Ministério da Agricultura, Pecuaria e Abastecimento- MAPA Secretaria de Defesa Agropecuditia - SDA Coordenacao Geral de Apoio Laboratorial - CGAL Manual de Métodos de Analises de Bebidas e Vinagres ‘Nao alcoslicos A ‘ARES REDUTORES Método 14 1. METODO Titulométrico (Método Eynon Lane) 2. PRINCIPIO Os agticares redutores reagem com os ions cipricos da solugio de Febling, reduzindo-se a ions cuprosos, sob a ago do calor em meio alealino, Ao reagir com os fons cipricos, os acticares sofiem oxidagio, enquanto que o cobre é reduzido, formando-se um precipitado vermelho de éxido cuproso. Os acticares ndo redutores devem sofier uma prévia hidrdlise com acido cloridrico dissociando o dissacarideo em seus monossacarideos. 3. MATERIAL 3.1 EQUIPAMENTOS a) Balanga analitica b) Chapa aquecedora ou bico de Bunsen c) Banho-maria d) Cronémetro 3.2 REAGENTES E SOLUCOES a) Solugao A de Fehling: Dissolver 34,639 g de sulfato de cobre pentahidratado (Cu SO,.5I e diluir a 500 mL em balao volumétrico. b) Solucdo B de Febiling: Dissolver 173,0 g de tartarato duplo de sédio e potéssio (CsH,KNaOg) p.a. (sal de Rochelle) 2 50,0 g de hidroxido de sédio em Agua destilada e diluir a $00 mL em balao volumétrico, ¢) Solugao padrao de glicose anidra p.a 0,5% (recém preparada) d) Solucao de acetato neutro de chumbo a 20% e) Solugo azul de metileno 1% f) Carvao ativo 2) Fosfato monoicido de sodio Na H:PO, on oxalato de potissio ou sédio p.a h) Acido cloridrico p.a. i) Solugao de hidréxido de sédio 5 N. 0) p.a. em agua destilada 3.3 VIDRARIA E OUTROS MATERIAIS a) Balio volumétrico de 100 mL b) Bureta de 25 MI ) Erlenmeyer de 250 mL d) Pérolas de vidro para ebuligao ou talco neutro e) Pipetas volumétricas de 1, 5, 20 e 50 mL f) Termémetro g) Funil h) Papel de filtro i) Pinea i) Papel de tomassol Edigio: 1 Revistio: 0 Pagina 1 de 5Ministério da Agricultura, Pecuaria e Abastecimento- MAPA Secretaria de Defesa Agropecuditia - SDA Coordenacao Geral de Apoio Laboratorial - CGAL Manual de Métodos de Analises de Bebidas e Vinagres Nao alcodlicos ACUCARES REDUTORES Método 14 4. PROCEDIMENTO 4.1 PREPARO DA AMOSTRA Pipetar 5 mL ou pesar 5 g da amostra homogeneizada e descarbonatada se necessirio, num baliio volumétrico de 100 mL e completar © volume com Agua destilada (para amostras com alto teor de aciicar, diluir convenientemente). Se necessirio efetuar clarificagdo como segue: pipetar a mesma aliquota para um balio volumétrico de 100 mL, adicionar 2 mL de solugio de acetato neutro de chumbo (volume maior para produtos com alto teor de matérias corantes). Colocar uma ponta de espatula de carvio ativo (no adicionar em excesso, pois poder absorver parte dos aciicares). Agitar bem e deixar em repouso por 10 minutos. Completar o volume com agua destilada. Filtrar © contetido do balo voluméirico sobre 0,4 g de fosfato monoacido de sédio (ou 0.4 g de oxalato de sédio) por mililitro de solugao de acetato de chumbo utilizado, num erlenmeyer de 250 mL (a solugio apresentara sedimentos em poucos minutos, deixando o liquido sobrenadante claro). Adicionar ‘uma ponta de espatula a mais de fosfato (ou oxalato) para assegurar a completa precipitacao de acetato de chumbo. Filtrar novamente, se necessitio. 4.2-ACUCARES REDUTORES 4.2.1 TITULACAO DO BRANCO Em erlenmeyer de 250 mL, adicionar 20 mL de solucio de Soxhlet (10 mL de Felhing A + 10 mL de Felhing B), 50 mL de Agua destilada e 19 mL. da solucio padrio de glicose e algumas pérolas de vidro. Levar 0 fiasco ao aquecimento, de modo que entre em ebuligao dentro de 4 minutos. Iniciada a ebulicdo, adicionar 3 gotas de azul metileno. Decorrido um minuto do inicio da fervura, proceder 4 titulagdo até o desaparecimento da coloragao azul. Repetir a operagao até que os resultados em duplicata sejam iguais. 4.2.2 TITULAGAO. DA AMOSTRA a) Previ Em erlenmeyer de 250 mL, adicionar 20 mL da solugio de Soxhlet, 40 mL de agua destilada e 10 mL da amostra preparada (4.1). Levar o frasco ao aquecimento, de modo que entre em ebuligdo dentro de 4 minutos. Iniciada a ebuligao, titular com solugao de glicose até o desaparecimento da coloragio azul do sulfate de cobre, Adicionar 2 gotas de azul de metileno, aps 1 minuto, continuar a titulagio até o desaparecimento da coloragio azul. Seja K o volume gasto da solugiio de glicose. b) Titulagao Em erlenmeyer de 250 mL, adicionar 20 mL da solugao de Soxhlet, 40 mL de agua destilada e 10 mL da amostra preparada, Levar 0 frasco ao aquecimento, de