Berichrom* Protein C

Berichrom [PROTEIN__C]
Reagents for the determination of protein C activity A. Pipetting scheme for the kinetic method

Intended Use Semi-micro test Chromotimer

For the quantitative determination of functionally active protein C using a chromogenic substrate as an aid Plasma sample 100 µL 25 µL
in the diagnosis of inherited and acquired deficiencies. Protein C-Activator 1000 µL 250 µL
Mix and incubate for exactly 5 minutes at +37 °C.
Summary and Explanation
Protein C is a vitamin-K-dependent coagulation inhibitor which regulates the activity of F V and F VIII. Substrate Reagent 200 µL 50 µL
Congenital heterozygous deficiency leads to a high, age-dependent incidence of venous thromboses2, 4. Mix and determine ∆A405 nm/min.
Homozygous deficiency in neonates is associated with very severe thrombotic manifestations. An acquired After approx. 15 seconds, read the absorbance and start the stopwatch simultaneously. After exactly
deficiency may be due to vitamin K deficiency, e.g. as a result of absorption disturbances or oral anticoagu- 60 and 120 seconds, read the absorbance again, calculate the respective ∆A/min values by subtrac-
lant therapy. In vitamin K deficiency, other vitamin K-dependent coagulation factors are also diminished tion, and then calculate the mean value of the two ∆A readings.
in activity, and therefore the risk of thrombosis under these conditions is small. Due to the short half-life of Evaluation, kinetic method
protein C, the induction of oral anticoagulant therapy may lead to very low levels of protein C activity with Calculation of the factor:
the risk of coumarin necroses.
Berichrom* Protein C detects the amidolytically active portion of the activated protein C, including the non-car- Assigned value (% of the norm)reference plasma
FL = –––––––––––––––––––––––––––––––––––
boxylated molecules synthesized in vitamin K deficiency. Thus, in conditions of vitamin K deficiency, a higher ∆A/minreference plasma
protein C activity is found with Berichrom* Protein C than when using the coagulometric method ([REF] OQYG).
To obtain a complete picture of the cause of a protein C deficiency, it is therefore advisable to also use the Multiply the ∆A/min of the samples by the resulting factor; the protein C content is obtained in % of the norm.
coagulometric method and the antigenic determination technique. Protein Csample (% of the norm) = FL x ∆A/minsample

Principle of the Method Pipetting scheme for the two-point method

Protein C in the patient sample is activated by a specific snake venom activator. The resulting Protein Ca Sample Sample blank
is assayed in a kinetic test by measuring the increase in absorbance at 405 nm. The assay is based on Plasma sample 100 µL 100 µL
the following reactions:
Protein C-Activator 1000 µL –
isotonic saline – 1000 µL
Protein C-Activator
Protein Csample → Protein Ca Mix and incubate for exactly 5 minutes at +37 °C.

Protein Ca Substrate Reagent 200 µL 200 µL
p-Glu-Pro-Arg-MNA → p-Glu-Pro-Arg-OH + MNA
Mix immediately and start the stopwatch simultaneously. After exactly 5 minutes, add:
Reagents Acetic acid 20 % 1000 µL 1000 µL
Materials provided Mix immediately and read the absorbance against the blank within 60 minutes.
Berichrom [PROTEIN__C], [REF] OUVV 15 with
3 x → 10 mL [ACTIVATOR], Protein C-Activator Evaluation, two-point method
Calculation of the factor:
3 x → 3 mL [SUBSTRATE], Substrate Reagent
Assigned value (% of the norm)reference plasma
1 x 30 mL [ACTIVATOR__DILUENT], Hepes Buffer Solution FL= –––––––––––––––––––––––––––––––––––
Areference plasma

Berichrom [PROTEIN__C], [REF] OUVV 17 with Multiply the absorbance of the sample by the resulting factor.
4 x → 5 mL Protein C [ACTIVATOR], Protein C-Activator Protein Csample (% of the norm) = FL x Asample
2 x → 3 mL [SUBSTRATE], Substrate Reagent Notes
1 x 30 mL [ACTIVATOR__DILUENT], Hepes Buffer Solution 1. Doubling or halving of volumes used in the test mixtures has no effect on the calculation or laboratory-
internal calculation factor.
Composition 2. FL is a calculating factor established within the laboratory and needs to be determined only once in an
Protein C-Activator: Extract from the venom of Agkistrodon contortrix (≤ 0.6 U/mL), stabilized and assay series. This method of evaluation is basically equivalent to an evaluation via a reference curve.
lyophilized
3. The laboratory-internal factor FL and/or reference curve must be re-determined for each change of
Hepes Buffer Solution: HEPES, polyethylene glycol, caesium chloride, pH 8.25; device and for each new lot of Berichrom* Protein C.
Preservative: sodium azide (< 1 g/L)
Automatic:
Substrate Reagent: Pyro-glutamic acid-proline-arginine-methoxy-nitroanilide (p-Glu-Pro-Arg-MNA),
lyophilized; concentration in the working solution: 4 mmol/L. Special instructions for coagulation analyzers may be obtained from Siemens Healthcare Diagnostics
by request.
Warnings and Precautions
Internal Quality Control
1. For in-vitro diagnostic use only.
Normal range: Control Plasma N
2. Contains sodium azide (< 0.1 %) as a preservative. Sodium azide can react with copper or lead pipes
in drain lines to form explosive compounds. Dispose of properly in accordance with local regulations. Pathological range: Control Plasma P
Two controls should be measured with each calibration and at least every 8 hours during each testing
Preparations of the Reagents day (one in the normal range and one in the pathological range). The controls should be processed just
[ACTIVATOR]: Dissolve the contents of the vial with the quantity of [ACTIVATOR__DILUENT] like the samples. Each laboratory should determine its own quality control range, either by means of the
indicated on the label, and warm to +37 °C. target values and ranges provided by the manufacturer of the controls or by means of its own confidence
[SUBSTRATE]: Dissolve the contents of the vial with the quantity of distilled water indicated on the label, level established in the laboratory. If the measured control value lies outside the confidence level previ-
and warm to +37 °C. ously established, then the reagents, the laboratory-internal factor FL and/or the calibration curve and the
coagulation analyzer should be examined.
Mix carefully once more before using.
Storage and Stability Limitations of the Procedure
Store the test kit unopened at +2 to +8 °C, and use by the expiry date given on the label. There are appropriate coagulation analyzers for which Siemens provides operating instructions.
Stability after reconstitution: False low protein C activity may be found in patients being treated with aprotinin3.
Siemens has validated use of these reagents on various analyzers to optimize product performance and
Temperature [ACTIVATOR] [SUBSTRATE] meet product specifications. User defined modifications are not supported by Siemens as they may affect
performance of the system and assay results. It is the responsibility of the user to validate modifications
+37 °C 8 hours 1 week to these instructions or use of the reagents on analyzers other than those included in Siemens Application
+2 to +8 °C 2 weeks 6 weeks Sheets or these Instructions for Use.
≤-20 °C 4 weeks 6 months Results of this test should always be interpreted in conjunction with the patient’s medical history, clinical
[ACTIVATOR__DILUENT] is stable for 6 months at +2 to +8 °C once opened. presentation and other findings.
Different coagulation analyzers have individual stability data. Expected Values
Materials required but not provided: 70 - 140 % of the norm5
Standard Human Plasma, [REF] ORKL Systematic deviations from these ranges may be determined by the particular device. It may be necessary
Control Plasma N, [REF] ORKE to calculate your own reference range in the laboratory.
Control Plasma P, [REF] OUPZ Specific Performance Characteristics
Acetic acid 20 % (only for two-point method) Measuring range
Imidazole buffer solution, [REF] OQAA, or The measuring range extends from 0 to 140 % of the norm.
Dade® Owren’s Veronal Buffer, [REF] B4234 or
Precision and Reproducibility
Dade® CA System Buffer, [REF] B4265 or For protein C values in the reference range, the coefficient of variation from day to day lies at 1.9 %. For
Isotonic Saline Solution pathological values, the coefficient of variation from day to day lies at 0.4 %.
Coagulation analyzer (see Chapter titled "Limitations of the Procedure") Method comparison
Equipment In a comparison of Berichrom* Protein C with immunochemical and other chromogenic methods, the cor-
Berichrom* Protein C can be used in a great number of coagulation analyzers. relation coefficients found were between 0.74 and 0.901.
Observe the operating instructions issued by the analyzer’s manufacturer!
Bibliography
Specimens 1. Sturk A, Morrien-Salomons WM, Huisman MV, et al. Analytical and clinical evaluation of commercial
To obtain the plasma, carefully mix 1 part sodium citrate solution (0.11 mol/L) with 9 parts venous blood, avoiding protein C assays. Clin Chim Acta. 1987; 165: 263-70.
the formation of foam. Centrifuge immediately at no less than 1500 x g for at least 10 minutes. 2. Vinazzer H, Pangraz U. Protein C: comparison of different assays in normal and abnormal plasma
Stability of the samples: samples. Thromb Res. 1987; 46: 1-8.
≤-20 °C 1 month 3. Espana F, Estelles A, Griffin JH, et al. Aprotinin (Trasylol) is a competitive inhibitor of activated protein
+15 to +25 °C 8 hours C. Thromb Res. 1989; 56: 751-6.
Thaw plasma stored at ≤-20 °C within 10 minutes at +37 °C, and then perform the assay within 8 hours. 4. Vigano d’Angelo S, Comp PC, Esmon CT, d’Angelo A. Relationship between protein C antigen and antico-
agulant activity during oral anticoagulation and in selected disease states. J Clin Invest. 1986; 77: 416-25.
Procedure 5. Kraus M. Protein C, protein S, factor V Leiden. In: Thomas L, ed. Clinical Laboratory Diagnostics,
Manual: Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft, 1998: 621-5.
Semi-micro test:
cuvette: 1 cm path length
wavelength: 405 nm
test temperature: +37 °C
Pre-warm the Protein C Activator and Substrate Reagent as well as the plastic cuvettes/tubes to +37 °C
prior to the test.

