TCVN TIEU CHUAN QUOCGIA TCVN 12365-2:2018 ISO 16140-2:2016 Xudt ban lin 1 VI SINH VAT TRONG CHUOI THU'C PHAM — XAC NHAN GIA TRI SU’ DUNG PHU'ONG PHAP — PHAN 2: QUY TRINH XAC NHAN GIA TRI SU’ DUNG PHUONG PHAP THAY THE SO VOI PHUO'NG PHAP CHUAN Microbiology of the food chain - Method validation - Part 2: Protocol for the validation of alternative (proprietary) methods against a reference method HA NOI - 2018TCVN 12365-2:2018 Lindi dau ‘TCVN 12365-2:2018 hoan toan trong duong vei ISO 16140-2:2016; TCVN 12365-2:2018 do Ban ky thuat tigu chudn quéc gia TCVN/TCIF13 Phuong phdp phan tich va dy m&u bién soan, Téng cyc Tiéu chudn Bo luréng Chat lurgng thm éinh, 89 Khoa hoc va Céng nghé céng bd. B9 tiéu chudn TCVN 12366 (ISO 16140) Vi sinh vat trong chudi thyc pham — Xée nh@n gid tj sirdung phuong phap gdm cactiéu chudn sau: — TCVN 12365-1:2018 (ISO 16140-1:2016), Phan 1 ~ Thuét nga’ va dinh nghia = TCVN 12965-2:2018 (ISO 16140-2:2016), Phin 2 - Quy trinh xée nhén gid tri six dung phwong phép thay thé so voi phuong phap chunTCVN 12365-2:2018 Loi gidi thigu Ngay nay cé rdt nhiéu phuong phap thay thé, chi yéu la cdc phuong phap déc quyén duge si dung 68 danh gid cht lugng vi sinh cila nguyén ligu thd, thanh pham va finh trang vi sinh cla quy trinh san xudt. Céc phuong phép nay thuong nhanh hon va dé thyc hign hon so véi phuang phép chudn tueng tng. Cc nha xéy dung phuong phap, ngu@i sir dyng cudi cling va cc e quan chire ning can cd quy trinh phd bién dang tin cay d& xdc nhan gid tr] sir dung cdc phuong phap thay thé nay. Dé ligu thu ‘dug sé cung cp cho nguoi sir dung cudi cling va dir ligu higu nang oa phuong phap dura ra, do 46, ‘cho phép ho chon phuong phép cy thé. Cac dor ligu thu due cling o6 th due ding lam co’ sé cho vige chimg nhn phuong phap boi mél td chive é6c lap. Tidu chudn nay: — nhdm cung cp quy trinh cy thé va hvéng dan xac nhén gid tri st dung phuong phap déc quyén ge sir dyng nhu mgt phwong phép nhanh va/hoge dB dang thy hién hon so voi phuong phép chun tuong eng, — ofing 06 thé duge sir dung dé xac nhéni gid tr] sir dyng cac phuong phap khong doc quyén khac duge sir dung thay cho phwong phap chuan, — duoc dy dinh la sy ké thira cla quy trinh xéc nhan duge xudt ban trong phién ban dau tién cla ISO 16140 (ISO 18140:2003), va ~ duge xAy dyng chi yéu 68 xde nhan gia tr] str dung cdc phuong phap cé kha nang nudi cy vi sinh vat dich, nhung cling 6 thé 4p dung cho c4c phuong phap vi sinh vat khdng thd nudi cdy nhu virus (vi dy: Norovirus) va don bao ky sinh (vi dy:Cryptosporidium hoe Giardia). Trong nhizng tring hep nay, mot sé tir ngG cn dug dién gia d& phd hep véi tinh hudng dp dyng cho sinh vat khong th nudi ody duge. Vic si dung tigu chudn nay lign quan dén chuyén mén vé cdc linh vyc lién quan nhw vi sinh hoc, thiét ké théng ké, phan tich nhu duc néu trong céc phan tuong tng. Thyc té thing ké bao gdm ting quan vé ly thuyét ldy mau va thiét ké c&c thy nghiém, phan tich théng ké dé ligu vi sinh (djnh tinh va dinh lugng) va téng quan vé cdc khai niém théng ké vé ly mau ngdu nhién, tinh khOng déng nhét cla mau, tinh én dinh cia mu, thiét ké céc thye nghigm va cdc thanh phan phuong sai. Khi tiéu chudn nay dug xem xét tiép theo, s& phdi tinh dén tét cd cdc thong tin s4n c6 lién quan dén mirc 6 tuan thi cdc quy trinh va ly do sai léch déi voi cdc s4n phAm cy thé. \Viéc hai hoa héa cae phuong phép xac nhén gia trj siy dung khéng thé ob ngay va déi voi mét sé nhém san phdm cy thé thi tigu chudn quéc té vayhodc cc tigu chudn quéc gia oé thé dang hién hanh ma khéng phi hop voi