Antifngicos Prof Rosana Slide 2 Recordar viver Caractersticas da clula fngica: a principal caracterstica da clula fngica a presena de uma

uma parede celular que existe externamente membrana celular, que se assemelha membrana dos animais bicamada lipdica, presena de fosfolipideos, esteris, lipdeos. S que o principal esterol da parede fngica o ergosterol, ao contrrio do colesterol que o principal esterol dos mamferos. Slide 3 A parede celular tem vrias funes para os fungos: - Proteo contra danos fsicos, principalmente condios, que possuem uma parede celular muito espessa; - Proteo contra dissecao; - Resistncia variao de turgor; - Manuteno da forma celular; permite a morfognese. a primeira organela a entrar em contato com o sistema imune do hospedeiro, carregando as molculas que vo promover a adeso ao organismo. Dessa maneira, a parede um importante alvo para antifngicos. Slide 4 A parede celular fngica bastante complexa. Sua estrutura bsica de 50% polissacardeos, glucana (principalmente beta 1,3 glucana) em grande quantidade, e quitina nas camadas mais internas, que, ambas, ligam-se a protenas de parede. Mas tem-se observado, nos ltimos anos, varias protenas de parede que na verdade so do citoplasma (fosfatases, Hsp (chaperonas) heat shock protein , histonas). A presena dessas molculas citoplasmticas na parede motivo de estudo atualmente, mas acredita-se que o transporte ocorra por vesculas atravs da membrana. Slide 5 O fungo Cryptococcus neoformans possui, alm da parede, outra estrutura mais externa, chamada cpsula. Esta tambm composta por polissacardeos, dando clula, uma aparncia mais mucide. Dentre os estudados, de importncia mdica, o nico que possui cpsula. Slide 6 Os fungos dimrficos trmicos como os responsveis pelas micoses , como o nome sugere, possuem duas formas: (1) miceliana: que aquela que ocorre abaixo de 25C, geralmente em ambiente externo; (2) leveduriforme: que ocorre na fase tecidual, estando temperatura do corpo. Esses fungos possuem a beta 1,3 glucana como polissacardeo principal da parede na fase miceliana. Quando ocorre a mudana de forma, para a fase leveduriforme, umas das alteraes bioqumicas que ocorrem no

fungo a substituio de grande parte dessas beta 1,3 glucanas por glucanas de conformao alfa, e essas glucanas so tidas como fatores de virulncia sendo referida como glucana inflamatria. Slide 7 Antes da dcada de 70: anfotericina B e griseofulvina. Fatores que levaram ao aumento da incidncia de micoses oportunistas: - terapias que depletam o sistema imune: sabe-se que as micoses oportunistas esto relacionadas com a imunossupresso do individuo. - uso indiscriminado de antibiticos: pois acaba-se com a flora normal, desequilibrandoa. Cndida tambm flora, que est misturada com bactrias. Logo, destruindo uma grande parte das bactrias, est se desequilibrando a flora, e as Cndidas, que eram comensais, boazinhas e no patognicas, acabam se tornando patognicas. - mtodos invasivos diagnsticos: pois levam para o meio interno do hospedeiro microrganismo que esto em cateteres, por exemplo. - viroses crnicas e imunossupressoras como AIDS. A partir desse boom de micoses oportunistas, a industria farmacutica comeou a desenvolver medicamentos para combater essas micoses. O ideal que os frmacos tenham amplo espectro (um mesmo antifngico atingir o maior nmero de espcies) e principalmente ter baixa toxicidade, destruindo o microorganismo e no lesando o hospedeiro). Alvos dos antifngicos atuais geralmente no envelope celular. Slide 8 O alvo mais visado o ergosterol da membrana celular, tendo atuao de azlicos, alilaminas e polienos, atuando, cada qual, de maneira diferente. As beta glucanas, especificas de fungos, tambm so timos alvos, pois no existem nas clulas de mamferos. As quitinas tambm o so. As equinocandinas inibem a beta 1,3 glucana sintase. Alguns antifngicos tm alvos intracelulares, como a fluoropirimidina, que atua na sntese de DNA e RNA. Slide 9 Alvo: ergosterol de membrana. Como antifngicos, tem-se: polienos, azis e alilaminas. Slide 10, 11, 12, 13 Polienos: Anfotericina B e nistatina. Mecanismo de ao: Os polienos vo se ligar ao ergosterol, formando poros e desequilibrando a clula, levando a uma lise celular. A anfotericina B tem um efeito colateral bem desagradvel pois ao se ligar ao ergosterol, oxida essa molcula levando formao de radicais livres , que a nefrotoxicidade. A toxicidade seletiva da anfotericina B no total, pois tambm h

