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  • 16 Mecanismos Mutación

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    MECANISMOS DE LA MUTACION GENICA = Ideas fundamentales ‘mediante varios mecanismos diferentes, que incluyen a los errores en la replicaci6n y las lesiones fortuitas en el DNA. Los mutégenos si mutagénesis, gene ntes que aumentan la frecuencia de Imente alterando el DNA. Los compuestos potencialmente mutigenos y earcinégenos se pueden detectar ficilmente mediante pruebas de mutagénesis ccon sistemas bacterianos. Los sistemas biol6gicos de reparacién eliminan del DNA ‘muchas alteracionés potencialmente mutégenss, Las células que carecen de ciertos sistemas de reparacién’ tienen frecuencias de mutaci6n més altas de lo normal. Test de Salmonella (test de Ames) para la deteccién de mutagenos. Arribas placa de Petri sembrada con alrededor de 10" bactrias incapaces de sintetizar histiina (el pequeio némero de colons visibles eortesponde a reverienes espontineos). Abajo: placa de Pet con in disco impregnado de un motigeno. Este produce un ‘san nero de reve sintetizar histidine los coloniassrededor del disco, 496, E ste capitulo deseribe Jos numerosos tipos de procesos Capitulo 16 Mecanismos de la mutacién génica moleculares que dan lugar a los alelos mutantes que se diseutieron en el capitulo anterior. Dichos procesos son Televantes no sélo en lo que conciere a la Genética experimental, sino que también tienen una implicacién directa en la salud humana, Base molecular de las mutaciones génicas Las mutaciones génicas pueden producirse de forma espontnea ‘ pueden inducirse, Las mutaciones espontineas se dan de for- ‘ma natural y se producen en todas las células. Las mutaciones inducidas se producen cuando un organismo es expuesto a un agente mutagénico, o mutégeno; estas mutaciones ocurren tipi- ‘camente con mucha mayor frecuencia que las espontineas. ‘La comprensién de los mecanismos de la mutacién génica re- quiere la realizaci6n de andlisis a nivel de las moléculas de DNA. ¥¥ de proteina, En capitulos anteriores se han descrito modelos para las estructuras del DNA y de las protefnas, y se ha discutido Ja naturaleza de las mutaciones que alteran estas estructuras (véase, p. ej, el Cuadro 15-1). ‘Se pueden emplear las tSenicas de la Genética molecular para Ja determinacién de la secuencia de grandes tramos de DNA, asi ‘como de los cambios en la secuencia debidos las mutaciones. La secuenciacién ha inerementado enormemente nuestro conoci ‘miento sobre ls ruts implicadas en la mutagenesis y ha ayudado incluso a desentrafar los misterios de los puntos calientes muta- _cionales (sitios genéticos con gran tendencia a sufiir mutaciones). ‘Gran parte del trabajo sobre Ja base molecular de la mutacién se ha llevado a cabo en células individuales de bacterias y en sus ‘virus, Sin embargo, también se han analizado muchas mutaciones + causantes de enfermedades hereditarias en la especie“humana, y., revisaremos algunos de los hallazgos de estos estudios. Analizare- ‘mos también los mecanismos biolégicos de reparacién, ya que AT: Si vna ain Stree cambio ‘autonirico dels forma ceo comin a fom rr enol en el moment de a incorpracn (come mucetsida ‘fst, en hgar de enn eadena mold qe se equemutizs, se ineopora frente una timisa dea cadena olde Yynusard una mutaign AT —» GC. (Tomado de FJ. Gardner yD. P.Sausad, Principles of Genes, 5* el. Copyright (© 1984, Jobn Wiley & Sons, New York) Los emparejamientos err6neos pueden ocurtir también euan- do una de las bases se ioniza. Esto sucede con mayor frecuencia aque los emparejamientos eréneos producidos por ls formas imino o enol de las bases. z ‘Transversiones. En las mutaciones por transversion, una pi- rimidina es sustituida por una purina 0 viceversa. Las transver- siones no pueden generarse mediante los emparejamientos err6- neos representados en la Figura 16-2. Cos las bases del DNA en su orientacién normal, Ia ereacién de una transversiGn por wn error en la teplicacién requeriria el emparejamiento erréneo de ‘una purina con una purina o de una pirimidina con una pirimidi- na en alggn momento durante Ia sintesis del DNA. Aunque las dimensiones de la doble hélice del DNA destavorecen energéti- camente tales emparejamientos, sabemos ahora, por estudios de difraccién de rayos X, que pueden formarse pares G—A, asf ‘como otros pares purina-purina ‘Mutaciones de cambio de fase. Los errores en la replicacién pueden conducir a mutaciones de eambio de fase. Recuerde del Capitulo 10 que tales mutaciones dan lugar a proteinas muy mo- dificadas. ‘Transiciones. Todos los emparejamientos erréneos descritos hasta ahora dan lugar « mutaciones por transicién, en las que ‘una purina es susttuida por otra purina o una pirimidina por otra pirimidina (Fig. 16-3). La polimerasa de DNA Ill bacteriana (Cap. 8) tiene ung actividad correctora que reconoce tales empa- ‘ejamientos errénedsy los escinde, reduciendo asf enormemente las mutaciones observadas. Otro sistema de reparacién (que se describe ms adelante en este capitulo) comrige muchas de Tas bases mal emparejadas que escapan a la correceién por la fun- cidn correctora de la polimerasa. ‘A mediacos de los alos sesenta, George Stresinger y sus ¢o- laboradores dedujeron las secuencias de nucleétidos localizada’ alrededor de diferentes sitios de mataciones de cambio de fase en el gen de la lisozima del fago TS. Descubrieron que estas ‘mutaciones ocurrian a menudo en secuencias repetidas y propu- sieron un modelo que explicaba los cambios de fase durante Ia sintesis del DNA. En el modelo de Streisinger (Fig. 16-4), los cambios de fase surgen cuando los lazos en regiones de cadena, sencilla se estabilizan mediante un «emparejamiento erréneo deslizadon entre secuencias repetidas. En los afs setent, Jeffry Miller y sus colaboradores examina: ‘on puntos clientes mutacionales en el gen lacI de E.coli. Como se mencioné con ntetioridad, los puntos calienes son sitios de un gen que son mucho més mutables que otros. El trabaja con Jacl demostré que ciertos puntos calientes son cl resultado de secuen- .$ias repetdas, tal como predecfa el modelo de Streisinge? La Fi gua 16-5 representa la distribucin de mutaciones esponténess en el gen lacl. Compare esta distribucién con la que observ Benzer ‘en Jos genes rif de T4 (vase Ia Fig 9-26). Observe que predomi- ‘nan en ambos ¢as0$ 1s sitios con uno o dos hechos mutacionales. En Jac, a causa de los puntos calientes es una seevencia de cva- tro pares de bases repetida tres veces en tindem en el silvesi (por simplicidad, slo se indica una de las dos cadenas del DNA. seeps rere ator S-OTCIOT Giada 9 52, F584 —GTCTGG CTGG c aie Figura 16-4. —Venién simplifcad del modelo de Seisinger para a apariein de una mutacin de cambio de fare (2c) Durante lasts del DNA, Ia cadena reid sintezada real, forma un zn de una a vats bases. Este azo se estabiliza por el empaejamiento permite por ‘a aida de seeuencla epee (as bases A, en et cat), Ela siguiente ronds de pica, se produce la alin de un at de bases AT. (4) Si, en gar dela cadena reién Sinttizad,resbla la cadens mole, gener una deli, En este canola und que se rept es un dialed CCT Desputs del deszaniem, se preci na deecin de dos pres de bes (CG yA) asiguente ronda derepliacin. Cay El punto caliente més importante, representado aqui por las muta ciones FS, F525, FS4S y FS65, resulta de la adicién de un juego cextra de cuatro bases, CTGG, a una de las eadenas del DNA. Este ‘punto caliente revierte con mucha frecuencia, perdiendo el juego ‘extra de cuatro bases. El punto calientt menos importante, repre sentado aqui por las mutaciones F'S2 y FS84, resulta de la pérdida de una de las series de cuatro bases CTGG. Este mutante no recupera con facilidad el juego de cuatro bases perdido. {{Cémo puede