Imunologie curs 7

Recapitulare : de ce avem nevoie sa activam LT ? Sa recunoastem si sa le acitvma, scopul este sa

obtinem un nr crescut de limfocite care sa recunoasca in mod specific Ag care a declansat procesul si in
plus celulele acestea trebuie sa fie nu dora in nr mare ci si capabile sa distruga patogenl , adica sa fie
efectoare si in plus sa avem si o populatie capabila sa supravietuiasca: Lt cu memorie. Acestea avem
nevoie de ele in cazul unor noi intalniri cu acelasi antigen .

Intalnirea APC cu LTCD4 e la baza RI umoral si celular.

Etapele de principiu ale semnalizarii intracelulare

1) Etapa receptoriala : rec conf a ligandului => modif in conf receptorului la suprafata dar care sunt
transmise intracelular
2) Faza citosolica = suma de procese biochimice, in principiu fosforilari si defosforilari care fct pe
princp unei cascade enzimatice

Daca spunem enzimatice – avem fosforilaze =care fosforileaza . Cel mai cunoscut substrat al fosforilarii =
reziduul tirozinic. Pot exista si alte rezidurii care sa fie fosforilate de ex treonina si serina.

Care era rezultatul fosforilarii ? Ori substrautl devenea el insusi o fosforilaza, ori substratul juca rolul de
proteina adaptor. Sa devina fosforilaza=> permitea adaptarea cascadei. Daca devine adaptor=> aduce in
apropiere 2 proteine care jucau cele 2 roluri : ori de substrat ori de fosforilaza.

Dc faceam povestea asta? Avansam cascada activatoare, dar cel mai imp este ca noi amplificam
semnalul odata prin angajarea mai multor cai de transmitere a semnalului . Am prezentat data trecuta 3
cai ( cu PIP2 sunt 2 cai + calea MAP-kinazelor).

Am mai spus ca procesul invers este cel de defosforilare care este facute de fosfataze care vor bloca
transmiterea semnalului activator. Am dus semnalul activator pana la factorii activatori ai transcriptiei
nucleare , acestia sunt factori care au capacitatea de a se lega in zona promotor a genelor de interes si
va deeetermina cresterea ratei de transcriptie si rez va fi ca vom sintetiza proteinele care au diverse
roluri in fct celulelor.

Asta a fost la nivel molecular. La nivel celular avem LT naive atat cele CD4 cat si cele CD8. Urmare a
activatii LT CD4 poz, o prima etapa e sinteza si secretia/expunerea de citokine. Acestea pe de o parte vor
permite atingerea urmatorului scop= proliferarea celulara, pe de alta parte ele vor trebui sa se
diferentieze dpdv functional- ele toate sunt CD4+, nu asa le putem diferentia insa le putem identifica in
subseturi functionale datorita tipurilor de citokine secretate.

Deci una peste alta consecintele activarii LT sunt :

-activarea sintezei proteice

-maturizarea functionala

Sintetizam atat prot secretate cat si cele exprimate pe suprafata celulara spre ex moleculele de adeziune
celulara, receptorii pt citokine si chemokine. Avem nevoie de toate. Noi suntem in ggl limfatic. Ca celula
efectoare, nu vom avea nevoie de ea acolo, ci vom avea nevoie sa plece la situsul infectios => vom avea
nevoie de alt set de molecule de adeziune ca sa plece si de chemokine si receptori pt chemokine ca sa
aiba o anume directie. Avem nevoie si de citokine care sunt mesagerii.

In urma acestor sinteze se va modifica fenotipul functional al celulei, pe de o parte. Pe de alta parte
obtinem maturitatea functionala si obtinem proliferarea celulara=> celulele noastre in stadiul naiv, in
stadiul G0 vor trebui sa parcurga etapele ciclulu celular si vom ajunge sa avem LT efectoare si LT cu
memorie, ambele mature. Cand vbim de CD4 am spus ca ele sunt diferentiate in subseturi care sunt
Helper 1, 2, 17 si regulatorii.

