UNIVERSIDAD PEDAGOGICA Y TECNOLOGICA DE COLOMBIA

FACULTAD DE CIENCIAS - ESCUELA DE BIOLOGIA

LABORATORIO DE BIOLOGÍA GENERAL

GUIA Nº 5. EXTRACCION DE ADN POR METODOS SENCILLOS Y

CASEROS

YIRENY AVELLANEDA GONZÁLEZ

DOCENTE: ELSA HELENA MANJARRES HERNANDEZ

LABORATORIO DE BIOLOGÍA

QUÍMICA

2020
INTRODUCCIÓN

El ADN Acido desoxirribonucleico, es el polímero Biológico encargado de

transmitir la información Genética, está conformado por Nucleótidos, (un grupo
fosfato, una desoxirribosa y una base nitrogenada que puede ser Adenina, Citosina,
Timina o Guanina).
Su estructura fue dilucidada en 1953 por los científicos Watson y Crick, quienes
propusieron un modelo de escalera en hélice en donde las bases nitrogenadas
conforman los escalones y el azúcar y el fosfato se ubican hacia la parte exterior.
Todas las células procariotas y Eucariotas contienen material genético llamado
ADN, en las células Eucariotas también existe ADN extra nuclear en mitocondrias y
cloroplastos.
Siendo el ADN la molécula más importante de las células vivas su aislamiento
comprende básicamente 5 pasos: Ruptura de las células, eliminación de citoplasma
y membranas, eliminación de ARN, eliminación de proteínas y concentración de
ADN.

Para extraer el ADN primero es necesario romper las células para luego separar el
ADN y ARN del resto de los componentes celulares como proteínas y membranas
lipídicas. Un detergente es una solución capaz de disolver las membranas unidas a
las proteínas que están junto al ADN. La sal de mesa tiene un catión que se une a
la molécula de ADN y hace que cambie sus propiedades químicas, permitiendo que
el ADN precipite en presencia de alcohol. El alcohol además disuelve los azúcares
y proteínas. El ablandador de carne hace que las proteínas remanentes se
disgreguen permitiendo que el ADN adquiera más flexibilidad.

La extracción del ADN, se basa principalmente en la mezcla de métodos, en donde

se separa del resto de la célula, se precipita y se purifica.

OBJETIVOS

 Probar métodos sencillos de extracción de ADN de muestras vegetales.

 Detectar los diferentes procesos Mecánicos o Químicos mediante los que se
aísla al ADN del contenido célula.
 MATERIALES

BIOLÓGICOS REACTIVOS VIDRIERIA Y OTROS EQUIPOS

 Alcohol antiséptico muy  Palillos de madera o de
Frutos de:
frio. pincho.
 Banano
 Agua fría  Gaza o una tela en la que
 Fresa
 Cloruro de sodio NaCl se pueda colar, cuchillas y
 Papaya
(Sal de Cocina) cuchillos,
 Cebolla de bulbo  cámara
 Detergente liquido lava-  Recipientes para medir
 Arvejas fotográfica
loza o shampú anti como vasos desechables,
 durazno o plátano  licuadora
grasa. botellas plásticas, jeringas
o cualquier fruta que  Estufa.
 Ablanda carnes, o jugo etc.
sea blanda.
de papaya o piña  Nevera o hielo
 Varilla de vidrio o  Cucharitas desechables
 (Use uno
carnes , jugo de piña o  Un plato y un tenedor
solamente)
solucion limpidora para desechables
lentes

PREGUNTA A RESOLVER: ¿Cuáles son las propiedades físicas y químicas del

ADN y ARN que les permiten ser separados y aislados del contenido de las células?

R. ADN y ARN son los ácidos nucleicos que conforman la base de nuestro
genoma. Estas dos biomoléculas determinan lo que somos como especie y en
buena medida, lo que somos como individuos.

El ácido desoxirribonucleico (ADN) es un ácido nucleico que contiene toda la

información genética hereditaria que sirve de “manual de instrucción” para
desarrollarnos, vivir y reproducirnos. El ADN se encuentra en el núcleo de las
células, aunque una pequeña parte también se localiza en las mitocondrias, de ahí
los términos ADN mitocondrial y ADN nuclear. El ADN como ácido nucleico está
compuesto por estructuras más simples, las bases nitrogenadas. Estas son 4:
 Adenina
 Guanina
 Citosina
 Timina
El orden que adoptan estas bases determinará nuestro código genético.
El ARN o ácido ribonucleico es el otro tipo de ácido nucleico que posibilita la
síntesis de proteínas. Si bien el ADN contiene la información genética, el ARN es el
que permite que esta sea comprendida por las células. Está compuesto por una
cadena simple, al contrario del ADN, que tiene una doble cadena.

