trén cdc mau théng thudng, Chi cdc mau tir cing mét ngudn gécingudn (vi dy: cing mgt ma, 16 hang) méi dug gop chung va sau 66 chi theo yéu cAu cila khach hang. Cac mau tir ngudn gdc/cde nguén khac nhau, nhu tir cdc khéch hang khéc nhau, thi khéng durge g6p chung. D.A1.2 Dich cdy ‘Si dung huyén phi chudn cia mét chiing tc ché thich hyp [xem TCVN 6807-2 (ISO 18140-2)] cua vi sinh vat thir nghiém phi hop voi phuong phép dang durgc nghién ctru, CAy cae phan mau thir cia nn mau & mirc xAp xi § clu trén 25 9 (ho&e mi), trong 46 khong qué 2 trong 300 phép thir lap lai khéng durge chia sinh vat nao ¢6 thé phat hién dug trén 25 g. ‘CHU THICH: Kich ita phn mu thi thudng la 25 g (hoc 25 ml) cho cfc thir nghiém dn tinh, nhung ob thé sir dng cic wong thay thé khéc vi ibu ign 0 tinh dn didu nay, (Ce Gidu kién wre ché éurge 4p dung phai la loai tre ché ma vi sinh vat dich gp phai khi o6 mat trong ‘mau bj nhiém ty nhién cla san phdm hodc mau méi trudng. Cac mau chudn khée ho&e 8 dug ching nhan véi mét dai 44 biét cia vi sinh vat thich hop ¢6 thé dug sty dung 4é chuan bj dich cdy. D.1.3 Chuan bj mau ‘Thém hofc trGn mot lung thich hop cia huyén phii vi sinh vat voi mot Iveng san phdm ho%c m&u mdi rung da biét khong bj nhiém dé cung cp di nguyén liéu cho day thir nghiém can thyc hin, Néu cde mé&u urge nudi cdy theo sé ltrgng ln, dim bao rang lugng mau dé di dé déng nhét. Ngoai ra, nudi cy ldp lai cdc Iugng nén mau 25 g (hoc ml) 44 cn trrdc d cung cp dui cdc phan mau thir c6 chia lwgng xae dinh céc vi sinh vat, 28TCVN 6507-4:2019 Git? lai mét lung thich hop nén mau khéng nudi cdy d2 sir dyng lam cac kiém ching v6 tring va trén vai cac mu da duoc nudi cay néu cdc phép tht? so bé cho thay mirc vi sinh vat qua cao. D.1.4 Phan mau thir gop. D.1.4.1. Thiv nghigm tham khdo so’ bd ‘Cho dich cay (0.1.2) ¢6 chira Khodng 5 cfu vi sinh vat thir nghiém vao huyén phi ban dau cila phan mu thir 25 g (hoge ml) trong 225 mi canh thang ting sinh sob, d va hoan thanh phép thir theo phurong phép dug: nghién ciru Két qua “phat hign dug” khang dinh rang chat cdy d& thu hdi duge vi sinh vat thir nghiém tir 25 g (hoae mi) phan mau thir da nudi cy. D.4.4.2. Quy trinh kiém tra xac nhan Vi du duge mé ta la gép cdc phan thy nghiém tir 10 mau cling loai d8 phat hién Salmonella [theo TCVN 6507-1 (ISO 6579-1)] nhung si dung quy trinh nay cho cdc s6 lvgng m&u khéc nhau, cdc vi sinh vat khéc va cae quy trinh khéc. Trén 10 phan th nghiém mdi phan 25 g (hoa mi) tir m&i mau (tang 250 g hoac mi) véi 2 250 mi méi trung tang sinh so b§ 48 duge lam Am truée. Thém dich cy (D.1.2) 66 chira kho’ng 5 cfu Salmonella va ii toan bg chat ey theo quy trinh chuan, dam bao rang nhiét d6 O dat duge trong mét thdi gian thich hop. Sau khi , nudi cdy chuyén va hoan thanh phép thir theo phurong phép dang duge nghién oivu. Néu phat hién dug Salmonella, gop cdc phan thir nghiém 10 x 25 g (hoac mi) cla cling loai mau dug kiém tra xe nhan vé chiing thir nghiém d& chon va dp dung cac didu kién 64 ap dung. Néu khéng phat hién