AOAC 999.

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PLOMO, CADMIO, ZINC, COBRE Y HIERRO EN ALIMENTOS

ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA DESPUÉS DE LA DIGESTIÓN EN

MICROONDAS

[APLICABLE A LA DETERMINACIÓN DE ZN, CU Y Fe en una variedad de alimentos por digestión

con microondas y espectrofotometría de absorción atómica de llama (FAAS), y Cd y Pb por
digestión con microondas y espectroscopía de absorción atómica en horno de grafito
(GFAAAS). El método es capaz de determinar estos elementos en concentraciones superiores a
aproximadamente Pb (0,4), Cd (0,01), Zn (4), Cu (3) y Fe (7) mg/Kg. El método no es aplicable a
alimentos con un contenido de grasa >40%. No aplicable a la leche en polvo.

consulte la tabla 999.10A para ver los resultados del estudio entre laboratorios que respaldan
la aceptación del método.

precaución:

Los recipientes de digestión deben enfriarse durante un tiempo adecuado antes de abrirlos
para evitar quemaduras por vapores calientes y corrosivos. Siempre agregue suavemente
ácido al agua. Mantenga una distancia segura de los hornos equipados con corrección de
fondo zeeman cuando el imán esté encendido. Consulte las instrucciones del fabricante para
determinar la distancia de seguridad, que varía para diferentes instrumentos. consulte el
Apéndice B. Seguridad en el laboratorio, para el uso seguro de gases comprimidos, ácidos
inorgánicos y espectrómetro de absorción atómica.

A. PRINCIPIO

Los productos se digieren con HNO3 y H2O2 bajo presión en un recipiente cerrado calentado
por microondas. La solución se diluye con H2O. Pb y Cd están determinados por GFAAS. Zn, Cu
y Fe están determinados por FAAS.

A. Aparato

(a) Espectrofotómetro de absorción atómica: con quemador de aire-acetileno o quemador de

óxido nitroso-acetileno para llama (FAAS; véase la tabla 999.10B) y un horno de grafito para
determinaciones electrotérmicas (GFAAS; véase la tabla 999.10C), con fondo apropiado (no
atómico). ) absorción.

(b) Lámparas de descarga sin electrodos o de cátodo hueco: para Pb, Cd, Zn, Cu y Fe

(c) horno de microondas diseñado para uso en laboratorio, por ejemplo, MDS-2000 (CEM Corp,
Matthews, NC, EE. UU.). Revise el horno de microondas regularmente para saber si hay energía
entregada. Si el efecto medido no está de acuerdo con la especificación, ajuste el programa:
Llene un vaso de precipitados de plástico (polipropileno o teflón) con 1.000 kg de agua
(temperatura ambiente) y mida la temperatura (Tb). Coloque el vaso de precipitados en el
horno de microondas y caliente el agua a máxima potencia durante 2 min. Saque el vaso de
precipitados del horno, revuelva el agua y mida la temperatura (Ta). La potencia entregada en
vatios:

P=35x(Ta-Tb)

(d) recipientes de digestión de teflón: 100 ml, que resistan una presión de al menos 1,4 MPa
(e) matraces aforados de 25 y 1000 ml

(f) Embudos- Vidrio o plástico

(g) botellas de plástico, por ejemplo botellas de poliestireno con tapas bien ajustadas, 50-100
ml

(h) Horno de secado.- O equipo para liofilización. Limpie cuidadosamente todo el material de
vidrio y plástico y enjuague, por ejemplo con HNO3 o Hcl, para evitar la contaminación por
metales.

C. Reactivos

Los reactivos deben ser al menos de grado reactivo analítico (p.a), preferiblemente ultrapuros
(suprapur), o equivalentes.