Modificarea fenotipului morfo-functional

1.CD69

LT naiv e tinut in aria T dependenta a ggl limfatic prin moleculele de adeziune. Una din primele prot sint
este o mol expr pe supr LT in primele 12 ore = CD69 si ea are rolul de a bloca un receptor care exista in
zona in care este ancorat LT = sfingozin fosfat 1 receptor . ROLUL acestui rec este sa detaseze LT matur si
sa il trimita sa isi vada de treaba. Lt ca sa se activeze tre sa parcurga toate etapele de activare- are
neovie de ceva timp. E nevoie de o mol care sa blocheze eliberarea LT pana isi primeste el toate
semnalele activaotare si ajunge la maturitatea functionala. Asta face CD69.

De aceea, CD69 e printre primele molecule sintetizate(in primele 12 ore).

Un alt eveniment

2.Receptorul pentru IL2

Avem nevoie de ea ca sa parcurgem etapele ulterioare.

3.CD40L ( 24-48h)

4.CTLA4 (24-48 h)

5.Cams & CCR = molecule de adeziune celulara si receptori pt citokine

Cruciala este sinteza si secretia IL2 , dar pt aceasta avem nevoie de receptorul pt IL2. In functie strict de
domeniului extracel si de modul de transducere gasim 5 tipuri receptori pt citokine care vor recunoaste
fiecare familie dintre ei cate un nr de citokine.

Familia receptorilor de tip 1 = o sa fie dimeri, o sa aiba in domeniule extracelular reziduuri de cisteine
care vor transduce semnalul pe calea JAK STAT. Pot avea multi liganzi. Vor avea secvente variabile pt
fiecare tip de citokina.

Avem de nevoie de IL2 si de receptorul ei. In primele ore dupa transducerea semnalului activator o sa
creasta sinteza proteinelor c-FOS care alaturi de proteinele ... apartin familiei AP-1. In primele 2 ore
incepe sa creasca sinteza de IL2 care atinge maximul in 12 ore. Nu dureaza mult- dupa 24 ore aceasta
crestere a sintezei de IL2 nu mai exista pt ca si-a facut treaba. Avem nevoie de functionare, cronologie si
cat timp? NU este permanent.

IL2 va fi sint de catre LT CD4+ , va fi secretata in sinapsa imunologica . Rolul ei este deosebit de imp in
cresterea , supravietuirea si diferentierea LT naive, dar, in plus, este extrem de imp in reglarea RI
datorita actiunii sale asupra T-urilor regulatorii.

Apare CD69 si in f scurt timp apare rec pt IL2, prezent pe LT activate, pe LT efectoare si pe T-regulatorii.
Este vorba despre receptorul alfa pt il-2 !!

Structuri

Il2 este o gp cu GM mica (14-17 kDa) , are 4 lanturi alfa helix. Este cel mai bun reprezentant dintre
citokine pt aceasta strucutra.

Rec pt IL2 este un heterodimer sau trimer. Are un lant alfa cunoscut si sub denumirea CD25 care are
functia de recunoastere. Afinitatea lui pt interleukina 2 este scazuta in principiu. Acest receptor daca il
gasim in forma lui solubila, el reprezinta un marker(in transplant de tesut) de activare a LT. In aceasta
situatie , cand vrem sa urmarim cum evolueaza pacientul dupa transplant, ne este util sa avem un
marker care sa ne spuna daca avem LT activare sau nu. CD25 in forma sa solubila ne poate furniza
informatii asupra nivelului de activare a LT.

Mai contine receptorul inca 2 lanturi :

-lantul beta= CD122 are rolul de a transduce semnalul activator pe calea JAK STAT

-lantul gamma = gamma c ( c vine de la faptul ca este un lant comun tuturor receptorilor tip 1)

Lantul gamma= CD132 are rolul de a creste afinitatea lantului alfa pt IL2 si pemrite transducerea
semnalului activator.

Deci cum e format rec pt IL2 ? 1 alfa, 1 beta si 1 gamma c = CD25 +CD122 + CD132+.