explicar el modelo de Streisinger estas observa ciones? El modelo predice que la frecuencia de un cambio de fase particular depende det ntimero-de pares de bases que se pueden formar durante el emparejamiento erréneo deslizado de Mutaciones puntuales 850 46. $28 itulo 16 Mecanismos de la mutacién génica Aicién Sintesia de DNA Delecién Sintosia del DNA, ‘e) Jas secuencias repetdas. La secvencia silvestre mostrada para el sen lac! puede dejar fuera una seeuencia CTGG y estabilizar Ia estructura mediante Ia formacién de nueve pares de bases ({Puede resolver esto aplicando el modelo de la Figura 16-48 Ia secuencia mostra para cl gen lac). Que se genere una dele- i6n_o una adicién depend desi el desizamiento ocure en Ia, na sintetizada de nuevo, respectivamente. De ante por adicin puede dejar fuera una se- cuencia CTGG y estabilizar una estructura con 13 pares de bases (verfique esto para la secuencia FSS mostrada para lac), lo que explica la répida reversion de mutaciones como la FSS. Sin em bargo, slo hay cinco pares de bases disponibles para estabilizar 85, FS25, . S45, FS05 Nimero de aminodeldo Deleciones @ Fs2, : a sz mEsi0 Psa: asso mse sm ta sta ms em s112 [aR 5120 = 922 faa ses $05 Figura 16-5. Disuibuciso de 140 msscionesempatines en lat. Cada hecho de mutacin punts inden nin ead, Los feuao oor representan mutciones de reversion rpida. Las delecions (anal) se represen ‘hjo El mape de se da cn trminos del ainero de aminoeids del corespondnt repeso la cif en J Los rime de lo alls se referen a as motions qe se han analizado a nivel de secenea del DNA. Las Imutaciones S114 y $38 (culos) son redo de I inecin de elemetasgendcostranspoibles (vése Cap. 20, 28 (circu oo) ex wna dupicacdn de B8 pres de buses. Tomado de J. Farabaugh, U.Sctimesser, M. Hofer Mie, Journal of Moleclor Biology 126, 1978, 847) i | 1 ‘S74, S11? Te bases ites = com eAC GREER otcs~-e SCTE Sitio Secuencia Num. de bases (nam. of pb) repetida’ —_deleclonadas Sucesoe 202 95 GTGGTGAA 6 2 $74,.8112 1452269 GCGGCGAT 123 1 sa s31a3s1 AAGCGGCG 20 2 $10, $136 3168238 © GTCGA 2 2 $32,865 943707 CA 2 1 sz eat 719 CA 2 1856 9430955 G 3 1 sez 2223383 Ninguna n 1 S120 582685 Ninguna 2 1 886 Figura 16-6. Deleciones en Lact. Las dleions que apereen en ‘7H y SHIZ se moestan en pare superior del figura. Las dleiones oduen como indian ls has amanills. Se deeciona una de as ‘Secuencia epetidas too el DNA interned, dejo wn opi del seoencia ‘epeid. Todas las muaciones se anaizar por detenninacin dee de 1nSeeunca del DNA. (Tomo de J. Farabaugh, U. Schein, DM. Hofery JH. Mile, Journal of Moleclar Biology 126, 1978, 47) una secuencia CTGG perdida en el mutante por deleci6n, lo que explica la reversién infrecuente de mutaciones como la FS2 en la Secuencia mostrada para lacl. Deleclones y dupleacones, Las delecones grandes (de més de unos poco pares de bases representa una faci conside- rable os acirees wpontinel, Gap praia slice ta Figun 16 La mayors de Ins delecones, aunque no todas, curren en secuncisrepetdas. La Figur J6-6 muestra los e- suas, presntados pr Miller y sus coaboradoresen 1978, de Ie locas 1 dcciones a eaten al dae caenia del DNA. Estuionposterites han demostada que os puntos calienes para Is delesiones Son as secuencasrpatias de mayor longitu Las dupleaciones de sepmentos de DNA se han bservado en muchos organismos. Como lis deleciones, ccaen endo en veencas roped {Cémo se genera las delecionesy las dupicaciones? Se han [popeets varios mecaniuoe qe poukon xara apex Porejemplo, una exensién del modelo de Ssinger del empa- rejamlentoeéneodeslizado (Fg 16-4) podria explicar por qué Ins delocionespredominan en lat sccareiag vepetidas cor ‘Alerativamene, Is delecionesy ls duplicaciones pdran ge- terarc mediante mecanimnce de recombinacin (qe we dese@- biran en ef Cap. 19) Lesiones espontaneas Adems de los errores en la replicaci6n, las lesiones espont- reas, que son dafios que se producen en el DNA de forma natu- ral, también pueden causar mutaciones. Dos de las lesiones es- pontineas mds frecuentes son el resultado de Ia despurinizacién y de la desaminacién, La despurinizacién, la mas comin de las dos, implica la el ‘minaci6n del enlace glucosfdico entre Ia base y la desoxirribosa, ‘Mutaciones espontineas ayo 9-0-¥-0- Despurinizaeién del ONA Figura 16-7. risa te un sitio de pri (gsi) os eteon seni de DNA. El equ sic gud ina, Gitasina HOH ae ° Hee. He. ‘S-Maticitosing Tiina Figura 16-8. esaminacdn de (a) etsinn y Smetietosina, Nimero de sucesos 50 700 Capitulo 16 Mecanismos de la mutacién géniea Posicion Figura 16-9. Puriecalenes de Smeticnsina cn cn IS stios diferentes de lal Todas son resutndo de una prsiions de lor resid de Seton. Las bara a colt, Se indian ls eutaciones sin semis que apaecen tranciéa GC — AT, Los aseiscs (*) sf las lanes represent os sos en los se pela haber detetado tneambio GC -» AT sn que se proujea isha mutacin. Puede observarse que los esiduos de S-netitoxnn son puss clientes pra I atsicén GC + AT. De SO mutaciones osu independiente 4 ess en 4 sts de Smetitosinay solamente 6 estaba eh ls 11 esis no metiladas,(Forado de C. Culone¢ Narre 274, 1978, 775) ‘ya consiguiente pérdida de un residuo de guanina 0 adenina det DNA (Fig. 16-7). Una eélula de mamifero pierde exponténea- mente de su DNA alrededor de 10 000 purina durante un tempo de generacin de 20 horas a37 °C. Si estas lesiones perssteran, ciones, Se ha demostrdo que la frecuencia de Ia expansién aumenta con el tamafo de la insercién de DNA (y por tanto, presuiblemente, con et mimero de repetciones). Aparente- ‘mente, ef némero de repeticiones en los alelos premutacién en- contrados en los VNTTy sus hijas esté por encima de un cierto ‘umbral y, por tanto, la probabilidad de que se expanda a una ‘mutacién completa es mucho mayor que eel c3s0 de los indivie «duos normaes. I mecanismo propuesto para la aparicién de estas repeticio- nes ¢5 un empargjamiento erréneo deslizado durante la sitesis del DNA (como se muestra en la Fig. 16-6), que implica la ex- pansién en un solo paso de la seevencia de cuatro pares de bases CTGG. La frecuencia de mutacin extraodinariamente elevada de ls repeticiones de tres pares de bases en el sfndrome del X {régilsugiee que en las clulas humanas, por encima de un um bral de alrededor de 50 repeticiones, la maquinaria de replica- cin no puede replica fielmente la secuencia correcta, lo que da lugar a grandes variaciones en el nimero de repeticiones. ‘Una segunda enfermedad hereditaia, la atrofia muscular espi- nal y bulbar ligada al cromosoma X (conocida como enfermedad de Kennedy), también se debe ala amplifcaciGn de una repeti- cin de tes pares de bases, en este caso del tplete CAG. La enfermedad de Kennedy, que se caracteriza por debilidad y atro- fia muscular-progresiva, se produce por mutaciones en el.gen tras que los pacientes afectados tienen entre 40 y 52 repeticiones. La distrofia miot6nica, la forma més comin de distrofia mus- cular en los adultos, constituye otro ejemplo de enfermedad hu- ‘mana cuya causa es la expansién de una secuencia, Las familias susceptibles muestran un aumento en Ia severidad de la enferme- ddad en generaciones sucesivas, debido a Ia amplificacién pro- aresiva de un triplete CTG presente en el extremo 3 de un trans- crtito. Los individuos normales poseen, por témino medio, cinco ccopias de la repeticién CTG; los individuos con afeccién leve tienen aproximadamente 50 copias, y los gravemente afectados ‘is de 1000 repeticiones del triplete CTG. Ejemplos adiciona- les de expansién de un triplcte estén apareciendo continuamente, siendo un ejemplo més el de la enfermedad de Huntington. Mutaciones inducidas Especificidad mutagénica ‘Cuando observamos la distribucién de las mutaciones inducidas por diferentes mutégenos, vemos una especificidad distintiva ‘que caracteriza