OUVV G15 E0501 (699) 

Dade is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics. Testdurchführung
* Berichrom is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics. Manuell:
Halbmikroansatz:
Küvette: 1 cm Schichtdicke
Wellenlänge: 405 nm
Testtemperatur: +37 °C
Protein C-Aktivator und Substrat-Reagenz sowie die Kunststoffküvetten bzw. -röhrchen vor dem Test auf
+37 °C vorwärmen.
Edition May 2008
A. Pipettierschema für die kinetische Methode

Berichrom* Protein C Plasma-Probe

Protein C-Aktivator
Halbmikroansatz
100 µl
1000 µl
Chromotimer
25 µl
250 µl

Berichrom [PROTEIN__C] mischen und exakt 5 Minuten bei +37 °C inkubieren.

Substrat-Reagenz
Mischen und ∆E405 nm/min bestimmen.
200 µl 50 µl

Reagenzien zur Bestimmung der Protein C-Aktivität Nach ca. 15 Sekunden die Extinktion ablesen und gleichzeitig die Stoppuhr starten. Nach genau 60
und 120 Sekunden Ablesung wiederholen, die jeweiligen ∆E/min durch Differenzbildung berechnen
Anwendungsbereich und aus beiden Messwerten den Mittelwert bilden.
Für die quantitative Bestimmung von funktionell aktivem Protein C unter Verwendung eines chromogenen Auswertung, kinetische Methode
Substrats zur Unterstützung der Diagnose von erblichen und erworbenen Mangelzuständen. Berechnung des Faktors:
Diagnostische Bedeutung Sollwert (% der Norm)Bezugsplasma
Protein C ist ein Vitamin K-abhängiger Inhibitor der Gerinnung, der die Aktivität von F V und F VIII reguliert. FL= ––––––––––––––––––––––––––
Angeborener heterozygoter Mangel führt zu einer altersabhängigen hohen Inzidenz venöser Thrombosen2,4. ∆E/minBezugsplasma

