PRACTICA Nº 2

SOLUCIONES, pH y AMORTIGUADORES

RELACIÓN DE EXPERIMENTOS
1.- Preparación de una solución cloruro de sodio y dextrosa.
2.- Acción tampón (Buffer) de las proteínas del suero sanguíneo.
3.- Determinación de la acidez gástrica.

INTRODUCCIÓN

Una solución corresponde a la mezcla de dos o más sustancias, con las

características de mostrarse homogénea a los procedimientos físicos. El componente que se
encuentra en mayor proporción se denomina solvente, en tanto que el otro u otros
componentes se denomina soluto(s). El agua por sus notables cualidades de solvente y por
ser el componente químico más importante del organismo, cumple un rol destacado en
mantener solubles a los diversos constituyentes químicos de la célula.

En atención al tamaño de las moléculas de soluto, las soluciones se agrupan en

soluciones coloidales y soluciones verdaderas.

Las soluciones coloidales tienen partículas de soluto (micelas) de un tamaño

comprendido entre 1 nm y 1000 nm; es el caso de las soluciones de proteínas, ácidos
nucleicos y polisacáridos. Las soluciones verdaderas tienen un tamaño menor a 1nm. Las
biomoléculas y bioiones de bajo peso molecular dan soluciones de esta clase.

La concentración de las soluciones corresponde a la cantidad de soluto por unidad de

volumen dé la solución y en Bioquímica existen 3 sistemas importantes para expresar la
concentración de las soluciones. El sistema molar, él sistema normal y el sistema
porcentual.

Solución Molar (M) es aquella que contiene un mol de la sustancia por litro de solución.
Solución normal es aquella que contiene el equivalente gramo de la sustancia por litro de
solución. Solución porcentual es aquella que contiene un determinado número de gramos
de la sustancia en 100 g se consideran soluciones porcentuales aquellas que contienen

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cierto número de gramos, miligramos o microgramos de soluto en 100 ml de la solución y
se puede escribir (P/V) para indicar que en este caso la relación es de peso-volumen.

Por otro lado, cuando hablamos de soluciones biológicas, la concentración de

hidrogeniones [H+] en la célula tiene un poderoso efecto sobre las reacciones químicas que
allí ocurren, desde el momento en que todos estos procesos son catalizados por enzimas y
éstas a su vez requieren pHs óptimos para trabajar eficientemente. En vista que la
concentración de hidrogeniones expresada en normalidad, en la mayoría de soluciones,
incluyendo líquidos biológicos, es muy pequeña, hace un buen tiempo se acuñó el término
de pH (potencial de hidrogeniones) para representarlas con cifras más manejables. El pH es
pues un término que expresa la concentración de iones hidrógeno como el logaritmo
negativo (de base 10) de dicha concentración en normalidad o lo que es lo mismo el
logaritmo del inverso de concentración de hidrogeniones [H+].
pH = - log [H+]

De acuerdo con este concepto, si el pH es 7 el medio es neutro, si el pH es menor de

7 la solución es ácida, y básica si el pH es mayor a 7.
La escala de pH, nos indica el grado de acidez o de basicidad de una solución y varía entre
0 y 14, valores que en concentración de Hidrogeniones en Normalidad corresponden desde
1N hasta 10-14 N.
El pH de una solución puede ser estimado en la práctica mediante el uso de métodos
colorimétricos o potenciométricos. El procedimiento tan conocido para determinar el pH de
una solución mediante el papel indicador de pH, es un método colorimétrico.

Finalmente, los amortiguadores o tampones son soluciones que se oponen a

variaciones bruscas en el pH y por lo general están constituidos de ácidos débiles con sus
bases conjugadas. Cuando hay exceso de OH - interviene el componente ácido del tampón;
en cambio cuando hay exceso de H + , interviene el componente base conjugada del mismo.
En uno u otro caso, se habrán enmascarado los iones OH – y H + y por lo tanto el pH del
medio no se modificará.

