—_——____Tovicoa Esneciais em Producto Vegatal Ii! °°" CaplTuLo 13 METODOLOGIAS DE DETERMINACAO DAS PRINCIPAIS VARIAVEIS MORFOLOGICAS DO SISTEMA RADICULAR DO CAFEEIRO Marcelo Antonio Tomaz José Francisco Teixeira do Amaral Wagner Nunes Rodrigues Lima Deleon Martins Amarilson de Oliveira Candido 4 INTRODUGAO grande dificuldade no estudo do sistema radicular do cafeeiro faz com que poucas informagoes consistentes estejam disponiveis na literatura, ocorrendo, em muitos casos, contradigdes entre pesquisadores sobre as caracteristicas das ralzes do cafeeiro, tanto em aspectos de sua estrutura quanto em aspectos fisiolégicos Fundamental contribuicdo para entendimento da morfologia do sistema radicular de cafeeiros @ atribulda a Nutman (1933a, 1933b e 1934), Em seus estudos, a descrigao do sistema radicular indica a presenca de raizes permanentes, axials, verticais, superficiais, absorventes @ suporte das absorventes (NUTMAN, 1933a) Nutman (1933b) também propde que uma raiz tipica de uma planta de café é formada por {.uma raiz pivotante, curta e grossa; 2, ralzes axials, de crescimento vertical descendente, originadas de ramificagoes da riz plvotante; 4. raizes laterals, de crescimento paralelo & superficie do solo. A distribulgéo do sistema radicular do cafeeiro varia de acordo com varios fatores, {ais como: a espécie, a cultivar, a enxertia, a idade da planta, a carga de frutos, a 363densidade de plantio, a fertlidade do solo, a presen? de camadas compactadas, 3 localizago da umidade, entre outros. Nulman (1934) aponta a existéncia de grande dificuldade na definigso de um modelo ideal pare representar o sistema radicular do cafeeiro, havendo muitas divergéncias na literatura em relagdo a profundidade em que as raizes superficiais & absorventes se concentram No perfil do solo. Veriabllidade nas caracteristicas morfolégicas das raizes de plantas de café pode ‘ocorrer devido a influéncia de fatores genotipicos © ambientais, tomando necesséria ma atengao especial no estudo das variaveis do sistema radicular, i que 6 comum ocorrer diferengas no desenvolvimento de plantas de café, com nitida diferenca entre to do sistema radicular e da parte aérea quando plantas $30 submetidas smo entre materiais genéticos © cresciment a diferentes condigSes ambientais (Figura 1), ou me: distintos.‘As maiores dificuldades no estugg campo esta relacionadas a dip, procedimento que requer tempo © andlise ¢. Culdade de ob © Sistema radicular do cafeeiro em ENGAO de to sce das a8 raizes, sendo um (eae 22). * Por exemplo, em vasos plasticos jem do sistema radicular de cafeeiros cultivados em campo, Amaral 4 Um trado retirando amostras de ralzes nos quatro pontos cardiais, nawy Metodologias de determinacao das principais vaniaveis morfologicas COMO a profundidade de amostragem devem atender aos objelivos do pesquisago, Apos a amostragem, o sistema radicular presente no volume de solo coletadg deve Ser lavado individuaimente sobre peneira, como citado acima Figura 3 — Amosiragem de raizes (A) @ amostra de raizes preparada para processamento digital Fonte: Amaral (2002) Quando 0 cafeeiro € cultivado em ambiente restrito, como em vasos, o tempo gasto Para tornar o sistema radicular apto para ser avaliado normalmente é maior, quando comparado por cultivos em campo, devido ao fato de todo o sistema radicular poder ser amostrado. Entretanto, a variabilidade entre as varidveis é Significativamente Menor. Assim, as raizes devem ser lavadas em Agua corrente com auxilio de uma Peneira, sendo recomendada a utllizagdo de uma malha de 2 mm (Figura 4A e 48), até que se consiga eliminar todo 0 solo (Figura 4C e 4D), evitando-se ao maximo a perda de raizes.2.1 VOLUME DE RAIZES 0 volume de raizes € obtido através do método de desiocamento de agua. Para tal utiiza-se uma proveta, onde acrescenta-se um volume de Agua conhecido e em seguida merguiha-se as raizes na proveta com agua, sendo o volume radicular correspondente 20 volume de agua desiocado na proveta, expresso em cm®, Este método € amplamente utilizado, a0 longo dos anos (GUISCAFRE-ARRILAGA: GOMEZ, 1938; NAKASONO