tiéu chudn nay. Hy veng rang khi céc tiéu chudn dé dugc soat xét, sé dug thay di 8 phi hop voi tiéu chun nay, néu khng thl chi vi cde Iy do kg thuat. Vi dy: ISO 16297 F1d8 cp dén xc nhén gid tr str dung cho m@t d6i tugng riéng (tinh trang vé sinh ca m&u stra tuoi nguyén ligu) va sé tdn tai nhu mét tiéu chudn xc nhan bén canh tiu chuain nay. Néu phai x4c nhén thi tiéu chudn cy thé nay phai durge wu tién riéng.TIEU CHUAN QUOC GIA TCVN 12365-2:2018 Vi sinh vat trong chudi thc pham — Xae nhan gia i st? dung phuong phap — Phan 2: Quy trinh x4c nh4n gia tri st dung phuong phap thay thé so véi phuong phap chudn Microbiology of the food chain ~ Method validation — Part 2: Protocol for the validation of allemative (proprietary) methods against a reference method 1 Pham vi 4p dung Tigu chudn nay quy dinh quy trinh chung va quy trinh ky thuat 8 danh gia cdc phuong phép thay thé, phn Ién la phurong php déc quy&n trong phan tich vi sinh vat trong chu6i thy phdm, Cac nghién cru xc nhén gid tri st dyng theo tiéu chudn nay due ding cho cdc td chikc danh gid, x4¢ nhan gia tr] sir yng phurong phép. Tidu chudn nay cé thé ap dung 48 x4c nhén gid tri str dung cdc phuong phap phan tich (phat hién hodc. inh lung) vi sinh vat trong: = cde sn pham thy phdm; ~ c&e san phdm thire an chin nudi; = cdc mu mél trvdng trong khu vc sén xudt, xi ly thyre phdm va thire an chan nudi; ~ cc mau tir giai dogin sin xudt ban dau. Tiéu chuan nay trong truéng hop cy thé c6 thé ap dyng cho vi khuan va ndm. Mot sé didu trong tiéu chudn nay cé thé dp dyng cho cdc phuong php xac dinh vi sinh vat khc hoe cdc chat chuyén hoa cola ching thy theo ting trréng hyp. Trong twong lai, huéng dan cho c&e sinh vat khde (vi dy: virus va ky sinh tring) 88 durgc dura vao trong.tiéu chudn nay hoc durgc tach thanh mgt tiéu chudn riéng cia bd TCVN 12365 (ISO 16140).‘TCVN 12365-2:2018 2. Tal ligu vign dan Céc tal igu vién dn sau rdt cén thiét cho vige &p dung tigu chudn nay. 861 v6i cde tai ligu vign dn ghi nm c6ng bé thi 4p dung phién ban duge néu. 86: véi cdc tai ligu vign dfn khéng ghi ném céng bé thi ap dung phién ban méi nhat, bao gdm ca cac sia déi, bd sung (néu c6). TCVN 12365-1 (ISO 16140-1), Vi sinh vat trong chudi thc phém — Xéc nhin gid tr] sik dung phuong phdp — Phan 1: Thudt ngi va dinh nghia. 3. Thuat ngtr va dinh nghfa “Trong tiéu chun nay &p dung céc thudt ng@ va dinh nghia trong TCVN 12385-1 (ISO 16140-1), 4 Quy trinh chung d6i véi vige xac nhén gia tr| str dyng cae phwong phap thay thé Quy trinh xéc nhn gid tri str dung bao gdm hal giai doan: = nghién cu so s4nh phuong phap cla phuong phdp thay thé (déc quyén) so voi phuong phap chudn duge thyc hién trong phéng thiy nghiém 18 chiro; = nghién ciu lién phéng thir nghiém cia phuong phap thay thé (4c quyén) so voi phuong phap chudn durge thye hign trong c&c phang thir nghigm khéc nhau. Cac quy trinh kj thuat 48 thy hign nghién ctu so sanh phyong phép va nghién céu lién phong thir nghigm éugc quy dinh tai Bidu 5 va Dieu 6 tly thugc vao ban chdt cla phuong phdp thay thé (6c quydn) Ia dinh tinh hay dinh lrgng. DO ligu thu dg trong mét sé phan olla nghién clu xAc nhén gia trl sl dung due danh gié bang cach sir dung Giéi han ch4p nhan (AL) va khéng dan gia théng ké vé- dG ligu. Céc AL nay dya trén y kién cla cdc chuyén gia va di lidu thu Gurgc trong cée nghién etru xéc nhén gid tj sir dung hign hanh. 5 Phuong phap dinh tinh ~ Quy trinh ky thuat v8 xdc nhan gid tr] sir dung 5.1 Nghién cru so s4nh phuong phap 5.4.1 Xem xét chung Nghién ctu so sénh phurong phép Id mot phan cia qué