‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫‪M inistry‬‬

‫‪la tio n‬‬

‫‪pu‬‬
‫‪f‬‬

‫‪o‬‬
‫‪P‬‬

‫‪o‬‬
‫‪He‬‬
‫‪a lt h a n d‬‬

‫جمهورية مصر العربية‬

‫وزارة الصحة والسكان‬

‫دﻟﻴــﻞ ﻣﻌﺎﻣـﻞ اﻟـــﺪرن‬

‫‪1‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫اإلشراف العام‬
‫د‪ .‬وجدى عبد المنعم‬ ‫د‪ .‬أحمد صفوت‬
‫مدير عام اإلدارة العامة لألمراض الصدرية‬ ‫رئيس‬
‫والمدير التنفيذى لبرنامج مكافحة الدرن‬ ‫االدارة المركزية للمعامل‬

‫إعداد‬
‫المادة العلمية‬
‫الطبعة االولي ‪:‬‬
‫مديرة المعمل المرجعي ‪ :‬د‪ .‬مشيرة اسماعيل عام ‪2005‬‬
‫الطبعة الثانية ‪:‬‬
‫اسرة المعمل المرجعي لتشخيص الدرن‬
‫المعامل المركزية بوزارة الصحة والسكان‬
‫مديرة المعمل المرجعي‬

‫د‪ .‬عزة عبد الفتاح حجازي‬

‫اخصائي معمل‬

‫د‪.‬جيهان سيف الدين‬

‫اخصائي معمل‬

‫د‪ .‬هويدا قاسم ابراهيم‬

‫اشراف تنسيقي‬

‫أ‪.‬أحمـــد سمـــير‬

‫بالتنسيق والتعاون مع‬

‫د‪ .‬فاتن علي شكري‬
‫إستشاري المعامل بالبرنامج القومي لمكافحة الدرن‬

‫د‪ .‬أمل صالح‬

‫مسئولة مكافحة العدوي بالبرنامج‬

‫‪2015‬‬ ‫‪2‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫اﻟﻔﻬﺮس‬
‫‪4‬‬ ‫مقدمة‬
‫‪5‬‬ ‫اجراءات مكافحة العدوي والسالمة بمعمل الدرن‬
‫‪13‬‬ ‫أعمال التطهير والتخلص من المخلفات البيولوجية‬
‫‪14‬‬ ‫أعمال الصيانة بالمعمل‬
‫‪16‬‬ ‫حاالت الطوارئ‬
‫‪18‬‬ ‫التعقيم‬
‫‪19‬‬ ‫الطرق المعملية لتشخيص الدرن‬
‫‪22‬‬ ‫أوال‪ -‬الفحص المجهري المباشر‬
‫‪30‬‬ ‫ثانيا‪ :‬المزارع الدرنية‬
‫‪31‬‬ ‫طرق تحضير المستنبتات الصلبة‬
‫‪39‬‬ ‫اختبارات تصنيف الميكوبكتيريا علي المستنبتات الصلبة‬
‫‪47‬‬ ‫طريقة عمل الحساسية الدرنية علي المستنبتات الصلبة‬
‫‪54‬‬ ‫ضبط الجودة بمعمل الدرن‬
‫‪55‬‬ ‫أوال ‪ :‬ضبط الجودة داخل المعمل‬
‫‪59‬‬ ‫ثانيا‪ :‬ضبط الجودة الخارجي‬
‫‪62‬‬ ‫طرق ضبط الجودة للمزارع الدرنية والحساسية‬
‫‪66‬‬ ‫طريقة عمل المزارع الدرنية علي المستنبتات السا ئلة (جهاز الباكتك ‪( 960‬‬
‫‪69‬‬ ‫طريقة عمل الحساسية الدرنية علي المستنبتات السائلة للصف االول‬
‫‪74‬‬ ‫طريقة عمل الحساسية الدرنية علي المستنبتات السائلة للصف الثاني‬
‫‪76‬‬ ‫اختبارات ضبط الجودة لجهاز الباكتك‬
‫‪79‬‬ ‫تشخيص الميكوبكتريا بجهاز الجين اكسبرت‬
‫‪83‬‬ ‫كيفية حساب وطلب الكيماويات الالزمة لعمل ‪ 1000‬شريحة‬
‫‪84‬‬ ‫نماذج تقارير المرور وتقارير ضبط الجودة بمعمل الدرن‬
‫‪92‬‬ ‫نماذج الرسال العينات المراد فحصها الي معمل الدرن‬
‫‪97‬‬ ‫المصطلحات العلمية‬
‫‪98‬‬ ‫المراجع العلمية‬

‫‪3‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫اﻟـــــــﺪرن‬
‫‪Tuberculosis‬‬

‫ﻣﻘﺪﻣـــــــﺔ‬
‫مرض الدرن من األمراض المعدية ش � � � ��ديدة الخطورة ( ‪ ) Risk group III‬والتى تنتقل عن طريق الجهاز التنفسى‬
‫وقد انتش � � � ��ر هذا المرض فى معظم دول العالم بما فيهم مصر وأصبح يصيب ثمانية ماليين من البش � � � ��ر كل عام‬
‫ويحصد أرواح الماليين منهم سنوياً ‪.‬‬
‫وق � � � ��د أعلن � � � ��ت منظمة الصحة العالمية (‪ )WHO‬أن ‪ % 95‬من حاالت الدرن توجد في الدول النامية وأن ‪ % 75‬من‬
‫هذه الحاالت تحدث بين أفراد المجتمع المنتجين اقتصاديا أي من سن ‪ 50-15‬عاما ‪.‬‬
‫ونتيج � � � ��ة لنج � � � ��اح برنامج مكافح � � � ��ة الدرن فى مص � � � ��ر ( ‪ ) NTP‬ونتيج � � � ��ة لتطبيق نظام الع � � � ��الج تحت المالحظة‬
‫والقصي � � � ��ر األم� � � � � � ��د ( ‪ ) DOTS‬بن �س � � � ��بة ‪ %100‬ف � � � ��ى كل أنح� � � � � � ��اء مص � � � � � ��ر ف � � � ��إن ع � � � � � ��دد الح� � � � � � ��االت الدرني � � � ��ة‬
‫الجدي � � � � � ��دة المتوقع � � � ��ة س � � � � � ��نوياً ( ‪ 15 ( Estimated incidence‬حال � � � ��ة ل � � � ��كل ‪ 100‬أل � � � ��ف م � � � ��ن الس � � � ��كان‪.‬‬

‫البكتريا المسببة للدرن ‪- :‬‬

‫تم اكتش � � � � ��اف البكتريا المس � � � ��ببة للدرن بواسطة العالم روبرت كوخ سنة ‪ – 1882‬وتنقس � � � ��م البكتريا المسببة للمرض‬
‫‪ Mycobacterium tuberculosis complex‬إلي ‪ 4‬فصائل هي ‪:‬‬
‫‪1- Mycobacterium tuberculosis.‬‬
‫‪2- Mycobacterium bovis )including BCG (.‬‬
‫‪3- Mycobacterium microti.‬‬
‫‪4- Mycobacterium africanum.‬‬
‫وميكروب ‪ Mycobact .Tuberculosis‬نوعان ‪- :‬‬
‫النوع الذي يصيب اإلنسان ‪Human Mycobacteria‬‬ ‫• ‬
‫النوع الذي يصيب البقر‪Bovine Mycobacteria‬‬ ‫• ‬

‫طريقة انتقال العدوى ‪:‬‬

‫ينتقل ميكروب الدرن عن طريق الس � � � ��عال والبصق والعطس علي ش � � � ��كل رذاذ صغير جدا يدخل إلي الرئة عن‬ ‫• ‬
‫طريق االستنشاق ‪.‬‬
‫اللبن الملوث بعصيات الدرن من حيوان مريض أو من متداولي األغذية المصابين بالمرض ‪.‬‬ ‫• ‬

‫أعضاء الجسم المعرضة لإلصابة بالمرض ‪-:‬‬

‫• إصاب � � � ��ة الرئ � � � ��ة تمثل حوالي ‪ % 85‬من الح � � � ��االت المرضية وقد تحدث اإلصابة بنس � � � ��بة ‪ % 15‬في بعض‬
‫األعض � � � ��اء األخ � � � ��رى مثل ‪ - :‬العظام – الحنجرة – الجهاز البولي والتناس � � � ��لي – الجهاز الهضمي والغش � � � ��اء‬
‫البريتونى – الغدد الليمفاوية – الجلد – العينين – المخ واألعصاب ‪.‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪4‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫إﺟﺮاءات ﻣﻜﺎﻓﺤﺔ اﻟﻌﺪوي واﻟﺴﻼﻣﺔ ﺑﻤﻌﻤﻞ اﻟﺪرن‬

‫‪Safety Measures & Infection Control in TB Lab‬‬

‫ يعتبر ميكروب الدرن من مجموعة الميكروبات شديدة الخطورة (‪.(Risk group III‬‬ ‫•‬
‫ كل من يعمل بقسم الدرن مسئول عن سالمته وسالمة زمالئه ‪.‬‬ ‫•‬
‫ينتقل ميكروب الدرن عن طريق الهواء‪ ،‬واستنشاق الرذاذ المحتوي علي الميكروب قد يؤدي للعدوى‬
‫ ويمكن القضاء علي ميكروب الدرن بالوسائل التاليه‪:‬‬ ‫•‬

‫الغليان‬
‫الحرق‬
‫لمدة ‪ 10‬دقائق‬
‫لعدة ثوانى‬

‫المطهرات‬ ‫التجميد‬
‫لمدة ‪ 12‬ساعة‬ ‫اليتم التعقيم به ابدا‬

‫ومن األسباب الشائعة النتشار الرذاذ بالمعمل ‪:‬‬

‫‪ .1‬اثناء جمع عينات البصاق من المرضي او المشتبه بهم‪.‬‬
‫‪ .2‬اثناء استخدام الماصات والمحاقن ‪.‬‬
‫أثناء تحضير المسحات علي الشرائح ‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫‪ .4‬اثناء تدوير العينات داخل جهاز الطرد المركزي(‪.(Centrifuge‬‬
‫‪ .5‬عند حرق إبرة الزرع ‪.‬‬
‫‪ .6‬المراوح ( يمنع استخدام المراوح عند عمل المسحات حتى يتم تثبيت العينة )‪.‬‬
‫‪ .7‬اثناء القاء المخلفات في اوعية التطهير‪.‬‬

‫‪5‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫الشروط الواجب توافرها فى العاملين بمعامل الدرن ‪- :‬‬

‫قبل استالم العمل بالمعمل يجب إجراء اآلتى‪-:‬‬ ‫• ‬
‫‪ .1‬اختبار التيوبركلين‪.‬‬
‫‪ .2‬أشعة على الصدر‪.‬‬
‫‪ .3‬التدريب على طرق السالمة بالمعمل‪.‬‬

‫يوجد ثالث مستويات للمعامل على أساس التحكم فى العدوى‪:‬‬

‫األعمال التى يقوم بها المعمل‬ ‫المستوى )‪(L‬‬ ‫نوع المعمل‬

‫• استالم العينات ‪.‬‬
‫• الفرد والصبغة ‪.‬‬ ‫‪L1‬‬ ‫المعمل الطرفى‬
‫• الفحص الميكروسكوبى المباشر لميكروب الدرن‬
‫• نفس األعمال التى يقوم بها المعمل الطرفى (‪. + (L1‬‬
‫• فصل الميكوبكتريا من العينات ثم الزرع في ‪ 2L‬س� � � � �واء درنيه او غير‬
‫درنيه ‪.‬‬
‫‪L2‬‬ ‫المعمل الوسطى‬
‫• قراءة المزارع ‪.‬‬

‫• يقوم بنف � � � ��س األعمال التى يقوم بها المعم � � � ��ل الطرفى (‪ )L1‬والمعمل‬
‫الوسطى (‪. + (L2‬‬
‫• عمل اختبارات الحساس � � � ��ية لألدوية النوعية لميكروب الدرن واختبارات‬ ‫المعمل‬
‫التصنيف للميكوبكتريا فى (‪. (L3‬‬
‫‪L3‬‬
‫المرجعى‬
‫• تحضير معلق بكتي � � � ��رى لحفظ الميكوبكتريا ولعمل اختبارات البيولوجيا‬
‫الجزيئة ‪.‬‬

‫ملحوظة‪:‬‬
‫يعتبر العمل فى (‪ )L3‬أكثر خطورة حيث أن فى بعض األحيان يتم فصل ميكوبكتريا مقاومة لألدوية ( الخط األول‬
‫والثانى )‪.‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪6‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫مكافحة العدوي في المعمل الطرفي (‪:)L 1‬‬

‫‪ -I‬وصف المعمل ‪:‬‬
‫ يجب ان يحتوي علي ثالث حجرات‪:‬‬ ‫•‬
‫‪ -‬حجرة الستالم العينات‪.‬‬
‫‪ -‬حجرة للفرد والصبغة‪.‬‬
‫‪ -‬حجرة للفحص الميكروسكوبي وتسجيل النتائج‪.‬‬
‫ملحوظة ‪ :‬اذا لم يتوافر عدد الحجرات المطلوبة يراعي تحديد اسطح العمل كل علي حدة‪.‬‬
‫ يجب ان تكون اسطح الحوائط واالرضيات ملساء والفواصل اقل ما يمكن‪.‬‬ ‫•‬
‫ يجب ان تكون البنشات ملساء ذات نوعية تتحمل المواد المطهرة المختلفة‪.‬‬ ‫•‬
‫ يجب ان يكون المعمل جيد التهوية واإلضاءة‪.‬‬ ‫•‬
‫ يجب ان يكون الصرف الصحي جيدا‪.‬‬ ‫•‬
‫ يجب ان يحتوي المعمل علي حوضين احدهما لغسيل االيدي واالخر للصبغة‪.‬‬ ‫•‬
‫ يحظر دخول المرضي والموظفين داخل المعمل‪.‬‬ ‫•‬
‫ يجب تقليل الحركة داخل المعمل قدر االمكان‪.‬‬ ‫•‬

‫‪ -II‬فنيو المعمل ‪:‬‬

‫ يسأل عن التاريخ الطبى أو المرضى التابع لهم (شكوى أى مرض أو أعراض)‬ ‫•‬
‫ عمل أشعة تشخيصية واختبار تيوبركلين لهم قبل بدء المهنة ‪.‬‬ ‫•‬
‫ اذا وجد اختبار التيوبركلين سلبيا يعاد بعد اسبوعين ويتم استشارة الطبيب ‪.‬‬ ‫•‬
‫ التدريب على اجراءات السالمة بالمعمل ‪.‬‬ ‫•‬
‫ وضع لوحات بالستيكيه او بغطاء بالستيك (قابل للتنظيف) علي الحوائط مدون عليها اجراءات السالمه ‪.‬‬ ‫•‬
‫ يمنع الطعام والتدخين والشرب وتخزين الطعام بالمعمل ‪.‬‬ ‫•‬
‫ يمنع استخدام الفم فى استعمال الماصة ‪.‬‬ ‫•‬
‫ يستخدم القفاز عند التعامل مع العينات ‪.‬‬ ‫•‬

‫‪- III‬جمع العينات‪:‬‬

‫‪ -‬ينصح المريض باآلتى ‪:‬‬
‫وضع اليد و استخدام المناديل الورقية على الفم عند البصق فى العبوة ‪.‬‬ ‫•‬
‫يبصق فى الهواء الطلق خارج المعمل ‪.‬‬ ‫•‬

‫‪7‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫‪ -‬مواصفات عبوة جمع البصاق ‪:‬‬

‫تكون مصنوعة من البالسيتك الصلب ‪.‬‬ ‫•‬
‫شفافة و ذات فوهة واسعة ‪.‬‬ ‫•‬
‫محكمة الغلق بواسطة غطاء حلزونى‪.‬‬ ‫•‬
‫اذا لم يستطع المريض احضار عينة ‪ ,‬البد من التخلص من العبوة إواعدامها ‪.‬‬ ‫•‬
‫إذا أردنا التخلص من المخلفات ‪ ,‬يوضع عليها مطهر ( فينول ‪ ) %5‬ثم تعدم فى االوتوكالف ثم المحرقة‬ ‫•‬
‫(في حالة عدم وجود اوتوكالف يجب ابقاء الفينول علي العينات لمدة ‪ 24‬ساعة قبل اعدامها بالمحرقة)‪.‬‬
‫تعتبر استمارات المرضى ملوثة ويتم التخلص منها في اكياس جمع النفايات الخطرة‬ ‫•‬

‫‪ -IV‬خطوات العمل ‪:‬‬

‫ تنظف عروة الزرع المعدنية من البصاق العالق بعد فرد العينة بحكها فى الرمل الموضوع فى زجاجة ومن‬ ‫•‬
‫فوقة كحول ‪ , %70‬ثم تحرق فى اللهب ويفضل استخدام المراود الخشبية احادية االستخدام ‪.‬‬
‫ البد أن تتم عملية فرد العينات فى مكان ليس به تيار هواء ‪.‬‬ ‫•‬
‫ عدم استخدام مروحة أثناء عملية فرد العينات على الشرائح ‪.‬‬ ‫•‬
‫ يمنع تجفيف الشريحة باستخدام اللهب بل بتركها تجف فى الهواء وذلك منعا النتشار الرذاذ‪.‬‬ ‫•‬

‫‪ - V‬لتخلص من المخلفات واستخدام المطهر ‪:‬‬

‫ البد من استخدام طريقة معترف بها ( مسموح بها ) للتخلص من المخلفات البيولوجية‪.‬‬ ‫•‬
‫ تلقى المخلفات ( القفازات – عبوات البصاق – العيدان الخشبية ‪-‬عروات الزرع البالستيك – ورق الترشيح)‬ ‫•‬
‫فى الكيس األحمر بسلة المهمالت ثم يعدم فى األوتوكالف ثم يرسل الى المحرقة ‪.‬‬
‫ يض � � � ��اف فين � � � ��ول ‪ %5‬أو ديتول ‪ %10‬على عبوات البصاق المطلوب التخلص منها لمدة ‪ 24‬س � � � ��اعة اذا لم‬ ‫•‬
‫يتوفر اوتوكالف‪.‬‬
‫ تطهر األيدى بكحول ‪ %70‬بعد غسلها بالماء والصابون‪.‬‬ ‫•‬

‫‪- VI‬مستلزمات المعمل الطرفى (‪: )L1‬‬

‫ مروحة شفط هواء فى المعمل ضعيف التهوية ‪.‬‬ ‫•‬
‫ لمبة أشعة فوق بنفسجية لتعقيم األسطح بالمعمل (يراعي عمل صيانة للمبة االشعة سنويا)‪.‬‬ ‫•‬
‫ بنشات ومقاعد مناسبة للعمل ‪.‬‬ ‫•‬
‫ حوض لغسيل األيدى وحوض اخر للصبغة‪.‬‬ ‫•‬
‫ مكتب ودوالب لحفظ الكيماويات و السجالت وغيرها ‪.‬‬ ‫•‬

‫‪2015‬‬ ‫‪8‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ ال يوجد حاجة لكابينة سالمة بيولوجية‪.‬‬ ‫•‬

‫مكافحة العدوى فى المعمل الوسطى (‪: )L2‬‬

‫‪ -I‬وصف المعمل‪-:‬‬
‫يجب ان يحتوى المعمل على ثالث حجرات على األقل ‪:‬‬
‫ حجرة للتعامل مع العينات وتحتوى هذه الحجرة على كابينة س � � � ��المة بيولوجية وجهاز طرد مركزى وحضان‬ ‫•‬
‫وثالجة أو أكثر ‪.‬‬
‫ حج� � � � �رة للتعقيم واالعدام وتحتوى هذه الحج� � � � �رة على عدد ‪ 2‬أوتوكالف (تعقيم ‪ +‬أعدام )‪ ،‬عدد ‪ 1‬فرن هواء‬ ‫•‬
‫ساخن‪ ،‬عدد ‪ 2‬حوض لغسيل األدوات التى سيعاد استخدامها بعد ادخالها فى األوتوكالف ‪.‬‬
‫ حجرة لتحضير المستنبتات ( الميديا ) تحتوى على حمام مائى‪ ،‬أفران لتسوية الميديا‪ ،‬ثالجات ‪،‬حضانات‪،‬‬ ‫•‬
‫جهاز لتقطير المياه ‪.‬‬
‫ملحوظة ‪:‬‬
‫ ‪‬يجب توفير دوالب لتخزين وحفظ الكيماويات والصبغات‪.‬‬
‫ ‪‬يمكن تحضير الصبغات والمستنبتات في حجرة واحدة‪.‬‬

‫‪ -‬باالضافة الى الشروط الواجب توافرها فى (‪ )L1‬يجب االلتزام باآلتى ‪:‬‬

‫تغلق النوافذ أثناء العمل ‪.‬‬ ‫•‬
‫يصمم أثاث المعمل بحيث يكون سهل تنظيفه والقضاء على الحشرات والقوارض ‪.‬‬ ‫•‬
‫توفير حوض لغسل األيدى وشماعات للمعاطف ‪.‬‬ ‫•‬
‫توفير بنش � � � ��ات مصنوعة من مادة مقاومة للتأكل من الماء أو األحماض أو الكحول أو المطهرات األخرى‬ ‫•‬
‫وتكون سهلة التنظيف (‪. (Epoxy‬‬

‫‪ .II‬مستلزمات المعمل الوسطى (‪: )L2‬‬

‫‪ -‬باالضافة الى المستلزمات الموجودة بالمعمل الطرفى ‪ ,‬يجب توفير اآلتى ‪:‬‬
‫كابينة سالمة بيولوجية ( ‪( Class II A 2‬‬ ‫•‬
‫أوتوكالف للتعقيم واخر لالعدام ‪.‬‬ ‫•‬
‫جهاز طرد مركزى به غطاء لل‪ rotor‬و ‪ bucket‬لكل زجاجة ‪.‬‬ ‫•‬
‫سلة مهمالت معدنية ذات غطاء معدنى حتى يسهل تعقيمها ‪.‬‬ ‫•‬

‫‪9‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫‪ .III‬خطوات العمل ‪:‬‬

‫‪ -‬باالضافة الى ما سبق ذكره فى ‪: L1‬‬
‫يجب اتخاذ الحذر عند الدخول الى المعمل أثناء العمل ‪.‬‬ ‫•‬
‫تكتب تعليمات على باب المعمل توضح ‪:‬‬ ‫•‬
‫‪ )1‬عالمة الخطر ‪.‬‬
‫‪ )2‬اسماء المسئولين بالمعمل ‪.‬‬
‫‪. L2 (3‬‬
‫وضع المعطف ( البالطو ) المعملى أثناء العمل ‪.‬‬ ‫•‬

‫‪ .IV‬التخلص من المخلفات ‪:‬‬

‫إعدام المخلفات البيولوجية قبل التخلص منها وذلك عن طريق وضعها فى أوتوكالف االعدام ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫تعقيم المستلزمات التى سيعاد استخدامها مثل الزجاجيات وسالت المهمالت المعدنية وذلك عن طريق وضعها‬ ‫‪-‬‬
‫فى اوتوكالف التعقيم ‪.‬‬

‫المعمل المرجعي ‪L3‬‬

‫‪ .i‬مكان العمل ‪-:‬‬
‫باالضافة الى الحجرات المطلوب تواجدها فى المعمل الوسطى‪ ،‬يستلزم توافر حجرة لعمل اختبارات الحساسية‬ ‫‪-‬‬
‫للعقاقي � � � ��ر المضادة للدرن إواختبارات التصنيف للميكروب بحيث تحتوى على‪ ،‬كابينه س � � � ��المة بيولوجية‪ ،‬حمام‬
‫مائى‪ ،‬ثالجات‪ ،‬جهاز طرد مركزى‪ ،‬حضانات ‪.‬‬
‫يجب فصل المعمل عن بقية الحجرات التابعة للمعامل االخرى‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫يجب توافر أبواب مزدوجة وبينهما س � � � ��تارة هوائية تقفل ذاتيا ونوافذ يمكن احكام غلقها بحيث تس � � � ��مح باستخدام‬ ‫‪-‬‬
‫غاز تطهير للحجرة ‪.‬‬
‫يجب توافر مولد كهربائى لحاالت القصور الكهربى المفاجىء ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫يجب أن يكون الضغط الجوى فى المعمل أقل منه خارج المعمل حتى اليسمح بخروج هواء ملوث من المعمل‬ ‫‪-‬‬
‫ويفضل وجود جهاز انذار يعمل فى حالة تغير مس � � � ��توى الضغط ويضاف مرش � � � ��ح ‪ HEPA‬ذو مواصفات‬
‫محددة ( قطر الثقب فيه ‪ )0.3µm‬علي مروحة العادم‪.‬‬

‫‪ . II‬مستلزمات المعمل المرجعى ‪-:‬‬

‫باالضافة الى ماسبق ذكره فى المعمل الوسطى‪:‬‬ ‫‪-‬‬
‫كابينة سالمة بيولوجية ‪. Class II A2‬‬ ‫•‬
‫اوتوكالف فى نفس الحجرة أو إذا تعذر ذلك يجب نقل المواد الخطرة المطلوب إعدامها أو تعقيمها بحذر شديد‬ ‫•‬
‫وباتخاذ اجراءات السالمة المطلوبة ‪.‬‬
‫‪2015‬‬ ‫‪10‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫‪ .III‬خطوات العمل ‪:‬‬

‫‪ -‬باالضافة الى ما سبق ذكره بالمعمل الوسطى ‪: L2‬‬
‫دخول المعمل بحذر واالقالل من الحركة أثناء العمل ‪.‬‬ ‫•‬
‫يكتب التعليمات االتية على باب المعمل ‪:‬‬ ‫•‬
‫‪ )1‬عالمة الخطر ‪.‬‬
‫‪ )2‬اسماء المسئولين بالمعمل ‪.‬‬
‫‪. L3 (3‬‬
‫‪ )4‬تحديد الخطورة البيولو جية ‪.‬‬
‫‪ )5‬ارتداء الواقيات الش � � � ��خصية (البالطو أوالجاون احادي االستخدام‪ ،‬ماسك وقفازات وواقي العين) قبل الدخول‬
‫للمعمل‪.‬‬
‫ملحوظة‪ :‬اليتم نقل األجهزة والمستلزمات من معمل الى آخر‪.‬‬

‫‪ .IV‬التخلص من المخلفات‪:‬‬
‫‪ -‬باالضافة الى ما سبق ذكره بالمعمل الوسطى ‪: L2‬‬
‫يفضل توافر حوض س � � � ��عته حوالى ‪ 5-2‬لتر داخل كابينة الس � � � ��المة يحتوى على ‪ %10‬ديتول إللقاء السوائل‬ ‫•‬
‫الملوثة والقطن والشاش وورق النشاف به ‪.‬‬
‫يجب توافر سلة المهمالت المعدنية ذات الغطاء المعدنى ‪.‬‬ ‫•‬

‫‪11‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﻛﺎﺑﻴﻨﺔ اﻟﺴﻼﻣﺔ اﻟﺒﻴﻮﻟﻮﺟﻴﺔ‬

‫الشروط الواجب توافرها أثناء العمل فى الكابينة ‪:‬‬
‫‪ )1‬يجب تحضير كل مستلزمات العمل قبل البدء فى العمل ‪.‬‬
‫‪ )2‬تشغيل الكابينة ومصباح االشعة فوق البنفسجية لمدة نصف ساعة قبل بداية العمل‪.‬‬
‫‪ )3‬يجب اختبار اتجاه الهواء بالكابينة للتأكد من مروره خالل الفتحات وليس فى اتجاه القائم بالعمل ‪.‬‬
‫‪ )4‬تطهير أس � � � ��طح الكابينة من الداخل باس � � � ��تخدام المطهر ( كحول ‪ %70‬أو ديتول ‪ ) %10‬ثم بقطن مشبع بماء‬
‫مقطر معقم‪.‬‬
‫‪ )5‬التمأل الكابينة بمستلزمات غير مستخدمة حتى ال تتكدس الكابينة فيضطرب اتجاه الهواء بها ‪.‬‬
‫‪ )6‬عدم وضع أى شىء فوق فتحات الهواء فى مقدمة الكابينة أو وضع اليدين أثناء العمل فوقها‪.‬‬
‫‪ )7‬تجمع األدوات النظيفة على جانب واألدوات الملوثة على جانب أخر‪.‬‬
‫‪ )8‬يجب أستخدام القفازات فوق فتحة األكمام حتى اليتسرب الهواء اليها ويستحب استخدام اكمام ذات االستخدام‬
‫الواحد او جاون باكمام ويتم التخلص منها بعد انتهاء العمل في االكياس الحمراء‪.‬‬
‫‪ )9‬تح � � � ��رك األيدى بهدوء وببطىء داخل الكابينة وعند إدخاله � � � ��ا أو اخراجها من الكابينة حتى ال يضطرب اتجاه‬
‫الهواء‪.‬‬
‫‪ )10‬ال يستخدم اللهب داخل الكابينة حتى اليضطرب اتجاه الهواء ‪.‬‬
‫‪ )11‬تلقى الملوثات فى المطهر ( ديتول ‪ ) %10‬قبل إخراجها من الكابينة ‪.‬‬
‫‪ )12‬تطهر األسطح الداخلية للكابينة بالكحول ‪ %70‬ثم الماء المقطر المعقم بعد االنتهاء من العمل‪.‬‬
‫‪ )13‬تترك الكابينة تحت التشغيل لمدة ‪ 5‬دقائق بعد االنتهاء من العمل ‪.‬‬
‫‪ )14‬تغلق واجهة الكابينة ويتم تشغيل لمبة األشعة فوق البنفسجية داخل الكابينة لمدة نصف ساعة‬
‫‪ )15‬تنفذ أعمال الصيانة للكابينة سنويا من قبل الشركة أو الهيئه المسئولة ‪.‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪12‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫أعمال التطهير والتخلص من المخلفات البيولوجية‪:‬‬

