Lezione 19 - MMMolecularMedicine

MOLECULAR MEDICINE
Molecular Therapy
…from bench to bedside
Marialuisa Lavitrano, PhD

Professor of Pathology and Immunology
Head of Molecular Medicine Lab
Department of Surgical Science
marialuisa.lavitrano@unimib.it
University of Milano-Bicocca
MOLECULAR MEDICINE
A multidisciplinary
approach to understand the
functional mechanisms of
cell phisiology and pathology
in different fields
offering a vast potential for
the development of
new therapeutics
MOLECULAR MEDICINE
21st Century Challenge

Eliminating the Suffering and Death
Towards High-Performing Health Systems
The Role of Science and Technology

MOLECULAR MEDICINE
CANCER
MOLECULAR MEDICINE
Burden of Cancer in the World
•  10.1 million new cases of cancer / year

•  6.2 million deaths from cancer / year
•  22.4 million people living with cancer
MOLECULAR MEDICINE
The US Challenge Goal
To eliminate the
suffering and death
due to cancer by 2015
…failed!
MOLECULAR MEDICINE
21st Century Personalized Oncology
MOLECULAR MEDICINE
The Processes Involved in Cancer
•  Proliferation
•  Micro-Invasion
•  Immune Evasion
•  Cell Recruitment
•  Dissemination
•  Targeting
•  Penetration
•  Colonization
•  De-Differentiation

Copyright Dennis Kunkel Microscopy

MOLECULAR MEDICINE
Cancer as a Disease Process Opportunities for Intervention
MOLECULAR MEDICINE
Transformational Technologies
Exponential Expansion of Knowledge
•  Genomics
•  Proteomics
•  Metabolomics
•  Molecular Imaging
•  Nanotechnology
•  Bioinformatics
MOLECULAR MEDICINE
Molecular Diagnosis
Profile of the Patient and the Tumor
MOLECULAR MEDICINE
Molecular Therapeutics
Targeted Intervention
Bcl2
§  traslocato nel linfoma follicolare (cellule B), viene a trovarsi sotto il

controllo del promotore della catena pesante delle Ig ->
overespressione che conferisce resistenza all’apoptosi
§  è un oncogene che promuove la sopravvivenza cellulare invece

che stimolare la proliferazione
Bcl2 come target molecolare
Modulazione dell’espressione di Bcl2 - Genasense
Ø  vari tipi di linfomi e carcinoma mammario

Genasense + farmaco convenzionale -> remissione completa del tumore
•  linfoma, AML
Genasense -> remissione completa (anche su pazienti in stadi avanzati)
§  melanoma
§ Genasense + chemioterapia -> parziale remissione ( î 3x aspettativa di vita)
•  melanoma
Genasense + farmaco convenzionale -> blocco crescita del tumore
LIMITAZIONE: gli AS non superano la barriera ematoencefalica
Inibizione Bcl - 2ABT-737

È una BH3 mimetic small molecule inhibitors - SMI
MOLECULAR MEDICINE
Targeted Intervention
PTEN
Regolazione dell’attività di NFkB
Fosforilazione delle prot IkB chi attiva il complesso IKK?

mediata da IKKs
• IKKα, β: subunità chinasiche
topi KO -> IKKβ: subunità cruciale
IKKα: ruolo accessorio
•  IKKγ (Nemo): subunità regolatoria
Ubiquitinazione
a carico di 2 Lys Nterm
operato da E3 Ub-ligasi
Degradazione
da parte del proteasoma
Traslocazione al nucleo
Legame sui promotori responsivi
cancer
NFkB pathway come target per la terapia molecolare
Antiinfiammatori non steroidei (FANS)