Functionare
In mom initial al sinapsei imunologice, o sa avem exprimat receptor pt IL2 , dar in forma sa cu afinitate
scazuta, datorita faptului ca nu prez decat un lant beta si un lant gamma c. Ca urmare a sintezei si
secretiei IL2, eliberarii ei in sinapsa imunologica, aceasta va avea un rol autocrin, va fi recunoscut de
receptorul sau si va determina cresterea sintezei lantului alfa a.i vom avea sintetizat complexul
receptorial cu afinitate crescuta pt IL2 ceea ce va permite transducerea semnalelor activatoare si
realizarea rolurilor mediate de IL2.

Care sunt functiile IL2?

1. Asigura supravietuirea LT activate deoarece sub actiunea IL2 sunt sintetizate proteine dinf amilia
BCL si anume BCL2 care au efect antiapoptotic
2. Induce proliferarea celulara deoarece stimuleaza sinteza unor cicline = proteine care determina
trecerea celulei din stadiul G0 in G1 . IN plus, stimuleaza degradarea unor proteine = proteinele
p27 care au rolul de inhibitori ai activarii ciclului celular, deci per total actiunile lor duc la
activarea ciclului celular a.i sa inducem proliferarea celulara
3. IL2 sunt implicate in diferentierea subseturilor functionale ale LT CD4+ prin stimularea sintezei si
secretiei de IL4 si IFN gamma

IL2 actioneaza si asupra LT regulatorii, carora le asigura supravietuirea si functionarea. In plus, s-a
observat in vitro ca IL2 actioneaza si asupra celulelor NK si LB in care induce proliferare si diferentiere
dar pana acum nu s-a putut concluziona asupra rolului in vivo- daca acest fenomen este produs si in
vivo.

Ceea ce trebuie sa stim este ca IL2 si receptorul sau exercita un rol crucial in realizarea unui RI , fapt
dovedit prin realizarea unor linii de celule knockout pt oricare din aceste molecule care determina
dezvoltarea unui raspuns fata de proteine self => boli autoimune.

Proliferarea celulara

Am spus ca aceasta expansiune clonala e mediata de semnale fie pe calea principala. Daca semnalele
merg pe calea princip vor determina cresterea sintezei fact pro mitotic care va determina la randul sau
activarea ciclinelor dependente de kinaze => trecerea din G2 in M in ceea ce prrriveste ciclul celular.

Din G2 in M si din G1 in S ...

Pe calea principala se anuleaza restrictiile din acest punct. Calea accesorie permite trecerea celuleid in
stadiul G1 in S. In plus, factorii de crestere autocrini = IL2 determina cresterea sintezei unor ciclene si
cresterea degradarii unor inhibitori ( proteina 27). Toate acestea vor duce la expansiunea clonala.

Cat, cum si in ce fel?

De ex experimental s-a dem ca in urma stimularii cu virsul Epstein Barr CD4 de la o frecventa de 1 la o
mie inainte de stimulare a ajuns la o frecventa de 1 la 100. Pe de alta part,e pt CD8 au crescut de la 1 la
100 000 sau 1 la un milion pana la 1/3 sau 1/10 celule  au crescut de 35 000 ori.

Cand infectia a fost eradicata, celulele acestea au murit pt ca cea mai mare parte a celulelor produse
sunt celule efectoare car printr-o durata de viata scurta spre deosebire de cel cu memorie care au o
durata de viata lunga, de ani, doar ca ele sunt mult mai putine. 1 din 10 000 supravietuiesc(sunt cu
memorie).

Diferentierea LT

Difefernte fenotipice si fct intre LT efectoare si cele cu memorie

Ar trebui sa privim dif in fct de moleculele elgate de capac de activare si supravietuire. Una din cele mai
imp molecule = CD28. Pe LT naive avem nevoie de CD28? Da, e cu rol accesor in transmiterea semnalelor
activatorii. Categoric va fi prez ep TL naive. Pe cel efectoare si cu memorie avem nevoie de el? Nu, deci
ele sunt CD28-.