trinh xéc nhén gia tj sir dung duge thy hién trong phong thir nghiém td chirc. Nghién ciu nay bao gdm ba phan sau: — nghién cou so sénh cdc két qué cia phuong phap chudn voi két qua cla phurong phép thay thé trong c&c mau nhiém (ty nhién vafho&c nhan tao) (cling dure gqi ld nghién ctvu a6 dap tng);TCVN 12365-2:2018 — nghién ctu so sénh d& xc dinh mirc phat hign twong déi (RLOD) trong céc mau gay nhiém nhan tg0 (con ggi la nghién ctu RLOD); — nghién ctu muc tiéu/loai trtv cla phworng phap thay thé. Cac két qua (trong cac bang va cdc phép tinh) cia cde phan khac nhau va viéc glal thich két qua, bao gdm cdc két qua khac nhau, phai duc néu trong bao céo nghién curu. C@ phan mau thir phai dug néu rd trong phuong phép chudn. 5.1.2. Nghién ctu cap 461 hodic khéng cép dél ‘Céc phwong phap chudn va phuong phap thay thé phai duge thyc hign chinh xdc trén cling mot mau (cing mét phan méu thi) cang nhidu cang tét. Tuy nhién, cO sy phan biét gia cdc nghién ciru, sir dung cing mét phan mau thi cho cd phurong phap chudn va phirong phap thay thé, vi cd hai phuong phap dau cd cing buée dau tién trong quy trinh (tang sinh), va can siv dung cae phan mAu thir khac hau cho phuong phdp chun va phuong phap thay thé (vi dy: do canh thang t&ng sinh khéc nhau). Trong tréng hyp cd hai phurong phap déu sir dyng cing mot phdn mau thir, c&c két qua cla hai phuong phap nay sé 06 lién quan nhidu dén nhau. Vi dy, hi mu khong bj nhiém, ca hai phuong phap @au cho két qua mu 4m tinh. Do méi quan hé nay, ma dé ligu thu dug tir phuong phap chuan va phuong phdp thay thé diego goi Id cp di hoge thich hop. Trong tidu chudn nay, cym tir "nghién cou 3p doi" $8 dugc si dung cho loai hinh nghién cou nay. Tinh huéng nguge Iai, cing o6 thé Khéng c6 bute ban dau (tng sinh) giing nhau cho cd phuong phap chuan va phyong phép thay thé. Trong tréng hyp nay, clin sir dung céc phan mau the khac nhau tty cling [6 hang hoc mé san phdm cho ca hal phuong phap va do ligu kat qua thu duge gol la kh6ng cp di hoc khéng so sénh, Trong tiéu chun nay, cum tty “nghién etru Khong cap d0i" duge sir dung cho logi hinh nghién oiu nay. Vige chon nghién ctu ep dél hod khéng cap ddi phy thude vao cdc quy trinh cla phurong phdp chudn va phuong phdp thay thé. Néu c6 bude ban dau trong cach tién hanh (tang sinh) thi thiét ké nghién tru cp d6i la bat bude. Bidu nay mé tA nghién ctu so sénh phuong phdp néu phuang phap chuan va phuong phap thay thé ¢6 buéc ban dau chung trong cach tién hanh (tang sinh) (nghién ciru e&p di) va néu phurong phép chudn va phong phap thay thé khéng cé buéc ban du chung (nghién ctu khong c&p ddl). Sy khac Di8t gifra cd hai logi nghién ctru duge chi ra trong phain n6i dung khi thich hep. 5.4.3. Nghién ciru 49 dap ing Ngbian ctu 49 dap teng nhim xac dinh chénh Igch d6 dap tng gitra phurong phap chudn va phyong php thay thé. Nghién ctu nay durge tién hanh str dung mau nhi&m ty nhién va/ho&e nh4n tao. Cac nhém va cdc kidu/loal khéc nhau phai dugc kiém tra va didu nay. Gidi han ch4p nhan dugc xéc dinhTCVN 12365-2:2018 vé sy chénh féch t6i da cé thé chdp nhan duge ty thudc vao loai hinh nghién ctu (cap déi/khéng cp 6i) va 86 lung nhom duoc thir nghigm. 