‫التطهير باستخدام المطهر ‪:‬‬ ‫‪)1‬‬

‫أمثلة للمطهر‬ ‫طريقة عمل المطهر‬

‫كحول اثيلى ‪.‬‬ ‫‪ -‬تدمير الغشاء الدهنى للخلية وخروج السائل‬

‫كلورايد‪.‬‬ ‫الخلوى ‪.‬‬

‫فينول‪.‬‬

‫‪ -‬القضاء على البروتينات واالنزيمات األساسية كلورايد ‪.‬‬

‫‪( H2O2‬ماء األكسجين‪).‬‬ ‫للخلية (الموجودة بالسائل الخلوى) ‪.‬‬

‫فينول ‪.‬‬

‫‪ -‬المطهرات المستخدمة فى معمل الدرن ‪:‬‬

‫‪ %70‬كحول لتطهير األيدى و الجلد ‪ ,‬الجروح ‪ ,‬األس � � � ��طح الداخلية للكابينة وال ‪ rotor‬التابع لجهاز الطرد‬ ‫•‬
‫المركزى ‪.‬‬
‫كلور او ديتول ‪ : %10‬يسكب به السوائل المراد إعدامها ويطهر به األسطح واألدوات ‪.‬‬ ‫•‬

‫التعقيم أو االعدام ‪:‬‬ ‫‪)2‬‬

‫باألوتوكالف عند درجة الح اررة ‪° 121‬م لمدة ‪ 20‬دقيقة للقضاء على البكتريا ‪.‬‬ ‫•‬

‫المخلفات البيولوجية ‪:‬‬ ‫‪)3‬‬

‫تجمع فى األكياس الحمراء المخصصة لهذه المخلفات ثم تنقل الى المحرقة بطريقة منتظمة ‪.‬‬ ‫•‬

‫استخدام الفورمالدهايد فى التطهير ‪:‬‬ ‫‪)4‬‬

‫يستخدم لتطهير األماكن صغيرة السعة مثل كابينة السالمة والحضان‪ .‬يعادل بعد ذلك الفورمالدهايد بالنشادر‬ ‫•‬
‫حيث أنه مسرطن ويسبب حساسية ‪.‬يفضل استخدام ماء االكسجين‪ H2O2‬حيث انه آمن وغير مسرطن‪.‬‬

‫‪13‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫أﻋﻤﺎل اﻟﺼﻴﺎﻧﺔ ﺑﺎﻟﻤﻌﻤﻞ‬

‫‪ ‬مسئوليات العمال ‪:‬‬

‫‪‬‬
‫تنظيف األرضيات واألحواض بالماء والصابون يوميا ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫تجميع المخلفات يوميا ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫تنظيف النوافذ والحوائط والدواليب أسبوعيا ‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫مسئوليات بقية أعضاء المعمل ‪:‬‬ ‫‪‬‬

‫وض � � � ��ع مخلفات العمل فى الكابينة فى الحوض المحتوى على محلول ‪ % 5‬كلور او ديتول ‪ %10‬وتركها لمدة‬ ‫‪-‬‬
‫ساعتين ثم إعدامها فى األوتوكالف ‪.‬‬

‫‪ ‬أعمال الصيانة لألجهزة فى المعمل ‪: L2,L3‬‬

‫كابينة السالمة البيولوجية ‪- :‬‬ ‫‪-‬‬
‫صيانة يومية بعد االنتهاء من العمل ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫تنظيف من الداخل بديتول ‪ % 10‬ثم بماء مقطر يتم تعقيمه ثم تجفف بالورق النشاف وتزال طاولة العمل‬ ‫•‬
‫وينظف ويطهر المكان تحتها بكحول ‪ %70‬ويشطف بالماء والصابون‪.‬‬
‫صيانة سنوية للكابينة (تطهير ومعايرة) بواسطة الشركة المتخصصة‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫جهاز الطرد المركزى ‪- :‬‬

‫إذا س � � � ��كبت الس� � � � �وائل به ‪ ,‬ينظف من الداخل ب ‪ %10‬ديتول وماء وصابون ويراعى صيانته كل ‪ 6‬شهور من‬ ‫‪-‬‬
‫قبل الشركة المتخصصة‪.‬‬

‫الحضان ‪- :‬‬
‫ينظف الحضان اسبوعيا بالكحول ‪ %70‬و تكون الصيانة العامة سنويا عن طريق الشركة‪.‬‬ ‫•‬

‫األوتوكالف ‪- :‬‬
‫• يشطف بالماء والصابون وينظف الفلتر شهريا ‪.‬‬
‫• وتكون الصيانة العامة سنويا عن طريق الشركة ‪.‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪14‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫الديب فريزر ‪° 20 - :‬م و ‪°80-‬م‬

‫يزال الثلج المترسب على الباب مرة شهريا حتى يحكم غلق الباب ويتم إزالة األتربة من الظهر الخلفى‪.‬‬ ‫•‬
‫تكون الصيانة العامة سنويا بواسطة الشركة المتخصصة‪.‬‬ ‫•‬

‫الثالجات ‪:‬‬
‫تكون الصيانة العامة س � � � ��نويا أوعند اللزوم عن طريق اخ � � � ��الء الثالجات من المحتويات وفرزها إواختبار تاريخ‬ ‫•‬
‫انته � � � ��اء الصالحية لهذه المحتويات والتخلص م � � � ��ن المنتجات منتهية الصالحية ‪ .‬كما تزال األتربة من الظهر‬
‫الخلفى لكل ثالجة شهريا‪.‬‬

‫‪15‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﺣـــﺎﻻت اﻟﻄـــــﻮارىء‬

‫يعتبر االهمال هو السبب الرئيسى لحاالت الطوارىء ‪.‬‬

‫اوال ‪ .‬إذا سكبت مواد ملوثة داخل كابينة الحماية ‪:‬‬
‫يستخدم قفاز جديد ‪.‬‬ ‫•‬
‫يوضع ورق نش � � � ��اف على مكان الس � � � ��كب ويصب عليه ديتول ‪ %10‬ويمسح المسكوب بالورق النشاف المشبع‬ ‫•‬
‫بالديت � � � ��ول ‪ .‬يكرر ذلك مرة أخرى ويلقى الورق بكي � � � ��س النفايات‪ .‬ينظف المكان بعد ذلك بماء مقطر و معقم‬
‫ويجفف‪.‬‬
‫ يجب ترك الكابينه تعمل طوال فتره التنظيف والتطهير‪.‬‬ ‫•‬
‫إذا تسرب السائل المسكوب تحت طاولة العمل ‪ ,‬تزال هذه الطاولة وينظف تحتها بما سبق ذكره ‪.‬‬ ‫•‬

‫ثانيا ‪ .‬إذا سكبت مواد ملوثة على المعطف المعملى ( البالطو ) ‪:‬‬
‫يخلع البالطو ويغس � � � ��ل جيدا بالماء والصابون ويجفف ويكوى إواذا كان ورقيايلقى فى كيس النفايات ويعدم فى‬ ‫•‬
‫األوتوكالف ‪.‬‬
‫يستخدم بالطو آخر نظيف ‪.‬‬ ‫•‬

‫ثالثا‪ .‬إذا سكبت مواد ملوثة خارج كابينة السالمة ‪:‬‬

‫مثل سكب علب البصاق على األرض ‪ -‬كسر زجاجات مزارع ايجابية النتيجة ‪.‬‬
‫يترك المعمل لمدة ساعة حتى يترسب الرذاذ المنبعث من المواد الملوثة ويصبح تحت مستوى الفم واألنف ‪.‬‬ ‫•‬
‫يمنع دخول العاملين الي المعمل ‪.‬‬ ‫•‬
‫يدخل المسئول للمعمل مرة أخرى بالبالطو والقفاز والقناع ( الماسك )‪.‬‬ ‫•‬
‫يتم احتواء االنسكاب اوال بالقطن او الشاش ثم يرمى بالسلة الخطرة يوضع المطهر و يترك لمدة نصف ساعة‪.‬‬ ‫•‬
‫يرفع محتوى المواد الملوثة وتلقى فى األكياس الحمراء ‪.‬‬ ‫•‬
‫يتم تنظيف و تطهير المعمل بالكامل ثم يعرض لالشعة فوق البنفسجيه لمدة نصف ساعه‪.‬‬ ‫•‬

‫رابعا ‪ .‬إذا سكبت مواد ملوثة على الجلد‪:‬‬

‫يشطف الجلد بماء ساخن ‪.‬‬ ‫•‬
‫يطهر الجلد بكحول ‪. %70‬‬ ‫•‬
‫يضغط على الجلد بورق نشاف بعد تطهيره‪.‬‬ ‫•‬

‫‪2015‬‬ ‫‪16‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫خامسا ‪ .‬إذا انثقب القفاز وجرح الجلد أثناء العمل ‪:‬‬

‫يخلع القفاز داخل الكابينة ثم تغسل االيدي بماء جاري ‪.‬‬ ‫•‬
‫يطهر الجلد بكحول ‪. %70‬‬ ‫•‬
‫إذا كان هناك نزيف‪ ،‬يغس � � � ��ل يالماء والصابون ويطهر ويتم الضغط على مكان النزيف بدون عس � � � ��ر لمكان‬ ‫•‬
‫الجرح‪.‬‬
‫سادسا ‪ .‬إذا سكبت مواد ملوثة فى العين ‪:‬‬
‫تشطف العين لمدة ¼ ساعة بالماء الجارى‪.‬‬ ‫•‬
‫تفتح العين أثناء عملية شطفها بالماء‪.‬‬ ‫•‬

‫ملحوظة ‪ :‬عند حدوث أى حالة طوارى بالمعمل ‪:‬‬

‫يبلغ مدير المعمل أو الطبيب المسئول ‪.‬‬ ‫•‬
‫يكتب تقرير بالحادثة مبين به وصف الحادثة واسم المصاب واالجراء الذى اتخذ لضمان سالمة العاملين بالمعمل ‪.‬‬

‫اﻟﺸﺮوط اﻟﻤﻄﻠﻮﺑﺔ دوﻟﻴﺎ وﻋﺎﻟﻤﻴﺎ ﻟﻨﻘﻞ ﻣﺰارع اﻟﻤﻴﻜﻮﺑﻜﺘﺮﻳﺎ اﻟﺪرﻧﻴﺔ‬

‫)‪(Mycobacterium Tuberculosis Complex‬‬

‫فى حالة نقل السالالت الدرنية خارج البالد‪ ،‬يراعى الشروط اآلتية‪:‬‬ ‫‪-‬‬
‫تعد مزارع ال‪ MTC‬من المواد المعدية (‪ )Category A‬التى تحتوى على كم هائل من الميكروب الحى الذى‬ ‫‪-‬‬
‫يسبب المرض لالنسان ‪ .‬كما تتضاعف الخطورة إذا كان الميكروب مقاوم للعقاقير المضادة له‪.‬‬
‫المزارع إما أن تكون على ميديا صلبة ( ‪ ) LJ‬فى أنابيب أو زجاجات محكمة الغلق أو األفضل أن تكون فى‬ ‫‪-‬‬
‫هيئة معلق من الميكروب فى ميديا سائلة (‪ )7H9‬بحيث تكون الكمية ‪ 1.5ml‬من المعلق فى أنبوبة‬
‫( ‪.)crytube 2 m‬‬
‫كل أنبوبة تلف فى ورق نش � � � ��اف وتوضع مع بقية األنابيب أمثالها فى عبوة اخرى محكمة الغلق وتلك العبوة‬ ‫‪-‬‬
‫األخيرة توضع فى عبوة أكبر مصنوعة من مادة الفيبر المتعرج أو الكرتون أو الخش � � � ��ب بحيث ترس � � � ��م عليها‬
‫عالمة الخطر ( الحذر ) من الخارج‪.‬‬

‫‪17‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫اﻟﺘﻌﻘﻴـــــــــــــــﻢ‬
‫‪ .1‬جميع العينات والمزارع والمواد المستخدمة في المعمل يجب تعقيمها قبل إعدامها أو إعادة استخدامها ‪.‬‬
‫‪ .2‬يتم التعقيم في األوتوكالف لمدة ‪ 20‬دقيقة في درجة ح اررة ‪o121‬م ( ‪ 1,2‬ضغط جوي ) للمحاليل عدا المواد‬
‫البروتينية والسكريات ‪.‬‬
‫‪ .3‬يجب التأكد من كفاءة األوتوكالف باستخدام المؤشرات البيولوجية أو الكيميائية مع كل دورة تعقيم‪.‬‬
‫‪ .4‬يراعى تنظيف األوتوكالف يوميا من الداخل والتأكد من وجود الكمية الكافية من الماء قبل تشغيله‪.‬‬
‫‪ .5‬عدم تكديس األوتوكالف لترك فرصة لدورة البخار إواخراج الهواء‪.‬‬
‫‪ .6‬حساب وقت التعقيم عند الوصول إلى درجة الح اررة المطلوبة و ليس عند بدء التشغيل ‪.‬‬
‫‪ .7‬عدم فتح الجهاز قبل ان يبرد تماما ‪.‬‬
‫‪ .8‬تعقم الزجاجيات فى فرن الهواء الساخن عند درجة ‪o180‬م لمدة نصف ساعة ‪.‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪18‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫اﻟﻄﺮق اﻟﻤﻌﻤﻠﻴﺔ ﻟﺘﺸﺨﻴﺺ اﻟﺪرن‬

‫العينات‪:‬‬
‫‪ -‬أنواع العينات‪:‬‬
‫اوال ‪ :‬في حاالت الدرن الرئوي‬
‫‪ -1‬البصاق‪.‬‬
‫‪ -2‬الغسيل الشعبي‪.‬‬
‫ثانيا ‪ :‬في حاالت الدرن خارج الرئة‬
‫‪ -1‬البول‪.‬‬
‫‪ -2‬البراز‪.‬‬
‫‪ -3‬سوائل الجسم مثل سائل االستسقاء(‪ ،) Ascitis‬ارتشاح تامورى( ‪ ،) Pericardial effusion‬سائل‬
‫بللورى (‪ ،)Pleural effusion‬سائل النخاع (‪.(C.S.F‬‬
‫‪ -4‬البذل من الغدد الليمفاوية‪.‬‬

‫‪ -‬طرق التعامل مع العينات المختلفة ‪ :‬جمعها – حفظها‪ -‬نقلها‬

‫البصاق ( ‪:) Sputum‬‬
‫يجمع فى أكواب بالستيك نظيفة ذات غطاء محكم و فوهة واسعة و يفضل ان تكون معقمة فى حالة‬ ‫‪-‬‬
‫طلب مزرعة ‪.‬‬
‫ينصح المريض بغسل الفم جيدا أو عمل مضمضة إلزالة بقايا الطعام أو األدوية ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫يسعل المريض عدة مرات للتأكد من الحصول على العينة من داخل الرئة والشعب الهوائية‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫تؤخذ ‪ 3‬عينات على يومين متتاليين من المريض أحدهما عينة الصباح الباكر ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫يكفى لعمل الفحوص الالزمة من ‪ 10-5‬ملي بصاق فى حالة المزرعة و‪ 5-3‬ملي فقط فى حالة‬ ‫‪-‬‬
‫الفحص المباشر‪.‬‬

‫البول ( ‪:) Urine‬‬

‫يجم � � � ��ع بول الصباح الباك � � � ��ر فى زجاجة نظيفة و جافة وتحفظ بعيدا ع � � � ��ن الضوء و فى مكان بارد‬ ‫‪-‬‬
‫(الثالجة)‬
‫يفضل فحص ‪ 5‬عينات فى خمسة أيام متتالية ألن إفراز عصيات الدرن يكون متقطعا وترسل يوميا‬ ‫‪-‬‬
‫للمعمل ‪.‬‬
‫تترك العينة حتى تترسب ثم تدار فى جهاز الطرد المركزى و يؤخذ الراسب لعمل الفيلم ثم المزرعة‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫‪19‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫سوائل الجسم(‪ - :)Body Fluids‬مثل ‪:‬‬

‫سائل االستسقاء(‪ ،) Ascitis‬ارتش � � � ��اح تامورى( ‪ ،) Pericardial effusion‬سائل بللورى(‪Pleural effu-‬‬ ‫س‬
‫‪ ،)sion‬سائل النخاع الشوكى(‪.(C.S.F‬‬
‫يج � � � ��ب جمع هذه العينات تح � � � ��ت احتياطات تعقيم معين � � � ��ة (‪ )Aseptic conditions‬في أنابيب أو‬ ‫‪-‬‬
‫زجاجات تحتوي علي مادة مانعة للتجلط مثل أوكساالت(‪ )oxalates‬أوسترات (‪)citrates‬الصوديوم‪.‬‬
‫هذه السوائل عادة ما تكون محتوية على عدد قليل من العصيات ومن الصعب اكتشافها في الفحص‬ ‫‪-‬‬
‫المباشر أو المزارع ‪.‬‬
‫ولزيادة فرصة اكتش � � � ��اف عصيات الدرن ‪ :‬يجب جمع أكبر كمية من الس � � � ��ائل وزرع عدد كبير من‬ ‫‪-‬‬
‫زجاجات المستنبتات ‪.‬‬
‫وقد وصف العالم(‪ )Eberle‬طريقة لزيادة فرص اكتشاف العصيات في السوائل المختلفة ‪:‬‬ ‫‪-‬‬
‫‪ .1‬يسحب السائل بكمية كبيرة في زجاجة معقمة ‪.‬‬
‫يضاف نقطتان من ‪ % 20‬سترات الصوديوم المعقم لكل ‪ 10‬مل من السائل ‪.‬‬ ‫‪.2‬‬
‫يدار السائل في جهاز الطرد المركزي بسرعة عالية لمدة ‪ 30‬دقيقة ‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫يسحب السائل الفوقي(‪)Supernatant‬بواسطة ماصة باستير ويترك الراسب ‪.‬‬ ‫‪.4‬‬
‫يلقح جزء من الراسب علي طبق أجار دم ويحضن لليوم التالي ‪.‬‬ ‫‪.5‬‬
‫يحفظ باقي الراسب في الثالجة ‪.‬‬ ‫‪.6‬‬
‫يزرع الراسب علي أكبر عدد من زجاجات المستنبتات إذا لم يظهر نمو علي طبق أجار الدم‪.‬‬ ‫‪.7‬‬
‫‪ .8‬يجب معاملة الراسب قبل الزرع بنفس الطريقة التي يعامل بها البصاق ( طريقة التطهير والتركيز‬
‫‪ ) Concentration & Decontamination‬إذا احتوى طبق أجار الدم علي ميكروبات ‪.‬‬

‫حفظ ونقل العينة‪:‬‬

‫الحفظ ‪:‬‬
‫اليزيد الوقت بين أخذ العينة وزرعها عن ثالثة أيام فى حالة البصاق اما البول وباقي سوائل الجسم‬ ‫♦‬
‫تزرع بعد سحبها مباشرة‪.‬‬
‫تحفظ عينات البصاق فى الثالجة لحين نقلها وتنقل لمكان زرعها مرتين فى األسبوع‪.‬‬ ‫♦‬

‫النقل‪:‬‬
‫تنقل العينات فى عبوات خاصة معقمة ومحكمة الغلق وتوضع فى راكات خاصة يحمل كل راك من‬ ‫♦‬
‫‪ 30-20‬عبوة توضع أفقياً فى الراك وتحاط كل عبوة بقطن حتى يمتص أى سائل مسكوب ‪ .‬يفضل‬
‫وضع الراكات فى ثالجات متنقلة محكمة الغلق وتكون بعيدة عن أشعة الشمس‪.‬‬
‫توضع االستمارات المرفقة بعيداً عن العينات ‪ .‬ترفق استمارة مع كل ثالجة متنقلة توضح محتوياتها‬ ‫♦‬
‫وأسماء المرضى ‪.‬‬
‫‪2015‬‬ ‫‪20‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫قبل التحرك بالثالجة المتنقلة المحتوية على العينات ‪ ،‬يجب مراعاة االتى ‪:‬‬ ‫♦‬
‫‪ .1‬مقارنة األرقام الموجودة على العبوات باألرقام التى باالستمارة المرفقة ‪.‬‬
‫‪ .2‬مقارنة عدد العينات بالثالجة بعدد العينات المكتوبة باالستمارة المرفقة ‪.‬‬
‫‪ .3‬وجود المعلومات الكافية للمرضى على االستمارة المرفقة ‪.‬‬
‫‪ .4‬وجود تاريخ نقل العينات واسم المركز المأخوذ منه العينات على االستمارة المرفقة ‪.‬‬

‫إستالم العينة‪:‬‬
‫يفضل استالم العينة فى مكان مخصص الستالم العينات ‪.‬‬ ‫♦‬
‫تفتح الثالجة المتنقلة فى كابينة السالمة البيولوجية إن وجدت ‪.‬‬ ‫♦‬
‫يراعى االتى عند إخراج العينات ‪:‬‬ ‫♦‬
‫‪ .1‬لبس القفازات أثناء اخراج العينات ‪.‬‬
‫‪ .2‬فحص العينات ومالحظة وجود أى سائل منسكب ‪.‬‬
‫‪ .3‬تعقيم الثالجة بفوطة مشبعة ب�‪ %5‬فينول من الخارج ‪.‬‬
‫‪ .4‬فتح الثالجة بحرص ويالحظ وجود أى عبوات مكسورة ‪ .‬اذا وجدت عبوات مكسورةيطلب عينات‬
‫أخرى من نفس المريض وتعقم العينات التالفة ثم تحرق ‪.‬‬
‫‪ .5‬مقارنة األرقام على العبوات باألرقام على االستمارة ‪.‬‬
‫‪ .6‬تعقيم الثالجة من الداخل بفوطة مشبعة ب�‪ %5‬فينول ‪.‬‬
‫‪ .7‬التخلص من القفازات بالتعقيم والحرق ‪.‬‬
‫‪ .8‬غسل األيدى بالماء والصابون ثم ‪ % 70‬كحول ‪.‬‬

‫حفظ ونقل المزارع‪:‬‬

‫توضع العينات المزروعة على المستنبت فى الحضان عند درجة ‪o 37–35‬م لحين ظهور المستعمرات‬ ‫♦‬
‫عليها أو حتى يمر عليها ‪ 8‬أسابيع ‪.‬‬
‫تحفظ المزارع اإليجابية فى الثالجة عند درجة ‪o8 – 2‬م لحين نقلها ‪.‬‬ ‫♦‬
‫تنقل المزارع اإليجابية بنفس الراكات السابق وصفها فى نقل عبوات البصاق ولكن ال داعى لوضع‬ ‫♦‬
‫القطن حولها‪ ،‬ثم توضع فى الثالجة المتنقلة لنقلها إلى المعمل المركزي لعمل اختبارات الحساس � � � ��ية‬
‫لها ‪.‬‬

‫‪21‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫‪-II‬اﻻﺧﺘﺒﺎرات اﻟﻤﺘﺒﻌﺔ ﻓﻲ اﻟﺘﺸﺨﻴﺺ‬

‫أوال الطرق التقليدية في التشخيص‪:‬‬

‫‪-1‬الفحص المجهري المباشر‪:‬‬
‫المزايا ‪:‬‬
‫وسيلة سريعة للتشخيص ‪.‬‬ ‫‪.1‬‬
‫قليلة التكاليف ‪.‬‬ ‫‪.2‬‬
‫ال تحتاج إلي مهارة فائقة أو تجهيزات معقدة ‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫يعطى مؤش ار تقريبياً(‪ )Rough index‬لعدد العصيات في العينة ‪.‬‬ ‫‪.4‬‬
‫اكتشاف المريض المعدى(‪ )infectious‬وكذلك متابعة المريض أثناء العالج ‪.‬‬ ‫‪.5‬‬

‫العيوب ‪:‬‬
‫يعتبر من الوسائل األقل حساسية الكتشاف المرض (‪(Less sensitive‬‬ ‫‪.1‬‬
‫أش � � � ��ار العالم ‪ Cummings‬إلي أن عينة البصاق ال تكون إيجابية في الفحص المجهري إال في‬ ‫‪.2‬‬
‫حالة وجود (‪10000-5000‬عصية ‪ /‬مل ) ‪.‬‬
‫ال يفرق بين عصيات الدرن النموذجية وغير النموذجية (‪. ( Less specific‬‬ ‫‪.3‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪22‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ًأ‪ :‬ﺻﺒﻐﺔ اﻟﺰﻳﻞ ﻧﻠﺴﻦ )‪( Z.N.)–(Ziehl Neelsen‬‬

‫تحضير الكواشف‬
‫‪ -1‬محلوال لفوكسين الكحولي المركز‪:‬‬

‫‪ 10‬جم‬ ‫فوكسين قاعدي ( ‪( basic fuchsin‬‬

‫‪ 100‬مل‬ ‫كحول إثيلى ‪% 95‬‬
‫ملحوظة ‪ :‬يمكن تحضير محلول الفوكسين بـ ‪ 3‬جم حسب جودة الصبغة‪.‬‬
‫‪ -2‬محلول الفينول ‪: % 5‬‬

‫‪ 50‬جم‬ ‫بللورات فينول‬

‫‪ 950‬مل‬ ‫ماء مقطر‬
‫تسيل بللورات الفينول فى حمام مائي ثم يؤخذ منها ‪ 50‬مل في مخبار وتضاف إلي الماء المقطر حتى ‪ 1‬لتر‬
‫‪ -3‬تحضير صبغة الزيل نلسن الشغالة‪:‬‬

‫‪ 100‬مل‬ ‫محلول الفوكسين الكحولي المركز‬

‫‪ 900‬مل‬ ‫محلول فينول ‪% 5‬‬
‫تخلط وترج جيدا ثم ترشح في زجاجة بنية اللون ‪.‬‬
‫يكتب أسم الصبغة وتاريخ التحضير علي الزجاجة وتحفظ بعيدا عن الضوء ‪.‬‬
‫‪ -4‬تحضير الكحول الحمضي (محلول التبهيت)‪:‬‬

‫‪ 970‬مل‬ ‫‪ -‬كحول مثيلي ‪% 95‬‬

‫‪ 30‬مل‬ ‫حامض الهيدروكلوريك المركز‬
‫ملحوظة ‪:‬يضاف الحامض الى الكحول دائماًوليس العكس‪.‬‬
‫‪ -5‬الصبغة المبينة ‪: )Contrast or Counter stain ( :‬‬

‫‪ 0,1‬جم‬ ‫‪ -‬كلوريد أزرق المثيلين‬

‫‪ 100‬مل‬ ‫ماء مقطر‬
‫يمزج إلذابته جيدا ‪.‬‬

‫‪23‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫طريقــــــة العمــــــل‬

‫‪ -1‬طريقة إعداد المسحات ‪:‬‬

‫الترقيم ‪:‬ترقم الش� � � � �رائح علي طرف الشريحة بالحفر بواسطة‬
‫القلم ذو الطرف الماسي او يكتب علي الجزء المصنفر من‬
‫الشريحة‪.‬‬
‫الفرد ‪:‬ينقل الجزء الصلب المتقيح من العينة إلي الش� � � � �ريحة بواسطة عيدان‬
‫خش � � � ��بية كما في حالة البصاق أو بعروة الزرع كما ينقل ال ارس � � � ��ب بواسطة‬
‫ماصة باستير في حالة البول وغيره من السوائل بعد تدويره في جهاز الطرد‬
‫المركزى‪.‬‬
‫تفرد العينة بعروة الزرع الس � � � ��لك بمساحة‪ 2×1‬س � � � ��م بحيث تكون متجانسة‬
‫ورقيقة بقدر اإلمكان ‪.‬‬
‫يفضل عمل المسحة في صورة دوائر حلزونية متداخلة ومتكررة كما في الرسم ‪.‬‬
‫ملحوظة‪ :‬يجب عدم مزج العينة الن هذا يؤدى إلى تخفيفها‪.‬‬
‫التجفيف ‪:‬تجفف الشريحة في الهواء لمدة ‪ 30-15‬دقيقة وينصح بعدم استعمال اللهب ‪.‬‬
‫يجب عدم تعرض المسحة لضوء الشمس المباشر أو ‪.U.V‬أو للح اررة الشديدة حيث يفقد الميكروب‬
‫خاصية ‪. Acid - Fastness‬‬
‫التثبيت ‪:‬يثبت الفيلم بتمريره فوق موقد بنزن ثالث مرات لمدة ‪ 5-3‬ثوان‪.‬‬
‫تطهيــــــر المواد الملوثة ‪:‬بإلقائها ف � � � ��ي وعاء معدني ذو غطاء وغير قابل للصدأ به مطهر ثم تعدم‬
‫في األوتوكالف ‪.‬‬
‫يجب حرق العروة الس � � � ��لك بين كل عين � � � ��ة وأخري بعد وضعها في زجاجة بها رمل‬
‫وكحول إلزالة أي عالق بها حتى ال ينتشر الرذاذ بالمعمل‪.‬‬
‫‪ -2‬طريقة الصبغة ‪:‬‬
‫ توضع الش� � � � �رائح علي الحامل ( ‪ 12-10‬شريحة علي األكثر ) بحيث يكون‬ ‫•‬
‫الس � � � ��طح المفرود عليه الفيلم ألعلي والطرف المرقم في أتجاه القائم بالعمل ‪.‬‬
‫وتوضع الشرائح متباعدة‪.‬‬
‫ يغطي الفيلم بقطعة من ورق الترشيح ‪.‬‬ ‫•‬
‫ يغطي سطح الشرائح بأكمله بالفوكسين القاعدي ‪.‬‬ ‫•‬
‫ يتم التسخين بلطف حتى يظهر بخار وذلك باستخدام قطعة من القطن علي‬ ‫•‬
‫مرود وتبلل بالكحول مع تجنب الغليان أو جفاف الصبغة وتكرر هذة العملية‬
‫من ‪ 3 – 2‬مرات ‪.‬‬
‫ تترك الصبغة الدافئة علي الشريحة من ‪ 10-7‬دقائق ‪.‬‬ ‫•‬

