Bioquímica II

TEMA 5
Ciclo del ácido
cítrico
Introducción
piruvato
•El ciclo del acido cítrico (ciclo de Krebs,
ciclo de los ácidos tricarboxílicos) acetil-CoA (C2)
consiste en la serie de reacciones que
permiten la conversión de un grupo
acetilo en CO2 dando lugar a la
formación de NADH, FADH2 y GTP
•En metabolismos aerobios, el ciclo del
acido cítrico es la vía final común para la
oxidación de las molécula combustibles:
glúcidos, aminoácidos y ácidos grasos
•Algunos metabolitos del ciclo son
utilizados como intermediarios de
biosíntesis
•En eucariontes, el ciclo del acido cítrico
tiene lugar en la matriz mitocondrial
Conversión de piruvato en acetilCoA
En un paso previo al ciclo del ácido cítrico, el piruvato es convertido en
acetilcoenzima A mediante una reaccion catalizada por el complejo
piruvato deshidrogenasa
Piruvato + NAD+ + CoA → Acetil-CoA + NADH + CO2

Este paso es irreversible en el caso de células animales. No puede haber

conversión de acetil-CoA en piruvato

Estructura del complejo piruvato deshidrogenasa

Enzima Abreviación Número de Grupo Reacción
cadenas prostético catalizada
Componente piruvato E1 o A 24 Pirofosfato Descarboxilación
deshidrogenasa de tiamina oxidativa del
piruvato
Dihidroxilipoil E2 o B 24 Lipoamida Transferencia del
transacetilasa grupo acetilo hacia
Coenzima A
Dihidroxilipoil E3 o C 12 FAD Regeneración de
deshidrogenasa la forma oxidada
de la lipoamida
Estructura de la piruvato deshidrogenasa

Micrografía electrónica del complejo

piruvato deshidrogenasa de E.coli
Mecanismo de catálisis del complejo piruvato deshidrogenasa

Las primeras reacciones se dan en el componente piruvato deshidrogenasa

piruvato Compuesto de adición

Formas de resonancia de hidroxietil-TPP Hidroxietil-TPP

Mecanismo de catálisis del complejo piruvato deshidrogenasa
En una segunda fase, se da una interacción entre los componentes piruvato
deshidrogenasa y dihidroxilipoil transacetilasa.

Hidroxietil-TPP Lipoamide Carbanion de TPP acetillipoamida

Coenzima A Acetillipoamida Acetil CoA Dihidrolipoamida

Mecanismo de catálisis del complejo piruvato deshidrogenasa
En la última fase se regenera la forma inicial de la lipoamida

Dihidrolipoamida Lipoamida

Ventajas de los complejos enzimáticos:

Reacciones coordinadas
•Mayor velocidad: se evitan algunas etapas de difusión
•Se reduce la probabilidad de reacciones secundarias
Mecanismo de catálisis del complejo piruvato deshidrogenasa
(vista global)
Control del complejo piruvato deshidrogenasa

La transformación de piruvato en acetilCoA permite, la oxidación de los

átomos de carbono mediante el ciclo del acido cítrico o la biosíntesis de
lípidos. Al ser un paso irreversible, debe estar fuertemente controlado

Modificación Niveles altos de

alostérica acetilCoA y de NADH
inhiben al complejo
El control
se realiza
por Una quinasa Cocientes altos de
especifica fosforila NADH/NAD+, acetyl
el componente E2 CoA/CoA, or
del complejo y lo ATP/ADP activan a la
Modificación inactiva quinasa
covalente

Un aumento de Ca++
Una fosfatasa
en respuesta a
revierte el efecto
hormonas activa a la
de la quinasa.
fosfatasa
Control del complejo piruvato deshidrogenasa

Esquema del control del complejo piruvato deshidrogenasa

Reacciones del Ciclo del acido cítrico: formación de citrato
•El primer paso para el ingreso de los carbonos de acetilCoA al ciclo del
acido citrico consiste en una condensacion de acetil CoA con
oxaloacetato, para dar lugar, primero a citril CoA y luego a citrato.
•La hidrólisis del citrilCoA impulsa la condensacion de oxaloaacetato
con acetilCoA.
•Estas reacciones son catalizadas por la enzima citrato sintasa

oxaloacetato acetilCoA citrilCoA citrato

Reacciones del Ciclo del acido cítrico: características de la
citrato sintasa
•La citrato sintasa de los mamíferos es un dímero.
•Sufre cambios conformacionales marcados cuando se une el
oxaloacetato. Estos cambios conformacionales permiten la union de
acetilCoA
•En citrato sintasa se tiene un mecanismo secuencial ordenado
Reacciones del Ciclo del acido cítrico: isomerización de
citrato en isocitrato

