CTO. BIOLOGIA Temario: - Carioteca o Envoltura Nuclear ~ Los Acidos Nucleicos: Caracteristicas generales y subtipos - ELADN y La Gromatina: proteinas nucleares, tipos de cromatina, niveles @@ Compactgcion. El Cariotipo - Duplitacién de! ADN: Caracteristicas, enzimas y proteinas ~Agentes mutagénicos fisicos, quimicos y biolégicos ~ Reparacion del ADN: lesiones y arreglos en una hebra y ambas hebras - Célula caricerosa WGEMA EDUCATIVA MEDICA DE AVANZADA 2020INTRODUCCION Una de las caracteristicas mas importantes en la génesis de las células eucariotas es la aparicién del nucleo. De hecho, el nombre eucariota significa “niicleo verdadero AA diferencia de las procariotas, las eucariotas tienen una envoltura nuclear que protege al ADN de la accién de cualquier elemento que pueda dafiarlo, y asi finalmente mutarlo. Ya Veremos que una mutacién es un cambio Imeversible en la secuencia de nuclestidos del ADN. El nicleo es en si un lugar donde el ADN se encuentra protegido por una envoltura compleja llamada Envoltura Nuclear 0 Cerioteca. Esta envoltura, formada por una doble membrana altamente elaborades (llamadas membrana nuclear intema y externa), separa y protege al ADN haciendo que sea muy complicado ingresar al nticleo ¥ dafiarlo. Esto marca una diferencia con los procariontes que tienen el ADN suelto en el citoplasma. Finalmente, diremos que el nticleo esta formado por 4 grandes elementos: » La envoltura nuclear 0 Carioteca » La cromatina » El Citoesqueleto nuclear > La Matriz nuclear LA ENVOLTURA NUCLEAR La envoltura nuclear 0 Carioteca es una doble membrana biolégiea concéntrica que toman contacto entre si anivel de los complejos de poro, y que se llaman Membrana Nuclear Extema y Membrana Nuclear Interna, Entre ‘ambpas membrana hay una cavidad llamada Lumen de la Carioteca, que ya veremos que se continua con el lumen del REG, La membrana nuclear Extema es idéntica en su morfologia con a membrana del REG, por lo que tiene ‘exactamente el mismo tipo de proteinas, los ribosomas tachonados y sus dos funciones claves: Sintesis de proteinas no citosélicas y Glicosilacién Inicial (0 n- glicosilacién) de proteinas, Finalmente, la membrana nuclear externa se continua con la membrana del REG, pér lo que el lumen de la Carioteca se continua con el lumen del REG. Le Membrana nuclear interna, por su lado, es lisa, ya que no tiene ribosomes adheridos. Sin embargo, en su cara nuclear o cara interna se une ‘ parte del citoesqueleto nuclear llamado La Lamina Nuclear. Esta Lamina Nuclear @s una cobertura de filamentos intermedios dispuestos en tres capes (lamadas capes: yC). Los flamentos intermedios 'son los Laminofilamentos o Filamentos de la Lamina ‘Nuclear (ambos nombres se usan para definir a lo ‘miismo). Y sus funciones son: __ > Darle la forma precisa al nticleo de cada oé- lula, > Permitir la deformacién mecénica del niicleo es sin que se rompa. ore co" » Permitir la unién de la Heterocromatina a la envoltura nuclear, dando la clasica imagen del nacleo intertésico, Esta lamina nuclear recubre toda la cara nuclear de la membrana nuclear interna, excepto en las regiones donde estan los poros nucleares, Va veremos en el proceso de division celular que cuando se fosforlan las protainas de la lémina nuclear, esta tiende a desensamblarse, permitiendo que so fragmente la envoltura nuclear,LOS POROS NUCLEARES Toda molécula que quiera salir o entrar al nticleo, debe pasar por un lugar altamente especializado en la. Carioteca que regula selectivamente el pasajea través de. elias, Los poros nucleares son quienes permiten un flujo desde el nucleo hacia el citoplasma y desde éste hacia el nticleo, existiendo