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Biol Solos Férteis (2013) 49:791–801 DOI
10.1007/s00374-012-0771-5
PAPEL ORIGINAL
Co-inoculação de soja e feijão comum com rizóbio e azospirilla:
estratégias para melhorar a sustentabilidade
Mariangela Hungria & Marco Antonio Nogueira &
Ricardo Silva Araujo
Recebido: 10 de outubro de 2012 /Revisado: 9 de dezembro de 2012 /Aprovado: 27 de dezembro de 2012 / Publicado on-line: 12 de janeiro de 2013
# Springer-Verlag Berlim Heidelberg 2013
Resumo As associações planta-microrganismos são estudadas há
muito tempo, mas sua exploração na agricultura substituindo parcial
ou totalmente os fertilizantes químicos ainda é modesta. Neste
estudo, avaliou-se a ação combinada de inoculantes de rizóbios e
promotores de crescimento de plantas sobre as produtividades de
soja e feijão. A inoculação de sementes com rizóbios (1,2×106
células sementeÿ1 ) foi comparada à co-inoculação com Azospirillum
brasilense em sulco (diferentes doses) ou em sementes (1,2×105
células sementeÿ1 ) em nove experimentos de campo. A melhor
dose de inoculante no sulco foi de 2,5×105 células de A. brasi lense
seedÿ1 para ambas as culturas. A inoculação com Bradyrhizobium
japonicum aumentou a produtividade da soja em média 222 kghaÿ1
(8,4%) e a coinoculação com A. brasilense no sulco em média 427
kghaÿ1 (16,1%); a inoculação sempre melhorou a nodulação. A co-
inoculação das sementes com ambos os microrganismos resultou
em um aumento médio de 420 kghaÿ1 (14,1%) na produtividade da
soja em relação ao controle não inoculado. Para o feijoeiro, a
inoculação de sementes com Rhizobium tropici aumentou a
produtividade em 98 kghaÿ1 (8,3%), enquanto a co-inoculação com
podem ser assimiladas pela planta hospedeira . O Brasil tem sido
A. brasilense no sulco resultou no impressionante aumento de 285 kghaÿ1
M. Hungria (*) : M. A. Nogueira Embrapa
Soja, Cx. Postal 231, 86001-970, Londrina, Paraná, Brazil e-mail:
mariangela.hungria@embrapa.br
M. A. Nogueira e-
mail: marco.nogueira@embrapa.br
M. Hungria : M. A. Nogueira : R. S. Araujo Conselho
Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq-MCT), Brasília,
Federal District, Brazil
RS Araujo e-
mail: rsaraujo@totalbiotecnologia.com.br
R. S. Araujo
Total Biotecnologia Indústria e Comércio Ltda, Rua Emílio Romani
1190, CIC, 81460-020, Curitiba, Paraná, Brazil
(19,6%). O tratamento inoculado mais barato e mais sustentável
produziu rendimentos equivalentes ao tratamento mais caro sem
inoculação + N-fertilizante. Os resultados confirmam a
viabilidade do uso de rizóbio e azospirilla como inoculantes em
uma ampla gama de sistemas agrícolas, substituindo fertilizantes N
caros e prejudiciais ao meio ambiente.
Palavras-chave BNF. Bradyrhizobium. Azospirillum.
Rhizobium. Co-inoculação. Glicina máx. PGPR.
Phaseolus vulgaris
Introdução
Muitas leguminosas podem estabelecer uma parceria simbiótica
com bactérias específicas denominadas coletivamente de rizóbios,
que possuem um complexo enzimático denominado dinitrogenase
que lhes permite capturar nitrogênio atmosférico e reduzi-lo a
amônia, seguido pela incorporação em formas nitrogenadas que
considerado um país modelo na aplicação dos benefícios da fixação
biológica de nitrogênio, especialmente para o uso de linhagens elite
de Bradyrhizobium japonicum/Bradyrhizobium elkanii em soja
[Glycine max (L.) Merr.], atendendo a demanda da planta em N
(Hungria et al. 2005, 2006a, b).
Outro grupo de microrganismos benéficos do solo é
representado por bactérias associativas capazes de promover o
crescimento de plantas por meio de diversos processos biológicos
(Chaparro et al. 2012), incluindo a produção de diversos hormônios
de crescimento de plantas como auxinas (Ashraf et al. 2011; Tien
et al. 2012). al. 1979), giberelinas (Bottini et al. 1989), citocininas (Strzelczyk et al.
1994; Tien et ai. 1979), etileno (Strzelczyk et al. 1994), a capacidade
de induzir resistência de plantas a doenças e estresses (Wang et
al. 2009), para solubilizar fosfato (Rodriguez et al. 2004), e também
a fixação biológica de nitrogênio (Ashraf et al. .
2011; Döbereiner e Pedrosa 1987). Entre essas bactérias
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as do gênero Azospirillum são certamente as mais estudadas e
empregadas como inoculantes em todo o mundo, inclusive no Brasil
(Hungria et al. 2010).
A soja é uma cultura de rendimento chave no Brasil e a fixação de
até 300 kg de N ha–1 além da liberação, no solo, de 20–30 kgN ha–1
para a próxima safra são estimativas atuais (Hungria et al. al. 2005,
2006a, b). Pesquisas contínuas têm sido realizadas para garantir os
benefícios às cultivares mais produtivas. No entanto, a contribuição
do processo biológico é ameaçada pelas mudanças climáticas globais,
com períodos crescentes de seca e altas temperaturas, e o Brasil não
é exceção (Zullo et al. 2008). Estresses ambientais ajudam a aumentar
a suscetibilidade a doenças, levando ao tratamento de sementes com
uma variedade de fungicidas e inseticidas que atualmente são
utilizados em mais de 90% da soja cultivada no Brasil e que podem
ser altamente deletérios para os rizóbios (Campo et al. 2009). Qualquer
