Quimica Farmaceutico Biologica @ i Universidad Nacional Auténoma de México Facultad de Estudios Superiores Zaragoza if Laboratorio de Microbiologia General 1 Grupo: 2654 CONOCIMIENTOS PREVIOS A LA SESION PRACTICA DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA GENERAL ASESORA: QFB. Beatriz Elena Arellano Pimentel Elaboro: Franco Diaz Cristofer. -Mauricio Martinez Valentina Annet. -Muiioz Segura Ramiro. CONOCIMIENTOS PREVIOS A LA SESION DE LAB. DE MICROBIOLOGIA GENERAL | PROFESORA: QF8. BEATRIZ ELENA ARELLANO PIMENTEL PRAC. 4 PUNTOS GUIA Qué es un medio de cultivo? ‘Un material nutritivo preparado para el crecimiento de microorganismos. 4Cémo se clasifican los medios de cultivo de acuerdo a su consistencia? Y mencione tres ejemplos de cada uno, Se presentan como medios sdlidos, semisélidos y liquidos, 1. Medios Liquidos: se utlizan preferentemente para favorecer el desarrollo bacteriano de células estresadas. En determinadas ocasiones no se pueden sustituir por los medios sélidos, por ejemplo en la sintesis de exotoxinas, pigmentos, enzimas, etc. Ejemplo: Agua peptonada, Caldo comiin, Caldo Cerebro Corazén, Caldo Sabouraud, etc. 2. Medios Sélidos: se utiizan para obtener bacterias aisladas por la formacién de colonias sobre la superficie del medio de cultivo y para el estudio de la morfologia de las colonias, lo que no permiten los medios liquidos. Se diferencian porque tienen una sustancia de sostén, que puede sser agar-agar. Ejemplo: Agar Comuin, Agar SS, Agar Cerebro Corazén, Agar Saboureaud, etc. 3, Medios Semisélidos: se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias, Tienen un menor porcentaje de agar, por lo que no se solidifican totalmente a temperatura ambiente. Ejemplo: Agar MIO, Agar SIM.ECémo se clasifican los medios de cultivo de acuerdo a su ‘composicién quimica? Y mencione tres ejemplos de clu zCual es la diferencia entre un medio enriquecido y un medio de enriquecimiento? Y mencione tres ejemplos de cada uno. Medio de enriquecimiento. EI medio (medio de enriquecimiento) para un cultivo de enriquecimiento suele ser liquido y proporciona nutrientes y condiciones ambientales que favorecen el desarrollo de un mmicrobio particular pero no de otros. En este sentido también es un medio selectivo, pero ‘std destinado a aumentar las cantidades muy pequefias del microorganismo deseado hasta niveles detectables. ‘ejemplos: agar McConkey, Agar chocolate, Agar sabouraud Medios enriquecidos. Son medios simples o comunes, a los que se le afladen clertos elementos como sangre, suero, liquido ascitico, huevo, glucosa, vitaminas, etc. lo que permite el aporte de factores de crecimiento o sustancias que neutralizan agentes inhibidores del crecimiento en bacterias exigentes nutricionalmente, entre algunos ejemplos: agar sangre, medio de Léwenstein-Jensen, enriquecido con huevo para faciltar el crecimiento de Mycobacterium; agar desoxicolato-lactosa (DLA), enriquecido con lactosa y desoxicolato De manera general describa la funcién principal que tienen los medios de cultivo liquidos, semisélidos, sélidos en tubo, y sélidos en placa 11, Medios Liquidos: se utiizan preferentemente para favorecer el desarrollo bacteriano de células estresadas. En determinadas ocasiones no se pueden sustituir por los medios sélidos, por ejemplo en la sintesis de exotoxinas, pigmentos, enzimas, ete 2, Medios Sélidos: se utllizan para obtener bacterias aisladas por la formacién de colonias sobre la superficie del medio de cultivo y para el estudio de la morfologia de las colonias, lo que no permiten los medios liquidos. Se diferencian porque tienen una sustancia de sostén, que puede ser agar-agar. 3. Medios Semisdlidos: se utiizan para estudiar la motiidad de las bacterias. Tienen un menor porcentaje de agar, por lo que no se solidifican totalmente a temperatura ambiente. Describa paso a paso la