T5SW 1013742 SECREGAO DE INSULINA: ESTIMULO E CINETICA EDSON DELATTRE* RESUMO Na revisto, objetivow-se abordar o processo secretério de insulina, no que tooa ao seu desencadeamento e padndo de respos- ta. Sto apresentadas a3 hipdteses metabélica e do glicorreceptor para o reconhecimento da glivose. O padrio bifisico da secrecdo de insulina & discutido em termos das hipéteses explicativas L INTRODUGAO O crescente ritmo de estudo e com- preensfo dos processos envolvides na sintese e secrepio de insulina, ocortido nas duas altimas décadss, devese, em grande parte, a dois avangos téenicos desenvolvidos, aprimorados e difundidos 4 partir do final dos anos 50, O primeiro deles, 0 radioimunoenstio, cujos funda. mentos foram simultaneamente estabe- Iecidos por YALOW &BERSON?) nos FUA, e por EKINSU2), na Inglaterra, pemmitiu a dosagem rotineira de hor monios e outras substancias, com pre tividade, exatido, precisfo, sensibil dade © expecificidade muito’ superiores js apresentadas elas séenicas de mem- suragio até entdo praticadas, O segun. dio avango se inicion com 0 emprego de preperagdes in vitro ou in stu, de tecido pancreitico total ou parcial, estendendose até nossos dias, com 0 desenvolvimento de um elevado niime ro de t6enicas evariagoes. © principal objetivo deste relato ¢ abordar © mecanismo pelo qual as of lulas bete-pancredticas reconhecem © es timulo para a secregéo de insulina, bem come enfacar 0 padrdo com que esta se processa 2. TECNICAS DE ESTUDO DA SECRECAO DE INSULINA ‘A par dos estudos que envolvem seres_humanos, bem como animais, em condigées ‘bastante proximas das fisiolgias, outros empregam prepa- ragves especitis, que vdo desde 0 plin- creas ainda conectado ao seu portador, aié membranas € grinulos de células insulares, Assim, utizamese: (a) per fusGo de pancreas in situ (KUZUYA, KAJINUMA & IDE3); (b) perfusao de pancreas in vitro (GRODSKY et ali!”, SUSSMAN, VAUGHAN & TIM- MER6?; CURRY, BENNETT & GROD- SKY7S, WERSEN27, LENZEN4]), (©) perfusto de fragmentos de pincseas {KIRUCHT. et iB), (@) sncubagao de fragmentos de pancreas fetal (LAM BERT et alii, apud HEDESKOV!8) ou adulto (COORE & RANDLE®, MALAISSE, MALAISSE.LAGAE & MAYHEW*S; MALAiSSE, MALAISSE. LAGAE. & ‘WRIGHT; FELDMAN, QUICKEL Jr. & LEBOVITZ!4); (e) cultura de tecido paneredtico fetal (VECCHIO & GONETO9) ou neonatal (HOLLANDE et ali2!); (9 ilhotas iso Jadas por miviodissecgdo (HELLERS. TROM!9) oy por colagenase (MOS. KALEWSKI, 'LACY & —KOSTIA- NOVSKYS5), ’incubadas em. condi goes estiticas (KEEN, SELLS & JAR RETT2, HOWELL & TAYLOR? MALAISSE, MALAISSELAGAE & KING, VANCE, ev ali68: “COLL. GARCIA & GILLS, ATKINS & MAT- TY3, LERNMARK#2; HELLMAN et ali?5) ou dindmicas ( IDAHL25; LACY, WALKER & —FINK3®; LAMBERT, HENQUIN & MALVAUX38) ou, ainda, mantidas em cultura (LAMBERT at alii3?); (g) cultura de células insulares (KOSTIANOVSKY et alii32; HOLLAN- DE et alii2!); (h) perfustio de células insulates (IDAHL et alli25) e (4) incuba do de membranas e grinulos de células insulaes (DAVIS & LAZARUSIO, LAZARUS, DAVIS & O'CONNOR*®, DAVIS & LAZARUS!!). Considers’ ges. sobre as vantagens & limitagges Spresentadas polas técnicas in vitro, ‘para estudo da sectepfo de insulina, fo- ram feitgs por FELDMANU3)¢ HEDES Kovils) 3, ESTIMULO SECRETORIO Os agentes capazes de desencadear a sectegz0 de insulina sfo denominados iniciadores ou estémulos primirios, en- quanto aqueles que aumentam uma fe posta secretéria priméria, mas sfo, por si s6, incapazes de eliciar uma ses. posta secretéria, sfo referidos como potencializadores ou estfmulos secundé- fios, Dentie os agentes primérios, tais como, carboidratos (v.g. glicose, mano- se, N'acetilglicosamina, inosina, glice raldefdo, diidroxiacetona, glicosamina); aminoécidos (v.g, srginina, leucina, lisi- 1, fenilalanina); écidos graxos ¢ outros, a —D— glicose €, reconhecidamente, ‘0 maior estimalo fisiologiee da secregd0 de insulina * Mestre em Biologia na srs de Fisiologia e Biot sie, 395DELATTRE © processo de secreg¥o insulinica estimulado por glicose ¢ aceito, atval mente, como umtia seqiéncia encadeada de etapas, Estas se iniciam com 0 re- conhecimento (metabolismo, possive! mente) do secretagogo pelas células, beta, passando pelo aumento da con- centragao (atividade) citos6lica de Ca2* € ativayio do sistema de microtiibulos © microfilamentos, indo até a ocorrén- da migragio das vesiculas armaze- nadoras de insulina, em direed0 & mem- brana_plasmitica, © subsequente extr- so do contetdo granular para o It quido interstcial. 3.1. Reconhecimento do estimulo AA id6ia de que 0 provesso de secre: go de insulina envalvera © metabo ismo da glicose remonta a dgcades passadas. Je/em 1958, POZZA et aif), iestando 0 efeito de virios carboidratos, injetados na artériapancredtica de cles, levantaram a hipotese de que a seeregdo de insulina seria estimlada por avécares metabolizéves. Resulta dos de KILO et alil31), KARAM et ali), IDAHLO4), MALAISSEC3) ¢ KUZUYA, KAJINUMA & IDEG3) sugetem que a glicose precisa penetrar na oélula beta e ser metabolizada, para Provocar a seerepfo. de insulin, Por Sua_-vee, GAGLIARDINO. & MARS TIN(I3)’ consideram que 0 efeito estimulatério da gio depende do seu melabolismo, provavelmente, no Ciclo de Krebs, Um papel dette Ciclo, como promotor do sinal e energia requeridos para 0 processo de sectopao dP insu ha, foi. sugerido por MALAISSE. & MALAISSE-LAGAEC4) para. explicar 0 efeito estimulatério provocado por fecidos graxos e aminoécdos. MALAI. SE et alil@) verifcaram que a glct. lve representa a maior via de metabolis- mo da glicose nas hotas pancresticas, estando intimamente envolvida no pro cesso de identificagao da gicose pela cdlulas beta, come um estcmulo pata a secreggo de insllna, Sugerem que, n0 provesso de secreg#o da insulina por Blicose, a glicdlise pode regular os pro esos. fisiolégicos” dentro da edule beta, MALAIS: et alii(54) consi- deram que 0 inetabolismo da glow na lula beta, especialmente. no seg mento metabslico localizado além do nivel de. tiosefosfato, zepresenta 0 comigonente-chave do dspositivo glicos- sensor daquela célula. Consideram, também, que. 0 potencial insulinoté pico” dos carboidratos std em paralelo 396 com sua capacidade de softer glcdlise OpiniGes concordantes com esta sto, igualmente,,. expressas_por MALAI SE et ali@8)¢ ZAWALICH et ail), Outrossim, temse constatado que as curvas relicionando as taxas de secre. go de insulina e a utilizaggo de glico- se pela célula beta, com a concentragio extracelular de glicose, sfo. similares (ASHCROFT et alii; ASHCROFT, WEERASINGHE &RANDLE!). Resultados obtidos por MALAIS- SE-LAGAE & MALAISSEGS) sugerem que o estimulo para a captago de Ca3* depende do metabolismo da gi cose pela cetula beta. Segundo SENER, LEVY & MALAISSE(®) e ISHIBASHI et alii(26), a glicclise exerce, na oélula beta, um estzvito contzole sobre a mo- bilizagdo de Ca2¥, Jovando @ secrega0 ae insulina Recentemente, foi proposto que a conexo entre 0s eventos metaboticos © © rearranjo dos fluxos catiénicos da oélula beta ¢ felte por intermédio da geragao intracelular de NAD@)H* e H*, em paralelo com uma produgio aumen- tada de ATP, que pode ser essencial para preencher a necessidade de ener ia__doquels clula (MALAISSE._ et alii55; MALAISSE et alii a5, b52,¢53), ‘Assim, a capacidade