Las funciones del ARN pueden comprenderse mejor a través de la descripción de

los diferentes tipos que existen. Entre los más conocidos están:

 ARNm o ARN mensajero, que transmite la información codificante del ADN

sirviendo de pauta a la síntesis de proteínas.
 ARNt o ARN de transferencia, que trasporta aminoácidos para la síntesis
de proteínas.
 ARNr o ARN ribosómico que, como su nombre indica, se localiza en los
ribosomas y ayuda a leer los ARNm y catalizan la síntesis de proteínas.

PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS

Densidad: existe una relación lineal entre el contenido en G+C y la densidad del
ADN determinada en un gradiente de densidad. A mayor contenido en G+C mayor
densidad posee el ADN.
Meselson y col. (1957) desarrollaron una técnica de centrifugación en gradiente
de densidad. Cuando se centrifuga a alta velocidad una solución densa (saturada)
de un soluto de bajo peso molecular, se produce un equilibrio entre dos fuerzas
opuestas, la de difusión del soluto y la fuerza de sedimentación, como consecuencia
se produce un gradiente de densidad que aumenta en la dirección de la fuerza
centrífuga.
Si añadimos al centrifugar una molécula de ADN, está migrará hacia el fondo del
tubo hasta llegar al punto en que la densidad del soluto de bajo peso.
Posteriormente, es posible aislar las moléculas de ADN de diferente densidad.
DESNATURALIZACIÓN: TEMPERATURA DE FUSIÓN
Desnaturalización: la proporción A+T/C+G está relacionada en primer lugar con la
estabilidad de la molécula de ADN de doble hélice. Cuanto mayor es el contenido
en G+C mayor cantidad de calor que hay que suministrar a un ADN de doble hélice
para desnaturalizarlo. La temperatura de fusión necesaria para desnaturalizar
la mitad del ADN de una mezcla.
Está directamente relacionada con el contenido en G+C, a mayor contenido en G+C
mayor temperatura de fusión.

METODOLOGIA.

El material del que se va a obtener el ADN y el ARN, puede ser un vegetal o fruta
(solo uno) de cualquiera de las siguientes: Un durazno, unas 20 uvas, 10 fresas,
una naranja, una manzana, o una cebolla cabezona (use una sola clase de vegetal
o fruta).

1. Tome el material elegido, que este sano sin hongos manchas o mal olor
producido por descomposición si tiene cascara dura retírela con ayuda de un
cuchillo (por ejemplo, naranja, pera)

2. Haga trozos del material y póngalos en la licuadora, cubra con agua, hasta
que tape el material agregue dos cucharadas de sal y licue a alta velocidad
por 3 minutos.

3. Vierta el licuado en un frasco de boca ancha y agregue otras dos cucharadas

de sal, agite con un palo de pincho por 10 minutos constantemente

4. Agregue, 2 cucharadas de detergente liquido (o champú anti graso) a la

mezcla agite con el palo de pincho constantemente, deje en reposo por 10
minutos.

5. Vierta la mezcla en un recipiente en el que se pueda calentar y caliéntala por

diez minutos sin dejar hervir.

6. Inmediatamente ponga la mezcla en hielo (o llévela al congelador) por 5

minutos, si no puede hacer este proceso déjela reposar en un sitio frio y
fresco por 10 minutos.
 7. Luego pase la mezcla por una gasa limpia (filtre) o una tela en la que se
pueda colar

8. Lo que queda en la tela (grueso) deséchelo, lo que recoge se llama filtrado,

y se usa para continuar el proceso.

9. Agregue una solución de ablandador de carne (o jugo de papaya o de piña

- más o menos ¼ del volumen total de la mezcla). Ejemplo: usted tiene la
mezcla en un vaso desechable de los que se sirve gaseosa, este mide más
o menos 300 ml) ¼ de vaso de jugo o 2 cucharaditas de ablanda carnes, todo
esto se tiene que realizar en frío, deje en reposo por 10 minutos.

10. Agregue alcohol frío (¼ de un vaso desechable) suavemente por las paredes
cuidando de no mezclar el filtrado con el alcohol.

En el límite del filtrado y el alcohol comenzará a aparecer el ADN.

Ascendiendo como burbujas blancas hacia la superficie del recipiente, deje
en reposo, al cabo de 15 minutos usted observara que sobre la superficie se
forma una malla de material. Si tiene una varilla de vidrio se puede tomar con
cuidado y se podrá extraer de la solución.
Coloque el ADN extraído sobre una servilleta y déjelo secar uno o dos días,
después tendrá una fina malla de ADN.