manera de preparar un medio Iiquido, un medio semisélido, sdlido en tubo y sélido en placa; indicando todas y cada una de las precauciones que se deben de tener al preparar los diferentes medios de cultivo y sobre todo al realizar el vaciado en placa, Describa la forma correcta de almacenar los diferentes medios de cultivo ya preparados. Mencione tres medios de cultivo selectivos y/o diferenciales paraaislar bacterias Gram positivas y tres para cultivar bacterias Gram negativas. Medios selectivos. El agar sulfito de bismuto se utiliza para aislar la bacteria gram negativa que produce la fiebre tifoidea, Salmonella typhi, de las heces. zCémo se prepara el agar sangre de camero (ASC 5%) y por qué? Suspender 40g del polvo en 1 litro de agua puriicada, Dejar reposar § minutos y mezclar perfectamente hasta obtener una suspensién homogénea. Calentar con agitacién frecuente y hervir 1 minuto para disolucién total. Esteriizar a 121 °C durante 20 minutos. Agregar 5-10% de sangre ovina desfibrinada estéril al medio esterilizado, fundido y enfriado a 45-50°C. Homogeneizar y distribuir en placas de Petri estériles. AN ser suplementado con sangre ovina, permite el crecimiento de microorganismos nutricionalmente exigentes y la clara visualizacién de reacciones de hemélisis “Cémo se prepara el agar chocolate y por qué? {Cual es el porcentaje de agar de un medio semisélido? El agar esta presente en una concentracién menor al del resto de sélidos en el medio, en su defecto no superior al 0.5% o se recomienda el uso de agares menos potentes como el Agar de Hugh-Leiffson zCual es el porcentaje de agar de un medio sélido? El agar se encuentra en una concentracién de entre 1.5 a 2%, Mencione las caracteristicas del agar- agar -Es un hidrocoloide completamente soluble en agua a 100°C. ~Se puede disolver a bajas temperaturas. Al contacto con agua fria se hincha y puede aumentar hasta 30 veces su volumen. -No aporta sabor ni aroma y carece de color. -Es un poderoso agente gelifcante, -Es un gel termorreversible. -Golfica entre 35°C y 43°C y se derrte entre 85°C y 95°C. -No aporta calorias. -Es ligeramente saciante y laxante. -Es el Unico hidrocoloide que ofrece gelatinas que pueden soportar temperaturas de esterilizacion Mencione que sustancias se utilizan para solidificar un medio de cultivo Los agares para microbiologia son empleados como elementos solidificantes en los medios de cuttivo y no tienen ningtin impacto negativo sobre el crecimiento de las bacterias ni son atacados por los microorganismos que se estan desarrollando alli adentro. El agar nutritivo resulta bastante util ya que permanece sédlido sin importar las altas temperaturas a las que sea somelido y el crecimiento de las baclerias se desarrolla en la superficie, permitiendo que las colonias pequefias se puedan identificar mas fécilmente. Mencione que sustancias son utilizadas como inhibidores de ciertosmicroorganismos en la preparacién de medios de cultivo. El inhibidor McConkey permite el crecimiento gram (~) e impide el de los gram (+), color verde brilante (Inhibe gram (+) ) el colorante cristal violeta inhiben las gram positivas, Las sales biliares inhiben las gram (+) y algunos (-) Investigue qué son los medios cromogénicos Bioagar Campylobacter: Es un medio cromogénico selectivo para la deteccion y ‘enumeracion para la mayoria de especies de Campylobacter termofiico (C. jejuni, C. coli ay C. lari) en muestras alimentarias y ambientales Elaborar la tabla de los diferentes medios de cultivo que vienen en la pregunta 10 del cuestionario del manual y anexar los siguiente medios: agar con bilis y esculina para bacteroides (BBE), agar sangre hemolizada con kanamicina y vancomicina (KV), agar con alcohol feniletilico para anaerobios (PEA). LA TABLA ES DE SUMA IMPORTANCIA, EN DADO CASO DE ELABORARLA EN HOJAS SUELTAS PEGARLA EN SU BITACORA. Resolver