a cada mutigeno. Esta especificidad mutagéni- ‘ca fue observada por primera vez por Benzer, en 1961, en el sistema rif del fago T4. La especificidad surge por una «prefe- rencia» de un mutégeno dado por ciertos ripos de mutaciones (por ejemplo, las transiciones GC—-AT) y por ciertos sitios mu- tacionales (puntos calientes). La Figura 16-13 muestra la especi ficidad mutagénica en lac! de tres mutégenos que se describirén més tarde: el metanosulfonato de etilo (EMS), la lz ultravioleta (UV) y la aflatoxina B, (AFB,). Las gréficas muestran la distri- bbucién de las mutaciones por sustitucién de base que dan Tugar'a codones de terminacién de la traduccién UAG, La Figura 16-13 es similar a la Figura 9-26, que muestra ta distribucién de las -mutaciones en rif, con la excepeién de que, para laci, se cono- cen los cambids de secuencia especificos para cada sitio, lo que permite desglosar las. gréficas en cada categoria de sustitucién, La Figura 16-13 revela los dos componentes de la especifici dad mutagénica. Primero, cada mutézeno mostrado favorece una categoria de sustitucién’especifica. Por ejemplo, el EMS y la uz UY favorecen las transiciones GC + AT, mientras que la AFB, favorece las transversiones GC ~> TA. Estas preferencias esta relacionadas con los diferentes mecanismos de mutagénesis. Se- ‘gundo, incluso dentro de la misma categoria, hay grandes dife- rencias en la tasa de mutacién. Estas diferencias pueden obser vvarse mejor en el caso de la luz, UV para los cambios GC ~» AT. Alguna caracteristica de la secuencia del DNA circundante debe ser la causante de estas diferencias. En algunos casos, Ia causa de los puntos calientes puede determinarse mediante estudios de Ja secuencia del DNA, como se describi6 previamente para los residuos de 5-metilcitosina y para ciertos sitios de cambio de fase (Figs. 16-5 y 16-9). En muchos ejemplos de puntos calien- tes inducidos por mutiigenos, se desconoce todavia Ia razén cexacta de la gran mutabilidad de sitios espectficos. Sin embargo, Ja elevada frecuencia de lesiones en algunos sitios y Ia repara- {que determina el receptor de andrgenos, Los individuos norma-—_ ci6n reducida de ciertas posiciones son a veces las causas de los les tienen una media de 21 repeticiones CAG en este gen, mien- puntos calientes. i ; j + Ee bie: E Ey 3 “le Eid ed af el Fo peal a Namero de svcesos Mutactones inducidas -50- ° 100 200-300 ° 100 Sitio émbar Sitio dmbar Figura 16-13. topctcdad de los mtigenos. Se muesua la dsvibucis de muiciones en 6 sos dl peo Jct para tes mutigenos: EMS, luz UY yaflsoxna BL ara ada bara representa el mero de matciones en Sitio espectiv.Algunos pants caliente esti fuera de esa, con el nimer de sucsosindicado diectmente ‘acim del pico corspondiente. Por ejemplo, en a colesiga generda con hz UV, un ito gue cai de unt ‘eansicién GC ~+ AT est represents por 80 sucesos. Cada sito mutcionl mondo en Ie igre genera a coda ‘iba: (UAG) en el comespondieate mRNA. Las matacones se rdenan de acserdo cone pode susan de ase Lis strtcosindean as posiones de as Snetitosins. (Adaptado de. Colour y 1. H. Miler, Joural of Macular ‘Biology 117, 1977, 57%; y P.L. Foster el, Proceedings of he National Academy of Sciences USA 80, 1983, 2695) Mecanismos de mutagénesis : Los mutigenos inducen mutaciones al menos mediante tres:me~ ccanismos diferentes. Pueden reemplazar una base del DNA, alte- ‘ar una base de modo que se empareje erréneamente de forma cespecifica con otra base o daliar una base de modo que, en condi- ciones normales, ya no pueda emparejarse con ninguna base. Incorporacién de andlogos de bases. Algunos compuestos {quimicos son lo suficientemente parecidos a las bases nitrogena- das normales del DNA para que, ocasionalmente, se incorporen al DNA en lugar de éstas; tales compuestos se denominan andlogos de bases. Una vez incorporados, estos andlogos tienen propieda- des de emparejainiento distintas de las que presentan Tas bases normales; de este modo, pueden causar mutaciones al provocar ‘que, durante la replicaciGn, se inserten nuclestidos incorrectas fren- tea ellos. El andlogo de base original s6lo esté en una de las cade ‘nas, pero puede provocar el cambio de un par de nucleétidas que se replica en todas las copias de DNA derivadas de la cadena original. Por ejemplo, e! S-bromouracilo (5-BU) cs un anilogo de in timina que contiene bromo en la posicién C-5, en lugar del gri- po CH, que aparece en la timina. Este cambio no afects a los 4tomos que partcipan en los puentes de hidrogeno durante el cemparejamiento de las bases, aunque la presencia de bromo alte- +4 de forma significativa la distribucién de electrones en Ia base. 504 Capitulo 16 Mecanismos de la mutacién génica Figura 16-14. roses stematvas de empareamiento para et ‘trontourcilo (5), Ei S-BU ex wn anslogo dela mina qu ve puede incorpora enncamen al DNA como una bate. Poste un tomo de bromo en gat det grupo mei. (2) Ea su esa eo normal, el $-BU iia et comporamient de a tmin, sla qo eemplaa,enparesadose con la ‘denna. (0) Sin embargo, a presencia de on tome de brome causa con tlava frsueacis una refissibcién de os elackones, de manera qu el BU pasa parte de ou existence a for onizada rr. Ea ete estado, empara ‘on lain, mitando el compartment det sina e indacendo tut maconer darn Ia repieasion, WA (by Traneleion2. GC ==> AT Figura 16-15. Mecassmo de ‘mutagénesis del S-BU. 15-60 produce ‘tciones cuando se incorpo en una forma {Toe cambin aoe forma (a) Eas sca ceo normale -BU erparela ‘somo Is ini (-BU;)- Por tno, el BU Se corpora fete a a aeina » los ‘mparjamieto erneorpteriors com Tannin dan aga a tansiciones AT ~+ GC. (b) En sa forma ionizad, el $-BU emparja ‘como ln etosina (S-BU, Por tanto, {1 S-BU we incrpra endneamente ene 2a unin y lov emparejarienonprterires on adenina provoca ransiciones GC -+ AT. La estructura normal (Ia forma eeto) del 5-BU empareja con la adenina, como se muestra en la Figura 16-14a, pero puede cam- biat con frecuencia a la forma enol o a una forma ionizaday, la ‘ltima empareja in vive con Ia guanina (Fig. 16-14b). De esta forma, la naturaleza del par formado durante la replicacién depen 7 om, H Forma ceto normal AdeninaFormaionizada——Guanina ‘se! BU dol BU i o Normal Frecuente Motante derd de la forma en que se encuentre el 5-BU en el momento del cemparejamiento (Fig. 16-15). El 5-BU provoca casi exclusiva: mente transiciones, como se deduce de las Figuras 16-14 y 16-15, Otro andlogo muy utilizado en investigacién es In 2-amino- purina (2-AP), un andlogo de Ia adenina que puede emparejar NoH W 2AP Tiina 2AP Citosina protonada a) ») Figura 16-16. Posies serativas de cmparejamit pr a 2-aminperina (@-AP) un ange de la adeina Nomalneac, la 2APerpae co a inina (a, pe en sexta proton pune hace cn a cosa (), con la timina, aunque también puede emparejar enéneamente con la citosina cuando esté en estado protonado, como se mues- traen la Figura 16-16, Por lo tanto, cuando 1a 2-AP se incorpora al DNA mediante un emparejamiento con timina, puede generar transiciones AT -+ GC mediante emparejamiento erréneo con la citosina en las replicaciones posteriores. O, si la 2-AP se incor- ora mediante un emparejamiento.erréneo con la citosina, en ese «aso provocari transiciones GC -> AT cuando se empareje con la timina, Estudios genéticos han demostrado que la 2-AP, al igual ue el $-BU, es muy especifica en la produccién de transiciones. Emparejamiento erréneo especifico Algunos mutigenos no se incorporan al DNA, sino que en su lugar alteran una base, provocando un emparejamiento errGneo especifico. Ciertos agentes alquilantes, tales como el metanosulfonsto de etilo (EMS) y 1a ampliamente utilizada nitrosoguanidina (NG) ope-" ran de esta manera: CH, omw=n ° ee CH—-O-S—H,C ee 0 H . ot HN. NH N. Figura 16-18. ‘Mutactones inducidas vee Timina