PROCEDIMIENTO

1. Presente una página de evidencias fotográficas del proceso.

R. https://youtu.be/vX71b3U11Hc

2. Construya un diagrama de flujo para el proceso realizado: indique tiempos.

 Proceso de obtención del ADN
y el ARN de una papaya.

Tomar la papaya, pelarla y picarla en cuadritos.

Ponerla en la licuadora y cubrir con agua, hasta que tape la papaya.

Agregar dos cucharadas de sal y licuar a alta velocidad por 3 minutos.

Verter el licuado en un recipiente y agregar dos cucharadas de sal.

Agitar constantemente durante 10 minutos.

Agregar 2 cucharadas de detergente líquido a la

mezcla y agitar constantemente

Dejar en reposo por 10 minutos.

Verter la mezcla en una olla, calentarla por 10 minutos sin dejarla hervir.

Dejar reposar la mezcla en el congelador de 5 a 10 minutos.

Filtrar / colar la mezcla, ya sea con una gaza o con tela.

Obtener el filtrado (100 ml) y desechar el residuo.

Agregar ¼ de solución de ablandador de carne (25 ml)

Dejar en reposo por 10 minutos.

Agregar ¼ de alcohol frio (25 ml) por las paredes del recipiente.

Dejar en reposo por 15 minutos.

 Extraer con cuidado el ADN que se presentara como unas
burbujas blancas / una sustancia gelatinosa transparente.

Colocar el ADN sobre una servilleta

Fin.

3. Complete la siguiente tabla de datos para cada uno de los procesos. Incluya
procedimientos físicos o reactivos utilizados en cada caso.

OBJETIVO METODO

Mediante el proceso de licuado, ya que las partículas son separadas y

Ruptura celular
mezcladas con otros ingredientes. (proceso similar a la centrifugación).

Mediante el proceso de filtración: en este momento las proteínas son

Eliminación de
eliminadas, ya que se separa completamente los residuos sólidos de las
proteínas
macropartículas (dentro del líquido).

Licuefacción: debido a que la fruta, (papaya) que pasa de estar de un

estado sólido a uno liquido mezclándose con la sal y el agua,
Rompimiento de presentando así un proceso de rompimiento celular.
pared celular
Proceso físico (cambio de estado de solido a liquido) - químico
(integración de diferentes sustancias, sal, agua, fructuosa)

Desintegración de Mediante la adición de detergente liquido anti grasa, ya que se rompen

membranas los lípidos (que son grasa), y ya ha pasado un proceso de rompimiento
lipídicas celular, también ocurre una separación de ADN.

Al adicionar la solución de ablanda carnes, se incentivara a que el ADN

por diferencia de densidades se precipite sobre la solución que estamos
Purificación del
observando, y al añadir alcohol, una tercera sustancia, con una tercera
ADN
densidad le abrirá paso al ADN para precipitarse sobre la solución y bajo
el alcohol.
 4. En la siguiente tabla usted encuentra un listado de reactivos utilizados en los
procesos de extracción de ADN y ARN determine qué tipo de compuesto es, la
formula (si la tiene), y la acción física o química que le permite actuar en el
proceso a nivel celular o tisular.

Tipo-de
Sustancia usada Forma en que actúa en el proceso.
compuesto

Mezcla de
Detergente Esta sustancia elimina la grasa, pero también
sustancias
/Shampoo destruye los lípidos naturales.
orgánicas

NaCl Compuesto iónico Disminuye la solubilidad de las proteínas

Hidroliza proteínas vegetales, y es útil para

Ablanda carnes enzima evitar la formación de los sedimentos
proteicos.

Compuesto El alcohol presenta la menor densidad de

orgánico todas las sustancias presentes en nuestro
Alcohol frio proceso, es así como permite que el ADN se
Derivado de los precipite sobre el filtrado y se haga visible a
hidrocarburos través de sí mismo.

El agua actúa sobre la sal estableciendo

Solución salina mezcla homogénea, puentes de hidrogeno con el Cl y el Na, y asi
(agua sal) compuesto iónico hidratarse dentro de la solución.

Compuesto Mantiene fría la solución, permitiendo la

Hielo
inorgánico precipitación del ADN.

5. ¿Porque el ADN fluye hacia la capa de alcoholes?

R. Cuando el ADN entra en contacto con etanol (alcohol), se rompe la capa hidrante,
se exponen los grupos fosfatos y se favorece la unión con cationes como el Na+.
Esto hace que se reduzcan las fuerzas repulsivas entre las cadenas de nucleótidos
y precipite el ADN.
6. ¿Qué pasó con el ARN celular en cada proceso, de la misma forma que
pasa con el ADN Extra nuclear, mitocondrial y cloroplasmico?