el cuestionario correspondiente a la practica 4 NOTA: RECUERDEN QUE SI SE REPITE LA INFORMACION QUE INVESTIGAN CON LAS PREGUNTAS QUE VIENEN EN EL CUESTIONARIO CUANDO LLEGUEN A RESOLVER ESTE, SOLO ANOTEN LA PREGUNTA Y COMO RESPUESTA ANOTEN EL NUMERO. DE PAG. DE SU BITACORA EN LA CUAL VIENE LA RESPUESTA A ESA PREGUNTA EN PARTICULAR. Cuestionario 1. Defina qué es un medio de cultivo y cual es su utilidad. Son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones fisicas optimas, permite el crecimiento de los m.o, Son esenciales en el laboratorio de microbiologia por lo que un control en su fabricacién, preparacién, conservacién y Uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones: -Temperatura -Grado de humedad -Presion de oxigeno -Grado correcto de acidez 0 alcalinidad Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de m.o. contaminantes. La mayoria de las bacterias patégenas requieren nutrients complejos similares en composicién a los liquidos orgénicos de! cuerpo humano. Por eso, la base demuchos medios de cultivo es una infusién de extractos de came y peptona alos que se anadiran otros ingredientes 2. ECémo se clasifican los medios de cultivo de acuerdo a su consistencia? 1a) Medios liquidos: Son los que se presentan en este estado, denominandose por esta razén caldos, El medio liquido mas utilizado es el llamado caldo nutritive, compuesto principalmente de extracto de came, peptona y agua. Se utilizan fundamentalmente cuando se pretende la obtencién de una suspensién bacteriana de una determinada concentracién b) Medios sélidos: se preparan a partir de los medios liquidos, agregandoles un agente gelificante. Los mas utlizados son la gelatina y el agar gelatina. Es una proteina animal obtenida de los huseos. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, su punto de fusion es bajo, El agar puede utllizarse para diferentes fines, aunque los mas importantes son: agar comercial para la industria alimenticia, agar bacteriologico, agares purificados y agarosa, utllizada para electroforesis en gel, SIM 3.5g (0.35%) preservar cepas, pruebas bioquimicas. ©) Semisélidos: se preparan a partir de los medios liquidos agregando a estos un agente solidificante en una proporcién menor que para preparar medios sélidos. Uno de sus usos es la investigacién de la movilidad de la bacterias, observar motiidad 3, .Qué sustancias se emplean para modificar la consistencia de los medios de cultivo? Partiendo de un medio liquide podemos modificar su consistencia afiadiendo productos ‘como albtimina, gelatina o agar, con lo que obtendriamos medios en estado semisdlido 0 sélido. 4, Mencione las propiedades fisicoquimicas del agar. EI agar-agar es el agente solidificante mas utllzado. Su composicién quimica es indefinida y solidifica con mayor dificultad a medida que desciende el pH. Es insoluble en agua fria, pero se funde y solubiliza en agua hirviendo y solidifica a 45°C. Forma geles transparentes muy estables y es degradado por muy pocas bacterias. 5. Qué utilidad tiene cada uno de los siguientes tipos de medios de cultivo: a) Liquido: Se utlizan fundamentalmente cuando se pretende la obtencién de una suspensién bacteriana de una determinada concentracién b) Semisélido: Uno de sus usos es la investigacién de la movilidad de las bacterias, observar motilidad. ©) Sélido: El agar puede utlizarse para diferentes fines, aunque los mas importantes son: agar comercial para la industria alimenticia, agar bacteriologico, agares purificados y agarosa, utlizada para electroforesis en gel, SIM 3.59 (0.35%) preservar cepas, pruebas bioquimicas, 6. Explique en qué consisten los siguientes medios de cultivo y cite tres ejemplos de cada uno: a) Basicos: son aquellos que poseen los componentes minimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesitan requerimientos especiales. El medio