O«etitimina ——Guanina Figura 16-17. enyrjaniewo enscoesefin incite por sigiscn La alga en ee cassie eusala por EDS) Ja ‘icin 0-6 es ann, a oman en psi + liming, pe ‘Sndici#onenparnina eee con ina yguania, espeivanent, mo se mesa en gu as bacteria, onde as mutans ‘shan wld con gran tale ls rine maine eects son Sascooes OC ~ AT. logue inca qu im nlglcion Se pon 0-6 Se a anise de mayor inporanet es I mugs Aunque tales agentes aiiaden grupos alquilo (un grape etilo el EMS y un grupo metilo Ia NG) en muchas posiciones de Tas cuatro bases, la mutagenicidad correlaciona mejor con a adicign al oxigeno situado en la posicién 6 de Ia guanina, para formar (0-G-alquilguanina. Esta adicin provoca el emparejamiento cerr6neo con la timina, como se muestra en Ia Figura 1-12, 1o que produciria transiciones GC -> AT en Ia siguiente ronda de replicacién. Como se esperaba, as determinacién de la especiti- ccidad mutagénica del EMS y de In NG muestra una gran prefe rencia por las transiciones GC + AT (Vea los datos para el EMS 4que se muestran en la Fig. 16-13). Los agentes alquilantes tam- bién pueden modificar las bases de los dNTP (donde N puede ser ‘cualquier base), que son precursores de la sintesis del DNA. HA. _cHcHyc ON ot oO AL ee Bases et nitogonads Moldeole on intersi ien-191 » Agenesinterslntes (4) Estructras dels agentes comune poflavns, nara de arin © ICR-I9i. (b) Un ageme intecalane se desliza ene ls bases apldas suas en el inti dela olécula de DNA. Este hecho conduce&inerinesy deleciones de ua Unico par de auclasides.(Tomado de LS. Leman, Proceedings of the Natonl Academy of Sciences USA 49, 1963, 94) si Capitulo 16 Mecanismos de in mutacin yéaiea Los agentes intercalantes constituyen otra clase importante ‘de modificadores del DNA. Este grupo de compuestos incluye la proflavina, el naranja de acridina y una clase de compuestos {quimicos denominados compuestos ICR (Fig. 16-18a). Estos agentes son moléculas planas, que imitan a los pares de bases y son capaces de deslizarse(intercalarse) entre Is bases nitrogena- das que estén apiladas en el interior de la dable hice del DNA (Fig. 16-186). En esta posicidn intercalada, el agente puede pro- ducir inserciones o deleciones de un tinico par de nucle6tidos. Los agentes intercalantes también pueden apilarse entre las bases de tun DNA de cadena sencilla; y de esta manera, pueden estabilizar bases que estén en un 1azo durante una mutacién de cambio de fase, como se representa en el modelo de Streisinger (Fig. 16-4), Daiios estructurales en las bases. Un gran miimero de muta .genos daflan una 0 més bases, de manera que se imposibilita el emparejamiento espectfico entre las bases. El resultado es un bloqueo de la replicacién, puesto que la sintesis del DNA no continuaré més allé de una base que no puede especificar a su complementaria mediante enlaces por puente de hidrégeno. En Jas células bacterianas, este bloqueo de la replicacién puede evi- arse mediante Ia insercién de bases no especificas. El proceso requiere Ia activacién de un sistema especial, el sistema SOS (Fig. 16-19). El nombre de SOS deriva de ta idea de que este sistema se induce como una respuesta de emergencia para impe- dir la muerte de la célula en el caso de que se produzca un dato seb significativo en el DNA. La induccién de SOS es un gitimo re- curso, que permite la supervivencia de la célula a cambio de un cierto grado de mutagénesis. No esti claro eémo funciona exactamente el sistema SOS, aunque se sabe que en E. coli depende al menos de tres genes: recA (que también esta implicado en el mecanismo de recombi hacién general), umuC y umuD. Los modelos actuales para el sistema SOS sugieren que las protefnas UmuC y UmuD interae- cionan con el complejo de replicacién de la polimerasa de DNA IL, provocando la relajacién de su normalmente estricta especi- ficidad y permitiendo asf Ia replicacién més alld de las lesiones que producfan el bloqueo. La Figura 16-19 muestra un modelo para el sistema SOS, que cen este ejemplo actin después de que la polimerasa de DNA III se detenga en un tipo de dafio denominado fotodimero TC. Puesto que la replicacin puede proseguir aguas abajo del dime- 10, se geniera una regiGn de DNA de cadena sencilla. Esta regién atrae a la proteina estabilizadora Ssb, la protefna de unién a ca- dena sencilla, asi como a la protefna RecA, que forma filamen- tos ¢ induce la sintesis de las protefnas UmuC y UmuD. La pro- tefna UmuD se une alos filamentos y es cortada por Ia accién de Ja proteina RecA, dando lugar a una versién més corta denomi- ‘ada UmuD’, que a continuacién se une ala proteina UmuC para formar un complejo que permite que la polimerizacién del DNA continie mas allé del dimero, aiadiendo bases con una elevada frecuencia de error (véase la Fig. 16-19). 060800, Polimerasa de‘DNA Ill - Umud Figura 16-19. sisens OS. La polimeasa de DNA 1, most en aul deine en nese como ef Fetter “TC mosrado en afi, Jo que genera uns regi de cadean sencila ue ata aa prtinn, Ss (pera eacare) y 4 1a RecA (pp clare), goe forma filaments. La presencia de los Slamenios RecA permite qe Ia ofl simetice UinuD (telos rojo), que escorts or Ia acide Reed pra dar tga $ UmaD (lesion rosa, y ‘UmuC (valor aman). Uma feema us complejo con Uma? {ue penite qe In poimeraaide {el DNA continde mas ale (eI sin Boqueadora ’ Por 1o tanto, os mtigenos que dan skos de emparea- mento espectico de buses dependen el vstemna SOS para 5 tecin, La eateora de los mutigenos dependents del sistema SOS os tports i qu clays 4 mys Cos ate, que eausanefncer(arcindgenos, como la luz ultraviolet, Ia bMaczinaB, yl bensbtajean Gs Cone al i). {De qu forma permite el sitema SOS la ecuperacidn de as imaaciones tas la ugéness? Damimiye assem S08 la fdelidad dea repiacin del DNA tanto (pra pena eplica- cién a pesar de las lesiones) que se producen errores en la replica Sib incluso en el DNA no dado? Seta hiptesis fuera comeo- tm meyers de, la mutaconey_poctads por dferetes tmtigeann depndiocioe de SOS sei sae, 6n haga 8 et capone cada maligne, Layer oles pensions 9 pwonducsfan por a propia accn del sera SOS sobre el DNA no dado, En este cas, el migeno devempefia la nein indrecta de induc al sistema SOS, Sin embargo, lo estos sobre Ia eopecificad nmagénin han demoaado que noes eto Jo que sucede, Por el contrario, los diferentes mutigenos depen- dienes de SOS poeen eoecficdades maeadamene distin, ‘como se puede comprobar para Ia luz UV y la aflatoxina B, en la * Figura 16-13. Cada mutégeno induce su propa dstrbucién de mu- tuciones Por Io tanto, ls mutaciones deben generarse en respuesta 4 pares de bases daados espeificns. El tipo de lsindifiere en ‘muchos casos. Algunas de las lesiones més ampliamenteestudiadas incluyen los fotoproductos de Ia luz UV y 10s sitios apurinicos. {La luz ultravioleta genera varios fotoproductos del DNA. Dos Jesiones diferentes que ocurren en residuosadyacentes de pirimi- «inn —elfotodimero ciclobutano-pirimiina y el fotoproductn 6-4 (Fig. 16-20) —se han relacionado estrechamente con la mutags- resis Estas lesionesintrfieren con el emparejamiento normal de Mutacionesinduchdas Si Figura 16-20. .) Famet dl dinero ciabusno- Plcmiding. La uz ultvileta estima a format de un anil de ‘ielobutan (verde) ene ds prmiinassiacemts de a ‘misma cadena del DNA medint saci sobre Ios doles. ‘ences 36 (b) Bsructura del fxpeeducto 6-4, La estuctrs se fonna ene as psicions C6 y Ct de ds piimiias adyacnts, por lo gene 5-003" y $-TC-, prticindo ‘na pertubacin signfcativa ent exractra oeal del ble ce (Pate tomas de EC. Frederp, DNA Repu Copyright © 1985 de W. H. Freeman and Company pane tomada de EC Prodherg, DNA Repair, Copyright © 198S de W. 