THẢO LUẬN

DỊCH
Chúng tôi đã phát triển một xét nghiệm RTD-PCR định lượng và có độ nhạy cao
để phát hiện HBV DNA. Hơn nữa, xét nghiệm ít tốn công sức hơn so với PCR
cạnh tranh. Toàn bộ quy trình có thể hoàn thành trong vòng 5 giờ, bao gồm cả
việc chiết xuất DNA từ huyết thanh của bệnh nhân. Xét nghiệm RTD-PCR được
thực hiện bằng một bước duy nhất, yêu cầu một ống đơn, một enzym và một bộ
mồi duy nhất với mẫu dò fluorogenic cụ thể mục tiêu. Phân tích dữ liệu sau PCR
của RTD-PCR có thể được thực hiện bằng cách sử dụng máy tính được kết nối
với máy dò trình tự ABI 7700 mà không cần điện di gel và mẫu dò lai ghép (12,
13).
RTD-PCR cho thấy mối tương quan chặt chẽ giữa Ct và số lượng HBV DNA
ban đầu nằm trong khoảng từ 101 đến 108 bản sao/phản ứng. Độ nhạy của RTD-
PCR tương tự như của PCR lồng nhau. Độ nhạy cao và độ tuyến tính tốt trên
một dải động rộng được giải thích như sau. Như đã trình bày trong một nghiên
cứu trước đây về động học PCR, biểu đồ logarit của số bản sao trong một loạt
các mẫu HBV DNA chuẩn so với Ct tạo ra một đường thẳng, dẫn đến độ tuyến
tính tốt trên một dải động rộng cho xét nghiệm RTD-PCR (7). Ngoài ra, hệ
thống phát hiện huỳnh quang nhạy cho phép quan sát Ct trong khi quá trình
khuếch đại PCR vẫn ở giai đoạn hàm mũ. Hơn nữa, không có thành phần nào
trong hỗn hợp phản ứng bị hạn chế trong quá trình khuếch đại pha hàm mũ. Do
đó, xác định Ct đáng tin cậy hơn xác định sự hiện diện hoặc lượng sản phẩm
PCR (4, 5).
RTD-PCR phát hiện HBV DNA ở 8 trong số 46 bệnh nhân viêm gan B mãn tính
âm tính với HBV DNA bằng xét nghiệm bDNA và không phát hiện HBV DNA
ở bất kỳ người nào trong số 23 tình nguyện viên khỏe mạnh. RTD-PCR được
ước tính là nhạy hơn từ 104 đến 105 lần so với xét nghiệm bDNA (Hình 3a đến
c). Trong nghiên cứu hạn chế này, RTD-PCR cho thấy độ nhạy và độ đặc hiệu
tốt.
Hình 3. Mối tương quan giữa nồng độ HBV DNA trong huyết thanh được xác định bằng
RTD-PCR và những được xác định bằng xét nghiệm bDNA đã được nghiên cứu với các mẫu
thu thập từ 46 bệnh nhân viêm gan B mãn tính. (a và c) Mối tương quan giữa nồng độ HBV
DNA trong huyết thanh ở 25 trong số 46 bệnh nhân được xác định bằng xét nghiệm bDNA và
RTD-PCR sử dụng bộ 1 và bộ 3 mồi và mẫu dò. (b) Mối tương quan giữa nồng độ HBV DNA
huyết thanh được xác định bằng xét nghiệm bDNA và RTD-PCR sử dụng bộ 2 mồi và mẫu dò.
(d) Mối tương quan giữa nồng độ HBV DNA trong huyết thanh được xác định bằng RTD-
PCR sử dụng mồi và đầu dò nằm ở vùng S (bộ 1) và vùng X (bộ 3). Hệ số tương quan được
chỉ ra trong mỗi bảng. Các đường đứt đoạn cho biết giới hạn phát hiện của xét nghiệm
bDNA.

Ý CHÍNH
Xét nghiệm RTD-PCR có độ nhạy cao để phát hiện và định lượng HBV DNA.
Hơn nữa, xét nghiệm ít tốn công sức hơn so với PCR cạnh tranh:

 Toàn bộ quy trình có thể hoàn thành trong vòng 5 giờ, bao gồm cả việc
chiết xuất DNA từ huyết thanh của bệnh nhân.
 Được thực hiện bằng một bước duy nhất, yêu cầu một ống đơn, một
enzym và một bộ mồi duy nhất với mẫu dò fluorogenic cụ thể mục tiêu.
  Phân tích dữ liệu sau PCR có thể được thực hiện bằng cách sử dụng máy
tính được kết nối với máy dò trình tự ABI 7700 mà không cần điện di gel
và mẫu dò lai ghép.
RTD-PCR có độ nhạy cao và độ tuyến tính tốt trên một dải động rộng:

 Có mối tương quan chặt chẽ giữa Ct và số lượng HBV DNA ban đầu nằm
trong khoảng từ 101 đến 108 bản sao/phản ứng.
 Độ nhạy của RTD-PCR tương tự như của PCR lồng nhau.

RTD-PCR phát hiện HBV DNA ở 8 trong số 46 bệnh nhân viêm gan B mãn tính
âm tính với xét nghiệm bDNA và không phát hiện HBV DNA ở bất kỳ người
nào trong số 23 tình nguyện viên khỏe mạnh. RTD-PCR được ước tính là nhạy
hơn từ 104 đến 105 lần so với xét nghiệm bDNA (Hình 3a đến c).
=> Trong nghiên cứu hạn chế này, RTD-PCR cho thấy độ nhạy và độ đặc hiệu
tốt.