2020 sernineas Direcelén General de Epidemioiogia Instituto de Diagnéstico y Referencia Epidemiolégicos “Dr. Manuel Martinez Bée2" (InDRE) Ciudad de México, 2 1 OCT 2020 io No. DGE-DsaT- 1344 -2020 Asunto: Informe de evaluacién comparative preliminar. (Omar Khayyan Ruvalcaba Salazar Director General MCD, Servicios Integrales de Diagnésticos, S.A. de C.V. Calle Vasco de Quiroge 3900 Torre a Piso T0-b, Col Santa Fe Cuajimalpa rT. Cuajimalpa de Morelos, CP, 05848, Cuidad de México Presente En respuesta a su atenta solicitud de fecha 1 de septiembre de 2020, para la evaluacién del producto “FLU-COVID RT-PCR KIT”, con ntimero de referencia MAD-003942M-L, compuesto por dos partes: “FLU-COVID MMIX" con numero de referencia MAD-003942M-100-L y “FLU- COVID PC" con ntimero de referencia: MAD-FLU-COVID, fabricados por Vitro S.A. ubicado en Parque Tecnolégico Ciencias de la Salud, Avenida del Conocimiento 100, 18016, Granada, Espafia, se expide el siguiente resultado. Procedimiento de Evaluacién. Pruebas para verificacién del desempefio analitico. Para verificar el desernpefio analitico del producto “FLU-COVID RT-PCR KIT" (véase Fotos 1 y 2), se utilizé reactivo con nlimeros de lote FCVPOOIL y FCVPOO2L. La verificacién de la especificidad analitica se realiz6 utilizando un panel comercial de diferentes virus respiratorios. La verificacién del limite de deteccién se realizé utilizando un extracto de RNA total cuantificado (con carga viral determinada) y obtenido a partir de una muestra positiva al virus SARS-CoV-2. El equipo utilizado para el estudio fue el CFX96™ Touch Real-Time PCR Detection System (BIO-RAD). (véase Foto 3). vetnwsobsmdsalud_ SALUD 2020 Se romocion dea sled Instituto de Diagnéstico y Referencia Epidemiolégicos “Dr. Manuel Martinez Bée2" (InDRE) Foto 3. CFX96™ Touch Real-Time PCR Detection System (BIO-RAD) El estuche “FLU-COVID RT-PCR KIT" es un kit de diagndstico in vitro para la deteccién simultanea cualitativa y la diferenciacién del RNA del virus Influenza A (FIUA): Influenza A genérica, HINI pandémica 2009 y H3 genérica; virus de la Influenza B (FluB): linajes Victoria y Yamagata y/o SARS-CoV-2, a partir del RNA extraido de muestras clinicas humanas de diferente origen como exudados nasofaringeos, orofaringeos y lavados broncoalveolares (BAL). Esté basado en la técnica One-Step RT-PCR multiplex en tiempo real, utilizando cebadores y sondas fluorescentes para los genes diana: Matrix protein de FIUA (Mp), Matrix protein de FluB (Mp) y gene de la nucleocdpside (N) de SARS-CoV-2. Resultados del Desempefio analitico. Sensibilidad (limite de deteccién). Para la verificacién del limite de deteccién del virus SARS-CoV-2, se analizaron diferentes concentraciones del extracto de RNA cuantificado, utilizando tres réplicas por cada valor de concentracion. Los resultados obtenidos fueron los siguientes: Tabla 1. Verificaci6n de la sensibilidad en la deteccién del virus SARS-CoV-2 Resultado esperado Resultado observado retin Concentracié % Positivos / total jenético viral 7 ncentracién ositivos 5 Concentraciin tedrica de réplicas SARS-CoV-2GenN 10 copias/reaccién —_ 10 copias / reaccion 3/3 (100) vars. gctienssalud LISS NE SUDINNS SUR_. SALUD 2020 " Promocién de a Salud LEONA VICARIO Direccién