Hay dos factores a considerar en la efectividad de un tampón: la concentración de

los componentes del mismo y la relación existente entre ambos. Sin embargo, hay que
tener presente que la mayor acción amortiguadora de pH está en el pK o en las
proximidades de este valor.
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EXPERIMENTO 1

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES

Objetivos

1. Familiarizar al alumno con los cálculos necesarios para la reparación de una solución.
2.-Preparar la solución utilizando adecuadamente el material de laboratorio.

1.1.- PREPARACIÓN DE UNA SOLUCIÓN DE CLORURO DE SODIO 0.5 M (500ml)

Procedimiento

1. Estimada la cantidad de cloruro de sodio necesario para preparar 400 ml de

solución 0.5 M, se pesa con mucha exactitud dicha cantidad.
2. Se coloca la sustancia pesada en un beaker de 100 ml y se añade aproximadamente
50 ml de agua destilada.
3. Se agita con una bagueta de vidrio hasta que se disuelva completamente el cloruro
de sodio.
4. Se transfiere el contenido a un frasco volumétrico (fiola) de 500 ml y se completa
hasta la marca con agua destilada. Se tapa el frasco y se mezcla.
5. Se trasfiere el contenido a un frasco y se le rotula adecuadamente.

Resultados
Anote en el espacio la cantidad de cloruro de sodio que calculó. __________________

1.2 PREPARACIÓN DE UNA SOLUCIÓN DE DEXTROSA AL 12% (250ml)

TENIENDO COMO BASES DEXTROSA AL 5% Y DEXTROSA AL 33,3%.

Procedimiento

1. Estimar los volúmenes necesarios de dextrosa al 5% y al 33,3% necesarios para

preparar 250 ml de solución al 12% de dextrosa.
2. Se mide los volúmenes determinados en probetas.
3. Se colocan en una fiola de 250 ml.
4. Se agita hasta que se homogenizen.

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 5. Se transfiere el contenido a un frasco volumétrico (fiola) de 500 ml y se completa
hasta la marca con agua destilada. Se tapa el frasco y se mezcla.
6. Se trasfiere el contenido a un frasco y se le rotula adecuadamente.

Resultados
Anote en el espacio el volumen de dextrosa al 5% que calculó. __________________
Anote en el espacio el volumen de dextrosa al 33.3% que calculó. __________________

EXPERIMENTO 2.

ACCION TAMPON (BUFFER) DE LAS PROTEINAS DEL SUERO SANGUINEO

Objetivos
Demostrar la acción amortiguadora de pH de las proteínas del suero sanguíneo

Método: Volumétrico o titrimétrico.

Se estima los miliequivalentes de HCl y de NaOH gastados para hacer variar el pH del
suero sanguíneo, hacia el lado ácido y hacia el lado alcalino, respectivamente, y comparar
estos resultados con los obtenidos al utilizar suero desproteinizado en lugar de suero
sanguíneo

Procedimiento:

a) Medir en un Erlenmeyer, 2 ml de suero sanguíneo diluido al medio (1.0 ml de

suero más 1.0 ml de agua destilada) y titular con NaOH 0.01 N hasta un pH
aproximado de 8.5, usando como indicador la fenolftaleína. Anotar el volumen
gastado de la soda.
b) A la misma solución añadir dos gotas de anaranjado de metilo y titular con HCl 0.1
N hasta pH 3.4, anotar el volumen de ácido gastado. Para reconocer el color que
toma este indicador a pH 3.4, preparar un tampón de dicho pH y añadirle dos gotas
de anaranjado de metilo.

c) Repetir los pasos 1 y 2, utilizando en este caso suero desproteinizado ( o agua

destilada). Para obtener el suero desproteinizado, mida cierto volumen de suero en
un tubo de ensayo, y caliente en baño María hirviente por dos minutos; después de
filtrar o centrifugar, usar el filtrado o el sobrenadante, según el caso

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Resultados.
1. Con los datos obtenidos en este experimento complete la siguiente tabla:

SUERO AGUA
SANGUINEO DESTILADA
Gasto de NaOH 0.01 N en ml.
Gasto de HCl 0.1 N en ml.

1. Estimar los micromoles o miliequivalentes de ácido y base necesario para hacer cambiar
en una unidad el pH del suero y del agua destilada.