‫‪2015‬‬ ‫‪24‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ تشطف كل شريحة علي حدة بعد إزالة ورق الترشيح بواسطة ملقط ( جفت )‬ ‫•‬
‫إوالقائه في وعاء اإلعدام ‪.‬‬
‫ يتم التخلص من ماء الش � � � ��طف بوضع الشريحة مائلة بواسطة الجفت وتغطي‬ ‫•‬
‫الشرائح كل منها بمحلول إزالة اللون ( الكحول الحمضي ) لمدة ‪ 3‬دقائق ثم‬
‫تشطف بماء الصنبور وتكرر هذه الخطوة حتى يزول اللون تماما‬
‫ تشطف الشرائح بالماء الجاري كل علي حدة في وضع مائل وبرفق‪.‬‬ ‫•‬
‫ توضع الش� � � � �رائح على الحامل وتغطي بالصبغة المبينة (‪(counter stain‬‬ ‫•‬
‫لمدة ‪ 60‬ثانية ‪.‬‬
‫ تش � � � ��طف وتترك لتجف في الهواء بعيداً عن ضوء الشمس ( ال يستعمل ورق‬ ‫•‬
‫الترشيح في التجفيف ) ‪.‬‬
‫ يج � � � ��ب تجن � � � ��ب إجراء الصبغة لعدد كبير من الش� � � � �رائح في آن واحد بس � � � ��بب‬ ‫•‬
‫االحتمال الفعلى النتقال التلوث من شريحة ألخرى ‪.‬‬

‫‪ -3‬طريقةالفحص بالمجهر‪:‬‬
‫يستخدم المجهر ثنائي العدسة العينية (‪Bin-‬‬
‫‪ )ocular‬ذو مصدر ضوئي كهربائي‬
‫يرفع المكثف ألعلي ويفتح الحجاب آلخره مع‬ ‫‪-‬‬
‫ضبط الضوء الكهربى ‪.‬‬
‫توضع الشريحة علي المسرح بعد وضع نقطة‬ ‫‪-‬‬
‫زيت سيدر على طرف الفيلم ‪.‬‬
‫لتجنب تلوث الزيت يجب عدم لمس الشريحة‬ ‫‪-‬‬
‫بالم � � � ��رود الزجاجي أو قطارة الزيت ولكن تترك‬
‫نقطة الزيت لتسقط على الشريحة ‪.‬‬
‫تفحص الشريحة بواسطة العدسة الزيتية ذات‬ ‫‪-‬‬
‫التكبير × ‪. 100‬‬
‫يفح � � � ��ص م � � � ��ا ال يقل عن ‪ 300‬حقل مجهري قبل إعطاء النتيجة س � � � ��لبية وذلك بفحص‪ 3‬خطوط طولية بطول‬ ‫‪-‬‬
‫الفيلم ‪ -‬كما فى الرسم ثم عشوائياً ‪.‬‬

‫‪25‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫تظهر عصيات الدرن في ش � � � ��كل عيدان رفيعة حمراء مقوس � � � ��ة بعض الشئ محببة إلي حد ما‪ ،‬منفردة أو مزدوجة أو‬
‫مجموعات وتكون واضحة تماما على الخلفية الزرقاء‪ .‬تعد العصيات الصامدة للحمض (‪ )AFB‬ويسجل العدد في‬
‫سجل النتائج بالشفرة المتفق عليها ‪- :‬‬

‫بعد الفحص والتأكد من الرقم لكل شريحة تمسح بقطعة من الشاش مبللة بالزيلول للتخلص من زيت الغمر وتوضع‬
‫في صندوق خاص بالشرائح حسب ترتيبها في سجل المعمل‪.‬‬
‫‪ -‬يجب مسح العدسة الزيتية بعد فحص كل شريحة بقطعة من الشاش النظيف‪.‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪26‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ب‪ :‬ﺻﺒﻐﺔ ﻓﻠﻮروﻛﺮوم )‪(Fluorochrome‬‬

‫تس � � � ��تخدم صبغة فلوروسنتية لصبغ العصيات المقاومة للحمض مع اس � � � ��تخدام صبغة مبينة للخلفية مثل برمنجنات‬
‫البوتاسيوم او باستخدام اكريدين برتقالى (‪.( Acridin orange‬‬

‫تحضير الكواشف‬
‫أ– الصبغة ‪:‬‬
‫محلول(أ)‪:‬‬
‫‪ 0.1‬جم‬ ‫اورامين (‪)Auramine‬‬
‫‪ 10‬مل‬ ‫كحول إثيلى ‪% 95‬‬
‫محلول(ب)‪:‬‬
‫‪ 3‬جم‬ ‫بللورات الفنيول‬
‫‪ 87‬مل‬ ‫ماء مقطر‬
‫يمزج المحلوالن ( أ‪+‬ب )‬ ‫‪-‬‬
‫يحفظ فى زجاجة بنية اللون و محكمة اإلغالق بعيدا عن الح اررة و الضوء ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫ملحوظة ‪ :‬إذا وجدت عكارة مع طول فترة التخزين ال يعني هذا فقد الفاعلية ‪.‬‬

‫ب – محلول مزيل اللون‪:‬‬

‫‪ 0.5‬مل‬ ‫حمض الهيدروكلوريك المركز‬
‫‪ 10‬مل‬ ‫الكحول اإلثيلي ‪% 70‬‬
‫ملحوظة ‪:‬‬
‫‪.‬‬ ‫إذا وجدت عكارة مع طول فترة التخزين ال يعني هذا فقد الفاعلية‬

‫ج – الصبغة المبينة‪:‬‬
‫‪ -1‬برمنجات البوتاسيوم‪:‬‬
‫‪ 0.5‬جم‬ ‫برمنجنات البوتاسيوم‬
‫‪ 100‬مل‬ ‫ماء مقطر‬
‫تحفظ في زجاجة بنية‪.‬‬
‫‪ -2‬أكريدين برتقالى‪:‬‬

‫‪ 0,01‬جم‬ ‫فوسفات الصوديوم الثنائي القاعدية الالمائي‬

‫‪ 100‬مل‬ ‫ماء مقطر‬
‫‪ 0,01‬جم‬ ‫األكريدين البرتقالي‬
‫يضاف االكريدين البرتقالى بعد اذابة فوسفات الصوديوم في الماء المقطر ويذاب جيدا ثم يحفظ في زجاجات بنية‬
‫اللون محكمة اإلغالق ‪.‬‬

‫‪27‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﻃﺮﻳﻘﺔ اﻟﻌﻤﻞ‬

‫تثبيت المسحات علي الشرائح بالتسخين ‪.‬‬ ‫• ‬

‫تغمر الشرائح باألورامين لمدة ‪ 15‬دقيقة بدون تسخين ‪.‬‬ ‫• ‬
‫تشطف بماء الصنبور ويسكب الماء ‪.‬‬ ‫• ‬
‫يزال اللون بالكحول الحمضي لمدة دقيقتين ‪.‬‬ ‫• ‬
‫تشطف بماء الصنبور ثم يسكب الماء ‪.‬‬ ‫• ‬
‫تغمر الشرائح بالصبغة المبينة ‪ 1‬أو ‪ 2‬لمدة ال تزيد عن ‪ 4‬دقائق ‪.‬‬ ‫• ‬
‫تشطف بالماء ثم يسكب ‪.‬‬ ‫• ‬
‫تترك لتجف في الهواء ‪.‬‬ ‫• ‬
‫تفحص مباشرة بعد الصبغة ‪.‬‬ ‫• ‬

‫الفحص المجهري ‪:‬‬

‫تفحص بالمجهر االستشعاعي (‪(Fluorescent Microscope‬‬ ‫• ‬
‫‪.BG-12or 5113 Primary filter with an OG-1 barrier filter system‬‬ ‫•‬
‫في هذا النظام تشع العصيات المقاومة للحمض ضوء اصفر متألق‬ ‫• ‬
‫(‪.( Bright Yellow Fluorescence‬‬ ‫• ‬
‫مع الصبغة المبينة ببرمنجنات البوتاس � � � ��يوم تش � � � ��ع الخلفية ضوء أصفر باهت يختلف عن لون العصيات ‪ ،‬أما‬ ‫• ‬
‫مع األكريدين البرتقالي فالخلفية تصبغ باللون األحمر أو البرتقالي التي تختلف كلية عن الضوء المنبعث من‬
‫العصيات ‪.‬‬
‫يمكن عمل فحص دقيق وس� � � � �ريع لألفالم بالعدسة الشيئية ذات التكبير × ‪ 10‬وفي بعض األحيان نحتاج إلي‬ ‫• ‬
‫الفحص بواسطة العدسة × ‪ 40‬أو × ‪ 45‬للتحقق من شكل العصيات ‪.‬‬
‫يجب التأكد من الشرائح اإليجابية بصبغها بصبغة ‪ Z.N‬بدون إزالة األورامين ‪.‬‬ ‫• ‬

‫‪2015‬‬ ‫‪28‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ج‪ :‬ﺻﺒﻐﺔ اﻟﻜﻴﻨﻴﻮن ) اﻟﺼﺒﻐﺔ اﻟﺒﺎردة(‬

‫تحضير الكاشف‪:‬‬
‫‪ 4‬جرام‬ ‫فوكسين قاعدى‬
‫‪ 20‬مل‬ ‫كحول إثيلى ‪%95‬‬
‫يذاب مع الرج مع إضافة الكحول ببطء‬
‫‪100‬مل‬ ‫ماء مقطر‬
‫‪ 8‬جرام‬ ‫بللورات الفينول المذابة‬
‫تحضير محلول مزيل اللون والصبغة المبينة كما فى طريقة ال (‪.(ZN‬‬

‫الخطوات‪:‬‬
‫تثبيت الفيلم على الشريحة بواسطة اللهب‪.‬‬ ‫‪-1‬‬
‫يغطى سطح الشريحة بصبغة الكينيون كاربول فوكسين من ‪ 15 – 10‬دقيقة بدون تسخين‪.‬‬ ‫‪-2‬‬
‫تشطف الشرائح إلزالة الصبغة بالماء المقطر‪.‬‬ ‫‪-3‬‬
‫يزال اللون بمحلول الكحول الحمضى لمدة ‪ 3‬دقائق‪.‬‬ ‫‪-4‬‬
‫تشطف بالماء المقطر وتكرر الخطوة السابقة إلزالة اللون األحمر تماما‪.‬‬ ‫‪-5‬‬
‫توضع الصبغة المبينة (الميثيلين االزرق)‪.‬‬ ‫‪-6‬‬
‫تشطف بالماء وتترك لتجف فى الهواء وتفحص كما سبق‪.‬‬ ‫‪-7‬‬

‫‪29‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﺛﺎﻧﻴ§ ‪ -‬اﻟﻤﺰارع اﻟﺪرﻧﻴﺔ‬

‫أنواع المستنبتات (‪ )Media‬المستخدمة لزرع ميكروب الدرن‬

‫أوالً ‪ :‬المستنبتات الصلبة (‪(Solid Media‬‬

‫أ – المستنبتات الصلبة المحتوية على البيض‬

‫لوفنشتاين جنسن ‪Lowenstein Jensen‬‬
‫ستون برينك ‪Stone Brink‬‬
‫• المميزات ‪:‬‬
‫‪ -1‬ذات حساسية عالية ( ‪ ) Highly sensitive‬حوالى ‪. % 98‬‬
‫‪ -2‬قليلة التكاليف ‪.‬‬
‫‪ -3‬يمكن منها عمل الحساسية لألدوية النوعية المعالجة للدرن ‪.‬‬
‫‪ -4‬يمكن التعامل مع كافة العينات الواردة ‪.‬‬

‫• العيوب ‪:‬‬
‫‪ -1‬بطء نمو الميكروب حيث يستغرق من ( ‪ 8 – 3‬أسابيع ) ‪.‬‬
‫‪ -2‬تحتاج إلى تركيز وتطهير بعض العينات التى تحتوى على ميكروبات ملوثة (‪ )Flora‬مثل البصاق – الصديد‬
‫– البول ‪ ....‬وغيره ‪.‬‬
‫‪ - 3‬قد تحدث تلوث للمزرعة ( ‪ ) % 4 – 3‬من حجم العمل ‪.‬‬

‫ب – المستنبتات الصلبة المحتوية على األجار‬

‫ديوبس أوليك أسيد‪Dubos Oleic Acid Media -‬‬
‫‪Middle Brook 7 H 11‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪30‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ثانياً ‪ :‬المستنبتات السائلة (‪(Solid Media‬‬

‫‪Middle Brook 7 H9, 7 H12‬‬

‫طرق تحضير المستنبتات الصلبة‬

‫أ‪ -‬مستنبت ‪Lowenstein Jensen‬‬
‫تحضير األمالح‬

‫الكمية‬ ‫االسم الكيميائي‬ ‫المادة‬

‫‪ 2,4‬جم‬ ‫‪KH2PO4‬‬ ‫فوسفات أحادي البوتاسيوم‬
‫‪0,24‬جم‬ ‫‪Mg SO4‬‬ ‫كبريتات الماغنسيوم‬
‫‪0,6‬جم‬ ‫سترات الماغنسيوم‬
‫‪3,6‬جم‬ ‫اسبراجين‬
‫‪12‬مل‬ ‫جليسرين‬
‫‪600‬مل‬ ‫ماء مقطر‬

‫يضاف الماء المقطر قبل إضافة الجلس� � � � �رين ويذاب الخليط فى حمام مائى وبعد إضافة الجلس� � � � �رين تذاب األمالح‬
‫جيدا ثم تعقم فى األوتوكالف عند درجة ح اررة ‪ْ120‬م لمدة ‪ 30‬دقيقة ‪.‬‬

‫ب‪ -‬تحضير البيض ‪ 1 :‬لتر‪:‬‬

‫يجب استعمال بيض حديث اإلنتاج (أسبوع أو أقل) ‪.‬‬ ‫• ‬

‫يغسل البيض جيدا بالفرشاة وينقع فى صابون سائل ‪ %5‬ويترك لمدة ‪2/1‬ساعة ‪.‬‬ ‫• ‬

‫يشطف بالماء الجارى إلزالة الصابون كلية ويجفف ثم يوضع البيض فى كحول ‪ %70‬لمدة ‪15‬دقيقة ‪.‬‬ ‫• ‬

‫يكسر البيض كل على حدة فى طبق بترى معقم للتأكد من أنه طازج بواسطة ملعقة معقمة وتوضع فى‬ ‫• ‬
‫دورق معقم ثم يمزج صفار البيض بالبياض ويرش � � � ��ح من خالل عدة طبقات من الشاش المعقم بواسطة‬
‫قمع معقم ‪.‬‬

‫ج‪ -‬مالكيت اخضر ‪20‬مل ‪. %2‬‬

‫• يحضر فى فالس � � � ��ك معقمة يوزن ‪ 2‬جم مالكيت أخضر ‪ 100 +‬مل ماء مقطر معقم ويذاب فى حمام‬
‫مائى وال يعقم فى االوتوكالف ويتم تحضيره فى نفس اليوم‪.‬‬
‫‪31‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫‪ -‬بعد أن تبرد األمالح يضاف إليها مزيج البيض ‪ 1‬لتر والمالكيت األخضر ‪.‬‬
‫‪ -‬تصب فى زجاجات خاصة معقمة ذات غطاء حلزونى (‪ 6(Screw - capped‬مل لكل زجاجة ‪.‬‬

‫تسوى المستنبتات فى فرن التسوية (‪ )Inspissator‬فى وضع مائل عند درجة ح اررة ‪°85‬م لمدة ‪ 50‬دقيقة ‪.‬‬

‫بعد أن يتم تسوية المستنبتات يجب التأكد من اآلتى ‪:‬‬

‫تس � � � ��وية المس � � � ��تنبت فى ح اررة ‪ ْ85‬مئوية وليس أكثر والدليل على ذلك عدم وجود فقعات هواء كثيرة كما في‬ ‫‪-‬‬
‫الص � � � ��ورة‪ .‬خلوه � � � ��ا من التلوث بوضعها في الحضان من ‪ 4- 2‬ايام عند درجة ح اررة ‪° 37‬م ثم تحفظ بعد ذلك‬
‫في الثالجة‬

‫‪ -2‬ستون برينك ‪:Stonebrink‬‬

‫أ‪ -‬األمالح‪:‬‬
‫فوسفات أحادية البوتاسيوم‬ ‫‪KHPO4‬‬ ‫‪7‬جم‬
‫فوسفات ثنائية الصوديوم‬ ‫‪Na2HPO4‬‬ ‫‪4‬جم‬
‫بيروفات الصوديوم‬ ‫‪%12.5‬‬
‫ماء مقطر‬ ‫‪1‬لتر‬
‫‪120‬م لمدة ‪ 30‬دقيقة ‪.‬‬
‫ْ‬ ‫تذاب األمالح ثم تعقم فى األوتوكالف عند درجة‬

‫‪2015‬‬ ‫‪32‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ب‪ -‬مزيج البيض‪:‬‬

‫ يحضر ‪ 2‬لتر كما فى طريقة تحضير مستنبت ‪.Lowenstein Jensen‬‬ ‫•‬

‫ج‪ -‬مالكيت أخضر ‪ 40 %2‬مل ( تحضر كما سبق ) ‪:‬‬

‫ يضاف محلول األمالح ‪ 1‬لتر بعد ان يبرد ومزيج البيض ‪ 2‬لتر والمالكيت‪.‬‬ ‫•‬
‫األخضر ‪ 40‬مل ويمزج جيداً فى ظروف تعقيم جيدة ثم يصب فى زجاجات‪.‬‬
‫معقمة كما سبق شرحه وتسوى ثم يجرى اختبار االتعقيم ثم تحفظ فى الثالجة ‪.‬‬
‫ يس � � � ��تخدم هذا المس � � � ��تنبت فى زرع ميكروب الدرن من أصل حيوانى‪ Bovine strain‬ألنها تفضل البيروفات‬ ‫•‬
‫عن الجليسرين‪.‬‬

‫ملحوظة‪:‬‬
‫ عند تحضير تشغيلة جديدة من مستنبت ‪ LJ‬يجب اختبار جودته فى زرع ميكروب الدرن وذلك بتلقيح عدد‬ ‫•‬
‫‪ 2‬من زجاجات المس � � � ��تنبت المحضرة حديثا بواس � � � ��طة معلق من مستعمرة ايجابية للميكوبكتيريا وتحضينها مع‬
‫بقية العينات‪.‬‬

‫‪33‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﻃﺮﻳﻘﺔ اﻟﺰرع ﻋﻠﻰ اﻟﻤﺴﺘﻨﺒﺘﺎت اﻟﺼﻠﺒﺔ‬

‫• طريقة تركيز وتطهير العينات قبل الزرع (‪(Concentration & decontamination‬‬

‫للحصول على مزارع جيدة يجب أوال القضاء على البكتريا المتعايشة (‪ )commensals‬فى العينات الملوثة مثل‬
‫البول والبصاق والصديد ومسحات الحلق‪.‬‬

‫أ ‪ -‬طريقة الصودا الكاوية ‪) Petroff’s method ( :‬‬

‫ تس � � � ��تخدم هذه الطريقة لمعظم العينات وبالذات العينات المتماس � � � ��كة اللزجة(‪ ) tenacious‬ألن الصودا تعمل‬ ‫•‬
‫على إذابة المواد العضوية كما تقضى على الميكروبات المتعايشة وتستخدم فى حالة البصاق ‪ -‬الصديد ‪.‬‬
‫ ولكن يجب أن يوضع فى االعتبار أال تزيد مدة تعرض عصيات الدرن للصودا الكاوية عن ‪ 45 - 30‬دقيقة‬ ‫•‬
‫حتى ال تتأثر حيوية الميكروب (‪ ) viability‬وتعطى مزرعة سلبية كاذبة ‪.‬‬

‫الطريقة ‪:‬‬
‫ يضاف مقدار من الصودا الكاوية المعقمة بتركيز ‪ % 4‬مساو للعينة وتغلق الزجاجة جيداً‪.‬‬ ‫•‬

‫ توضع فى الهزاز لمدة ‪ 20‬دقيقة ‪.‬‬ ‫•‬

‫ تدار فى جهاز الطرد المركزى لمدة ‪ 15‬دقيقة بسرعة ‪ 3000‬دورة ‪ /‬دقيقة ‪.‬‬ ‫•‬
‫ يؤخذ الراسب الناتج ويعادل بواسطة حامض الهيدروكلوريك ( ‪ ) N 1‬المضاف إليه الفينول األحمر ككاشف‬ ‫•‬
‫للرقم الهيدروجينى نقطة نقطة حتى نحصل على نقطة التعادل ‪.‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪34‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ يلق � � � ��ح ‪ 2‬زجاجة‪1 + L.J‬زجاجة ‪ Stonebrink‬بوضع ‪ 3-2‬نقط من ال ارس � � � ��ب المتعادل بواس � � � ��طة ماصات‬ ‫•‬
‫باستير معقمة‪.‬‬

‫ توضع المس � � � ��تنبتات الملقحة فى وضع مائل لمدة ‪ 4-2‬أيام فى الحضان حتى يتم توزيع الراسب على سطح‬ ‫•‬
‫المستنبت مع مراعاة عدم غلق الغطاء كامالً ثم يعدل وضعها بقية فترة التحضين التى تستمر لمدة ‪ 6‬إلى ‪8‬‬
‫أسابيع عند درجة ح اررة من ‪ ْ35‬إلى ‪ْ37‬م مع ضرورة غلق الغطاء بإحكام حتى ال يجف المستنبت ‪.‬‬

‫طريقة تحضير محلول التعادل ‪:‬‬

‫أ‪ -‬حامض الهيدروكلوريك المدخن ‪ 72 37% Fuming‬مل ‪.‬‬
‫ب‪ -‬الفينول األحمر ‪ 1 %1‬مل ‪.‬‬
‫ج‪ -‬يضاف ماء مقطر معقم حتى ‪ 1‬لتر ثم يصب فى أنابيب اختبار ويعقم فى األوتوكالف ‪.‬‬

‫نقطة التعادل‪:‬‬
‫هى أول نقطة تحول المحلول إلى اللون األصفر ‪.‬‬

‫ب ‪ -‬طريقة الـ ‪:NALC‬‬

‫( ‪( N-acetyl-L- cysteine sodium hydroxide method‬‬
‫المميزات ‪:‬‬
‫يزيد من حيوية العصيات الحية مما يضاعف من النتائج أو المزارع اإليجابية ‪.‬‬ ‫‪-1‬‬
‫فصل ميكروب الدرن من العينات التى تحتوى على عدد قليل من عصيات الدرن ‪.‬‬ ‫‪-2‬‬
‫يحافظ على شكل عصيات الدرن مما يؤدى إلى سهولة الكشف عليها أثناء الفحص الميكروسكوبى ‪.‬‬ ‫‪-3‬‬

‫‪35‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫التركيب ‪ :‬الوظيفة‪:‬‬
‫‪ N-acetyl-L- cysteine‬يؤدى إلى تكسير المخاط‪.‬‬
‫الصودا الكاوية تعمل على قتل البكتريا غير الدرنية الموجودة بالعينة‪.‬‬

‫ملحوظة ‪ :‬يعمل ملح س � � � ��ترات البوتاس � � � ��يوم المضاف على التخلص من أيونات المعادن الثقيلة التى قد توجد بالعينة‬
‫وتؤدى إلى وقف عمل ال� ‪. Acetyl cysteine‬‬

‫طريقة التحضير ‪:‬‬

‫لتحضير ‪ 100‬مل من ‪-: NaOHcysteineN acetyl-L‬‬
‫‪ -1‬يعقم ‪ % 4‬من الصودا الكاوية ( ‪ 4‬جم صودا كاوية ‪ 100 +‬مل ماء مقطر ) ‪.‬‬
‫‪ -2‬يعقم ‪ % 2,9‬سترات الصوديوم (‪ 2,9‬جم سترات صوديوم ‪ 100 +‬مل ماء مقطر)‪.‬‬
‫يؤخذ ‪ 50‬مل من المحلول (‪ 50 + (1‬مل من محلول (‪ 0,5 + (2‬جم من بودرة ال� ‪. NALC‬‬
‫يوضع فى زجاجة ويستخدم هذا المحلول خالل ‪ 24‬ساعة فقط ‪.‬‬

‫تحضير محلول الفوسفات المنظم الرقم الهيدروجيني ‪6.8‬‬

‫محلول رقم (‪(1‬‬
‫يضاف إليها ‪ 1,192‬جم من صوديوم ثنائى الفوسفات‬ ‫‪ 100‬مل ماء مقطر‬
‫يضاف إليها ‪ 5,96‬جم من صوديوم ثنائى الفوسفات‬ ‫‪ 500‬مل ماء مقطر‬
‫يضاف إليها ‪ 11,93‬جم من صوديوم ثنائى الفوسفات‬ ‫‪ 1000‬مل ماء مقطر‬

‫محلول رقم (‪(2‬‬

‫يضاف إليها ‪ 0,912‬جم من فوسفات أحادي البوتاسيوم‬ ‫‪ 100‬مل ماء مقطر‬
‫يضاف إليها ‪ 4,96‬جم من فوسفات أحادي البوتاسيوم‬ ‫‪ 500‬مل ماء مقطر‬
‫يضاف إليها ‪ 9,12‬جم من فوسفات أحادي البوتاسيوم‬ ‫‪ 1000‬مل ماء مقطر‬
‫ثم يضاف ‪ 50‬مل من محلول رقم (‪ 50+ (1‬مل من محلول رقم (‪(2‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪36‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫تحضير نالك ( ‪:) NALC - NaOH‬‬

‫‪ % 2.9‬سترات‬
‫( ‪)NALC Powder‬‬ ‫‪Na OH % 4‬‬ ‫الحجم المطلوب تحضيره‬
‫الصوديوم‬
‫‪ 0.25‬جم‬ ‫‪ 25‬مل‬ ‫‪ 25‬مل‬ ‫‪ 50‬مل‬
‫‪ 0.5‬جم‬ ‫‪ 50‬مل‬ ‫‪ 50‬مل‬ ‫‪ 100‬مل‬
‫‪ 1‬جم‬ ‫‪ 100‬مل‬ ‫‪ 100‬مل‬ ‫‪ 200‬مل‬
‫يستخدم هذا المحلول فى خالل ‪ 24‬ساعة ‪.‬‬

‫الخطوات ‪:‬‬
‫‪ -1‬يؤخذ فى أنبوبة س � � � ��نترفيوج معقمة ( فالكون حجم ‪ 50‬مل ) مقدار من ال� نالك هيدروكس � � � ��يد الصوديوم‬
‫(‪ )NALC – NAOH‬مع مقدار مساوى من العينة‪.‬‬
‫‪ -2‬توضع فى الهزاز (‪ )Vortex‬لمدة ‪ 20 – 5‬ثانية ‪.‬‬
‫‪ -3‬تترك لمدة ‪ 15‬دقيقة فى درجة ح اررة الغرفة ‪.‬‬
‫‪ -4‬يض � � � ��اف محلول الفوس � � � ��فات المنظم (‪ )buffer phosphate‬ذو الرق � � � ��م الهيدروجينى ‪(PH 6.8( 6,8‬‬
‫حوالى ‪ 40 – 30‬مل ‪.‬‬
‫‪ -5‬تخلط جيداً ثم توضع فى جهاز الطرد المركزى (‪ )Centrifuge‬لمدة ‪ 15‬دقيقة عند ‪ 3000‬لفة ‪ /‬دقيقة‬
‫‪.Relative Centrifugal force‬‬
‫‪ -6‬يصب السائل الفوقى ‪.‬‬
‫‪ -7‬تكرر هذه الخطوات اذا كان البصاق شديد اللزوجة‪.‬‬
‫‪ -8‬يتم زرع ال ارس � � � ��ب على مس � � � ��تنبت ال� ‪ L.J‬كما فى طريقة ال� ‪ Petroff‬بع � � � ��د إضافة عدة نقط من محلول‬
‫الفوسفات المنظم ‪.‬‬

