LABORATOIRE DE PROCEDURE N®8 | 6 pages UAC/EPAC/URMAPha MICROBIOLOGIE ANNEE : 2021 REVISION : 2021- 2024 PROCEDURE D' IDENTIFICATION DES BACTERIES APRES CULTURE But : Déterminer les caractéres culturaux et biochimiques des bactéries aprés culture Responsabilités Rédacteurs : Experts formateurs/Quality Laboratory Testing-Training Project in Benin 2021-2022 Utilisateurs : Biologistes médicaux Superviseurs Matériel ‘Consommables et réactifs de Pétri ensemencées - Ensemenceur - Milieux d'identification Lame + Disques doxydase (galerie de Leminor, Galerie = Tubes stériles = Gants Api 208, réactif durée = Bee bunsen + Masque chirurgical indole, réactif de kovac's...) : Eau physologiqe serie = Eau oxyaénée Equipement Documents -Hotte ou Poste de Sécurité | - Cahier de paillasse Microbiologique (PSM) MODE OPERATOIRE 1- Phase pré-analytique = Porter les gants - Nettoyer le poste de travail = Allumer la hotte ou le bee bunsen = Sortir les boites de snsemencées de 24h portant les colonies a identifier - Sortir les réactifi 2+ Phase analytique - Se décontaminer en réalisant un lavage aseptique des mains 4 eau et au savon (et si possible se frictionner les mains) ; = Mettre un masque chirurgical de protection ~ Porter un gant ; - Observer les milieux déji ensemencer pour voir s'il y a croissance ou non, pour un bouillon onobserve la turbi - Apprécier les caractéres culturaux des bactéries : © La forme des colonies: rondes, irréguli © Liallure du contour: bords lisses régulier ou irrégulier, dentelé, présentant des prolongements (téte de méduse); © Lerelief: colonie bombée, semi-bombée, plate; ‘© Lecentre: surélevé, ereux ; © Lataille des colonies: petites, grosses, moyenne colonies; © Lacouleur de la colonie et opacité: colonie opaque, translucide; ‘© L’aspect: colonie lisse, rugueuse, muqueuse; © L’odeur; © Ouvrir la boite de pétri pour apprécier I'adt apprécié par raclage & l'aide de ensemenceur. - Noter 'appréciation des colonies dans le cahier de paillasse - Faire le Gram controle ~ Procéder 4 la détection des caractéres biochimiques pour l'identification des bactéries 4 partir d’une colonie isolée Cocei A Gram positif (Micrococcaceae/Streptococeaceae) -Réaliser le test a la catalase: Si la catalase est positive, il s’agit de la famille des Micrococcaceae (Staphylococcus, Micrococcus) -Vérifier le type respiratoire de la bactérie : (lecture dans le bouillon de 24h) © S'il est aéroanaérobie facultatif, alors il s’agit des Staphylococcus (S aureus ; S epidermidis ; S saprophyticus ; S cohnit ; § xylosus) © S'ilest agrobie stricte, alors il s’agit des Micrococcus Faire le test de la staphylocoagulase libre : © Sile test est positif, alors il s'agit de Staphylococcus aureus. © Si le test est négatif;; alors il pourrait s’agir de: S aureus ; S epidermidis ; S saprophyticus ; 8 cohnii ou de S xylosus -Paire le test a la DNase © Sile test est positf, alors il ‘agit de Staphylococcus aureus.© Si le test est négatif alors il pourrait Sagir de : S epidermidis ; S saprophyticus ; S cohnii ou de S xylosus = Réaliser l'antibiogramme Si la catalase est négative, il s'agit de la famille des Streptococeaceae -Rechercher le caractére d’hémolyse Si hémolyse béta, faire le test a la bacitracine 0,04UI, le camp test ou le test de I’hydrolyse de 'hyppurate de Sodium : ©. Si la bactérie est sensible a la bacitracine ; alors il s’agit des Streptocoques du groupe A ; si le camp test ou le test de hydrolyse de Phyppurrate est positif, alors il s'agit des Strptocoques du groupe B Si hémolyse alpha, faire le test & Foptochine : (©. Si la bactérie est sensible, alors il s'agit des pneumocoques ; si la bactérie est résistante, alors il s‘agit des autres streptocoques oraux (ensemencer la galerie Api Streptocoque) Si hémolyse gamma ensemencer le milieu BEA ou le milieu Deoccosel : © Si la bactérie se développe sur le milieu, alors il s‘agit des Streptocoques du groupe D ou des Entérocoques Ensemencer le milieu BHS (Bouillon Hyper Salé) © Sila bactérie ne se développe pas dans le milieu, alors il s'agit des Streptocoques D ; © Sila bactérie se développe, alors il s'agit des Entérocoques Cocei Gram Négatif (Neisseriaceae) -Réaliser le test a la catalase : © Sile test est positif, il pourrait s'agir de Neisseria gonorrheae ou de Neisseria meningitidis -Réaliser le test & oxydase © Sile test est positif, il pourrait s'agir de Neisseria meningitidis ou de Neisseria gonorrheae -Vérifier la capacité de la bactérie a fermenter certains sucres : (©. Si la bactérie ne fermente pas le maltose, il s'agit de Neisseria gonorrheae ; © Sila bactérie fermente le maltose, il ‘agit de Neisseria meningitidisBacilles Gram Négatif -Paire le test a la catalase: (© Sile test est positif, alors il pourrait s'agir d’une entérobactérie ; © Sile test est négatif, il pourrait s’agir des non entérobactéries. -Paire le test de oxydase: © Sie test est négatif, il pourrait s’agir des enterobactéries o- Sile test est positif, il pourrait s'agir des non entérobactéries. -Vérifier la capacité de ta bactérie a réduire le nitrate en nitrite: © Sila bactérie réduit le nitrate en nitrite, alors il s'agit d’une entérobactérie © Sie test est positif il pourrait s’agir des non entérobactéries, -Ensemencer la galerie de Leminor ou Ia galerie API 20 E (confére procédure d’ensemencement de la galerie) pour obtenir plus de caractére permettant identification de lespéce -Noter les caractér dans le cahier de paillasse. 3 Phase post-analytique = Ranger le matériel - Décontaminer le poste de travailAnnexe : COCCIGRAM + Catalaser Catalase- I - Staphylocoagulase Bacitracine |{ camp test / libre o,04ut Hydrolyse de Optochine Vhyppurate de =COCCI GRAM- | ~ v N gonorrheae ‘meningitidis: T | Bacilles GRAM ~ | Oxydase + aes, ae Enterobactéries Galerie dlidentificatio References : Rdigé par : Vérifig par = ‘Approuyé par : = Equipe de formation - Dr. LEGBA Boris - Pr. BANKOLE Honoré Date : 11/11/2021 Signature Date : Signature + Dr. DOUGNON Victorien Dr. HAUKKA Kaisa Date Signature