ace emn Five Brogeimien, amp: Vee coamesy MMINI-INFORME del Aeobajo ex auch PROGRAMACION METABOLICA: CAUSAS Y CONSECUENCIAS Mulchand 5. Patel y Malathi Srinivasan Departamento de Blequimtca de fa Escuela de Medicina y Ciencias Biomédicas de le Universidad Estatal de Nueva York Buffalo, Nueva York EI desarrollo programado somal de un organismo mufticelular desde Ja eélula germinal implica uma serie de eventos sincronizados dirigidos por instrucciones adquiridas durante la concepeién. Durante los periodos criticos tempranos de la vida el organismo también tiene le habilidad de responder a situaciones del medio ambiente que son extrafios al normal desarrollo por adaptaciones a eseala cchilar, biomolecular y bioquimica, Tales adapteciones tempranas a un estimulo/stress notricional cambian definitivamente la fisiologfa y el metabolismo del organismo y continéan siendo expresados aun en la ausencia del estimulo/stress que les dieron comienzo, un preceso denominade programacién metabélica. Un breve resumen Ge los hallazgos de estadios epidemiolégicos humanos y animales se presenta abajo apoyando el concepto de programaciéa metabélica inducida por experiencias nutzicionales en los periodos eriticos durants al desarrollo con consecuencias posteriores en la adultez! Este mini-informe. focalizara en la programacin metabética con referencia a un nuevo modelo de ratas desarrollada en muestro laboratorio. Eyidencia de programacidn metabélica extrafilas de datos enidemiolgicos hamanos ‘Numerosos hallazgos epidemiolégicos indican que Ja programacién metabélica ocurre ea humanos. Barker, basindose en estudios epidemiolégices, fue el primero en sugerir que el tam: rcionado de recién idos era el resultado de la malnutrici ‘matema con up wentédo dé fesultads: pata Ia Salid (Diabetes apo. 2hipertensisr emmedades cand ares) en la vi sciéa nacido. Estas observaciones primarias en la ahora amijliamente reconocida hipétesis del “origen fetal” enfatizaron en la importancia de wna adecuada La programacién mutricional ha sido demostrada en estudios animales. En los estudios cantidad us, comida = r "Rene consecuencias @ lar crecimiento, Las mieneias na inducida por ma dicta hipoprotei restriecién calérica durante el embarazo causa cambios severos en la estructura y funcién de numerosos érganos de las erias. Ratas jas alimentadas con dieta hipoproteicas tuvi ‘[as alteraciones registradas fueron: vascularizacién 1‘Luciana 2004 reducida del islote, capacidad de proliferacién de las Gélulas By disminucién del tamailo del islote, Gisminucién de la sensibilidad de ta liberaciéa de insulina esiimlada por gucosa y sensibilidad alterada 2 la insulina en mésculo, Ademés, los nicleos hipotalémicos suiren malformaciones en estas ratas destetadas; esto se acompatia de reduccién de vascularizacién de la corteza cerebral en las crias. ‘Las capacidades metabélicas hepaticas, musculares y dal tejido adiposo estén comprometidas por 1a restriccién proteica materna durente el embarazo y lé lactancia con resultados adversos en la adultez. Elevadas comcentraciones de insulina durante periodos criticos del deserrollo, como ocurre perinatalmente en fas crfas de madres diabéiicas embarazadas, condujeron a mala organizaciéa definitiva del niicleo ventromedial hipotalémico seguido de intolerancia a la glucosa en la vida, adulta. Colectivamente, los resultados de modelos animales indican que aun los periodos breves de imanipulacién dietaria en la vida temprana tienen implicancias pera causar patologias, las cuales se ‘veelven evidentes solamente en la aduitez. jodelo “rata nacida en La mayoria de los estudios animales citados arriba demostraron que la desnutrici6a matema durante el embarazo levaba a un retardo del crecimiento intranterino y adaplaciones