fator que reduza a nodulação pode resultar na diminuição da fixação
de N2 , levando à busca de estratégias para minimizar os impactos
dos tratamentos de sementes com fungicidas e inseticidas, como a
inoculação em sulco (Campo et al. 2010).
No caso do feijão comum (Phaseolus vulgaris L.) – uma fonte
barata de proteína para a crescente população mundial – ainda há
preocupações sobre a capacidade de fixação biológica de nitrogênio
para sustentar o crescimento das plantas e o rendimento das culturas.
As limitações à simbiose são atribuídas ao melhoramento de plantas
focado em fertilizantes nitrogenados, população indígena de rizóbios
altamente competitiva, mas pouco eficaz no solo e alta suscetibilidade
a doenças e estresses ambientais (Graham 1981; Hungria e Vargas
2000). No entanto, aumentos na nodulação, fixação de nitrogênio e
rendimento de grãos foram observados quando cepas elite selecionadas
são usadas como inoculantes (Hungria et al. 2000, 2003).
Considerando as principais limitações à fixação biológica de N2
com soja e feijão comum inoculados com rizóbios e os benefícios ao
crescimento da cultura atribuídos ao Azospirillum, a co-inoculação com
ambos os microrganismos pode melhorar o desempenho da planta.
Essa abordagem está em consonância com as demandas modernas
de sustentabilidade agrícola, econômica, social e ambiental (Chaparro
et al. 2012).
Apesar dos relatos sobre os benefícios da co-inoculação de rizóbios e
azospirilla, poucos experimentos de campo foram realizados com
rhizobia e azospirilla ou outras rizobactérias promotoras de crescimento
de plantas (PGPR), e nenhum nas condições brasileiras.
Neste estudo, relatamos os resultados de experimentos realizados
durante três safras com co-inoculação de soja e feijão com rizóbio e
azospirilla.
A coinoculação de microrganismos com diferentes funções representa
uma tática simples, barata, mas inovadora, que ainda está longe de
ser adotada na agricultura de larga escala, e os resultados aqui
descritos incentivam o uso dessa abordagem microbiana nos trópicos.
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Materiais e métodos
Descrição dos sites
Nove experimentos foram conduzidos com soja (G. max (L.)
Merr.) e feijão (P. vulgaris L.) por três safras consecutivas (Tabela 1).
Em todas as safras, foram implantados experimentos em dois
ecossistemas do Estado do Paraná, sul do Brasil, nos distritos de
Londrina e Ponta Grossa. A estação experimental da Embrapa Soja,
Londrina (23°11ÿS, 51°11ÿW) está a 620 m de altitude e o clima é
classificado como Cfa (classificação de Köppen); os ensaios foram
realizados em um oxi sol, Latossolo Vermelho Eutroférrico (Rhodic
Eutrudox). Em Ponta Grossa (25°13ÿ S e 50°1ÿ W) a altitude é de 880
m, o clima é classificado como Cfb e os ensaios foram realizados no
Serviço de Produção de Sementes Básicas da Embrapa, em um
Latossolo Vermelho Distrófico (Típico Haplodox). Os experimentos
foram realizados nesses dois locais, mas em cada estação foi em uma
área diferente do mesmo local.
Em cada local, no início da experimentação, 20 subamostras de
solo (0-20 cm) foram coletadas para avaliar as propriedades químicas
e granulometria do solo. A análise química seguiu procedimentos
básicos (Klute 1986; Sparks 1996), conforme descrito anteriormente
(Hungria et al. 2006b). Antes de serem analisadas, as amostras de
solo foram secas (60 °C por 48 h) e peneiradas (2 mm). O pH do solo
foi determinado em 0,01 M CaCl2 (1:2,5; solo/solução), após agitação
por 1 h. Ca, Mg e Al trocáveis foram determinados no extrato obtido
com 1 mol Lÿ1 de KCl (1:10; solo/solução) após agitação por 10 min.
Os teores de P e K foram avaliados no extrato de Mehlich-1 (0,05 mol
Lÿ1 HCl+0,0125 mol Lÿ1 H2SO4) (1:10; solo/solução) após agitação
por 10 min. O alumínio foi determinado por titulação com NaOH
padronizado 0,015 Mo Lÿ1 , usando azul de bromotimol como
indicador. As concentrações de Ca e Mg foram determinadas em
espectrofotômetro de absorção atômica, K em fotômetro de chama e
P por colorimetria, utilizando o método do azul de molibdênio e ácido
ascórbico como agente redutor. O carbono foi determinado pela
oxidação do dicromato. As características do solo antes da semeadura
em cada local são mostradas na Tabela 2.
As populações de rizóbios em cada local foram estimadas pela
técnica do número mais provável (Vincent 1970) e tabelas estatísticas
com plantas de soja da cultivar BRS 133 e feijão da cultivar IPR-Colibri.
Rhizobial
populações em cada local são mostradas na Tabela 1.
Gerenciamento de campo
Cerca de 50 dias antes do início do experimento, os valores de pH do
solo foram determinados em cada local e o calcário foi aplicado para
aliviar a acidez. A quantidade de cal aplicada foi estimada para uma
saturação de bases de 70% para elevar o pH para aproximadamente
5,5. Trinta dias antes da semeadura foi aplicado o glyphosate (1,5
Lhaÿ1 ).
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Tabela 1 Locais, estações, datas, espécies de plantas, cultivares e populações de rizóbios naturalizados nos locais onde os experimentos de campo foram
realizado