General de Epidemiciogia. Instituto de Diagnéstico y Referencia Epidemiolégicos “Dr. Manuel Martinez Baez" (InDRE) Para estimar la sensibilidad del virus Influenza se utilizaron extractos de RNA obtenidos a partir de muestras de cultivo con valores de CT (Cycle Threshold) conocidos y determinados por las pruebas de deteccion de referencia. Se realizaron diluciones seriadas de los extractos y se analizaron por triplicado. Los resultados de reactividad fueron los siguientes: Tabla 2. Comparacién de la sensibilidad en la detecci6n de los virus influenza influenza A Influenza B linaje a Meas Influenza A H3N2 vonage edad % Positivos % Positivos RNA EER Hrotalde «YO, /totalde © YET, /total de réplicas réplicas réplicas Stock 79.02 3/3(100) 23.78 3/3(100) 2299 3/3100) Diluci6n1 2252 3/3100) 27.28 += 3/3 (100) 26.49 3/3(100) Dilucién2 26.02 3/3 (100) 30.78 = 3/3(100) 29.99 3/3 (100) Dilucion3 2952 3/3(100) 3428 ©=— 3/3100) 3349 3/3 (100) Dilucion4 33.02 3/3(100) 37.78" 3/3(100) 36.99% 3/3(100) Dilucin5 3652" 3/3(100) 4128 = 0/3 (0) 40.49_—1/3 (33.33) Dilucisn6 40.02 0/3(0) 44.78 = 0/3(0) 43.99. 0/3 (0) ‘Los valores de CT de las dluciones son tesricos. ™ Diluciones con valor de CT cercano a los limites de deteccién de las pruebas esténdar del laboratorio. Reproducibilidad entre lotes. Se analizaron 40 réplicas del control positivo utilizando estuches de dos lotes diferentes (FCVPODIL y FCVPO02L), considerando 20 réplicas por cada uno. Al analizar los valores de CT se obtuvieron los siguientes resultados de coeficiente de variacién (CV): Tabla 3. Verificaci6n de la reproducibilidad ae Precisién intralote Fabeueeey genético viral 9% CVobtenido %CVobtenido %CV Lote FCVPOOIL Lote FCVPOO2L obtenido SARS-CoV-2, 0.736, 1.656 1345, Influenza A 0.724 0.793, 0.766 Influenza B 0.600 1.768 1.351 vessel SVR WIE SBNSSEspecificidad. Direccién General de Epidemiciogia Instituto de Diagnéstico y Referencia Epidemiolégicos “Dr. Manuel Martinez 84e2" (INDRE) Se utilizé el panel de verificacion NATtrol™ Respiratory Verification Panel 2 marca ZeptoMetrix Corporation con ntimero de catalogo NATRVP2-BIO. Los resultados fueron: Tabla 4. Verificacién de la especificidad Clave Resultado esperado 1 Virus parainfiuenza tipo 1 2 Influenza B cepa B/Florida/02/06 3 Virus parainfluenza tipo 2 4 Influenza A HiNIpdm cepa A/NY/02/09 5 Influenza AH3 cepa A/Brisbane/10/07 6 Influenza AHI cepa A/NewCal/20/99 7 Adenovirus 31 8 Adenovirus 3 9 Adenovirus 1 to Virus sincicial respiratorio A2 u Parainfluenza 4 2 Parainfluenza 3 B Rhinovirus 1A 14 — Metapneumovirus 8 cepa Peru6-2003 5 Coronavirus 229E 16 Coronavirus OC43 7 Coronavirus NL63 18 Coronavirus HKU-1 9 B. pertussis cepa A639 20 8, parapertussis cepa A747 a C. pneumoniae cepa CWL-029 2 M. pneumoniae cepa M129 2B Negativo Repetibilidad. Resultado observado “FLU-COVID RT-PCR KIT" Resultado negativo Positive para influenza B Resultado negativo Positivo para influenza A Positive para influenza A Positivo para influenza A Resultado negativo Resultado negativo Resultado negativo Resultado negativo Resultado negativo Resultado negativo Resultado negativo Resultado negativo Resultado negativo Resultado negativo Resultado negativo Resultado negativo Resultado negativo Resultado negativo Resultado