Aspirina e sodio salicilato: sembrano bloccare la pathway per inibizione di IKKβ
Hanno anche azione indipendente su COX2 -|blocco formazione PG
Sulfasalazina: usata soprattutto per artrite reumatoide, colite ulcerosa, morbo di Chron
-| fosforilazione di IkBa
Sulindac: -|attività di IKK e anche azione indipendente su COX2
Agenti immunosoppressivi
Usati per la terapia antirigetto post-trapianto ( -| GVHD)
Ciclosporina A: può agire da inibitore non competitivo dell’attività chimotrypsin-like
del proteasoma 20S -| degradazione di IkBα
Non blocca il proteasoma 26S -> non ha effetto sulla degradazione di p105
FK-506 (tacrolimus): -| traslocazione c-Rel al nucleo
Non ha effetti sull’attivazione di RelB o sull’espressione di p50
Specificità nel blocco dell’espressione di IL2R
Inibitori del proteasoma
MG101, MG115, MG132 -| attività proteasica in maniera più aspecifica e transitoria
Lactacystin: acilazione di un residuo Thr in una subunità chiave del proteasoma
PS-341 (Peptidi dell’acido boronico): i più potenti inibitori finora sintetizzati ->
stanno per entrare in trial clinici come adiuvanti in chemioterapia
Prodotti naturali
Flavonoidi: composti fenolici derivati dalle piante (quercetina, resveratrolo, miricetina)
Attività biologiche riconosciute: soppressione dell’infiammazione
chemoprevenzione del cancro (-> apoptosi)
MOLECULAR MEDICINE
Molecular Imaging
Diagnosis and Monitoring in Real-Time
MOLECULAR MEDICINE
Molecular Therapeutics: TKI
Gleevec and CML, LLA, GIST (block ABL, KIT, PDGFR)
STI571 o imatinib mesilato (Gleevec, Novartis)
•  primo inibitore specifico di tirosino-chinasi approvato per la terapia
•  identificato “per caso” -> screening di inibitori della PKC
•  alta affinità anche per chinasi -> abl (bcr-abl) c-Kit e PDGFR
•  legame all’ATP binding site -> blocco in conformazione inattiva
PDGFR in patologia
• Overespressione in sarcomi dei tessuti molli, gliomi, medulloblastoma e tumori ovarici

•  TMA: >50% tumori solidi di varia natura esprimono PDGFRβ nella porzione stromale
•  omologo dell’oncogene trasformante retrovirale v-sis
(GastroIntestinal Stromal Tumors)
(Chronic MyeloMonocitic Leukemia)

(DermatoFibroSarcoma Protuberans)
Azioni del PDGF
•  A livello cellulare: proliferazione, survival, migrazione

•  Azione autocrina nelle cellule tumorali
•  Azione paracrina verso fibroblasti stromali e cellule perivascolari
•  Contribuisce alla riparazione delle ferite per stimolazione di fibroblasti, cellule
muscolari lisce e diverse cellule infiammatorie
•  Stimolazione dell’angiogenesi
•  Coinvolto nell’aumento della pressione del fluido
interstiziale stromale che a sua volta diminuisce l’uptake di
farmaci da parte del tumore stesso ->
blocco del recettore -> aumento dell’uptake di
farmaci con potenziamento dell’
effetto citotossico
C-Kit
•  Omologo dell’oncogene v-kit, del virus del sarcoma nei felini

•  Recettore per lo Stem Cell Factor (SCF) strutturalmente relato a PDGFR
•  Espresso sulle cellule staminali e nei progenitori ematopoietici, mastociti, melanociti
cellule germinali, nelle cellule pacemaker intestinali
•  Essenziale per il survival (in assenza -> apoptosi) di tali cellule
•  Nel compartimento ematopietico è coinvolto nel mantenimento delle cellule staminali
e nel differenziamento delle linee mieloide e linfoide -> downregolato dopo che i
progenitori sono differenziati nella forma matura
•  I mastociti (solo) mantengono alti livelli di c-Kit per tutta la loro vita ->
critico per tutte le fasi della vita mastocitaria: survival, differenziamento,
chemotassi, attivazione funzionale
c-KIT in patologia
•  mutazioni del tipo “gain-of-function”