'H, Freeman and Company. Adaptado de A.M. R. Taylor, . M.Rosney y JB. Canpbel, Cancer Research 38,1979, 1046-1080) Jas bases; por tanto, se requiere/a inducciGn del sistema SOS para 1a mutagénesis. La insercién incorrecta de bases frente a los foto- productos de la luz UV tiene lugar en la posicién’ det dimero, siendo més frecuente para los dimeros 5-CC-3' y 5TC-3', Le ‘mutacin mds frecuente es la transicién CT, aunque la luz UV también estimula otras sustituciones de bases (transversiones) y cambios de fase, as{ como duplicaciones y deleciones. La especi ficidad mutagénica de la luz UV se ilustra en la Figura 16-13. Radiaci6n ionizante La radiacién ionizante causa Ia formaci6n de moléculas ioniza- ddas y excitadas que pueden dasar los componentes celulares y el DNA. Puesto que los sistemas biol6gicos poseen una faturaleza acuosa, las moléculas generadas por los efectos de la radiacién jonizante sobre el agua producen la mayor parte del dallo. Se ‘riginan muchos tipos diferentes de especies reactivas del oxige 1no con radicales superdxido, como el -OH. Los productos de reaccién bioldgicamente mds relevantes son el “OH, el O: y el H,O,, Estas especies pueden dafiar las bases, dando lugar a dife rentes productos de adicign y de degradaci6n. Entre los ms co. rrientes, que provocan mutaciones, se encuentran el glicol de ina y el 8-oxodG, representados en la Figura 16-10, La radia ionizante puede causar la rotura del enlace N-glucosidico, de las cadenas del DNA que son las tesponsables de Tos efec- Tetales de esta radiacién, ‘aflatoxina B, es un carcin6geno poderoso, que origina si- tio§ apurinieos tras la formacién de un producto de adicidn en la én N-7 de la guanina (Fig. 16-21). Los estudios de los sitios aputinicos generados in viero han demostrado la necesidad del 508. Capitulo 16 Mecanismos de la mutacién génica Guanine Afatoxina By 0 0 Ho ° oS oc HNN Exqueleto de ONA Figura 16-21. nial DNA de la sfoxia Baiada metbiicament sistema SOS, que nserta generalmente una adenina frente al sitio apurinico, As los agentes que producen la despurinizacién en tos residuos de guanina deberfan induct preferentemente transversio- nes GC -» TA. Puede ver por qué la insercién de una adenina frente aun sito apurnico que deriva de una guanina dara lugar a «sta susiucidn en la siguiente ronda de replicacia? La Figura 16-13 muestra el anisis genético de muchas sustituciones de ba- ses inducidas por ln AFB. Puede verificar que, de hecho, la ma- yorfa de las sustituciones son transversiones GC —» TA. LAAFB, es un miemlro de una clase de crcindgenos quimicos «que originan productos de adicién voluminosos cuando se unen covalentemente al DNA. Otros ejemplos inciuyen los dol epéxi- dos de benzo(a)pireno, un compuesto producido por los motores de combustisn interna. En euanto a otros muchos compuesto di- ferentes, no est todavia claro qué productos de adicin desempe- Tian cl papel principal en la mutagénesis. En algunos ass, la especificidad mutagénica sugiere que a despurinizacién puede constitu una etapa intermedia de la mutagénesis; en otros, to- davia se deseonoce eusl ese! mecanismo implicado. COROLARIO Los mutagenos inducen mutaciones mediante varios iecanismos diferentes, Algunos mutagenos mimetizan las Anilisis de reversion El andlisis por reversién de una mutacin puede aportarnos in- formacién sobre la naturaleza de Ia mutacién o la accién de un mutdgeno. Por ejemplo, si una mutacién no puede revertirse por Ja aceién del mutdgeno que lo indujo, entonces el mutgeno debe ejercer algén tipo de accién unidireccional relativamente specifica. En una mutacién inducida por hidroxilamina (HA), por ejemplo, seria razonable esperar que la miutacién original fuera GC -+ AT, que no podria revertirse por otro hecho espect- fico GC -+-AT. De igual forma, las mutaciones que pueden re- verti con proflavina son con toda probabilidad mutaciones de ‘cambio de fase: por lo que, las mutaciones inducidas por écido nitroso (NA), que son transiciones, no deberfan ser revertidas ‘con proflavina, Las transversiones no pueden inducirse con los agentes mer ‘cionados anteriormente, aunque se sabe de una forma definitive que son comunes entre las mutaciones espontineas, como de- _muuestran Jos estudios de secuenciacién de DNA y protefnas, De cesta forma, si en el test de reversién una mutacién revierte es- pponténeamente, pero no lo hace en respuesta a un motgeno de ‘ransicién © a un mutigeno de cambio de fase, entonces, por climinacién, se trata probablemente de una transversisn. E] Cuadro 16-1 resume algunas predicciones basadas en supo- siciones sencillas sobre el andlisis de reversién. Recuerde que las especificidades mutagénicas dependen del organismo, del ‘genotipo, del gen estudiado y de la accidn de tos sistemas biol6- ‘Bicos de reparacién. Observe que el tipo de I6gica empleada en cl andlisis de reversién depende en gran manera de la suposici¥n de que los hechos de reversién no se deben a supresores © a * elementos transponibles; cualquiera de ellos dificltarfa mucho las deducciones del andlisis de reversién, Relacién entre mutdgenos y carcinégenos ‘Se acepta que existe una clara correlacién entre mutagenicidad y carcinogenicidad. Un estudio ha demostrado que 157 de 175 car- ‘cindgenos conocidos (aproximadamente el 90 %) también son rmutégenos. La teoria de la mutacin somética para ef eénces sostiene que estos agentes producen céncer mediante la induc- cién de mutaciones en las células somiticas. De ello se deduce ‘una gran importancia de la mutagénesis para nuestra sociedad. MUTAGENO EMPLEADO EN LA REVERSION Mutacion NA HAO EMS Reversion Proflavina esponténea ‘Transicidn (GC ~ AT) ree seas Mutaciones inducidas y cancer humano. El conocimiento de la especificidad de los mutaigenos en las bac- terits ha Hevado a la implicaciOn directa de ciertos mutigenos mbientsles como causas del cfincer en la especie humana, Desde hace tiempo se sospecha que la luz ultraviolet y ta aflatoxina By éstin relacionadas con el cncer de piel el de higado, respectiva- mente. En la actualidad, el andlisi de las seevencias del DNA de mutaciones en un gen humano ha aportado pruebas directas de la implicacin de estos compuests en el edncer. E.gen en cuestién se denomina p53 y es uno de los varios genes supresores de tu- mores: genes que determinan proteinas que suprimen la forma- cin de tumores (estudiaremos estos genes con mayor dete en 1 Cap. 23). Una considerable proporcién de pacientes con eén- cer presentan mutaciones en genes supresores e tamores. El cncer de higado es muy frecuente en el sur de Africa y el ‘este de Asia, donde se ha correlacionado la alta incidencia de ‘ste tipo de céncer con una elevada exposicién a AFB, Cuando se analizaron mutaciones en p53, se encontraron transversiones G + T, las mutaciones tipicas inducidas por AFB,, en pacientes con eéncer de higado del sur de Africa y del este de Asia, pero ro en pacientes de esas regiones con edncer de pulmén, colon 0 ‘mama. Por otro lado, las mutaciones en p53 de pécientes con cancer de higado de éreas con baja exposiciéi a AFB, no eran transversiones G = T. Estos descubrimientos, junto alos resul- tados de los estudios de Ia especificidad mutagénica de la AFB, (vase Ia Fig. 16-13), nos permiten eoncluir que las mutaciones inducidas por AFB, son una causa principal del cfncer de higado nl sur de Attica y el este de Asia La secuenciacién de las mutaciones en p53 ha véforzado tam- bien la relacin entre la luz UV y los c&nceres de pel humanos La mayorfa de los careinomas invasivos escamosos analizados hasta ahora en Ia especie humana presentan miutaciones en p53. Todas ellas son mutaciones en sitios con dos pirimidinas, la ma- yorta de los euales son susttuciones C -> T cuando C es la piri ‘midina en Ia posicin 3’ del dimero'TC, Ademés, varios tumores presentan mutaciones en p53 causadas por cambios dobles de bases CC TT, que aparecen con mayor frecuencia entre las mutaciones inducidas con luz