5.1.3.4 Chon cdc nhém dé thir nghiém Vigc chon nhém va kigulogi sty dung trong x4c nhan gid tr sir dung sé phy thudc vao loai hog nhém visinh vat va pham vi xée nh@n, Néu phuong phdp duge 4p dung cho nhidu foal thye phdm thi phai nghién cau it nhét § nhém thye phdm. Bao cdo nghién ctu x4c nhan phai néu 15 cdc nhém thyc phim dugc sir dyng trong nghién iru, Néu phuong phdp cn xéc nhgn déi voi mgt s6 06 han cdc nhém thyc phdm, vi dy: “cac sin phdm thit an ngay, san pham thit cn dun lai treéc khi an" va "stra ché bién nhiét va cdc san phdm ‘s(ta”, thi chi nhOing nhém nay duge nghién ciru. Ngoai thie phdm, mau thire an chan nudi, mu mdi trvéng, va mau giai dogn san xudt ban dau 06 thé duc dua vao lam céc nhém bd sung. Bidu nay sé md rong viéc 4p dying phurong php thay thé cho céc nhom bd sung nay. ‘B6i véi t4t cd cdc nhém duge chon (thyc phm va cdc sén phdm khdc), ft nhét phai nghién cizu ba loai hac nhau cho m&i nhém. Phu tye A trinh bay téng quan va céc nhom va kidu/loai cé lién quan voi cdc vi sinh vat dc trung 6 thé cé lién quan dén vige x4c nhn. Phy Ive A can duge str dung dé tao didu kign cho viéc chon c&c nhém, kiéu/logi va cc san phdm va vi sinh vat dc trung. Bigu nay khong phai la vige chon bat bude, Khi chon mdu cho nghién civu, wu tién cao nhat la tim nhOng mau bj nhi&m ty nhién. Néu khong thé cd ‘due du s6 mau bj nhiém tyy nhién thi cho phép st» dyng mu nhiém nhan tao (xem Phy yc B va Phy luc C). Chi tiét v8 vie chudn bj mau da nusi cdy nhan tao phai duge néu trong bao cdo nghién ctu xac nhén. T6t nhdt la cdc mau thyrc pham thu duge ty dai phn bé cang rong cang tét 48 giam moi sai ech do mAu cyc bO va md réng pham vi xdc nhén. Phai bdo dam rang voi vige chon cdc kidu/loal khéc nhau, ca hé vi khudn nan cao va thp (ty nhién), cc loai tre ché (stress) khdc nhau do ché bién va nguyén ligu thé (chua ché bién) déu duge dua vao nghién ciru, VI DU: 88 xac nhdn id td sir dung phurong phap pha hign Lisleria monocytogene va nhém "eae sén phim thit én ngay, sin phim tht Wy nhig trate kin, cc lpi sin phdm ob th la (1) ee sn phd tit 68 ndu chin (hd vi kun bn thdp, irc ‘ché nhigt), (2) céo s’n phdm thit I8n men hogc sy khO (hd vi khudn cao, dre ché pH) va (3) sn phdm 48 xir I (hun khdi {ax<0:92| (hv kun nbn tung bin rch a). ‘Vi dy, trong mét sé truéng hyp, d6i vei phuong phap thay thé ap dung cho nhiéu logi thy phdm, co thé két hop céc nhém "in ngay" va "nguyén ligu" tir cing mot nhém san phdm, Vi dy, cc nhéom thit nguyén ligu va thit an ngay (san phdm) 06 thé dugc gép vao mot nhom 6 ba oai chia ra cdc loai thyc pham an ngay va nguyén ligu. Viee chon nhém thre phdm (két hp) phai dya trén phan tich nguy oo.TCVN 12365-2:2018 54.3.2 $6 long mau ‘B6i voi mBi nhém can kiém tra, phal kiém tra ti thibu 60 mau dom (8, it nhat la ba foi v6 it nhét 20 mau dai dién cho méi loai (ba loal x 20 mau cho mai loai = 60 mAu). Phai co duge phan két qua phan tich duong tinh bang phuong phap chudn hoac phvong phap thay thé (nghia la khdng phai ld tat cd cdc méu déu duong tinh hoe am tinh) cho méi loal dug kiém tra. Trong tinh hudng ly tuéng, méi loai thir ighiém 06 10 m&u (50 %) dvong tinh va 10 mau am tinh, nhung nén nam trong khoding tir 25 % d6n 75 %. Béi voi mdi nhém, ft nhdt 30 mau phai cho két qua duong tinh bang phyong php chudn varhodic phuong phap thay thé. 5.4.3.3 Két qua cla phwong phap thay thé va khang dinh Nhidu quy trinh cla phyong php thay thé gdm hai bude, bude dau tién la buréc tang sinh, phat hin va bu6c thir hal la khang dinh két qua phat hign tir buéc mot. Két qua cudi cing cita phurong phap thay thé a két qua thu duge sau bude hai. Kat qua cudi cling sé giéng nhu két qué sau khi tng sinh ‘va phat hign trong trréng hop khdng o6 bute xée nhén trong quy trinh phuong phap thay thé, Két qua (cudi cling) cla phuong phap thay thé phai khang dinh dude phan nghién ctu 46 dap eng. ‘Tét cd céc két qua thu due bang phurong phap thay thé trong nghién ciu khéng c&p dé