茅苍术水提液及其不同极性部位对幽门螺杆菌的体外抑制作用研究Δ

王庆庆 １＊，庞 谦 ２，赵 明 １，王文兵 ３，欧阳臻 １ #，吴 娜 （１.江苏大学药学院，

２
江苏 镇江 ２１２０１３；２.江苏大学京
江学院，江苏 镇江 ２１２０１３；３.江苏大学生命科学研究院，江苏 镇江 ２１２０１３）
中图分类号 R２８５；R９７ 文献标志码 A 文章编号 １００１-０４０８（２０１２）４３-４０４２-０３
DOI １０.６０３９/j.issn.１００１-０４０８.２０１２.４３.０４

摘 要 目的：研究茅苍术水提液及其不同极性部位对幽门螺杆菌的体外抑制作用。方法：采用加热回流提取法制得茅苍术的水
提液，再采用有机溶剂萃取法将茅苍术的水提液分为石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水 ４ 个不同极性部位。采用浊度法检测茅苍术
水提液及其不同极性部位对幽门螺杆菌的抑制作用。结果：茅苍术水提液及其石油醚、乙酸乙酯、正丁醇部位均有抑菌作用，并且
随着药物浓度的增大，对幽门螺杆菌的抑制作用也增强；水部位没有抑菌作用。同一浓度下各部位抑菌效果强弱顺序为石油醚部
位＞乙酸乙酯部位＞正丁醇部位。结论：茅苍术水提液中石油醚部位的抑菌效果最好，提示茅苍术中对幽门螺杆菌作用的有效成
分存在于水提液中的低极性部位。本研究结果可为进一步对茅苍术药效成分的研究提供理论依据。
关键词 茅苍术；水提液；不同极性部位；幽门螺杆菌；
体外抑菌试验

Study on the Inhibitory Effects of Aqueous Extracts and Its Different Polarity Parts of Atractylodes lancea
on Helicobacter Pylori in Vitro
WANG Qing-qing，ZHAO Ming，OUYANG Zhen（School of Pharmacy，Jiangsu University，Jiangsu Zhenjiang
２１２０１３，China）
PANG Qian，WU Na（Jingjiang College，Jiangsu University，Jiangsu Zhenjiang ２１２０１３，China）
WANG Wen-bing（Institute of Life Science，Jiangsu University，Jiangsu Zhenjiang ２１２０１３，China）

ABSTRACT OBJECTIVE：To investigate the inhibitory effect of aqueous extracts and its different polarity parts of Atractylodes
lancea on Helicobacter pylori（H pylori）in vitro. METHODS：Water extract was obtained by heat refluxing extraction，and extracts
were divided into ４ polarities of solvents such as petroleum ether，ethyl acetate，butyl alcohol and aqueous part. The inhibitory ef-
fect of aqueous extracts and its different polarity parts of A. lancea on H pylori was observed by nephelometry. RESULTS：Except
for aqueous part，the aqueous extracts and its petroleum ether，ethyl acetate，butyl alcohol parts of A. lancea could inhibit the
growth of H pylori and the inhibitory effect was enhanced with the increase of extract concentration. The inhibitory effect of these
parts were petroleum ether＞ethyl acetate＞butyl alcohol. CONCLUSION：The petroleum ether part shows relatively strong inhibito-
ry effect，and low polarity part of aqueous extracts of A. lancea can effectively inhibits H pylor. The study further provides experi-
mental basis for the active component study.
KEY WORDS Atractylodes lancea；Aqueous extract；Different polarity parts；Helicobacter pylori；Bacteriostatic test in vitro

􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂􀤂

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析与新药研发。电话：０５１１-８８７９１５６４。E-mail：zhenouyang@ujs.edu. （收稿日期：２０１２- ０１- ０６ 修回日期：２０１２- ０５- ２４）
cn