‫‪37‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫اﻟﺨﻄﻮات اﻟﻤﺘﺒﻌﺔ ﺣﺘﻲ ﺗﻘﺮأ اﻟﻤﺰارع‬

‫ تختبر المزارع بعد تلقيحها ب� ‪ 72‬ساعة للتأكد من تبخر السائل من المستنبت وغلق أغطية الزجاجات بإحكام‬ ‫•‬
‫قبل أن يجف المستنبت وأيضاً لفحص المستعمرات الملوثة إن وجدت ‪.‬‬
‫ بعد ذلك تفحص المزارع مرة كل أسبوع حتى مرور ‪ 8‬أسابيع‪ ،‬إواذا لم يتيسر ذلك فتفحص ‪ 3‬مرات ‪:‬‬ ‫•‬
‫‪ -1‬بعد أسبوع لتحديد الميكوبكتريا سريعة النمو حتى ال تختلط بالميكوبكتريا الدرنية ‪.‬‬
‫‪ -2‬بعد ‪ 4-3‬أسابيع لتحديد المزارع االيجابية للميكوبكتريا الدرنية ‪.‬‬
‫‪ -3‬بعد ‪ 8‬أسابيع لتحديد المزارع االيجابية للميكوبكتريا الدرنية بطيئة النمو‪ ،‬قبل اعطاء النتيجة السلبية ‪.‬‬
‫ملحوظة‪ :‬ال بد أن تحمل الزجاجة تاريخ تلقيح المزرعة حتى يمكن حساب وقت قراءتها ‪.‬‬

‫عند وجود مزارع ملوثة‪ ،‬يراعى اآلتى ‪:‬‬

‫‪ -1‬اذا كان سطح المستنبت ملوثاً كله أو إذا كان لون المستنبت متغي اًر أو إذا لم يكن المستنبت صلباً و متماسكاً‬
‫تعقم وتعدم ‪.‬‬
‫‪ -2‬إذا كان التلوث يغطى جزءاً من س � � � ��طح المس � � � ��تنبت ويبقى بقية السطح س � � � ��ليماً وذا لون غير متغير تترك فى‬
‫الحضان حتى تق أر أو تعطى نتيجة سلبية بعد ‪ 8‬أسابيع ‪.‬‬
‫‪ -3‬اذا حدث نمو على المستنبت فى األسبوع الثامن واألخير ‪ ،‬فذلك يمكن أن يكون تلوثاً أو ميكروبكتريا درنية‪.‬‬
‫وللتأكد‪ ،‬يحضر فيلم من المس � � � ��تعمرات النامية ويصبغ بالزيل نيلس � � � ��ن ويفحص لمعرفة ما إذا كانت المزرعة‬
‫ايجابية أم سلبية وذلك بوجود عصيات مقاومة للحمض والكحول ‪. AFB‬‬

‫قراءة المزرعة ‪:‬‬

‫الشروط الواجب توافرها حتى حتى تكون مستعمرة ميكوبكتريا درنية ‪:‬‬
‫تكون خش � � � ��نة الس � � � ��طح‪ ،‬س � � � ��كرية اللون‪ ،‬متعرجة كالقرنبييط تنمو فى مدة بين ‪ 8-3‬أسابيع ( إذا نمت أثناء األسبوع‬
‫األول فهى ميكوبكتريا سريعة النمو)‪.‬‬

‫للتأكد من أن المستعمرة للميكوبكتريا الدرنية يؤخذ جزء من المستعمرة بإبرة الزرع ويذاب فى نقطة من محلول الملح‬
‫(‪ )Saline Nacl‬على الشريحة فيعطى مظه ار معلقا حيث أن الميكوبكتريا الدرنية ال تذوب فى محلول الملح‪ .‬تترك‬
‫العينة على الش� � � � �ريحة لتجف‪ ،‬ثم تثبت على النار وتصبغ بالزيل نيلسن وتفحص‪ .‬عند الفحص‪ ،‬تظهر الميكوبكتريا‬
‫الدرنية على هيئة عصيات حمراء ومرصوصة فى ش � � � ��كل أحبال متعرجة ذات أطوال مختلفة أو فى شكل تجمعات‬
‫متفرقة ‪.‬‬
‫‪2015‬‬ ‫‪38‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫إﺧﺘﺒﺎرات ﺗﺼﻨﻴﻒ اﻟﻤﻴﻜﻮﺑﻜﺘﺮﻳﺎ‬

‫‪ -I‬إختبار النياسين‪:Niacin test‬‬
‫‪.1‬اإلختبار العادى‪:‬‬
‫فكرة اإلختبار‪:‬‬
‫تنتج هذه الفصائل نياسين أثناء فترة نموها ولذلك فهى التحلله عند إضافته لها بل يتراكم ويفرز على‬ ‫ ‬
‫المستنبت‪:‬‬
‫‪M.tuberculosis‬‬ ‫ ‬

‫‪M.simiae‬‬ ‫ ‬

‫‪M.chelonae‬‬ ‫ ‬

‫ويوضح هذا اإلختبار إفراز وتراكم النياسين على المستنبت فى حالة وجود ‪. M.tuberculosis‬‬ ‫ ‬

‫محلوظة ‪:‬‬
‫يجب أن تكون عدد المستعمرات على الميديا أكثر من ‪ 50‬مستعمرة‪.‬‬ ‫ ‬
‫يجب تهوية الميديا أثناء التجربة بعدم غلق األنبوبة بشدة‪.‬‬ ‫ ‬
‫الضوابط (‪:)Controls‬‬
‫‪Sterile distilled water‬‬ ‫‪-ve control‬‬ ‫ ‬
‫مستخرج من مزرعة ‪M.tuberculosis H37Rv‬‬ ‫‪+control ve‬‬
‫الخطوات‪:‬‬
‫يضاف ‪ 1‬مل ماء مقطر معقم للمزرعة‪ .‬تشقق الميديا بطرف الباستيرحتى يدخل الماء بالميديا‪.‬‬ ‫ ‬
‫توضع األنبوبة أفقيا حتى يغطي السائل سطح الميديا‪.‬تترك األنبوبة ‪30‬ق حتى يفرز النياسين‪ .‬إذا كان‬ ‫ ‬
‫عدد المستعمرات قليال‪ ,‬تترك فترة أطول من ‪30‬ق ‪.‬‬
‫توضع األنبوبة عموديا لمدة (‪)5‬ق حتى يترسب السائل أسفل األنبوبة‪.‬‬ ‫ ‬
‫يسحب ½ مل من السائل ألنبوبة جديدة‬ ‫ ‬
‫يضاف ½ مل من ‪ %4‬محلول األنيلين و ½ مل من ‪ %10‬بروميد السيانوجين‪.‬‬ ‫ ‬
‫تغلق األنبوبة ويالحظ تحول لون المحلول إلى أصفر خالل (‪)5‬ق (نتيجة إيجابى)‪ .‬هذا اللون يتكون‬ ‫ ‬
‫بين المحلولين كدائرة مستديرة صفراء‪.‬‬

‫تحليل النتائج‪:‬‬
‫السلبى‪ :‬ال تغيير للون‪.‬‬ ‫ ‬
‫اإليجابى‪ :‬يظهر لون أصفر كدائرة مستديرة بين المحلولين أو كعمود أصفر عند رج األنبوبة‪.‬‬ ‫ ‬

‫‪39‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫‪.2‬إختبار الشرائط‬
‫اإلختالف عن االختبار السابق‪:‬‬
‫بعد شق الميديا وترك األنبوبة ألفراز النياسين يوضع الشريط فى السائل‪.‬‬ ‫ ‬
‫الخطوات‪:‬‬
‫يضاف ‪ 1‬مل من ماء الملح المعقم للميديا اإليجابية‪.‬‬ ‫ ‬
‫إذا كان النمو كثيرا‪ ,‬تشقق الميديا بالباستير حتى يسمح بدخول ماء الملح للميديا‪.‬‬ ‫ ‬
‫توضع األنبوبة أفقيا حتى يغطى السائل سطح الميديا‪.‬‬ ‫ ‬
‫تترك األنبوبة ‪30‬ق حتى يفرز النياسين ويمكن تركها مدة أطول إذا كان عدد المستعمرات أقل‪.‬‬ ‫ ‬
‫توضع األنبوبة عموديا لمدة ‪ 5‬دقائق حتى يترسب السائل‪.‬‬ ‫ ‬
‫ينقل ½ مل من السائل ألنبوبة جديدة بغطاء‪.‬‬ ‫ ‬
‫يغرس الشريط فى السائل مع مالحظة اتجاه السهم الذى يبين أى طرف من الشريط يغرس فى السائل‪.‬‬ ‫ ‬
‫تترك فى درجة ح اررة الغرفة لمدة ‪20-15‬ق‪ .‬تهز األنبوبة ببطىء بدون هزها بعنف‪.‬‬ ‫ ‬
‫يالحظ لون السائل من أمام خلفية بيضاء‪ .‬اللون األصفر يؤكد األيجابية‪ .‬ال يؤخد بظهور أى لون على‬ ‫ ‬
‫الشريط‪.‬‬

‫‪ -II‬إختبار إختزال النيترات(‪(Nitrate Reduction Test‬‬

‫هذا اإلختبار يفرق بين ‪ M.tuberculosis‬والميكوبكتريا األخرى‪.‬‬ ‫ ‬
‫الشروط‪:‬‬
‫تكون المزرعة عمرها ليس أكثر من ‪ 4‬أسابيع على اإليجابية‪.‬‬ ‫ ‬
‫تكون شديدة اإليجابية (مستعمرات كثيرة على المزرعة)‪.‬‬ ‫ ‬

‫الطريقة التقليدية (‪(Classical Method‬‬

‫محلول(‪.(1‬‬ ‫يذاب ‪ gm 3.02‬فوسفات البوتاسيوم(‪ )KH2PO4‬فى ‪ ml 1000‬من الماء المقطر‬ ‫ ‬
‫محلول (‪(2‬‬ ‫فوسفات صوديوم (‪ )Na2HPO4‬في ‪ 1000‬مللي ماء مقطر‬ ‫يذاب ‪gm 3.16‬‬ ‫ ‬
‫يضاف ‪ 389‬مللي من محلول (‪ )1‬إلى ‪ 611‬مللي من محلول (‪ )2‬ويخلط‪.‬‬ ‫ ‬
‫محلول (‪.(3‬‬ ‫يضبط ‪pH=7‬‬
‫يذاب‪ 0.85gm‬نيترات الصوديوم فى‪ 1000‬مللي من محلول (‪(3‬‬ ‫ ‬
‫ويقسم في انابيب (كل انبوبة بها ‪ 100‬مللي) وتعقم في االوتوكالف لمدة ‪ 20‬دقيقة‬ ‫ ‬
‫وبهذا نحصل علي ‪Substrate NaNO3‬‬ ‫ ‬
‫محلول حمض الهيدروكلوريك‪:‬‬ ‫ ‬
‫‪2015‬‬ ‫‪40‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫يضاف ‪ 10‬مللي من ‪ conc HCL‬الي ‪ 10‬مللي ماء مقطر (وليس العكس) (تخفيف ‪ )1:1‬يخزن‬ ‫ ‬
‫فى زجاجة داكنة اللون بعيدا عن الضوء فى الثالجة‪.‬‬
‫محلول ‪:sulfanilamide 0.2%‬‬ ‫ ‬
‫يذاب ‪ 0.2gm‬من السلفانيالميد فى ‪ 100‬مللي ماءمقطر ويخزن فى زجاجات‬ ‫ ‬
‫داكنة اللون بعيدا عن الضوء في الثالجة‬ ‫ ‬
‫محلول ‪:N-naphthylethylene-diamine 0.1%‬‬ ‫ ‬
‫يذاب ‪ gm 0.1‬من النافثايإلثيلين ديامين فى ‪ 100‬مللي ماء مقطر ويخزن فى زجاجات داكنة اللون‬ ‫ ‬
‫فى الثالجة بعيدا عن الضوء‬

‫الضوابط (‪:)Controls‬‬
‫‪: ve control-‬‬
‫تستخدم مستخرج من أنبوبة غير مزروعة‪.‬‬ ‫ ‬
‫‪: ve control+‬‬
‫يختبر مستخرج من أنبوبة مزروعة ب‪.MTB H37Rv‬‬ ‫ ‬

‫الخطوات‪:‬‬
‫يضاف ‪ 0.2ml‬من ماء الملح المعقم فى أنبوبة بغطاء محكم‪.‬‬ ‫ ‬
‫يسحب من مستعمرات عمرها ليس اكثر من شهر بلوب معقم و يمزج بالمحلول الملحي المعقم‪.‬‬ ‫ ‬
‫يضاف ‪ 2ml‬من ‪. Substrate NaNO3‬‬ ‫ ‬
‫يهز جيدا ويحضن عموديا فى ‪°37‬م (حمام مائى) لمدة ‪ 3‬ساعات ثم يخرج‪.‬‬ ‫ ‬
‫يضاف نقطة من ‪ . dil.HCL‬تهز األنبوبة جيدا‪.‬‬ ‫ ‬
‫يضاف عدد ‪ 2‬نقطة من ‪. sulfanilamide 0.2%‬‬ ‫ ‬
‫يضاف عدد ‪ 2‬نقطة من ‪. naphyl ethylene-diamine 0.1%‬‬ ‫ ‬
‫يختبر لظهور لون بمبى أو أحمر فورا‪.‬‬ ‫ ‬
‫تحليل النتائج‪:‬‬
‫السلبى‪ :‬اليظهر أى لون‪ .‬هذا يعنى السلبية‬ ‫ ‬
‫يضاف كم بسيط من بودرة الزنك لألنابيب السلبية‪.‬‬

‫ ‪‬إذا كان ‪ nitrate‬مازال موجودا يظهر اللون األحمر سلبى حقيقى‪.‬‬

‫‪41‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫اإليجابى‪ :‬لون بمبى إلى أحمر داكن‪.‬‬ ‫ ‬

‫ ‪‬بمبى فاتح ‪.-/+‬‬

‫ ‪‬بمبى ‪. 1+‬‬
‫ ‪‬بمبى غامق ‪.2+‬‬
‫ ‪‬أحمر ‪.3+‬‬
‫أيجابى‬ ‫ ‪‬أحمر غامق ‪.4+‬‬
‫ ‪‬أحمر نبيتى ‪.5+‬‬

‫‪ .2‬طريقة المستلزم البللورى(‪(Crystalline Reagent Method‬‬

‫المحاليل‪:‬‬
‫نيترات الصوديوم ‪ Substrate‬فى ال ‪ : buffer‬كما سبق ذكره‪.‬‬ ‫ ‬
‫المستلزم البللورى‪:‬‬ ‫ ‬
‫(‪ )1‬جزء‬ ‫‪Sulfanilic acid‬‬ ‫ ‬
‫‪ N-)1-naphthyl( – ethylene diamine dihydrochloride‬جزء(‪(1‬‬ ‫ ‬
‫(‪ )10‬أجزاء‬ ‫‪L)+( – tartaric acid‬‬ ‫ ‬
‫توضع الكيماويات فى زجاجة داكنة اللون وتخلط جيدا بالهز الشديد (‪30‬مرة)‪ .‬يحفظ هذا الخليط فى‬ ‫ ‬
‫ح اررة الحجرة‪.‬‬

‫الضوابط (‪:)Controls‬‬
‫‪: -ve control‬‬ ‫ ‬

‫يختبر مستخرج من أنبوبة غير مزروعة الميديا‪.‬‬

‫‪: +ve control‬‬ ‫ ‬

‫يختبر مستخرج من مزروعة ايجابية ب‪.MTB H37Rv‬‬

‫الخطوات‪:‬‬
‫يضاف ‪ 0.2ml‬ماء ملح معقم فى أنبوبة بغطاء محكم‪.‬‬ ‫ ‬
‫يسحب من مستعمرات من مزرعة إيجابية عمرها ليس أكثر من شهر‪.‬‬ ‫ ‬
‫يضاف ‪ 2ml‬من ‪. substrate NaNO3‬‬ ‫ ‬
‫يهز جيدا ويحضن فى ‪°37‬م بحمام مائى لمدة ‪ 3‬ساعات ويخرج‪.‬‬ ‫ ‬
‫يضاف كم بسيط جدا بال‪ spatula‬من ال‪ crystalline reagent‬الى محلول اإلختبار‪.‬‬ ‫ ‬
‫أحمر فى الحاالت اإليجابية‪.‬‬ ‫يالحظ لون بمبى‬ ‫ ‬
‫‪2015‬‬ ‫‪42‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫‪ .3‬إختبار الشرائط‪:‬‬
‫الخطوات‪:‬‬
‫يضاف ‪ 1ml‬من ماء الملح المعقم فى األنبوبة المحكمة الغلق‪.‬‬ ‫ ‬
‫يؤخذ جزء من المستعمرات التى لم تتجاوز ‪ 4‬أسابيع على اإليجابية باللوب المعقم‪.‬‬ ‫ ‬
‫يضاف الجزء المأخوذ من المستعمرات ويخلط بماء الملح‪.‬‬ ‫ ‬
‫يسقط شريط النيترات بماسك معقم فى األنبوبة (الشريط عليه سهم يشير إلى اتجاه الشريط)‪.‬‬ ‫ ‬
‫تغلق األنبوبة جيدا وتحضن عموديا عند ‪°37‬م لمدة ساعتين‪.‬‬ ‫ ‬
‫بعد ساعة من التحضين‪ ,‬تهز األنبوبة بهدوء دون إمالتها‪.‬‬ ‫ ‬
‫بعد ساعيتن من التحضين‪ ,‬تمال األنبوبة ‪ 6‬مرات حتى يبل الشريط ‪.‬‬ ‫ ‬
‫تترك األنبوبة مائلة لمدة ‪10‬ق ويكون السائل مغطيا للشريط‪.‬‬ ‫ ‬
‫ايجابى‪.‬‬ ‫يكشف عن لون الجزء العلوى من الشريط‪ .‬اللون األزرق‬ ‫ ‬

‫‪ -III‬إختبار ال‪(Paranitrbenzoic Acid )PNBA‬‬

‫الفكرة ‪:‬‬
‫يؤخر ال ‪ PNBA‬نمو الميكوبكتريا الدرنية‪.‬‬ ‫ ‬
‫الخطوات‪:‬‬
‫ يذاب ‪ 5‬جم من بودرة (تركيز ‪ )%99,9‬ال ‪ PNBA‬فى ‪ 100‬مل بروبيلين جليكول حتى نحصل على تركيز‬ ‫•‬
‫‪ 50,00‬ميكروجرام‪/‬مل (أو ‪50‬مجم‪/‬مل) (الستوك)‪.‬‬
‫ يمكن حفظه فى الثالجة (‪°8-2‬م)‪.‬‬ ‫•‬
‫ يؤخذ ‪2,4‬مل من الستوك ويضاف على ‪ 240‬مل ميديا (‪ )LJ‬حتى نحصل على تركيز‪ 500‬ميكرو جرام‪/‬مل‪.‬‬ ‫•‬
‫ ظهور مستعمرات على المستنبات يدل على عدم وجود الميكوبكتريا الدرينة‬ ‫•‬

‫‪ -IV‬إختبار ال ‪Thiophene-2-carboxylic Acid HYDRAZID )TCH‬‬

‫الفكرة ‪:‬‬
‫ يساعد ال ‪ TCH‬على نمو الميكوبكتريا الدرينة‪.‬‬ ‫•‬
‫ يفرق بين (‪( )sisolucrebuT .M(&)sivoB.M‬إيجابى النياسين) والسالالت الغير مفرزة للصبغة‬ ‫•‬
‫البطيئة النمو‪ .‬تعتبر معظم ‪ M.bovis‬حساسة للتركيز القليل من (‪ TCH )5 ug /ml‬ولكن ‪MTB‬‬
‫والسالالت بطيئة النمو تعتبر مقاومة لل‪.TCH‬‬
‫الخطوات‪:‬‬
‫ يؤخذ ‪20,6‬مجم من بودرة ال‪ TCH‬تركيز (‪ )%97‬ويضاف على ‪ 20‬مل ماء مقطر معقم (ســــــتوك)‪ .‬يمكن‬ ‫•‬

‫‪43‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫حفظه فى الثالجة (‪°8-2‬م)‪.‬‬

‫ يؤخذ ½ مل من الستوك ويضاف على ‪ 4,5‬مل ماء مقطر معقم (‪.(W1‬‬ ‫•‬
‫ يؤخذ ½ مل من ‪ W1‬ويضاف على ‪ 4,5‬مل ماء مقطر معقم (‪.(W2‬‬ ‫•‬
‫ يؤخذ ‪ 4,8‬مل من ‪ W2‬ويضاف على ‪240‬مل ميديا (‪ )LJ‬التركيز النهائى ‪ 2‬ميكروجرام‪/‬مل‪.‬‬ ‫•‬
‫ عدم ظهور مستعمرات على المستنبات يدل على عدم وجود ميكوبكتريا الدرينة‬ ‫•‬
‫‪ V-‬إختبار الكتاليز ( ‪(Catalase Test‬‬
‫ تفرز الخلية الدرنية إنزيم الكتاليز الذى يحلل ال‪.H2O2------H2O+O2‬‬ ‫•‬
‫ ظهور غاز وفقاقيع ال‪ O2‬مؤشر لتفاعل الكتاليز‪.‬‬ ‫•‬
‫محلوظة‪:‬‬
‫ يجب أن تكون عدد المستعمرات على الميديا أكثر من ‪ 50‬مستعمرة‪.‬‬ ‫•‬
‫المحاليل ‪:‬‬
‫ ‪.0,067mole phosphate buffer pH7,0‬‬ ‫•‬
‫ ي � � � ��ذاب( ‪ 9,47gdisodium phosphate (Na2HPO4 anhydrous‬ف � � � ��ى م � � � ��اء مقطر للحصول على‬ ‫•‬
‫(‪(0,067M‬‬ ‫‪)1( Solution‬‬
‫ ي � � � ��ذاب ( ‪ 9,07g monopotasium phosphate ( KH2PO4‬ف � � � ��ى ‪ 1000‬مللي ماء مقطر للحصول‬ ‫•‬
‫على ‪(0,067M( )2( Solution‬‬
‫ ماء أوكسجين ‪ )superoxol( %30 , H2O2‬ويخزن فى الثالجة‪.‬‬ ‫•‬
‫ يجب إرتداء قفازات وواقى للعين أثناء العمل‪.‬‬ ‫•‬
‫‪Tween 80‬‬ ‫ ‪10ml‬‬ ‫•‬
‫ ماء مقطر ‪.90ml‬‬ ‫•‬
‫ يم � � � ��زج ال‪ Tween‬م � � � ��ع الماء المقطر ويوضع فى األوتوكالف عند ‪°121‬م – ‪ 10‬دقائق قد يرقد ال‪Tween‬‬ ‫•‬
‫فى القاع لذلك يجب التقليب أثناء التبريد ويخزن فى الثالجة‪.‬‬
‫ (‪Complete Catalase reagent )Tween-Peroxide mixtur‬‬ ‫•‬
‫ قبل اإلستخدام مباشرة تمزج أجزاء متساوية من ‪ H2O2 %30 & Tween80 %10‬نأخذ ‪ 0,5ml‬من المزيج‬ ‫•‬
‫لكل ساللة فى اإلختبار‬
‫الكونتروالت‪:‬‬
‫ طريقة التنقيط ‪:Drop method‬‬ ‫•‬
‫ تستخدم أنبوبة مستنبت ‪ LJ‬غير مزروعة ‪ Negative Control‬وأنبوبة أخرى مزروعة‪Positive Control‬‬ ‫•‬
‫‪M.T.B H37Rv‬‬
‫ اإلختبار النصف كمى ‪c°68:‬‬ ‫•‬
‫‪ Negative Control‬وأنبوبة أخ � � � ��رى مزروعة ‪Positive‬‬ ‫ تس � � � ��تخدم أنبوبة مس � � � ��تنبت ‪ LJ‬غير مزروع � � � ��ة‬ ‫•‬
‫‪2015‬‬ ‫‪44‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫‪. Control M.terrae‬‬

‫طريقة العمل‪:‬‬
‫‪ .1‬طريقة التنقيط ‪:Drop method‬‬
‫ تستخدم أنبوبة ‪ LJ‬مضى على نموها ‪ 14‬يوم‪.‬‬ ‫•‬
‫ نضع ‪ 2‬نقطة من مزيج ‪ Tween-peroxide‬محضر للتو على سطح المستنبت‪.‬‬ ‫•‬
‫ يالحظ ظهور فقاعات الهواء فى خالل ‪ 5‬دقائق‪.‬‬ ‫•‬
‫النتائج‪:‬‬
‫سلبى‪.‬‬ ‫ اليوجد فقاعات‬ ‫•‬
‫ايجابى (بطىء)‪.‬‬ ‫ قليل من الفقاعات ببطء‬ ‫•‬
‫إيجابى (سريع)‪.‬‬ ‫ فقاعات فورية غزيرة‬ ‫•‬

‫‪ .2‬طريقة النصف كمى‪:‬‬

‫ تستخدم أنبوبة ‪ LJ‬مضى على نموها ‪ 14‬يوم‪.‬‬ ‫•‬
‫ يضاف ‪ 1‬مل من مزيج ‪ Tween-peroxide‬محضر للتو‪.‬‬ ‫•‬
‫ تغطى األنبوب بدون إحكام وتترك فى درجة ح اررة الغرفة لمدة ‪ 5‬دقائق‪.‬‬ ‫•‬
‫ يظهر عمود من الرغاوى‪ ,‬يقاس طول العمود‪.‬‬ ‫•‬
‫النتائج‪:‬‬
‫ أقل من ‪31‬مم رغاوى اليوجد نشاط للكتاليز (أو نشاط قليل)‪.‬‬ ‫•‬
‫ من ‪31‬مم – ‪ 45‬مم رغاوى نتيجة التثبت إفراز الكتاليز‪.‬‬ ‫•‬
‫ أكثر من ‪ 45‬مم رغاوى نشاط قوى للكتاليز‪.‬‬ ‫•‬

‫‪ .3‬اإلختبار ‪:c°pH7,0,68‬‬
‫الخطوات‪:‬‬
‫ يضاف ½ مل من (‪ Phosphate buffer 0.067M(pH=7‬لألنبوبة (‪ )16x125mm‬بماصة معقمة‪.‬‬ ‫•‬
‫ تزرع من المستعمرات على محلول ال‪ buffer‬باستخدام لوب معقم‪.‬‬ ‫•‬
‫ توضع األنبوبة فى حمام مائى ‪°68‬م لمدة ‪20‬ق‪.‬‬ ‫•‬
‫ يضاف ½ مل من ‪ 80-Tween‬لألنبوبة وتغلق‪.‬‬ ‫•‬
‫ يالحظ ظهور الفقاعات على س � � � ��طح السائل‪ .‬التحرك األنبوبة ألن ‪ 80-Tween‬يمكن أن يخرج ‪O2‬ويعطي‬ ‫•‬
‫نتائج ايجابى كاذب‪.‬‬
‫‪45‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ تترك األنابيب ‪20‬ق قبل إعدامها‪.‬‬ ‫•‬

‫تحليل النتائج‪:‬‬

‫ اإليجابى‪ :‬فقاعات‪.‬‬ ‫•‬

‫ السلبى‪ :‬اليوجد فقاعات‪.‬‬ ‫•‬
‫‪ -‬ف � � � ��ى بعض الحاالت النادرة‪ :‬تظهر فقاعات وفوران من الخالي � � � ��ا الجذرية ولكن التكون هذه الفقاعات على‬
‫سطح السائل فى هذه الحالة تحتسب ايجابية النتيجة‪.‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪46‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﻃﺮﻳﻘﺔ ﻋﻤﻞ اﻟﺤﺴﺎﺳﻴﺔ اﻟﺪرﻧﻴﺔ ﻋﻠﻲ اﻟﻤﺴﺘﻨﺒﺘﺎت اﻟﺼﻠﺒﺔ)‪(L-J‬‬

‫تحضير المضادات الحيوية الخاصة لعمل الحساسيات بميكروب الدرن‪:‬‬

‫مالحظات عامة ‪:‬‬
‫يجب التأكد من صالحية األدوية المستخدمة و تركيز المضاد الحيوى‪.‬‬ ‫‪)1‬‬
‫يجب مراعاة طريقة حفظ األدوية ودرجة الح اررة المناسبة لها حتى ال تؤثر على فعالية الدواء ‪.‬‬ ‫‪)2‬‬
‫يجب مراعاة التعقيم اثناء التحضير باستخدام أدوات معقمة جيداً ‪.‬‬ ‫‪)3‬‬