alrededor de 3000 a 4000 poros en Un niicleo normal. En cada poro nuclear, un conjunto de proteinas forman un cilindro hueco llamado Complejo del oro, encargado de regular el pasaje. Morfolégicamente, dicho Complejo del Poro esta formado por: > & Columnas proteicas: Atraviesan de lado a lado al poro, se disponen formando la pared de! complejo como tuna suerte de barri,y en sus extremos se forman los anillos del poro. > Proteinas de Anclaje: Fijan a cada columna proteica a la Carioteca > Proteinas Radiales: nacen de la cara intema de las columnas proteicas y se proyectan hacia la cavidad del oro. Actiign como esfinter, por tener la capacidad de acortarse o alargarse. » Fibrillas proteicas: Son proteinas fibrilares que nacen de los anillos extemo e intemo y se proyectan hacia el itosol y hacia el nticleo. Aquellas que se proyectan hacia el niicleo se unen por sus extremios y forman la Jaula Nuclear. INGRESO AL NUCLEO En la mitologia griega, Caronte era el barquero del Hades, el encargado de guiarlas sombras errantes de los ifuntos recientes de un lado a otro del rio Aqueronte si tenian un ébolo para pagar el viaje. Paratraseando un poco 2 la historia de los dioses griegos, toda proteina que quiera pasar del citosol al nticleo, deberd unirse 2 Caronte, y tener a mano el 6bolo. a Pues bien, todas las proteinas que estén presentes en el ndicleo (ADN polimerasas, ARN polimerasas, las histonas, etc.) son sintetizadas en el citosol. Para poder ingresar al nticleo, presentan un péptido sefial llamado NSL (por Nuclear Signal Localization o Sefial de Localizacién Nuclear). Este péptido sefial es reconocido por una proteina citosélica llamada importina. Esta proteina reconoce al péptido serial NSL. Una vez unida a la proteina recién sintetizada, la Importina permite que Se pliegue la proteina y la transporta hacia un poro nuclear, donde se Uniré a una proteina llamada Ran GTPasa, quien degrada un GTP para forzar @pertura del poro; pasando de 9nm +8 a25:nm y permitir que la proteina ingrese al nlicleo. EGRESO DEL NUCLEO Muchas proteinas permanecen en él nticleo, pero otras son sacadas al citosol para ser degradadas. Para poder salir, previamente se las debe etiquetar con una secuencia de aminodcidos especifica llamada Sefial de Exportacién Nuclear o NES (por Nuclear Export Signal). Esta secuencia especifica es reconocida por unas proteinas llamadas Exportinas, encargadas de llevar hacia el complejo de poro a la proteina.Hay una proteina que es clave para que las ‘moléculas pasen por el complejo de poro hacia ambos Tados. Es la proteina Ran, que dependiendo de su | luni6n a GTP o GDP promueve el movimiento hacia un ado u otro. El cicio es el siguiente: 4. Cuando Ran esté unido a GDP en citosol, y _aumenta Ia concentracién de Ran-GDP en citosol, se produce el ingreso del mismo al niicleo, y con ella se promueve el ingreso de Jas proteinas hacia el interior nuclear. 2, Amedida que va ingresando Ran-GDP al nicleo, Comienza a aumentar su concentracién en ese ‘compartimento. 3.La proteina Ran-GEF se encarga de cambiar el GDP por GTP, aumentando ahora la Concentracién de Ran-GTP en el niicleo. 