eeompafantes— ajo condiciones adversas, A excepcidn de los efectos adversos descriptes causades por 4 disminucién de Ta cantidad de alimento suministrado a Jes ratas, el efecto de una nutriciéa alterada durante el periodo de lactencia no ha sido investigado exhaustivamente en las Tatas. Esto se debe alas dificultades experimentales en criar exitosamente a estas ratas recién nacidas con una modificacién en la férmula de la leche y alejadas de sus madres. La tScnica de Hall da un sentido al estudio de los efectos de una mutricién alterada durante el periodo de lactancia. Nosotros hemos adapfado esta técnica para evaluar las consecuencias de un cambio en la “calidad” nutricional (se pas6 de Ja leche de rata, que es rioa en lipidos a una lect 30) Garante eI periodo de lactancin de estas raias. ET resultado fue ef m ‘ina faza” (también denominadas como “ratas HC”) donde tas ratas recién nacidas fueron criadas en tazas de Styrofoam Mlotando en un baiio’de agua & temperatura controlada, Retas de 4 dias de edad fueron alimentadas por cénules intragistricas, introducidas sin cirugia, y criadas con leche rica en hidratos de carbono (el 56% de las calorias provenian de hidratos de carbon comparado.con_el 8% de la leche de rata). Se les dio esta leche ‘hasta los 24 dias de edad, y después se les comenz6 a dar alimento.de laboratorio. A otro grupo de ratas de 4 dias de edad se las alimenté artificialmente con leche rica en lipidos (con tina composiein de macronuirientes similar a la leche de rata para dem que la técnica de crianza artificial per se no tiene efectos de programuciod metabolica) y un tercer grupo de ratas recién uacidas alimentadas por sus propias madres sirvierom como control. EY protocolo detallado seguido por auestro laboratorio para los experinenios realizados usando el modelo “rata recién nacida en una taza” se describe en otros trabajos’. La figura 1A ilustra las adaptaciones metabélicas en Ia primera generacion de ratas HC. Adaptaciones metabilicas inmediatas en el perfodo de fnctancia * Las abreviatras usadas en este informe son: ras HC: mas eiadas con leche ra en hidtos de cxrbore; SAPKC2: proteina quinas, ectivada porsiese-2 PD-quinasa: fositidinestol3-quinasa; GLP-L peptido smd plueagse-1 Los trabajos son: a) Hiremalagur, BK, pbanaing, G.t, Kathan,SC, yPata, MS. (£992) |, Nate Biochem 3,1724208) emalagis, BK, VadlamudiS, Johenning, G.L, y Palel M5. (1.595) at}. Ober, 17, 495-502 EiUn_resultado inmediato de la dieta_rica_en perinsulinemia dentro de las 24 horas de tisfaurada la dieta, persistiendo la misma durante el periodo de Jactancia y en Ja adultez incluso ain después de haber retisado la leche rica en hidratos 3 carbono en el tiempo del destete (Fig. 1A y 2A). Durante el periodo de lactancia no hubo diferencias en el peso corporal y los niveles de glucemia entre las ratas HC y los grupo coatrol. La superposiciéa de la ventana critica entre el desarrollo pancredtico postnatal coa la dieta rica en hidratos de carbono en las ratas HC sugiere que el pancreas endocrino es el organo blanco de adaptaciones significativas. Hemos observado alteraciones significativas a escala celular, molecular y bioquimica en islotes aislados de ratas HC recién nacidas y también hemos observado la programacién de estas adaptaciones en Ja adultez. Las adaptaciones celulares inducidas por la modificacién en Ja dieta durante el peticdo de Jactancia incluyen un némero incrementado de islotes més pequefios en Jos pancreas HC comparados con las ratas control. Estos islotes tienen una 4rea inmunopositiva mayor para Ja insulina, lo que da como resultado un incremento neto de la masa preductora de insulina en los islotes HC. Adicionalmente, la tasa de apoptosis y la expresién de antigeno nuclear de células