et al. 1980; MARTINS et al., 2011), pois trata-se de uma metodologia répida além de poder utilizar materiais de facil obtengao (Figura 5). Nao se encontra relatos na literatura de outras metodologias de volume de raizMotodologin du dutuuninactio duo pnincipitn vanes morfolaatas Figura 5 ~ Dotorminagao do volumo do ralzos através do método do doslocamanta de Agua, imerssn das raizos (A) © obsorvagaio do volum do agua deslocado na proveta (8) 2.2 COMPRIMENTO DE RAIZES A avaliagio do comprimento de raiz do cafeeiro 6 uma tarefa trabalhosa ¢ demorada, além disso, os métodos ulilizados estéo sujeitos a erros que podem limitar a precisio dos resultados obtidos (CALDWELL; VIRGINIA, 1989; HIMMELBAUER et al., 2002; ZOON; TIENDEREN, 1990). A avaliagao poderia ser melhorada através de métodos de amostragem e determinagao mais adequados que combinem rapidez e preciso, permitindo 0 exame de um numero relativamente grande de plantas, no entanto, devido estrutura complexa do sistema radicular e a variabilidade espacial da distribui¢do das ralzes torna-se dificil a melhoria da sua determinagao (BENGOUGH et al., 2000). A problematica em relacdo a elevada variabilidade entre as amostras de raizes é amplamente conhecida; em alguns casos, requerendo inmeras amostras para 2 obtengao de uma estimativa, com elevado grau de exatiddo, que represente a média (BENGOUGH et al., 2000). Para a medi¢ao do comprimento do sistema radicular, muitos pesquisadores ainda utilizam réguas @ outros métodos de medicao tradicionais no campo @ em amostras 368fy, wy) ops spncinis om Producto Veal i) i no laboratério (BINGHAM, BENGOUGH, 2003) Porém, estas medigdes S30 limitadas @ cansativas € 86 devem ser utilizadas para pequenas amostras de raizes A maioria das medidas aplicadas na avaliag3o do comprimento do sistema radicular era baseada no metodo de linha-intersecao de Newman (1966), onde era requerida intansiva utllizago de mao-de-obra. Posteriormente, 0 método de Newman fo! modificado por Tennant (1975), sendo utilizado atualmente em estudos que envolvem o sistema radicular de plantas de cafeeiro © método de Tennant (1975) consiste na retirada de uma subamostra de raiz, distribuindo-a uniformemente ao acaso em uma tela branca estendida Abaixo desta tela, coloca-se uma folha de transparéncia com quadriculas de n cm de lado (Ex: n= 1 om) @ procede-se a contagem das intersegdes A quantidade de interseg6es 6 realizada com auxilio de uma lupa e um marcador de contagem, contando-se as intersegbes nos dois sentidos (vertical e horizontal) de distribuig4o das raizes com as linhas das quadriculas. O comprimento de raizes & obtido pela formula: rt Rept Sendo: R= comprimento de raizes (cm); N= numero de intersegdes contadas; = tamanho da quadricula (cm). Rossiello e outros (1995) afirmam que o comprimento radicular também pode ser determinado por meio da seguinte formula: L=— 369YY od Onde: L = comprimento da raiz (cm/dm” solo) A= 4rea superficial de raiz (em*) R = raio da raiz (cm), determinado pela formula aw a Sendo: V = volume radicular (cm*) A = area superficial de raiz (cm*) Atualmente, existem alguns programas computacionals que podem ser utiizadcs a, medig4o do comprimento radicular a partir de uma imagem digital (JORGE 1995, CRUVINEL et al., 1996; RICHNER et al., 2000). Os métodos de Gigitalizacao de imagens podem ser aplicados diretamente sobre perfil, e em raizes extraidas de un volume de solo. Tais métodos, em comparagao as métodos tradicionais de medic de ralzes, so mais precisos, uma vez que a tecnologia digital diminui a interferénca humana nas operagdes de medida, reduzindo significativamente os coeficientes de variagdo, em comparacao com os estudos executados manualmente, e por mais de um operador (FARREL et al., 1993). Também, com esta ferramenta 6 possivel a partir de uma subamostra, chegar-se a estimativa de valores precisos dos parametros requeridos (FERNANDES et al., 2001, ARAUJO et al., 2004). Apesar desta ferramenta apresentar estas vantagens, poucos sao os estudos que apresentam informagdes de ordem metodoldgica, de facil reprodugdo, de todas as fases do processamento das imagens. Os métodos de digitalizaco de imagens de ralzes possibilitam que as imagens sejam obtidas diretamente no campo ou através de raizes separadas do solo por lavagem, e digitalizadas (RITCHNER et al., 2000) 370Entretanto, Independente do método, a obten¢do de uma imagem digital de qualidade, @ © requisito mais importante para 0 processamento digital (BRASIL. 