insulinotrapica de lum seoretagogo dependeria do grau de elevagfo de nucleotideos piridsnicos re- duzides por ele provocada, nucleott- deos estes que afetatiam a afiidade, por cations, dos sistemas ionoforéticos da célula beta (MALAISSE et alii o°). (Os resultados expesimentals que cor relacionam metabolismo de substra- tos ¢ a secregdo de insulina, pelas eé- Juas beta, constituem evidéncias favord- eis a0 modelo do sitio-substrato, como um hipétese explicativa para a ago insulinotrépica dos estimulos pri mérios da secrecio. Esta hipbtese foi, Esquematizagdo do padrao biffsico da secreggo de insulina, conforme: Semina, 4(14):395-399, 1983 reoentemente, discutida em revisfo pu- blicada por “MALAISSE. et_ali(50) Em. oposigd0, evidencias favorvels ao modelo do sitio-reguiador (glicorre- ceptor) tém sido obtidas por outros pesquisadores. Segundo este modelo, a fHicose pode desempenhar um papel duplo nas células beta, ao agir como fstimulante quimico, em adigfo 20 set papel de substrate. metabélico (MATS- CHINSKY et alii”). Dessa forma, a glicose, por si mesma, desencadeatia a Secrogio™ de insulin, ao. apie em um glcoreceptor membrapar. Dados iad adores de que a gicdlse nfo é um vento necessirio para a seereggo_ de insulina foram obtidos por PACE. & MATSCHINSKY(1), ao" verificarem que a citocalasina B provaca inibigao de uiilizapao de_glicose, em condighes Gque aumentam a secreezo de insulina Entretanto, HEDESKOV(18), revisando as evidénclas favoriveis ow ‘contririas Summa e ovtee das hipdteses, considera fragmentérios contraditrios os argu mentos em favor do modelo do siio- regulador, tendo revnido um maior Yor lume de evidénciasfavordveis ao modelo do siti-substrato, 4. CINETICA DA SECRECAO A secreg0 de insutina, evocada por slicose em concentrago supralimiar (es- timulo em onda quadrada), apresenta um caracteristico padre’ bifisico Assim, apés um periodo de 50 a 100s de Jaténcia, ovorre um répide aumento da taxa de secrepdo de insulina, que cai 2 njveis intermedisrios (entre os niveis basal e maximo) dentro de 5 a 10 min. Essa fase inicial ¢ seguida de nm segue doe prolongado periodo, que apresen. ta um aumento mais gradual da secre. g8 (GRODSKY et ali, apud HEDES- KOVI8) (Figura), HEDESKOV (198018),DELATTRE Esse padrio de resposta foi, inicial- mente, constatado em pancreas isolado © perfundido (CURRY, BENNETT & GRODSKY a7, b8), sendo, posterior- mente, observado em outros sistemas isolados, tais como: (a) fragmentos jso- lados de péncreas (KIKUCHI et alii30); (b) ilhotas isoladas (DAH 23; IDAHL24; LACY, WALKER &FINK36, LACY, KLEIN & FINK37, LAMBERT, HENQUIN & MALVAUX38; SIEGEL et alii®) e (c) suspensio de células in- sulares (IDAHL et alii25), E possivel que tal padrgo tenha uma importancia fisioldgica, uma vez que tem sido constatado em seres humanos, tanto a ntvel do sangue periférico, quan: to mo sangue portal (CERASI, LUET & EFENDIC; ELAHI et alii; BLAC. KARD & NELSON; LUND, SCHMIDT & DECKERT, apud WOLLHEIM & SHARP!®), Por outro lado, em certos tipos de diabetes, nota-se ‘a falta da resposta inicial 4 ‘slicose, com preser- vagfo da segunda fase (CERASI, LUET & EFENDIC, apud WOLLHEIM & SHARP!0), Divers hipétesestém sido aventadas para explicar a forma bifésca de secre- gio. Neste. sentido, GRODSKY et alii, apud RANDLE & HALES(64), ropéem um modelo de dois compar timentos para a. insulina estoceda, na célula beta. Um, localizado proximo 4 membrana, teria dimens6es reduzidas @ seria rapidamente mobilizado, enquan- to o outro, mais intemo, apresentara grandes dimensdes ¢ lenta mobilizacdo. Por outro lado, LACYG4) sugere que os granulos de insulina alinhados 20 longo dos