· ４０４２ · China Pharmacy ２０１２ Vol. ２３ No. ４３ 中国药房 ２０１２ 年第 ２３ 卷第 ４３ 期

 幽门螺杆菌（Helicobacter Pylori，Hp）与人类慢性胃炎、消 表 1 茅苍术水提液不同溶剂萃取部位浸膏得率
化性溃疡、胃黏膜相关性淋巴组织（MALT）淋巴瘤和胃癌的发 Tab 1 Yield of different polarity parts of aqueous extract of
生密切相关[１]。目前西医治疗 Hp 常采用 ２ 种以上抗菌药，并联 A. lancea
合使用抑酸药或铋剂，不仅不良反应大、服用剂量大，而且易 萃取部位 生药/g 浸膏重/mg 出膏率/％
产生耐药性 [２]，故采用中药和天然药物防治 Hp 感染成为了一 石油醚部位 20 3.4 0.017
个新的治疗途径[３～７]。 乙酸乙酯部位 20 15.9 0.080
正丁醇部位 20 180.9 0.900
茅 苍 术 为 菊 科 植 物 茅 苍 术 Atractylodes lancea（Thunb.）
水部位 20 8 581.7 42.900
DC.的干燥根茎，具有抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗溃疡的作用[８]。本
将茅苍术水提液的石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部
试验研究茅苍术水提液及其不同极性部位的抗 Hp 作用，以筛
位、剩余水部位的浸膏溶解于蒸馏水中，并按生药含量制备成
选茅苍术抗 Hp 的活性部位，筛选新的抗 Hp 药物，为我省道地
浓度为 １.２５、２.５、５、１０ g·mL － １ 的供试药液（分别为石油醚部
药材茅苍术的开发利用提供理论依据。
位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位的①、②、③、④组），贮
1 仪器与材料 藏， 备用。
1.1 仪器 ２.１.３ 阳性药液的制备 取甲硝唑片 １ 片，研成细粉，溶于 １
７２２ 型分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）；R-２００ mL 蒸馏水中， 制备成浓度为 ０.２ g·mL－１ 的甲硝唑溶液。
型旋转蒸发仪（瑞士 Buchi 公司）；HH 系列数显恒温水浴锅（郑 2.2 菌悬液的制备
州佳创仪器设备有限公司）。 将受试菌在 Hp 血平板上传种 ３ 次，以保证其纯度及活
1.2 试药 力。将培养 ７２ h 的菌株用 PBS 洗下后制成 PBS 菌悬液，于
茅苍术采挖于江苏省句容茅山地区，经江苏大学药学院 ６００ nm 波长处测定吸光度（OD）值，菌悬液浓度稀释至 １×１０８
欧阳臻教授鉴定为真品。甲硝唑片（扬州市星斗药业有限公 cfu·mL－１。
司，批号：３２０２０５７５，规格：０.２ g/片）；哥伦比亚琼脂、厌氧培养 2.3 抑菌试验
罐、微需氧环境发生袋（德国 Merck 公司）；无菌羊血（金坛市欣 分别取 １０ μL 各组供试药液，以及 １０ μL １×１０８ cfu·mL－１ 的
迪科技有限公司）；选择性抗生素（上海基伟生物科技有限公 菌悬液，混匀后均匀涂布于 Hp 血平板上。设置空白对照，即
司）；石油醚、乙酸乙酯、正丁醇（分析纯，国药集团化学试剂有 加入 １０ μL 菌悬液和 １０ μL PBS，在血平板上均匀涂开。阳性
限公司）。 药液同法涂布血平板。