Temporada Colheita Local Cultivar Semeadura Colheita Colhido Células de rizóbio (solo UFC gÿ1 )b
áreaa

Temporada de verão Soja Londrina BR 133 06/11/2009 09/03/2010 8 m2 19/11/2009 3,57×103

2009/2010 Ponta Grossa BR 133 08/04/2010 8 m2 4,27×103
Soja
Feijão comum Londrina IPR-Colibri 04/11/2009 14/01/2010 6 m2 3,57×103

Feijão comum Ponta Grossa IPR-Colibri 02/12/2009 23/02/2010 6 m2 3,57×103

Estação seca Feijão comum Londrina IPR-Colibri 20/02/2010 30/05/2010 6 m2 3,14×104

2010 Feijão comum Ponta Grossa IPR-Colibri 26/02/2010 06/07/2010 7,2 m2 Soja Soja 3,14×104

Temporada de verão Londrina BR 133 04/11/2010 21/03/2011 8 m2 1,79×104

2010/2011 Ponta Grossa BR 133 25/11/2010 13/04/2011 8 m2 2,14×104

Feijão comum Londrina IAPAR 81 04/11/2010 07/02/2011 8 m2 3,38×104

uma

Os tamanhos das parcelas variaram de 4×6 (24 m2 ) a 5,5×6 (33 m2 )

b
Estimado pelo método do número mais provável (NMP) (Vincent 1970) usando soja e feijão como plantas armadilha

Tanto para a soja quanto para o feijão, 300 kg haÿ1 de N–P–
K (0–28–20) foram aplicados no sulco imediatamente antes da semeadura,
conforme recomendado para a cultura da soja no Brasil. Nenhum fertilizante
N foi aplicado, exceto para as parcelas de controle N-fertilizante,
Conforme detalhado abaixo. Além disso, para ambas as culturas, no estádio V4 da soja
[quatro nós no caule principal com folhas totalmente desenvolvidas,
começando com o nó unifoliolado (Fehr e Caviness
1977)] e 25 dias após a emergência (DAE) para o feijoeiro,
plantas receberam 20 g haÿ1 de Mo (como Na2MoO4·2H2O) e 2 g
haÿ1 de Co (como CoCl2·6H2O) como spray foliar.
e para o Azospirillum, um novo produto no mercado, 108 células gÿ1
ou mLÿ1. Nos últimos 10 anos, os requisitos legais para rizóbios em
inoculantes aumentou de 108 para 109 células, conforme a indústria
a tecnologia melhorou consideravelmente; portanto, aumenta
a concentração de células para inoculantes à base de Azospirillum são
também esperado. A recomendação técnica para ambos os
culturas de soja e feijão é que a dose de inoculante
deve fornecer 1,2 milhão de células semente-1. Quando inocula no sulco
ção substitui a inoculação de sementes, a concentração deve ser
aumentado para pelo menos 2,5 milhões de células semente-1. Considerando real

Para soja, fungicida (fluquinconazol, 50 g ia ha-1 ) legislação e expectativas para os próximos anos, decidimos
contra a ferrugem da soja (Phakopsora pachyrhizi) foi trabalhar com estimativas do número de células sementeÿ1. Portanto, para

no segundo ano, após a floração. Para o feijão comum,
foi aplicado inseticida contra Elasmopalpus lignosellus,
metil-carbamato a uma taxa de 1,50 L 100 kg semente-1
As cultivares usadas em cada experimento são mostradas na Tabela 1.
Inoculantes e desenho experimental
De acordo com a legislação brasileira, inoculantes contendo
rizóbios devem carregar pelo menos 109 células g-1 ou mL-1 de inoculante,
neste estudo, a inoculação de rizóbios consistiu na inoculação de sementes:
para soja, com Bradyrhizobium japonicum comercial
. cepas SEMIA 5079 e SEMIA 5080 (no Brasil, soja
inoculantes carregam duas cepas e esta combinação representa
mais de 80% dos inoculantes comerciais vendidos no país),
e para o feijão-comum, com Rhizobium tropici cepa SEMIA
4080 (=PRF 81), sempre fornecido em 1,2 × 106 células semente-1
(inoculantes comerciais de feijão no Brasil carregam apenas
uma estirpe). Para o Azospirillum brasilense, as linhagens comerciais

Tabela 2 Propriedades químicas dos solos (0–20 cm) realizados antes da semeadura

pH H+Al Al P cmolc/dm3 K C Ca+Mg SBa CECa BS

mg/dm3 cmolc/dm3 g/dm3 %

Verão (chuvoso) Londrina Soja/feijão 5,72 3,01 Ponta Grossa Soja/ 0,02 6,48 0,58 19,71 9,00 9,59 12,60 76,07
temporada 2009/2010 0,22 20,85 5,54 5,76 9,71 59,39
feijão 5,25 3,94 0,00 3,36

Estação seca 2010 Londrina feijão comum 5,55 3,05 0,03 6,33 0,59 20.01 9.02 9,61 12,66 75,71