mas conocido de éste grupo es el agar nutritive 0 agar comtin, que resulta de la adicién de agar a caldo nutitivo,b) Enriquecidos: son aquellos que, ademas de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de m.o. exigentes. Este enriquecimiento se hace se hace por adicién de sangre u otros productos biolégicos que aportan dichos factores. ¢) Selectivo y/o diferencial: son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una poblacién polimicrobiana, El fundamento de estos medios consiste en faciltar nutricionalmente el crecimiento de una poblacién microbiana espectfica, Un ‘ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza parafavorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias. 4) Especial o de ensayo: : son medios empleados para comprobar una o mas cacarteristicas bioquimicas, se crearon con el fin de identificar y clasificar a los mo. segtin sus actividades por ejemplo: SIM, TSI, LIA, etc. ©) SIM= sulfuro, Indol, motiidad, 7. eCudl es la diferencia entre el agar sangre y el agar chocolate? En el chocolate los eritrocitos sufrieron lisis por calentamiento y en ell agar sangre estén intactos 8. Indique la forma correcta de disolver un medio de cultivo que contenga agar. 9, 2Qué precauciones deben tomarse en cuenta al preparar un medio de cultivo? -Prepararlos sélo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores que suministren productos de calidad. + Utiizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiolégica y fisicoquimica adecuada + Utlizar materiales de vidrio bien lavados y enjuagados con agua destilada o desmineralizada + Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilizacion. Nunca se deben exceder las condiciones sefialadas por el fabricante, 10. Realice una tabla para los siguientes medios de cultivo: EMB, Mac Conkey, Sal y Manitol, S- 110, SS, AN, ASC 5%, Agar Chocolate, Agar verde brillante, Agar tioglicolato, ‘Agar Mueller Hinton y Agar base leche. Dicha tabla deberé de contener la siguiente informacién: a) Nombre del medio de cultivo b) Clasificacién de acuerdo a su composicién quimica 6) Composicién quimica 4d) Fundamento del medio e) Utilidad #) Interpretacién UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO. FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA MICROBIOLOGIA GENERAL | LABORATORIO. EXAMEN DE LA PRACTICA 4 (PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO)ALUMNOS: EQ. 4 GPO. 2651 FECHA 19-02-22 Franco Diaz Cristofer. Mauricio Martinez Valentina Annet. Mufioz Segura Ramiro. 1. Defina que es un medio de cultivo. Un medio de cultivo es un conjunto de componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. 2. El porcentaje de agar que contiene un medio sélido es, yelde un medio semisélido es, 3. Mencione dos ejemplos a parte del agar para dar consistencia sélida a un medio de cultivo, 4, Mencione un ejemplo de un medio de cultivo: a) Sélido en placa, b) Sélido en tubo, ©) Semis6tido d) Liquido, 5. Mencione cual es la utiidad en general de un medio de cultivo: a) Sdlido en placa, b) Sélido en tubo, ¢) Semisolido ) Liquido, 6. Este tipo de medio se fundamentan en el uso de un sustrato cromogénico especifico, el cual se evidencia por la formacién de colonias coloreadas:, 7. Escriba el nombre de tres medios centerobacterias: 8, Mencione tres medios tities para el aislamiento de bacterias Gram positivas, 9. EI medio de Middlebrook, Petragnani, Dubos, Mycobactosel y Lowenstein- Jensen son ifiles para el aislamiento di 10. El medio de agar con cicloserina, cefoxitina /fructuosa y el medio de agar tioglcolato son empleados para el cultivo de microorganismos: 9S para el aistamiento de Valor: 1 punto clu |. Relaciona las siguientes columnas a) Basico ( ) TSI b) Enriquecido ( ) EMB©) Selectivo ylo diferencial () ASC 5% 4d) Enriquecimiento ( ) Caldo selenito €) Especial o de ensayo ( ) Agar Nutritive