Homozygoter Mangel bei Neugeborenen ist mit schwersten thrombotischen Erscheinungen verbunden. Ein
erworbener Mangel kann durch Vitamin K-Mangel bedingt sein, z. B. durch Resorptionsstörungen oder orale Mit dem erhaltenen Faktor werden die ∆E/min der Proben multipliziert; man erhält Protein C in % der
Antikoagulation. Da bei Vitamin K-Mangel auch andere Vitamin K-abhängige Gerinnungsfaktoren in ihrer Norm.
Aktivität vermindert sind, ist das Thromboserisiko unter diesen Bedingungen gering. Aufgrund der kurzen Protein CProbe (% d. N.) = FL x ∆E/minProbe
Halbwertszeit von Protein C kann es bei Einleitung der oralen Antikoagulation zu sehr niedrigen Protein C- Pipettierschema für die Zweipunkt-Methode
Aktivitäten mit der Gefahr von Cumarin-Nekrosen kommen.
Berichrom* Protein C erfasst den amidolytisch wirksamen Anteil des aktivierten Protein C, einschließlich Probe Probenleerwert
der nicht carboxylierten, unter Vitamin K-Mangel synthetisierten Moleküle. Unter Vitamin K-Mangel wird Plasma Probe 100 µl 100 µl
daher eine höhere Protein C-Aktivität gefunden als mit der Koagulometermethode ([REF] OQYG). Um ein Protein C-Aktivator 1000 µl –
komplettes Bild der Ursache eines Protein C-Mangels zu erhalten, empfiehlt es sich daher, zusätzlich die isotonische Kochsalzlösung – 1000 µl
Koagulometermethode und die Antigenbestimmung durchzuführen. Mischen und exakt 5 Minuten bei +37 °C inkubieren.
Prinzip der Methode Substrat-Reagenz 200 µl 200 µl
Protein C der Patientenprobe wird mit einem spezifischen Schlangengiftaktivator aktiviert. Das entstan- Sofort mischen und gleichzeitig die Stoppuhr starten. Nach genau 5 Minuten Zugabe von:
dene Protein Ca wird in einem kinetischen Test mit Extinktionszunahme bei 405 nm nach folgendem
Reaktionsschema bestimmt: Essigsäure 20 % 1000 µl 1000 µl
Sofort mischen und die Extinktion innerhalb von 60 Minuten gegen den Probenleerwert bestimmen.
Protein C-Aktivator
Protein CProbe → Protein Ca Auswertung, Zweipunkt-Methode
Berechnung des Faktors:
Protein Ca
p-Glu-Pro-Arg-MNA → p-Glu-Pro-Arg-OH + MNA Sollwert (% der Norm)Bezugsplasma
Reagenzien FL= –––––––––––––––––––––––––––
EBezugsplasma
Inhalt der Handelspackungen
Berichrom [PROTEIN__C], [REF] OUVV 15 mit Mit dem erhaltenen Faktor wird die Extinktion der Probe multipliziert.
Protein CProbe (% d. N.) = FL x EProbe
3 x → 10 ml [ACTIVATOR], Protein C-Aktivator
3 x → 3 ml [SUBSTRATE], Substrat-Reagenz
Anmerkungen
1. Eine Volumenverdopplung oder -halbierung hat keine Auswirkung auf die Berechnung und den labo-
1 x 30 ml [ACTIVATOR__DILUENT], Hepes-Pufferlösung rinternen Faktor.
2. FL ist ein laborinterner Faktor und braucht in einer Messserie nur einmal bestimmt zu werden. Die
Berichrom [PROTEIN__C], [REF] OUVV 17 mit Auswertung entspricht im wesentlichen einer Auswertung über eine Bezugskurve.
4 x → 5 ml Protein C [ACTIVATOR], Protein C-Aktivator 3. Bei jedem Gerätewechsel und für jede Charge Berichrom* Protein C muss der laborinterne Faktor FL
2 x → 3 ml [SUBSTRATE], Substrat-Reagenz bzw. die Bezugskurve neu bestimmt werden.
1 x 30 ml [ACTIVATOR__DILUENT], Hepes-Pufferlösung Automatisch:
Zusammensetzung Spezielle Vorschriften für Gerinnungsmessgeräte sind von Siemens Healthcare Diagnostics auf Anfrage
Protein C-Aktivator: Extrakt aus dem Gift von Agkistrodon contortrix (≤ 0,6 U/ml), stabilisiert und erhältlich.
lyophilisiert Interne Qualitätskontrolle
Hepes-Pufferlösung: HEPES, Polyethylenglycol, Caesiumchlorid, pH 8,25; Normalbereich: Kontroll-Plasma N
Konservierungsmittel: Natriumazid (< 1 g/l) Pathologischer Bereich: Kontroll-Plasma P
Substrat-Reagenz: pyro-Glutaminsäure-prolin-arginin-methoxy-nitroanilid (p-Glu-Pro-Arg-MNA), Bei jeder Kalibration und mindestens alle 8 Stunden an jedem Testtag sollten zwei Kontrollen (eine im
lyophilisiert; Konzentration in der Gebrauchslösung: 4 mmol/l Normalbereich und eine im pathologischen Bereich) gemessen werden. Die Kontrollen sollten wie die
Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen Proben behandelt werden. Jedes Labor sollte seinen Qualitätskontrollbereich entweder anhand der vom
1. Nur zur in-vitro diagnostischen Anwendung. Hersteller der Kontrollen angegebenen Sollwerte und -bereiche oder anhand des im Labor bestimmten
2. Enthält Natriumazid (< 0,1 %) als Konservierungsmittel. Natriumazid kann mit kupfer- oder bleihaltigen Vertrauensbereiches festlegen. Liegt der gemessene Kontrollwert außerhalb des vorher festgelegten
Abflussrohren explosive Verbindungen eingehen. Entsorgen Sie bitte ordnungsgemäß entsprechend Vertrauensbereiches, sollten Reagenzien, der laborinterne Faktor FL bzw. die Kalibrationskurve und das
den örtlichen Richtlinien. Gerinnungsmessgerät überprüft werden.
Vorbereitung der Reagenzien Einschränkungen der Testdurchführung
[ACTIVATOR]: Inhalt der Flasche mit der auf dem Etikett angegebenen Menge [ACTIVATOR-__ Es sind Gerinnungsmeßgeräte geeignet, für die Siemens Anwendungsvorschriften bereitstellt.
DILUENT] lösen und auf +37 °C erwärmen. Siemens hat den Einsatz dieser Reagenzien auf verschiedenen Analysengeräten auf optimale Produkt-
[SUBSTRATE]: Inhalt der Flasche mit der auf dem Etikett angegebenen Menge dest. Wasser lösen und leistung und Einhaltung der Produktspezifikationen überprüft. Vom Benutzer vorgenommene Änderungen
auf +37 °C erwärmen. werden von Siemens nicht unterstützt, da sie die Leistung des Systems und die Testergebnisse beeinflus-
sen können. Es liegt in der Verantwortung des Benutzers, Änderungen an diesen Anleitungen oder die
Vor Gebrauch noch einmal vorsichtig mischen.
Verwendung dieser Reagenzien auf anderen als in den Applikationsvorschriften von Siemens oder diesen
Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen Gebrauchsanweisungen genannten Analysengeräten zu validieren.
Der Testkit ist ungeöffnet bei +2 bis +8 °C zu lagern und bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Ver- Resultate dieses Tests sollten stets in Verbindung mit der Vorgeschichte des Patienten, dem klinischen
fallsdatum verwendbar. Bild und anderen Untersuchungsergebnissen interpretiert werden.
Stabilität nach Rekonstitution: Für Patienten, die mit Aprotinin behandelt werden, können falsch niedrige Protein C-Aktivitäten gefunden
werden3.
Temperatur [ACTIVATOR] [SUBSTRATE]
+37 °C 8 Stunden 1 Woche
Erwartete Werte
70 - 140 % der Norm5
+2 bis +8 °C 2 Wochen 6 Wochen
Systematische Abweichungen von diesen Bereichen können gerätebedingt sein. Gegebenenfalls muss
≤-20 °C 4 Wochen 6 Monate
ein eigener Referenzbereich durch das Labor erstellt werden.
[ACTIVATOR__DILUENT] ist nach erstmaligem Öffnen 6 Monate bei +2 bis +8 °C stabil.
Die verschiedenen Gerinnungsmessgeräte haben individuelle Stabilitätsdaten. Leistungsmerkmale des Tests
Zusätzlich benötigte Materialien: Messbereich
Der Messbereich reicht von 0 bis 140 % der Norm.
Standard-Human-Plasma, [REF] ORKL
Kontroll-Plasma N, [REF] ORKE Präzision und Reproduzierbarkeit
Für Protein C-Werte im Referenzbereich liegt der Variationskoeffizient von Tag zu Tag bei 1,9 %. Bei
Kontroll-Plasma P, [REF] OUPZ pathologischen Werten liegt der Variationskoeffizient von Tag zu Tag bei 0,4 %.
Essigsäure 20 % (nur Zweipunktmethode)
Methodenvergleich
Imidazol-Pufferlösung, [REF] OQAA, oder Bei einem Vergleich von Berichrom* Protein C mit immunchemischchemischen und anderen chromo-
Dade® Owren’s Veronal-Puffer, [REF] oder genen Methoden wurden Korrelationskoeffizienten zwischen 0,74 und 0,90 gefunden1.
Dade® CA-System Puffer, [REF] B4265 oder
Isotonische Kochsalzlösung
Literatur
Siehe englische Gebrauchsanweisung.
Gerinnungsmessgerät (siehe Kapitel "Einschränkungen der Testdurchführung")
Geräte Dade ist ein Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics.
Berichrom* Protein C kann an einer Vielzahl von Gerinnungsmessgeräten verwendet werden. * Berichrom ist ein Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics.
Bedienungsanleitung des Geräteherstellers beachten!
Untersuchungsmaterial
Zur Plasmagewinnung 1 Teil Natriumcitrat-Lösung (0,11 mol/l) mit 9 Teilen Venenblut sorgfältig unter Vermei-
dung von Schaumbildung mischen. Sofort mindestens 10 Minuten bei mindestens 1500 x g zentrifugieren.
Stabilität der Probe: Ausgabe Mai 2008
≤-20 °C 1 Monat
+15 bis +25 °C 8 Stunden
Bei ≤-20 °C gelagerte Plasmen innerhalb von 10 min bei +37 °C auftauen und die Bestimmung dann
innerhalb von 8 Stunden durchführen.

OUVV G15 E0501 (699) 

Berichrom* Protéine C A. Schéma de pipetage pour la méthode cinétique
Semi-micro-test Chromotimer

Berichrom [PROTEIN__C]
Echantillon plasmatique 100 µl 25 µl
Protéine C-Activateur 1000 µl 250 µl
Mélanger et laisser incuber exactement 5 minutes à +37 °C.
Réactif Substrat 200 µl 50 µl
Réactifs pour le dosage de l’activité Protéine C Mélanger et déterminer ∆D.O.405 nm/min.
Domaine d’utilisation Lire la densité optique après exactement 15 secondes et déclencher simultanément le chronomètre.
Faire deux autres lectures à exactement 60 et 120 secondes, calculer la ∆D.O./min, puis la moyenne
Permet la détermination quantitative de la protéine C active fonctionnelle par utilisation d’un substrat
chromogène, comme aide au diagnostic de déficits congénitaux ou acquis. des deux valeurs obtenues.

Intérêt diagnostique Exploitation de la méthode cinétique

La protéine C est un inhibiteur de la coagulation vitamine K-dépendant, qui régule l’activité des facteurs V Calcul du facteur :
et VIII. Un déficit hétérozygote congénital entraîne des thromboses veineuses dont l’incidence augmente Valeur-cible (% de la normale)plasma de référence
avec l’âge2,4. Un déficit homozygote chez les nouveau-nés est associé à des manifestations thromboti- FL = ––––––––––––––––––––––––––––––––––––
ques très sévères. Un déficit acquis peut être dû à un déficit en vitamine K, suite par ex. à des troubles ∆D.O./minplasma de référence

d’absorption ou à un traitement aux anticoagulants oraux. Un déficit en vitamine K pouvant avoir égale-
ment comme résultat la diminution de l’activité d’autres facteurs de la coagulation vitamine K-dépendants, Multiplier la valeur moyenne des ∆D.O./min par le facteur obtenu. On obtient ainsi la concentration de
le risque de thrombose dans ces conditions est faible. Du fait de la courte demi-vie de la protéine C, la protéine C en % de la normale :
mise en place d’un traitement aux anticoagulants oraux peut être à l’origine d’une très faible activité de Protéine Céchantillon (% de la normale) = FL x ∆D.O./minéchantllon
protéine C, entraînant ainsi un risque de nécrose aux AVK.
B. Schéma de pipetage pour la méthode manuelle en deux temps
Berichrom* Protéine C révèle la fraction amidolytique active de la protéine C activée, y compris des molé-
cules non carboxylées, synthétisée par déficit en vitamine K. En présence d’un déficit en vitamine K, on ob- Echantillon Blanc-échantillon
serve ainsi une activité protéine C plus élevée qu’avec la méthode coagulométrique ([REF] OQYG). Pour Echantillon plasmatique 100 µl 100 µl
obtenir un tableau complet de l’origine du déficit en protéine C, il est donc recommandé d’effectuer, en plus Protéine C-Activateur 1000 µl –
du test Berichrom* Protéine C, le test par méthode coagulométrique ainsi qu’un dosage de l’antigène.
Sérum physiologique isotonique – 1000 µl
Principe de la méthode Mélanger et laisser incuber exactement 5 minutes à +37 °C
La protéine C contenue dans l’échantillon à tester est activée par un activateur de venin de serpent spéci- Réactif Substrat 200 µl 200 µl
fique. La protéine Ca ainsi obtenue est alors déterminée selon un test cinétique avec augmentation de la Mélanger aussitôt et déclencher simultanément le chronomètre. Après exactement 5 minutes, ajouter :
densité optique à 405 nm, selon le schéma réactionnel suivant :
Acide acétique à 20 % 1000 µl 1000 µl
Protéine C-Activateur Mélanger aussitôt et déterminer la densité optique dans les 60 minutes contre le blanc-échantillon.
Protéine Céchantillon → Protéine Ca
Protéine Ca Exploitation de la méthode en deux points
p-Glu-Pro-Arg-MNA → p-Glu-Pro-Arg-OH + MNA Calcul du facteur :
Réactifs Valeur-cible (% de la normale)plasma de référence
FL = ––––––––––––––––––––––––––––––––––––
Contenu des conditionnements D.O.plasma de référence