proliferantes estin ‘inversamente alteradas en los islotes y el epitelio ductal de las ratas HC. Uno de los factores contribuyentes a Ja ontogenia alterada ha sido atribuida al cambio en la expresién del factor de crecimiento simil insulina I. ‘Numerosas adaptaciones moleculares se observaron en islotes neonatales en respuesta a la dicta rica en hidratos de carbono. Se observaron en los islotes de raias HC neonatales incrementos de la biosintesis y la expresion génica de preproinsulina (Fig. 2B). Adicionalmente, los niveles de factor de trascripcién de ARNim tales como el factor homeobox" pancredticoducdenal-1 (PDX-1) . el factor del islote-1 (Isl-1), el factor estimulante corriente arriba-1 (USF-1), el factor regenerador-3 (ceg-3), el Beta 2/NeuroD y el factor nuclear hepatocitico §3 estan significativamente elevados en los islotes HC neonatales. Los niveles de ARNm de SAPK-2, PI3-quinasa, Acetil-CoA carboxilasa, GluT2 y los sustratos de receptores de insulina 1 y 2 son también significativamente mes altos estos islotes HC. PDX-1 es un importante transactivador del gen de Ja insulina y es un componente esencial de los mecanismos causados por la glucosa que modula la eccién promotora de Ja insulina. La actividad fijadora“de"/ADN de PDX-1 ha sido propuesta set modulada por Ja glucesa mediante una cascada de fosforilacion que involucra a SAPK-2 y PI-3 quinasa, la cual facilita la translocacién de la forma fosforilada activa de 46 Kda al nficleo lo que provoca un aumento en la transeripeién del gen de la insulina (Fig. 3). La posible correlacién entre los efectos observados de la dieta rica en hidratos de carbono in ratas HC y la transcripeién del gen de la preproinsulina se muestra en Ja figura 3, También PDX-1 es un importante factor de transcripcién que se encarga de la progresiGn de las células ductales pluripotenciales, en células endecrinas. El incremento significative de In expresién génica, la actividad fijatiord del ADN, y el componente proteico de PDX-1 en los islotes HC neonatales.sugieren que estos juegan un papel fundamental en las adaptaciones celulares como asi también del inicio y mantenimiento de 1a hiperinsulemia en este modelo de rala. Los factores de transcripcién como el Isl-1, Beta2/NeuroD, reg-3 y el factor hepatocitico nuclear 5-3 también contribuyen a la organogénesis pancreética. Los inerementos en la expresién génica de estos factores sugieren que ellos también contribuyen a la modificacion de la arcuitectura del islote en las, ratas HC meonatales. El andlisis de genotecas de ADN circuls~ ha indicado significativos cambios en Jos patrones de expresién génica global en las ratas HC neonatales como asi también de los islotes 5 omeotox: Secuencia altamente conservada dentro do numerocos gones del dsarrot, inelies ins elacinns homesicoso grnes HOX. Elheaenbox codifca una oowerela de aincacidee (el homecernic) capuz de unirseal ADN para sa segulzciéa, Puente: Biologia de Custis @ Eiciinde adult jendo que son esexviales un amplio abanico de alteraciones moleculares para el | inicio ere del fenotipo HC en las ratas H¢ Las significativas adeptaciones bioquimicas resumidas abajo inician y sostienen Ja hiperinsutinemia en ratas HC neonatales. Un rasgo caracteristico de las ratas HC neonaiales es un ineremento de 6 veces en Ia insulinemia. (Fig. 2A). Hay un incremeato en la sensibilidad distinta de Ja respuesta seeretoria de insulina stimula por glacosa en los isles HC; (Fig. 20) y este hecho esta asociado con Ios inerementos en actividad de la hexoguinasa de bajo Km y con un incremento de la cantidad de protefnas que conforman el GluT? (Fig. 2D), La secrecién de insulina de los islotes esta_regulada por 3 vias: la via dependiente del canal Karp, la via de mimento independionte