phal duge khang dinh. Trong nghign cau cp di, chi céc két qua dureng thu duc bing phurong phap thay thé, tuong @ng voi két qua cia phuong phap chuan [a am tinh, thi phai diye khdng dinh. Viée khang dinh nay cn 48 xc dinh ligu két qua c6 phai la duong tinh thyrc hay duong tinh gid. Phép thir khang dinh hode c4c phép th phi o6 kha nang phyc hdi va khang éjnh vie nhgn dang cia ching phan tgp 1a dich ciia phurong phdp. Cac phép thir nay 06 thd duge dya trén quy trinh khang dinh cia phuong phap chudn, bude khang dinh olla phuong phap thay thé trong truéng hyp nay 06 thd phan lap va khang dinh vigc nhan dang cia chiing dich, sy két hgp cila cd hal ho§c bat ky quy trinh nao khéc 06 thé phan lap va-khang dinh sy nhan dang cia chiing dich. Néu bu¢ t&ng sinh cia cée phuong phap chuan va phuong phdp thay thé khde nhau vé sé lan tang sinh (nghfa la: bude ddu/khéng chon Igc va bude thi hailod chon I9c) hodc tng thdi gian & 4m, c&n 6 ‘céch khang dinh bd sung cho nghién cru xéc nhan. Cach thir nhdt phai direc sir dung v6i phuong phap thay thé theo ding quy trinh/huéng dan ciia né (didu kién kiém tra théng thong bing phuong phap thay thé theo quy trinh di kam b9 thir, viée nay khéng bao gém cdc cdc phép thir bd sung ma cb thé duge thy hién trong qua trinh nghién ciu xc nhan). Céch thir hai phai chuy&n phan nudi cdy tng sinh cla phong phdp thay thé sang phan tong tng cla phuong phdp chuéin sao cho giam thidu tng thai gian di 4m ola buéc tang sinh-clla phuong phap chuan duge dy kién. Két qua ola hal cach khang dinh phai duc bdo cdo riéng ré.TCVN 12365-2:2018 5.1.34 Tinh va dién gial 4 dp dng Nhin chung, dé ligu phai durgc néu trong bao cdo dé 6 ting quan vé céc dif ligu thé thu duge. Thong tin phai duge néu 16 cho foal nhi&m (nhiém ty nhign hoc gay nhiém nhén tao) alia cae mau duge str dyng, log thiét ké nghién ou da duge sir dyng (vi dy: nghién cou cap di hoe nghién cou khéng cp ddl) va cac phép thir khang éinh duge sir dung 8 khang dinh két qua cilia phurong phap thay thé. ‘D6i voi céc m&u gay nhim nan tao, quy trinh (tham khdo) sir dung 48 chudn bj phai duge quy dinh (xem thém Phy lyc C). Céc két qua thu duge di voi cdc phuong phép chudn va phuong phép thay thé cb ngudn géc tir cing mét mau, o6 nghia la tir mot phan mu thi trong truéng hgp nghién ctu cap dBi hoac hai phan mau thir trong trvdng hop nghién ciru khéng cp di, pha durgc nau cy thé déi véi nghién ctru cp ddl theo Bang 1 va nghién cru khéng c&p di theo Bang 2. Bang 3 dugc chuan bj cho cac két qua mau téng hyp cho tét cd cdc loai cita nhém (2 60 mau) va cho méi loai (2 20 mau) 44i voi nghién ctu cp d6i va khong c&p ai, Bang 1 - So sdnh va gial thich cdc két qua mdu gitra phuong phdp chudn va phuong phap thay thé cho nghién ciru cap 46% Kt qua cia phyong phap (chudn hogc thay thé) trén mau Phuong | Phuong phap thay thé Dién gial BrAe | (adem phepkndng anh neu] SMERG SIN PHONG) (aya rn bt qua ca phvonaohép one trong quy tinh cla phuong | PRAP thay th thay thé 48 dye khang dinh) phép thay thé) (bang céich bat ky)? + + Khdng cn thidt? ‘Théng nhét dong tinh (PA) - : Khong edn thidt> Thing nhét 4m tinh (NA) ‘Sal lgch 4m do két qué cla phurong phap * . Khia cho Bute thay thé am tinh gid (ND) : + + Sai léch dvong (PD) Théng nhat am tinh do két qua cla : + - phuong phap thay thé durang tinh gid (Nae + khdng djnh kt qua cia phuong php thay thé theo 5.1.3.3, > khéng cn phép tho khing dinh thém, Két qua cia phuohg phdp thay thé dupe Khing dinh giéng nhir két qua ciel phuong phap thay thé. [*_két qud cuvorg tinh gi ny (FP) pha durge sir yng