UV. I medio ambiente actual expone todos los individuos a una ampliavariedad de productos quimicos, en forma de medicamen- tos, cosméticos, conservantes alimenticis, pesticides, eompuestos utlizados en I industria, contaminantes, et. Se ha demostrado que muchos de esos compuesto son mutégenosy cacinggenos, Algu- nos ejemplos son el conservante alimenticio AF-2, el fumigante alimenticio dibromuro de etileno, el medicamento hycanthone (em- pleado contra el esquistosoma), varios aditivos de ites para el ca- bello y el compuesto industrial cloruro de vnilo, Todos ellos son Potente y, en consecuencs, algunos han sido objeto de controles suberamentales. Sin embargo, cada semana aparecen en el merca- do cientos de compuestos quimicos nuevos, ;Cémo se puede comprobar Is earcinogenicidad de un nimero tan amplio de nue- vos agentes antes de que la poblacién quede expuestaa ellos? El test de Ames ‘Se han ideado muchos sistemas para detectar la carcinogenici- dad, Se trata de pruebas que duran mucho tiempo y que normal- Relacén entre matigenos y carelnégenos ho. 1500 Colonia revertientes por paca 8 g 0 204 60 BO 100 120 140 Dosis de afstoxina 8 (ng) Figura 16-22. Restads el ex de Amo en los ques musta lo ‘mutageniidad de a aflutoxina 8, tambien un potent crsindgen. TALOO, ‘TALS y TAIS3S son estes de Salmonella ie levan diferentes mutaciones axowscas his. La erp TALOO cs muy sesble «le reverin ‘meant cambios de pres de ben Las exspes TAISIS y TAIS3S son sensibls ala eversn mediante mutacones de cambio de fe. Lot resltados de est musian qu a sfltxinsD, eu poteste mtgeno «ue produce cambios de pares de bases, pero no cuios de fs. Toma de ‘McCann y BN. Ames, en Advances Modern Tenology, Vol 5. Eto or W.G. Flamm y MA. Mebinsn. Copyright © de Hemisphere Publishing Cor, Watingon, DC) ‘mente implican una investigacién Iaboriosa con mamferos pe- ‘quefios. Las pruebas mas rpidas existentes emplean microorga- nismos (como hongos o bacterias) y detectan la mutagenicidad ‘mas que Ia carcinogenicidad, La prueba més ampliamente utliza- da fue desarroliada en los aiios setenta por Bruce Ames, que rab {j6.con Salmonelia typhimurium. El test de Ames utiliza dos muta- ciones de auxotrofia para la histidina, que revierten por diferentes ‘mecanismos moleculares (Fig. 16-22) Mediante tSenicas genéti- cas, se han incorporado propiedades adicionales a estas estirpes ‘que las hacen id6neas para la deteceién de mutigenos. En primer ugar, levan una mutacién que inactiva el sistema de reparacion ppor escisién (que describiremos més tarde). En segundo lugar, evan otra mutacin que elimina la cubierta protectora de lipo- ppolisacdrido de la estipe silvestre de Salmonella, lo que facilita In entrada a ta eélula de muchos productos quimicas diferentes. Evolutivamente, las bacterias estin muy alejadas de la especie humana. ;Pueden tener los resultados de una prueba bacteriana alguna significacién paralla deteccién de productos quiimicos pe- 1igrosos para la especie humana? En primer lugar, hemos visto 4que la naturaleza genética y qutmica del DNA es idéntica en todos os organismos, de forma que un compuesto que actile ‘como mutégeno en un organismo es probable que tenga un efec- to mutagénico en otros organismos. En segundo lugar, Ames sto Capitulo 16 Mecanismos de la mutacién génica (a) © Figura 16-23. conversién nebslica del benzo(ypreno (BP) en un Par de bases rtigeno (y earingeen). El benzoapreo pase por diferentes caps (a) ‘Uanina-citosina __conforme teva haciendo mae soluble en agua pra exc. Uno fn el DNA els itemedisios de este proceso, un diol epénido (2), es capa de reacionar et ‘on Ia goanina del DNA (Ft resccn conduce «un dissin de a ae ‘olga de DNA (6) y a mutacones, Et henalapten es, po to, ‘un mundgeno para cualquier edule que produzea este imermediario, Segin a T.B. Weintein ta, Science 193, 1976, 892; de J. Cais, Cancer: Scence and a” Nye Soci. Coptight G 1978 por W.H, Freeman and Company) 5. Benzolaipireno tH bacteriano, En Jos mamfferos, muchas de las transformaciones importantes de los compuestos quimicos ingeridos tienen lugar en el higado, donde las sustancias tomadas del exterior son deto- Ho" xificadas 0 descompuestas. En algunos casos, la accién de las a HO cenzimas del higado puede crear un compuesto t6xico o mutige- ‘no a partir de una sustancia que originalmente no era peligrosa (Fig. 16-23). Ames incorpors enzimas del h(gado de mamiferos su sistema bacteriano, empleando higado de rata para este fin, La Figura 16-24 ilustra el procedimiento utiizado en el test de Los productos quimicos detectados por este test pueden consi- derarse no s6lo como potenciales carcinégenos (fuentes de mu taciones somiéticas), sino también como posibles causantes de ‘mutaciones en las células germinales, Puesto que esta prueba es sencilla y barata, muchos laboratorios de todo el mundo com- prueban de manera rutinaria la mutagenicidad y earcinogenici- dad de muchos compuestos potencialmente peligrosos. | 3 Ho! zy @ His- = Hie? Test de reversién Ho” HO Figuen'16-262" Rise det pets Be el teehee Tea sepeseraa ic ar tation de mcr Sat ee eee reheat e: SZastenaa ycabeakn as opti Peter por pershebe Bh cle ond Senanigrascccmnie Diigregasén Conioats cour enime hats a ete 3) Terese steer miele Sle apa cco poses rama: Casas ee Pierre biemertotaie Sonainmtensnsiss Seer Seer Sees SES aes = = Tndueeion Mezciar y sembra Mecanismos biolégicos de reparacién ‘Como hemos visto en secciones anteriores, existen muchas ame- nazas potenciales para la fidelidad de la replicacién del DNA. No s6lo hay una tasa de error inberente a la replicacién del DNA, sino que también acurren lesiones espontineas que af den nuevos errores. Ademds, Ios mutigenos presentes en el am- biente pueden daiiar el DNA y aumentar enormemente Ia tasa de mutacién, Las eélulas vivas han desarrollado una serie de sistemas enzi- méticos que reparan los dafios en el DNA de varias formas. El fallo de estos sistemas conduce a un aumento en la tasa de muta cin. Como veremos més adelante, varias enfermedades huma- nas que incluyen a ciertos tipos de céinceres pueden atribuirse a efectos en la reparacién del DNA. Examinaremos primero al- gunos de los mecanismos de reparacién caracterizados, para considerar a continuacién cémo integra la célula estos sistemas en una estrategin global de reparacién, Los mecanismos de reparacién se pueden clasificar en varias categoria. Prevencién de los errores antes de que ocurran Algunos sistemas ‘enzimaticos neutralizan los compuestos po- tencialmente dainos antes de que reaccionen con el DNA. Un ejemplo de estos sistemas es la detoxificacidn de los radicales super6xido producidos durante el daito oxidativo del DNA: la enzima dismutasa del superdxido cataliza la conversi6n de los radicales superdxido en peréxido de hidrégen6,-y la enzima en- talasa, a su vez, convierte el perdxido de hidrogeno en agua’ Otro mecanismo que evita loserrores antes de que ocurran de- pende del producto proteico del gen mutT: esta enzima impide Ia incorporacién al DNA de 8-oxodG (véase Ia Fig. 16-10), que aparece por I oxidacién de dGTP, mediante la hidr6lisis del twifosfato de Ia 8-oxodG a la forma monofosfato, Reversién directa del dafio La forma ms simple de reparar una lesi6n, una vez que ha ocu~ rrido, es climinarla directamente, regenerando a continuacién la base normal. No siempre es posible lareversin, ya que algunos tipos de dafios son esencialmente ireversibles. Sin embargo, en unos pocos casos, Ia lesiones se pueden reparar de esta forma Un ejemplo es el fotodimero mutagénico causado por la luz UV (véase Ia Fig. 16-20). El fotodimero de pirimidina-ciclobutano puede repararse con una fotoliasa que se ha encontrado en bac terias y cucariotas inferiores, aunque no en 1a especie humana. La enzima se une al fotodimero y lo rompe en presencia de cier- tas longitudes de onda de luz visible, regenerando las bases ori- sinales (Fig. 16-25). Esta enzima no puede operar en la oscuri- dad, asf que en esta condicién se necesitan otros mecanismos de reparacién para eliminar el dafio producido por la luz UV. En plantas y Drosophila se ha detectado una fotoliasa que elimina los fotoproductos 6-4. Las transferasas de grupos alquilo también son enzimas implicadas en la reversiOn directa de las lesiones. Eliminan ciertos grupos alquilo afiadidos a la posicién 0-6 de la guanina Mecanismos biolgieos de reparacién 5H Timine Timina Esqueleto de ONA Fotodimero blanca un uv ae 338 ee 2 Figura 16-25. Repurcidn de un ftotimeo de prmidina indigo porlae UV mediane una enna foromeactvane otis La enn econoce 2 flxodiner (ea ee caso, un dinero de ina yse une a6. Bn presencs eta, a fttias liza wu energi pr romper e mero en 8 respetivos monsmeros.