‫المعادلة المستخدمة لحساب وزن بودرة المضاد الحيوى فى ال�‪ Stock‬مهما اختلفت درجة النقاوة (‪:)Potency‬‬
‫‪Volume of dissolving Sol. )ml( X conc. of antibiotic in stock )μg /ml(X 1000‬‬
‫(‪Potency )μg /ml‬‬
‫مثال ‪:‬‬
‫*إذأ كان درجة نقاوة ‪74% EMB‬‬
‫*وزن بودرة ‪ EMB‬المذاب فى ‪ 20‬مل ماء مقطر لتحضير ‪ Stock‬تركيزة ‪= 10 μg/ml‬‬
‫‪20X10 X1000 =270.3 mg‬‬
‫‪740‬‬
‫اوالً تحضير الريفامبيسين ( ‪ ) RMP‬درجة النقاء ‪: % 95‬‬
‫تحضير ال ‪: Stock‬‬
‫يذاب ‪ 10,5‬مليجرام بودرة فى ‪ 2,5‬مل مثيانول للحصول على تركيز ‪ 4‬ميكروجرام ‪ /‬مل ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫يحضر ال ‪ Stock‬اول بأول ( عند كل تحضيرة ‪ ) media‬واليخزن ‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫تحضير المضاد الحيوى على الميديا ‪:‬‬

‫‪ 1‬مل من ‪ 200 + Stock‬مل ميديا = تركيز ‪ 20‬ميكروجرام ‪ /‬مل ‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫‪ 2‬مل من ‪ 200 + Stock‬مل ميديا = تركيز ‪ 40‬ميكروجرام ‪ /‬مل ‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫تحفظ الميديا المضاف اليها المضاد الحيوى لمدة التزيد عن اسبوعين‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫ثانياً تحضير االيثامبيوتول ( ‪: ) EMB‬‬
‫تحضير ال ‪: Stock‬‬
‫اذا كانت درجة النقاء ‪. % 74‬‬ ‫‪-‬‬
‫يذاب ‪ 270,3‬مليجرام بودرة فى ‪ 20‬مل ماء مقطر = تركيز ‪ 10‬ميكروجرام ‪/‬مل‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫‪47‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫يمكن حفظة فى الثالجة (‪8-2‬م) لمدة شهرين أو عند درجة ‪ ْ 20 -‬م لمدة ستة أشهر‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫تحضير المضاد الحيوى على الميديا ‪:‬‬

‫يذاب ‪2/1‬مل من ‪ Stock‬فى ‪ 4,5‬مل ماء مقطر = محلول (‪. (1‬‬ ‫‪-‬‬
‫يؤخذ ‪ 2/1‬مل من محلول (‪ )1‬ويضاف على ‪ 4,5‬مل ماء مقطر = محلول (‪. (2‬‬ ‫‪-‬‬
‫يؤخذ ‪ 4‬مل من محلول (‪ )2‬ويضاف على ‪ 200‬مل ميديا ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫التركيز النهائى ‪ 2‬ميكروجرام ‪ /‬مل ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫تحفظ الميديا المضاف اليها المضاد الحيوى لمدة التزيد عن شهرين‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫ثالثاً تحضير استربتومايسين ‪: St‬‬

‫تحضير ال ‪: Stock‬‬
‫اذا كانت درجة النقاء ‪. % 75,8‬‬ ‫‪-‬‬
‫يذاب ‪ 263,8‬مليجرام بودرة فى ‪ 20‬مل ماء مقطر = تركيز ‪ 10‬ميكروجرام ‪/‬مل‬ ‫‪-‬‬
‫يمكن حفظة فى الثالجة (‪8-2‬م) لمدة شهرين أو عند درجة ‪ ْ 20 -‬م لمدة ستة أشهر‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫تحضير المضاد الحيوى على الميديا ‪:‬‬
‫يذاب ‪2/1‬مل من ‪ Stock‬فى ‪ 4,5‬مل ماء مقطر = محلول (‪. (1‬‬ ‫‪-‬‬
‫يؤخذ ‪ 2‬مل من محلول (‪ )1‬ويضاف على ‪ 2‬مل ماء مقطر = محلول (‪. (2‬‬ ‫‪-‬‬
‫يؤخذ ‪1,6‬مل من محلول (‪ )2‬ويضاف على ‪ 200‬مل ميديا ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫التركيز النهائى ‪ 4‬ميكروجرام ‪ /‬مل ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫تحفظ الميديا المضاف اليها المضاد الحيوى لمدة التزيد عن شهرين‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫رابعاً تحضيرااليزونيازيد ‪: INH‬‬

‫تحضير ال ‪: Stock‬‬
‫اذا كانت درجة النقاء ‪. % 99,9‬‬ ‫‪-‬‬
‫يذاب ‪ 200,2‬مليجرام بودرة فى ‪ 20‬مل ماء مقطر = تركيز ‪ 10‬ميكروجرام ‪/‬مل‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫يمكن حفظة فى الثالجة (‪8-2‬م) لمدة شهرين أو عند درجة ‪ ْ 20-‬ملمدة ستة اشهر‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫تحضير المضاد الحيوى على الميديا ‪:‬‬
‫يذاب ‪2/1‬مل من ‪ Stock‬فى ‪ 4,5‬مل ماء مقطر = محلول (‪. (1‬‬ ‫‪-‬‬
‫يؤخذ ‪ 2/1‬مل من محلول (‪ )1‬ويضاف على ‪ 4,5‬مل ماء مقطر = محلول (‪. (2‬‬ ‫‪-‬‬
‫يؤخذ ‪ 0,4‬مل من محلول (‪ )2‬ويضاف على ‪ 200‬مل ميديا ‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪48‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫التركيز النهائى ‪ 0,2‬ميكروجرام ‪ /‬مل ‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫تحفظ الميديا المضاف اليها المضاد الحيوى لمدة التزيد عن شهرين‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫كيفية تخزين المضادات الحيوية ‪:‬‬

‫‪ -1‬تخزين البودرة ( ينظر على العبوة ) ‪:‬‬
‫رفامبيسين ‪ ْ 20- :‬م ‪.‬‬
‫الستربتومايسين وااليثامبيوتول ‪ ْ 4 :‬م‪.‬‬
‫االيزونيازيد ‪ :‬درجة ح اررة الغرفة ‪ ْ 20‬م‪.‬‬
‫‪ -‬تخزين الميديا المحتوية على المضادات الحيوية‪:‬‬
‫عند ‪ْ 4‬م بعيداً عن الضوء لمدة شهرين ما عدا الريفامبيسين لمدة أسبوعين‪.‬‬
‫خامسا تحضير الكاناميسن ‪: KAN‬‬
‫تحضير ال ‪: Stock‬‬
‫اذا كانت درجة النقاء ‪. % 78,9‬‬ ‫‪-‬‬
‫يذاب ‪ 253,5‬مليجرام بودرة فى ‪ 20‬مل ماء مقطر معقم‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫يخزن عند ‪ ْ 18-‬م لمدة شهر‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫تحضير المضاد الحيوى على الميديا ‪:‬‬
‫‪2/1‬مل من ‪ 4,5 + Stock‬مل ماء مقطر = محلول (‪. (W1‬‬ ‫‪-‬‬
‫‪ 6‬مل من ‪ 200 + W1‬مل ميديا‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫التركيز النهائى ‪ 30‬ميكروجرام ‪ /‬مل ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫يمكن تخزينها عند ‪°4‬م لمدة شهر‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫سادسا تحضير األفلوكساسين ‪:‬‬
‫تحضير ال ‪: Stock‬‬
‫اذا كانت درجة النقاء ‪. % 100‬‬ ‫‪-‬‬
‫يذاب ‪ 20‬مليجرام بودرة فى ‪ 20‬مل ماء مقطر معقم‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫يخزن عند ‪ ْ 8-2‬م لمدة شهر‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫تحضير المضاد الحيوى على الميديا ‪:‬‬

‫‪2/1‬مل من ‪ 4,5 + Stock‬مل ماء مقطر = محلول (‪. (W1‬‬ ‫‪-‬‬

‫‪ 800‬ميكرولتر من ‪ 200 + W1‬مل ميديا‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫التركيز النهائى ‪ 2‬ميكروجرام ‪ /‬مل ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫يمكن تخزينها عند ‪°4‬م لمدة شهر‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫‪49‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫سابعا تحضير الكابريوميسين ‪: CAP‬‬

‫تحضير ال ‪: Stock‬‬
‫اذا كانت درجة النقاء ‪. %84,8‬‬ ‫‪-‬‬
‫يذاب ‪ 235,8‬مليجرام بودرة فى ‪ 20‬مل ماء مقطر معقم‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫يخزن عند ‪ ْ 4‬م لمدة شهر‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫تحضير المضاد الحيوى على الميديا ‪:‬‬
‫‪ 0,5‬مل من ‪ 4,5 + Stock‬مل ماء مقطر = محلول (‪. (W1‬‬ ‫‪-‬‬
‫‪ 8‬ميكرولتر من ‪ 200 + W1‬مل ميديا‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫التركيز النهائى ‪ 40‬ميكروجرام ‪ /‬مل ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫يمكن تخزينها عند ‪°4‬م لمدة شهر‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫تحضير الكابريوميسين ‪ CAP‬بطريقة أخرى‪:‬‬
‫تحضير ال ‪: Stock‬‬
‫يذاب ‪ 24‬مليجرام بودرة فى ‪ 12‬مل ماء مقطر معقم تركيز ‪ 2‬مجم‪/‬مل‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫تحضير المضاد الحيوى على الميديا ‪:‬‬

‫يضاف ‪ 48‬مل ماء مقطر على ‪ ( )W1( Stock‬تركيز‪ 400‬ميكروجرام‪/‬مل) ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫‪ 40‬ميكروجرام‪/‬مل‪.‬‬ ‫يؤخذ ‪ 55,5‬مل من ‪ W1‬ويضاف على ‪ 500‬مل ميديا (‪ )LJ‬تركيز‬
‫ثامنا تحضير األميكاسين ‪: AM‬‬
‫تركيز ‪ 2‬مجم‪/‬مل‪.‬‬ ‫تحضير ال ‪ : Stock‬يذاب ‪ 24‬مليجرام بودرة فى ‪ 12‬مل ماء مقطر معقم‬
‫تحضير المضاد الحيوى على الميديا ‪:‬‬
‫يضاف ‪24‬مل ماء مقطر على ‪ ( )W1( Stock‬تركيز ‪ 400‬ميكروجرام‪/‬مل) ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫‪ 40‬ميكروجرام‪/‬مل‪.‬‬ ‫يؤخذ ‪ 55,5‬مل من ‪ W1‬ويضاف على ‪ 500‬مل ميديا (‪ )LJ‬تركيز‬

‫‪2015‬‬ ‫‪50‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

Preparation of the Stocks of anti TB drugs

Weight of
Potency Dissolving Concentration
Product Volum )ml( Antibiotic storage of Stock
(ug/ml( Solution )ug/ml(
powder )mg(

INH 999 SDW 20 10 200.2 From 2 to 8ºc

EMB 740 SDW 20 10 270.3 From 2 to 8ºc

RMP 950 Ethylene glycol 2.5 4 10.5 Prepared fresh

SM 758 SDW 20 10 263.8 From 2 to 8ºc

KAN 773 SDW 20 10 258.7 < - 18ºc

OFL 999 Naoh )0.1N( 20 1000 20 From 2 to 8ºc

EIL 999 Propylene glycol 20 10 200.2 From 2 to 8ºc

CAP 856 SDW 20 10 233.6 < - 18ºc

999 Propylene glycol 100 50 5g From 2 to 8ºc

ICH 970 SDW 20 10 206.2 From 2 to 8ºc

Preparation of Antibiotic-Containing Media )LJ(

Final conc
of
Conc of Conc of
Stock W1 SDW antibionic
SDW (ml) w1 w2 w2 (ml) Amount of LJ (ml)
(ml) (ml) (ml) in LJ
(ug/ml) (ug/ml)
inedia
(ug/ml)
INH (١٠) 0.5 4.5 1000 0.5 4.5 100 0.4 200 0.2
EMB
0.5 4.5 1000 0.5 4.5 100 4 200 2
(10)
RMP
2 200 40
(10)
SM (10) 0.5 4.5 1000 2 2 500 1.6 200 4
KAN (10) 0.5 4.5 1000 6 200 30
OFL
4 4 1000 0.8 200 2
(1000)
ETH (10) 0.5 4.5 1000 2 200 10
CAP (10) 0.5 4.5 1000 8 200 40
PNB
2.4 240 500
(50mg/ml)
TCH (10) 0.5 4.5 1000 0.5 4.5 100 4.8 240 2

51 2015
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﺗﺤﻀﻴﺮ ﻣﺤﻠﻮل اﻟﺘﻌﺎدل ‪McFarland Opacity Tube‬‬

‫محلول (أ) كلوريد الباريوم ‪:‬‬

‫‪ 1‬جم من كلوريد الباريوم ‪ 100 +‬مل ماء مقطر معقم ‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫محلول (ب) حمض الكبريتيك ‪:‬‬

‫‪ 1‬مل حمض كبريتيك مركز ‪ 99 +‬مل ماء مقطر ‪.‬‬ ‫‪-‬‬

‫محلول التعادل ‪:‬‬

‫يؤخذ ‪ 9,95‬مل من محلول (ب) ‪ 0,5 +‬مل من محلول (أ) فتتكون عكارة يقاس عليها تركيز‬ ‫‪-‬‬
‫الميكروب الخاص لعمل الحساسية ‪.‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪52‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﺧﻄﻮات اﺧﺘﺒﺎر اﻟﺤﺴﺎﺳﻴﺔ )‪(Proportional Method‬‬

‫‪ .1‬تحضير معلق الميكوبكتريا‪:‬‬

‫ تحضير معلق تركيزه ‪.1mg/ml‬‬ ‫•‬
‫ يحضر من هذا المعلق تخفيف ‪ 100 x1‬لزرع ‪ C1‬والميديا المحتوية على المضادات الحيوية‪.‬‬ ‫•‬
‫ من المعلق األخير يحضر معلق أخر تخفيف‪ 100 1x‬لزرع ‪ C3‬والميديا المحتوية على المضادات الحيوية‪.‬‬ ‫•‬
‫ من المعلق األخير يحضر معلق أخر تخفيف‪ 100 1x‬لزرع ‪ C5‬والميديا المحتوية على المضادات الحيوية‪.‬‬ ‫•‬
‫‪ .2‬تحضير معلق الميكوبكتريا‪:‬‬
‫ تتم عملية الزرع باس � � � ��تخدام ماصة باس � � � ��تير تنقط ‪ 2‬نقطة (‪)0,1ml‬على األنبوبة (او الزجاجة) ويفرد السائل‬ ‫•‬
‫على سطح الميديا بتحريك األنبوبة‪.‬‬
‫ توضع الزجاجة أفقيا فى اليوم األول للتحضين ثم توضع رأسيا بقية أيام التحضين‪.‬‬ ‫•‬
‫‪ .3‬قراءة النتائج‪ :‬استخدام طريقة ‪ Cannetti‬فى القراءة وتحليل النتائج‪.‬‬
‫ تق أر الكنتروالت أوال ‪ .‬يجب أن تكون المستعمرات على ‪ C1‬عددها اكبر من ‪ 100‬مستعمرة‪.‬‬ ‫•‬
‫ تقارن زجاجات ‪ C3‬بالزجاجات المحتوية على الميديا ‪ +‬المضادات عند ‪ . C1‬إذا كانت ‪ C1‬المحتوية على‬ ‫•‬
‫المضادات أكثر من ‪C3‬مقاوم‪ .‬إذا كانت أقل حساس‪.‬‬
‫ تق � � � ��ارن زجاجات ‪ C5‬بالزجاج � � � ��ات المحتوية على الميديا ‪ +‬المضادات عند ‪ C3‬إذا كانت ‪ C3‬المحتوية على‬ ‫•‬
‫المضادات أكثر من ‪ C5‬مقاوم‪ .‬إذا كانت اقل حساس‪.‬‬

‫‪53‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﺿﺒﻂ اﻟﺠﻮدة ﻟﻠﻔﺤﺺ اﻟﻤﺒﺎﺷﺮ واﻟﻤﺰارع اﻟﺼﻠﺒﺔ‬

‫تعريف‪:‬‬
‫المتابعة المستمرة لكل خطوات العمل بمعمل تشخيص الدرن بداية من تسلم العينة وحتى تسليم النتيجة ‪.‬‬
‫الغرض من التطبيق ‪:‬‬
‫تحسين كفاءة العمل ‪.‬‬ ‫‪.1‬‬
‫اكتشاف أي خطا وتصحيحه عن طريق مراقبة كل خطوات العمل ‪.‬‬ ‫‪.2‬‬
‫الحصول على نتائج صحيحة ‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫ينقسم إلى ‪:‬‬
‫ضبط الجودة داخل المعمل ‪(Internal quality control( IQC‬‬ ‫‪.1‬‬
‫تقييم الجودة الخارجي ‪(External Quality Assessment( EQA‬‬ ‫‪.2‬‬
‫تحسين كفاءة العمل (‪(Quality improvement‬‬ ‫‪.3‬‬
‫وذلك بوضع الحلول ألى مشاكل قد تحدث وتحتاج إلى المتابعة المستمرة للعمل ‪.‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪54‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫أوالً ‪ :‬ضبط الجودة داخل المعمل)‪)IQC‬‬

‫ويشمل الوسائل المتبعة داخل المعمل للتأكد من سير العمل بطريقة صحيحة وذلك بالنسبة لآلتي ‪:‬‬
‫ طريقة أخذ العينة واستكمال البيانات المناسبة وطريقة نقلها وحفظها‪.‬‬ ‫•‬
‫ الكيماويات والصبغات والمستنبتات ‪.‬‬ ‫•‬
‫ خطوات التشخيص البكتريولوجي والربط بين نتائج الفحص المجهري المباشر والمزارع‬ ‫•‬
‫ األجهزة ‪.‬‬ ‫•‬
‫ تدريب العاملين بالمعمل من أطباء وفنيين وعمال ‪.‬‬ ‫•‬
‫ وجود دليل فني يتضمن جميع االختبارات األساسية بالمعمل للرجوع إليه عند الحاجة ‪.‬‬ ‫•‬

‫طريقة أخذ العينة ‪:‬‬

‫ يجب حث المريض على إعطاء عينة بصاق وليس لعاب ‪ ،‬كذلك يجب أن تكون الكمية المناسبة (‪ 5-3‬مل)‬ ‫•‬
‫فى الفحص المباشر وحتى ‪ 10‬مل للمزرعة‪.‬‬
‫ من أسباب السلبية الكاذبة ( انخفاض معدل النتائج اإليجابية ) سيولة العينة أو عدم كفايتها للفحص‬ ‫•‬
‫ فى حالة العينات األخرى مثل البول ‪ ،‬س� � � � �وائل الجس � � � ��م المختلفة – األنسجة … الخ ‪ ،‬يجب مراعاة طريقة أخذ‬ ‫•‬
‫العينة والكمية المناسبة ‪.‬‬

‫نقل العينة وحفظها‬

‫ يعتمد نقل العينة وحفظها على نوع الفحص المطلوب ‪:‬‬ ‫•‬
‫ ف � � � ��ى حالة الفحص المجهري فق � � � ��ط يجب أن تحفظ العينة بعيداً عن الضوء والح اررة وتكون مدة النقل والتخزين‬ ‫•‬
‫ال تزيد عن ‪ 3‬أيام ‪.‬‬
‫ فى حالة المزرعة يجب حفظ العينة فى الثالجة ونقلها فى صندوق مبرد( من ‪ ْ8-2‬م) ويجب أال تتعدى فترة‬ ‫•‬
‫النقل والتخزين ثالثة أيام ‪ ،‬زيادة فترة التخزين عن ثالثة أيام قد يؤدي إلى زيادة معدالت التلوث بالمزارع‪.‬‬
‫ يجب مراعاة الدقة فى كتابة البيانات ونقلها من طلب الفحص إلى العبوة التي تحتوى على العينة ‪.‬‬ ‫•‬
‫ ترقم العينة وتدون البيانات فى سجل المعمل وبنفس الرقم ‪.‬‬ ‫•‬

‫الكيماويات والصبغات والمستنبتات ‪:‬‬

‫يجب مراعاة اآلتي ‪:‬‬
‫ تحضر الصبغات مرة كل أسبوع ‪.‬‬ ‫•‬
‫ اختبار الصبغات التي تم تحضيرها حديثاً بعينة إيجابية وأخرى سلبية قبل استعمالها الختبار جودتها فى صبغ‬ ‫•‬

‫‪55‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫عصيات الدرن وكذلك الكتشاف وجود أي تلوث بعصيات الدرن ‪.‬‬

‫ تخزي � � � ��ن م � � � ��ادة الفلوروك � � � ��روم ف � � � ��ى زجاج � � � ��ة بنية الل � � � ��ون ووضعها ف � � � ��ى مكان مظل � � � ��م حيث يمك � � � ��ن أن تفقد‬ ‫•‬
‫فعاليتها(‪)Fluorescence‬تدريجياً عند تعرضهالضوء الشمس ‪.‬‬

‫فى حالة تحضير الصبغات بالمعمل يراعى اآلتى ‪:‬‬

‫استخدام بودرة الفوكسين القاعدى ‪ Basic fuchsin‬وليس ‪. Acid fuchsin‬‬ ‫‪-1‬‬
‫استخدام الماء المقطر وليس ماء الصنبور حيث ثبت أن مياه الصنبور قد تحتوى على الميكوبكتريا غير‬ ‫‪-2‬‬
‫النموذجية ‪ Atypical Mycobacterium‬وهى ميكروبات غير مرضية رمامة (‪(saprophytic‬‬
‫إذابة البودرة بالكامل وذلك باستخدام حمام مائى أو وضعها فى الحضان لمدة أسبوع ‪.‬‬ ‫‪-3‬‬
‫حفظها فى زجاجات بنية اللون حيث أن ضوء الشمس يؤثر على فعالية الصبغة ‪.‬‬ ‫‪-4‬‬
‫ترشيح الصبغة قبل استخدامها حيث أن بللورات الفينول تترسب سريعا على هيئة إبر حمراء قد يخطىء‬ ‫‪-5‬‬
‫الفاحص فى تشخيصها على أنها عصيات الدرن‪.‬‬
‫يجب أن تكون الزجاجات الخاصة بالصبغة سواء الفوكسين القاعدى ‪ /‬أو محلول التبهيت ذات غطاء‬ ‫ ‪-‬‬
‫محكم حتى ال يتبخر منها الكحول الذى يدخل فى تركيبها ‪.‬‬
‫استخدام الكحول اإلثيلى فى تحضير الفوكسين القاعدى ‪ /‬والكحول المثيلى فى تحضير محلول التبهيت ‪.‬‬ ‫‪-7‬‬
‫يجب أن يستخدم حامض الهيدروكلوريك المركز والمدخن بنسبة ال تقل عن ‪.%36‬‬ ‫‪-8‬‬
‫ يجب مالحظة لون وقوام المستنبتات قبل استعمالها الكتشاف أي تغير بها‪.‬‬ ‫•‬
‫(عند وجود فقاقيع هواء بالمستنبت يدل هذا على زيادة تعرضها للح اررة أثناء التسوية)‬ ‫ ‬ ‫•‬
‫ اختبار المستنبتات بعد تحضيرها وذلك بتحضينها لمدة ‪ 48‬ساعة إلى ‪ 4‬أيام للتأكد من عدم وجود أي‬ ‫•‬
‫تلوث بها ‪.‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪56‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫اﻟﻔﺤﺺ اﻟﺒﻜﺘﺮﻳﻮﻟﻮﺟﻲ‬

‫ إعادة فحص عدد ‪ 3‬شرائح (ايجابية وسلبية) يومياً بواسطة شخص آخر(‪. (double check‬‬ ‫•‬
‫ يجب فحص المستعمرات التي تنمو على المستنبتات مجهرياً(‪ ).Z.N‬للتأكدمن أنها لعصيات الدرن ‪.‬‬ ‫•‬
‫المتابعة المستمرة للنتائج لمعرفة معدالت ‪-:‬‬
‫ المزارع اإليجابية ‪.‬‬ ‫•‬
‫ المزارع الملوثة ( معدل تلوث ‪ %3-2‬يعتبر مقبوالً ‪ ،‬بينما صفر‪ %‬تلوث تعكس زيادة تركيز المحلول المطهر‬ ‫•‬
‫للعينة قبل الزرع وبالتالي قتل كثير من عصيات الدرن ) ‪.‬‬
‫ المزارع السلبية بالنسبة للنتائج اإليجابية للفحص المجهري وذلك بمالحظة نتيجة المزرعة ومقارنتها بالفحص‬ ‫•‬
‫المجهري لنفس العينة ‪.‬‬
‫فى حالة وجود اختالف بين نتيجة المزرعة والفحص المجهري لنفس العينة مثل وجود عصيات مقاومة‬
‫لألحماض )‪ (AFB‬فى الفحص المجهري وعدم نموها على المستنبتات يجب البحث عن السبب مثل ‪-:‬‬
‫أ– توقف نمو البكتريا كنتيجة للعالج خاصة الريفامبيسين واإليزونيازيد ‪.‬‬
‫ب‪ -‬خطوة التطهير السابقة لزرع العينة لم تتم بطريقة صحيحة بسبب ‪-:‬‬
‫زيادة تعرض العصيات الدرنية للمطهر ( أكثر من ‪ 45‬دقيقة ) ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫زيادة تركيز المطهر عن المطلوب ‪.‬‬ ‫‪-‬‬
‫ج‪ -‬عدم جودة المستنبت ‪.‬‬
‫د‪ -‬درجة ح اررة الحضان أقل أو أكثر من المطلوب (الدرجة المثلى تتراوح من‪ْ37-35‬م)‪.‬‬

‫‪57‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ا‪³‬ﺟﻬﺰة‬

‫‪ -1‬الميكروسكوب ‪:‬‬
‫ يجب تنظيف العدس � � � ��ات من الزيت بشاش � � � ��ة جافة وذلك بعد االنتهاء من العمل يومياً وال يستخدم الزيلول إال‬ ‫•‬
‫لمسح جسم الميكروسكوب ألن الزيلول يذيب البالستيك المحيط بالعدسات ويؤدى إلى إتالفها ؛ضرورة تغطية‬
‫الميكروسكوب لحمايته من األتربة ؛ المحافظة على لمبة اإلضاءة بعدم تركها مضاءة لمدة طويلة وعدم غلق‬
‫المفتاح مرة واحدة بل يجب تقليل اإلضاءة حتى تصل للصفر ثم يغلق المفتاح‪.‬‬

‫‪ -2‬الحضان ‪:‬‬
‫ يج � � � ��ب التأك � � � ��د من أن درجة الح اررة به من ‪ ْ 37 – 35‬م وذلك بوضع ترمومتر فى زجاجة بها ماء ووضعه‬ ‫•‬
‫بداخل الحضان ‪.‬‬

‫‪ -3‬جهاز الطرد المركزى‪:‬‬

‫ يجب التأكد من أن الجهاز مضبوط على قوة الطرد النس � � � ��بية ‪ Relative centrifugal force‬وهى تس � � � ��اوى‬ ‫•‬
‫عدد اللفات ‪ /‬دقيقة ‪ ½ +‬القطر ويقاس من مركز الدوار حتى نصف طول األنبوبة‪.‬‬

‫‪Rotor‬‬
‫‪Tube‬‬

‫ ترص األنابيب فى جهاز الطرد المركزى بحيث تكون متوازنة ‪.‬‬ ‫•‬
‫ يجب عدم فتح الجهاز حتى يستقر تماماً حتى ال تتكسر األنابيب أو يخرج رذاذ يلوث عينة سلبية من أخرى‬ ‫•‬
‫إيجابية ‪ .‬ويجب عدم رج األنابيب عند إخراجها حتى ال يحدث مزج بين الراسب والجزء الرائق ‪.‬‬
‫ يفضل استخدام ‪ Swinging angle rotor‬حيث يتكون الراسب فى قاع األنبوبة‪،‬‬ ‫•‬
‫ وهذا أفضل من ‪ Fixed angle rotor‬حيث يتكون الراسب فى جانب من القاع ‪.‬‬ ‫•‬

‫‪Fixed angle rotor‬‬ ‫‪Swinging angle rotor‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪58‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫‪ -4‬كابينة الحماية البيولوجية ‪:‬‬

‫االهتم � � � ��ام بكابينة الحماي � � � ��ة البيولوجية حيث أنها قد تكون مصد اًر للثلوث وذل � � � ��ك بالعمل على تنظيفها من األتربة‬
‫وتطهيرها بمحلول الكلور‪ %2 -1‬أوالفينول‪. %5‬‬
‫التأكد من أن قدرة مروحة سحب الهواء ( ‪ ) Exhaustion fan‬من ‪ 75 – 50‬قدم‪ /‬دقيقة ( إذا قلت‬ ‫‪.1‬‬
‫السرعة عن ‪ 50‬هذا يعنى أن مرشح البكتريا فى حاجة للتغيير ) ‪.‬‬
‫يجب اختبار اتجاه الهواء خالل الفتحة األمامية باستخدام منديل ورقى ‪.‬‬ ‫‪.2‬‬