dé tinh ty duremag tinh gid,TCVN 12365-2:2018 Bang 2 - So sénh va dién gidi cac két qué mau gitra céc phuong phap chuan va phwong phap thay thé 44i voi nghién ctru khéng cap dél Két qua ca phuong phap (chuan hoge thay thé) trén mau Phuong Phuong phap thay thé Khang ¢jnh Dién giai PhaP | (gdm moi phép khang dinh neu} PRONG ee (dya tren két qua cia phuong phap chuan | trong quy trinh ca phurong thay tt thay thé 68 duge khang éinh) php thay thé) (bang cach bat ky) + + + Théng nhdt duong tinh (PA) ' + ‘Sal igch &m do két qua phworng hap thay thé am tinh gia (NO) : s ‘Théng nhét dm tinh (NA) Théng nhét am tinh do két qua cia 8 z + phurong phép thay thé dung tinh gia (NA) + - : ‘Sailch am (ND) é . ‘ ‘Sai lgch am do két qua clia phuong phép thay thé Am tinh gia (ND) + + Sai lgch dong (PD) ‘Théng nhdt 4m tinh do két qua oda : + : phurong phép thay thé duong tinh gid (NAP ‘khdng dinh két qua cia phuong php thay thé durge thy hign theo 6.1.3.3. két qua ducing tinh gb (FP) ny pha drge sir dyng @ tinh ty Ip duong tinh gid Bang 3 — Tém tat cdc két qué thu durgc bing phueng phap chudn va phwong phap thay thé cua tt ca cdc m&u d6i vi tieng nhém Két qui phuong phap chuan | Két qua phyong phap chudn dvong tinh 4m tinh (R+) (RY Két qué phuong phép thay thé ae dong tinh (A+) ‘Duong tinh phi hgp (PA) Sai Ich durong (PD) K&t qua phyong phap thay thé +h t ‘am tinh (A+) Sai léch &m (ND) ‘Am tinh phi hyp (NA) Dya trén d& ligu théng ké trong Bang 3 déi véi cdc nhém két hyp theo nhém va theo kidwloai, tinh gid {ri 6 dap tng cia phuong phép thay thé (1) va cla phuong phap chudn (2) 49 ding trong a6i (3) va. ~ ty 86 durong tinh gid d4i voi phwong phap thay thé sau khi khng dinh thém cdc két qua (4) nhu sau:TCVN 12365-2:2018 (PA+PD) : SE = ——— x 100% o Bd dap ting cla phuong phap thay thé: SEyx ParhosPa * ”) éna ch 4 {PA+ND) a = ——_—_ x100% (2) 86 dap tng cita phuong phap chuan: SEw PA+ND+PD) x (2) ‘6 diing tong déi: RT = oes x100 % 3) . 5 Fe T¥1@ dung tinh gid 661 voi phurong php thay thé: FPR= - 100 % (4) Trong d6: N la sé lugng mau ting sé (NA + PA + PD + ND) va FP Ia céc két qua duong tinh gia. Cac phan giai thich ttr vit t&t dugc sir dung, xem Bang 1 dén Bang 3. Cae két qué clia phuong phédp thay thé d khang dinh phai duge sir dung d8 xac dinh xem o6 tuong thich véi két qué cla phuong phap chudn hay khéng. Tinh chénh léch gida (ND - PD) di v6i cd nghién cau ep déi va khéng cp d6i va ting cia (ND + PD) 461 vol cc nghién ctvu cp aél. Kiém tra xem chénh léch vafhodc téng cia PD va ND pht hop véi gidi han chdp nh@n (AL) trong Bang 4 d6i véi logi nghién clu (c§p d6i va khéng cap dal) hay khong va sé lugng nhém duge sir dyng trong dénh gid. CHU THIGH: Gigi nan chdp nhan (AL) duxge dya trén dO ligu va sy théng nhdt cde chuy8n pia. AL Khtng da tén phan tich thdng ké d tidy. Vigc dign gia cdc két qua phai Gugc thy hign theo ting nhém va déi véi tét c& c&c nhém duge sir dyng trong nghién cru xde nhan. Vide di&n gidi cdc két qua cling phai thyc hign theo tig cach tang sinh trong trudng hop céc quy trinh khac nhau duge sir dung cho cdc loai mdu khée nhau. AL khéng dap img khi gi tri quan sat dug cao hon AL. Khi AL khéng d4p tng thi tién hanh didu tra (vf dy: phan tich nguyén nhan géc) d8 din gil cdc két qua quan sat dugc. Dya vao AL va thing tin bd sung, quyét inh xem phuong phap thay thé 6 éurgc col la khéng phi hop véi myc dich 66i voi nhém hoe cdc nh6m o6 lién quan hay khéng, Céc ly do ch4p nhan phurong phap thay thé trong trvéng hyp AL khong at yéu cau phai duge néu ro trong bao cdo nghién cou.TCVN 