Alta molecula implicata era CD45 . Sunt 6 izoforme care difera in ceeea ce priveste GM, intre 180 si 220
kDa si sunt exprimate diferit la diverse momente ale evolutiei LT in fct de ce nevoi are acea celula. Pe LT
naiv e prezenta izoforma CD45RA , care are o afinitate scazuta pt TCR si nu va transmite o cantitate f
mare (ele dadeau semnale activatorii pe calea scurta, scurtcicuitand multe etape intermediare) . Aceasta
izoforma dp naive nu sta f aproape de complex =>nu da pe calea scurta. IN urma activarii si trecerii la
forma efectoare sau cu memorie gasim o izoforma care sta mai aproape de complexul de recunoastere
pt ca la acel moment noi nu mai avem prea multe alte mol care sa transmite semnale accesorii dar avem
nevoie de aceasta cale extrem de rapida => celulele fectoare si cele cu memorie sunt caracterizata de
CD45 RO.

CD25= receptorul alfa pt IL2 . Pe LT naiv el nu prea este exprimat alfa ( ci avem beta si gamma c) . IN
schimb, pe cel efectoare sau cel cu memorie vom avea expresie crescuta a formei afla pt ca deja au
primit semnale care au determinat expresia acestui recpetor.

Pe LT cu memorie nu prea mai avme nevoie de IL2 => expresie low.

CD127 = receptorul pt IL7 care are rol deosesbit in supravietuirea celulelor cu memorie=> pe aceasta va
fi exprimata in cantitati crescute spre deosebire de cele efectorii ( astea tre sa moara repede, nu putem
sa tinem o pop celulara atat de mare daca nu mai are functie). In schimb, avme nevoie de rec pt IL7 pe
cele naive pt ca la un mom dat s-ar putea sa avem nevoie de ele.

Alt tip de mol exprimate pe suprafata LT sunt cele implicate in migrare . Unde se duc si unde se
localizeaza= trafic si homing. Cata vreme avem LT naive , acestea trebuiau sa se duca in epiteliul vascular
inalt , erau atrase de chemokina 7 si in plus trebuie sa stabileasca legaturi prin int L-selectinelor, ICAM si
VCAM-urilor(VASCULAR CELLULAR ADHESION MOLECULE). Chemokinele au rolul de atragere.

A TREIA cat de mol care face dif intre cele 3 fenotipuri = citokinele pe care le secreta fiecare.

Asa cum am spus inainte, una din consecintele activarii LT este diferntierea lor functionala prin faptul ca
vor secreta seturi diferite de citokine care vor actiona in mod diferit. Cum ? In fct de ce necesitati (date
de tipul de ag expus) sunt, avem nevoie de seturi diferite de citokine. Daca avem Ag extracelulare vom
avea nevoie de citokine inflamatorii. Daca avem Ag intracelulare vom avea nevoie de citokine care sa
stimuleze un RIC. Daca avem helminti, vom avea nevoie de citokine care sa fie capabila sa ii distruga =
LTH2.

In functie de setul de citokine pe care il secreta si modul de actiune , ele au fost impartite in 5 seturi
principale .

TH1 – vor media imunitatea celulara , in principal

TH2- functia lor fiziologica este apararea antihelmintica. Din pacate, acum, stimularea rasp de tip th2 e
mai mult asociata cu raspunsul la alergeni

TH17 – efect major proinflamator, favorizand rasp catre bacteriile extracelulare si fungi

Avem un subset functional al LT regulatorii care au rolul de a inhiba functionarea celulelor care ar putea
dezvolta un rasp impotriva proteinelor proprii.

In fine, s-a mai descoperit o subcategorie = LT foliculare . In realitate, s-a dem ca exista in plus si LT CD4+
care secreta un mix de citokine care apartin unor subseturi diferite sau nu secreta intregul set de
citokine caracteristice unor categorii. S-a mai dem si ca exista posibilitatea ca unele dintre LTh sa treaca
dintr-o categorie in ala in functie de stimulii existenti.

Exista aceste subseturi functionale invatate dar nu sunt batute in cuie, existand toate combinatiile
posibile.