•  le mutazioni tendono a raggrupparsi in diversi siti della molecola in differenti
patologie -> il fenotipo patologico è determinato dal domain affetto dalla mutazione
cosiccome dal tipo cellulare in cui la mutazione avviene
•  mutazioni nel domain extracellulare -> malattie mieloproliferative, AML, GIST
•  mutazioni nel domain transmembrana -> AML, mastocitosi sistemica
•  mutazioni nel domain prossimale a quello chinasico (regolazione negativa dell’attività
chinasica) -> GIST e linfomi
•  mutazioni nel domain tirosino-chinasico (attivazione enzimatica costitutiva) ->
mastocitosi sistemica, alcuni particolari tipi di leucemia e linfoma, seminoma
Bcr-Abl
•  prodotto di fusione derivante dalla t(9:22) che origina il cosiddetto cromosoma Ph,
la traslocazione puo’ avvenire in due punti diversi dando origine a due proteine di
fusione a differente peso molecolare e coinvolte nella patogenesi di due tipi di
leucemie -> p210 (presente in oltre il 90% delle leucemie mieloide croniche)
e p185 (presente nel 25-30% delle leucemie linfoblastiche acute adulte e nel 2-10%
delle leucemie linfoblastiche acute infantili
•  c-abl è l’omologo umano di v-abl del virus della leucemia murina di Abelson
•  c-abl codifica per una tirosino-chinasi citoplasmatica che si attiva in seguito a
miristilazione e ancoraggio alla faccia interna della membrana citoplasmatica
•  il prodotto di fusione conferisce alla chinasi attivazione costituiva con conseguente
attivazione costitutiva di una serie di pathways da essa regolate -> azione
antiapoptotica e mitogenica
MOLECULAR MEDICINE
Gleevec and Chronic Myelogenous Leukemia
MOLECULAR MEDICINE
Molecular Imaging
Diagnosis and Monitoring in Real-Time
MOLECULAR MEDICINE
FDG-PET Monitoring
Response to Gleevec in GIST
Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) family
• EGFR recettore tirosino-chinasico (scoperto nel 1981, Cohen)

• omologo umano dell’oncogene virale v-erbB (eritroblastosi aviaria)
• primo link meccanicistico tra controllo della crescita cellulare e tumorigenesi
•  diversi recettori hanno differente affinità per
vari ligandi e le signaling pathways attivate
da differenti componenti sono distinte ->
es: ErbB1/ErbB2 innescano un signaling molto
più robusto dell’omodimero ErbB1;
solo ErbB1 lega PLCγ mentre solo
ErbB3 e 4 attivano la pathway di AKT
• ErbB2: funzionalmente inattivo nel legame
con i ligandi della famiglia
• ErbB3: domain chinasico non funzionale
Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) family
•  ErbB1/EGFR overespresso in vari tumori di origine epiteliale (vescica, mammella, rene,

prostata, polmone, carcinomi della testa e del collo)
•  ErbB2 overespressione nel carcinoma dell’esofago, del pancreas, del colon, del
polmone, della mammella, dell’endometrio e della cervice
•  nel carcinoma della mammella c’è correlazione clinica tra overespressione e malignità
del tumore (semplice overespressione provoca favorisce la crescita tumorale)
•  ErbB3 overespresso nei tumori di stomaco, colon, mammella e prostata
• ErbB4 overespresso nel cancro della mammella e nei tumori ovarici della granulosa
ErbBs come target per la terapia molecolare
Trasuztumab (HERCEPTIN, Genentech)

§ Anticorpo monoclonale diretto contro la porzione extracellulare di ErbB2
§ Approvato per il trattamento dei carcinomi della mammella overesprimenti ErbB2, viene
usato sia solo che in combinazione con chemio classica
§  Innesca una reazione di citotossicità anticorpo-mediata (Fc domain intatto per essere
efficace)
§ ~ 5% delle pazienti ha effetti collaterali a livello cardiaco in quanto ErbB2 è espresso
anche nel cuore
Cetuximab (ERBITUX, ImClone)