del canal Kyzp y Ja via de aumento independiente del canal de Ca” y estas vias tienen una regulacién ascendente en Ios islotes HC. Los niveles cireulantes de GLP-1 son siznificativamente mas clevados en las ratas HC sugiriendo que los eventos mediados por ei GLP-1 contribuyen significativamente con la hiperinsulinemia de las ratas HC. En adicién con su efecto insulinetrépico, el GLP-1 estimula la transeripeién del gen de Ja preproinsulina y el gen PDX-1 y también la proliferaciéa y neogénesis de células Ba partir del epitelio ductal en toedores. A la luz de lo expuesto arriba, el incremento significative de niveies circulantes de GLP-1 en las ratas HC de 12 dias de edad tiene importantes ‘conseenencias para el fenotipo IC en las ratas HC Iactantes. Debido a Ia kiperinsulinemia crdnica, la capacidad de lipogénesis hepatica se mejora en las ratas HC. Enzimas como la glucoquinasa y la enzima mélica que normalmente aparecen en el higado ea el destete son precozmente indvcidas por el tipo de alimentaciéa que reciben estas ratas sugiriendo que su aparicién no es desarrollo-dependiente, sino controlada por la presencia de un estimulo Ga hiperinsulinemia inducida por fa dieta). Se desprende de lo arriba expuesto que Ja alimentacioa de ratas con una formula de leche rica en hidratos de carbono, en Iugar de Ta leche matema, durante el periodo de lactancia provoca alteraciones significativas en las fimciones del islote como asi también de Ia respuesta metabélica de los tejidos periféricos, los cuales son importantes para el desarrollo de la obesidad adulta. (Fig. 4, fase adaptativa) Hes £1 enlaa Programacién del ta La hiperinsulinemia persiste en Ia adultez de las ratas HC a pesar del retiro de la dita rica en hidretos de carbonos en el 24° dia de vida. (Fig. 1A) Las alteraciones observadas ea la via secretora de la insulina en los islotes HC neonatales son programadas ea los islotes del adulto.. Los cambios ‘moleculares (incremento en Ja transeripciéa del gen de la preproinsulina) observados en Ios islotes de las ratas HC neonatales también se observan en los islotes de los adultos HC. Hay un incremento en la masa productora de insulina del pancreas de los adultos HC. La hiperinsulinemia orénica se acompatia de un incremento en el peso corporal de los animales desde el dia 55 en adelante y se llega a una obesided muy desarrollada en el 100° dia. Aunque las ratas HC adultas se mantienen ea normoglucemia, se observa una respuesta alterada de Ia prueba de tolerancia a la glucosa en et 75° dia. Ademés, el higado y el tejido adiposo muestran un aumento de su capacidad lipogénica en la adultez. Un aumento del tamatio celular en el tejido adiposo del epididimo refleja la adiposidad observada en el adulto. La cantidad de glucdgeno y Ia cascada de activacién de Ia glucdgeno sintetasa tienen una regulacién descendente en el higado y en el misculo esquelético y tienen una regulacién ascendente en el tejido adiposo del epididimo de fas ratas HC adultas. Tomados jumtos, estos hallazgos indican que las adaptaciones tempranas estén programadas y son acompaiiados por cambios adicionales, probablemente disparados por fuctores de la adultez. (Fig. 4, Fase de persistencia). El efecto generacik icionalmente inducido en Ja programaci6iLuciana 2004 "Una’-importatte-e' inesperdder consecuentia’ inducida es la trmsmisién del fenotipo desde la ma alterado de secrecién de insulina en las 48 horas posteriores al desiete, Este oourre en el 24° dia, de ‘flulas, causando niveles alterados de cxpresién génica en tojldes, especifices. Ademés, los eerie ca grades de metilacién de ADN en tjdos especifieos se tansmiten's les eéhns hijas por eplicacién, lo que produce la inmortalizacién de las modificaciones iniciales Comentarios Finales ” \ E] Modelo “rata reciéa nacida en ma taza” es tinico en el sentido que programa ae a Teche nenle l metabolismo de una rata adulta por el simple hecho de modificar composiciéa Buestros estudios con ratas que la naturaleza y duracién de los Programas de tratamiento dietario Programan el inicio de condiciones patolégicas en el adullo que mimetizan enfermedadesLuciana 2004 metal slicas mayores, tales como la obesidad y la diabetes tipo 2. Las evidencias apuntan a la iperinsuifinemia inducida por dieta como el evento primario en ia programacién metabélica en las ratas HC. En un reporte reciente Mokdad y col. sefaleron que Je epidemia de obesidad es uaa emenaza cxitica para la salud piiblica en los Estados Unidos (casi 1 de cada 5 americanos son obesos). Es poco probable que los genes relacionados con la obesidad estén involucrados en la inorementada incidencia de esta enfermedad, porque no ba habido cambios significativos en las ultimas décadas del “pool” de genes en los Estados Unidos. También ha habido un incremento del 33% en la incidencia de diabetes diagnosticada en la década pasada, y esto se ha correlacionado fuertemente con el ineremento de la incidencia de obesidad, sugiriendo que la obesidad es un factor de riesgo mayor pata las enfermedades crénicas. Con esto empicza a verse que los origenes de las enfermedades crénicas no se limitan solo a los genes heredados y/o al estilo de vida sedentario. Los resultados obtenidos a partir de la rata HC sugiere que las experiencias matricionales durante la vida inmediata postnatal tales como la sobrealimentacién y la introduccién temprma de comidas ricas en hidratos de carbono después del destete (por ejemplo cereales, frutas, jugos, ete.) pueden coniribuir a la programacién metabélica levando al desarrollo de enfermedades adultzs como la diabetes y ta obesidad. El nuevo campo emergente de la programacién metabélica por Jo tanto offece una ruta adicional para examinar la etiologia de las enfermedades adultas. ‘TRADUCCION DE TEXTOS DE FIGURAS Fig 1. Programacién metabélica indueida por la dieta en la 1* y 2° gencraciin de ratas HC. Se muestran las adaptaciones metabélicas en la 1* generacién (A) y 2° generacién (B) de ratas HC en. respuesta ala alimentacién con leche rica en bidratos de carbono. Fig2. Adaptaciones biguimicas en los islotes pancredticos de rtas HC recién nacidas. 2A representa fos niveles de insulina plasmaticos (en piM) en las ratas HC recién nacidas. 2B muestra los niveles relatives de ARNm de preproinsulina y PDX-1 en islotes de ratas HC de 12 das de edad comparindolas con ratas alimentadas por sus madres. 2C represenia la respuesta secretora de insulina ce los islotes de ratas HC de 12 dias de edad después de un esfirmlo con glucosa. La respuesta se mide en 30 islotes y en 60 minutos. 2D representa Ja actividad de Ja hexoquinasa de bajo X., «n fracciones de sobrenadante (S) y homogeneizado (P) de extracios de islotes de ratas HC de 12 dias de edad, comparéndolas con ratas alimentadas por sus madres. La actividad se expresa en miliunidades‘mg de proteina. Fig. 3. Mecanismos probables de la regulacién de la trascripciéa del gen de la ‘Preproinsulina en islotes de ratas HC neonatales, Este esquema indica las repuestas inducidas por las dieta riea en hidratos de carbono en las ratas HC, las posibles interacciones entre ellos y la ‘consecuente regulacién de la trascripcion del gen de la preproinsulina Fig. 4. Las 3 fases de la programacién metabélica en las ratas HC. Se mmestran fos posibles mecanismos para las adaptaciones a la dieta rica en hidratos de carbono en el periodo de lactancia (Fase cdapativa), ta persistencia en la adultez de estas adaptaciones (Fase de persistencia) y su iransmision a la descendencia (Fase de transmisién)