b.

Các bước trính xuất DNA

Chuẩ n bị mẫ u

Phá vỡ , ly giả i tế bà o

Tá ch DNA khỏ i protein

Tủ a DNA

Bước 1: Chuẩn bị mẫu

Gắ n cộ t silica

Là m sạ ch DNA

 Mẫ u đượ c nuô i cấ y trong mô i trườ ng LB trong thờ i gian nhấ t định. Sau

Thu hồ i DNA
khoả ng thờ i gian nuô i cấ y, mẫ u đượ c chuyển qua mô i trườ ng thạ ch đĩa để
thự c hiện chiếu UV
Bước 2: Phá vỡ các tế bào mở ra để giải phóng DNA
 Để cá c tế bà o trong mẫ u đượ c tá ch ra khỏ i nhau, sau khi ly tâ m, mẫ u đượ c
đưa và o dung dịch PBS buffer1 có chứ a muố i . Cá c ion Natri tích điện
dương trong muố i giú p bả o vệ cá c nhó m photphat tích điện â m chạ y dọ c
theo xương số ng củ a DNA.2
 Proteinase K3 sau đó đượ c thêm và o giú p phá vỡ cá c lipid trong mà ng tế
bà o và  nhâ n . DNA đượ c giả i phó ng khi cá c mà ng này bị phá vỡ .
Bước 3: Tách DNA khỏi protein và các mảnh vụn tế bào khác
 Để có đượ c mộ t mẫ u DNA sạ ch, cầ n phả i loạ i bỏ cà ng nhiều cá c mả nh vụ n
tế bà o cà ng tố t. Điều này có thể đượ c thự c hiện bằ ng nhiều phương
phá p. Thườ ng thì mộ t protease ( enzyme protein ) đượ c thêm và o để phâ n
hủ y cá c protein liên kết vớ i DNA và cá c protein khá c củ a tế bà o. 
Bước 4: Kết tủa DNA bằng cồn
 Cồ n lạ nh (ethanol) đượ c thêm cẩ n thậ n và o mẫ u DNA. DNA hò a tan trong
nướ c nhưng khô ng hò a tan khi có muố i và rượ u. Bằ ng cá ch ly tâ m, kết tủ a
trở nên có thể nhìn thấ y và có thể đượ c đẩ y ra ngoà i. Nếu có nhiều DNA,
bạ n có thể thấ y kết tủ a trắ ng.
 Khi thêm rượ u lạ nh và o dung dịch DNA, DNA sẽ kết tủ a ra khỏ i dung dịch
và nếu có đủ DNA trong dung dịch, bạ n có thể thấ y mộ t khố i mà u trắ ng.
Bước 5: Gắn cột silica

 Sau khi biến tính phá vỡ cấ u trú c tế bà o, DNA đượ c giả i phó ng ra ngoà i
dung dịch, tiếp theo dung dịch nà y sẽ đượ c di chuyển qua cộ t silica, tiến
hà nh ly tâ m để cá c DNA ó thể liên kết vớ i cá c hạ t silica  và đượ c giữ lạ i, cá c
thà nh phầ n khá c sẽ đi qua và chuyển sang đá y tube từ đó tá ch đượ c DNA
ra khỏ i dung dịch.
Bước 6: Làm sạch DNA
Đâ y là bướ c loạ i bỏ cá c thà nh phầ n cò n só t lạ i từ quá trình ly trích như
protein, polysaccharide, cá c loạ i vậ t chấ t nộ i bà o nhằ m đạ t hiệu suấ t tá ch chiết và
tinh sạ ch ADN cao.
 Rửa
 Thêm WB1 buffer4, thự c hiện ly tâ m trong vò ng 1 phú t để loạ i bỏ
protein, muố i và cá c chấ t bẩ n có mà u.
 WB2 buffer4 đượ c thêm và o và tiếp tụ c ly tâ m nhằ m rử a triệt để
protein, muố i và cá c thà nh phầ n cò n só t lạ i.
 Sự có mặ t củ a Ethanol tạ i bướ c nà y nhằ m thú c đẩ y quá trình kết tủ a
DNA tiếp tụ c diễn ra
 Làm khô cột
  Sau khi rử a, quá trình ly tâ m đượ c thự c hiện vớ i tố c độ 13.000 rpm
trong vò ng 1 phú t nhằ m loạ i ethanol
 Rửa giả DNA khỏi cột
 EB buffer5 – mộ t dung dịch đệm tiếp tụ c đượ c thêm và o giú p loạ i bỏ cá c
DNA gắ n khô ng bền hay cá c thà nh phầ n khô ng chính xá c khỏ i cộ t.
Bước 7: Thu hồi DNA
Mẫ u DNA có thể đượ c tinh chế thêm (là m sạ ch). Sau đó , nó đượ c tiếp tụ c
trong dung dịch đệm hơi kiềm và sẵ n sàng sử dụ ng.

TÀ I LIỆ U THAM KHẢ O

1. Phosphate-buffered saline - Wikipedia. https://en.wikipedia.org/wiki/Phosphate-
buffered_saline.
2. DNA Extraction and Polymerase Chain Reaction.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6425773/.
3. Proteinase K, recombinant, PCR Grade Solution from Pichia pastoris | Sigma-
Aldrich. https://www.sigmaaldrich.com/VN/en/product/roche/rprotksolro?
gclid=Cj0KCQiAmpyRBhC-ARIsABs2EAp7GSw7eh_DBkt8FF9KhwV-
BrUuJWhkbwdU4YrsUGLWQ9JAKo5F230aAscUEALw_wcB.
4. Cách bộ dụng cụ tách chiết DNA hoạt động trong 5 bước đơn giản.
https://bitesizebio.com/25018/how-dna-extraction-kits-work-in-the-lab/.
5. What is the composition of Buffer EB? - QIAGEN.
https://www.qiagen.com/us/resources/faq?id=d8ef773f-6a37-4993-908b-
8bbc7bc5c8d6&lang=en&fbclid=IwAR0yG9AKdQJJY-
MyjODBppyVuOSGh5CXZBQH_95AQPhRa7XRIT1Mc__cUMc.