§ Anticorpo monoclonale, diretto contro la porzione extracellulare di ErbB1
§ Previene il legame con ligando -> blocco del recettore
§ trattamento dei carcinomi a cellule squamose della testa e del collo, di un tipo di carcinoma
polmonare (NSLCC). Approvato dell’FDA per trattare, in combinazione con un inibitore
della topo I, il carcinoma del colon in fase di metastasi
MOLECULAR MEDICINE
Molecular Imaging
Diagnosis and Monitoring in “Real-Time”
MOLECULAR MEDICINE
Emerging Technology
Nanotechnology
•  Target therapies
•  Image single cells Slide 1
•  Develop biosensors to
monitor therapy within a cell
•  Screen for disease markers
•  Create biomaterials and

engineered tissues
MOLECULAR MEDICINE
Cancer Bioinformatics
MOLECULAR MEDICINE
REALITY FOR TOMORROW
The R7 Paradigm will

revolutionize Health Care
In 2015 we will provide:
•  to the Right patient
•  the Right intervention
•  for the Right reason
•  at the Right location
•  at the Right time
•  with the Right outcome
•  monitored in Real time
ESFRI Biological Bio-Medical Sciences Research Infrastructures
BBMRI
Biobanking
INSTRUCT INFRAFRONTIER EATRIS ECRIN

Bioinformatics
ELIXIR
Target Target Lead

Identification Vallidation Hit Lead Optimization Preclininc Phase I Phase II Phase III
Research Discovery Development
MOLECULAR MEDICINE
RESEARCH ACTIONS
Development Prevention Data- Biological Preclinical
of disease /Treatment mining validation Experimental
model Medicine
Immunological Diseases
Transplantation
…from bench …to bedside
Neurological Disorders
Cardiovascular Diseases
Cancer

MOLECULAR MEDICINE
MEDICINE - BIOTECHNOLOGY
Genomics
B
I
Proteomics
O
Cell biology
I
molecular imaging N
system biology, functional genomic F
O
R
Pre-clinical studies
M
A
T

Novel Therapeutic I
Applications C

S
Links with
Technology platforms European
EC networks

Trained researchers regulations
SME
MOLECULAR MEDICINE
Development of
disease model
Identification Generating Molecular Prevention/
of defective Animal Treatment …from bench to
pathways Therapy of Diseases bedside
Models
Functional Genomics
Comparing animal disease model
versus human disease
Disease Identification Prevention/

Model of defective Treatment of
pathways disease
RNA Proteo- Serum

Characterization of profiling mics Histology markers
Defective Pathway Novel
Therapeutical
approaches
Data-mining
Bioinformatic Database
SW Gene
development development expression
database
Bioinformatics
MOLECULAR MEDICINE
Research
Development Biological Preclinical

of disease Prevention/ Data- validation Experimental
model Treatment mining in vitro Medicine
and in vivo
1 2 3 4 5
integrated activities
6 Coordination activities
Networking
7 RNA profiling
8 Proteomics
9 Database development
Technological
platforms
10 Development of new prevention tools

11 Development of new drugs and therapies
12 Researchers exchange
BBMRI is the pan-European Biobanking and
Biomolecular Resources Research Infrastructure
combines expertise of clinicians, pathologists,
bioinformaticians, and molecular biologists
BBMRI-ERIC Mission
•  t o d e v e l o p p e r s o n a l i s e d
500 quality grade biobanks
medicine and disease 60M samples
prevention for the benefit of 480M citizens
European citizens.
•  To facilitate access and
20 countries
interoperability to quality-
defined human health/disease-
relevant biological resources
including associated data in an
efficient and ethically and
legally compliant manner.
BBMRI Common Services