SUERO AGUA
SANGUINEO DESTILADA
Gasto de NaOH 0.01 N en miliequivalentes
Gasto de HCl 0.01 N en miliequivalentes

EXPERIMENTO 3

ACIDEZ GASTRICA
Normalmente, el jugo gástrico contiene mucina, pepsina, pequeñas cantidades de otras
enzimas, ácidos orgánicos, sales, pequeñas cantidades de proteínas, fosfatos y una cantidad
importante de ácido clorhídrico. Este HCl es secretado por las células parietales del
estómago a una concentración promedio de aproximadamente 160 mEq/L (pH 0.87); esta
secreción está influenciada por diversos factores y es estimulada por las comidas, el
alcohol, la histamina, etc.

La regurgitación del líquido intestinal, los alimentos y otros componentes del jugo gástrico,
hacen que la acidez señalada disminuya , por lo que se señala que la acidez promedio de un
sujeto en ayunas es de aproximadamente 2.5 de pH.

Desde el punto de vista médico, la determinación de la acidez gástrica es de particular

importancia y contribuye al diagnóstico de una serie de enfermedades, como la úlcera
péptica, cáncer gástrico, gastritis crónica, atrofia gástrica, etc.

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Hace más de un siglo se estableció el denominado grado de acidez o Unidades de Acidez,
como medida de la acidez gástrica y corresponde a los mililitros de NaOH 0.1 N
necesarios para neutralizar la acidez de 100 ml de jugo gástrico.

La prueba de la determinación de la acidez gástrica en un paciente consiste en dejarlo en

ayunas por toda la noche y al día siguiente introducir una sonda nasogástrica y evacuar
completamente todo el contenido gástrico (muestra basal). Después se da el estímulo que
puede consistir en la comida de prueba, como la de Ewald, que incluye dos tostadas y una
taza de té: o agentes de mayor capacidad estimuladora como el alcohol o la histamina, esta
última se administra por vía intramuscular a una concentración de 0.01 mg / Kg de peso
corporal. Luego se comienzan a tomar muestras de jugo gástrico cada 15 minutos hasta
completar las 2 horas.

En cada muestra de jugo gástrico incluyendo la basal, se determinan las unidades de acidez
total del jugo gástrico, titulando con NaOH 0.01 N y usando como indicador el rojo de
fenol.

La acidez total del jugo gástrico en ayunas en un individuo normal es de aproximadamente

15 –50 mEq de HCl/L. Con estímulo, como la comida de prueba, se alcanzan normalmente
valores como de 20 a 90 mEq de HCl/L . Cuando el estímulo es la histamina que es uno de
los más potentes, el máximo estímulo está entre 30 a 60 mEq/L, en condiciones normales.
Menos importancia se concede en la actualidad a la determinación de la acidez libre y
acidez combinada del jugo gástrico. Se atribuía que la primera correspondía a la acidez del
HCl libre, en tanto que la segunda era debida a HCl combinado a fosfatos ácidos y a ácidos
orgánicos. La acidez libre se obtenía titulando el jugo gástrico con NaOH hasta un pH de
3.5, en tanto que la acidez combinada correspondía a la titulada en el jugo gástrico, desde
un pH de 3.5 hasta aproximadamente 8.3. Para esto era necesario el uso de dos indicadores,
el dimetil-aminoazobenzeno y la fenolftaleína.

Objetivo

- Determinar los grados de acidez (Unidades de Acidez) de una muestra de jugo

gástrico de un paciente en ayunas.

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Método.
- Titular una muestra de jugo gástrico utilizando NaOH 0.01 N y rojo de fenol como
indicador.

Procedimiento.
1. Medir 1 ml. de jugo gástrico filtrado con gasa, en un Erlenmeyer de 50 ml. Añadir
10 ml. de agua destilada.
2. Añadir 2 gotas de rojo de fenol y mezclar.
3. Titular con NaOH 0.01 N Hasta obtener el color de la solución patrón.
4. Preparar el patrón midiendo en un Erlenmeyer 1 ml. tampón fosfato pH 7.0;
Añadir 10 ml de agua destilada y 2 gotas de rojo de fenol y mezclar.