Feijão de Ponta Grossa 5,22 3,34 0,00 4,01 0,44 21,12 6,64 7,08 10,42 67,95

Verão (chuvoso) Londrina Soja/feijão 5,35 4,18 0,05 7,77 Ponta Grossa Soja/feijão 4,89 0,43 21,68 5,62 6,05 10,23 59,11
temporada 2010/2011 0,23 25,73 4,85 5,08 9,82 68,84
4,75 0,17 2,83

uma

SB soma de bases; capacidade de troca catiônica CEC; Saturação de bases BS=((K+Ca+Mg)/Tcec)×100, onde Tcec = K+Ca+Mg+acidez total em pH 7,0 (H+Al)

As propriedades granulométricas em cada local foram (em gramas por quilograma): Londrina: 710 (argila), 82 (silte), 208 (areia); Ponta Grossa: 238 (argila), 30 (silte),
732 (areia)
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Ab-V5 e Ab-V6 foram usados (combinação representando 100% dos
inoculantes usados no Brasil), e inoculação de sementes foi aplicada
a 1,2×105 células sementeÿ1 (exigência legal é dez vezes menor do
que para rizóbios). Para a inoculação no sulco com Azospirillum, as
doses foram de 2,5×105 células sementeÿ1 5×105 células , Cada
sementeÿ1
experimento incluiucélulas
, e 7,5×105 dois controles,
sementeÿ1controle não inoculado
de inoculante (NI) e
comercial.
controle não inoculado recebendo fertilizante N (NI +N). Para a
soja, foram aplicados 200 kgN haÿ1 na forma de uréia (46,6 %N),
aplicados fracionados com 50 % aplicados na semeadura e 50 % no
estádio R2 (flor aberta em um dos dois nós superiores da haste
principal com folha totalmente desenvolvida) (Fehr e Caviness 1977).
Para o feijoeiro, as plantas receberam 20 kgN haÿ1 parcelado como
uréia na semeadura e 60 kgN haÿ1 parcelado aos 25 DAE. Todos os
experimentos também incluíram um tratamento inoculado exclusivamente
com rizóbios aplicados em sementes (I Brady, I Rhizo). Finalmente,
diferentes concentrações de Azospirillum (Azo) foram aplicadas no
sulco ou nas sementes, com ou sem coinoculação com rizóbios. Os
tratamentos com Azospirillum diferiram de 1 ano para outro porque
foram redesenhados de acordo com os resultados obtidos no ano
anterior.
A soja sempre foi colhida na estação do verão (chuvosa).
Seis tratamentos foram incluídos na primeira safra: (1) NI; (2)
NI+N; (3) I Brady; (4) I Brady + Azo no sulco 2,5×105 células
sementeÿ1 ; (5) I Brady+Azo no sulco 5×105 células sementeÿ1 ; (6) I
Brady+Azo no sulco 7,5×105 células sementeÿ1 . Os melhores
resultados foram alcançados com I Brady+Azo no sulco 2,5×105
células ,sementeÿ1
assim no segundo ano este tratamento foi testado além da
aplicação nas sementes, também com seis tratamentos: (1) NI; (2)
NI+N; (3) I Brady; (4) I Brady+Azo no sulco 2,5×105 células sementeÿ1 ;
(5) NI+Azo no sulco 2,5×105 células sementeÿ1 ; (6) I Brady+Azo em
sementes 1,2×105 células seedÿ1 . No terceiro ano,
não houve necessidade de confirmação dos resultados com Azo
aplicado em sulco, portanto verificou-se o desempenho de coinoculação
de sementes, com apenas quatro tratamentos: (1) NI; (2) NI+N; (3) I
Brady; (6) I Brady+Azo em sementes 1,2×105 células seedÿ1 .
Para o feijoeiro, sete tratamentos foram incluídos na primeira safra
(safra de verão ou estação chuvosa) e na segunda safra (estação
seca): (1) NI; (2) NI+N; (3) Rhizo; (4) I Rhizo+Azo no sulco 2,5×105
células sementeÿ1 ; (5) NI+ Azo no sulco 2,5×105 células sementeÿ1 ;
(6) I Rhizo+Azo no sulco 5×105 células sementeÿ1 ; (7) NI+Azo no
sulco 5×105 células sementeÿ1 . Os melhores resultados também
foram obtidos com a co-inoculação e Azospirillum no sulco na
concentração de 2,5×105 células semente-1
, assim, na terceira safra, testou-se também a
co-inoculação de sementes, com seis tratamentos: (1) NI; (2) NI+N; (3)
Rhizo; (4) I Rhizo+Azo no sulco 2,5×105 células sementeÿ1 ; (5)
NI+Azo no sulco 2,5×105 células sementeÿ1 ; (6) I Rhizo+Azo 1,2×105
células sementeÿ1 .
Para a soja, foram utilizados inoculantes líquidos, somando-se as
quantidades estimadas para liberar 1,2×106 células seedÿ1 , misturando-
se
vigorosamente com as sementes e deixando-se secar por 2 h sob
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sombra. Os melhores resultados com feijão comum foram alcançados
com inoculantes de turfa; portanto, para esta leguminosa, foi utilizado
inoculante de turfa, adicionado de uma solução comercial de açúcar
de cana a 10% para aumentar a adesividade (a uma taxa de 200 mL
de solução de açúcar 50 kg sementesÿ1 ) e inoculante para fornecer
1,2 x 106 células de semente -1 . Azospirillum foi fornecido como
inoculante líquido e o procedimento foi o mesmo da soja.
Para inoculação no sulco, o inoculante foi misturado com 200 Lhaÿ1
de água e entregue no sulco.
Todos os experimentos foram distribuídos em um delineamento de
blocos inteiramente casualizados com seis repetições. Os tamanhos das
parcelas variaram de 4×6 m (24 m2 ) a 5,5×6 m (33 m2 ) e em todos os
locais as parcelas foram separadas por linhas de pelo menos 0,5 m e
pequenos terraços de pelo menos 1,5 m para evitar contaminação por
corrida superficial -off contendo bactérias ou fertilizantes, causados por
fortes chuvas que ocorrem frequentemente na temporada de verão. As
datas de semeadura e colheita são mostradas na Tabela 1. A densidade de
plantas foi de cerca de 300.000 plantas haÿ1 para soja e cerca de 240.000 plantas haÿ1 para
Amostragem, colheita e análises de plantas
No estádio V4 da soja (Fehr e Caviness 1977), e aos 25 DAE para o
feijoeiro, foram coletadas aleatoriamente seis plantas por parcela
(evitando linhas estabelecidas para produtividade de grãos) para
avaliação da nodulação (número de nódulos e massa seca por planta) .
Essa avaliação precoce da nodulação é capaz de identificar efeitos da
inoculação, uma vez que nódulos tardios também são formados pela
população de rizóbios do solo indígena. Outra colheita foi realizada no
estádio R2 da soja e aos 38 DAE (floração) do feijoeiro para avaliação
do crescimento das plantas e N total na parte aérea.
No laboratório, a parte aérea foi separada das raízes e estas foram
cuidadosamente lavadas e colocadas em secador forçado a ar a 65°C
até obtenção de peso constante (aproximadamente 72 h). Os nódulos
foram retirados das raízes e secos novamente, para determinação da
nodulação (número de nódulos e peso seco). A massa seca da parte
aérea foi avaliada, bem como o teor de N da parte aérea pelo método
de digestão Kjeldahl, usando um analisador automático de N Tecator.
O rendimento de grãos na maturidade fisiológica foi determinado
pela colheita de uma área central de cada parcela, e as áreas colhidas
são mostradas na Tabela 1. Os grãos foram limpos e pesados e os
valores foram corrigidos para 13% de umidade, após determinação da
umidade em um grão testador de umidade.
análise estatística
Os dados de cada experimento foram primeiramente submetidos a
testes de normalidade e homogeneidade de variâncias para cada
variável e, em seguida, à análise de variância (ANOVA). Ao confirmar
um valor estatisticamente significativo no teste F (pÿ0,05), foi utilizado
um teste post hoc (teste de múltiplos intervalos de Duncan em pÿ0,05)
como procedimento de comparação múltipla (SAS Institute 2001).
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Resultados ao controle. Curiosamente, o desempenho da cultura não foi melhorado