microtiibulos poderiam ser responséveis pela primeira fase da se- cregfo, enquanto a fase posterior decorreria da secregdo dos granulos {nicialmente livres no citoplasma, ¢ que se ligariam aos microtibulos, GRODS- KY et alii, apud GRODSKY(9) consi deram a possibilidade daquele padrio decorrer de um mecanismo de inibi $40, por feedback, da secrosdo, Esta hipétese “€ apoiada por evidéncias, cletrofisioldgicas sugestivas de uma auto-regulagdo secretéria da célula bet pela propria insulina (PACE et alii62), MALAISSE et alii(5!) propdem que 0s grinulos localizados na rede miczo- lamentar seriam os responsiveis pola primeira fase, enquanto a segunda corresponderia a uma mobilizacée dos grinulos secret6rios localizados 20 longo dos micrtibulos. ORCI & UNGER(60) atribuem 0 padrio bifisico a uma es pecial disposicgo_histoldgico-funcional das células insulares. Esta hip6tese, entretanto, tomou-se insustentével, apés a verificagao de um padrdo bifisico da secregdo de insulina em suspensio de células insulares (IDAHL et alli2>), Por sya vez, MEISSNER & ATWA: TERGS) consideram que o referido padrdo seria um fendmeno dependente, a0 menos parcialmente, do potencial de_membrana,, Segundo ATWATER & BEIGELMAN@), a resposta secretoria bitésica seria explicdvel pela existén. cia de um sistema regulat6rio na mem- brana da célula beta, possivelmente Seming_ 4114): 595.399, 1983 um canal de K* dependente de Ca2+ intracelular De acordo. com DAVIS& LAZARUS(10) @ LAZARUS, DAVIS O'CONNOR), atuapao da glicose a. nivel de um hipotetico receptor Iemnbranar produciria a primeira fase, enquanto a sua simuldénea entrada ¢ metabolismo na calula beta iniciaria manteria a segunda fase da seoreggo de" inspina.. Finalmente, WOLLHEIM at ali”) rounem evidéncias de que fguele padrio seria reflexo de uma alteragao bifésica na coneentragao cito- sélica do Ca2*, 5, CONCLUSAO Uma grande variedade de técnicas ‘tem sido empregada para o estudo dos processos envolvidos com a secrego de insulina, Existem duas hipoteses (modelos) que procuram explicar @ mecanismo de reconhecimento da glicose pela of- ua beta, a saber: (a) 0 modelo do st tio reguiador; (b) 0 modelo do sitio substrato, O conjunto de dados reuni dos até © presente parece favorecer, ‘em maior gra, 0 segundo modelo. O padrao’ de resposta secretéria @ concentragoes eficazes de glicose apresenta uma forma bifésica. Indmeras hipéteses tém sido propostas na tenta- tiva de explicar esse fendmeno, 0 qual ndo seria simplesmente uma particula- ridade académica, mas teria significado em condigdes fisioldgicas, como tam- ‘bém em algumas situacbes patol6gice: (2.8. certos tipos de diabetes). This review purposed to explain insulin release ABSTRACT regarding its unchain and response pattern, The metabolic and glucore- ceptor ypothsis are described for glucose recognition. The biphste pattem of ih secon ws dsceead Wage ede of a large number of explicative hypothesis. ” v PIS aisussed within kin O1, ASHCROFT, 5.1.H WEERASINGHE, LGC. & RANDLE, Pd, Intertelationship of islet metabolism, adenosine tiphosphate Contem aad insulin release, Biochem. 1,132 24-91, 197, 2 ~.; BASSETT, 3M, & RANDLE, P3. The pentose cycle and insulin release in mouse pancreatic iets. Biochem. 126:525-32, 1972, REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. 03, ATKINS, T. & MATTY, AJ. Metabolic viability of freehand microdissected and collagenase. Isolated islets of Langerhans. Endocrin, 46:XVUXVUL, 1970. 8, ATWATER, |, & BEIGELMAN, PM. Dynamic characteristics of elec activity in pancreatic B-cells. ects of calcium and magnesium removal. 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