‫‪ -5‬اختبار كفاءة األوتوكالف بيولوجياً حتى ال يكون مصد ارً للتلوث ‪.‬‬
‫‪6‬‬
‫‪ -7‬اختبار كفاءة جهاز التقطير بتحليل المياه كيمائياً من آن ألخر بحيث يكون الرقم الهيدروجينى ‪5‬‬
‫الى ‪.6‬‬

‫ثانياً ‪ :‬تقييم الجودة الخارجي)‪(EQA‬‬

‫ يتم بين المعامل المركزية والمعامل الوسيطة والفرعية وبين المعامل المركزية ومعامل مرجعية دولية ‪.‬‬ ‫•‬
‫ قد تتأثر كفاءة العمل بمعامل تش � � � ��خيص الدرن وتقل عن المس � � � ��توى المطلوب لهذا يجب تحديد المشاكل التي‬ ‫•‬
‫ت � � � ��ؤدي لذلك ومحاولة حلها وال يتأتى هذا إال عن طريق اإلش� � � � �راف على المعامل الوس � � � ��يطة والفرعية بانتظام‬
‫بواسطة أفراد مدربين وذوي خبرة عالية ‪.‬‬
‫ ويجب معرفة أن هذا اإلشراف ليس له عالقة بالتفتيش اإلداري الخاص بو ازرة الصحة ‪ ،‬إوانما الغرض منه هو‬ ‫•‬
‫مساعدة العاملين بمعامل الدرن على حل المشاكل الفنية الخاصة بالعمل لتحقيق أفضل األداء ‪.‬‬
‫ ويعتبر تأكيد الجودة هو المهمة األساسية المطلوبة من اإلشراف على معامل الدرن ‪.‬‬ ‫•‬
‫الطرق المتبعة لتقييم الجودة الخارجي بالنسبة للفحص المجهري المباشر‬
‫ يقوم مس � � � ��ئول الدرن فى المحافظة بجمع عدد ‪ 10‬ش� � � � �رائح عشوائياً ( س � � � ��لبية إوايجابية ) ثم تدون أرقام الشرائح‬ ‫•‬
‫ونتائجها فى استمارة مستقلة وتسلم هذه الشرائح إلى المعامل المركزية حيث يقوم المراجع الرئيسي بفحص هذه‬
‫الش� � � � �رائح دون معرفة مسبقة بنتائجها ثم تجري مقارنة بين نتائج المعامل المركزية والمعمل الوسيط أو الفرعي‬
‫‪ ،‬وفى حالة اختالف النتائج تجري اتصاالت بين المعملين لمعرفة أسباب االختالف لحل المشاكل ‪.‬‬
‫ تتميز هذه الطريقة بكفاءتها فى تقييم طريقة تجهيز الش� � � � �رائح من حيث الفرد والصبغة وكذلك فى تقييم كفاءة‬ ‫•‬
‫الفحص المجهري ‪.‬‬
‫ يتم إجراء هذا التقييم كل ‪ 6-3‬شهور وعند الحاجة يتم التقييم على فترات أقل‪.‬‬ ‫•‬

‫‪59‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫توجد طريقة أخرى لتقييم الجودة الخارجي‪EQA :‬‬

‫ وذلك باعداد مس � � � ��حات إيجابية مختلفة في درجة اإليجابية و أخرى س � � � ��لبية ويتم تثبيتها إوارسالها الى المعمل‬ ‫•‬
‫المراد تقييمه ثم إرسال النتيجة إلى المعمل المرجعى بالبريد أو الفاكس‪.‬‬
‫درجة القراءة ‪:‬‬
‫يق � � � ��وم المراجع بتقييم النتائج لتحديد درجة القراءة بناء على د ارس � � � ��ة االخت � � � ��الف بين نتائجه ونتائج المعمل الخاضع‬
‫للتقييم ‪ ،‬لذا يجب أن يقوم جميع القائمين بالفحص المجهري باس � � � ��تخدام رموز ش � � � ��فرية واحدة لتسجيل نتائج الفحص‬
‫المباشر ‪ ،‬وهذه الرموز هي ‪:‬‬

‫أكثر من ‪ 10‬عصيات في كل حقل مجهري‬ ‫‪+++‬‬

‫عصيات في كل حقل مجهري‬ ‫من ‪9-1‬‬ ‫‪++‬‬
‫من ‪ 99-10‬في ‪ 100‬حقل مجهري‬ ‫‪+‬‬
‫من ‪ 9-1‬في ‪ 100‬حقل مجهري‬ ‫يكتب العدد‬
‫عدم وجود عصيات‬ ‫سلبي‬
‫ فى حالة الشك تطلب عينه أخرى إلعادة الفحص ‪.‬‬ ‫•‬
‫ فى حالة تطابق النتائج يكون درجة الخطأ (‪ � � )score‬صفر ‪.‬‬ ‫•‬
‫ فى حالة تطابق اإليجابية مع اختالف درجة القراءة تحسب نقطة واحدة لكل درجة اختالف‬ ‫•‬
‫ فى حالة اختالف النتائج من السلبية لإليجابية تحسب النقاط كاآلتي ‪:‬‬ ‫•‬
‫نقاط‬ ‫‪8‬‬ ‫نقاط‬ ‫‪7‬‬ ‫نقاط‬ ‫‪6‬‬ ‫نقاط‬ ‫‪5‬‬

‫‪+‬‬ ‫‪9-1‬‬
‫‪+++‬‬ ‫‪++‬‬

‫ فى حالة احتساب ‪ 5‬نقاط أو أكثر يجب سرعة التعرف على المشاكل القائمة التي أدت لهذا الخطأ‪.‬‬ ‫•‬
‫األسباب التي تؤدي إلى‬
‫خطأ فى تشخيص الفحص المجهرى‪:‬‬
‫األسباب المحتملة للنتائج السلبية الكاذبة ‪.‬‬

‫ خطا فى التدوين فى السجالت ‪.‬‬ ‫•‬ ‫خطأ فى ا لتسجيل‬

‫ خطا فى ملء استمارة التقييم ‪.‬‬ ‫•‬
‫ عدم فحص الشريحة بالكامل‪.‬‬ ‫•‬ ‫خطأ فى الفحص‬
‫ قصور فى كفاءة الميكروسكوب ( الضوء – العدسات ) ‪.‬‬ ‫•‬
‫ قصور فى بصر القائم بالفحص (عمي ألوان ‪ -‬ضعف) ‪.‬‬ ‫•‬

‫‪2015‬‬ ‫‪60‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ استخدام كيماويات غير جيدة ‪.‬‬ ‫•‬ ‫خطأ فى الصبغة‬

‫ التسخين غير كاف مما يؤدي إلى ظهور العصيات بلون باهت‪.‬‬ ‫•‬
‫األسباب المحتملة للنتائج اإليجابية الكاذبة ‪.‬‬

‫ خطا فى التدوين فى السجالت ‪.‬‬ ‫•‬ ‫خطأ فى التسجيل‬

‫ خطا فى ملء استمارة التقييم ‪.‬‬ ‫•‬
‫ الخلط بين خدوش بالشريحة و العصيات الدرنية ‪.‬‬ ‫•‬ ‫خطأ فى الفحص‬
‫ تبهيت غير كاف مما يؤدى الى صبغ عصيات غير درنية ‪.‬‬ ‫•‬ ‫خطأ فى الصبغة‬
‫ عدم الترشيح قبل االستعمال يؤدى إلى ترسب بللورات الفينول الحمراء ‪.‬‬ ‫•‬
‫ من عينة إيجابية أثناء إعداد المسحات أو الصبغة ‪.‬‬ ‫•‬ ‫تلوث الشريحة‬
‫ من المجهر (العدسة الزيتية) ‪.‬‬ ‫•‬
‫ من زيت السيدر‪.‬‬ ‫•‬

‫‪61‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﺿﺒﻂ اﻟﺠﻮدة ﻟﻠﻤﺰارع اﻟﺪرﻧﻴﺔ اﻟﺼﻠﺒﺔ ) ‪:( QC of Culture‬‬

‫األسباب التى قد تؤدى إلى خطأ فى تشخيص المزرعة ‪-:‬‬

‫‪ -1‬أسباب السلبية الكاذبة ‪:‬‬
‫ أن تكون العينة غير صالحة للزرع ( لعاب ‪ -‬خطأ فى حفظ العينة مثل تعرضها للضوء والح اررة ) ‪.‬‬ ‫•‬
‫ التلقيح الخاطئ للمس � � � ��تنبت ( رج العينة بعد تدويرها فى جهاز الطرد المركزى يؤدى إلى زيادة تخفيف الراسب‬ ‫•‬
‫) أو عدم التلقيح سهواً ‪.‬‬
‫ خطأ فى تحضير المستنبتات ( خطأ فى الرقم الهيدروجينى ‪ ، pH‬خطأ فى العناصر المستخدمة)‪.‬‬ ‫•‬
‫ خطأ فى طريقة الزرع ‪:‬‬ ‫•‬
‫‪ -‬زيادة تركيز هيدروكسيد الصوديوم أو زيادة تعرض العينة له عن ‪ 45‬دقيقة ‪.‬‬
‫‪ -‬خطأ فى درجة التعادل بحمض الهيدروكلوريك ويظهر هذا فى صورة تغيير للون المستنبت أزرق أو أصفر ‪.‬‬
‫‪ -‬عدم كفاءة التطهير‪ Decontamination‬يؤدى إلى طمس المستعمرات بميكروبات أخرى‪.‬‬
‫ قصور فى جهاز الطرد المركزى ‪.‬‬ ‫•‬
‫ ارتفاع درجة ح اررة الحضان جفاف المستنبت وقتل العصيات ‪.‬‬ ‫•‬
‫ انخفاض درجة ح اررة الحضان غير كافية لنمو العصيات ‪.‬‬ ‫•‬
‫ خطأ فى تسجيل النتيجة بسجل المعمل‪.‬‬ ‫•‬
‫( ‪ ) 2‬أسباب اإليجابية الكاذبة ‪:‬‬
‫ التلوث ببصاق إيجابى ‪:‬‬ ‫•‬
‫‪ -‬مباشر ‪ :‬من عينة إيجابية أخرى‬
‫‪ -‬غير مباشر عن طريق ‪:‬‬
‫* استخدام ماصة ملوثة فى عملية التلقيح ‪.‬‬
‫* الرذاذ المتصاعد نتيجة فتح الزجاجات مباشرة بعد تدويرها فى جهاز الطرد المركزى ‪.‬‬

‫ استخدام سوائل أو أدوات غير معقمة فى جمع العينات مثل األنابيب والمناظير ‪.‬‬ ‫•‬
‫ خطأ فى التسجيل بسجل المعمل ‪.‬‬ ‫•‬

‫‪2015‬‬ ‫‪62‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫طرق ضبط الجودة ‪:‬‬

‫الكتشاف السلبية واإليجابية الكاذبة للمزارع الدرنية يجب مراعاة اآلتى بانتظام ‪:‬‬
‫مراجعة سجل المعمل الكتشاف مزارع إيجابية غير متوقعة لعينات سلبية بالفحص المباشر للبصاق ‪-‬‬ ‫‪.1‬‬
‫ويمكن أن يكون ذلك نتيجة تلوث العينات من العينة اإليجابية األولى التى تم زرعها فى نفس اليوم‪0‬‬
‫مراجعة سجل المعمل للتأكد من عدم وجود مزارع سلبية متتابعة لعينات إيجابية بالفحص المباشر أوعدم‬
‫ظهور مزارع إيجابية فى فترة معينة تم فيها استخدام مستنبتات دفعة (تشغيلة) واحدة‬
‫(‪. ( Same batch of media‬‬
‫مراجعة اإلحصائيات والتأكد من عدم وجود ارتفاع أو انخفاض غير عادى فى عدد المزارع اإليجابية أو‬ ‫‪.2‬‬
‫السلبية وذلك بالمقارنة مع اإلحصائيات األخرى ‪.‬‬
‫مراجعة نسبة المزارع الملوثة من خالل اإلحصائيات ‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫تبادل العينات بين المعامل الوسيطة والمعامل المركزية لعمل مزارع أولية ‪.‬‬ ‫‪.4‬‬

‫‪63‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﺿﺒﻂ اﻟﺠﻮدة ﻻﺧﺘﺒﺎرات ﺣﺴﺎﺳﻴﺔ ﻣﻴﻜﺮوب اﻟﺪرن ﻟﻠﻤﻀﺎدات اﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‬

‫يمكن أن تكون هذه االختبارات سلبية كاذبة (حساس كاذب) أو إيجابية كاذبة (مقاوم كاذب)‪.‬‬
‫‪ -1‬االسباب الرئيسية للحساس الكاذب‪False sensitive :‬‬
‫ خطأ فى تحضير المستنبتات ( خطأ فى الرقم الهيدروجينى ‪ ، pH‬خطأ فى العناصر المستخدمة)‬ ‫•‬
‫ ارتفاع درجة ح اررة الحضان عن‪ c °37‬جفاف المستنبت وقتل العصيات‪.‬‬ ‫•‬
‫ انخفاض درجة ح اررة الحضان عن ‪ C °35‬غير كافية لنمو العصيات‬ ‫•‬
‫ طريق � � � ��ة تحضير المس � � � ��تنبت المحتوى على مضادات ال � � � ��درن مثل زيادة تركيز واح � � � ��د أو اكثر من مضادات‬ ‫•‬
‫الدرن‪ ،‬ويمكن االش � � � ��تباه فى ذلك فى حالة عدم وجود س � � � ��الالت مقاومة خالل المدة المستخدم فيها مستنبتات‬
‫تم تحضيرها فى وقت واحدوالس � � � ��تبعاد أو التأكد من هذا االحتمال يمكن استخدام ساللة مقاومة معروفة يمكن‬
‫الحصول عليها من مريض مصاب بالدرن سبق عالجه‪.‬‬
‫ خطأ فى تفسير النتائج ‪:‬‬ ‫•‬
‫يجب أن تحتوى زجاجة الضابط (‪ )Control No. 1‬على ‪ 100‬مستعمرة على االقل وذلك ألن وجود عدد أقل قد‬
‫ال يس � � � ��مح بظهور عدد كاف من المستعمرات على زجاجة الضابط وكذلك على األنابيب المحتوية على المضادات‬
‫الحيوية‪.‬‬
‫‪-‬األسباب الرئيسية للمقاومة الكاذبة ‪False Resistance :‬‬
‫ خطأ فى طريقة تحضير المستنبت المحتوى على مضادات الدرن مثل نقص تركيز واحد أو أكثر من مضادات‬ ‫•‬
‫الدرن نتيجة ‪:‬‬
‫‪ -‬خطأ فى تخزين مضادات الدرن‪.‬‬
‫‪ -‬خطأ فى تحضير المحلول المركز‪.‬‬
‫‪ -‬إبطال مفعول مضادات الدرن بزيادة التسوية فى جهاز تجميد المستنبتات(‪. (Inspissator‬‬
‫‪ -‬استعمال االقراص والكبسوالت فى تحضير المستنبتات الخاصة بالحساسية‪.‬‬
‫‪ -‬خطأ فى وزن المضاد الحيوى المضاف‪ (.‬مثل عدم تعديل الوزن حسب ال�‪(Potency‬‬
‫ خطأ فى تفسير النتائج‪:‬‬ ‫•‬
‫‪ -‬إذا احتوت كل من زجاجتى الضابط (‪ )3( ، )1‬على عدد ال يمكن حصره من المستعمرات الدرنية‬
‫ال يمكن تقدير المقاومة ولكن يمكن فقط التعرف على السالالت الحساسة‪.‬‬
‫‪ -‬التلوث الذاتى لزجاجات مستنبتات الحساسية وذلك إذا رجت الزجاجات فقد تلقح إحدى المستعمرات‬
‫أماكن اخرى من المستنبت وتبدأ مستعمرات جديدة فى النمو مما يزيد عدد المستعمرات عن المتوقع‪.‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪64‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫مالحظة‪:‬‬
‫فى حالة وجود سالالت مقاومة لكل المضادات لكل العينات يزداد احتمال وجود تلوث بميكروبات غير‬
‫نموذجية (‪ ”. )Atypical Mycobacteria‬لذا يفضل استخدام ‪” TCH, PNB, Catalase, Niacin‬‬
‫لتصنيف الميكروب‪.‬‬
‫طريقة تقييم الجودة الداخلى (‪ )IQA‬الختبارات الحساسية ‪:‬‬
‫عدد المستعمرات الموجودة على كل من زجاجتى الضابط (‪ )3( ، )1‬وكذلك على الزجاجات المحتوية‬ ‫*‬
‫على مضادات الدرن‪.‬‬
‫تفسير النتائج (حساس أو مقاوم)‪.‬‬ ‫*‬
‫يجب عمل عمل إختبار ضبط الجودة مع كل تشغيلة اختبار حساسية بعمل اختبار حساسية لعينة‬ ‫*‬
‫‪ M.tuberculosis H37Rv‬التى تكون حساسة لجميع المضادات الحيوية المعالجة للدرن‪.‬‬

‫طريقة تقييم الجودة الخارجى (‪ )EQA‬الختبارات الحساسية ‪:‬‬

‫يجب أن يتم تقدير الحساسية بطريقة موحدة ‪.‬‬ ‫*‬
‫يجب أن يش � � � ��مل التقرير الطريقة المستخدمة – تركيز مضادات الدرن ونوع المستنبت المستخدم هذا وتقوم المعامل‬
‫المركزية حالياً بتبادل سالالت الدرن مع معامل الدرن العالمية‪.‬‬

‫‪65‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﻃﺮﻳﻘﺔ ﻋﻤﻞ اﻟﻤﺰارع اﻟﺪرﻧﻴﺔ ﻋﻠﻲ اﻟﻤﺴﺘﻨﺒﺘﺎت اﻟﺴﺎﺋﻠﺔ‬

‫(‪Mycobaterium Growth Indicator Tube )MGIT‬‬
‫‪BACTEC System‬‬
‫انبوبة ال ‪: MGIT‬‬
‫ تحتوى أنبوبة ال‪ MGIT‬على ‪:‬‬ ‫•‬
‫‪ .1‬سائل البروث الذى يسرع من نمو الميكوبكتريا‪ .‬ويتكون هذا السائل من‪:‬‬
‫‪Modified middle brook 7 H9 broth base + Casein Peptone.‬‬
‫‪ .2‬مادة الفلوروكروم المشبعة باألكسجين وممزوجة بالسيليكون فى قاع األنبوبة‪.‬عندما تنمو الميكوبكتريا‪,‬‬
‫تمتص األكسجين الموجود وتفرز ثانى أكسيد الكربون عندئذ ينشط الفلوروكروم ويشع ‪.‬‬
‫تعطى األنابيب نتيجة ايجابية من ‪ 42-4‬يوم‪ .‬بعد ذلك تق أر نتيجة سلبية‪.‬‬
‫ يمكن أن تعطى األنابيب نتيجة ايجابية كاذبة فى حالة ‪:‬‬ ‫•‬
‫‪ .1‬تلوث بميكوبكتريا غير درنية وعندئذ يكون البروث خفيف التعكر‪.‬‬
‫‪ .2‬تلوث ببكتريا أخرى غير الميكوبكتريا ويكون البروث شديد التعكر‪.‬‬
‫ عند إنماء الميكوبكتريا خاصة ‪MTB complex‬‬ ‫•‬

‫يضاف النبوبة ‪MGIT‬‬

‫‪Growth supplement‬‬
‫‪+‬‬ ‫لمنع التلوث ‪PANTA‬‬
‫‪OADC+POES‬‬
‫‪Oleic Acid‬‬ ‫‪Polymixin B‬‬
‫‪Albumin‬‬ ‫‪Amphotercin B‬‬
‫‪Dextrose‬‬ ‫‪Nalidixic Acid‬‬
‫‪Catalase‬‬ ‫‪Trimethoprim‬‬
‫‪Polyoxyethelynesterate‬‬
‫‪Azocilin‬‬
‫(‪(POES‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪66‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫طريقة تخزين ال ‪-: Kits‬‬

‫‪ .1‬أنابيب ال ‪: MGIT‬‬
‫ تحفظ فى درجة ح اررة ‪° 25-2‬م بعيد ا” عن الضوء ‪.‬‬ ‫•‬
‫ البد أن يكون ال‪ Broth‬رايق واذا كان معكرا” فال يستعمل ‪.‬‬ ‫•‬
‫ تحفظ حتى تاريخ االنتهاء المكتوب على العبوة ‪.‬‬ ‫•‬
‫‪ .2‬زجاجات ‪: OADC‬‬
‫ تحفظ فى درجة ‪°8-2‬م ( فى الثالجة ) بعيدا” عن الضوء حتى تاريخ االنتهاء‪.‬‬ ‫•‬
‫‪ .3‬زجاجات ‪:PANTA‬‬
‫ تحفظ فى درجة ح اررة ‪°8-2‬م ‪.‬‬ ‫•‬
‫ عند حلها تستخدم خالل ‪ 5‬أيام ( بحيث تكون محفوظة فى الثالجة ) أو عند ‪°20-‬م فى ‪Deep Freezer‬‬ ‫•‬
‫لمدة ‪ 3‬شهور وتقسم إواذا ساحت التستخدم مرة اخرى بعد هذه المرة ‪.‬‬

‫التجهيزات التى تسبق خطوات ‪: Bactec 960‬‬

‫تجهيز العينة ‪:‬‬
‫‪ .1‬طريقة ال ‪: NALC-NaOH‬‬
‫ عند تحضير ال ‪ ,NALC-NaOH‬يستخدم فى ظرف ‪ 24‬ساعة‪.‬‬ ‫•‬
‫ يخلط ‪ NaOH 4 %‬بكمية متساوية من ‪(1(.Na Citrate 2.9% Sol‬‬ ‫•‬
‫ يضاف ‪ 2/1‬جم من ‪ NALC Powder‬الى ‪ 100‬مل من ‪.(2(.Sol (1(.Sol‬‬ ‫•‬
‫‪ .2‬طريقة تحضير ‪: .Phosphate Buffer Sol‬‬
‫)‪-: )Sol.A‬‬
‫ ‪ 500ml‬ماء مقطر يضاف اليها ‪ 5,96gm‬فوسفات ثنائى الصوديوم ‪.Na2HPO4‬‬ ‫•‬
‫)‪-: )Sol.B‬‬
‫ ‪ 500ml‬ماء مقطر يضاف اليها ‪ 4,56gm‬فوسفات أحادى البوتاسيوم ‪.KH2PO4‬‬ ‫•‬
‫ يضاف ‪ 500‬مللى (‪ )solu A‬الى ‪ 500‬مللى (‪ )solu B‬ثم نقوم بضبط ‪.ph‬‬ ‫•‬
‫ يعقم فى االوتوكالف عند ‪º 121‬م لمدة ‪ 20‬دقيقة ‪.‬‬ ‫•‬
‫ أذا كانت أكياس ‪ Phosphate Buffer‬جاهزة من الشركة ‪:‬‬ ‫•‬
‫ يضاف الكيس على ‪ 500ml‬ماء مقطر ويعقم فى األوتوكالف عند ‪° 121‬م لمدة ‪ 20‬دقيقة‪.‬‬ ‫•‬
‫‪ .3‬طريقة تحضير ‪: OADC + PANTA‬‬
‫ يضاف ‪ 15ml‬من ‪ OADC‬على زجاجة ال ‪. (3(.PANTASol‬‬ ‫•‬

‫‪67‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫الخطوات‪:‬‬
‫ ترقم ‪ 50 Falcon tube‬مللى ويوضع فيها العينة ويضاف عليها كمية متساوية من ‪(2(.Sol‬‬ ‫•‬
‫(‪ )NALC - NaOH‬وتغلق جيدا‪.‬‬
‫ توضع األنبوبة على ‪ Vortex‬لمدة ‪ 20-15‬ثانية ‪.‬‬ ‫•‬
‫ تقلب األنبوبة لخلط العينة بال ‪.NALC NaOH‬‬ ‫•‬
‫ تترك األنبوبة فى درجة ح اررة الحجرة لمدة ‪ 20-15‬دقيقة ‪.‬‬ ‫•‬
‫ يض � � � ��اف ‪ Phosphate buffer‬معقم على العين � � � ��ة وال‪ NALC-NaOH‬حتى يصل لعالمة ‪ 45‬مل وتقلب‬ ‫•‬
‫االنبوبة يدويا” ‪.‬‬
‫ توضع أنبوبة ال ‪ Falcon‬المعقمة فى السنترفيوج المبرد وتدار ‪ 3000xg‬لمدة ‪ 15‬دقيقة ‪.‬‬ ‫•‬
‫ يسكب الرائق ويترك الراسب وتغلق األنبوبة بعد اضافة ‪. (0.5-1ml( Phosphate buffer‬‬ ‫•‬
‫ ترقم أنبوبة ال‪ MGIT‬على حسب العينة ( اليكتب الرقم على كود األنبوب)‬ ‫•‬
‫ يضاف ‪ 0,8ml‬من ‪ )OADC + PANTA( )3(.Sol‬على أنبوبة ال ‪. MGIT‬‬ ‫•‬
‫ يضاف ‪ 0,5ml‬من العينة ( الراسب) على أنبوبة ال ‪. MGIT‬‬ ‫•‬
‫ ترج االنبوبة وتترك فى درجة ح اررة الحجرة ‪ 2/1‬ساعة ثم توضع فى جهاز الباكتيك ‪ 960‬وتختبر‪.‬‬ ‫•‬

‫كيفية تطهير المزرعة الملوثة بأنابيب ال ‪:MGIT‬‬

‫‪ .1‬تسكب محتويات أنبوبة ال ‪ MGIT‬الملوثة فى أنبوبة ‪.Falcon 50ml‬‬
‫‪ .2‬يضاف ‪ 8ml NALC – NaOH‬لل ‪ Falcon‬وتوضع على ‪ Vortex‬لمدة ‪ 15‬ثانية‪.‬‬
‫‪ .3‬تترك االنبوبة لمدة ‪ 15‬دقيقة ‪.‬‬
‫‪ .4‬يضاف (‪ 35ml Phosphate buffer )ph = 6-8‬ويخلط على السوائل السابقة‪.‬‬
‫‪.5‬توضع ال ‪ Falcon‬فى السنترفيوج ‪ 3000xg‬لمدة ‪ 15‬دقيقة ‪.‬‬
‫‪.6‬يسكب الراشح ويضاف ‪ Phosphate buffer‬على الراسب (‪. ) 0.5-1ml‬‬
‫‪ .7‬يزرع من أنبوبة ال ‪ Falcon 0.5ml‬من ‪ Suspension‬على أنبوبة ‪ MGIT‬جديدة عليها ‪Growth‬‬
‫‪ 800( PANTA – Supplement‬ميكرون)‪.‬‬
‫‪.8‬تترك األنبوبة فى درجة حرارة الحجرة ‪ 2/1‬ساعة‪.‬‬
‫‪ .9‬تدخل الجهاز ‪.‬‬
‫متى يتم عمل ال‪ Subculture‬من ‪:MGIT +ve‬‬
‫أ‪ .‬األنابيب التى مر عليها أكثر من ‪ 5‬أيام ايجابية النتيجة ‪.‬‬
‫ب‪ .‬األنابيب التى ظلت خارج الجهاز اكثر من ‪ 4‬ساعات‪.‬‬
‫ت‪ .‬األنابيب التى اعطت تلوث على ال‪ Blood agar‬و الفيلم سلبى‪.‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪68‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫الطريقة‪:‬‬
‫‪ +‬تترك ‪ 4/1‬ساعة‪.‬‬ ‫‪.1‬تخرج أنبوبة ال ‪ MGIT‬االيجابى من الجهاز‪Vortex‬‬
‫‪.2‬تحل ‪ PANTA‬بال ‪ 15( OADC‬مل ) ‪.‬‬
‫‪.3‬تحضر أنبوبة ‪ MGIT‬جديدة ويضاف عليها ‪:‬‬
‫ ‪ 800‬ميكرولتر من ال‪. PANTA+OADC‬‬ ‫•‬
‫ ‪ 2/1‬مل من األنبوبة ال ‪ MGIT‬االيجابى ‪.‬‬ ‫•‬
‫‪.4‬تدخل األنبوبة فى الجهاز ‪.‬‬
‫‪‬عند قراءة األنبوبة األولية ايجابى ‪ ,‬تخرج األنبوبة من الجهاز ويتم عمل ‪:‬‬ ‫‪‬‬

‫ فيلم ‪.‬‬ ‫•‬

‫ يزرع منها على طبق ‪ Blood agar‬ويدخل الحضان ‪ 48‬ساعة عند ‪° 37‬م ‪.‬‬ ‫•‬
‫ إذا كان الفيلم ايجابى ‪ AFB‬و ‪ Blood agar‬ليس عليه نمو أو تلوث بعد ‪ 48‬ساعة ابدأ الحساسية (‪.(DST‬‬ ‫•‬
‫(‪.(DST‬‬ ‫‪Subculture‬‬ ‫ إذا كان الفيلم سلبى ‪ AFB‬و ‪ Blood agar‬عليه نمو (تلوث)‬ ‫•‬