Berichrom [PROTEIN__C], [REF] OUVV 15 contenant Multiplier la densité optique de l’échantillon par le facteur obtenu.
3 x → 10 ml [ACTIVATOR], Protéine C-Activateur Protéine Céchantillon (% de la normale) = FL x D.O.échantllon
3 x → 3 ml [SUBSTRATE], Réactif Substrat Remarques
1 x 30 ml [ACTIVATOR__DILUENT], Solution tampon Hépès 1. La multiplication ou la division par deux des prises d’essai n’a pas d’influence sur l’exploitation des
résultats.
Berichrom [PROTEIN__C], [REF] OUVV 17 contenant 2. FL est un facteur interne au laboratoire. Ne le calculer qu’une seule fois par série de mesures. L’exploi-
4 x → 5 ml Protein C [ACTIVATOR], Protéine C-Activateur tation ainsi obtenue correspond essentiellement à une exploitation à l’aide d’une courbe d’étalonnage.
3. Déterminer un nouveau facteur interne au laboratoire ou une nouvelle courbe d’étalonnage à chaque
2 x → 3 ml [SUBSTRATE], Réactif Substrat changement d’appareil et à chaque nouveau lot de Berichrom* Protéine C.
1 x 30 ml [ACTIVATOR__DILUENT], Solution tampon Hépès Méthode automatique :
Composition Les adaptations spécifiques aux différents appareils de coagulation sont envoyées sur demande par Sie-
Protéine C-Activateur : extrait de venin d’Agkistrodon contortrix (≤ 0,6 U/ml), stabilisé et lyophi- mens Healthcare Diagnostics.
lisé. Contrôle de qualité interne
Solution tampon Hépès : Hépès, polyéthylène glycol, chlorure de caesium, pH 8,25; Domaine normal : Plasma de contrôle N
Conservateur : azide de sodium (< 1 g/l) Domaine thérapeutique : Plasma de contrôle P
Réactif Substrat : pyro-acide glutamique-proline-arginine-méthoxy-nitroanilide (p-Glu-Pro-Arg- Introduire deux contrôles (un dans le domaine normal et un dans le domaine thérapeutique) à chaque
MNA), lyophilisé ; concentration de la solution d’emploi : 4 mmol/l nouvel étalonnage et au moins toutes les 8 heures sur une journée de travail. Traiter les contrôles comme
Mises en garde et précautions d’emploi des échantillons de patients. Chaque laboratoire doit déterminer son propre domaine de confiance soit à
partir des valeurs théoriques et des domaines de confiance indiqués par le fabricant des contrôles utilisés,
1. Réactifs réservés à un usage de diagnostic in vitro. soit à partir de domaines de confiance déterminés dans son laboratoire. Si les valeurs obtenues pour les
2. Contient de l’azite de sodium (< 0,1 %) comme conservateur. L’ azite de sodium peut réagir avec les contrôles sortent des domaines de confiance préalablement établis, procéder à la vérification des réactifs,
tuyaux d’évacuation en cuivre ou en plomb et former des composés explosifs. L’évacuer conformé- du facteur interne ou de la courbe d’étalonnage, et de l’appareil de coagulation utilisé.
ment aux réglementations locales.
Préparation des réactifs Limites de réalisation du test
Siemens propose des protocoles d’adaptation pour les appareils de coagulation adaptés à la réalisation du test.
[ACTIVATOR] : reconstituer le contenu d’un flacon avec le [ACTIVATOR__DILUENT] indiqué sur l’éti-
quette, et chauffer la solution à +37 °C. Des valeurs d’activité protéine C diminuées à tort peuvent être obtenues sur des patients traités à l’aprotinine3.
Siemens a validé l’utilisation de ces réactifs sur plusieurs analyseurs afin d’optimiser les performances du
[SUBSTRATE] : reconstituer le contenu d’un flacon avec le volume d’eau distillée indiqué sur l’étiquette,
produit et répondre à ses spécifications. Les modifications apportées par l’utilisateur ne sont pas sous la
et chauffer la solution à +37 °C.
responsabilité de Siemens dans la mesure où elles peuvent affecter les performances du système et les ré-
Bien mélanger à nouveau les réactifs avant emploi. sultats des dosages. Il est de la responsabilité de l’utilisateur de valider toutes modifications apportées à ces
Stabilités et conditions de conservation instructions ou à l’utilisation des réactifs sur les analyseurs autres que ceux mentionnés dans les protocoles
Dans leur conditionnement d’origine non ouvert, les réactifs du coffret se conservent à +2/+8 °C jusqu’à la d’application Siemens ou dans la présente notice d’utilisation.
date de péremption indiquée sur l’étiquette. Les résultats de ce test doivent toujours être interprétés en rapport avec les antécédents médicaux du
Stabilités après reconstitution : patient, les signes cliniques et autres constatations.

Température [ACTIVATOR] [SUBSTRATE] Valeurs attendues

70 - 140 % de la normale5
+37 °C 8 heures 1 semaine
Des déviations systématiques par rapport à ce domaine peuvent être dues à l’appareil utilisé. Le labora-
+2/+8 °C 2 semaines 6 semaines
toire devra éventuellement déterminer son propre domaine de référence.
≤-20 °C 4 semaines 6 mois
Après première ouverture, la [ACTIVATOR__DILUENT] reste stable pendant 6 mois à +2/+8 °C. Caractéristiques du test
Chaque appareil de coagulation a des données de stabilité spécifiques. Domaine de mesure
Autres réactifs et matériel nécessaires: Le domaine de mesure s’étend de 0 à 140 % de la normale.
Plasma standard humain, [REF] ORKL Précision et reproductibilité
Plasma de contrôle N, [REF] ORKE Le coefficient de variation pour la reproductibilité a été trouvé à 1,9 % pour des valeurs de protéine C
trouvées à l’intérieur du domaine de référence, et à 0,4 % pour des valeurs pathologiques.
Plasma de contrôle P, [REF] OUPZ
Acide acétique à 20 % (uniquement pour la méthode en deux points)
Comparaison avec une autre méthode
Une comparaison de Berichrom* Protéine C avec une méthode immunochimique et une autre méthode
Tampon Imidazole, [REF] OQAA, ou chromogénique a donné des coefficients de corrélation compris entre 0,7 et 0,901.
Dade® Tampon véronal d’Owren, [REF] B4234, ou
Dade® Tampon pour systèmes CA, [REF] B4265, ou
Littérature
Voir la notice d’utilisation en anglais.
Sérum physiologique
Appareil de coagulation (cf. « Limites de réalisation du test ») Dade est une marque commerciale de Siemens Healthcare Diagnostics.
Appareils de coagulation * Berichrom est une marque commerciale de Siemens Healthcare Diagnostics.
Berichrom* Protéine C peut être utilisé sur un grand nombre d’appareils de coagulation. Respecter les
instructions indiquées par le fabricant de l’appareil !
Echantillons à tester
Pour obtenir les plasmas, prélever 1 volume de solution de citrate de sodium (0,11 mol/l) avec 9 volumes
Edition Mai 2008
de sang veineux, et mélanger avec précaution en évitant la formation de mousse. Centrifuger aussitôt
pendant au moins 10 minutes à au moins 1500 x g.
Stabilité de l’échantillon :
≤-20 °C 1 mois
+15/+25 °C 8 heures
Berichrom* Proteina C
Les plasmas conservés à ≤-20 °C doivent être décongelés en 10 minutes maximum à +37 °C, et testés
dans les 8 heures qui suivent.
Réalisation du test
Berichrom [PROTEIN__C]
Reagenti per la determinazione dell’attività della proteina C
Méthode manuelle :
Semi-micro-test : Settore d’impiego
Cuve : 1 cm de trajet optique Per la determinazione quantitativa della proteina C funzionalmente attiva, utilizzando un substrato cromo-
Longueur d’onde : 405 nm genico come ausilio nella diagnosi delle carenze congenite ed acquisite.
Température du test : +37 °C
Préchauffer le Protéine C-Activateur et le Réactif Substrat ainsi que les cuves ou tubes plastique à +37 °C.