El citrato sufre una isomerización hacia isocitrato en dos reacciones

catalizadas por cis-aconitasa

citrato cis-aconitato isocitrato

Reacciones del Ciclo del acido cítrico: isomerización de
citrato en isocitrato

La cis-aconitasa es una enzima que contiene un complejo hierro-azufre

citrato
Reacciones del Ciclo del acido cítrico: formación de
α-cetoglutarato

La tercera etapa es una reaccion de descarboxilacion oxidativa que da

lugar a α-cetoglutarato. Estas reacciones son catalizadas por la isocitrato
deshidrogenasa

isocitrato α-cetoglutarato

En este paso se obtiene la primera molécula de NADH del ciclo

Reacciones del Ciclo del acido cítrico: formación de succinil-
CoA
•Esta es una segunda reacción de descarboxilacion oxidativa.
• Es catalizada por el complejo α-cetoglutarato deshidrogenasa, de
estructura y mecanismos muy similares al complejo piruvato
deshidrogenasa

α-cetoglutarato Succinil-CoA
Reacciones del Ciclo del acido cítrico: formación de succinil-
CoA
El compuesto succinil-CoA puede liberar energia libre al hidrolizarse. Esta
energia es utilizada para la formacion de GTP a partir de GDP. Esta es la
única reacción del ciclo donde se forma, de manera directa, un compuesto
de alta energia.

La reacción es catalizada por succinil-CoA sintasa. Algunas de estas

enzimas convierten ADP (en lugar de GDP) en ATP (en lugar de GTP).

Tenemos además la interconversión : GTP+ADP=GDP+ATP

Reacciones del ciclo del acido cítrico: estructura de la
succinil-CoA sintasa
La succinil-CoA sintasa consta de dos cadenas polipeptidicas, cada
una con dos dominios.

En la subunidad α se
encuentra el dominio de
union a coenzima A y
fosfato. El residuo de His
toma el fosfato y mediante
cambios
conformacionales, puede
acercarlo al dominio de la
subunidad β donde se
encuentra el GDP (o ADP)
Reacciones del ciclo del acido cítrico: regeneracion del
oxaloacetato
Las ultimas etapas del ciclo del acido citrico permiten volver a formar
oxaloacetato. Estas etapas consisten en una oxidacion, una hidratacion y
una nueva oxidación, obteniéndose FADH2 y NADH

succinato fumarato L-malato oxaloacetato

Succinato fumarasa malato
deshidrogenasa deshidrogenasa

A diferencia de las otras enzimas del ciclo, la succinato deshidrogenasa

es una proteína integral de membrana, inmersa en la membrana interna
mitocondrial. Esta enzima interviene también en el cadena de transporte
de electrones de la fosforilación oxidativa.
Reacciones del ciclo del acido cítrico: estructura de la
succinato deshidrogenasa
Ciclo del acido
cítrico : vista
global
Reacciones del ciclo del acido cítrico: cambios de energia libre
Etapa Reacción Enzima Grupo ΔG°’
prostético (kcal/mol)
1 AcetilCoA+oxaloacetato+H2O-> Citrato sintasa -7,5
citrato +CoA+H+
2ª Citrato -> cis-aconitato Aconitasa Fe-S +2,0
2b cis-aconitato ->isocitrato Aconitasa Fe-S -0,5
3 Isocitrato+NAD+->α- Isocitrato -2,0
cetoglutarato+CO2+NADH deshidrogenasa
4 α-cetoglutarato+NAD++CoA -> Complejo α- Acido -7,2
succinilCoA+CO2+NADH cetoglutarato lipoico, FAD,
deshidrogenasa TPP
5 SuccinilCo+Pi+GDP-> SuccinilCoA -0,8
succinato+GTP+CoA sintasa
6 Succinato+FAD - Succinato FAD, Fe-S 0
>fumarato+FADH2 deshidrogenasa
7 Fumarato+ H2O -> L-malato Fumarasa -0,9
8 l-malato+NAD+ - Malato +7,1
>oxaloacetato+NADH+H+ deshidrogenasa
Reacción global
AcetilCoA+3 NAD++FAD+GDP+Pi+2H20 2CO2+CoA+3NADH+H++FADH2+GTP
Control del ciclo del ácido cítrico piruvato