CS Quality
CS ELSI
CS IT
EATRIS is the pan-European infrastructure for translational medicine.
9 Members
70 academic institution
EATRIS Mission
•  t o t r a n s f o r m l a b o r a t o r y
research outcomes into new
ways to diagnose and treat
patients with the aim of
improving the health of
millions of people worldwide.
•  To s u p p o r t t r a n s l a t i o n a l
research projects (pre-clinical
research – proof of principles;
fase I and II clinical trials
Products: A_IATRIS is the

•  Biomarkers Italian network of
•  Small molecules 16 institutions
•  Imaging and Tracing Product
•  Advanced Therapy Medicinal Products
ECRIN (European Clinical Research Infrastructures
Network) is the pan-European infrastructure dedicated
to the multinational indipendent clinical research
ECRIN Mission
•  to facilitate european clinical
360M citizens
research
7 Members
•  To conduct independent trials, 2 Observers
across all disease and topic
areas to assess preventative,
diagnostic and therapeutic
interventions that might not
otherwise be investigated. ItaCRIN is the
•  to develop innovative health Italian network of
products. 10 clinical trial
•  to Explore new indications for
service providers
authorised health products
Portfolio Ongoing Ended Collaborative
ECRIN trials trials projects
(2016)
21 10 5
ELIXIR: a distributed infrastructure for
Biological data to support research in Life Sciences
ELIXIR Mission
•  to support research in the field
of “life sciences” and their 20 countries
translational activities to
medicine, environment,
biotechnological industries and
ELIXIR-IIB
society
The Italian Node of
•  t o d e f i n e s t a n d a r d s o f
ELIXIR, has been
interoperability and integration
established as a Joint
of resources.
Research Unit
coordinated by CNR.
ELIXIR-IIB includes 17 partners (Universities,

Research Institutions and technological institutes
such as CINECA, GARR and INFN)
EURO-BIOIMAGING is the European Research
Infrastructure for Imaging Technologies in
Biological and Biomedical Sciences
EURO-BIOIMAGING Mission
•  to provide access to a broad
29 geographically distributed Nodes
range of state-of-the-art candidates
technologies in biological and 17 countries
biomedical imaging for life
scientists.
•  to exchange best practice
•  To ensure interoperability of
European and International
imaging infrastructures.
EURO-
BIOIMAGING WGs
•  Advanced light
microscopy
•  Molecular imaging
•  Medical imaging
A coordination effort on mouse disease models to unravel the role of
gene function in human health and disease
INFRAFRONTIER (Archivefrontier and Phenofrontier) - the European Research

Infrastructure for the development, systemic phenotyping, archiving and distribution
of mammalian models - access to sustainable mouse resources
World-wide distribution of EMMA-INFRAFRONTIER users
INFRAFRONTIER consortium members:
q  Mouse Clinics from Europe and Canada

q  EMMA Archiving and Distribution Nodes
q  European Bioinformatics Institute (EMBL-EBI)
23 Research Infrastructures among 15 Countries
The European Mouse Mutant Archive (EMMA) as part of the

INFRAFRONTIER Research Infrastructure is worldwide the
third largest public repository of mutant mouse strains, with more
than 5000 strains available - IMSR (www.findmice.org)
CNR Monterotondo
Instruct is a distributed ESFRI Infrastructure
providing access to forefront technologies,
expertise and training for
Integrated Structural Biology
Instruct Mission Small proteins Large proteins Multi-protein sub-cellular whole cells
and domains and complexes assemblies structure
•  to cover all resolution ranges
using structural technologies
•  to realise the power of using an
integrated approach to achieve
high impact research outcomes
•  to initiate new technologies that X-ray crystallography X-ray microscopy Light/fluorescent
will be the leading edge of an microscopy
NMR mass spectrometry cryo-electron tomography
evolving, globally competitive small angle scattering
single particle cryo-EM
research infrastructure
Computational analysis and modelling
•  Instruct is operational since 2012