(A) agua-Redestilada o desionizada>18MOHM.cm

(B) ácido nítrico - 65% (p/p)
(C) Ácido nítrico -0,1M. Diluir 7ml de HNO3 concentrado, (B) con agua hasta 1L
(D) Ácido nítrico -3 M. Diluir 200ml de HNO3 concentrado, (b) con agua hasta 1L
(E) peróxido de hidrógeno -30% (p/p)
(F) solución estándar de zinc-solución estándar de zinc 1 mg/ml. Disolver 1.000g de Zn en
14mL de agua + 7mL de ácido nítrico, (b), en un matraz aforado de 1L. Diluir al
volumen con agua. [Nota: las soluciones estándar comercialmente disponibles para
AAS (por ejemplo, BDH Chemicals Ltd. Poole, Reino Unido) pueden usarse para todas
las soluciones estándar de metal]
(G) solución estándar de cobre-1mg/ml. Disolver 1.000g Cu en 7ml de ácido nítrico (b), en
un matraz aforado de 1L. Diluir a volumen con agua.
(H) Solución estándar de hierro 1mg/1ml. Disolver 1.000g de Fe en 14ml de agua + 7ml de
ácido nítrico, (b), en un matraz aforado de 1L. Diluir al volumen con agua.
(I) solución estándar de plomo 1mg/1ml. Disolver 1.000g de Pb en 7ml de ácido nítrico,
(b), en un matraz aforado de 1L. Diluir al volumen con agua.
(J) solución estándar de cadmio 1mg/1ml. Disolver 1.000mg de Cd en 14ml de agua + 7ml
de ácido nítrico, (b), en matraz aforado de 1L. Diluir al volumen con agua.
(K) Soluciones estándar de trabajo (1) para análisis de llama: diluir el estándar (f)-(j) con
HNO3 0,1 M, (c) hasta un rango de estándares que cubra la concentración del
elemento a determinar. (2) Para el análisis en horno de grafito: solución estándar
diluida (f)-(j) con HNO3 0,1 M (c) hasta un rango de estándares que cubra el rango
lineal del elemento a determinar.

D. procedimientos

(a) procedimientos de limpieza-(1)Para vidrio y artículos de plástico-Solución ácida: 500 ml

de HNO3 concentrado C(b)+450 ml de agua desionizada, C(a). Lavar primero con agua y
detergente. Enjuague con agua del grifo, seguido de agua desionizada y luego con
soluciones ácidas. Finalmente enjuague 4-5 veces con agua desionizada (2). Para
recipientes de digestión de teflón: enjuague con acetona, lave con agua desionizada,
mantenga los recipientes cubiertos con 0,1 M HNO3, C(c) durante al menos 30 minutos,
enjuague con agua desionizada y deje que los recipientes se sequen.

(b) pretratamiento: si el producto se va a analizar fresco, proceda como (d).

Homogeneización. De lo contrario, continúe en (c), Secado.
(c) Secado-Secado a peso constante en horno de secado a 105°C, o liofilizado. La
liofilización suele ser preferible porque hace que las lías del producto sean compactas y
más fáciles de homogeneizar. Si el resultado final se basa en el peso fresco, pese la porción
de prueba antes y después del secado para obtener el contenido de agua.

H2O=(WF-WD/WF)X100

donde H2O, % contenido de agua de la porción de prueba (%) wf=peso de la porción de

prueba (g), wd=peso después del secado

(d) homogeneización homogeneizar productos utilizando equipos no contaminantes.

Compruebe si hay metales lixiviados si el aparato consta de una parte metálica.
(e) Digestión: pese 0,2-0,5 g de material seco en el recipiente de digestión. Si se utilizan
materiales que contienen agua, el peso máximo está restringido a 2 g, pero el contenido
de materia seca nunca debe exceder los 0,5 g. Por ejemplo, si el producto tiene un
contenido de agua del 50 %, tome un máximo de 1 g (= 0,5 g de materia seca). Si un
producto tiene un contenido de agua del 95 %, tome 2 g (<0,5 g de materia seca). cuando
se digieren productos desconocidos, demasiados sólidos pueden causar la ruptura de la
membrana de seguridad en el recipiente de digestión.

Agregue 5 ml de HNO3, C(b) y 2 ml de H2O2 al 30 %, C(e). Cierre los recipientes, coloque

los recipientes en el soporte, coloque el soporte para recipientes en el horno de
microondas y cierre la puerta. Configure el programa del horno de acuerdo con los
parámetros dados en la tabla 999.10D e inicie el programa.

El programa es válido solo cuando se digieren 12 vasos simultáneamente. Si se digieren

menos, los recipientes restantes deben llenarse con blanco de reactivo. Cuando se usa un
horno de microondas diferente al que se da como ejemplo, puede ser necesario usar un
programa de tiempo/potencia ligeramente diferente.

