Clonarea plantelor prin cultura de meristeme

Cultura de meristeme
Meristemele sunt ţesuturi de tip formativ, cu celule tinere, care îşi menţin în tot cursul vieţii
plantelor capacitatea de a prolifera, de a se divide, formând mereu noi celule. Ele sunt localizate în
vârfurile de creştere ale tulpinilor şi rădăcinilor, la nivelul ramificaţiilor organelor. Acestea sunt
meristeme apicale, de tip primar, cu rol în creşterea în lungime a organelor. La organele ce suferă procese
de modificare întâlnim meristeme secundare, respectiv cambiul (strat regenerator libero-lemnos) şi
felogenul (strat generator subero-felodermic).
De regulă, prin termenul lărgit de cultură de meristeme, se înţelege cultivarea „in vitro” a
meristemelor apicale, caulinare, axilare.
Pe lângă aptitudinea proliferativă, celulele meristematice deţin caracteristici structurale
particulare:
- au pereţii celulari subţiri, celulozici, nemodificaţi secundar;
- sunt bogate în citoplasmă, au mitocondrii numeroase, nucleul est mare, cu nucleoli bine reliefaţi;
- au vacuolele mici şi nu deţin metaboliţi secundari.
Formarea meristemelor şi organogeneza sunt procese care se petrec treptat, sub control
genetic şi hormonal. Factorii de mediu pot stimula atât inducerea, cât şi şi viteza de desfăşurare a
proceselor de organogeneză. Hormonii sunt factori cu rol hotărâtor în direcţionarea proceselor
de diferenţiere a meristemelor, în tesuturi radiculare sau caulinare. Auxinele intervin în reglarea
formării meristemelor, iar citochininele au rol în neogeneza de muguraşi si lastari.
Cultivat in vitro, meristemul terminal, apical sau axilar, poate să genereze una sau mai
multe plante noi (lastari), în funcţie de balanţa hormonală prezentă în mediul de cultura. Prin
tehnica culturii de meristeme se poate realiza o rapidă multiplicare clonală a plantelor la specii
horticole sau silvice.
Plantele regenerate din meristeme sunt identice din punct de vedere genetic, cu planta
mamă donatoare, fapt deosebit de important în agricultură, asigurându-se astfel o multiplicare
clonală. Mai mult, clonele meristematice reprezinta un material săditor sănătos. Plantulele
generate “in vitro” din meristeme sunt libere de viroze, boli deosebit de păgubitoare şi imposibil
de evitat şi de combătut în condiţiile înmulţirii vegetative a plantelor.
 Metoda vegetativa de inmultire fidela a plantelor - clonarea, ca toate tehnnologiile
vegetale in vitro, se bazeaza pe insusirea specifica celulei vegetale TOTIPOTENTA –
capacitatea de a regenera un organism complet (planta), cand are conditii optime de cultura.

Recoltarea si inocularea meristemelor in conditii sterile

Mod de lucru
- Mediul de cultura. Se utilizeaza mediul Murashige-Skoog solidificat, steril, suplimentat cu
auxina AIA (acid indolilacetic) 1,5 mg/l + citochinina BA (benziladenina) 1 mg/l, repartizat in
flacoane cilindrice sterile.
- Materialul vegetal. Se recolteaza muguri de trandafir de pe lastarii de 1 an (de la axila
frunzelor; perioada optima de recoltare- primavara).
- Sterilizarea mugurilor. Se imerseaza mugurii in solutie HgCl2 0,1%, timp de 7 minute, pentru
sterilizare; se spala in cateva bai de apa distilata sterila, pentru indepartarea sterilizantului. Se
indeparteaza solzii protectori si primele primordii foliare, folosind pensa si bisturiul sterilizate in
flacara si racite.
- Inocularea meristemelor. Se introduce steril, cu varful bisturiului fragmentul meristematic, cu
dimensiunea de 1-2 mm, in vasul de cultura pe suprafata mediului. Toate operatiile se realizeaza
steril in hota cu flux de aer.
- Cultivarea inoculilor. Se transfera vasele cu inoculii in camera de crestere, unde conditiile de
cultivare sunt: 25˚C si fotoperioada 16 ore lumina / 8 ore intuneric. Durata cultivarii este de 4-6
saptamani, pana la aparitia lastarilor.
Aclimatizarea regenerantilor. Aceasta ultima etapa a protocolului de regenerare in vitro este la
fel de importanta ca si regenerarea. Ea consta in scoaterea plantelor regenerate de pe mediul
artificial (cand acestea au3-4 cm lungime si un sistem radicular bine dezvoltat) si plantarea lor in
conditii nesterile in nisip sau mranita, in ghivece. Protejarea lor se face in camera de
aclimatizare, prin acoperire cu folie transparenta – care impiedica evaporarea rapida a apei in
primele zile. Temperatura, lumina si umiditatea variaza in limite mai largi decat in camera de
crestere. Astfel, regenerantii se adapteaza la conditiile normale de cultura, dezvoltand cuticula
foliara si toate organele vegetative.
Lastari regenerati de trandafir

Camera de aclimatizare a regenerantilor

Reprezentarea schematică a procesului de regenerare in cultura de meristeme:
1. apexul din care este izolat meristemul;
2. iniţierea culturii;
3. lăstar dezvoltat din meristem;
4. plantă obţinută prin înrădăcinarea lăstarului;
5. transferul în sol pentru aclimatizare.