•  Instruct is one of the ESFRI Landmark of the 2016 ESFRI Roadmap.
Instruct-ERIC: Instruct successfully passed the first step for ERIC status.
Submission of Instruct-ERIC Step 2 is expected within November 2016
ISBE: Research Infrastructure in Systems Biology
ISBE is a distributed ESFRI Infrastructure
Open Access COSYS platform

ISBE/ SYSBIO Mission
•  to provide open access to
services in systems biology:
Ø  mathematical model of complex
biological functions using the
COSYS web platform;
Ø  metabolomics data acquisition
and analysis, datasets, useful to
build predictive constraint-based
models, and for model
validations.
•  ISBE 23 consortium members

•  SYSBIO associated partner
MIRRI: Microbial Resource Research Infrastructure
MIRRI is a distributed ESFRI Infrastructure
MIRRI Mission
• to provide facilitated access to high
quality microorganisms, their
derivatives, associated data in a
legal compliant way.
• To provide access to state-of-the-
art technologies and innovative
services with the aim to connect
public resource centres with
researchers and policy makers
•  MIRRI 30 public biorepositories and research institutes from 19 European

countries Start the operational phase in 2018
Biobanks
Translational research
Clinical research
Biological information
Systems biology
Marine BRC
Openscreen platforms
Biomedical imaging
Highly pathogenic agents ERINHA
Model mamm. genomes
Structural biology
Biomarcatori theranostici - Chemioresistenza
DIAGNOSI CLASSIFICAZIONE TERAPIA
Biopsia tumorale Analisi molecolare Farmaco intelligente
Nuovi geni coinvolti nella farmaco-resistenza
TARGET IDENTIFICATION
TARGET VALIDATION
in vitro
(phenotype screen)
BIOBANKS in vivo
ex vivo
patient tissue analysis
Teranostic marker
IDENTIFICAZIONE DEI GENI COINVOLTI NELLA FARMACO-RESISTENZA
TRAMITE SCREENING FENOTIPICO CON RNAi LIBRARY
Infezione di 20x106 HCT116p53KO con l'intera libreria o il pool kinasico della libreria di shRNA
Selezione con puromicina à selezionati i soli geni il cui silenziamento è compatibile con la sopravvivenza
200 µM 5FU per 72 hs à cellule morte, flottanti raccolte dalla piastra (~20-30%)
Estrazione del DNA & PCR di frammenti di 643bp contenenti promotore H1 e hairpin region
digestione EcoRI-XhoI e clonaggio in pRS (p Retro Super)
Re-infezione del pool arricchito dei pRS-shRNA in HCT116p53KO à selezione à trattamento con 5FU
cellule morte, flottanti raccolte dalla piastra (~60-70%)
Estrazione del DNA & PCR di frammenti di 643bp contenenti promotore H1 e hairpin region
digestione EcoRI-XhoI e clonaggio in pRS à trasformazione di DH5α transformation à
Sequenziamento dei prodotti di Colony-PCR
RISULTATI DELLO SCREEN
49 GENES IDENTIFIED INVOLVED IN DRUG-RESISTANCE

ê
TARGETS FOR MOLECULAR DIAGNOSIS & DEVELOPMENT OF
NEW INHIBITORS TO BE USED IN THERAPY
ü  12 membrane receptors (6 RTKs, 6 non-RTKs)
ü  7 MAP kinases
ü  16 other kinases (mainly ser/thr kinases)
ü  6 nuclear proteins (mainly transcription factors)
ü  8 other prots (chemokine, ribosomal prot, serine protease, ER prot, etc)
GSK-3
GSK3A
GSK3B
BTK
University of Milano-Bicocca Grassilli et al, Oncogene, in press
TEST DIAGNOSTICO FUNZIONALE
CELLULE DEL TUMORE DEL PAZIENTE
Test su biopsia postchirurgica, caratteristiche:
•  rapido, max 72 ore
•  semplice da eseguire
•  riproducibile in ogni lab da personale tecnico