Tanto em Londrina quanto em Ponta Grossa, os solos apresentaram alta
população de bradirizóbios de soja naturalizados
(Tabela 1), e embora não haja diferenças na nodulação
foram observadas no estádio V4, inoculação de sementes com
B. japonicum, com ou sem inoculação no sulco
com A. brasilense na concentração de 2,5×105 células
sementeÿ1 melhorou o número de nódulos e a massa seca, principalmente
em Ponta Grossa (Tabela 3). No segundo ano, o
diferenças em Ponta Grossa foram marcantes, com
Aumento de 3,5 vezes no peso seco do nódulo (Tabela 4). Como
esperado, a nodulação sempre diminuiu com a aplicação de N-fertilizante
(Tabelas 3 e 4). Na fase R2, em
por novos aumentos na concentração de A. brasilense
aplicado no sulco, e os rendimentos diminuíram nestes tratamentos
tanto em Londrina quanto em Ponta Grossa. Por fim, vale
mencionando que em ambas as localidades, a aplicação de
200 kg de Nhaÿ1 não trouxe benefícios de rendimento em comparação
à co-inoculação (Tabela 3). Co-inoculação melhorada
rendimento em 82–276 kghaÿ1 (2,9–12,4%) (2009/2010) e
140–323 kghaÿ1 (9,2–4,9%) (2010/2011) quando comparado
com a inoculação apenas com B. japonicum.
Após definir a melhor concentração de A. brasilense para
ser aplicado no sulco no primeiro ano, o bom desempenho
de coinoculação com B. japonicum em sementes e 2,5×105
células sementeÿ1 de A. brasilense em sulco foi confirmada no

lugares e anos, novamente a melhor estratégia para maiores
produção de biomassa vegetal e acúmulo de N em
tecidos foi de inoculação de sementes com B. japonicum e
de coinoculação com a menor concentração de
Azospirillum, com resultados comparáveis ao tratamento
recebendo um alto nível de fertilizante N (Tabelas 3 e 4).
No primeiro ano em Londrina, quando comparado ao controle não
inoculado, a produtividade da soja aumentou em 214 kghaÿ1
(8%) com inoculação de sementes com B. japonicum, e por
296 kghaÿ1 (11,1%) quando coinoculado com A. brasilense
no sulco na concentração de 2,5 × 105 células semente-1
(Tabela 3). Resultados semelhantes e ainda mais expressivos foram
obtido em Ponta Grossa, com aumento de produtividade de 244 kg
ha-1 (12,3%) e 520 kgha-1 (26,3%) para inoculação e
coinoculação, respectivamente, em relação ao não inoculado
segundo ano em Londrina e Ponta Grossa (Tabela 4). Isto
deve ser lembrado que os experimentos foram realizados
em diferentes parcelas. Aumentos de 475 kg ha-1 (14,1%) e
418 kg ha ÿ 1 (16%) em Londrina e Ponta Grossa foram
observadas, respectivamente, quando comparadas ao controle não
inoculado. Curiosamente, os rendimentos também foram estatisticamente
maiores do que no tratamento inoculado exclusivamente com
B. japonicum, e também quando comparado com A. brasilense
aplicado no sulco sem inoculação de sementes com B. japoni cum.
Finalmente, os aumentos de rendimento também foram observados em um novo
tratamento incluído no segundo ano, consistindo de co-inoculação de
sementes com B. japonicum (1,2×106 células sementeÿ1 )
e A. brasilense (1,2×105 células sementeÿ1 ). Em comparação a
o controle não inoculado, a coinoculação de sementes resultou em
aumentos de rendimento de 395 (11,7%) e 445 (17,1%) kg ha-1 em