(Segin JD. Watson, Molecular Biology of the Gene, 3 ed Copyright © 1976 por W. A. Benjamin) (Fig. 16-17) por agentes como la NG y el EMS. La transferasa de ‘grupos metilo de E. coli estébien estudiada, Esta enzima trans: fiere el grupo metilo desde la O-6-metilguanina un residuo de cistefna de la proteina. Cuando ocurte esto, la enzima se inacti- vva, de forma que este sistema de reparacién puede saturarse si el nivel de alquilacién es lo suficientemente elevado, Vias de reparacion por escision Reparaci6n general por escisién. Este sistema, denominado también reparacién por escisién de nucledtidos, implica la rotw ra de dos enlaces fosfodiésteres sobre Ia misma cadena, uno & cada lado de Ia lesi6n, 1o que da lugar Ia escisién de un oligo rucledtido, Esta escisién deja un hueco que se rellena mediante ‘una sfntesis de reparaciGn y queda sellado por una ligasa. En los procariotas, se eliminan 12 6 13 nuclestidos; mientras que, en Jos eucariotas, se eliminan de 27 a 29 nucle6tidos. La Figura 16-26 representa los patrones de incisiones en cada caso. En E, coli, los productos de los genes wv7A, B y C constituyen Ja esciucleasa. La proteina UvrA, que reconoce el DNA dais do, forma un complejo con UvrB a la que conduce al sitio lesio- nado antes de que se produzca la disociacién. A contimuaciéa, la protefna UvrC se une a a UvrB. Cada una de estas dos subunil- des realiza una incisi6n. Un oligonuclestido corto de 12 nucles- tidos queda desconectado del resto y se libera por Ia accién de otra proteina, la helicasa Il. La Figura 16-27 muestra con detalle estos hechos de escisién, La escinucleasa humana es considerablemente més compleja ‘que la bacteriana ¢ incluye al menos 17 protefnas. Sin embargo, las etapas bésicas de accién son las mismas gue en E. coli 52 Capitulo 16 Mecan Figura 16-26. qed lesion en este caso, un diero de tminn— que ge mesa en races, Patrons de incision dels esincleans de E, colt mina. Los puntos js inca os pares de inn en una Acoplamiento entre la transeripelén y Ia reparacién. La implicacién de TFITH, un factor de transcripcién, en la repara- cin por escisin sirve para recalcar ef hecho de que la transcrip- cién y la reparacién estén acopladas. Tanto en los eucariotas Figura 16-28. La epsracidn pr exc de milton exh acoplda 4 [seein ste model par "epuacdn acolo 2 las fe amerika Gel svance de a polinerass de RNA (os) ‘nie wn cambio conformaccnl, compleio de repiiescion Factores price ay in a coplamien io al THI y otros factors lugar pata evar a cabo ls im La raacpcin onde conta normale. Terao de @ : Incisién wo) poll ante Vigasda do DNA off 3 Figura 16-27. Repreenacisn csquematzaa de los sconecinients esque inci eliza porta escineleasa UwABC de ln subunidd UveA forma complejo con is wibaniad Ue, sa qe conduc al sti dado antes de ques produzca I dsociscnyA coninascsn, como se moesim en In fgra, la elicas de DNA Il medi la iberacion de tn segment de DNA geerado por dos icsiones eo la misma cadena el DNA. La proteins UviC es desplazad también en este momento, La ‘ness de reprneionsobeigiene dspaza a Uv. (Tomado de EC. Feecbers G.C. Walker y W. Sede, DNA Repair and Matagencsis, Copyright © 1995 de the Amerian Society for Miesbilogy) como en los procariotas, hay una reparaci6n preferente de Ia ex dena de DNA que se transcribe en los genes que se expresan activamente, La Figura 16-28 describe un mecanismo para este acoplamiento. Acortamiento de transerito yfactores Complejo ave acoplan Is reparacion de eiongacisn / Lesion Complejo dereparacion Transerito de RNA SIECES ES IS” gee Q eeces 9 22 La glucosiass de DNA rcrecreercer@ bee of Sear cae Figura 16-29. Accisa de las ghuosltas del DNA. Las shucossas clminan las Bases aerada dejando un sto AP. Coo posteriori, esto AP et ‘cid por las endonuclssas AP representa en la Figua 1630 (Segin Lewin, Gener. Copyright © 1983 de Joba Willey.) SES ISSISSIS gWae@ag@ag&a Se a a $d 3% akaqaWa af go8 9 [= = Seen | rnuevo DNA SOTRSEE ONS a&aa@aakaaka ES salle feria SoSESS SEE OS aackqokagea Figura 16-30. _Reparacdn de sts AP (purnicos 0 apirmidinicos). [as endonulesas AP reconocen los sitios APy conan los enlaces fosoaésee Un timo de DNA es eiminado por uns exonulessy el husco corespondiete se ellena poe medio de a poimerasa II igasa de DNA. (Segn B. Lewin, Genes. Copyright © 1983 de John Wiley.) Mecanismo bioligicos de reparaciin 3. ‘Vias de escisién especifieas. Ciertas lesiones son tan sutiles que no causan una distorsién 1o suficientemente importante ‘como para ser reconocidas por el sistema general deteparacién por escisiGn determinado por los genes wrABC y sus homélogos de las células superiores. Por tanto, se necesitan otras vias de reparacién por escisiGn adicionales. Via de reparacién mediante glucosilasas de DNA (reparacion pporescsiGn de base). Las glucositasas de DNA. no rompen los enlaces fstodiéstres, sino los enlaces N-glucosdicos (base-azi- ca), liberando la base alterada y generando un sitio apurinico 0 spifimidinico, denominados ambos como sitios AP, ya que son bioguimicamenteequivalentes(yéase la Fg. 16-7), Esta etapa ini- cial se muestra en la Figura 16-29. El sitio AP resultante es repa- rado a continnacién por una via de reparacin mediada por la endonucleasa AP (que se describirs en el siguiente subapartado) sten numerosas glucosiisas de DNA. Una de ells, la glu- cosilasa de urailo de DNA, elimina el uracilo del DNA. Los residuos de uracilo, que se producen por la desaminacién espon- tinea de la citosina (Fig. 16-8), pueden dar lugar a una transiién Nc = Teuando no se reparan, Es posible que la pareja natural de Ja adenina en el DNA sea la timina (5-metiluracilo), y no el uni cilo, para permitir el reconocimiento y la escisién de estos resi= ‘duos de uracilo. Si el uracilo fuera un constituyente normal del DNA, este sistema de reparacisn no seria posible. Hay también una glucosilasa que reconoce y escinde la hipo- xxantina, el producto de Ia desaminacién de la adenina. Otras glu- cosilasas eliminan bases alquiladas (como la 3~metiladenina, 1a ‘3-metilguanina y la 7-metilguanina), purinas con anitlos abier- tos, bases daifadas oxidativamente y, en algunos organismos,fo- todimeros producidos por Ia luz. UV. Todavia se siguen descu- briendo nuevas glucosilasas. Via de reparacién mediante la nucleasa AP. Todas las céln- Jas contienen endonucleasas que atacan los sitios que quedan tras la pérdida esponténea de residuos de purina o pirimidina ‘Las endonucleasns AP resultan vitales para la célula ye que, como se apunt6 con anterioridad, la despurinizacién espontines es un hecho relativamente frecuente. Estas enzimas introducen hendiduras en la cadena mediante Ia rotura de enlaces fosfodis- teres en los sitios AP. Esto promueve un proceso de reparacién. por escisién mediado por tres enzimas adicionales: una exona- cleasa, la polimerasa de DNA 1 y laligasa de DNA (Fig. 16-30) Dada la eficacia de la ruta de reparacién