12365-2:2018 Bang 4 - Cac théng sé gidi han chap nhén va céc gid trj 46i voi thiét ké nghién cou c&p d4i va khong cap doi lién quan dén sé long nhém dugc siv dung sé iugna nidin Nghian ciru cap aéi Nghién cu khéng c§p dot (ND*= PD! (ND +PD) (ND-PD) 1 3 6 3 2 4 8 4 3 5 40 5 4 5 12 5 5 5 4 5 6 6 6 6 7 6 18 7 8 6 20 7 * ND = sb lagng mbu 06 Ket qua saitch &m. © P= sb long miu co két qua sal Ibch dong. CHO THICH: Théng tn v8 sy khée bigt quan sat duoc gia cdc két qua cda phuong php thay thé trutc va s2u khdng dinh bt qua (bude 4 va bude 2) theo phucrng php thay thé cn duxge néu trong bo céo xéc nhgn gid tr sir dyng nhw thong tin ‘sung, nhung kong duge sir dyng rong dinh gia (Eng th higu ring cia phurong php thay td. 5.1.4 Mirc phat hign twong déi cia nghién cou Nghién ciru so sénh duge tién hanh 48 danh gid mirc phat hién (LOD) ctia phuong phép thay thé so voi phwong phdp chudn. Viée Génh gia duge dya trén vigc tinh mize phat hign tong é6i (RLOD). Trong nghién ctru nay, sir dung lap lai cdc mau nhiém nhdn tao & ba mirc nhiém hogc nhiu moc nhiém hon. Tét nhat la c&c mire 4 biét 68 tinh LOD. Tuy nhién diu nay la khong bat bude. 5.4.44 Chon nhém, 66 kegng mau va phép thir ip lai i véi vige chon nhém va kidu/loai, xem 5.1.3.1. Str dyng cling céc nhém nhu duge chon cho nghién cru & dap tng (xem 5.1.3). Déi v6i m&i nhém, chon mét logi 6 lién quan. Bé tinh Gai dién cao hon cho nhém duge dénh gid, kidu/loai nay nén khde véi ogi ding trong nghién oiru 49 dap tng (néu ob thé), Céc mu phai duge nudi cdy nhan tao. Céc quy trinh chun bj mau nudi cdy nhan tao duge néu trong Phy luc C. Méi kiéu/loai due nudi cdy voi mét ching khac, Chuan bj t6i thiéu ba mirc cho méi lagi bao gdm it nhdt mot mérc kim ching Am, mot mic thdp va cdp mirc cao hon. Tét nhét, marc thdp la mirc phat hin Iy thuy&t (térc ld 0,7 cfulphan mau thir) va mirc cao hon la mire chi trén mirc phat hién ly thuyét (vi dy: 1 cfu dén 1,5 cfu/phan méu thi). it nhdt mére thap cn 6 46 phyc hi tieng phan theo phuong phap chudn (46 phyc hdi ting phan & mirc thdp cn trong khoang tir 25 % dén 75 % s6 mu dugc kiém tra). Can woe tinh mite 66 nhiém (trév kiém chtng am). O 13TCVN 12365-2:2018 mirc kiém chimg 4m, cdn kiém tra it nhAt nam mau lp lai bang cd hai phuyong phdp. Déi voi merc thir hal (th4p) (mirc phat hign ly thuyét), c&n kiém tra it nhdt 20 mau kip lai va & mirc ther ba (cao hon), phai kiém tra it nhat 5 mu lap lai theo cd hai phuong phap. Mire kiém chteng 4m khdng dure cho két qua duong tinh. Khi thu duge céc két qua duvong tinh, cdn lap lai cdc thyre nghigm cho tat cd cdc mic. Cac két qua thir nghigm sai ch durong thu duge bang phuong phdp thay thé phai dugc khang dinh thém (xem 5.1.3.3). RLOD phai dugc dénh gié sau hi khdng dinh. CHU THICH 1: B 08 ue sy bdo dim tt hom cho vite ph hl tong phn, oh igo va th nghig rbiku mic hig hon, ‘CHU THICH 2: Can cb mic nhiém d6i voi LOD olla phureng phap chudn nu phutong phap thay thé cé LOO thdp hon phuong hap chudin, 5.1.4.2 Tinh va dién gial RLOD RLOD duge xe dinh la ty s6 cla c&c LOD ctia phuong phap thay thé va phuong phép chun: 6) ‘B6i voi mdi nhom, It nhat céc RLOD phai dug ube tinh bang cach lp mé hinh bd sung-log-log (CLL) vo, két hop dir ligu ob matkhéng ob mat ca c& hai phuong php. Cae mire nhidm khdng on tinh toan RLOD vi chiding 48 bao gdm trong m6 hinh két qua céc dudng dd thj xac sudt phat hign so voi ligu log (mie nhiém), Mo hinh théng k& va cdc phép tinh duege: néu trong Phy lye D. Céc phép tinh 06 thd Guge thyc hign v6i cée bang Excel™" cia tidu chudn nay. Bang tinh Excel® 48 