2001). Mesmo com avangos no estudo de raizes, tornados possiveis por meio da analise de imagens assistida por computador, a medigao do comprimento do sistema radicular ainda consome muito tempo, principalmente devido a magnitude do comprimento total de ralzes que pode ser encontrado em um Unico sistema radicular ou em um sequano volume de solo (COSTA et al, 2000) 2.3 AREA SUPERFICIAL A preocupagao com 0 desenvolvimento de novos métodos de determinagao de variaveis relacionadas ao sistema radicular do cafeeiro ndo é tao recente. Ainda em 4934, Nutman desenvolveu um minucioso trabalho de determinag3o direta da area das raizes do cafeeiro, encontrando média de 463 m* de superficie para plantas adultas de café arabica. Também, Ramos e Lima (1980) enfatizam a importancia de se avaliar a 4rea superficial em trabalhos de raizes. A determinagao da area do sistema radicular permite uma diferenciagdo mais precisa da capacidade do sistema radicular em realizar os processos de absor¢a0. Esse fato @ justificado pela ramificacao do sistema radicular que nao pode ser avaliado por outras variaveis, como por exemplo, a determinagao do comprimento e peso (RAMOS; LIMA, 1980), que podem mascarar a avaliagao de um sistema radicular de maior diametro de um sistema radicular mais ramificado, impossibilitando a diferenciagdo dos mesmos. | __ Em 1949, Wilde e Voigt descreveram uma metodologia de avaliagao da superficie relativa de ralzes de plantas através da titulagdo. Apesar de sua preciso, esse ‘método requeria um longo tempo de execugao. Esse fato levou Carley e Watson iolverem um método alternativo que adicionasse mais facilidade e do método titulométrico. Esses autores propuseram um método imar a superficie de raizes. artyy © método gravimétrico de Carley e Watson (1966) utiliza uma solugso, levemen, aquecida, de seis partes de nitrato de calcio para uma parte de agua. Um cn Contendo 600 mL dessa solucao & pesado em balanca analltica para doterming do peso total do conjunto. Raizes secas S40 emersas na solucao por 10 Se9UNdos g enldo, erguidas sobre 0 becker para escorrimento do eXCesS0 Por 30 segundos, ¢ novo peso é anotado para determinar a quantidade que f0l adcionada ou remoygy ni i Pelas raizes. Teoricamente, quando as raizes s4o emersas em uma Souga6 4 faturalmente drenadas, ocorrem uma absorgao limitada e€ uma deposigao gg ety camada de solucdo sobre as raizes. Solugdes mais pesadas devem, Portanta exagerar as diferengas entre as raizes @ servir como um critério de comparacag, Ramos e Lima (1980), propuseram a determinacao da superficie relativa do sistema radicular de plantas jovens de café através de titulometria, empregando uma adaptacao da metodologia de Wilde e Voigt (1949). Nesse método, as ralzes devem, Ser separadas do excesso de solo em agua corrente, e transferidas para recipientes com agua destilada por 30 minutos, para evitar a perda excessiva de Agua dos tecidos. Antes da titulometria, recomenda-se deixar as raizes escorrerem 0 eXCesso de Agua por 10 minutos. As raizes entéo so emersas em solugdo de HCI (3,00 ny Por 15 minutos, e deixadas em repouso por mais 10 minutos para 0 escorrimento do excesso da solugao. Apés esse periodo, as raizes sao transferidas para um recipiente contendo 500 mL de dgua destilada por 15 minutos em agitador magnético. O indicador fenolftaleina ¢ adicionado e a titulago 6 feita com KOH (0,15 N). A superficie relativa do sistema radicular corresponde ao volume de KOH gasto, corrigido para 500 mL, que representa a quantidade de Acido adsorvido na superficie real das raizes. © método titulométrico citado permite a verificagao de diferengas entre os sistemas radiculares de cafeeiros, avaliando