Evenimentele initiale

Cand avem noi un LT CD4 poz naiv , el este cunoscut si sub denumirea de LTH precursor pt ca el in acest
moment nu poate sa ajute pe nimeni, datorita faptului ca are un set complet de gene pt citokine dar el
secreta doar IL2 la o rata scazuta.

In urma stimularii antigenice = in urma cooperarii cu APC, el va trece la o etapa ulterioara de dezvoltare ,
fiind denumit acum LTH0 , pt ca el activeaza transcriptia tuturor genelor citokinelor(nu s-a hotarat care
trebuie), dar toate sunt la o rata scazuta. Abia din acest moment, in functie de conditiile de mediu, el se
va angaja in diferentierea unui subset functional.
Pt a se diferentia in subseturile povestite la inceptu, avem nevoie de mai multe etape. Prima este
inductia , a doua este angajarea, a treia este amplificarea.

In angajare deja LT este hotarat ce set de citokine va sintetiza . In amplificare el isi va creste sinteza
acelui set de citokine si va inhiba sinteza celorlate seturi de citokine a.i el sa se diferentieze in mod clar.

Factori care infl inductia

Suntem in TH0. Ar putea infl inductia celulele care produc citokinele care vor polariza sinteza ulterioara
a cestor molecule. Cine pot fi acestea ? APC-urile si celulele sistemului imun inascut : NK, mastocite,
bazofile. Toate acestea sunt evident in legatura cu tipul de agenti care au declansat raspunsul. Daca
avem virusuri= ag intracleular, va fi mai degraba secretat IFN gamma crescut , asta inseamna ca LT CD4+
mai degraba va induce sinteza citokinelor care includ IFN gamma , adica se va diferentia in TH1.

Daca avem bacterii extracelulare, vom avea sinteza de IL12, care vom induce mai degraba diferentierea
in LTH17.

In fct de inflamatia existenta, vom avea urmatoarele posibilitati:

-sa avem in medu IFN gamma produs de macrofagele activate => inductia de LTH1. Acesta va secreta IFN
gamma, TNF alfa, IL2 + IL10 . Rezultatul va fi un RIC

-daca in medie avem TGF beta , aceasta va induce diferentierea de lt REGULATORII = lt 17, REZULTATUL
fiind amplificarea raspunsului inflamator.

-daca in medu avem IL6 produsa de celulele endoteliale si hepatocite => vom induce diferentierea LTH2 ,
care va produce semnatura caracterisitca= IL4 , IL5, IL 13.

Factori care infl angajarea

Ac etapa depinde de sinteza propriului set de citokine, adica TH1 va secreta IFN => va fi amplificata
aceasta sinteza , dar va fi si inhibata sinteza citokinelor proprii celorlalte seturi.

Daca e pe IL4 => va fi amplif sinteza ce contine IL4 (TH2) siv ro fi inhibate sintezele celorlate seturi de
citokineL

La fel e si pt IL17 si pt TGFbeta care inhiba restul ( aici e o poveste mai complicata)

Fact care infl amplificarea

Ne-am indus, ne-am angajat ( pastram un sg set de citokine pe care sa-l sint si le inh pe restu) si acum
aici dupa ce ne-am hotarat amplificama ceasta sinteza si se va realiza cu contributia factorilor
transcriptionali. Avem cat eun set distinct pt fiecare set de citokine si dupa aceasta este posibila
influenta prin factori epigenetici : spre ex metilarea histonelor care va exercita controlul dupa
transcriptie, sau prezenta de mRNA = secventa de RNA de 15 pana la 22 nucleotide care joaca rolul de
silencer : chiar daca am avut semnalul de cfrestere a ratei, inhibam apoi, pt ca permanent trebuie sa
avem mecanisme de control si adaptare.