1.3 菌株 将涂布好的血平板放入厌氧培养罐中，罐内放入微需氧
Hp 菌株从江苏大学附属医院内镜室活检标本分离培养获 环境发生袋，于 ３７ ℃微需氧培养（５％O２、１０％CO２、８５％N２）。
得。取江苏大学附属医院行消化系内窥镜检查患者的胃窦黏 培养 ７２ h 后，将每个血平板上的菌株用 PBS 洗下，制成菌悬
膜（距幽门 ５ cm 内）活检组织标本，病理证实为胃癌，将活检新 液，每组均稀释相同倍数至适当的浓度，采用比浊法[６]，用紫外
鲜组织用接种环均匀涂于固体琼脂培养基上，微需氧环境、 分光光度仪于 ６００ nm 波长处测定 OD 值， 记录抑制细菌生长的
３７ ℃下培养，约 ７２ h 后收集细菌。经观察菌落、细菌形态、尿 情况。试验重复３次， 取平均值。抑菌率＝（１－OD 药物/OD 空白对照）/
素酶、氧化酶和过氧化氢酶等一系列生化试验鉴定为 Hp 阳 １００％。
性。 2.4 统计学方法
2 方法 试验数据采用 SPSS １６.０ 软件进行处理，数据以x±s 表
2.1 供试溶液的制备 示，计算半数抑菌浓度（MIC５０）、９０％抑菌浓度（MIC９０），采用 t
２.１.１ 茅苍术水提液的制备 称取一定量的茅苍术药材粉 检验作差异性分析。P＜０.０５ 为差异有统计学意义。
末，加入 １０ 倍体积水，加热回流提取 ２ h，放冷，滤过，滤渣再加 3 结果
１０ 倍体积水，回流提取 ２ h，滤过，合并滤液，于 ６０ ℃下减压浓 3.1茅苍术水提液对 Hp 的抑制作用
缩至生药含量为 １ g·mL－１，即得茅苍术水提液。 茅苍术水提液对 Hp 具有一定的抑制作用，随着浓度增大
将茅苍术水提液制备成生药含量分别为 ０.１２５、０.２５、０.５、 抑制作用明显增强，但水提液抑菌效果略低于甲硝唑溶液。茅
１ g·mL－１ 的供试药液（分别为茅苍术水提液①、②、③、④组）， 苍术水提液③组MIC５０、 MIC９０分别为 １.１７、 ６.０７ g·mL－１。茅苍术
贮藏，备用。 水提液对 Hp 的抑制作用见表 ２。
２.１.２ 茅苍术水提液不同极性部位的制备 将茅苍术水提液 表 2 茅苍术水提液对 Hp 的抑制作用 （x± ±s，n＝3）
转入分液漏斗中，加入相同体积的石油醚，轻轻振摇，静置，待 Tab 2 Inhibitory effect of A. lancea on Hp（ x±
±s， n＝3）
溶液完全分层后放出下层水溶液，收集石油醚部分；下层水溶 组别 浓度/g·mL－1 OD值 抑制率/％ MIC50/g·mL－1 MIC90/g·mL－1
液用同法再萃取 ３ 次；合并 ４ 次石油醚萃取液，在 ４０ ℃下减压 空白对照组 - 0.683±0.056 1 -
甲硝唑组 0.2 0.253±0.034 6＊ 62.90
浓缩回收石油醚，浓缩液干燥后即为茅苍术水提液的石油醚
茅苍术水提液①组 0.125 0.676±0.035 3 1.02
部位。石油醚萃取后的剩余水溶液按上述方法再依次用乙酸
茅苍术水提液②组 0.25 0.575±0.069 8＊ 15.80
乙酯、正丁醇萃取，乙酸乙酯萃取液在 ４０ ℃下减压浓缩，正丁 茅苍术水提液③组 0.5 0.492±0.020 8＊ 27.90 1.17 6.07
醇和剩余水溶液在 ６０ ℃下减压浓缩，将浓缩液干燥即得乙酸 茅苍术水提液④组 1 0.398±0.045 6＊ 41.70
乙酯部位、正丁醇部位以及剩余水部位。茅苍术水提液不同 与空白对照组比较：＊
P＜０.０１
溶剂萃取部位浸膏得率见表 １。 vs.blank control group：＊
P＜０.０１