El ADP actúa como activador

alostérico de la isocitrato acetilCoA
deshidrogenasa. El enlace de
NAD+, Mg2+ y ADP es
Oxalo
mutuamente cooperativo. NADH acetato citrato
inhibe a isocitrato deshidrogenasa
desplazando a NAD+. ATP actua malato
como inhibidor. isocitrato

fumarato
SuccinilCoA, NADH y carga
energética alta inhiben a α-
cetoglutarato deshidrogenasa. succinato α-cetoglutarato

Succinil-
CoA
El ciclo del acido citrico provee de precursores biosintéticos

Piruvato
Otros
aminoácidos,
purinas, AcetilCoA
pirimidinas
oxaloacetato
Citrato
aspartato
Acidos grasos,
esteroles

Purinas

Succinil- α-cetoglutarato
CoA
Otros
Porfirinas, hemo, glutamato aminoácidos
clorofila
Reposición de las moléculas utilizadas para fines de
biosintesis

Cuando los intermediarios del ciclo del acido citrico son utilizados para
biosintesis, deben ser repuestos por otras reacciones, dado que la
célula no puede quedar sin energia.
Las reacciones de reposición de intermediarios se denominan
reacciones “anapleróticas”, en el caso del oxaloacetato tenemos:

Piruvato + CO2 + ATP + H2O -> oxaloacetato + ADP + Pi + 2 H+

Piruvato carboxilasa
(biotina)

Esta reacción se verá con mas detalle en el capitulo dedicado a

gluconeogénesis
Beri-beri : enfermedad causada por deficiencia de tiamina

•El Beriberi es un síndrome neurológico y cardivascular. Los síntomas son

dolor en las extremidades, debilidad de la musculatura, temblores. Puede
darse un agrandamiento del corazón y deficiencias cardiacas.

•Este síndrome se debe a deficiencia en tiamina (vitamina B1)y ha sido

observado mayormente en poblaciones cuya alimentación se basa en el
arroz, dado que este cereal tiene poco contenido en esta vitamina.

•La deficiencia de tiamina impide el correcto funcionamiento de los

complejos piruvato deshidrogenasa y α-cetoglutarato deshidrogenasa. Dado
que el sistema nervioso utiliza mayormente glucosa como combustible, un
funcionamiento inadecuado del complejo piruvato deshidrogenasa da lugar
a problemas neurologicos.
El mercurio y arsenito también afectan a piruvato deshidrogenasa
y α-cetoglutarato deshidrogenasa

•El envenenamiento con mercurio o con arsenito AsO3 3- da lugar a

sintomas parecidos a los del Beriberi. Mercurio y arsenito reaccionan con
grupos sulfidrilo, por ejemplo el grupo lipoamida del complejo piruvato
deshidrogenasa. Se administran moléculas que contengan sulfidrilo
como antidoto para estos envenenamientos.

lipoamida arsenito
 Resumen: CICLO DE KREBS

Vía final común para la oxidación de moléculas

combustibles: glúcidos, aminoácidos y ácidos grasos
Algunos metabolitos del ciclo son utilizados como
intermediarios de biosíntesis
 1

4
complejo piruvato deshidrogenasa
 Resumen:
Regulacion ciclo
de krebs
 acetilCoA

El ciclo del
Citrato
glioxilato sintasa

Las plantas y algunos

microorganismos oxaloacetato citrato
pueden subsistir
utilizando acetato Aconitasa
Malato
como única molécula deshidrogenasa
combustible, esto
gracias al ciclo del
glioxilato.
En este ciclo se tiene
dos nuevas enzimas:
isocitrato liasa, malato malato Isocitrato isocitrato
sintasa Malato liasa
sintasa

acetilCoA glioxilato

succinato
El ciclo del glioxilato

Las plantas y bacterias pueden sintetizar acetilCoA a partir de acetato

mediante la reaccion:

Acetato +CoA +ATP -> acetilCoA+AMP+PPi

El succinato formado por la isocitrato liasa puede ser utilizado para la

formación de glúcidos.
En las plantas, el ciclo del glioxilato tienen lugar en organelos denominados
glioxisomas