mi lateiolame(- Ciel) La tincion de Gram Es una de las técnicas mas utilizadas en el laboratorio de microbiologia. Jape 3 \ 1884 5 F ) Técnica desarrollada por S Hans Christian Gram. Es una tinci6on diferencial Permite diferenciar entre bacterias grampositivas y gramnegativas. Ventajas V Es rapido y sencillo. . v Se puede observar coloracién, Importancia forma, tamafio y agrupamiento. = Permite plantear los criterios del Y El preparado puede conservarse. diagnéstico de una bacteria. ——-sorienta para elegir un tratamiento Es una técnica que implica ante una infeccion. el uso de varias sustancias y un procedimiento para Eigetekcun ess llevario a cabo. Tinci6n de Gram Microbiologia Procedimiento Previo a la tincién de Gram CS -_ Proveniente de caldo Proveniente de agar 2 Utiizar una pequefia / © medio liquide fraccion de una colonia GBrnar una pequeria ~ aislada. gota, as Colocar sobre un ~~ portaobjetos la cual 6 Gdlocar sobre un debera tener una gota portaobjetos je agua colocada = Realizar el frotis extendiendo la muestra con movimiento circular hacia afuera, Z Fijacién quimica Posteriormente dejar secar A Con la flama del Utilizando mechero. metanol QFB. Luis Enrique Chacén LépezTincion de Gram Microbiologia Procedimiento Colorante M Agente Colorante primario lordients decolorante secundario é é Cristal Lugo! Alcohol- Safranina violeta acetona (0 fucsina) © 1 minuto © 1 minuto © 18 segundos ©) 1 minuto Lavado para Lavado para Lavado para Lavado para eliminar resto ¢liminar resto eliminar resto eliminar resto de colorante de colorante de decolorante de colorante E& Inetinar, et portaobjetos durante los lavados y al anacir vagy Deja secar y el decolorante i visualizar al microscopic Es importante respetar los tiempos de cada sustancia para que la tin: adecuadamente. nsalga \, 7 7 F ) ~ Microbiologia wy Fundamento = La coloracién de Gram depende enormemente de la composicién quimica y estructural de la pared celular. = Elcomponente mas importante de la pared celular es el peptidogiucano. En bacterias grampositivas = El cristal violeta se afiade primero y posteriormente el lugol Se forma un complejo cristal violeta-lugol. Al ser la capa de peptidoglucano muy gruesa el complejo no puede eliminarse durante el lavado con alcohol-acetona. Visualizéndose estas bacterias de color violeta La capa de peptidoglucano es muy delgada y el agente decolorante afecta la membrana externa El complejo es eliminado durante el lavado con el agente decolorante. Al effiadir el colorante secundario haré que estas & Avreviaturas: se visualicen de color fucsia. ME: Membrana externa PG: Peptidoglucano MC: Membrana citoplasmica Werener neersAlgunos ejemplos Bacterias grampositivas Diplococos Estafilococos Streptococcus pneumoniae Staphylococcus aureus ‘Staphylococcus saprophyticus Estreptococos Streptococcus pyogenes Bacilos enee89000 Streptococcus agalactiae ED iisteria monocytogenes Enterococcus faecalis/faecium Bacillus spp. Bacterias gramnegativas Diplococos Bacilos Neisseria gonorrhoeae Escherichia coli Neisseia meningitidis Klebsiella pneumoniae Moraxella catarrhalis Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter baumannit Fee ; Bacilos curvos Helicobacter pylori Haemophilus influenzae Vibrios Vibrio cholerae ROGHES TO MAD