Tabela 3 Efeitos da inoculação com Bradyrhizobium e Azospirillum na parte aérea (N total na parte aérea, TNS) no estádio R2 e rendimento de grãos no estádio
na nodulação (número de nódulos, NN; e peso seco do nódulo, NDW) em colheita final de soja. Experimentos realizados em Latossolos de Lon drina e Ponta
Estágio V4, crescimento da planta (peso seco da parte aérea, SWD) e acúmulo de N Grossa, na safra 2009/2010

Tratamento Londrina Ponta Grossa

V4 R2 Colheita V4 R2 Colheita

NN NDW SDW TNS Colheita NN NDW SDW TNS Colheita

(n° plÿ1 ) (mg plÿ1 ) (g plÿ1 ) (mg N plÿ1 ) (kg ha - 1 ) (sem plÿ1 ) (mg plÿ1 ) (g plÿ1 ) (mg N plÿ1 ) (kg ha - 1 )

DENTRO 20,7 ab 101 a 3,26 a 95b 2663 c 28,8 a 106 a 5.13b 144b 1976 c
NI + N 13,9 b 33b 3,79 a 119 ab 2881 b 26,0 a 53b 6,57 a 212 a 2305 ab

I (semente de Brady) 21,1 a 102 a 3,78 a 118 ab 2877b 32,7 a 125 a 6,56 a 210 a 2220b
Sulco I+Azo 22,7 a 108 a 3,94 a 135 a 2959 a 32,8 a 121 a 6,50 a 214 a 2496 a
2,5 × 105 células semente-1
Sulco I+Azo 19,1 a 100 a 3,52 a 113 ab 2843b 29,1 a 106 a 5,55 a 166 a 2321 ab
5×105 células sementeÿ1
Sulco I+Azo 21,9 a 96 a 3,33 a 111 ab 2813b 28,8 a 101 a 5,57 a 170 a 2217 aC
7,5 × 105 células semente-1

Escala de Fehr e Caviness (1977)

aNI não inoculado e sem N-fertilizante; NI+N não inoculado com 200 kg de N haÿ1 , dividido duas vezes, na semeadura e R2; I inoculação de sementes Brady
com Bradyrhizobium, 1,2×106 células sementeÿ1 ; Azo inoculação com Azospirillum em sulco, com diferentes concentrações
b
As médias (n=6) de uma mesma coluna seguidas de letras diferentes são significativamente diferentes (pÿ0,05, teste de Duncan)
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796 Biol Solos Férteis (2013) 49:791–801

Tabela 4 Efeitos da inoculação com Bradyrhizobium e Azospirillum na parte aérea (N total na parte aérea, TNS) no estádio R2 e rendimento de grãos no estádio
na nodulação (número de nódulos, NN; e peso seco do nódulo, NDW) em colheita final de soja. Experimentos realizados em Latossolos de Lon drina e
Estágios V4, crescimento da planta (peso seco da parte aérea, SWD) e acúmulo de N Ponta Grossa, na safra 2010/2011

Tratamento Londrina Ponta Grossa

V4 R2 Colheita V4 R2 Colheita

NN NDW SDW TNS Rendimento NN NDW SDW TNS Colheita

(n° plÿ1 ) (mg plÿ1 ) (g plÿ1 ) (mg N plÿ1 ) (kg haÿ1 ) (n° plÿ1 ) (mg plÿ1 ) (g plÿ1 ) (mg N plÿ1 ) (kg haÿ1 )

DENTRO
32,1 ab 112a 3,35 b 107b 3360c 20,2 b 56b 4,98b 145b 2599 c
NI + N 18,9 b 24b 4,01 a 134 a 3760 a 17,7 b 44b 6,88 a 223 a 3069 a

I (semente de Brady) 33,2 a 123 a 4,08 a 136 a 3512b 42.1a 195 a 6,96 a 188 ab 2877 aC
Sulco I+Azo 41,3 a 136 a 4,21 a 149 a 3835 a 45,7 a 212 a 6,99 a 234 a 3017 a
2,5 × 105 células semente-1
Sulco NI+Azo 21.1b 133 a 3,61 a 116 a 3446 aC 20,1 b 66b 5,15b 154b 2873 aC
2,5 × 105 células semente-1
Semente I+Azo 35,6 a 120 a 3,88 a 129 ab 3755 a 38,8 a 181 a 6,55 a 218 a 3044 a
1,2 × 105 células semente-1