Retire los recipientes de digestión del horno de microondas y deje que se enfríen
completamente antes de abrirlos. Abra el recipiente y enjuague la tapa y las paredes del
recipiente. Transferir la solución a un matraz aforado de 25 ml y diluir hasta marcar con
agua desionizada. Luego, transfiera la solución a un recipiente de plástico. Trate los
blancos de la misma manera que las pruebas. Se debe incluir blanco en cada set.

(f) Dilución: si la solución de prueba necesita diluirse aún más (debido a las altas
concentraciones de metales), diluya con 3M HNO3, C(d) para mantener la misma
concentración de ácido antes de la determinación de metales (g).

Una alta concentración de ácido es ambientalmente indeseable y puede deprimir la señal

analítica. Reduzca la fuerza del ácido diluyendo la solución de prueba a la mitad con ácido
nítrico 0,1 M y las soluciones estándar a la mitad con ácido nítrico 3 M. Las pruebas y los
patrones se llevan así a la misma concentración de ácido. La coincidencia de las
concentraciones de ácido es importante cuando se utiliza una curva de calibración.

(g) Espectrofotometría de absorción atómica: el uso de la técnica de horno de llama o de

grafito está determinado por la concentración del metal a determinar. La técnica de la
llama debe utilizarse en la medida de lo posible, ya que esta técnica es menos sensible a
 las interferencias que el GFAAS. La longitud de onda, el programa de temperatura/mezcla
de gases y otros parámetros instrumentales más apropiados para cada metal se
encuentran en el manual proporcionado con el instrumento. Utilice siempre la corrección
de fondo.

Las mediciones deben estar dentro del rango lineal cuando se utiliza el método de adición
estándar. Una curva de suma estándar consta de al menos tres puntos, de los cuales al menos
dos son estándares. La concentración del estándar más alto debe ser de 3 a 5 veces la
concentración en la solución de prueba. El estándar más bajo debe tener una concentración de
aproximadamente la mitad del estándar más alto. Una versión simplificada del método de
adición estándar es usar una curva estándar ajustada a la matriz, que es aplicable a productos
con la misma matriz: las soluciones de prueba y estándar se mezclan y se usan para hacer una
curva de adición estándar. Luego, esta curva se transfiere paralelamente al origen y se usa
como curva estándar para las pruebas siguientes y que se han diluido en las mismas
proporciones. La curva estándar ajustada a la matriz y las soluciones de prueba tendrán, por lo
tanto, la misma concentración de matriz. En la mayoría de los instrumentos modernos, esta
función está incluida en el software.

(1) Técnica de llama: la concentración de Zn, Cu y Fe suele estar en niveles adecuados

para la determinación por FAAS. Cuando se va a utilizar la curva de calibración, los
estándares y las soluciones de prueba deben tener la misma concentración de ácido.
Dado que el Fe puede verse muy afectado por las interferencias de la matriz, utilice el
método de adición estándar o estándares emparejados con la matriz. Cuando
experimente interferencias severas, una llama de acetileno de óxido nitroso oxidante
puede ser una alternativa.
(2) Técnica de horno de grafito: esta técnica generalmente se requiere para la
determinación de Pb y Cd en alimentos. Utilice tubos revestidos pirolíticamente con
plataformas. Dado que el método da como resultado una dilución bastante grande del
analito, con frecuencia también puede ser necesario para la determinación de, por
 ejemplo, Cu. Siempre se debe usar el método de adición estándar o estándares
emparejados con matriz, a menos que se demuestre que es innecesario (es decir, no
hay una diferencia significativa entre las pendientes de las curvas de calibración del
estándar de trabajo puro y las curvas de adición estándar del producto de prueba). Las
mediciones deben hacerse en el rango lineal cuando se usa el método de suma.
Programe el muestreador automático para entregar un volumen que brinde la mayor
absorbancia posible dentro del rango lineal y que produzca una absorbancia de fondo
no mayor que aproximadamente 0,5 unidades de absorbancia. La inyección múltiple
puede mejorar la absorbancia a concentraciones muy bajas. Evaluar cada nueva matriz
mediante curvas de ceniza y atomización para optimizar los parámetros del horno de
grafito.

E. Cálculos y evaluación de resultados.