OUVV G15 E0501 (699) 

Significato diagnostico Moltiplicando il fattore ottenuto per il ∆E/min dei campioni; si ottiene la proteina C in % della norma :
La proteina C è un inibitore della coagulazione dipendente dalla vitamina K che regola l’attività dei fattori F Proteina Ccampione(% d.N.) = FL x ∆E/mincampione
V e F VIII. Deficit congeniti eterozigoti comportano una incidenza elevata, dipendente dall’età, di trombosi
venose2,4. Un deficit omozigote nei neonati è associato a manifestazioni trombotiche fra le più gravi. Un B. Schema di distribuzione per il metodo a due punti
deficit acquisito può essere dovuto a carenza di vitamina K, ad es. come risultato di disturbi di assorbimen- Campione Bianco campione
to o terapia con anticoagulanti orali. Poiché nella carenza di vitamina K anche i fattori della coagulazione, Campione di plasma 100 µL 100 µL
dipendenti dalla vitamina K diminuiscono la loro attività, il rischio di trombosi in queste condizioni è ridotto.
A causa del breve tempo di emivita della proteina C, si possono avere livelli molto bassi di attività di protei- Attivatore proteina C 1000 µL –
na C con rischio di necrosi cumarinica nella fase iniziale della terapia con anticoagulanti orali. Soluzione isotonica salina – 1000 µL
Il Berichrom* Proteina C consente la determinazione della parte amidolitica attiva della Proteina C attivata Miscelare e incubare per 5 minuti esatti a +37 °C.
e della molecola non carbossilata sintetizzata in caso di carenza di vitamina K. In condizioni di carenza Reagente/Substrato 200 µL 200 µL
di vitamina K, si trova pertanto una più elevata attività di proteina C con il Berichrom rispetto al metodo Miscelare immediatamente e contemporaneamente far partire il cronometro. Dopo 5 minuti esatti,
coagulometrico ([REF] OQYG). Per ottenere un quadro completo delle cause di carenza di proteina C è aggiungere:
consigliabile utilizzare sia il metodo coagulometrico sia il metodo per la determinazione dell’antigene. Acido acetico al 20 % 1000 µL 1000 µL
Principio del metodo Miscelare subito e determinare l’estinzione entro 60 minuti contro il bianco campione.
La proteina C del campione in esame viene attivata con un attivatore specifico da veleno di serpente. La Valutazione, metodo a due punti
quantità di proteina C attivata viene determinata con test cinetico, misurando l’aumento dell’estinzione a Calcolo del fattore:
405 nm, secondo il seguente schema di reazione:
Valore nominale (% della norma)plasma di riferimento
Attivatore Proteina C FL = ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––
Proteina Ccampione → Proteina Ca Eplasma di riferimento

Proteina Ca Moltiplicare il fattore ottenuto per il valore di estinzione del campione :
p-Glu-Pro-Arg-MNA → p-Glu-Pro-Arg-OH + MNA
Proteina Ccampione(% d.N.) = FL x Ecampione
Reagenti Note
Contenuto della confezione 1. Il raddoppio o il dimezzamento dei volumi nel test non influenza il calcolo o il fattore di calcolo interno
Berichrom [PROTEIN__C], [REF] OUVV 15 con del laboratorio.
3 x → 10 mL [ACTIVATOR], Attivatore Proteina C 2. L’FL è un fattore di calcolo interno del laboratorio ed è sufficiente determinarlo una sola volta in una serie
di misure. Tale valutazione corrisponde in generale a una valutazione tramite una curva di calibrazione.
3 x → 3 mL [SUBSTRATE], Reagente substrato
3. Ad ogni modifica dello strumento e per ogni nuovo lotto di Berichrom* Proteina C, occorre determinare
1 x 30 mL [ACTIVATOR__DILUENT], Soluzione tampone Hepes un nuovo fattore FL interno del laboratorio e/o una nuova curva di calibrazione.
Berichrom [PROTEIN__C], [REF] OUVV 17 con Automatico:
Presso la Siemens Healthcare Diagnostics sono disponibili, su richiesta, speciali istruzioni per analizzatori
4 x → 5 mL Protein C [ACTIVATOR], Attivatore Proteina C per coagulazione.
2 x → 3 mL [SUBSTRATE], Reagente substrato
Controllo di qualità interno
1 x 30 mL [ACTIVATOR__DILUENT], Soluzione tampone Hepes Intervallo normale: Plasma di controllo N
Composizione Intervallo patologico: Plasma di controllo P
Attivatore Proteina C: estratto dal veleno di Agkistrodon contortrix (≤ 0,6 U/mL), stabilizzato e Per ogni calibrazione ed almeno ogni 8 ore per ciascun ciclo analitico, devono essere misurati due controlli
liofilizzato. (uno nell’intervallo normale ed uno nell’intervallo patologico): I controlli devono essere analizzati come il
Soluzione tampone Hepes: HEPES, polietilenglicole, cloruro di cesio, pH 8,25. Conservante: sodio campione. Ogni laboratorio dovrebbe determinare il proprio intervallo di controllo qualità, o sulla base degli
azide (< 1 g/L) intervalli di accettabilità indicati dal produttore oppure sulla base di propri intervalli di accettabilità determinati
nel laboratorio. Se i valori del controllo misurati si trovano al di fuori dell’intervallo di accettabilità precedente-
Reagente substrato: acido piroglutaminico-prolin-arginin-metossi-nitroanilide (p-Glu-Pro-Arg- mente determinato, il reagente, il fattore FL interno del laboratorio e/o la curva di calibrazione e l’analizzatore
MNA) liofilizzato; concentrazione della soluzione d’uso: 4 mmol/L. per coagulazione devono essere esaminati.
Avvertenze e precauzioni
1. Solo per uso diagnostico in vitro. Limitazioni della procedura
2. Contiene azoturo di sodio (< 0.1 %) come conservante. L’azoturo di sodio può reagire con le tubazioni Sono indicati analizzatori per coagulazione per i quali la Siemens fornisce le istruzioni operative.
in rame o piombo nelle linee di scarico formando composti esplosivi. Provvedere allo smaltimento in In pazienti trattati con aprotinina si può rilevare un’attività di proteina C falsamente diminuita3.
modo appropriato e secondo le normative locali. Siemens ha validato l’uso di questi reagenti su vari analizzatori per ottimizzare le prestazioni e rispettare le
Preparazione dei reagenti specifiche dei prodotti. Le modifiche definite dall’utente non sono supportate da Siemens poiché possono
influire sulle prestazioni del sistema e sui risultati del test. Pertanto è responsabilità dell’utente validare
[ACTIVATOR]: sciogliere il contenuto del flacone con la quantità di [ACTIVATOR__DILUENT] indicata in tutte le modifiche apportate a queste istruzioni, l’uso dei reagenti su analizzatori diversi da quelli inclusi nei
etichetta e riscaldare a +37 °C. fogli di istruzioni o nelle istruzioni d’uso fornite da Siemens.
[SUBSTRATE]: sciogliere il contenuto del flacone con la quantità di acqua distillata indicata in etichetta I risultati di questo test devono essere sempre interpretati alla luce della anamnesi del paziente, della
e riscaldare a +37 °C. presentazione clinica e valutando contestualmente l’esito di altri accertamenti.
Mescolare accuratamente ancora una volta prima dell’uso.
Conservazione e stabilità
Valori attesi
70 - 140 % della norma5
Conservare il kit, ben chiuso, a +2/+8 °C. e utilizzare entro la data di scadenza indicata sull’etichetta. Le deviazioni sistematiche da questi intervalli possono essere dovute allo strumento utilizzato. Il laborato-
Stabilità dopo ricostituzione: rio potrebbe, eventualmente, calcolare un proprio intervallo di riferimento.
Temperatura [ACTIVATOR] [SUBSTRATE] Caratteristiche specifiche del test
+37 °C 8 ore 1 settimana Intervallo di misura
+2/+8 °C 2 settimane 6 settimane L’ambito di misura è compreso tra 0 e 140 % della norma.
≤-20 °C 4 settimane 6 mesi Precisione e riproducibilità
La [ACTIVATOR__DILUENT], una volta aperta la confezione, è stabile per 6 mesi a +2/+8 °C. Il coefficiente di variazione inter-serie per i valori di proteina C nell’intervallo di riferimento è del 1,9 %; Il
I vari analizzatori per coagulazione hanno dati di stabilità individuali. coefficiente di variazione inter-serie nell’intervallo patologico è del 0,4 %.
Confronto tra metodi
Altro materiale necessario ma non fornito:
Da un confronto del Berichrom* Proteina C con altri metodi immunochimici e cromogenici, è risultato un
Plasma umano standard, [REF] ORKL coefficiente di correlazione compreso fra 0,74 e 0,901.
Plasma di controllo N, [REF] ORKE
Plasma di controllo P, [REF] OUPZ
Bibliografia
Vedere le istruzioni per l’uso in lingua inglese.
Acido acetico al 20 % (solo per il metodo a due punti)
Soluzione tampone imidazolo, [REF] OQAA oppure Dade è un marchio di Siemens Healthcare Diagnostics.
Dade® Tampone Veronal di Owren, [REF] B4234 oppure * Berichrom è un marchio di Siemens Healthcare Diagnostics.
Dade® Tampone Sistema CA, [REF] 4265 oppure
Soluzione fisiologica salina
Analizzatore per coagulazione (v. capitolo "Limitazioni della procedura").
Strumentazione Edizione Maggio 2008
Il Berichrom* Proteina C può essere utilizzato su molteplici analizzatori per coagulazione.

