INSTITUTO POLITÉCNICO

NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE
CIENCIAS BIOLÓGICAS

“Determinación de proteínas por

dos métodos diferentes: Lowry y
Bradford”

ALUMNO: LÓPEZ VALDIVIA

RODRIGO
5QM2 SECCIÓN 4
MAESTRO: FRANCISCO
HERNANDEZ
Método de Lowry
Objetivo

 Evaluar el método de Lowry mediante una curva de calibración y un análisis

estadístico.
Resultados
Tabla 1. Valores para crear la curva de calibración de albúmina por el método de
Lowry

Tubo No. Cantidad de proteína (µg) A590

Serie A Serie B
1 25 0.057 0.078
2 50 0.189 0.183
3 75 0.257 0.279
4 100 0.333 0.346
5 125 0.410 0.391

0.45

0.4

0.35

0.3

0.25
A590

0.2
A= 6.45X10-3 ordenada al origen
0.15
B= 3.27X10-3 pendiente
0.1
r= 0.9884 coeficiente de correlación
0.05

0
20 40 60 80 100 120 140
Cantidad de proteína (µg)

Figura1. Curva de calibración de la cantidad de albúmina por el método de Lowry

Tabla 2. Replicas para el análisis estadístico.

Tubo A590 Cantidad de proteína

(µg)
1 0.268 79.98
2 0.278 83.04
3 0.398 119.74
4 0.269 80.29
5 0.263 78.45
6 0.270 80.59
7 0.252 75.09
8 0.256 76.31
9 0.248 73.86
10 0.261 77.84

Tabla 3. Resultados del análisis estadístico

X S S2 %C.V µ
82.51 13.36 178.66 16.19 72.95≤µ≤92.06

Tabla 4. Efecto de sustancias no proteicas

Tubo Sustancia A590 Cantidad de Tipo de interferencia

No. proteína (µg)
1 Tris 1 M Ph7 0.195 57.66 Negativa
2 Glicerol 1% 0.252 75.09 Sin interferencia
3 Detergente 1% 0.254 75.70 Sin interferencia
4 SDS 1% 0.252 75.09 Sin interferencia
5 TCA 1% 0.24 71.42 Negativa

X= A590 - 6.45x10-3 / 3.27x10-3

Ecuación para la cantidad de proteína

 Lowry – Bradford Tcal= X(n1/2) /S
79.98-84.86= -4.88 Tcal= 1.38(101/2) /13.75
83.04-82.10= 0.94
Tcal= 0.3173
119.74-81.08= 38.66
T tab= 2.262
80.29-82.68=-2.39
78.45-84.86=-6.41 T cal ≤ T tab
80.59-73.39= 7.2 NO hay diferencia entre la exactitud
75.09-78.18= -3.09 de ambos métodos.
76.31-80.50= -4.19 F cal= S2L/S2B F tab= 4.03
73.86-81.37= -7.51
F cal= 178.66/ 11.22 F cal ≥ F tab
77.84-82.24= -4.4
X=1.38 S= 13.75 F cal= 15.92 SÍ hay diferencia entre la precisión de
ambos métodos.

Ventajas Desventajas
Se necesitan dos reacciones para poder
llevar a cabo este método.
El desarrollo de la reacción toma más
tiempo.
El tiempo de estabilidad de la reacción
es más largo.
Depende de la cantidad de tirosina y
triptófano.
Método de Bradford
Objetivo

 Evaluar el método de Bradford mediante una curva de calibración y un análisis

estadístico.
Resultados
Tabla 1. Valores para crear la curva de calibración de albúmina por el método de
Lowry

Tubo No. Cantidad de proteína (µg) A590

Serie A Serie B
1 25 0.344 0.314
2 50 0.546 0.603
3 75 0.747 0.748
4 100 0.839 0.890
5 125 1.048 1.043

1.2

0.8
A590

0.6

A= 0.1953 ordenada al origen

0.4
B= 6.892X10-3 pendiente
0.2
r= 0.9897 coeficiente de correlación
0
20 40 60 80 100 120 140
Cantidad de proteína (µg)

Figura1. Curva de calibración de la cantidad de albúmina por el método de Lowry

Tabla 2. Replicas para el análisis estadístico.

Tubo A590 Cantidad de proteína

(µg)
1 0.780 84.89
2 0.761 82.10
3 0.754 81.08
4 0.765 82.68
5 0.780 84.86
6 0.701 73.39
7 0.734 78.18
8 0.750 80.50
9 0.756 81.37
10 0.762 82.24

Tabla 3. Resultados del análisis estadístico

X S S2 %C.V µ
81.126 3.35 11.22 4.12 78.72≤µ≤83.52

Tabla 4. Efecto de sustancias no proteicas

Tubo Sustancia A590 Cantidad de Tipo de interferencia

No. proteína (µg)
1 Tris 1 M Ph7 0.862 96.73 Positiva
2 Glicerol 1% 0.814 89.77 Positiva
3 Detergente 1% 0.372 25.63 Negativa
4 SDS 1% 0.342 21.28 Negativa
5 TCA 1% 0.777 84.40 Positiva

X= A590 – 0.1953 / 6.892x10-3

Ecuación para cantidad de proteína

El SDS y el detergente nos dieron interferencias negativas ya que ambos pueden

interaccionar con las proteínas, desnaturalizándolas y así evitar que se forme el
complejo colorido. Dando una cantidad de proteína menor a la esperada.
 Lowry – Bradford Tcal= X(n1/2) /S
79.98-84.86= -4.88 Tcal= 1.38(101/2) /13.75
83.04-82.10= 0.94
Tcal= 0.3173
119.74-81.08= 38.66
80.29-82.68=-2.39 T tab= 2.262
78.45-84.86=-6.41 T cal ≤ T tab
80.59-73.39= 7.2
NO hay diferencia entre la exactitud
75.09-78.18= -3.09
de ambos métodos.
76.31-80.50= -4.19
73.86-81.37= -7.51 F cal= S2L/S2B
77.84-82.24= -4.4
F cal= 178.66/ 11.22
X=1.38 S= 13.75
F cal= 15.92

F tab= 4.03
F cal ≥ F tab
SÍ hay diferencia entre la precisión de
ambos métodos.

Ventajas Desventajas
Sólo es necesaria una reacción.
Tiempo de desarrollo de reacción es
rápido.
Tiempo de estabilidad corto.
Es independiente del contenido de
aminoácidos de las proteínas.
Comparación de métodos

Lowry – Bradford F cal= S2L/S2B

79.98-84.86= -4.88
F cal= 178.66/ 11.22
83.04-82.10= 0.94
119.74-81.08= 38.66 F cal= 15.92
80.29-82.68=-2.39 F tab= 4.03
78.45-84.86=-6.41 F cal ≥ F tab
80.59-73.39= 7.2
SÍ hay diferencia entre la precisión de
75.09-78.18= -3.09
ambos métodos.
76.31-80.50= -4.19
T tab= 2.262
73.86-81.37= -7.51 Tcal= X(n1/2) /S
77.84-82.24= -4.4 T cal ≤ T tab
Tcal= 1.38(101/2) /13.75
X=1.38 S= 13.75 NO hay diferencia entre la exactitud
Tcal= 0.3173
de ambos métodos.