TH1- STAT4

TH2- STAT6

Diferentierea TH1

O sa avem diferentiere de TH1 in prez unor citokine polarizante care sunt IFN gamma ce va actiona pe
calea facotirlor de transip STAT4 si a IL12, de asemenea pe STAT4. Ajungem la TH1 dat prezentei
celulelor inductoare dendritice, macrofagice, macrofagele si NK-urile care vor crea un mediu in care
avem un surplus de IFN gamma si IL12

Functiile TH1

Producem IFN gamma => cooperare retro in caredescarcam IFN gamma si vom creste sinteza efectoare,
adica a ROS, spre exemplu. Crestem capacitatile microbicide ale macrofagului. Pe LB va determina
amplificarea switchului subclaselor de igg si diminuarea switchului spre IL4, spre clasele producatoare de
IL4. In plus, creste sinteza de Ac => amplificarea opsonizarii si a fagocitarii.Asupra propriului set (CD4) va
amplifica diferentierea TH1 si va diminua celelalte subseturi . Pe APC va amplifica sinteza de proteine al
acest nivel, prot care contribuie la cresterea raspunsului = HLA DM , moleculele costimulatoare .

TH1 sint si IL10 , insa aceasta exercita efect inhibitor , de diminuare a inflamatiei, are rolul de pastrare a
echilibrului.

Diferentierea TH2

O sa avem productie de IL4, IL5, IL13. IL4 e det dat stim factoriilor de transcriptie GATA-3 si STAT6 care
repr etapa de amplify. S-a ajuns aici dat prezentei de helminti sau alergeni care au creat un mediu in
care a existat IL4.

Cine mai stimuleaza dif TH2? Insusi TH2. Setul caract de cytokine pt TH2 sunt IL4, IL5, IL13.

IL4 va stimula switchul de clasa intre IgE .Pe LT CD4 va determina angajarea si amplificarea rasp cu
sinteza citokinelor specific TH2 .

IL5 va action ape eozinofile => cresterea nr si diferentierea acestora si in plus activarea eozinofilelor si
trecerea spre forma lor matura

IL13 va actiona asupra macrofagelor . IN plus, va actiona la nivelul gastrointestinal va amplifica secretia
de mucus, va amplifica peristaltismul si la nivelul tractului respirator de asemenea va amplifica secretia
de mucus. Seamana cu manifestarile clinice din alergii. Astm – unele din man sale clinice sunt daotrite si
cresterii secretiei de mucus si at avem wheezing, obstructive, tuse, dispnee.

Daca avem alergii alimentare, creste peristaltismul si cresc sinteza si secretia de mucus.

Diferentierea TH17

O SA AVEM CITOKINELE polarizante care contrib la dif acestui subtip : IL1, IL6 si TGF beta , IL-21. De
retinut IL-6.

… dat de prez ag extracleular ede tipul bacterie, fungi si a celulelor afectate care au suferit apoptoza. IL6
va fi sint si secr de endoteliale si hepatocite.

Functiile : 17 va action ape neutorfile det amplify recrutarii acestor celule si cresterea nr lor datorita
cresterii factorulu stimulator al coloniilor granulocitar.e IN tes creste sint de substnate microbicice-
amplificam rasp nespecific si amplify rasp de barieira.

IL22 act pe tes epithelial pastrand integritatea

IL21 act la nivelul TH foliculare , amplificand generarea acestui subtip, act la nivelul TH17, amplificand
angajarea. Pe LB stimuleaza maturizarea acestora. Pe LTC CD8+ si NK stimuleaza RI celular.

Nu uitam ca aceste cytokine joaca un rol important in amplificarea RI innascut.

Proprietatile majore ale citokinelor

-producerea de raspuns antigeniz tranzitor prin semnalizare prin TCR si costimulare

-de obicei actioneaza atat asupra propriei celule cat si asupra celulelor invecinate, det parcurgerea
etapelor ulterioare ( activarea, expr rec cu afinitate inalta si activarea complete)
-sunt caracterizate actiunile citokinelor de pleiotropism : fiecare cytokine exercita mai multe efecte + de
redundanta: acelasi ef e exercitat de mai multe tiprui de cytokine( de aceea e f dificil de studiat rolul
unei anume cytokine)

In afara de ef pe celulele immune, exista si efecte pe alte tipuri de celule.