due Salmonella, lap lai vie gp cdc phan thir nghiém si dung it phan mau tht hen cho dén khi thu duge két qua dong tinh, D.1.5 Gop phan tang sinh sob} D.1.5.1. Thir nghigm déi ching so’ bg ‘Thy hign phép tht d6i ching theo D.1.4.1 D.1.5.2 Quy trinh kiém tra xac nhan Vi du duoc mé ta [a gp cac phan mau thir tang sinh so bé tir 10 mau cing loai dé phat hién Salmonella {theo TCVN 6507-1 (ISO 6579-1)] nhung st dung quy trinh nay cho cdc sé lugng miu hac nhau, cdc vi sinh vat khac va céc quy trinh khae. 29TCVN 6507-1:2019 Cho dich cy (0.1.2) 6 chtra khodng 5 cfu Salmonella vao mét trong muti huyén phi ban dau cua 25 g (hoac mi) mau thir trong 225 mi mai truréng tng sinh so b6 va O tat cd mudi huyén phil theo quy trinh chuan. Cy mét thé tich xde dinh clia chiing cy da tng sinh so bd va cac thé tich tung dong ella cae nudi cy tang sinh so b6 khéng cdy salmonella vao mét lvgng thich hop mai trvéng chon lec, dam bao duy trl duge ty 16 quy dinh di voi bude nusi cy chuyén nay. U méi treréng chon Igc va hoan thanh phép thir theo phuong phap dang duge nghién cir. D. 3 Glal thich két qua 'Néu phat hign dug Salmonella, gop 10 chiing cdy da tang sinh so bé tir cdc phan mau thi 25 g (hodc mi) cla cing logi mu dugc kiém tra xée nhén di véi ching thir nghiém a4 chon va didu kign irc ché urge ap dung. Néu khdng phat hién dug Salmonella, lp lai viéc gop chung si dung it ching cy da tang sinh so bo cho dén khi thu durgc két qua durong tinh trong tat cd cdc phép thir lap lai. D.2 Khang djnh két qua Bang ching cho thay rang mét hoac mét s6 cdc quy trinh gop dug mé ta dua ra mét bién phap thda dang vé phép thi nhiéu mau yéu cdu phai khang dinh. Nén han ché phy thuge vao céc két qua cla phép thir nghiém rigng 18 va quy trinh duge chon phai durgc lap fai tt nhat nm lan va t6t nhdt ld tam dén mud ln, str dyng céc mau khéc nhau cia cling mot kiéu nén mau/td hgp vi sinh vat dich d& dam bao, véi do chum hop ly ma phép thir cé kha ning phat hign vi sinh vat dich & ndng 6 higu qué thdp hon, 30TCVN 6507-1:2049 Thu myc tai ligu tham khdo {1] TCVN 10989 ” Sén phdm néng san the pham — Thiét ké tigu chuan ly mau tir 16 hang {2} TCVN 11923 (ISO/TS 17728) Vi sinh vat trong chudi thure phdm — Kj thuét fdy mu dé phén tich vi sinh vat trong thye pham va thie én chan nuéi [3] TCVN 8129 (iSO 18583) Vi sinh vat trong thyre phdm va thite an chan nudi— Phuong phép Idy mau ‘bé mat si dung dia tigp xic va lau b8 mat [4] TCVN 12365-2 (ISO 16140-2) Vi sinh vat trong chudi thy pham — Xac nhén gia tri sir dung phuong phap - Phan 2: Quy trinh xc nhén gid tri st dung phuong phap thay thé so v6i phuong phdp chuén [5] TCVN 10780-1 (ISO 6579-1) Vi sinh vat trong chudi thyc phdm — Phuong phap phat hién, dinh va xée dinh typ huyétthanh cla Salmonella ~ Phan 1: Phurong phép phat hién Salmonella spp. [6] CORRY J.E.L.C., JARVIS B., HEDGES A.J. Minimising the between-sample variance in colony counts on foods. Food Microbiol. 2010, 27 pp. 598-603 ® TCVN 10989:2016 tveng évang cb siza dbi voi ISO 7002: 1986. 3t