Creatinina
directa
SIGNIFICADO CLÍNICO
A creatinina, composto muito difundível, elimina-se do orga-
nismo quase exclusivamente por filtração renal.
Sua determinação em soro, assim como o clearance de
creatinina endógena constitui parâmetros importantes para
o diagnóstico de variadas afeções renais.
No entanto as dificuldades práticas inerentes à determinação
do clearance (coleta de urina em crianças, etc.) a determi-
nação de creatinina sérica é mais utilizada como índice de
funcionamento renal.
FUNDAMENTOS DO MÉTODO
A creatinina e outros compostos da amostra reagem com
ácido pícrico em meio alcalino produzindo um complexo
cor vermelho que se quantifica pela leitura fotocolorimétrica.
A determinação de creatinina pode realizar-se por uma
técnica de ponto final, ou por uma técnica cinética elimi-
nando-se em ambas a cor que pertence aos cromogênios
não-creatinina.
Na primeira técnica, a adição de ácido ao meio, destrói
o picrato de creatinina, mas não a cor conformada pelos
demais compostos. Portanto, a diferença entre a leitura
fotocolorimétrica antes e depois da adição de ácido, permite
quantificar a creatinina em forma específica.
Na técnica cinética, os cromogênios não-creatinina, reagem
dentro dos primeiros 30 segundos após o início da reação,
sendo cinética de primeira ordem para a creatinina. Assim,
entre os 30 segundos e os 5 minutos posteriores ao início da
reação, o incremento da coloração deve-se exclusivamente
à creatinina.
REAGENTES FORNECIDOS
Á. Reagente A: solução de ácido pícrico 41,4 mmol/l.
B. Reagente B: solução 0,4% de polioxietilén lauril éter (PLE)
em tampão alcalino, pH 12,4.
C. Reagente C: ácido acético 20%.
S. Padrão: solução de creatinina 20 mg/l.
INSTRUÇÕES PARA USO
Padrão: pronto para uso.
Reagente A: pronto para uso.
Reagente B: pronto para uso. É possível que a baixa tem-
peratura provoque turbidez ou algum sedimento. Solubilizar
totalmente o reagente deixando uns minutos em banho-maria
a 37oC antes de pipetar.
Reagente C: pronto para uso.
Reagente de trabalho: misturar em frasco plástico partes
iguais de Reagente A e Reagente B. Rotular e datar.
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Métodos para a determinação de creatinina em soro
ou urina
PRECAUÇÕES
Os reagentes são para uso diagnóstico "in vitro".
Reagentes B y C: corrosivos. H315+H320: Provoca irritação
cutânea e ocular. H314: Provoca queimaduras na pele e lesões
oculares graves. P262: Não pode entrar em contacto com os
olhos, a pele ou a roupa. P305 + P351 + P338: SE ENTRAR
EM CONTACTO COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente
com água durante vários minutos. Se usar lentes de contacto,
retire-as, se tal lhe for possível. Continuar a enxaguar. P302 +
P352: SE ENTRAR EM CONTACTO COM A PELE: lavar com
sabonete e água abundantes. P280: Usar luvas de protecção/
vestuário de protecção/protecção ocular/protecção facial.
Utilizar os reagentes observando as precauções habituais
de trabalho no laboratório de análises clínicas.
Todos os reagentes e as amostras devem ser descartadas
conforme à regulação local vigente.
ESTABILIDADE E INSTRUÇÕES DE
ARMAZENAMENTO
Reagentes Fornecidos: são estáveis sob temperatura
ambiente até a data de vencimento indicada na emba-
lagem.
Reagente de trabalho: sob temperatura ambiente e protegi-
do da luz é estável por 15 dias a partir da data de elaboração.
AMOSTRA
Soro ou urina
a) Coleta: obter o soro do modo usual.
Caso de urina, obter urina de 2 horas ou de 24 horas,
utilizando um frasco perfeitamente limpo e mantido sob
refrigeração (2-10oC) durante a coleta. Medir a diurese,
tomar uma alíquota e efetuar uma diluição 1:50 da mesma.
Caso a diurese seja de 2 horas, multiplicar o volume medido
por 12 para calcular a quantidade de creatinina eliminada
durante 24 horas.
b) Aditivos: não são necessários.
c) Substâncias interferentes conhecidas: os soros com
concentrações de bilirrubina maiores que 50 mg/l produzem
valores errôneos.
Não se observam interferências por hemólise ligeira ou
moderada, hiperlipemia, disproteinemia, cromogênios não-
creatinina (tais como: glicose, ácido ascórbico, cetoácidos,
glutation ou ergotionina).
Referência bibliográfica de Young para efeitos de drogas
neste método.
d) Estabilidade e instruções de armazenamento: a cre-
atinina no soro é estável por até 24 horas e na urina até 4
dias, mantida sob refrigeração e sem conservantes.
• TÉCNICA DE PONTO FINAL onde:
MATERIAL NECESSÁRIO (não fornecido) V = volume da diurese expresso em litros/24 hs
- Espectrofotômetro ou fotocolorímetro A fórmula surge de:
- Micropipetas e pipetas
D1 - D2
- Proveta
Creatinina na urina (g/24 hs) = x 0,020 g/l x 50 x V
- Tubos ou cubetas espectrofotométricas
P
- Banho-maria a 37oC
- Relógio ou timer onde:
0,020 g/l = concentração do Padrão
CONDIÇÕES DE REAÇÃO 50 = fator de diluição
- Comprimento de onda: 510 nm em espectrofotômetro ou
em fotocolorímetro de filtro verde (500-520 nm) 3) Depuração de Creatinina Endógena (D.C.E.):
- Temperatura de reação: 37oC Creatinina na urina (g/24 hs)
- Volume de amostra: 0,1 ml D.C.E. ml/min = x 694 ml/min
- Volume de Reagente: 1 ml Creatinina no soro (mg/l)
- Volume final de reação: 1,15 ml
onde:
- Tempo de reação: 15 minutos
g/24 hs 1.000 mg x 1.000 ml 1.000.000 ml
694 ml/min = = =
PROCEDIMENTO mg/l 1 mg x 1.440 min 1.440 min
Em três tubos marcados B (Branco) P (Padrão) e D
(Desconhecido), colocar: LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
B P D É importante verificar que a mistura depois de adicionar
cada reagente seja correta para evitar erros nos resultados.
Água destilada 0,1 ml - -
Vide Substâncias interferentes conhecidas em Amostra.
Padrão - 0,1 ml - O uso de plasma proporciona resultados falsamente dimi-
Amostra - - 0,1 ml nuídos em 8 a 15%.