ligao, embora em menor escala, ao colesterol. As atuais formulaes de anfotericina B promovem uma depurao, um delivery mais lento da droga, havendo mais contato na filtrao pelo rim, acarretando uma nefrotoxicidade mais grave. A nistatina tem uso basicamente tpico. A estrutura cilndrica do ergosterol mais compatvel ligao com anfotericina B do que com colesterol (sigmide): toxicidade seletiva. Anfotericina B nefrotxica, mas tem largo espectro. Slides 14 a 20 Azis (imidazis e triazis) e alilaminas so geraes de antifngicos posteriores aos polienos e promovem inibio de sntese do ergosterol. Azis So fungistaticos ou fungicidas, dependendo da espcie e do azol. Os azis vo inibir a sntese numa etapa bem prxima da formao final do ergosterol (enzima 14 alfa dimetilase), ao passo que as alilaminas (terbinafrina) inibem a sntese em um passo mais inicial (enzima esqualeno epoxidase). Como diazol, tem-se, por exemplo, o cetoconazol. Como triazis, tem-se, itraconazol e voriconazol possuem ligao mais especfica, amplo espectro e toxicidade, e fluconazol espectro limitado a leveduras. Alilaminas A principal a terbinafrina. Como caractersticas: - inibe esqualeno epoxidade; - lipoflica; - tem amplo espectro, incluindo dermatfitos. Slides 21 a 23 Alvo: componente de parede celular Equinocandinas: inibem a sntese de beta 1,3 glucana. Nicomicina: inibe a sntese de quitina, mas ainda no est no mercado; tem problemas de toxicidade a ser resolvidos. A equinocandina vai agir, portanto, intracelularmente, pois atua na enzima beta 1,3 glucana sintase que, por ser uma protena grande, possui alas e se localiza na membrana e tambm intracelularmente.

As equinocandinas so metablicos secundrios de fungos e que foram sendo modificados. A principal no mercado a caspofungina, sendo que anidulafungina e micafungina surgiram mais recentemente. Slide 24 A equinocandina: - bem tolerada; - no h resistncia (somente por mutao na subunidade FSK1, que a parte cataltica do complexo enzimtico da sntese de glucana). - em Candida, fungicida. - aprovada em candidiase e aspergilose invasivas no inicio dos anos 2000. O ndice de mortalidade para essas doenas muito alto e se no entrar rapidamente com a medicao a probabilidade de bito bem grande. - Cryptococcus resistente. No dimrfico, mas tem bastante alfa glucana em sua parede. Slide 26 Alvos intracelulares Griseofulvina: citoesqueleto Flucitosina: DNA/RNA Sordarina: traduo Slide 28 Griseofulvina - primeiro antifngico especifico - produzida pelo Penicilium griseofulvum - interfere na interao dos microtubulos - inibio da mitose - efetivo contra dermatfitos, mas sofre concorrncia com os azis - possui toxicidade heptica Slide 29 Flucitosina - na clula fngica, convertida em 5-fluorouracil (3 enzimas necessrias) - incorpora-se no RNA, promovendo uma terminao prematura da cadeia. - inibe sntese de DNA, inibindo a timidilato sintase. - bastante efetiva contra Candida e Cryptococcus. - possui pouca resistncia. (ex. modificao de uma enzima necessria para converter flucitosina em 5-fluorouracil) Slide 30 Sordarina

- bloqueador da traduo (inibidor da protena EF3 - Fator de elongao 3, exclusivo de fungos). - altamente especifica para fungos, mas possui 85% de identidade com equivalente humano, logo, como pode ser uma droga boa? Abandonada nos anos 70, pode ser uma promessa para o futuro com a descoberta de derivados. Slide 31 Existem testes para se verificar a resistncia dos fungos a determinados antifngicos, que traduzida em termos de MIC (Concentrao inibitria mnima). Slide 32 Mecanismos de resistncia a antifngicos - estudados principalmente em Candida. - para polienos h pouca resistncia. Mas como exemplo pode-se citar: contedo reduzido de ergosterol ou substituio por outro esterol. - no caso de azis, existe resistncia e ela se d de duas maneiras diferentes: (1) bomba de efluxo e (2) modificao na enzima (mutao na regio de binding do inibidor), diminuindo a afinidade. - para equinocandina, a resistncia tambm rara, mas pode ocorrer por mutao em FKS1. - flucitosina: perda de atividade da permease ou das enzimas da via. - alilamina: rara. CDR (um tipo de bomba de efluxo). Slide 33 - Como mecanismo de resistncia, pode-se citar tambm os biofilmes, que so comuns principalmente em Candidas, que so muito mais resistentes quando presentes nessas aglomeraes do que apenas em colnias ou isoladas.