4. Este aumento de Ran-GTPpromueve la salida de esta molécula hecia aftlera, permitiendo que salgan elementos nucleeres al citosol. §.Ya en citosol, Ran-GTP es hidrolizado por Ran-GAP (una GTPasa) pasando a Ran-GDP, aumentando la Concentracién citosélica de la misma, y cerrando asi el ciclo, LOS ACIDOS NUCLEICOS Los acidos nucleicos son las moléculas que tienen la informacién que hace que funcione una célula como {edo El mas famoso de los dcidos nucleicos por lejos es el ADN 0 Acido Desoxiribonucleico, y seguramente ya esids al tanto que el ADN es la biblioteca que contiene al cddigo genético. Otro acido nucleico de importancia clave es el ARN o Acido ribonucleico, que ya veremos mas adelante su funcién clave dentro del proceso de production de proteinas. i CONDICIONES PARA SER UN ACIDO NUCLEICO Todo Acido nucleico, independiente de si es ADN 0 ARN, es un polimero lineal bastante largo de una molécula llamada Nuclestido, por medio-de uniones fosfodiéster. A diferencia de las proteinas, que son pollmeros lineales de aminoacidos, los acidos nucleicos son bastante mas complejos que éstos, fundamentalmente porque el monémero de los acidos nucleicos es el nuclestido, que ya veremos que es una estructura formada por tres moléculas (pentosa, base nitrogenada y fosfato). Como son lineales, presentan dos exiremos, llamados extremo 3° y extremo 5" Los acidos nucleicos pueden ser de cadena simple (monocatenarios) 0 de doble cadena (bicatenarios): los ARN estén formados mayortariamente por una cadena sola, pero el ADN esté formado mayorilariamente por una doble cadena de nuclestidos.Ya hemos dicho que los nucleétidos son los monémeros de fos Acidos nucleicos, y que estan formados por DNA RNA 3 components. En efecto, todo nuclestido esta formado por- » 4 pentosa: s un ezicar(ohidrato de carbono) de Scar” @\ 9 Mm Adenina \o= bonos. Puede ser Ribosa o Desoxiribosa, depencien- do de si es la peniosa cel ARN o ADN respectivamente, a » 1 base nitrogenada: Hay 5 tipos distintos de bases nitro. : or igonadae, agrupades en dos grupos PD cuanina » Bases puricas: Adenina y Guanina » Bases Pirimidicas: Citosina, Timina y Uraclo Gripe aoe WD itcsina De todo lo antedicho, podemos decir que existen 5 pos dette do ude, Goperdcnse lipo ae tose [@ = nitrogenada que contenga. Enionces aw » ELADN esté formado por nuclestides de Adenina, de Cr | tient Greslo tosina, de Timina y de Guanina » EIARN est4 formado por nucleétidos de Adenina, de Citosina, de Uracilo y de Guanina » La pentosa del ADN es la Desoxiribosa, mientras que la del ARN es la Ribosa. Las bases nitrogenadas ‘se unen por medio de uniones complementarias. Asi, la Citosina se une ala Guanina por medio de 3 uniones fuentes de hidrégeno, fa Adenina se une a la Timina o al Uracilo con 2 puentes de Hidrégeno, dependiendo de si es un desoxinuclestido 0 un ribonuclestido. » La unién de los nucleétidos entre si para formar al Acido nucleico es del tipo unién Fosfodiéster. Geese ta baa w tn] DN Na aU Purinas a SLT Gi icra Informacién genética Se define como sentido biologico alaformaenquese <=, een a las moléculas. El ADN solamente se puede leer de 3° hacia 5’, 0 sea que su sentido bioléaico es 3'- 5”. Por su lado, los ARN tienen un sentido biolégico inverso, es decir 5” - 3’. NUCLEOTIDOS VS. NUCLEOSIDOS La asociacién de una base nitrogenada, por ejemplo adenina, con una pentosa, sin el fosfato, conforma un Nucledsido. En este caso, el Nucleésido se llama Adenosina (adenina + ribosa)Si a un Nucleésido le sumamos el grupo fosfato, se forma el Nucleétido, Ejemplos de ellos son el AMP (Adenosina Mono Fostato) ADP (Adenosina Di Fosfato) y el ATP (Adenosina Tri Fosfato). EI ATP, aparte de ser usado ‘como componente para armar acidos nucleicos, también es usado para depositar y transferir Energia Quimica, Los otros nuclestides (UTP, CTP, GTP y TTP) también pueden ser utilizados para depositar y transferir energia quimica (Sobre todo el GTP), pero la fuente principal de energia es el ATP. EL ADN o ACIDO DESOXIRRIBONUCLEICO En 1963, Watson y Crick describieron al ADN e hicieron fa publicacién que cambié la biologia celular. Para hacerlo, se basaron en los estudios ea previamente realizados