Reagente de Trabalho 1 ml 1 ml 1 ml DESEMPENHO

Misturar. Incubar 10 minutos em banho-maria a 37oC. Den- a) Reprodutibilidade: processando-se simultaneamente
tro dos 15 minutos de retirado do banho, ler o Padrão (P) duplicatas das mesmas amostras, obtiveram-se os seguin-
e o Desconhecido (D1) em espectrofotômetro a 510 nm ou tes dados:
em fotocolorímetro com filtro verde (500-520 nm) levando Nível D.P. C.V.
a 0,000 D.O. com o Branco. Logo após adicionar: 7,3 mg/l ± 0,18 mg/l 2,4 %
15 mg/l ± 0,26 mg/l 1,7 %
Reagente C 50 ul - 50 ul
b) Linearidade: a reação é linear até 100 mg/l.
Misturar. Deixar os tubos 5 minutos a temperatura ambiente
e voltar a ler o Desconhecido (D2), levando a 0,000 D.O.
com o Branco. • TÉCNICA CINÉTICA
Os valores de referência e o Método de Controle de MATERIAL NECESSÁRIO (não fornecido)
Qualidade são comuns para ambas as técnicas. Vide o - Espectrofotômetro ou fotocolorímetro
ponto correspondente em Técnica Cinética. - Micropipetas e pipetas
- Proveta
- Tubos ou cubetas espectrofotométricas
ESTABILIDADE DA MISTURA DE REAÇÃO FINAL - Banho-maria a 25oC
A cor da reação é estável durante 6 horas pelo que a leitura - Relógio ou timer
deve realizar-se neste intervalo.
CONDIÇÕES DE REAÇÃO
CÁLCULOS DOS RESULTADOS - Comprimento de onda: 500 nm em espectrofotômetro ou
1) Creatinina no soro (mg/l) = (D1 - D2) x f 490-510 nm em fotocolorímetro de filtro verde.
- Temperatura de reação: 25oC.
20 mg/l
O controle de temperatura não é crítico, podendo oscilar
f=
P entre 22 e 30oC. Vide LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO.

- Volume de amostra: 0,2 ml
D1 - D2 - Volume de Reagente de Trabalho: 1 ml
2) Creatinina na urina (g/24 hs) = x V - Volume final de reação: 1,2 ml
P - Tempo de reação: 5 minutos