ospedaliero
•  a costi contenuti
•  estendibile ad eventuali altri tipi di tumore/

trattamento farmacologico
TEST DIAGNOSTICO
CA Colon
OD NT – OD trattamento
Distribuzione dei valori ottenuti come differenza tra la media del triplicato dei campioni non trattati con farmaco e
la media del triplicato dei campioni trattati nei 135 campioni di ca colon.
A sinistra i delta dei campioni risultati resistenti con il test t di Student, a destra i delta dei campioni risultati
sensibili con lo stesso test.
CA OVAIO
RES Student’s t test
SENS Student’s t test
DIFFERENZA NT-TRATTATO
SENS
RES
PTX CARBO BEVA PTX + PTX + BEVA + PTX + IBR. IBR + IBR + IBR + IBR + IBR + PTX +
CARBO BEVA CARBO CARBO + PTX CARBO BEVA PTX + CARBO +
BEVA CARBO BEVA
•  12 brevetti (6 granted)
1. Lavitrano et al. “Gene Transfer Composition and Method" Europe Patent No. 02766976.1 (concesso) ceduto alla
Revivicor Inc Blacksburg, VA USA nel 2004.
2. Lavitrano M, Grassilli E, Helin K (2007). Composti modulatori della resistenza farmacologica in cellule epiteliali
tumorali. Brevetto italiano 0001378871 (concesso)
3. Lavitrano M, Grassilli E, Helin K. siRNA-mediated silencing of genes for treating chemotherapeutic drug-resistant
epithelial tumors. Patent application WO/2008/110,624
4. Lavitrano M, Grassilli E, Helin K (2012). NEW ISOFORM OF BRUTON’S TYROSINE KINASE (BTK) PROTEIN. Patent
application US 13/532,669
5. Lavitrano M, Grassilli E, Helin K (2012). MODULATOR COMPOUNDS OF THE DRUG RESISTANCE IN EPITHELIAL
TUMOUR CELLS. Patent application EP 12179806.0
6. Lavitrano M, Grassilli E, Helin K (2012). MODULATOR COMPOUNDS OF THE DRUG RESISTANCE IN EPITHELIAL
TUMOUR CELLS. Patent application EP 12179801.1
7. Lavitrano M, Grassilli E, Helin K (2012). ISOFORM OF BRUTON'S TYROSINE KINASE (BTK) PROTEIN. US Patent no
8,232,085 (concesso)
8. Lavitrano M, Grassilli E, Helin K (2014). Isoform of Bruton's tyrosine kinase (BTK) protein. US Patent no 8,889,643
(concesso)
9. Lavitrano M, Cerrito MG, Giovannoni R, Grassilli E, Masiero L, Pisano F, Romano G (2013). Pharmaceutical kit for
use in the treatment of colon and colorectal cancer. Patent application EP 2013179049.5
10. Lavitrano M, Cerrito MG, Giovannoni R, Grassilli E, Masiero L, Pisano F, Romano G (2014). Methods of treating
cancers. Patent application PCT/EP2014/066724
11. Lavitrano M, Grassilli E, Helin K. (2013). BTK INHIBITORS FOR USE IN TREATING CHEMOTHERAPEUTIC DRUG-
RESISTANT EPITHELIAL TUMOURS. Patent no EP 2 134 374 B1 (concesso).
12. Conconi D, Dalprà' L, Grassilli E, Lavitrano M (2014). Methods for determining the sensitivity or resistance of
cancer cells to at least one anticancer drug and/or therapeutically active molecule. Patent application PCT/
IB2014/062303

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Marialuisa Lavitrano, PhD

21st Century Challenge

The Role of Science and Technology

• 10.1 million new cases of cancer / year

The US Challenge Goal

Copyright Dennis Kunkel Microscopy

§ traslocato nel linfoma follicolare (cellule B), viene a trovarsi sotto il

§ è un oncogene che promuove la sopravvivenza cellulare invece

Modulazione dell’espressione di Bcl2 - Genasense

Ø vari tipi di linfomi e carcinoma mammario

LIMITAZIONE: gli AS non superano la barriera ematoencefalica

Inibizione Bcl - 2ABT-737

Fosforilazione delle prot IkB chi attiva il complesso IKK?