por la Dra. Rosalind Franklin. Seguin esta publicacion, & el ADN presenta las siguientes ‘Son dos moléculas de ADN helicoidales con giro ala derecha (dextrégiro), que cases ein ‘componen una doble hélice; - Ambas cadenas son antiparaletas, por Jo que sus uniones 3’, 5! siguen ste direcciones opuestas. Esto significa que, si leemos de izquierda a derecha, @ una hebra empieza en 3'en|a izquierda,y la otra empieza en 5’ en {a izquierda: “de Las bases nitrogenadas estén ubicadas en el interior de la hélice; ‘Ambas cadenas se hallan unidas entre si por uniones puentes de hidrégeno @ =e traves de sus bases nitrogenadas dela siguiente manera: Adenina seune con ~¢ Timina (A-T son dos puentes de hidrogeno), Citosina con Guanina (C-G son "ass . tres puentes de hidrogeno). Ly Mae ‘Ahora bien. La funcién del ADN es contener a los genes. Un gen es un segmento de ADN con sentido biolégico, con la informacion para generar un producto funcionante, ésto es transcribir un ARN, y si éste es un ARN mensajero una proteina, Ya veremos més adelante cémo esta conformado un gen. Por ahora, solamente diremos ue el ADN contiene a los genes, de ahi que se dice que el ADN es la Biblioteca Génica éCUANTO MIDE EL ADN? Las 48 moléculas de ADN que hay dentro del nticleo tienen forma fibnilar, es decir son fibras alargadas, y Por tal no son circulares como lo es el ADN bacteriano. Si juntésemos todas las moléculas de ADN que hay dentro del nticleo por sus extremos, y armasemos una gran fibra de ADN, la medida seria de nada més y nada menos que de alrededor de 2 metros de longitud. Imagen que para que 2 metros de una molécula pueda entrar perfectamente dentro de un niicleo, cuyo tamafio promedio es de 2 a 6 micrones de diametro, requiere que se disponga de formas muy precisas. En efecto, ya veremos mas adelante que el ADN se dispone en forma de fibras bien definidas, que le Permiten acomodarse correctamente. A esa disposicién especifica se la llama Niveles de CompactaciénCARACTERISTICAS DEL ADN EIADN puede ser separado en sus dos hebras si sé losomete a la accién de una temperatura especifica oa {a acolén de un pH alcalino. A este proceso de separado de hebras del ADN se lo llama DESNATURALIZACION DEL. ‘ADN. Como hay tres uniones puente de hidrégeno entre Citosina y Guanine, y solamente 2 entre Adenina y Timina, la temperatura de separado o PUNTO DE FISION depende de la relacion CG/AT, es decir, cuantas uniones CG y cuantas AT hay en una molécula de ADN. Asimismo, se ha demostrado perfectamente que cuando se comienza @ enfrier lentamente las hebras desnaturalizadas o separadas, éstas comienzan lentamente a unirse de manera complementaria y ordenada, volviendo a formar finalmente la molécula completa de ADN. A este proceso se lo llama Templado 0 Renaturalizacion. La desnaturalizacién implica el separado de las dos hebras de ADN por medio del uso de temperatura o pH alcalino, mientras que el templado o Renaturalizacién implica la unin de dos hebras separadas de ADN al disminuir la temperatura o bajar el pH. ADN Y CROMATINA EI ADN nuclear no se encuentra suetto en el nticleo, sino que presenta una intima ascciacién a proteinas Presentes en el nucleo, marcando una segunda diferencia con el ADN bacteriano, que se encuentra sin union a Proteinas (por eso se lo llama al ADN bacteriano como “ADN desnudo’), La asociacién especifica del ADN con proteinas se llama cromatina. LAS PROTEINAS NUCLEARES Como ya dijimos, el ADN se asocia a proteinas especificas para formar la cromatina, Existen dos grandes grupos proteicos: » Las histonas: Son las hisionas H1 (hay 6 subtipos) y las histonas nucleosémicas (H2A, H2B, H3 Y H4, que forman