Université Saad Dahlaeb BLIDA

Institut des sciences et technique appliquée

Tous les types :

Microbiologie alimentaire

Réalisé par : Encadré par :

Megrani Ikram Dr Allata

2021 /2022
TP n°01 : Préparation des échantillons, de la suspension mère et des dilutions décimales
Introduction:
La dilution est un procédé consistant à obtenir une solution de concentration inférieure à celle de départ, soit par
ajout de solvant, soit par rélèvement d’une partir de la solution et en complétant avec du solvant pour garder le
même volume .La dilution se caractérise par son taux de dilution. Cette notion présuppose que le corps dilué soit

soluble dans le solvant utilisé.

L’objectif de TP :
Créé des concentrations décroissante de l’échantillon original.

Obtenir un nombre de bactérie suffisamment faible pour compter les colonies individuelles

Echantillons et matériels utilisé :

 Un tube à essai
 Des pipettes graduées (1ML et 10ML )
 Vortex
 Eau physiologique
 Eau peptone
 Tryptone –sel

Mode opération :
 Mettre une quantité de lait liquide à prélever à l’aide d’un vortex
 Desserrer délicatement le bouchon et flamber l’ouverture du tube
 Prélever 1ml de lait liquide
 Flamber et fermer le tube
 Ouvrir le tube à essai contenant 9ML de diluant
 Flamber l’ouverture et introduire le volume prélevé
 Flamber et fermer le tube
 Ajouté la pipette souillée dans bac à eau de javel
 Prélavé 1ML de la dilution
 Introduire dans un tube essai contenant 9 ML de diluant
 Jusqu’a ‘à l’obtention de la désirée

TP n°2 : Microbiologie du yaourt

Introduction :
Aujourd’hui, le yaourt est considérer comme un produit de grand consommation ,il subit plusieurs analyses
microbiologiques lors de sa fabrication du point de vue de présence ou absence des micro-organismes telle que la
flore aérobie mésophile totale, les levures et les moisisures. .. 

Mode opération :

Recherche des germes de contamination

1-Dénombrement de la flore aérobie mésophile totale :

 Mettre une quantité de 1ML solution mère et des dilutions décimales
 Ajouté 15à 20 ML de gélose PCA
 Laisser solidifier
 Incuber les boites à30°C pendant 24 à 72 H
 Compter les boit contenant 10 à 300 colonies de couleur blanches
2- dénombrement des coliformes totaux et fécaux
 Mettre une quantité 1ML de solution mère et de la dilution décimale
 Ajouté 15 0 20ML de gélose VRBL
 Laisser solidifier
 Ajouté deuxième couche du même milieu VRBL
 Incuber les boit à 30°c pour le coliforme totaux apparition jaunes
 Incuber les boit à 44°C pour le coliforme fécaux apparition rouge

3- dénombrement des Staphylococcus aureus

 Mettre 0 ,1ML de l’échantillon à analyse dans une boit de pétri
 Ajouté la gélose
 Etaler à l’aide d’un râteau
 Incuber les boit 37°c pendant 48H les colonies
 Compter les colonies avec une coloration noir

4-dénombrement les levures et moisissures :

 D’éliminer la contamination bactérienne
 Mettre 1ML la dilution et à la solution mère dans une boit de pétri
 Incuber à 25°c pendant 5j
 Les colonies formées sont à dénombrer
TP n°3 : analyse microbiologique du couscous

Introduction :
En Algérie le couscous n’est pas seulement le (plate national) mais fait partie du quotidien de la famille algérienne ,
et la semaine ne peut se terminer sans un plat de couscous le vendredi .

Dans le domaine, le couscous subit plusieurs analyses microbiologique lors de sa fabrication du point du vie de
présence ou absence du micro-organisme.

Objectif :
Les analyses microbiologiques visent le contrôle de l’aliment du point du vue présence ou absence des
microorganismes, dans le cas des céréales , les microorganisme recherchés sont surtout les moisissures et
clostridium sulfito-réducteur

Les matérielle et les produis utilisés :

 225g du couscous
 225ml l’eau distillée
 Les tubes
 L’eau peptone
 Boit de pétri
Mode opération :
Recherche les microorganismes ( moisissures et clostridium sulfito –réducteur )
1- Recherche des levures et moisissures :
 Inoculer les boit avec 1ML de différentes de dilition
 15ML DE L4OGA refroidie
 Mélange et laisser solidifier
 Ajouté le deuxième couche de gélose 4 ML
 Laisser et refroidir
 Incuberles boit à 25°c pendant 5j
2-Recherche des clostridium sulfito – réducteur :
 Prélever 1ML de la suspension mère
 Introduire dans une boit de pétri
 Ajouté quelque goutte de sulfite de sodium 0,5ML et quelque goutte de fer
 Remplir le tube avec VF 19ML
 Mélange et laisse solidifier
 Incuber le tube 46°c pendant 20H
Conclusion :
D’un point de vue microbiologique , l’analysesdesrésultat a montré que le couscous n’
TP : N ° 04 Analyses microbiologique de la viande rouge

Introduction :
La viande et les produits carnés sont particulièrement sensibles la prolifération bactérienne, en raison de leur haute
teneur en eau et en substances nutritives .la viande est stérile au départ, mais dès qu’elle est coupée, les surfaces
exposées à l’air ambiant fournissent des conditions idéal pour le développement des parleries. La viande hachée est
encoure plus exposée.

Objectif :
Analyses la viande hachée cru en déterminant les microorganismes qu’elle contient et en identifiant leurs différents
types.

Mode operatoire :
Préparation de la suspension mére : peser 25g de viande et le mettre dans un bocale on ajoutant 225ml d’eau
poptonée tamponée , on ajitant la solution de 6 à 8 min .

Préparation des solutions décimales : mettre 9ml de diluant (tryptone-sel) dans les tubes à essai , transfert 1ml de
la supension mére avec une pipette dans l’un des tubes et continuer avec tous les tubes de la meme manière puis
mettre dans l’agitateure pendant 5 à 10s.

Dénombrement des coliformes totaux et des coliformes fécaux : on utulisant le milieu de culture qu’est le VRBL,

Pour les coliformes totaux incuber pendant 24h à 30c°,

Pour les coliformes fécaux incuber pendant 24h à 44c°.

Conclusion :

La viande est un essentiel l’organisme ainsi que la viande hachée, et sa consommation nécessite une surveillance sur
le plan microbiologique et physicochimique