Resultados.
Las Unidades de Acidez del jugo gástrico analizados son: ____________
La acidez del jugo gástrico, expresado como mEq de HCl/L de jugo gástrico es:
___________

INTERROGANTES .
1.- Qué es una solución saturada?
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________

2.- Siendo actualmente recomendable el sustituir las concentraciones de las biomoléculas de

los líquidos biológicos del organismo expresadas en forma porcentual, por las
concentraciones expresadas en el sistema molar, haga las conversiones correspondientes
para los compuestos químicos que se señalan e indique si los valores están altos (A),
normales (N) o disminuidos (D), respectivamente.

Compuesto PM Concentración Concentración Valores A,

(%) milimoles/litro N, D

Glucosa (sangre) 180 75 mg %

Urea (Sangre) 60 25.5 mg %
Colesterol (suero) 387 180 mg %
Lactato (suero) 140 5 mg %

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 Creatinina (suero) 113 0.8 mg%
Calcio (suero) 40 8.5 mg%
Hierro (suero) 56 75 µg/dL
Fósforo (suero) 31 4.5 mg/dL
Para resolver puede consultar el siguiente enlace http://www.scielo.sa.cr/scielo.php?
pid=S0253-29482002000100008&script=sci_arttext

3.- Cómo se prepara:

a) 225 ml de NaCl al 10%

b) 500 ml de NaHCO3 8.4%

c) 100 ml de glucosa 0.5N

4.- Cual presenta la osmolaridad más alta NaCl 0.1M o Na2SO4 0.08 M. Realice los cálculos

5. A un enfermo hay que inyectarle 15 g de KCl y 126 g de glucosa (C 6H12O6) ¿Cuánta agua
habrá que añadirles para que resulte un suero 0.4 osmolar?

6. Buscar las composiciones de las siguientes soluciones: Hartman, Ringer y Darrow.

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7. Calcular la osmolaridad a partir de:
a Dextrosa al 10 % en solución salina al 0.45%.
b Dextrosa al 5 % en solución salina al 0.2%.

8. ¿Que se entiende por acidez real y por acidez titulable?

9. ¿Qué es la anaclorhidria o anacidez gástrica?

10. Con los datos que se señalan, construya en papel milimetrado la curva de acidez
gástrica total. A través de una sonda nasogástrica, se obtuvo una muestra de jugo
gástrico en ayunas de un paciente. Luego se administró la comida de Ewald como
estimulante y se procedió a retirar nuevas muestras de jugo gástrico a los15’ , 30’ y
60’. En la titulación de estas muestras se gastaron 15 ml. (basal), 20 ml., 29 ml. y
33 ml. de NaOH 0.01 N respectivamente.

11. ¿Por qué es importante que se mantenga constante, dentro de ciertos límites, el pH en
el organismo?

12. ¿Cuáles son las fuentes de iones H+ en el organismo?

13. ¿Cuáles son los sistemas reguladores que facilitan la eliminación del H+ producido
en el organismo con el fin de mantener constante el pH sanguíneo?

14. ¿Cuáles son los sistemas extrasanguíneos que tienden a mantener el pH

extracelular?

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16.-Pocos días antes de ser dado de alta a un paciente, se le practicó una serie de
determinaciones en el laboratorio, habiéndose obtenido los siguientes resultados.
Colesterol sérico total 215 mg%
Alanina sérica 0.8 mmol/L
Cobre sérico 182 µg/dL
Hemoglobina sanguínea 1.6 mmol/L
Ácido úrico sérico 650 µmoles/L
Tiroxina sérica 48 ng%
Zinc sérico 35 µmol/L
a) Complete la siguiente Tabla anotando los V.N para los parámetros analizados
Compuesto químico Valores Normales
Colesterol sérico mmol/L
Alanina sérica mg%
Cobre sérico µmol/L
Hb g%

Acido úrico mg%

Tiroxina sérica nmol/L
Zinc sérico µg%
b) Exprese los resultados del paciente en las unidades en que se expresaron sus V.N. en la
tabla anterior y junto a cada resultado escriba en un paréntesis la letra A, N ó D , según
encuentre que los resultados están aumentados, normales o disminuidos;
respectivamente.

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