al nucleosoma) » Las proteinas no histénicas: Se dividen en &cidas (con funcién mayoritariamente enzimética, como las ADN polimerasas) y basicas (con funcion estructural o de soporte como la PCNA olas SSB de la duplicacién del ‘ADN). LOS TIPOS DE CROMATINA En Biologia Celular e Histologia se habla de lo mismo pero definido de otra manera, un poco mas elaborada y mas precisa. Agul definimos que la crematina laxa se llama Eucromatina (y es la cromatina transcripcionalmente activa), mientras que la cromatina densa se llama Heterocromatina (y es la cromatina transcripcionalmente inactiva) Por su lado, la Heterocromatina, que dijimos que se trata de cromatina densa 0 compactada, es decir cromatina transcripcionalmente inactiva, se subclasifica en dos grandes grupos: » Heterocromatina Constitutiva: es la cromatina que en ninguna célula se transcribe. Siempre se mantiene compactada y su compactacién es irreversible (no hay forma de activarla o volverla eucromatina). Ejemplos son el ADN centromérico (que forma Centrémeros), el ADN telomérico (que forma Telémeros) » Heterocromatina Facultativa; es la cromatina que en algunas células es Eucromatina y en otras Heterocro- matina, Es una compactacién reversible. Un ejemplo es el cromosoma X en la mujer, donde uno de los 2‘cromosomas X presenta una inactivacién come parte de un proceso llamado Lyonizacién del X. Se observa enias células RECO trance Ip acu [Eucrom= — ENTENDIENDO UN POCO ALA CROMATINA Un pregunta frecuente que nos solemos hacer {cémo es posible que tengan la misma informacion mética células que cumplen distintas funciones? Ahi '@s donde entra la Diferenciacién, que es el proceso de ‘aciivacién e inactivacién selectiva de genes para poder ‘cumplir une funcién especifica Para hacerio mas claro lo vamos a ejemplificar con tuna proteina. La albiimine es una proteina producida por os hepatocitos del higado. En estas céiulas, ldgicamente el gen de la Albtimina esté activo o es funcional. La neurona Ro produce albtimina, sin embargo contiene en su interior al gen de la albimina, sélo que en este caso el gen esta inactivo (si estuviese activo se transcrbiria y produciria el ARNm encargado de producir albuminallll). Entonces, en el hepatocito el gen de la albtimina forma parte de la Eucromatina, mientras que en la neurona el mismo gen se Ubica dentro de la Heterocromatina acuitava (porque en algunas elas como el hepatecito forma parte de la Eucromatina, y en otras como la neurbna forma parte de la heterocromatina), NIVELES DE COMPACTACION DE LA CROMATINA EIADN se dispone dentro de nucleo de manera muy precisa, Esta disposicién permite conformar cromatina taxa o cromatina densa. La histologia no ensefia que cuando la cromatina esta laxa, el ADN se esté transeribiendo en ARN y por ende esa célula esta sintetizando proteinas. Por el contrario, cuando la cromatina esté densa, esa célula no est sintetizando activamente proteinas, LAS FIBRAS DE 10 NANOMETROS Estas fibras son el nivel mas bésico de compactacién de la cromatina. Se dispone formando nucleosomas separados por ADN espaciador. El Nucleosoma es la unidad basica de enrollamiento de la cromatina, y esté formado por dos grandes elementos: > Un cllindro proteico: Compuesto por 2 pares de las histo- nas Nucleosémicas (2 H2A, 2 H2B, 2 H3 y 2 H4) que con- forman asi UN OCTAMERO de forma cilindrica, y de 10 rim de diémetro. > Un segmento de ADN: Que se enrolla sobre este cilindro y da 2 vueltas (0 como dicen muchos libros, 1.8 vweltas).. Cada wuelta equivale a 83 pares de nlicledtidas u 83 pb, por lo que el ADN que esta en el Nucleosoma tiene 146 ares de nuclestidos (recordar que da 1.8 vueltas).