RESOLUCION DE LA PREGUNTA DE INVESTIGACION E INTERPRETACION

DE RESULTADOS.

CONSULTA

La siguiente imagen muestra, los procesos que se conocen como dogma central de
la Biología, que es un principio universal que deben cumplir todas las células de los
seres vivos.
 1. De acuerdo a esta imagen. Cuál es el papel del ADN, Cual el del ARN y cual
el de los aminoácidos.

R. En la transcripción, la secuencia de ADN de un gen se copia para obtener una

molécula de ARN. Este proceso es llamado transcripción porque implica reescribir,
o transcribir, la secuencia de ADN en un "alfabeto" de ARN similar. En eucariontes,
la molécula de ARN debe someterse a un procesamiento para convertirse en un
ARN mensajero (ARNm) maduro.

En la traducción, la secuencia de ARNm se decodifica para especificar la

secuencia de aminoácidos de un polipéptido. El nombre traducción refleja que la
secuencia de nucleótidos del ARNm se debe traducir al "idioma", completamente
diferente, de los aminoácidos.

Por lo tanto, durante la expresión de un gen codificante de proteína, la información

fluye de ADN → ARN → proteína. Este flujo de información se conoce como el
dogma central de la biología molecular. Los genes no codificantes (genes que
producen ARN funcionales) también se transcriben para producir ARN, pero este
ARN no se traduce en un polipéptido. Para cualquier tipo de gen, el proceso de
pasar de ADN a producto funcional se conoce como expresión génica.
TRANSCRIPCIÓN

En la transcripción, una cadena del ADN que compone al gen, llamada

cadena no codificante, funciona como molde para que una enzima llamada
ARN polimerasa sintetice una cadena de ARN correspondiente
(complementaria). Esta cadena de ARN se llama transcrito primario.

El transcrito primario tiene la misma secuencia de información que la cadena

de ADN que no se transcribió, generalmente llamada cadena codificante. Sin
embargo, el transcrito primario y la cadena codificante no son idénticos
debido a ciertas diferencias bioquímicas entre el ADN y el ARN. Una
diferencia importante es que las moléculas de ARN no contienen la base
timina (T). En lugar de timina, las moléculas de ARN utilizan una base similar
llamada uracilo (U). El uracilo, al igual que la timina, forma pareja con la
adenina.
 2. Como afecta a las formas de vida los cambios en la secuencia de bases del
ADN.

MUTACIONES

A veces las células cometen errores al copiar su información genética, lo que

provoca mutaciones. Estas pueden ser irrelevantes, o pueden afectar la forma como
se hacen las proteínas y se expresan los genes.

Hay tres tipos de mutaciones por sustitución:

 Las mutaciones silenciosas no afectan la secuencia de aminoácidos

durante la traducción.
 Las mutaciones sin sentido dan como resultado un codón de terminación
donde debería haber un aminoáciddo, lo que causa que la traducción termine
prematuramente.
 Las mutaciones de sentido erróneo cambian el aminoácido que especifica un
codón.
¿QUÉ SON LAS ALTERACIONES GENÉTICAS?

Cualquier cambio en la secuencia del ADN, puede alterar el código genético y, por
tanto, puede que altere la síntesis de la proteína para la que codifica.

Por ejemplo, si nos fijamos en la tabla del código genético, el codón CAA se traduce
en el aminoácido glutamina, mientras que AAA se traduce en lisina, por lo que el
cambio de un nucleótido por otro (C por A), cambia la composición de la proteína y
puede que su correcto funcionamiento. Pero, si el cambio es a UAA, este codón en
lugar de dar lugar a glutamina es un codón de parada por lo que se detiene la
síntesis de la proteína.

Por tanto, la implicación clínica de una alteración genética dependerá de dónde se

produce, es decir, si tiene lugar en la región codificante (exoma) o no y también si
la alteración causa un cambio drástico en la síntesis de la proteína y por lo tanto en
la función que esta lleva a cabo en el organismo.

¿QUÉ TIPOS DE CAMBIOS PUEDE HABER?

El ejemplo que hemos visto anteriormente se trata de una sustitución, ya que se

produce el cambio de un nucleótido por otro, pero hay más tipos de alteraciones
genéticas, de manera general:

 Sustitución: cambio de una base por otra.

 Deleción: eliminación de una serie de bases.
 Duplicación: duplicación de un fragmento de bases.
 Inversión: inversión del orden de una secuencia de bases

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