tinh cde gi tri RLOD cd s8n 48 tai vd mi&n phi tai htip://standards.iso.org/iso/16140 va sau 66 chon tép RLOD. Déi voi cdc Phép tinh sir dyng bang tinh Excel® nay, phai chon "chu biét ndng 46". Tinh RLOD, cho méi hang myc thir i. Tom Iai két qua dug néu trong Bang 5. Bang 5 - Trinh bay RLOD trvéc va sau khi khang djnh cac két qua cila phurong phdp thay thé RLOD str dung céc két qua cia phuong | RLOD sir dung cdc két qua cla phwong php thay thé hép thay thé 68 khang dinh Hang myc (onan RLOD, RLOD, 1 2 k Két hop Excel a vi dy vb sn phim thch hip co ban sn. Thong tin da ra tgo thug tn cho ng att dung va khding dn dh pha sit dyng sn phdm nay. 14TCVN 12365-2:2018 Gigi han ch4p nhan (AL) d6i vei RLOD dia trén cac két qua cla phurong phép thay thé da khang dinh quy dinh mire tang t6i da LOD cila phuong phdp thay thé so vai phuong php chudn khéng duge coi 18 06 lién quan trong vige xem xét tinh phu hop cho myc dich ella phuong phép. Do d6, gid tr AL sé > 1. Can didn gidi cho tirng hang myc. AL 6) voi dé ligu nghién ciru cdp déi duge thidt lap & mirc 1,5, nghfa la LOD 46i voi phuong phap thay thé khéng duge cao hen 1,5 lan LOD ctia phwong phép chuan, Gid tri LOD 46i véi phuong phap thay thé nhd hon gid tr] LOD cia phuong phap chudn luén duge chép nhén vi didu nay cé nghia la phuong php thay thé o& kha nang phat hign ra mic nhigm thép hon so v6i phurong phap chudn. AL d6i v6i dé ligu nghién cou khong c&p di & mic 2,5, nghia la LOD déi voi phong phap thay thé khong dug cao hon 2,5 lan LOD ctia phuong phép chudn. Gia tri LOD 46i véi phuong phap thay thé nhd hon gid tri LOD déi v6i phuong phép chuan Iuén duge chdp nhan vi didu nay c6 nghia la phuong phap thay thé 6 kha nang phat hién ra mirc nhiém thdp hon so véi phuong phép chun. AL kh6ng durgc dap tng khi gid tri quan s4t dugc cao hon AL. Khi AL khéng dp tng, cAn tién hanh Gibu tra (vi dy: phan tich nguy&n nhan gc) 48 giai thich v8 cdc két qua quan st dugc. Dya trén AL va théng tin bé sung, quy&t éinh xem phuong phap thay thé o6 duge col la Khéng phil hop v6l myc dich. la nhém ho§c kiéullogi c6 lién quan cn nghién céru hay khéng. Céc ly do chép nhan phuong php thay thé trong truéng hyp AL khéng dap eng phai dugc néu trong bao cdo nghién ctu. Ngoai vige tinh RLOD, d@ ligu 66 th8 dugc danh gid sir dung mé hinh xac sudt phat hign (POD) cla AOAC néu trong Tai ligu tham khdo [14] va o6 trong cdc hudng dan x4 nhén gi tri str dung cia AOAC". Vide danh gid sir dung mé hinh POD c6 thé cung cAp thém thang tin v8 sy trong duong cia cae phurong phép. 5.1.5. Nghlén ciru myc tiéu va loal trib 54.5.4 Chon va sé lvgng céc ching Cn sir dyng mt loat cdc ching. C4c tiéu chi chon cée chiing thir nghigm durgc néu trong Phy yo E. Cae ching duge st dyng cdn duge tinh dén nguyén t&c do cilia phuong phap thay thé (vi dy: dya vao dich cy, diva tran thr nghiém mi8n dich va phan tir). Cac nguy8n téc do khac nhau 6 thé cdn sir dyng cac bang thir nghiem cée ching khac nhau. MBi ching dug st dung phal dugc mé ta cdc dc tinh sinh hoa va/hoac huyét thanh hoc varhoac bién 448i di truyén voi day dui chi tiét 48 nhan dang da biét. C&n uu tién sir dung cdc ching phan lap tir the phdm, thie &n chin nudi, mai truéng ché bién thyc phém ho’c san xuét ban dau cé tinh én pham vi xc nhan. Tuy nhién, ob thd si? dung cdc chiing cilia bO suu tap ching phan lap tir bénh vign va moi trurémg. Can biét ngudn.géc cia tt cd cée ching va duge liu git? noi b6 (vi dy: phdng thir nghiém chuyén nganh), bd suu tap ching céy cia quée gia hoc quéc té 06 thé duge sir dung trong tang lai, néu can.