Antiinfiammatori non steroidei (FANS)

• primo inibitore specifico di tirosino-chinasi approvato per la terapia

• identificato “per caso” -> screening di inibitori della PKC

• legame all’ATP binding site -> blocco in conformazione inattiva

• Overespressione in sarcomi dei tessuti molli, gliomi, medulloblastoma e tumori ovarici

(GastroIntestinal Stromal Tumors)

(Chronic MyeloMonocitic Leukemia)

• A livello cellulare: proliferazione, survival, migrazione

• Omologo dell’oncogene v-kit, del virus del sarcoma nei felini

• mutazioni del tipo “gain-of-function”

• EGFR recettore tirosino-chinasico (scoperto nel 1981, Cohen)

• ErbB1/EGFR overespresso in vari tumori di origine epiteliale (vescica, mammella, rene,

Trasuztumab (HERCEPTIN, Genentech)

Cetuximab (ERBITUX, ImClone)

• Image single cells Slide 1

• Screen for disease markers

• Create biomaterials and

The R7 Paradigm will

INSTRUCT INFRAFRONTIER EATRIS ECRIN

Target Target Lead

Research Discovery Development

Disease Identification Prevention/

RNA Proteo- Serum

Development Biological Preclinical

10 Development of new prevention tools

BBMRI Common Services

Products: A_IATRIS is the

ELIXIR-IIB includes 17 partners (Universities,

INFRAFRONTIER (Archivefrontier and Phenofrontier) - the European Research

World-wide distribution of EMMA-INFRAFRONTIER users

INFRAFRONTIER consortium members:

q Mouse Clinics from Europe and Canada

23 Research Infrastructures among 15 Countries

The European Mouse Mutant Archive (EMMA) as part of the

• Instruct is operational since 2012

Open Access COSYS platform

• ISBE 23 consortium members

• MIRRI 30 public biorepositories and research institutes from 19 European

DIAGNOSI CLASSIFICAZIONE TERAPIA

Biopsia tumorale Analisi molecolare Farmaco intelligente

49 GENES IDENTIFIED INVOLVED IN DRUG-RESISTANCE

• rapido, max 72 ore

• riproducibile in ogni lab da personale tecnico

• estendibile ad eventuali altri tipi di tumore/

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•  10.1 million new cases of cancer / year

§  traslocato nel linfoma follicolare (cellule B), viene a trovarsi sotto il

§  è un oncogene che promuove la sopravvivenza cellulare invece

Ø  vari tipi di linfomi e carcinoma mammario

•  primo inibitore specifico di tirosino-chinasi approvato per la terapia

•  identificato “per caso” -> screening di inibitori della PKC

•  legame all’ATP binding site -> blocco in conformazione inattiva

• Overespressione in sarcomi dei tessuti molli, gliomi, medulloblastoma e tumori ovarici

•  A livello cellulare: proliferazione, survival, migrazione

•  Omologo dell’oncogene v-kit, del virus del sarcoma nei felini

•  mutazioni del tipo “gain-of-function”

• EGFR recettore tirosino-chinasico (scoperto nel 1981, Cohen)

•  ErbB1/EGFR overespresso in vari tumori di origine epiteliale (vescica, mammella, rene,

•  Image single cells Slide 1

•  Screen for disease markers

•  Create biomaterials and

q  Mouse Clinics from Europe and Canada

•  Instruct is operational since 2012

•  ISBE 23 consortium members

•  MIRRI 30 public biorepositories and research institutes from 19 European

•  rapido, max 72 ore

•  riproducibile in ogni lab da personale tecnico

•  estendibile ad eventuali altri tipi di tumore/