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 CONVERSÃO DE UNIDADES AO SISTEMA SI
PROCEDIMENTO Creatinina (mg/l) x 8,84 = Creatinina (umol/l)
Trazer o Reagente de trabalho até a temperatura de
reação (25oC). Antes de adicionar a amostra, levar o MÉTODO DE CONTROLE DE QUALIDADE
aparelho a zero com água destilada. Processar 2 níveis de um material de controle de qualidade
Em dois tubos ou cubetas de espectrofotômetro marca- (Standatrol S-E 2 niveles) com concentrações conhecidas
dos P (Padrão) e D (Desconhecido), colocar: de creatinina, com cada determinação.
P D
LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
Reagente de Trabalho 1 ml 1 ml Vide Substâncias interferentes conhecidas em AMOSTRA.
Padrão 0,2 ml - Outras causas de resultados errôneos são:
- Temperatura: embora a temperatura de reação admita uma
Amostra - 0,2 ml variação entre 22 e 30oC, uma diferença entre a tempera-
Misturar imediatamente, disparando ao mesmo tempo o tura de incubação do padrão e a das amostras diminui a
cronômetro e prosseguir a incubação. Aos 30 segundos precisão do método.
exatos medir a absorbância (P1 e D1), e continuar a - Tempo de leitura: ligeiras variações na medição do tempo
incubação. Medir novamente a absorbância (P2 e D2), afetam marcantemente a exatidão do método. As leituras
aos 5 minutos (4 minutos e 30 segundos após a primeira deverão ser realizadas exatamente em 30 segundos após
leitura). haver misturado a amostra com o reagente e aos 5 minutos
(4 minutos e 30 segundos após a primeira leitura).
- O uso de plasma proporciona resultados falsamente dimi-
CÁLCULOS DOS RESULTADOS nuídos em 8 a 15%.
1) Creatinina no soro (mg/l) = (D2 - D1) x f
20 mg/l DESEMPENHO
f= a) Reprodutibilidade: processando-se simultaneamente
P2 - P1 duplicatas das mesmas amostras, obtiveram-se os seguin-
D2 - D1 tes dados:
2) Creatinina na urina (g/24 hs) = x V Nível D.P. C.V.
P2 - P1 8,6 mg/l ± 0,31 mg/l 3,6 %
20,2 mg/l ± 0,61 mg/l 3,0 %
onde:
V = volume da diurese expresso em litros/24 hs b) Recuperação: adicionando quantidades conhecidas de
A fórmula surge de: creatinina a soros distintos, obteve-se uma recuperação
entre 96 e 101% para níveis de creatinina de até 60 mg/l.
D2 - D1
c) Linearidade: a reação é linear até 60 mg/l de creatinina.
Creatinina na urina (g/24 hs) = x 0,020 g/l x 50 x V
P2 - P1 Para valores superiores, diluir a amostra 1:2 ou 1:4 com

água destilada e repetir a determinação. Corrigir os cálculos
onde: multiplicando pelo fator de diluição utilizado.
0,020 g/l = concentração do Padrão
50 = fator de diluição APRESENTAÇÃO
3) Depuração de Creatinina Endógena (D.C.E.): - 240 ml (Cód. 1260551).
Creatinina na urina (g/24 hs) REFERÊNCIA
D.C.E. ml/min = x 694 ml/min
- Butler, A.R. - J. Chem. Soc. (Perkin Trans. II), 853 (1975).
Creatinina no soro (mg/l)
- Henry, R.J.; Cannon, D.C. & Winkelman, J.K. - Clinical
onde: Chemistry - Principles and Technics - Harper & Row, New
g/24 hs 1.000 mg x 1.000 ml 1.000.000 ml York - 2ª Ed., pág. 541/53 (1974).
- Martinek, R.G. - J. Amer. Med. Technol. 32/6:700 (1970).
694 ml/min = = =
mg/l 1 mg x 1.440 min 1.440 min - Owen, J.A.; Iggo, B.; Scandrett, F.J. & Stewart, C.P. - Bio-

chem. J. 58:426 (1954).
- Popper, H.; Mandel, E. & Meyer, H. - Biochem. Z. 291:351
VALORES DE REFERÊNCIA
(1937).
Soro: 8 - 14 mg/l
- Lorenzo, L.; Demaría, I.; Setta, F.; Taborda, M. - Clin. Chem.
Urina: 0,9 - 1,5 g/24hs
36/6:935, 1992.
D.C.E.: 80 - 140 ml/min (média 125 ml/min) para adultos
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
até 60 anos.
AACC Press, 4th ed., 2001.
Recomenda-se que cada laboratório estabeleça seus pró-
prios valores de referência.

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Símbolos
Os seguintes símbolos são utilizados nos kits de reagentes para diagnóstico da Wiener lab.

C
Este produto preenche os requisitos da Diretiva
Europeia 98/79 CE para dispositivos médicos de M Elaborado por:
diagnóstico "in vitro"

P Representante autorizado na Comunidade

Europeia
Nocivo

V Uso médico-diagnóstico "in vitro"

Corrosivo / Caústico

X Conteúdo suficiente para <n> testes

Irritante

H Data de validade

i Consultar as instruções de uso

l Limite de temperatura (conservar a)

 Não congelar
Calibr. Calibrador

b Controle

F Risco biológico

Volume após a reconstituição

b Controle Positivo

Cont. Conteúdo c Controle Negativo

g Número de lote h Número de catálogo

Wiener lab.
2000 Rosario - Argentina
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