Berichrom* Proteína C
Rispettare le istruzioni operative del produttore dell’analizzatore!
Campioni in esame
Per ottenere il plasma, mescolare 1 parte di soluzione di citrato sodico (0,11 mol/L) con 9 parti di sangue

Berichrom [PROTEIN__C]
venoso, evitando la formazione di schiuma. Centrifugare subito per almeno 10 minuti ad almeno 1500 x g.
Stabilità del campione:
≤ -20 °C 1 mese
+15/+25 °C 8 ore Reactivos para la determinación de actividad de la proteína C
Scongelare, entro 10 minuti a +37 °C i campioni di plasma conservati a ≤ -20 °C ed eseguire la deter-
minazione entro 8 ore. Campos de aplicación
Determinación cuantitativa de la activa funcional de la proteína C para el diagnóstico de estados de defi-
Procedura ciencia heredados o adquiridos, usando un sustrato cromógeno.
Manuale:
Test semi-micro : Significado diagnóstico
Cuvette: percorso ottico 1 cm La proteína C es un inhibidor de la coagulación, que depende de la vitamina K y que regula la actividad de
factor V y del factor VIII. Una deficiencia congénita heterocigota de proteína C conduce a una alta inciden-
Lunghezza d’onda: 405 nm cia de trombosis venosa dependiente de la edad 2,4. La deficiencia homocigota en los recién nacidos está
Temperatura: + 37 °C asociada con trastornos trombóticos graves. Una deficiencia adquirida puede ser causada por carencia
Prima dell’esecuzione del test, riscaldare l’Attivatore Proteina C, il Reagente substrato e le cuvette/pro- de vitamina K, p. ej., como resultado de trastornos en la absorción o por anticoagulación oral. Como por
vette di plastica a +37 °C. la deficiencia de vitamina K, la actividad de otros factores de la coagulación, que también dependen de
A. Schema di distribuzione per il metodo cinetico esta vitamina, está disminuida, existe en estas condiciones un riesgo menor de trombosis. Debido al corto
tiempo de vida media de la proteína C, la medicación con anticoagulantes orales puede disminuir mucho
Determinazione semi-micro Chromotimer la actividad de la proteína C, con el peligro de ocasionar una necrosis cumarínica.
Campione di plasma 100 µL 25 µL El Berichrom* Proteína C abarca la porción amidolíticamente activa de la proteína C activada, incluyendo
Attivatore proteina C 1000 µL 250 µL las moléculas no carboxiladas sintetizadas bajo deficiencia de vitamina K. Bajo la deficiencia de vitamina K
Miscelare ed incubare per 5 minuti esatti a +37 °C. se va a encontrar una actividad de proteína C más alta que por los métodos coagulimétricos ([REF] OQYG).
Reagente-Substrato 200 µL 50 µL Para poder obtener un cuadro completo sobre las causas de una deficiencia en proteína C, se recomienda
Miscelare e determinare ∆E405 nm/min. usar también métodos coagulimétricos y las técnicas de determinación de antígenos.
Leggere l’estinzione dopo circa 15 secondi e contemporaneamente far partire il cronometro. Ripetere
la lettura dopo 60 e 120 secondi esatti, calcolare i rispettivi ∆E/min. tramite la differenza di estinzione Principio del método
e poi determinare la media di entrambi i valori di misurazione. La proteína C de las muestras de pacientes es activada mediante un activador específico de veneno de
serpiente. La proteína Ca obtenida, se va a determinar por un test cinético, por aumento de la extinción a
Valutazione, metodo cinetico 405 nm, de acuerdo con el siguiente esquema:
Calcolo del fattore :
Activador de Proteína C
Valore teorico (% della norma)plasma di riferimento Proteína Cmuestra →Proteína Ca
FL = ––––––––––––––––––––––––––––––––––––
∆E/minplasma di riferimento Proteína Ca

p-Glu-Pro-Arg-MNA → p-Glu-Pro-Arg-OH + MNA

OUVV G15 E0501 (699) 