modo que entre em ebuligio dentro de 4 minutos, ¢ imediatamente transferir (K-1) ml de glicose. Iniciada a fervura, adicionar 2 gotas de azul de metileno. Apés 1 minuto, continuar a titulacao até o desaparecimento do azul da solugao, gastando no final da titulagao aproximadamente o mesmo tempo gasto na determinacao do branco. Repetir a operacao até que os resultados em duplicata sejam iguais Edigio: 1 Revistio: 0 Pagina 2 de 5Ministério da Agricultura, Pecuaria e Abastecimento- MAPA Secretaria de Defesa Agropecuditia - SDA Coordenacao Geral de Apoio Laboratorial - CGAL Manual de Métodos de Analises de Bebidas e Vinagres ‘Nao alcoslicos A ‘ARES REDUTORES Método 14 4.2.3 CALCULO E EXPRESSAO DO RESULTADO (O resultado é expresso em g/100 mL ou g/100 g pela seguinte formula: (o-a) 10-¥ ARG = hh Onde: ARG ~ agiicares redutores em glicose, em g/100 g ou g/100 mL. f; = fator que envolve todas as diluigdes (desde a tomada da aliquota inicial at8 amostra preparada para a titulagto dos AR) e as grandezas de massa ou volume usadas na tomada da amostra. £; = 1, fator de conversdo para expresso dos resultados em glicose mimero de mL da solugio de glicose gastos na titulagao da amostra, niimero de mL da solugao de glicose gastos na titulagao do branco. volume da amostra preparada usado na titulagao, em mL. ARES NAO REDUTORES 43.1 INVERSAO DOS ACUCARES Pipetar 50 mL da amostra preparada (obtida na preparagdo da amostra em 4.1) num baléo volumétrico de 100 mL. Adicionar | mL de acido cloridrico concentrado. Colocar em banho-maria, de modo que a solugio mantenha uma temperatura de 67 a 70°C, por 15 minutos. Esfriar temperatura ambiente, neutralizar com hidréxido de sédio 3 N, usando papel de tomassol como indicador e completar o volume com agua destilada. 43.2 TITULACAO DO BRANCO Proceder da mesma forma como em A R. 43.3 TITULACAO DA AMOSTRA, a) Previa proceder da mesma forma como em A R. usando a solueao dos aciicares invertidos, b) Titulagio Proceder da mesma forma em A R. usando a solucao dos agitcares invertidos. 4.3.4 CALCULO E EXPRESSAO DO RESULTADO O resultado é expresso em g/100 mL ou g/100 g pela seguinte formula: anp =| 27 O-5-(hi-2) 10-¥ Edigio: 1 Revistio: 0 Pagina 3 de 5Ministério da Agricultura, Pecuaria e Abastecimento- MAPA Secretaria de Defesa Agropecuditia - SDA Coordenacao Geral de Apoio Laboratorial - CGAL Manual de Métodos de Analises de Bebidas e Vinagres ‘Nao alcoslicos A ‘ARES REDUTORES Método 14 Onde: ANR = Agiicares nao redutores em sacarose. AR = Acticares redutores em glicose. f = fator que envolve todas as diluigdes (desde a tomada da aliquota inicial até amostra preparada para a titulagio dos AR) e as grandezas de massa ou volume usadas na tomada da amostza, fator de conversio para expressiio dos resultados em sacarose (0,96). niimero de mL da solugao de glicose gastos na titulacaio da amostra mimero de mL da solucao de glicose gastos ua titulacao do branco v= volume da amostza preparada usado na titulagao, em mL. 4.4 ACUCARES TOTAIS CALCULO E EXPRESSAO DO RESULTADO: 4.4.1 — Para expressar em agucares totais, usar a formula: Agiicares Totais ~ AR em glicose + ANR em sacarose 4.4.2 — Para expressar acticares em sacarose, usar a formula: Agticares Totais em Sacarose (AR em glicose x 0,96) + ANR em sacarose. 4.4.3 — Para expressar aglicares totais em glicose, usar a formula: Acticares Totais em Glicose = AR em glicose + (ANR em sacarose = 0,96). Onde: ARem glicose = agucares redutores em glicose ANR em sacarose = agiicares nao redutores em sacarose Os resultados so expressos em g/100 mL ou g/100 g. Nota: a) O tempo de titulagio nfo deveré ultrapassar 2 minutos, marcados a partir da adigi0 da solugao indicadora de azul de metileno, b) Solugio de Soxhlet é a mistura das solugdes A e B de Fehling em partes iguais. REFERENCIA BRASIL. Ministério da Agricultura. Portaria n° 76 de 26 de novembro de 1986, Dispde sobre os métodos analiticos de bebidas e vinagre. Diario Oficial da Republica Federativa do Brasil, Brasilia, 28 nov. 1986. Seco 1, pt. 2, Edigio: 1 Revistio: 0 Pagina 4 de 5Ministério da Agricultura, Pecuaria e Abastecimento- MAPA Secretaria de Defesa Agropecuditia - SDA Coordenacao Geral de Apoio Laboratorial - CGAL Manual de Métodos de Analises de Bebidas e Vinagres ‘Nao alcoslicos AC "ARES REDUTORES Método 14 *INSTITUTO de tecnologia de alimentos. Manual téenico de anilise quimica de alimentos. ‘Campinas, 1990. Edigio: 1 Revistio: 0 Pagina 5 de 5