por la endonucleasa AP, ésta puede ser la etapa final de otras vias de reparacién. De esta manera, silos pares de bases daiiados son escindidos, deja do un sitio AP, las endonucleasas AP pueden completar el resta- blecimiento de la constiucin silvestre. Esto es Io que ocurre en Ja via de reparacién por glucosilasas de DNA. Elsistema GO. Dos glucosilasas, los productos de los genes ‘mut! y mut¥, actiian conjuntamente para climinar las motaciones causadas por las lesiones producidas en el DNA por el 8-oxoG, © GO (véase la Fig. 16-10), Estas glucosilasas, junto al producto del gen mutT mencionado anteriormente, forman cl sistema GO. ‘Cuando se generan lesiones GO en el DNA, por dafio oxidativo eesponténeo, una glucosilasa determinada por muti elimina 1a lesin (Fig. 16-31). Aun asi, persisten algunas lesiones GO que sis. Capitulo 16 Mecanismos de In mutacién géaica a 90 ©) =o Replicacién Reparacion <=0 050 = 9=0 => 90 6 8 Figura 16-31. _sisema Go. (a) Las lesiones 80x04 se eiminan meine I cca del rteoa MutM, dejan un sto AP qe es reparad pox edonaceasesysfaess de epaacién. (Sin embarg, cuando se facta que Ls poimerass que itervonen en ln eplicsciénoperen rete = Ines, generaimente aden sn rsdvo de A. Ese emparcjamintoerénca ‘fa ugar al cambio GC — TA, per a potenu MutY elimi la A, ermiendo la reparacio del so AP rest (c) Cando las polmerats ‘Ge reparacie open fe 3 la lesa f-oR0dG, resaoran con peferecia una C fet a ést, dando ot oportunidad a protean MutM para lamina a esi, cemparejan errGneamente con la adenina. Una segunda glucosila- sa, el producto del gen mutY, elimina la adenina de este empareja- miento ertineo especifico, llevando al restablecimiento dela cito- sina correcta mediante sintesis de reparacién (mediada por Ia ppolimerasa de DNA 1) y permitiendo la subsiguiente climinacién de la lesién GO por el producto del gen muti. El producto del gen mucT impide la incorporacién de GO fren- te ala adenina. Se han detectado los genes humanos homélogos alos mutT, mut y mut. Reparacién posterior a la replicacién Reparacién de emparejamientos erréneos. Algunas vias de reparacién pueden reconocer errores. incluso después de que haya tenido lgar la repliacion. Uno de estos sistemas, denomi- nado sistema de reparacién de emparejamientos erréneos, detects los emparcjamientos erréneos que se producen durante Ja eplcacién, Suponga que tiviera que diseharun sistema enzi- tio gue pudiera repararervores dela replicaién, ;Que debe ria ser capaz de hacer este sistema? Al menos tres cosas: 1. Reconocer pares de bases mal emparejadas. 2 Determinar cual de las dos bases det emparejamiento erx6- neo es Ia incorrecta, 3. Escindir la base incorrecta realizar la sitesis de reparacin El segundo punto es la propiedad més importante de dicho site ‘ma. A menos que fuera capaz de discriminar entre Ia base co- rrecta y la incomrecta, el sistema de reparacién de emparejamien- {os errdneos no podria determinar la base que debe ser escindida, Por ejemplo, si se produce un emparejamiento erréneo G—T como resultado de un error en la replicacién, ;6mo podria de~ {erminar el sistema si la base incorrecta es Ia G o la T? Ambas El complejo enzimatico ‘+ reconoce el emparejamiento 2 ‘rroneo en el DNA hemimetil 43 jaa | Sintsis de roparacion (is Yrmetlocisn complet dl NA ode Figura 16-32. Molo pan rparncin de enpursjanienos erneos e° 6 col, Poe qo} DNA se me ean oso eninics Gb zmoosn aA de na scence GATC, la ade rec ictal tetra matin nmedianete dsp de arc det DNA ELDNA de abe cadena hommes ar po ae econ pr el sistema de eparcign de enero ents pomaidenis dt cnt In aden vj Ia ea La gra me un praca tntnco GT El tems de epraci de enarjanients ees rcnse tosses mal emptor © une eh, Senin Ie ceo, covet (I vn) yor ser aque tase ei DNA de co cadena emimela a earn, ccoe ise incor de a cade reign sinteizala Elster de sess de eqracién rete per bases toa Sega Cider, DNA Rear. Copy 1985 de W.H ‘eoman aad Compny) | son bases normales dei DNA. Sin embargo, los errores en la replicacién se producen por la incorporacién errénea de bases en la cadena recién sintetizada, de modo que es la base de esta ca- dena la que debe ser reconocida y escindida, Para reconocer Ia cadena vieja, molde de Ia cadena recién sin- ‘etizada, el sistema de reparacin de emparejamientos erxéneos seen mms Etapa 1 a Wed WV [eee @ se nomads ere, @ vas foonan un comleje. Musi cra a cadena rca sictizada (no mei) yl exoncleasa de depradacio araves lst del empareamiento treo dejande un amo peqeto de caden sencil. (3) La protein de ‘min aden secils (Sb) protege la epdn de cadena seca, (4) La ints Ge reparacin y lignin rellenn el hase (Tomado de 3. in, Trends in Genetit, Vol. 10 Elsevier Treads Journals, Cambridge, UK, 1955) Mecanismos bioligios de reparacion "8 am mm aT MMS GMM AAAARAA Me amma TTT TT Tm MECH MAAAAAAAAMBE Reparacién de emparcjmintos eninsos oI expecie humana (1) Los empacamiestoserineos yl bases mal linea apercen rae a replicon. 2) La proven de vin & GT (GTBP) y a prtine humana boéloga MS (ASHZ) reconace los emparejamientos ‘comets. 3) Dos proteins adcionales, RPMS? y MSIL, se oorprts pra format un complejo de rpuacn de mayor nao. () Fl emparenmien terénco Se repr despds de nein del DNA, la sites de repaacn 9 I gti Tomado de P. Karen, Science 268,19, 1857) de las bacterias aprovecha el retaso normal en la metilacign Posterior a la replicacin de la secuencia sO aoe On AGS La enzima metiladora es la metilasa de adenina, que produce 6 mefladenina en cada una de ls cadenas. No obstane, lena tarda varios minutos en reconocer y modificar las secuencias GATC recign sintetizadas, El sistema de reparaci6n de empateia- mientos erréneos acta durante ese periodo de tiempo, ya que ‘puede distinguir las cadenas viejas de las nuevas por el patrén de metilacin. La metilacion de Ia posicién 6 de la adenina no afecta al emparejamiento de las bases, aunque proporciona une etiqueta propiada que puede ser detectada por otos sistemas enzimticos La Figura 16-32 muestra Ia horquilla de replicacién durante Ia comreceién dé Emparejamientos erréneos. Observe que inmedia- tamente después de tener lugar Ia replicacin, Ia tnica cadens «que esté metilada en las secuencias GATC es la vieja ‘Una vez que se ha identticado el sitio mal emparejado, el sistema de reparacién de emparejamientos ersineos corrige el error. La Figura 16-33 ilustra un modelo para explicar cémo el sistema de reparacin lleva a cabo la correccién en F. coli. I sistema de correccin de emparejamientos exr6ncos se he caracterizado también en la especie humana. Dos de ls protet- 516 Figura 16-35. rsquems dein repncion posterior a In replicacidn, (a al epi por ‘combina, fa epics sls rors ann Ist logesdor,deando un huec ea neva cadena. Una proteina dependent de rec rllens ego el hie, tempeando ona porn de I cadena penta ‘puesta (rains 1 a compementidad del DNA, ct nyeco se rellen con at bases coca, Finalmente, a ‘rotsna RecA ropa el hue a a cadena parca. () nl sistema S08, cuando e pat de replicaci aleaza un esi loquendry, ema ‘de repracdn ima drectament el mero recesaio de bases (a mean incomes) frente Is esi Ia replicacin cota sin dja inginhoeco, Observe au, en cali des dos vas, Ia esi blogseadora triginal peemanece enol DNA y debe reparie ‘mediante alguna ota via. CTomado de A. Kommbers y "Baker, DNA Replication, 2 ed Copyright © 19928 W. H. Freeman and Company) Lesion (b) Replicacién nas, BMSH2 y hMLHI, son muy similares a las bacterianas Mut y MutL, respectivamente. La Figura 16-34 representa ¢6- ‘mo la protefna hMSH2, junto a la protefna de unién a G—T (GTBP, del inglés G—T Binding Protein), reconoce las bases mal emparejadas y favorece la unién de los otros componentes del sistema, hPMS2 y hMLHI, para llevar a cabo la reparacién

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