um parametro relevante com preciso, resultado da redug&o do problema causado pela perda de radicelas durante o processo de determinacao por outros métodos, No estudo de plantas maiores, a avaliacdo da terminagao de pardmetros morfolégicos de raizes. Diversos 's0 livre ou comercial, vam sendo desenvolvidos para tal fim; entre 372—— tio tales ep ‘alas! QUANTROOT, WinRHYZO, ROOTEDGE podem ser citados como exemplos Comparagoos entre os diferentes Softwares normaimente retornam estimativas semalhantes, havendo maior discropdncia para o didmetro e area superficial das ralza8 do que para medidas de Comprimento, mas todas se mostram reproduziveis. Para garantir a procisto das estimativas, as ralzes devem ser cuidadosamente limpas © espalhadas, para que as Imagens capturadas pelo scanner sejam Feprosentativas da superticia ront das raizes, © aumento da resolug&o das imagens dns ralzos aproxima os valores estimados dos valores reais, sendo recomendadas ‘08 resolugos proximas a 400 dpi (HIMMELBAUER et al., 2004), Corantas podem ser empregndos para a mensuragio da superficie de raizes em intogradores de dra, como exemplo, a realizagao o tratamento das raizes limpas Com safranina a 1% (KRAUS; ARDEIIN, 1997) e a determinacdo da superficie de ralzos através do um medidor de area foliar (MENDONGA, 2002). Devido & rolagdo existonte entre 0 comprimento de raiz e 0 didmetro médio com a superficie radicular, também 6 possivel efetuar 0 calculo de superficie radicular através de relagdes matematicas anteriormente citadas, como descrito por Bohm (1979), 2.4 MASSA DE MATERIA FRESCA E SECA Na pratica, a avaliagdo da massa de matéria fresca das raizes é feita logo apés a avaliago do volume de raiz, Isto, porque apés retirar a raizes da proveta com agua, ‘a metodologia sugere que as mesmas sejam secas a sombra ou em papel-toalha, para eliminar o excesso de agua, a fim de verificar a massa da matéria fresca das falzes (BENINCASA, 1988), determinada em balanga de preciso (Figura 6A). 373vy “=i Metodoloains de doterminacito das principais varidvals morfoloaicas... Figura 6 - Determinagso da massa de matéria fresca (A) € secagem de raizes em estufa ge circulagao forgada de ar (B) Apés a determinagao da massa de matéria fresca, a metodologia de avaliacao de massa de matéria seca das raizes sugere que as mesmas sejam acondicionadas em sacos de papel, devidamente etiquetados, e levadas a estufa de circulacao forcada de ar até atingir massa constante (Figura 6B). Assim como na determinagao de massa de matéria fresca, a determinagao de massa de matéria seca também ¢ feita utilizando balanga de precisdo (BENINCASA, 1988). Este método de determinagao de massa de maléria seca é largamente utilizado, todavia, € valido ressaltar que o tempo de permanéncia das raizes na estufa é¢ variavel, sendo relatado, na maioria dos trabalhos, a secagem por 72 horas. Existem varios fatores que podem influenciar o tempo de secagem das raizes, principalmente a diferenga de volume entre as amostras, 0 que implica na necessidade de verifcar, de forma amostral, se as amostras atingiram peso constante 3 CONSIDERAGOES FINAIS O sucesso na avaliagdo de parémetros que permitam caracterizar, entender e avaliar © potencial de desenvolvimento do sistema radicular do cafeeiro esta baseado na 374Tovicon Lisyy in an Produgo Youotal it ee aficioncla om 80 ACO88Ar 48 Falz00 © posteriormante om lornéd las viavols pare une aliagno adaquada por molo d ov a lavagom @ soparagto, iar 6 pode-se evidenciar quo alguns métodos utlizados para a avaliagdo do nistome cafeairo sfo Nistoricar radicular do col Nistoricamante roproduzkios, sendo comumanto ctados pola itoratura, 0 ‘ ‘Auaimente © 80 de Programas do computadoras © oquipamontos tocnol6gico® : ma nova vor a opresontam Ur 8 vertonto para a avaliagio do sistema radicular do caloolro, tendo olevada acoltacto pela comunidads cientifica, devido a yun alla preciso © repetibiidade, alm da maior faciiidada de oxecugho dos métodos, quando comparados com métodos manuais 4A REFERENCIAS AMARAL, J. 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