中国药房 ２０１２ 年第 ２３ 卷第 ４３ 期 China Pharmacy ２０１２ Vol. ２３ No. ４３ · ４０４３ ·

 3.2 茅苍术不同极性部位对 Hp 的抑制作用 为寻找茅苍术水提液的有效物质基础，本研究还比较了
茅苍术水提液的 ４ 个不同极性部位对 Hp 的抑制作用差异 茅苍术水提液不同极性部位对 Hp 的生长抑制作用。在石油
较大：石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位具有较好的抑 醚、乙酸乙酯、正丁醇和水 ４ 个不同极性部位中，石油醚、乙酸
菌作用，并且随着浓度的增大抑制作用明显增强；水部位基本 乙酯和正丁醇部位具有一定的抑菌作用，而水部位没有抑菌
没有抑菌作用。不同极性部位的抑菌作用大小顺序依次为： 作用。因此，茅苍术具有抑菌作用的主要活性部位为极性较
石油醚部位＞乙酸乙酯部位＞正丁醇部位。经 t 检验，石油醚 小的部位，即石油醚和乙酸乙酯部位，此结论可为今后对茅苍
部位抑菌作用显著大于乙酸乙酯部位和正丁醇部位，乙酸乙 术抑制幽门螺杆菌有效成分进行分离、鉴定奠定基础。一直
酯部位显著大于正丁醇部位（P＜０.０１）。石油醚部位③组的 以来，对茅苍术挥发性成分的研究较为深入，而非挥发性成分
MIC５０、MIC９０ 分别为 ２.８８、１５.００ g·mL ；乙酸乙酯部位③组的 －１
研究较少，进一步研究茅苍术水提液的化学成分，将为茅苍术
MIC５０、MIC９０ 分别为 ５.２０、２４.００ g·mL － １；正丁醇部位③组的 的深入研究与开发利用提供依据。
MIC５０、MIC９０ 分别为 ７.４６、３７.００ g·mL 。茅苍术水提液不同极 －１
参考文献
性部位对 Hp 的抑制作用见表 ３。 [１] 范学工，夏华向.幽门螺杆菌感染·基础与临床[M].长沙：
表3 茅苍术水提液不同极性部位对 Hp 的抑制作用
（ x±
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OD值 抑制率/％ MIC50/g·mL －1
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甲硝唑组 0. 2 0.253±0.034 6＊ 62.90
石油醚部位①组 1.25 0.516±0.043 6＊ 24.50
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石油醚部位②组 2.5 0.353±0.056 1＊ 48.30 １ １１５.
石油醚部位③组 5 0.256±0.058 0＊ 65.60 2.88 15.00 [５] Israel Castillo-Juáreza，Violeta González，Héctor Jaime-
石油醚部位④组 10 0.115±0.067 4＊ 83.20
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正丁醇部位②组 2.5 0.555±0.010 6＊ 18.70
正丁醇部位③组 5 0.375±0.037 6＊ 45.10 7.46 37.00 ol，２００５，４３（３）：４０７.
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水部位①组 1.25 0.678±0.046 7 0.73
helicobacter pylori activity from Cistus laurifolius leaves
水部位②组 2.5 0.705±0.037 6 -3.22
水部位③组 5 0.715±0.046 3 -4.68 [J]. J Ethnopharmacol，２００６，１０８（３）：４５７.
水部位④组 10 0.738±0.040 4 -8.05 [８] 欧阳臻，江涛涛，缪亚东，等.苍术的化学成分、道地性和
与空白对照组比较：P＜０.０１ ＊
药理活性研究进展[J].时珍国医国药，２００６，１７（１０）：
＊
vs.blank control group：P＜０.０１ １ ９３６.
4 讨论 [９] 熊海燕，王为国，王存文，等. 介绍测量菌液浓度的一种
本研究采用比浊法 测量菌液浓度，于 ６００ nm 波长处测定
[９]
方法[J]. 四川食品与发酵，２００３，４：４５.
菌液的吸光度，该方法简单、快速、准确度高。本课题组前期 [１０] 欧阳臻，杨 凌.茅苍术挥发油 GC-MS 指纹图谱研究[J].
对茅苍术挥发性成分进行了深入研究，对茅苍术水提物的研 药学学报，２００７，４２（９）：９６８.
究也有一定基础[１０，１１]。由于中药一般使用水煎剂，所以本试验 [１１] 欧阳臻，杨 凌，宿树兰，等. 超临界 CO２ 萃取-气相色谱-
研究了茅苍术水提液对的抑制作用；测定 MIC５０、MIC９０ 时选取 质谱联用分析茅苍术挥发性成分[J].药物分析杂志，
的是各提取部位的中间浓度为代表。试验结果证明，茅苍术 ２００７，２７（９）：１ ３３３.
水提液对具有抑制作用，可为茅苍术的开发利用提供理论基 （收稿日期：２０１１- １２- ０９ 修回日期：２０１２- ０４- ２７）

础。

《中国药房》杂志——《中国科学引文数据库》
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