negativo Resultado negativo Resultado negativo Se analizaron diferentes concentraciones del extracto de RNA cuantificado, utilizando tres réplicas en un anilisis hecho por el mismo operador, con el mismo lote de reactivos. Los resultados obtenidos fueron los siguientes: vemn-gobomdsalud> SALUD 2020 Subsecretaria de Prevencién y Promecién de la Salud LEONA VicaRIO Direccién General de Epidemiologia Institute de Diagnéstico y Referencia Epidemiolégicos: “Dr, Manuel Martinez Bez" (INDRE} Tabla 5. Verificaci6n de la repetibilidad Positivos / Concentracién total de réplicas _% Positives 10,000 copias / reaccion 3/3 100 1,000 copias / reacci6n 3/3 100 SARS-COV-2GeNN O55 copias / reaccion 3/3 100 100 copias / reaccién 3/3 100 Validez externa. Se analiz6 el panel AccuPlex™ SARS-CoV-2 Molecular Control Kit - Full Genome con ntimero de referencia 0505-0159. Los resultados obtenidos fueron los siguientes: Tabla 6. Resultados del panel de tercera opinién Vial Resultado esperado Resultado observado — Acuerdo 1 PositivoaSARS-CoV-2 _Positivo a SARS-CoV-2 2 PositivoaSARS-CoV-2 _Positivo a SARS-CoV-2 3 PositivoaSARS-CoV-2 _Positivo a SARS-CoV-2 4 — PositivoaSARS-CoV-2 _Positivo a SARS-CoV-2 5 PositivoaSARS-CoV-2 _Positivo a SARS-CoV-2 6 — NegativoaSARS-CoV-2 _ Negativo a SARS-CoV-2 7 NegativoaSARS-CoV-2 _ Negativo a SARS-CoV-2 8 —Negativoa SARS-CoV-2_ Negativo a SARS-CoV-2 9 Negativoa SARS-CoV-2_ Negativo a SARS-CoV-2 10 Negativoa SARS-CoV-2_ Negativo a SARS-CoV-2 Comentarios finales. + Elestuche no contiene inserto. La interpretacién de los resultados de esta evaluacién se llevé a cabo utilizando el inserto en espafiol con fecha de revisién 2020/09/10 proporcionado por el solicitante. * Se observé concordancia entre los valores del limite de deteccién declarados por el fabricante y los obtenidos experimentalmente en lo que respecta al virus SARS-CoV- 2. En el ensayo de comparacién de la sensibilidad de deteccién de los virus influenza A HINIpdm03, influenza A H3N2 e influenza B, se observé reactividad equiparable a las pruebas estandar del InDRE.‘Subsecretaria de Prevencién y Promocién de la Salud Direccién General de Epidemiclogia Instituto de Diagnéstico y Referencia Epidemiolégicos “Dr. Manuel Martinez Bée2" (InDRE) |, SALUD * Se observé concordancia entre los valores de especificidad declarados por el fabricante y los obtenidos experimentalmente. ‘* Se observé concordancia en los resultados obtenidos en los paneles de referencia NATtrol™ Respiratory Verification Panel 2 y AccuPlex™ SARS-CoV-2 Molecular Control Kit - Full Genome. Validez. Esta evaluacién es provisional en apoyo a la emergencia por la pandemia de la enfermedad COVID-19, declarada por la OMS el dia 11 de marzo del 2020, y sera valida Unicamente durante la duracion de la misma. Al término de ésta, la validez de esta evaluacién quedara automaticamente cancelada y ser necesario realizar una evaluacién completa para uso posterior. Atentamente Directora de Servicios y Apoyo Técnico del InDRE —_Directora de Diagnéstico y Referencia del InDRE 3z Marti Pee arate ee ececks clccees Sanh, ou de ErfrmecndesEmeroercasytoenct ct nO. ‘Brest Cnesto fame: Contes Energage dels Unios de Dear Ternagicseinvestigecon Maacldl NORE. seein 7 | Saas a : svawaab mesalud