Reactivos Valoración método de dos puntos
Cálculo del factor:
Contenido del envase comercial
Berichrom [PROTEIN__C], [REF] OUVV 15 con Valor teórico (% del valor normal)plasma de referencia
FL = –––––––––––––––––––––––––––––––––––––––
3 x → 10 ml [ACTIVATOR], Activador de proteína C E plasma de referencia
3 x → 3 ml [SUBSTRATE], Reactivo sustrato Multiplicar la Extinción de las muestras por el factor resultante
1 x 30 ml [ACTIVATOR__DILUENT], Solución tampón Hepes Proteína Cmuestra(% del v. n.) = FL x Emuestra
Berichrom [PROTEIN__C], [REF] OUVV 17 con Advertencias:
4 x → 5 ml Protein C [ACTIVATOR], Activador de proteína C 1. Una duplicación o una división del volumen no ejerce ninguna influencia en los cálculos ni sobre el
factor interno de laboratorio.
2 x → 3 ml [SUBSTRATE], Reactivo sustrato
2. FL es un factor de cálculo interno de laboratorio y sólo necesita ser determinado una vez para una
1 x 30 ml [ACTIVATOR__DILUENT], Solución tampón Hepes serie de medidas. Su valoración corresponde en esencia a una valoración efectuada sobre una curva
de referencia.
Composición
3. Para cada cambio de aparato y para cada cambio de lote de Berichrom* Proteína C se debe determi-
Activador de proteína C: Extracto obtenido del veneno de Agkistrodon contortrix (≤ 0,6 U/ml), esta- nar nuevamente el factor interno del laboratorio FL o la curva de referencia
bilizado y liofilizado.
Solución tampón Hepes: HEPES, polietilenglicol, cloruro de cesio, pH 8,25 Automático:
Agente de conservación: Azida sódica (< 1g/l) Instrucciones especiales para los aparatos de medida de la coagulación se pueden pedir a Siemens
Healthcare Diagnostics.
Reactivo sustrato: piro-ácido glutámico-prolin-arginin-metoxi-nitroanilid (p-glu-pro-arg-MNA),
liofilizado; concentración de la solución de trabajo: 4 mmol/l. Control de calidad interno
Advertencias y medidas de seguridad Rango normal: Plasma de control N
1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro. Rango patológico: Plasma de control P
2. Contiene azida de sodio (< 0,1 %) como conservante. La azida de sodio puede reaccionar con tube- Para cada calibración y por lo menos cada 8 horas, cada día de trabajo, se deben medir dos controles (uno
rías de cobre o de plomo en los conductos de drenaje y formar compuestos explosivos. Elimine este en el rango normal y uno en el rango patológico). Los controles deben tratarse como las muestras. Cada
producto de forma apropiada conforme a la normativa local. laboratorio debe establecer un rango de control de calidad propio ya sea basados en los valores teórico y
rangos dados por el fabricante o en el rango de confianza determinado en el laboratorio. Si el valor medido
Preparación de los reactivos del control se encuentra por fuera del rango de confianza establecido, se deben comprobar los reactivos,
[ACTIVATOR]: Disolver el contenido del frasco en la [ACTIVATOR__DILUENT] indicada en la etiqueta y el facto interno FL del laboratorio o la curva de referencia y el aparato de medida de la coagulación.
calentar a +37 °C.
[SUBSTRATE]: Disolver el contenido del frasco en la cantidad de agua destilada indicada en la etiqueta
Limitaciones del procedimiento
y calentar a +37 °C. Existen aparatos de medida de la coagulación, para los cuales se pueden obtener en Siemens las etapas de uso.
Agitar cuidadosamente una vez más antes de usar. Para pacientes que sean tratados con Aprotinina, se pueden encontrar actividades de proteína C bajas falsas3.
Siemens ha validado el uso de los reactivos en varios analizadores para optimizar el rendimiento del
Estabilidad y almacenaje producto y cumplir con las especificaciones del mismo. Las modificaciones definidas por el usuario no
El testkit conservado cerrado entre +2 y +8 °C, es estable hasta la fecha de vencimiento dada en la están garantizadas por Siemens dado que pueden afectar al rendimiento del sistema y a los resultados
etiqueta. del ensayo. Es responsabilidad del usuario validar las modificaciones realizadas a estas instrucciones o
Estabilidad después de la reconstitución: el uso de los reactivos en analizadores distintos a los incluidos en las hojas de aplicaciones de Siemens
o en estas instrucciones de uso.
Temperatura [ACTIVATOR] [SUBSTRATE] Los resultados de esta prueba deberán interpretarse siempre de acuerdo con la historia clínica del pacien-
+37 °C 8 horas 1 semana te, la sintomatologia clínica y otras observaciones.
entre +2 y +8 °C 2 semanas 6 semanas Valores esperados
≤-20 °C 4 semanas 6 meses 70 - 140 % del valor normal5
La [ACTIVATOR__DILUENT], una vez abierta, es estable durante 6 meses entre +2 y +8 °C. Desviaciones sistemáticas de este valor pueden ser ocasionadas por el aparato. En caso dado deberá
Los diferentes aparatos de medida de la coagulación tienen datos de estabilidad individuales. cada laboratorio establecer su propio rango de referencia.
Materiales adicionales necesarios: Características del test
Plasma humano estándar, [REF] ORKL Rango de medida
Plasma de control N, [REF] ORKE El rango de medida va desde 0 hasta 140 % del valor normal.
Plasma de control P, [REF] OUPZ Precisión y reproducibilidad
Ácido acético al 20 % (sólo para el método de dos puntos) Para los valores de proteína C en el rango de referencia, el coeficientes de variación de día a día es de
Solución tampón de imidazol, [REF] OQAA o 1,9 %. Para el rango patológico el coeficiente de variación día a día es de 0,4 %.
Dade® Tampón Veronal de Owren, [REF] B4234 o Comparación de métodos
Dade® Sistema tampón CA, [REF] B4265 o Al comparar Berichrom* Proteína C con otros métodos inmunoquímicos y otros cromogénicos se encon-
Solución salina fisiológica traron coeficientes de correlación entre 0,74 y 0,901.
Aparatos de medida de la coagulación (Observar el capítulo "Limitaciones del procedimiento") Literatura
Aparatos Ver instrucciones de utilización en inglés.
El Berichrom* Proteína C puede ser utilizado en un gran número de aparatos de medida de la coagulación. Dade es una marca comercial de Siemens Healthcare Diagnostics.
¡Siga las condiciones de manejo dadas por el fabricante!.
* Berichrom es una marca comercial de Siemens Healthcare Diagnostics.
Material a investigar
Para obtener el plasma, mezclar cuidadosamente 1 parte de solución de citrato de sodio (0,11 mol/l) con
9 partes de sangre venosa, evitando la formación de espuma. Centrifugar a continuación aprox. a 1500 x g
durante 10 minutos.
Estabilidad de la muestra: Edición Mayo 2008
≤-20 °C 1 mes

Berichrom* Proteína C
entre +15 y +25 °C 8 horas
Las muestras almacenadas a ≤-20 °C se deben descongelar en un plazo de 10 minutos. a +37 °C y se
deben medir dentro de las 8 horas siguientes.
Procedimiento
Manual:
Semimicro determinación
Berichrom [PROTEIN__C]
Cubeta: trayectoria óptica de 1 cm Reagentes para determinação da actividade da proteína C
Longitud de onda: 405 nm
Temperatura del test: +37 °C Campo de aplicação
El Activador proteína C, el Reactivo substrato, así como las cubetas o tubos plásticos se deben precalen- Para determinação quantitativa da proteína C funcionalmente activa, utilizando um substrato cromogénico
tar a +37 °C antes de empezar con el test. como apoio do diagnóstico das deficiências hereditárias e adquiridas.