Escala de Fehr e Caviness (1977)

aNI não inoculado e sem N-fertilizante; NI+N não inoculado com 200 kg de N haÿ1 , dividido duas vezes, na semeadura e R2; I inoculação de sementes Brady
com Bradyrhizobium, 1,2×106 células sementeÿ1 ; Azo inoculação com Azospirillum em sementes ou em sulco, com diferentes concentrações
b
As médias (n=6) de uma mesma coluna seguidas de letras diferentes são significativamente diferentes (pÿ0,05, teste de Duncan)

Londrina and Ponta Grossa, respectively, and of 243 (6.9 %)
e 167 (5,8 %) kg haÿ1 em comparação com a inoculação de sementes
exclusivamente com B. japonicum (Tabela 4).
Considerando os tratamentos que foram incluídos nas quatro
experimentos de campo realizados com soja, semente anual
inoculação com B. japonicum resultou em produtividade média de grãos
aumento de 222 kgha-1 , ou 8,4%, enquanto a co-inoculação
com A. brasilense em sulco aplicado na concentração de
2,5 × 105 células semente-1 aumentou o rendimento de grãos em média
427 kg ha - 1 , ou 16,1% (Fig. 1). Aumento do rendimento devido ao
co-inoculação com Azospirillum foram estatisticamente maiores
Fig. 1 Efeitos da inoculação de sementes com Bradyrhizobium e sulco
inoculação com Azospirillum na produtividade de grãos de soja (em quilograma por
hectare). Os tratamentos são representados por NI (não inoculados); NI+N
(não inoculado + 200 kg de N haÿ1 , 50 % na semeadura e 50 % no R2); EU
do que a inoculação exclusivamente com B. japonicum
(Fig. 1). Considerando os dois experimentos realizados no
segundo ano, co-inoculação de sementes com ambos os microrganismos
resultou em um aumento de 420 kg ha-1 (14,1 %) em comparação com o
controle não inoculado e de 205 kg ha-1
(6,4%) em comparação com a inoculação de sementes exclusivamente
com B. japonicum (Tabela 4).
Para o feijão comum na estação chuvosa, a inoculação de sementes
com R. tropici e co-inoculação em sulco com
Azospirillum em uma concentração de 2,5 × 105 células semente-1
resultou, aos 25 DAE, em maior nodulação tanto em Londrina
e Ponta Grossa (Tabela 5). Curiosamente, em Ponta Grossa,
o aumento da nodulação também foi observado pela inoculação
exclusivamente com Azospirillum no sulco. Aos 38 DAE, o maior
biomassa vegetal e N total na parte aérea também foi obtido pela
co-inoculação (semente-1 de 2,5×105 células ). Um aumento de
147 kg haÿ1 — estatisticamente significativo em comparação com o
controle não inoculado com uma população indígena de mais
de 103 células gÿ1 de solo - foi observada em Londrina com o
inoculação de sementes com R. tropici, mas a diferença não foi
estatisticamente significante em Ponta Grossa (Tabela 5). No entanto,
co-inoculação com A. brasilense em sulco (2,5×105 células
seedÿ1 ) aumentou significativamente a produtividade de grãos em Londrina
e Ponta Grossa, por 383 e 432 kg ha ÿ 1 , respectivamente, em
comparação com o controle não inoculado, e por 236 e
323 kg ha - 1 , respectivamente, em comparação com a inoculação

Brady, inoculação de sementes com Bradyrhizobium, 1,2×106 células sementeÿ1 ;
Azo, inoculação com Azospirillum em sulco, na concentração de
2,5×105 células sementeÿ1 . Os dados representam as médias de quatro
experimentos de campo, cada um com seis repetições, realizados em dois locais (Londrina e
Ponta Grossa) para duas safras (2009/2010 e 2010/2011). Letras diferentes
indicam diferença estatística (pÿ0,05, teste de Duncan)
com apenas R. tropici. É interessante observar que os grãos
O rendimento do tratamento de inoculação que promoveu os melhores
resultados foi maior, embora não significativamente, do que quando
80 kg haÿ1 de N, como fertilizante químico,
Londrina ou Ponta Grossa (Tabela 5).
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Biol Solos Férteis (2013) 49:791–801 797

Tabela 5 Efeitos da inoculação com Rhizobium e Azospirillum em aos 38 DAE (floração) e produtividade de grãos na colheita final de
nodulação (número de nódulos, NN; e peso seco do nódulo, NDW) a 25 feijão. Experimentos foram realizados em Latossolos de Londrina e Ponta
(vegetativo precoce) dias após a emergência (DAE), crescimento das plantas (broto seco Grossa na estação chuvosa de 2009/2010
peso, SWD) e acúmulo de N na parte aérea (N total na parte aérea, TNS)

Tratamento Londrina Ponta Grossa

25 DAE 38 DAE Colheita 25 DAE 38 DAE Colheita

NN NDW SDW TNS Colheita NN NDW SDW TNS Colheita

(n° plÿ1 ) (mg plÿ1 ) (g plÿ1 ) (mg N plÿ1 ) (kg ha - 1 ) (n° plÿ1 ) (mg plÿ1 ) (g plÿ1 ) (mg N plÿ1 ) (kg ha - 1 )

DENTRO 0,8 bb 1,8 dias 1,69b 34a 915 c 13,0c 10,6 b 4,80 a 102c 1434b

NI + N 2,8 b 1,2 dias 1,98 ab 45 a 1176 ab 18,0c 20,7 b 5,06 a 119 aC 1739 ab

I (semente de rizo) 18,2 a 20,2 a 1,67b 37a 1062 b 34,1 a 43,8 a 5,16 a 143 ab 1543 b