‫كيفية عمل مزرعة على ‪ MGIT‬من مزرعة ‪ LJ‬ايجابى‪:‬‬

‫‪ -‬يؤخذ جزء من المستعمرة باللوب (عروة الزرع) ويذاب فى ماء ملح معقم ويضبط على ‪.MF=1‬‬
‫‪ -‬يضاف على أنبوبة ‪ MGIT‬جديدة (مكتوب عليها رقم العينة)‪.‬‬
‫‪ 800‬ميكرولتر من ‪. OADC + PANTA‬‬
‫‪ 500‬ميكرولتر من المعلق المجهز والمضبوط على ‪. MF=1‬‬
‫‪ -‬تدخل األنبوبة فى الجهاز وتقرأ‪.‬‬
‫كيفية عمل الحساسية الدوية الصف االول من مزرعة ‪ L.J‬ايجابى باستخدام جهاز ‪:Bactec 960‬‬
‫‪ -‬تحضير ستوك )‪ (Stock‬المضادات الحيوية ‪:‬‬
‫ يضاف ‪ 4‬مل ماء مقطر معقم على كل زجاجة مضاد حيوى (‪ )I Line‬لعمل ال ‪. Stock‬‬ ‫•‬
‫ يمكن تقسيم ال ‪ Stock‬وحفظه فى ‪°20-‬م لمدة ‪ 6‬شهور ‪.‬‬ ‫•‬
‫‪ -‬تحضير العينة ‪:‬‬
‫‪ .1‬تستخدم مزرعة ايجابية عمرها ليس أكثر من ‪ 14‬يوم‪.‬‬
‫‪ .2‬يجهز معلق ( ‪.( Mac Farland = 1‬‬
‫‪ Vortex .3‬لمدة ‪ 3-2‬ق‪.‬‬
‫‪ .4‬يترك ‪ 20‬ق حتى يترسب ‪.‬‬
‫‪ .5‬ينقل الراشح ( ‪ ) Supernatant‬ألنبوبة أخرى ويترك ‪ 15‬ق ليترسب ‪.‬‬

‫‪69‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫‪ .6‬ينقل الراشح ألنبوبة أخرى ويضبط على ‪. Mac Farland = 0.5‬‬

‫‪ .7‬يؤخذ ‪ 1‬مل من المعلق االخير ويضاف على ‪ 4‬مل محلول ملح معقم ويخلط‪.‬‬
‫الزرع على االنابيب ‪- :960 MGIT‬‬
‫‪ Sire Supplement‬لكل أنبوبة من ‪.MGIT 960‬‬ ‫‪ .1‬يضاف ( ‪ 800‬ميكرون ) من‬
‫‪ .2‬يضاف ( ‪ 100‬ميكرون ) من ستوك المضاد الحيوى على أنبوبة ال ‪ MGIT‬الخاصة به والتى تحمل رقم‬
‫العينة ‪.‬‬
‫‪ .3‬كيفية تحضير ‪: Growth Control‬‬
‫يؤخد ( ‪ 100‬ميكرون ) من المعلق األخير بالماصة ويضاف على ‪ 10‬مل محلول ملح معقم لعمل‬ ‫ ‬
‫التخفيف ‪ 100/1‬ويخلط ‪.‬‬
‫يؤخذ من المحلول ( ‪ 2/1 ) 100/1‬مل ويوضع على أنبوبة ال ‪ Growth Control‬ويخلط‪.‬‬ ‫ ‬

‫‪ .4‬يوضع ‪ 2/1‬مل من المعلق (الغير مخفف) على االنبوبة المحتوية على المضاد الحيوى ويخلط ‪.‬‬
‫‪ .5‬توضع االنابيب فى الراك الخاص وتدخل فى الجهاز‪.‬‬

‫كيفية عمل ‪ DST‬ألدوية الخط األول من انبوبة ‪ MGIT‬ايجابى ‪:‬‬

‫إذا ظهر ايجابى ‪-:‬‬
‫‪ .1‬تترك األنبوبة فى الجهاز يوم آخر بعد عمل الفيلم ومزرعة الدم (‪.)Blood agar‬‬
‫‪ .2‬اذا تركت األنبوبة يوم أو يومين نكمل عملية ‪. DST‬‬
‫‪ .3‬اذا ترك���ت ‪ 3‬أي���ام أو ‪ 4‬أي���ام أو ‪ 5‬أيام يخفف ‪ 1‬مل من البروث (االيجاب���ى) ‪4 +‬مل ماء ملح معقم (‪5:1‬‬
‫تخفيف) ويخلط‪.‬‬
‫عملية ال ‪- :DST‬‬
‫‪  ‬يضاف ‪ 800‬ميكرون من ‪ Supplement Sire‬لكل أنبوبة ( بالتريتب التالى) ‪:‬‬
‫إذا ظهر ايجابى ‪-:‬‬
‫‪ .1‬تترك األنبوبة فى الجهاز يوم آخر بعد عمل الفيلم ومزرعة الدم (‪.)Blood agar‬‬
‫‪ .2‬اذا تركت األنبوبة يوم أو يومين نكمل عملية ‪. DST‬‬
‫‪ .3‬اذا تركت ‪ 3‬أيام أو ‪ 4‬أيام أو ‪ 5‬أيام يخفف ‪ 1‬مل من البروث (االيجابى) ‪4 +‬مل ماء ملح معقم (‪ 5:1‬تخفيف)‬
‫ويخلط‪.‬‬
‫عملية ال ‪- :DST‬‬
‫‪  ‬يضاف ‪ 800‬ميكرون من ‪ Supplement Sire‬لكل أنبوبة ( بالتريتب التالى) ‪:‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪70‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫‪  ‬يضاف ‪ 100‬ميكرولتر من ‪ antibiotic Stock‬على كل أنبوبة خاصة بهذا ال ‪antibiotic‬‬

‫‪ ‬يجهز ‪ :GC‬يضاف ‪ 0.1ml‬من معلق الميكروب ‪ 10ml +‬من ماء الملح المعقم ( تخفيف ‪.) 1:100‬‬
‫يخلط ‪.‬‬
‫‪ ‬ثم يضاف ‪ 0.5ml‬من التخفيف (‪ .)1:100‬على أنبوبة ‪ GC-MGIT‬ويخلط‪.‬‬
‫‪  ‬يضاف‪ 0.5ml‬من المعلق بدون التخفيف (‪ )1:100‬لكل أنبوبة تحتوى على ال‪. antibiotic‬يخلط‪.‬‬
‫‪ ‬توضع األنابيب فى الراك بالتريتب ثم توضع فى الجهاز ‪.‬‬

‫‪71‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﺗﺤﺪﻳﺪ ﻧﻮﻋﻴﺔ اﻟﻤﻴﻜﻮﺑﻜﺘﺮﻳﺎ ) ‪ (TB complex or MOTT‬ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام‬

‫)‪ PNBA (Paranitrobenzoic acid‬ﻋﻠﻰ ﺟﻬﺎز ‪Bactec 960‬‬
‫الفكرة‪- :‬‬
‫‪  ‬يعطل ‪ PNBA‬نمو ‪ MTB-Complex‬فاذا لم يظهر نمو على المستنبت ‪ ,‬فهذا دليل على ان الميكروب‬
‫هو ‪. MTB-Complex‬‬

‫تحضير ‪-: PNBA reagent‬‬

‫‪ ‬التركيز المطلوب ‪. mcg/ml 500 :‬‬
‫‪ ‬يضاف ‪ 1g‬من هيدروكسيد الصوديوم ( االقراص ) على ‪ 80ml‬ماء مقطر معقم حتى يذوب ‪.‬‬
‫‪ ‬يضاف ‪ 4gm‬من ‪ PNBA‬على المحلول السابق‪.‬‬
‫‪ ‬يضاف (‪ Phenolphthalein)Ph Ph‬على المحلول باستخدام باستير حتى يصبح اللون بمبى‪.‬‬
‫‪ ‬يضاف ‪ HCL‬مركز (‪ )37%‬على المحلول باستخدام باستير حتى يصفر المحلول ويصبح أصفر رايق‪.‬‬
‫اذا وجدت ترس���يبات يضاف هيدروكسيد صوديوم ( أقراص ) ويقلب‪ .‬سوف يصبح اللون بمبى مرة أخرى ‪.‬يعاد‬
‫وضع ‪ HCl‬حتى يصفر ويصبح اللون أصفر رايق ‪.‬‬
‫‪ ‬يكمل المحلول بماء مقطر معقم الى ‪. 100ml‬‬
‫‪ ‬يقسم فى زجاجات صغيرة ( ‪ ) ml -1 0.5‬وتوضع الزجاجات فى االوتوكالف عند ‪ 120°c‬لمدة ‪20‬‬
‫دقيقة وتحفظ الزجاجات فى الثالجة لمدة ‪ 3‬أشهر (‪. )2-8°c‬‬

‫إذا كانت عملية الزرع ‪-:‬‬

‫‪ ‬من أنبوبة ‪ MGIT‬ايجابى‪-:‬‬
‫‪ .1‬اذا كان عمر االنبوبة ‪ MGIT‬االيجابى يوم أو يومين ‪:‬‬
‫يضاف ‪ ml 1‬من البروث االيجابى على ‪ 4‬مل من محلول الملح المعقم (‪ )5 :1‬و يقارن المعلق‬ ‫ ‬
‫ب‪ MF 0,5‬ويستخدم هذا المعلق المخففى عملية الزرع على أنبوبة ال ‪.MGIT‬‬
‫‪ .2‬اذا كان عمر االنبوبة ‪ MGIT‬االيجابى أكثر من ‪ 5‬أيام‪ ،‬يعاد الزرع على أنبوبة ‪ MGIT‬جديدة ‪.‬‬
‫‪ ‬من ‪ LJ‬ايجابى ‪:‬‬
‫تستخدم مزرعة عمرها ‪ 14‬يوم ليس أكثر ‪.‬‬ ‫ ‬

‫يحضر معلق ويقارن ب‪. MF1‬‬ ‫ ‬

‫‪ 3-2 Vortex‬دقيقة‪.‬‬ ‫ ‬

‫يترك ‪ 20‬ق حتى يترسب ‪.‬‬ ‫ ‬

‫يسكب الراشح فى أنبوبة معقمة ويترك ‪ 15‬ق حتى يترسب‪.‬‬ ‫ ‬

‫‪2015‬‬ ‫‪72‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫يسكب الراشح فى أنبوبة معقمة ويقارن ب‪ MF 0.5‬باستخدام محلول ملح معقم ‪.‬‬ ‫ ‬

‫يخفف المعلق االخير (‪ )ml 1‬ب(‪ )ml 4‬محلول ملح معقم ‪.‬‬ ‫ ‬

‫يؤخذ ‪ ml 1/2‬من المعلق االخير لعملية الزرع ‪.‬‬ ‫ ‬

‫‪ ‬عملية الزرع‪:‬‬

‫‪ .1‬تجهز أنبوتبان ‪: MGIT‬‬
‫‪.)Growth Control )GC‬‬ ‫ ‬
‫‪.PNBA‬‬ ‫ ‬
‫‪ .2‬يضاف‪ ml 0.5‬من ‪ SIRE Supplement‬لكل أنبوبة ‪. MGIT‬‬
‫‪ .3‬يضاف ‪ 100‬ميكرون من ‪ PNBA reagent‬المجهز سابقا على أنبوبة ال ‪ MGIT‬المسماه ‪. PNBA‬‬
‫‪ .4‬يضاف‪ ml 0.5‬من المعلق على كل أنبوبة من ‪. MGIT‬‬
‫‪‬عملية الزرع‪-:‬‬ ‫‪‬‬

‫‪ .5‬توضع االنبوتبان فى الراك ذى الخانتين بحيث‪:‬‬

‫‪ .6‬يدخل الراك فى الجهاز‪.‬‬

‫‪  ‬القراءة‪-:‬‬
‫ ‪ GC MGIT tube‬تعطى ايجابى اذا كان‪400 GU‬‬ ‫•‬
‫‪.Sensitive‬‬ ‫ تختبر أنبوبة ‪ PNBA MGIT‬اذا كان ‪ = GU‬أو أقل من ‪10‬‬ ‫•‬

‫‪. resistant‬‬ ‫اذا كان ‪ GU‬أكثر من ‪10‬‬

‫‪73‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﻛﻴﻔﻴﺔ ﻋﻤﻞ ‪³ DST‬دوﻳﺔ اﻟﺨﻂ اﻟﺜﺎﻧﻰ ﻋﻠﻰ اﻟﺒﺎﻛﺘﻴﻚ‪٩٦٠‬‬

‫الخط الثانى من المضادات الحيوية‪ :‬ليس لها ‪ Kits‬بل يجهز الستوك من زجاجات البودرة‪.‬‬
‫‪‬األميكاسين‪-:‬‬
‫‪‬‬

‫ يذاب ‪ 332µg‬من البودرة فى ‪ 1ml‬ماء مقطر معقم ستوك (‪.(Stock‬‬ ‫•‬

‫ يضاف ‪ 1ml‬من الستوك على ‪ 3ml‬ماء مقطر معقم ‪.W1‬‬ ‫•‬
‫ يضاف ‪ 0.1ml‬من ‪ W1‬على أنبوبة ‪. MGIT‬‬ ‫•‬
‫ التركيز النهائى ( ‪. (1μg/ml‬‬ ‫•‬
‫• تكمل الخطوات التابعة إلختبار الحساسية على الباكتيك‪.‬‬
‫الكابريوميسين ‪-:‬‬
‫ يذاب ‪ µg 415‬من البودرة فى ‪ 1ml‬ماء مقطر معقم ستوك (‪.(Stock‬‬ ‫•‬
‫ يضاف‪ 1ml‬من الستوك على‪ ml 1‬ماء مقطر معقم ‪.W1‬‬ ‫•‬
‫ يضاف‪ ml 0,1‬من ‪ W1‬على أنبوبة ‪. MGIT‬‬ ‫•‬
‫ التركيز النهائى ( ‪. (2,5μg/ml‬‬ ‫•‬
‫ تكمل الخطوات التابعة إلختبار الحساسية على الباكتيك‪.‬‬ ‫•‬
‫الكابريوميس � � � ��ين ‪:‬تستخدم هذه الطريقة عند تحضير كميات بالمليجرام من المضاد الحيوى حيث يؤخذ فى االعتبار‬
‫درجة النقاء‬
‫ تحضير الستوك‪.‬‬ ‫•‬
‫وزن البودرة = حجم المذيب ‪ x‬التركيز المطلوب ‪100x‬‬
‫درجة النقاء‬
‫‪ ‬الكابريوميسين ‪ :‬تستخدم هذه الطريقة عند تحضير كميات بالميكروجرام من المضاد الحيوى حيث ال‬
‫يؤخذ فى االعتبار درجة النقاء‬
‫ يقسم الستوك فى كريوفيالز (أنابيب صغيرة) كميات ‪ ml 0,2‬وتخزن فى ‪° 70-‬م لمدة عام ‪.‬‬ ‫•‬
‫ عند استخدام الستوك ‪ ،‬يخرج من الديب فريزر حتى يسيح ثم يستخدم بدون تأخير‪.‬‬ ‫•‬
‫ يخفف ستوك المضاد الحيوى بإيضافة ‪ 100‬ميكرولتر من الستوك على ‪ 900‬ميكرولتر ماء مقطر معقم‬ ‫•‬
‫( = تخفيف ‪.( 10:1‬‬
‫ يسكب باقى الستوك ( اليستخدم بعد سيحانه مرة اخرى)‪.‬‬ ‫•‬
‫ تكمل الخطوات التابعة إلختبار الحساسية على الباكتيك‪.‬‬ ‫•‬
‫‪‬الكاناميسين ‪:‬‬
‫‪‬‬

‫يحسب وزن المضاد الحيوى المذاب فى الماء المقطر لتحضير الستوك‪.‬‬ ‫ ‬

‫‪2015‬‬ ‫‪74‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫وزن البودرة = حجم المذيب ‪ x‬التركيز المطلوب‪100 x‬‬

‫درجة النقاء‬
‫يقسم الستوك أحجام صغيرة (‪ )0.2ml‬فى كريوفيالز ويخزن فى ‪° 70-‬م لمدة عام ‪.‬‬
‫ عند االحتياج ‪ ،‬يسيح ويستخدم‪.‬‬ ‫•‬
‫يضاف ‪ 100‬ميكرولتر من الستوك على ‪ 900‬ميكرولتر من الماء المقطر‬ ‫ يخفف الستوك (‪)10:1‬‬ ‫•‬
‫المعقم‪.‬‬
‫ اليثلج الستوك مرة أخرى‪.‬‬ ‫•‬
‫ تكمل الخطوات التابعة إلختبار الحساسية على الباكتيك‪.‬‬ ‫•‬

‫‪ ‬األوفلوكساسين ‪-:‬‬
‫‪‬‬

‫ تحضير الستوك‪.‬‬ ‫•‬

‫وزن = ‪10x 1660‬‬
‫‪1000‬‬
‫= ‪ mg 16.6‬يذاب فى ‪ 10ml‬ماء مقطر معقم ‪ /‬هيدروكسيد الصوديوم‪.‬‬
‫‪‬إلذابة األوفلوكساسين ‪-:‬‬
‫‪‬‬

‫ توضع البودرة فى أنبوبة معقمة‪.‬‬ ‫•‬

‫ يستخدم ‪ 0.1N‬هيدروكسيد الصوديوم إلذابة المضاد الحيوى فى الماء المقطر المعقم‪.‬‬ ‫•‬
‫( لتحضير ‪ 0.1N‬هيدروكسيد الصوديوم ‪ :‬يذاب ‪ 4‬جم هيدروكسيد الصوديوم فى ‪ 1‬لتر ماء مقطر معقم)‪.‬‬
‫ يضاف هيدروكس � � � ��يد الصودي � � � ��وم نقطة بنقطة مع التحريك البطىء بعد كل نقط � � � ��ة حتى يذوب المضاد تماما‬ ‫•‬
‫ويصبح المحلول رايق تماما‪.‬‬
‫ يخفف المضاد بالماء المقطر الى الحجم المطلوب‪.‬‬ ‫•‬
‫ يقسم الستوك الى كميات صغيرة ‪ 0.2ml‬فى كريوفيالز يمكن تخزينه عند‪° 70 -‬م لمدة سنة‪.‬‬ ‫•‬
‫ نكمل مثل الكاناميسين‪.‬‬ ‫•‬
‫ نكمل خطوات اختبار الحساسية‪.‬‬ ‫•‬

‫‪75‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫اﺧﺘﺒﺎرات ﺿﺒﻂ اﻟﺠﻮدة ل ﺟﻬﺎز ال ‪BACTEC‬‬

‫‪Quality Control for BACTEC System‬‬
‫‪ ‬التحكم فى الجودة بالنسبة لصبغ األفالم من األنابيب االيجابية بجهاز الباكتيك ‪-:960‬‬
‫ يجهز معلق من عينات ايجابى ‪ MTB‬تعادل ( ‪ )McFarland 0.5-1‬وتزرع على انابيب ‪ .MGIT‬البد‬ ‫•‬
‫أن يعطى الفيلم منها ايجابى ‪ ve AFB+‬بعد إخراجها من الجهاز‪.‬‬
‫ يجهز معلق من عينات ايجابى ‪ ( E.coli‬أى سلبى ‪ ) MTB‬تعادل ( ‪ )McFarland 0.5-1‬البد أن‬ ‫•‬
‫يعطى الفيلم منها –‪. ve AFB‬‬
‫ لو (‪ MOTT )Rapid Growers‬يعطى فيلم ‪ AFB‬ايجابى خفيف ( الصبغة خفيفة ) ‪.‬‬ ‫•‬
‫‪ ‬التحكم فى الجودة بالنسبة لل ‪-: MGIT medium‬‬
‫ تجهيز عينات ‪ : Q.C‬عينات معروف انها ايجابى المزرعة تجهز المزرعة االيجابى‪.‬‬ ‫•‬
‫ تجهيز معلق المزرعة وعمل ‪ ( S.C‬يظهر بعد ‪ 15-10‬يوم ) ‪.‬‬ ‫•‬
‫ يسحب من ال‪ Colony‬ويضاف على ‪ 4ml‬من ‪ 7H9 broth‬معقم والخرز الزجاجى عددها ( ‪)8-6‬‬ ‫•‬
‫وقطرها (‪.)mm2-1‬‬
‫ ‪ Vortex‬لمدة ‪2-1‬ق (‪. (McF>1‬‬ ‫•‬
‫ يترك المعلق ‪20‬ق‪.‬‬ ‫•‬
‫ ينقل الراشح بالماصة ألنبوبة أخرى ذات غطاء محكم ومعقمة (‪. (T2‬‬ ‫•‬

‫‪2015‬‬ ‫‪76‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ يترك هذا الراشح ليترسب ‪15‬ق‪.‬‬ ‫•‬

‫ ينقل الراشح ألنبوبة أخرى ‪. T3‬‬ ‫•‬
‫ يضبط على ‪ McF 0.5‬ويعتبر هذا ‪ QC suspension‬ويمكن تجميد هذا المعلق بعد تقسيمه كميات صغيرة‬ ‫•‬
‫( كل كمية = ‪ 2-1‬مل ) فى زجاجات عند ‪°70-‬م‪ .‬يمكن اس � � � ��تخدام المعلق المجمد فى حدود مدة اقصاها‬
‫‪ 6‬شهور‪ .‬عند الحل اليستخدم المعلق مرة أخرى‪.‬‬
‫‪ ‬يجب تحليل النتائج كل ‪ 6‬شهور على األكثر وحصر اآلتى ‪:‬‬
‫ فيلم (‪ ، )+‬مزرعة (‪. )+‬‬ ‫•‬
‫ فيلم (‪ ، )-‬مزرعة (‪. )+‬‬ ‫•‬
‫ فيلم (‪ ، )+‬مزرعة (‪. )-‬‬ ‫•‬
‫ فيلم (‪ ، )-‬مزرعة (‪. )-‬‬ ‫•‬
‫ ‪Avg.Time-to-detection +ve control‬‬ ‫•‬
‫ التلوث ‪Avg.Time-to-detection‬‬ ‫•‬
‫‪ ‬ضبط الجودة بالنسبة للتسجيل‪-:‬‬
‫ يسجل ‪ .Lot.no‬بالنسبة لل‪:‬‬ ‫•‬
‫‪ -‬أنابيب ال‪. PANTA – Growth Supplement -OADC – MGIT‬‬
‫ يسجل تاريخ زرع و إدخال كل تشغيلة‪.‬‬ ‫•‬
‫ يسجل إسم القائم بالعمل‪.‬‬ ‫•‬
‫ يسجل تاريخ االيجابية لكل عينة‪.‬‬ ‫•‬
‫ يسجل نتيجة األفالم من أنابيب ال‪ MGIT‬االيجابى‪.‬‬ ‫•‬
‫ تقارن نتائج ال‪ MGIT‬بالنتائج على ال‪. LJ‬‬ ‫•‬
‫ يجب إجراء اختبارات الجودة على جميع المواد المستخدمة فى العمل مثل ‪ NaOH-NALC‬و ‪Phosphate‬‬ ‫•‬
‫‪ buffer‬وعلى الخطوات المتبعة‪ .‬تتابع تواريخ انتهاء الصالحية باستمرار لكل مادة على حدة‪.‬‬
‫ يجب عمل ‪ negative control‬و‪ Positive‬مع كل مجموعة عينات (أى مع كل تشغيلة)‪.‬‬ ‫•‬
‫‪1. Negative control:‬‬
‫ يضاف ‪ 5ml‬من ‪ Phosphate buffer‬على أنبوبة ‪. MGIT‬‬ ‫•‬
‫ تدخل الجهاز مع كل تشغيلة‪ .‬يجب أن تق أر (سلبى) عند ‪ 42‬يوم‪.‬‬ ‫•‬
‫‪2. Positive control:‬‬
‫ يضاف ‪ 5ml‬من معلق ( ‪ MTB ( MF=0.5‬مخفف ‪. 1:500‬‬ ‫•‬
‫ تدخل الجهاز مع كل تشغيلة‪ .‬يجب أن تق أر (ايجابى) فى وقت محدد‬ ‫•‬
‫(‪ )specified time-to-detection‬يحدد بعد تكرار عمل ‪ +ve control‬مع عدة تش���غيالت‪ .‬عند القراءة‬

‫‪77‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫يجب التأكد من عدم وجود تلوث بعمل فيلم لل‪. AFB‬‬

‫التحكم فى الجودة بالنسبة للحساسية الدرنية علي جهاز ‪BACTEC‬‬
‫ يجب عمل اختبار التحكم فى الجودة عند تحضير كل ستوك من المضادات الحيوية‬ ‫•‬
‫ ( ‪ ) PANTA-OADC-Growth supplement-SIRE supplement-MGIT‬او عند شراء مستلزمات‬ ‫•‬
‫جهاز الباكتك‬
‫ تس � � � ��تخدم ‪ MTB H37Rv‬كس � � � ��اللة أصلية وتزرع على ال‪ . MGIT‬يجب أن تعطى نتيجة حساس � � � ��ة مع كل‬ ‫•‬
‫المضادات الحيوية‪ .‬قبل زرع الساللة على ال‪ MGIT‬تزرع على ‪ L.J‬ثم تؤخذ عندما يمر على ايجابيتها مدة‬
‫التزيد عن ‪ 14‬يوم‪.‬‬
‫ يمكن حفظ الساللة على ماء ولبن فى ‪°70-‬م فى أنابيب صغيرة لمدة ‪ 6‬شهور‪.‬‬ ‫•‬
‫صيانة جهاز ال ‪:Bactec 960‬‬
‫‪  ‬الصيانة اليومية‪-:‬‬
‫اختبار آلة الطباعة والورق بالطريقة المكتوبة فى الدليل‪.‬‬ ‫‪.1‬‬
‫اختبار حركة األدراج واإلضاءة الكاشفة (الخارجية والداخلية)‪.‬‬ ‫‪.2‬‬
‫اختبار الترمومترات الموجودة باألدراج‪ .‬يجب إعادة العمود المتقطع الملون الى السائل الموجود‬ ‫‪.3‬‬
‫بالترمومتر الى طبيعته المتصلة‪.‬‬
‫إختبار ح اررة الجهاز من مفتاح قراءة الح اررة ومقارنتها بقراءة الترمومتر‪.‬‬ ‫‪.4‬‬
‫‪ ‬الصيانة الدورية ‪-:‬‬
‫تنظيف المرشحات شهريا‪ ،‬أو أسبوعبا إذا كان الجو متربا حتى ال يؤثر التراب على درجة الح اررة بالجهاز‪.‬‬ ‫‪.1‬‬
‫تغيير األنابيب (‪ )Calibration tubes‬الكاشفة الموجودة على جهة الشمال من كل درج قبل موعد‬ ‫‪.2‬‬
‫انتهاء الصالحية‪.‬‬
‫تنظيف الماسح الضوئى (‪ )Barcode Scanner Window‬الذى توقف عن العمل بسبب االتساخ ‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫‪ ‬معالجة حالة الطوارىء ‪-:‬‬
‫إذا سكبت أنبوبة ‪ MGIT‬مزروعة بداخل الجهاز‪ ،‬يوقف الجهاز فو ار وتبلغ الشركة حتى يأتى المسئول‬ ‫‪.1‬‬
‫ويقوم بأعمال التطهير الالزمة‪.‬‬
‫إذا سكبت كمية صغيرة من أنبوبة ال ‪ MGIT‬على حافة الدرج‪ ،‬يمكن تطهيرها بقطع شاش مبللة‬ ‫‪.2‬‬
‫بمطهر ضد الميكوبكتريا‪.‬‬
‫عند تنظيف وتطهير األدراج‪ ،‬يجب إيقاف الجهاز تماما حتى التزيد نسبة الرذاذ الملوث المنبعث من‬ ‫‪.3‬‬
‫السائل المسكوب‪.‬‬
‫يجب ان يكون هناك نظام صيانة دورية من قبل الشركة (اربع مرات سنويا علي االقل حتي يتم‬ ‫‪.4‬‬
‫المحافظة علي كفاءة الجهاز)‪.‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪78‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﺟﻬﺎز اﻟﺠﻴﻦ اﻛﺴﺒﺮت‬