A. Esquema de pipeteo para el método cinético Significado diagnóstico

A proteína C é um inibidor da coagulação dependente da vitamina K, que regula a actividade de F V
Semi-micro test Chromotimer e F VIII. A deficiência heterozigótica congénita leva a uma elevada incidência de tromboses venosas,
Muestra de plasma 100 µl 25 µl dependentes da idade2,4. A deficiência homozigótica nos recém-nascidos está associada a manifesta-
Activador de proteína C 1000 µl 250 µl ções trombóticas graves. A deficiência adquirida pode ser devida a uma deficiência da vitamina K, como
Mezclar e incubar exactamente 5 minutos a +37 °C. resultado, p. ex., de perturbações da reabsorção ou de uma terapia de anticoagulantes orais. Uma vez
Reactivo substrato 200 µl 50 µl que na deficiência de vitamina K, a actividade dos outros factores de coagulação dependentes da vitamina
K também é reduzida, o risco de trombose nestas condições é pequeno. Devido ao breve valor de semi-
Mezclar y determinar el ∆E405 nm/min. vida da proteína C, ao iniciar-se a terapia de anticoagulantes orais, podem ocorrer níveis muito baixos de
Leer la extinción después de 15 segundos y accionar simultáneamente el cronómetro. Repetir la medi- actividade de proteína C, com o risco de necroses cumarínicas.
da exactamente después de 60 y 120 segundos. Determinar por diferencia el correspondiente ∆E/min. Berichrom* Proteina C detecta a porção amidoliticamente activa da proteína C activada, incluindo as
y calcular el valor promedio de ambas determinaciones. moléculas não carboxiladas sintetizadas sob a deficiência da vitamina K. Por isso, em condições de
Valoración método cinético deficiência da vitamina K, é encontrada uma maior actividade de proteína C do que a encontrada com o
Cálculo del factor: método da coagulometria ([REF] OQYG). Por isso, para se obter um quadro completo sobre a causa de
uma deficiência da proteína C, é aconselhável executar o método de coagulometria e a determinação
Valor teórico (% del valor normal)plasma de referencia antigénica.
FL = ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––
∆E/min. plasma de referencia
Princípio metodológico
Multiplicar los ∆E/min. de las muestras por el factor resultante; la proteína C se obtiene en % del valor A proteína C da amostra do paciente é activada com um activador específico de veneno de serpente. A
normal. proteína resultante Ca é determinada com um teste cinético medindo o aumento da absorvância a 405 nm,
Proteína Cmuestra(% del v. n.) = FL x ∆E/min.muestra de acordo com o seguinte esquema de reacção:
Esquema de pipeteo para el método de dos puntos Activador de proteína C
Protein Camostra → Protein Ca
Muestra Blanco de muestra Protein Ca
Muestra de plasma 100 µl 100 µl p-Glu-Pro-Arg-MNA → p-Glu-Pro-Arg-OH + MNA
Activador de proteína C 1000 µl –
Solución salina isotónica – 1000 µl Reagentes
Mezclar e incubar exactamente 5 minutos a +37 °C. Conteúdo da embalagem
Reactivo Substrato 200 µl 200 µl Berichrom [PROTEIN__C], [REF] OUVV 15 com
Mezclar de inmediato y accionar simultáneamente el cronómetro. Después de 2 minutos exactos agregar: 3 x → 10 ml [ACTIVATOR], activador de proteína C
Ácido acético 20 % 1000 µl 1000 µl 3 x → 3 ml [SUBSTRATE], reagente de substrato
Mezclar de inmediato y leer la extinción de las muestras contra el blanco de muestras en un plazo 1 x 30 ml [ACTIVATOR__DILUENT], solução tampão Hepes
de 60 minutos.
Berichrom [PROTEIN__C], [REF] OUVV 17 com
4 x → 5 ml Protein C [ACTIVATOR], activador de proteína C
2 x → 3 ml [SUBSTRATE], reagente de substrato
1 x 30 ml [ACTIVATOR__DILUENT], solução tampão Hepes
OUVV G15 E0501 (699) 
Composição Automática:
Activador de proteína C: Extracto do veneno de Agkistrodon contortrix (≤ 0,6 U/ml), estabilizado e A pedido, a Siemens Healthcare DIagnostics disponibiliza instruções especiais para os coagulómetros.
liofilizado Controlo de qualidade interno
Solução tampão Hepes: HEPES, polietilenoglicol, cloreto de césio, pH 8,25; Intervalo normal: Plasma de controlo N
Conservante: Azida de sódio (< 1 g/l) Intervalo patológico: Plasma de controlo P
Reagente de substrato: Ácido piroglutamínico-prolina-arginina-metoxi-nitroanilida (p-Glu-Pro-Arg- Para cada calibração e pelo menos todas as 8 horas em cada dia de teste, deverão ser medidos dois
MNA), liofilizado; concentraçãoda solução de uso: 4 mmol/l controlos (um no intervalo normal e um no intervalo patológico). Os controlos deverão ser tratados como
Advertências e medidas de precaução a amostra. Cada laboratório deverá determinar o seu intervalo de controlo de qualidade próprio com base
1. Só para uso diagnóstico in-vitro. nos valores e intervalos teóricos indicados pelo fabricante dos controlos, ou com base no intervalo de
2. Contém azida de sódio (< 0,1 %) como conservante. A azida de sódio pode reagir com os tubos de confiança próprio determinado no laboratório. Se os valores de controlo medidos se situarem foram do
cobre ou de chumbo das canalizações de esgotos formando compostos explosivos. Elimine este intervalo de confiança determinado anteriormente, é necessário controlar os reagentes, o factor de cálculo
produto de forma correcta e de acordo com as regulamentações locais. interno do laboratório FL ou curva de calibração e o coagulómetro.
Preparação dos reagentes Limitações do Procedimento
queta y calentar a +37 °C. Os coagulómetros indicados são aqueles para os quais a Siemens disponibiliza instruções de utilização.
[ACTIVATOR]: Dissolver o conteúdo do frasco com a quantidade de [ACTIVATOR__DILUENT] indicada Para os pacientes tratados com aprotinina, podem obter-se falsos níveis baixos de actividade de proteína C3.
no rótulo e aquecer a +37 °C. A Siemens validou a utilização destes reagentes em vários analisadores, com o intuito de optimizar o de-
[SUBSTRATE]: Dissolver o conteúdo do frasco com a quantidade de água destilada indicada no rótulo sempenho do produto e satisfazer as especificações do produto. As modificações definidas pelo utilizador
e aquecer à temperatura de +37 °C. não são suportadas pela Siemens, na medida em que podem afectar o desempenho do sistema e os
resultados do ensaio. Constitui responsabilidade do utilizador validar as modificações efectuadas nestas
Antes de usar, agitar uma vez mais cuidadosamente. instruções ou em relação ao uso dos reagentes noutros analisadores que não os incluídos nas folhas de
Estabilidade e condições de conservação instruções de aplicação da Siemens ou nestas instruções de utilização.
O kit de teste deverá ser conservado, não aberto, entre +2 e +8 °C e pode ser utilizado até à data de Os resultados deste teste devem sempre ser interpretados em conjunto com o histórico médico do doente,
validade indicada no rótulo. estado clínico e outros dados de interesse.
Estabilidade após a reconstituição:
Valores expectáveis
Temperatura [ACTIVATOR] [SUBSTRATE] 70 - 140 % da norma5
+37 °C 8 horas 1 semana Os desvios sistemáticos destes intervalos podem ser condicionados pelo equipamento. Se for necessário,
+2 a +8 °C 2 semanas 6 semanas o laboratório deverá determinar um intervalo de referência próprio.
≤-20 °C 4 semanas 6 meses Características de performance do teste
Depois de ser aberta pela primeira vez, a [ACTIVATOR__DILUENT] mantém-se estável durante 6 meses Intervalo de medição
entre + 2 e +8 °C. O intervalo de medição vai de 0 a 140 % da norma.
Os diferentes coagulómetros possuem características de estabilidade individuais. Precisão e reprodutibilidade
Outros materiais necessários: O coeficiente de variação no dia-a-dia para os valores de proteína C no intervalo de referência situa-se em 1,9
Plasma humano standard, [REF] ORKL %. Para os valores patológicos, o coeficiente de variação no dia-a-dia situa-se em 0,4 %.
Plasma de controlo N, [REF] ORKE Comparação de métodos
Numa comparação de Berichrom* Proteina C com métodos imuno-químicos e outros métodos cromogé-
Plasma de controlo P, [REF] OUPZ nicos, foram encontrados coeficientes de correlação situados entre 0,74 e 0,901.
Ácido acético 20 % (só para o método de dois pontos)
Solução tampão Imidazol, [REF] OQAA, ou Bibliografia
Tampão Veronal de Owren da Dade® , [REF] B4234 ou Ver Instruções em inglês.
Tampão sistema CA da Dade® , [REF] B4265 ou Dade é uma marca comercial da Siemens Healthcare Diagnostics.
Solução fisiológica de cloreto de sódio * Berichrom é uma marca comercial da Siemens Healthcare Diagnostics.
Coagulómetro (veja o capítulo "Limites de execução do teste")
Equipamento
Berichrom* Proteina C pode ser utilizado numa multiplicidade de coagulómetros.
Observar o manual de utilização do fabricante do aparelho!
Material de análise Edição Maia 2008
Para a obtenção do plasma, misturar cuidadosamente 1 parte de solução de citrato de sódio (0,11 mol/l)
com 9 partes de sangue venoso, evitando a formação de espuma. Centrifugar, imediatamente, durante
10 minutos, no mínimo, a 1500 x g.
Estabilidade da amostra:
≤-20 °C 1 mês
+15 a +25 °C 8 horas
Descongelar os plasmas conservados a ≤-20 °C num período de tempo de 10 minutos, à temperatura de
+37 °C, e executar a determinação num período de tempo de 8 horas.
Procedimento
Manual:
Semi-microteste:
Cuvete: 1 cm camada de espessura
Comprimento de onda: 405 nm
Temperatura do teste: +37 °C
Antes do teste, aquecer previamente o activador de proteína C, o reagente de substrato e as cuvetes ou
tubinhos de plástico a +37 °C.
A. Esquema de pipetagem para o método cinético
Semi-microteste Chromotimer
Amostra de plasma 100 µl 25 µl
Activador de proteína C 1000 µl 250 µl
Misturar e incubar exactamente durante 5 minutos a +37 °C.
Reagente de substrato 200 µl 50 µl
Misturar e determinar ∆E405 nm/min.
Ler a absorvância após 15 segundos e accionar o cronómetro simultaneamente. Após 60 e 120 segun-
dos , exactamente, repetir a leitura, calcular a respectiva ∆E/min pela diferença dos valores e depois
o valor médio a partir dos dois valores medidos.
Avaliação, método cinético
Cálculo do factor:
Valor nominal (% da norma) plasma de referência
FL= –––––––––––––––––––––––––––––––––––
∆E/min plasma de referência

Os valores de ∆E/min das amostras são multiplicados pelo factor obtido; obtém-se a proteína C em %
da norma.
Proteína Camostra (% da norma) = FL x ∆E/minamostra
Esquema de pipetagem para o método de dois pontos
Amostra Valor em branco da amostra
Amostra de plasma 100 µl 100 µl
Activador de proteína C 1000 µl –
Solução isotónica de cloreto de sódio – 1000 µl
Misturar e incubar exactamente durante 5 minutos a +37 °C.
Reagente de substrato 200 µl 200 µl
Misturar imediatamente e accionar o cronómetro, simultaneamente. Após exactamente 5 minutos,
adicionar:
Ácido acético 20 % 1000 µl 1000 µl
Misturar imediatamente e determinar a absorvância, num período de tempo de 60 minutos contra o
valor em branco da amostra.
Avaliação, método de dois pontos
Cálculo do factor:
Valor nominal (% da norma)plasma de referência
FL= –––––––––––––––––––––––––––––––––––
E plasma de referência

A absorvância da amostra é multiplicada pelo factor obtido.
Protein Camostra (% da norma) = FL x Eamostra
Observações
1. A duplicação ou divisão em duas partes iguais do volume não tem qualquer efeito sobre o cálculo e o
factor de cálculo interno do laboratório.
2. FL é um factor de cálculo interno do laboratório e só necessita de ser determinado uma vez numa
série de medições. No essencial, a avaliação corresponde a uma avaliação feita com uma curva de
referência.
3. O factor de cálculo interno do laboratório FL ou a curva de referência têm de ser determinados de
novo para cada mudança de equipamento e lote novo de Berichrom* Proteína C.
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OUVV G15 E0501 (699)