‫)‪(GeneXpert Machine‬‬

‫تحضير العينات ‪:‬‬

‫يتم جمع عينات البصاق( التقل عن ‪ 1‬مللي) في عبوات بالستيك شفافة ذات غطاء محكم‪.‬‬ ‫‪.1‬‬
‫يتم حفظ العينات في الثالجة اذا لم يتم وضعها بالجهاز مدة ال تزيد عن ‪ 48‬ساعة‪.‬‬ ‫‪.2‬‬
‫نقل العينات من معمل الي اخر يكون في ثالجة حفظ صغيرة وفي خالل مدة ال تزيد عن ‪ 48‬ساعة ايضا‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫تنقل عينة البصاق الي انبوبة فالكون ( اقل كمية ‪ 1‬مللي والتزيد عن ‪ 4‬مللي)‪.‬‬ ‫‪.4‬‬
‫يضاف علي العينة ضعف المقدار من محلول (‪ )SR‬بمعدل ‪.1 ---2‬‬ ‫‪.5‬‬
‫تقفل االنبوبة جيدا وترج بشدة لمدة من ‪ 20- 10‬مرة‪.‬‬ ‫‪.6‬‬
‫تترك في درجة ح اررة الغرفة مدة ال تقل عن ‪ 10‬دقائق وال تزيد عن ساعتين‪.‬‬ ‫‪.7‬‬
‫بعد ‪ 10‬دقائق ترج مرة ثانية من ‪ 20- 10‬مرة بشدة ثم تترك لمدة ‪ 5‬دقائق في درجة ح اررة الغرفة‪.‬‬ ‫‪.8‬‬
‫ال بد من التأكد ان العينة اصبحت سائلة واال تترك من ‪ 10-5‬دقائق اخري‪.‬‬ ‫‪.9‬‬
‫يتم ترقيم العينات بماركر علي جانب ‪. cartridge‬‬ ‫‪.10‬‬
‫يتم سحب ‪ 2‬مللي (علي االقل) من العينة (اليجب سحب اي فقاقيع او مواد صلبة ان وجدت) بواسطة‬ ‫‪.11‬‬
‫باستير معقم من انبوبة الفالكون‪.‬‬
‫ثم نضعها في ال ‪ cartridge‬وتقفل جيدا ‪.‬‬ ‫‪.12‬‬

‫ملحوظة‪:‬‬
‫من الممكن استعمال الراسب المجهز من عينات البصاق بواسطة‬
‫‪NALC – NoOH – citrate solution‬‬
‫كالتالي‪:‬‬
‫‪ -‬يؤخذ ½ مللي من الراسب في انبوبة فالكون‪.‬‬
‫‪ -‬يضاف له واحد ونصف مللي من محلول (‪.)SR‬‬
‫‪ -‬يتبع نفس الخطوات السابقة من رقم ‬
‫ من الممكن ادخال الجهاز عينات من خارج الرئة بعد تجهيزها بواسطة‬ ‫•‬
‫‪NALC – NoOH – Citrate solution‬‬
‫ثم معاملتها كالسابق‬

‫‪79‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫طريقة تشغيل الجهاز‪:‬‬

‫يفتح الجهاز بالترتيب كالتالي‪:‬‬

‫‪ -‬يفتح ال ‪ UPS‬اوال بالضغط علي الزرار االيمن لمده ‪ 2‬ثانيه‪.‬‬

‫‪ -‬يفتح الجهاز من المفتاح الخلفي‪.‬‬
‫‪ -‬يفتح الالب توب الخاص بالجهاز‪.‬‬
‫طريقة إدخال العينة‪:‬‬
‫ نضغط علي كلمة ‪ Create Test‬علي شاشة الالب توب (في االعلي اقصي اليسار) سيظهر علي الشاشة‬ ‫•‬
‫جملة ‪Scan the Cartridge barcode‬‬
‫ نقوم بتعريف الجهاز للعينة بواسطة ال ‪Scaner‬‬ ‫•‬
‫ بعد تعريف العينة يظهر علي الشاشة مربع فارغ إلدخال اسم المريض ورقم العينة‬ ‫•‬
‫ يتم الضغط علي كلمة ‪ Start Test‬الذي يوجداسفل الشاشة‬ ‫•‬
‫ يتم تحديد المكان المخصص إلدخال العينة بواسطة لمبة تضاء فنضع العينة ويقفل عليها‬ ‫•‬
‫ بعد انتهاء المدة المحددة لكل اختبار ( ساعة وخمسون دقيقة) تظهلر النتيجة علي ‪View Result Screen‬‬ ‫•‬
‫‪Sample Report As PDF‬‬ ‫ ‪ -‬نطبع النتيجة بواسطة‬ ‫•‬

‫قراءة النتائج ‪:‬‬

‫ تظهر النتائج كاالتي‪:‬‬ ‫•‬

‫‪MTB detected‬‬ ‫‪- or MTB Not Detected‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪80‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫‪Rif Resistance detected - or Rif Resistance Not Detected‬‬

‫ اذا ظهرت علي الشاشة احدي النتائج التالية‪:‬‬ ‫•‬
‫‪_ Invalid‬‬

‫السبب ‪ :‬وجود مواد صلبة مثل االكل أو عينة لزجة متكتلة لم تذوب‬
‫الحل‪ :‬يعاد االختبار بعينة جديدة للمريض‬

‫‪_ No Result‬‬
‫االسباب ‪ - :‬انقطاع مفاجئ للتيار‬
‫‪ -‬تم فتح الجهاز اثناء التشغيل‬
‫‪ -‬تم ايقاف االختبار اثناء التشغيل‬
‫الحل‪ :‬اعادة االختبار بعينة جديدة للمريض‬

‫‪- Errors : No 5007‬‬

‫االسباب‬

‫عينة شديدة اللزوجة‬ ‫‪-‬‬

‫عينة غير كافية‬ ‫‪-‬‬
‫وجود فقاعات هواء أثناء سحب العينة‬ ‫‪-‬‬
‫الحل ‪ :‬اعادة االختبار بعينة جديدة‬
‫‪- Error No 2008‬‬
‫السبب‪ :‬العينة شديدة اللزوجة‬
‫الحل ‪ :‬اعادة االختبار بعينة اخري‬
‫‪- Error No 2127‬‬
‫السبب ‪ :‬تقطع في التيار الكهربائي‬
‫‪UPS‬‬ ‫الحل ‪ :‬تركيب‬
‫‪- Error No 5011‬‬
‫السبب ‪ - :‬لم يتم قفل العبوة جيدا‬
‫الحل ‪ :‬يعاد االختبار بعينة جديدة‬

‫‪81‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫‪2015‬‬ ‫‪82‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﻛﻴﻔﻴﺔ ﺣﺴﺎب وﻃﻠﺐ اﻟﻜﻴﻤﺎوﻳﺎت اﻟﻼزﻣﺔ ﻟﻌﻤﻞ ﺻﺒﻐﺔ ﻟﻌﺪد أﻟﻒ ﺷﺮﻳﺤﺔ‬

‫ملحوظة‬ ‫عدد المرضى‬ ‫الوحدة‬ ‫الكمية‬ ‫بند‬

‫المطلوبة أللف‬
‫شريحة‬
‫عبوة ‪25‬جم‬ ‫‪ 4‬زجاجات‬ ‫فوكسين قاعدى‬
‫عبوة ‪25‬جم‬ ‫‪ 1‬زجاجة‬ ‫مثيلين أزرق‬
‫تحسب الكميات حسب‬
‫عبوة ‪ 5,0‬جم‬ ‫‪ 500‬جم‬ ‫بللورات فينول‬
‫عدد المرضى المترددين‬
‫على المعمل إعتمادا” على‬ ‫كل ألف شريحة‬ ‫عبوة ‪ 5,2‬لتر‬ ‫‪ 1‬لتر‬ ‫كحول اثيلى ‪%95‬‬
‫اإلحصائية النصف سنوية‬ ‫تقريبا” ‪300‬‬ ‫عبوة ‪ 5,2‬لتر‬ ‫‪ 4‬زجاجات‬ ‫كحول مثيلى ‪%97‬‬
‫علما” بأن كل مريض‬ ‫مريض‬
‫حمض هيدروكلوريك‬
‫يحتاج إلى عمل ‪ 3‬شرائح‬
‫‪ 1‬لتر‬ ‫زجاجة ‪ 1‬لتر‬ ‫مركز ‪ %37‬مدخن‬
‫زجاجة ‪ 100‬مل‬ ‫‪ 100‬مل‬ ‫زيت سيدر‬
‫علبة ‪ 50‬شريحة‬ ‫‪ 20‬علبة‬ ‫شرائح‬
‫‪ 1000‬عبوة‬ ‫عبوات بصاق‬

‫‪83‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫‪Ministry of Health‬‬ ‫و ازرة الصحة والسكان‬

‫‪Central Health Laboratonica‬‬ ‫اإلدارة المركزية للمعامل‬
‫‪TB Department‬‬ ‫قسم الدرن‬

‫المرور على مستوصفات الصدر ( أول زيارة )‬

‫‪:‬‬ ‫المحافظة‬

‫رقم التليفون ‪:‬‬

‫اسم المركز أو المستوصف أو المستشفى ‪:‬‬

‫تاريخ المرور‪:‬‬

‫القائم بالمرور ‪:‬‬

‫| العاملون بالمعمل‬
‫االسم‬ ‫مدير المعمل ‪:‬‬

‫التخصص‬

‫عدد األطباء ‪:‬‬

‫مكان وتاريخ التدريب‬ ‫غير مدرب‬ ‫مدرب‬ ‫التخصص‬ ‫األسماء ‪:‬‬

‫عدد فني المعمل ‪:‬‬

‫مكان وتاريخ التدريب‬ ‫غير مدرب‬ ‫مدرب‬ ‫االسماء ‪:‬‬

‫العمال ‪:‬‬

‫عدد العمال ‪:‬‬

‫عبء العمل ‪:‬‬

‫عدد المسحات لكل فني في المعمل ‪:‬‬

‫|| وصف المعمل‬

‫عدد الحجرات ‪:‬‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫اضاءة جيدة ‪:‬‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫تهوية جيدة ‪:‬‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫تهوية جيدة ‪:‬‬

‫جودة البنشات ‪:‬‬

‫األرضيات والحوائط ‪:‬‬

‫مالحظات ‪:‬‬

‫||| االعمال التي يقوم بها المعمل ‪:‬‬

‫الفحص المباشر ‪:‬‬

‫الفحوص اآلخري ‪:‬‬

‫‪ I V‬االجهزة واألدوات ‪:‬‬

‫الكفاءة‬ ‫العدد‬ ‫الميكروسكوب ‪:‬‬

‫الكفاءة‬ ‫العدد‬ ‫الثالجات ‪:‬‬

‫الكفاءة‬ ‫العدد‬ ‫جهاز تقطير المياة ‪:‬‬

‫الكفاءة‬ ‫العدد‬ ‫الميزان الكهربي ‪:‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪84‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫المنبه ‪:‬‬

‫عروات الزرع ‪:‬‬

‫عيدان خشبية ‪:‬‬

‫النوع ‪:‬‬ ‫العدد ‪:‬‬ ‫مصدر لهب ‪:‬‬

‫شرائح زجاجية ‪:‬‬

‫قلم ماسي ‪:‬‬

‫االوراق الخاصة بتنظيف العدسات ‪:‬‬

‫عبوات جمع البصاق ‪:‬‬

‫علب حفظ الشرائح ‪:‬‬

‫الزجاجيات ‪:‬‬

‫ورق ترشيح ‪:‬‬

‫لمبة تعقيم باألشعة فوق البنفسجية ‪:‬‬

‫‪ V‬المحليل الخاصة بالصبغ ‪:‬‬

‫كوسين قاعدي ‪:‬‬

‫كحول اثيلي ‪:‬‬

‫كحول مثيلي ‪:‬‬

‫بللورات الفيتول ‪:‬‬

‫حمض الهيدروكلوريك المدخن ( ‪: ) % 37‬‬

‫مثيلين أزرق ‪:‬‬

‫زيت سيدر للعدسات ‪:‬‬

‫‪85‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫خزين للمحاليل للربع سنة ‪:‬‬

‫‪ VI‬اجراءات السالمة ‪:‬‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫مطهرات ‪:‬‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫( فينول ‪: ) % 5‬‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫صابون ‪:‬‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫بالطي المعمل ‪:‬‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫االقنعة والقفازات ‪:‬‬

‫طريقة التخلص من العينات بعد االنتهاء من فحصها ‪:‬‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫اضافة مطهر لعبنات البصاق ‪:‬‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫جمع المواد الملوثة في اكياس المواد الخطرة ‪:‬‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫نقل مخلفات العمل للمحرقة ‪:‬‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫عمل المسحات في وجود نافذة مفتوحة ‪:‬‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫اختيار اتجاه الهواء اثناء عمل المسحات ‪:‬‬

‫مالحظات‬

‫‪ VII‬خطوات الفحص الميكروسكوبي ‪:‬‬

‫‪ -1‬جمع العينات ‪:‬‬

‫* ما هي التعليمات التي تعطي للمريض للحصول علي عينة بصاق وليس لعاب ؟‬

‫‪2015‬‬ ‫‪86‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫* هل يتم مالحظة جودة العينة ؟‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫* هل يتم فحص العينات بعد جمعها في اقل من يومين ؟‬

‫‪-‬‬

‫* هل يتم التفرقة بين عينة البصاق وعينة اللعاب اثناء الفحص ؟‬

‫‪-‬‬
‫اكثر من ‪ = 1/10‬بصاق‬ ‫عدد الكرات البيضاء‬

‫اكثر من ‪ = 1/10‬لعاب‬ ‫عدد الخاليا البشرية‬

‫* اذا كانت العينة لعاب ‪ ،‬هل تم تشجيع المريض العطاء عينة بصاق ؟‬

‫‪-‬‬

‫* هل يتم تسجيل ان العينة لعاب ؟‬

‫‪-‬‬

‫* النسبة المئوية لعينات اللعاب في الحاالت المشتبة فيها بالدرن ؟‬

‫‪-‬‬

‫* مالحظة عدد العينات التي يتم جمعها من كل مشتبه تبعا لسياسة البرنامج القومي لمكافحة الدرن ؟‬

‫ال‬ ‫نعم‬

‫* اذا كانت االجابة ( بال ) ‪ :‬اذكر السبب‬

‫‪-‬‬

‫‪87‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫* مالحظة عدد العينات التي تم جمعها من المرضى اثناء متابعة العالج تبعا لسياسة البرنامج القومي لمكافحة الدرن ؟‬

‫ال‬ ‫نعم‬

‫* الطريقة السليمة ‪ /‬الترقيم عبوات البصاق السليمة ( على الغطاء وعلى جانب العبوة ) ؟‬

‫‪-‬‬

‫* الطريقة السليمة لترقيم الشرائح ( الرقم المعملى وبواسطة القلم الماسي او القلم الرصاصي )‬

‫ال‬ ‫نعم‬

‫‪ -2‬عمل المسحات‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫متجانسة‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫المقاس ‪ 2X1‬سم‬

‫‪ -3‬خطوات الصبغة‬

‫* هل يتم ترشيح صبغة الفوكسبن القاعدي والمثيلين االزرق قبل االستخدام ؟‬

‫ال‬ ‫نعم‬

‫* هل يتم تجفيف المسحات في الهواء قبل التثبيت ؟‬

‫ال‬ ‫نعم‬

‫دقيقة‬ ‫* مدة وضع المثيلين االزرق علي الشريحة ‪:‬‬

‫دقيقة‬ ‫* مدة وضع الكاربون فوكسين علي الشريحة ‪:‬‬

‫* طريقة ازالة اللون ‪ :‬حمض الهيدروكلوريك ‪ % 37‬او حمض الكبريتيك المركز ‪ % 25‬؟‬

‫‪-‬‬
‫* كم عدد الحلول التي يتم فحصها لكل شريحة ؟‬

‫ب) في حالة السلبية ‪:‬‬ ‫أ) في حالة االيجابية ‪:‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪88‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫* هل يتم تنظيف العدسة الزيتية بعد فحص كل شريحة ايجابية بورق تنظيف العدسات ؟‬

‫ال‬ ‫نعم‬

‫‪ VIII‬ضبط الجودة‬

‫‪ -1‬ضبط الجودة الداخلي ‪:‬‬

‫* هل يتم استعمال شرائح ايجابية وسلبية ككنترول لضبط جودة محاليل الصبغة ؟‬

‫ال‬ ‫نعم‬

‫* هل يوجد عدد كافي من مخزون المسحات االيجابية والسلبية ؟‬

‫‪-‬‬

‫* هل يوجد الدليل الفني ‪ /‬المعملي بالمعمل ؟‬

‫‪-‬‬

‫‪ -2‬ضبط لبجودة الخارجي ‪:‬‬

‫* هل يتم حفظ جميع الشرائح ؟‬

‫‪-‬‬

‫*هل يتم تنظيف جميع الشرائح قبل حفظها ؟‬

‫‪-‬‬

‫* هل يتم ترتيب الشرائح بنفس ترتيب سجل المعمل ؟‬

‫‪-‬‬

‫* هل يوجد تقارير التغذية الرجعية لعادة فحص الشرائح محفوظة بالمعمل ؟‬

‫اعـ ـ ــادةفحـ ـ ــصال ارئـ ـ ــحاثنـ ـ ــاءالمـ ـ ــرور‬

‫بصاق او لعاب‬ ‫صبغة الخلية‬ ‫صبغة المسحات الدرنية‬ ‫نتيجة الفني‬ ‫اسم الشريحة‬

‫الشرائح االيجابية‬

‫الشرائح السلبية‬

‫تحديد ايجاب النتائج الكاذب‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪ XI‬التســــــجيل والتقارير المعملية‬

‫‪ -1‬سجل المعمل‬

‫غير كامل‬ ‫كامل‬ ‫التسجيل حتى يوم المرور ‪:‬‬

‫غير كامل‬ ‫كامل‬ ‫التسجيل حتى يوم المرور ‪:‬‬

‫‪1‬‬ ‫‪2‬‬ ‫‪3‬‬ ‫التسجيل حتى يوم المرور ‪:‬‬

‫‪89‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫* هل يكتب النتائج اليجابية بالقلم االحمر ؟‬

‫‪-‬‬

‫*هل يكتب درجة االيجابية ؟‬

‫‪-‬‬

‫‪ -2‬التقارير ‪:‬‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫* هل يوجد طلب للفحص واخر للنتيجة ‪:‬‬

‫‪ -3‬االحصائيات‬

‫شهرية ‪:‬‬

‫ربع سنوية ‪:‬‬

‫نصف سنوية ‪:‬‬

‫سنوية ‪:‬‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫* هل يوجد سجل اشتباه ؟‬

‫ال‬ ‫نعم‬ ‫* هل يتم مقارنة سجل االشتباه مع سجل المعمل ؟‬

‫السلبية‬ ‫االيجابية‬ ‫نوع الفحص المطلوب‬

‫‪3‬‬ ‫‪2‬‬ ‫‪1‬‬ ‫‪3‬‬ ‫‪2‬‬ ‫‪1‬‬

‫تشخيصي‬

‫متابعة عالج‬

‫فحص مخالط‬

‫المجموع‬

‫‪ X‬المشاكل‬

‫مشاكل فنية‬

‫‪-‬‬

‫مشاكل ادارية‬

‫‪-‬‬

‫‪ XI‬التوصيات‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪-‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪90‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

Annex )4(
Smear Results Sheet for Blinded Rechecking
Microscopy Centre : ____________________ District : _________________________

Name of TU ____________ Month/Year : _____________

SI. No. Lab No. Result of LT of DMC, including grade for posisive
smears
1.
2.
3.
§
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.

Name of Lab. Techician: ____________

Signature: _____________________ Date ____________

EQA Annex )5( ANNEXURE C

Blinded Recheaching & Panel Testing
EQA of Suptum Microscopy

Worksheet: Blinded Recheaching of DMC Slides

Microscopy Centre Code :_____________________________ TU ________

District: _____________________ Month and Year: _______________

Tick appropraite Column or writte letter as indicated below table

SI. No. Slide AFB result / Specimen Staining Size Thickness Evenness
No. Grade by Quality

STLS MC Umpire >10 <10 Good Poor Good Poor Good Poor Good Poor
WBC/ WBC/
field field )U/O( )B/S( )K/N(

1 2 3 4 5 6

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

Total

1: MC result to be entered under supervision only after from completed by STLS

2: tick appropriate column
3: Tick if good; write ‘U’ if under-decolourized. ‘O’ if over-decolourized
4: Tick if good; write ‘B’ if too big. ‘S’ if too smal
5: Tick if good; write ‘K’ if too thick. ‘N’ if too thin
6: Tick appropriate column

Overall remarks:
Specimen quality: Needs improvement Yes No
Smear ize: Needs improvement Yes No
Smear thickness: Needs improvement Yes No
Smear evenness: Needs improvement Yes No
Staining: Needs improvement Yes No

Remarks:

Date of examination: ____________________ Signature of first controller: ___________________________

91 2015
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﻧﻤﻮذج ﻃﻠﺐ ﻓﺤﺺ ﺑﺼﺎق‬

‫الجنس‪ :‬ذكر ( ) أنثى( ) السن ‪.... :‬‬ ‫اسم المريض ‪.......... ....................‬‬
‫العنوان(بالتفصيل)‪............................................................. ................... :‬‬
‫للمريض الجديد ‪............................................................. ...................‬‬
‫الغرض من الفحص‪:‬‬
‫‪ -1‬مريض جديد ‪) ( :‬‬
‫‪-2‬مريض متردد‪) ( :‬‬
‫تاريخ فحص أخر بصاق‪........ ..........:‬‬ ‫‪......... .............:‬‬ ‫رقم سجل الدرن‬
‫‪........... .......... ......... ......... ....:‬‬ ‫النتيجة‬
‫‪ -3‬شهادة صحية‬
‫تاريخ العينة ‪..................... .................... :‬‬

‫اسم الطبيب‪:‬‬
‫التوقيع‪:‬‬

‫نتيجة الفحص‬

‫مسلسل المعمل‪:‬‬

‫النتيجة يكتب‬
‫توصيف إيجابية البصاق×‬ ‫رقم العينة‬ ‫التاريخ‬
‫(سلبي أو إيجابي)‬

‫تكتب النتائج بهذه الشفرة (‪ )9-1‬أو (‪ )+‬أو(‪ )++‬أو(‪)+++‬‬

‫التاريخ‪:‬‬

‫اسم القائم بالفحص‪:‬‬

‫التوقيع‪:‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪92‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﺑﺤﺚ ﻣﻘﺎوﻣﺔ ﻣﻴﻜﺮوب اﻟﺪرن ﻟ½دوﻳﺔ اﻟﻨﻮﻋﻴﺔ ﻃﻠﺐ ﻓﺤﺺ ﻣﺰرﻋﺔ درﻧﻴﺔ‬
‫من المعمل الطرفى إلى المعمل الوسيط‬

‫اسم المركز ‪:‬‬

‫كود المريض ‪:‬‬ ‫اسم المريض ‪:‬‬
‫‪:‬‬ ‫النوع‬ ‫‪:‬‬ ‫السن‬
‫نتيجة فحص البصاق بالمعمل الطرفى ‪:‬‬

‫نتيجة العينة الثانية‬ ‫نتيجة العينة األولى‬

‫التوقيع ‪:‬‬ ‫فنى المعمل االسم ‪:‬‬

‫التوقيع ‪:‬‬ ‫مدبر الوحدة (االسم) ‪:‬‬

‫نتيجة مزرعة البصاق للدرن‬

‫من المعمل الوسيط إلى المعمل الطرفى‬

‫كود المريض ‪:‬‬ ‫اسم المريض ‪:‬‬

‫‪:‬‬ ‫النوع‬ ‫‪:‬‬ ‫السن‬
‫نتيجة فحص البصاق بالمعمل الطرفى ‪:‬‬

‫نتيجة العينة الثانية‬ ‫نتيجة العينة األولى‬

‫نتيجة المزرعة ‪:‬‬

‫سلبى‬ ‫إيجابى‬

‫مسئول المعمل الوسيط‬

‫‪/‬‬ ‫‪/‬‬ ‫التاريخ ‪:‬‬ ‫التوقيع ‪:‬‬ ‫االسم ‪:‬‬

‫‪93‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﺑﺤﺚ ﻣﻘﺎوﻣﺔ ﻣﻴﻜﺮوب اﻟﺪرن ﻟ½دوﻳﺔ اﻟﻨﻮﻋﻴﺔ ﻃﻠﺐ ﻓﺤﺺ ﺣﺴﺎﺳﻴﺔ‬

‫من المعمل الوسيط إلى المعمل المركزى‬

‫اسم المحافظة ‪:‬‬

‫كود المريض ‪:‬‬ ‫اسم المريض ‪:‬‬
‫‪:‬‬ ‫النوع‬ ‫‪:‬‬ ‫السن‬

‫مسئول المعمل الوسطى ‪:‬‬

‫‪/‬‬ ‫‪/‬‬ ‫التاريخ ‪:‬‬ ‫التوقيع ‪:‬‬ ‫االسم ‪:‬‬

‫نتيجة فحص حساسية ميكروب الدرن‬

‫( من المعمل المركزى إلى المعمل الوسيط ومنسق الدراسة والمعمل الطرفى )‬

‫اسم المحافظة ‪:‬‬

‫كود المريض ‪:‬‬ ‫اسم المريض ‪:‬‬
‫‪:‬‬ ‫النوع‬ ‫‪:‬‬ ‫السن‬

‫‪Identification test‬‬

‫‪1- Atypical :‬‬

‫‪2- Typical‬‬ ‫‪human‬‬ ‫‪Bovine‬‬ ‫‪Other‬‬

‫نتيجة فحص الحساسية (‪(S/R‬‬

‫‪SM‬‬ ‫‪H‬‬ ‫‪Rif‬‬ ‫‪E‬‬

‫‪Sensitivity‬‬
‫مدير المعمل المركزى للدرن ‪:‬‬
‫‪/‬‬ ‫‪/‬‬ ‫التاريخ ‪:‬‬ ‫التوقيع ‪:‬‬ ‫االسم ‪:‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪94‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫استمارة تقييم الفحص المباشر للبصاق‬

‫استمارة رقم ‪:‬‬

‫اسم المعمل ‪:‬‬ ‫محافظة ‪:‬‬
‫القائم بارسال العينات ‪:‬‬
‫تاريخ الجمع ‪:‬‬
‫اسم الفنى ‪:‬‬

‫مالحظات من المراجع الرئيسي‬ ‫التقييم الفني للنتائج‬

‫مالحظات علي الصبغة‬ ‫مالحظات علي التجهيز‬

‫ضعيف‬ ‫متوسط‬ ‫جيد‬ ‫ضعيف‬ ‫متوسط‬ ‫جيد‬

‫ايجابي كاذب‬ ‫سلبي كاذب‬ ‫عدد الشرائح‬

‫مالحظات‬

‫‪95‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫اﺳﺘﻤﺎره ﺗﻘﻴﻴﻢ ﻓﺤﺺ اﻟﻤﺰارع‬

‫استماره رقم‪:‬‬
‫محافظه‪:‬‬
‫التاريخ‪:‬‬
‫اسم المعمل‪:‬‬

‫النتيجه بواسطه المعامل‬ ‫النتيجه بواسطه المعمل الوسيط‬ ‫رقم العينه‬

‫المركزيه‬

‫مالحظات‪:‬‬
‫‪-1‬‬
‫‪-2‬‬
‫‪-3‬‬

‫‪2015‬‬ ‫‪96‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫ﻣﻌﺎﻧﻰ اﻟﻤﺼﻄﻠﺤﺎت اﻟﻌﻠﻤﻴﺔ‬

‫‪WHO‬‬ ‫منظمة الصحة العالمية‬

‫‪NTP‬‬ ‫البرنامج القومى لمكافحة الدرن‬

‫‪DOTS‬‬ ‫العالج القصير األمد تحت المالحظة‬

‫‪ARI‬‬ ‫الحاالت اإليجابية المتوقعة سنوياً‬

‫‪BCG‬‬ ‫االطعم المضاد لمرض الدرن‬

‫‪Tuberculin‬‬ ‫ااختبار حساسية لميكروب الدرن‬

‫‪BSC‬‬ ‫كابينة الحماية البيولوجية‬

‫‪U.V‬‬ ‫األشعة فوق البنفسجية‬

‫‪Acid fastness‬‬ ‫خاصية صمود ميكروب الدرن إلزالة الصبغة بواسطة‬

‫الحمض‬

‫‪Relative Centrifugal force‬‬ ‫القوة النسبية للطرد المركزى‬

‫‪L.J‬‬ ‫مستنبتات اللوفنشتاين جنس‬

‫‪Swinging angle rotor‬‬ ‫الدوار المتأرجح‬

‫‪Fixed angle rotor‬‬ ‫الدوار الثابت‬

‫‪MGIT Tube‬‬ ‫انبوبة المستنبت السائلة‬

‫‪97‬‬ ‫‪2015‬‬
 ‫دليـــــــل معامـــــــــل الــــــدرن‬

‫اﻟﻤﺮاﺟﻊ اﻟﻌﻠﻤﻴﺔ‬

1- External Quality Assessment for AFB Smear Microscopy, CDC, IUATLD ,

KNCV , RIT , 2002.
2- Laboratory Services in Tuberculosis Control Part II , III Microscopy & Cul
ture, WHO , 1998 .
3- Medical Laboratory Manual for Tropical Countries vol II, Monica Cheeslrough
1985.
4- Procedures for the Isolation & Identification of Mycobacteria Annie L. Vestal
1975.
5- T.B Bacteriology Examination to stop TB, AKIKO FUJIKI, RIT, JIKA, 2001.
6- WHO handbook for guidline development. Geneva: World Health Organiz
tion, 2012
7- CDC. Guidelines for preventing the transmission of Mycobacterium tubercul
sis in healh – care settings, 2005 MMWR 2005 / 54 )RR17(; 1141.
8- BACTEC MGITTM , 960 System User ‘ s manual, 6/2004
9- GeneXpert&Xpert MTB /RIF , Quick start guide ,3/ 2014

2015 98