Sulco I+Azo 16,4 a 19,0 a 2,38 a 54 a 1298 a 48,2 a 41,9 a 5,27 a 151 a 1866 a
2,5 × 105 células semente-1
Sulco NI+Azo 2.07b 1,9 dias 1,99 ab 44 a 983 aC 14,6 aC 20,3 b 4,87 a 114 aC 1709 ab
2,5 × 105 células semente-1
Sulco I+Azo 13,4 a 12,9 b 1,86 a 42 a 1077b 49,8a 41,1 a 5.12a 130 abc 1584 ab
5×105 células sementeÿ1
Sulco NI+Azo 6.6b 7,8c 1,64b 36a 933 aC 24,1 aC 28,1 aC 4,82 a 112 c 1484b
5×105 células sementeÿ1

aNI não inoculado e sem N-fertilizante; NI+N não inoculado com 20 kg de N haÿ1 , aplicado fracionado como uréia na semeadura e 60 kg de N aplicado fracionado
aos 25 DAE; I inoculação de sementes de Rhizo com Rhizobium, 1,2×106 células sementeÿ1 ; Azo inoculação com Azospirillum em sulco, com diferentes
concentrações
b
As médias (n=6) de uma mesma coluna seguidas de letras diferentes são significativamente diferentes (pÿ0,05, teste de Duncan)

Na estação seca de 2010, os resultados foram semelhantes aos Ponta Grossa. Em Londrina, a co-inoculação com A. brasi lense aumentou a
aquelas obtidas na estação chuvosa, mas com menores rendimentos em produtividade de grãos em 270 kg haÿ1 em comparação
Ponta Grossa, devido a um longo período de estiagem (Tabela 6). Novamente, ao controle não inoculado, enquanto em Ponta Grossa o
aumentos na nodulação foram observados em Londrina e a diferença foi de 237 kg haÿ1 . Novamente, não há benefícios aumentando

Tabela 6 Efeitos da inoculação com Rhizobium e Azospirillum em (N total na parte aérea, TNS) aos 38 DAE e produtividade de grãos na colheita final
nodulação (número de nódulos, NN; e peso seco do nódulo, NDW) a 25 de feijão comum. Experimentos foram realizados em Latossolos de Londrina
(vegetativo precoce) e 38 (floração) dias após a emergência (DAE), e Ponta Grossa, na estação seca de 2010
crescimento das plantas (peso seco da parte aérea, SWD) e acúmulo de N na parte aérea

Tratamento Londrina Ponta Grossa

25 DAE 38 DAE Colheita 25 DAE 38 DAE Colheita

NN NDW SDW TNS Colheita NN NDW SDW TNS Colheita

(n° plÿ1 ) (mg plÿ1 ) (g plÿ1 ) (mg N plÿ1 ) (kg ha - 1 ) (n° plÿ1 ) (mg plÿ1 ) (g plÿ1 ) (mg N plÿ1 ) (kg ha - 1 )

DENTRO 13,1 bb 15,8b 1,22 b 22,3 b 980 c 8,9 b 9.2b 1,01 b 21,7 b 551b

NI + N 6,9 b 5,1c 2,05 a 46,1 a 1298 a 7,0 b 5.1b 2,02 a 43,2 a 808 a

I (semente de rizo) 30,2 a 35,3 a 2,18 a 42,7 a 1150 aC 21,2 a 25,2 a 1,88 a 41,3 a 615b

Sulco I+Azo 35,5 a 39,2 a 2,22 a 48,2 a 1250 a 29,9 a 30,4 a 2,12 a 42,9 a 788 a
2,5 × 105 células semente-1
Sulco NI+Azo 15,6 b 19,7 b 1,30 b 28,1 b 972 c 10.1b 11.1b 1,22 b 24,6 b 638b
2,5 × 105 células semente-1
Sulco I+Azo 29,7 a 36,3 a 1,89 a 38,9 a 1170b 23.2a 18,2 ab 1,34b 27,2b 784 a
5×105 células sementeÿ1
Sulco NI+Azo 12,8b 18,9 b 1,33 b 29,0 b 970 c 9,9 b 10.1b 1,02 b 21,1 b 551b
5×105 células sementeÿ1

uma

As médias (n=6) de uma mesma coluna seguidas de letras diferentes são significativamente diferentes (pÿ0,05, teste de Duncan)

bNI não inoculado e sem N-fertilizante; NI+N não inoculado com 20 kg de N haÿ1 , aplicado fracionado como uréia na semeadura e 60 kg de N aplicado fracionado
aos 25 DAE; I inoculação de sementes de Rhizo com Rhizobium, 1,2×106 células sementeÿ1 ; Azo inoculação com Azospirillum em sulco, com diferentes
concentrações
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798 Biol Solos Férteis (2013) 49:791–801

a dose de Azospirillum para 5×105 células para semente-1 foram

observado (Tabela 6).
Um quinto experimento foi conduzido na estação chuvosa de
2010/2011 em Londrina, desta vez apenas com a melhor dose de A.
brasilense estabelecido nos ensaios anteriores, de 2,5×105 células
sementeÿ1 (no sulco), e incluindo a co-inoculação de sementes, com
1,2×105 células sementeÿ1 (na semente) de Azospirillum (Tabela 7).
A inoculação com R. tropici sozinho, ou co-inoculação com
A. brasilense no sulco ou nas sementes resultou em maior nodulação
aos 25 DAE, bem como biomassa vegetal e N total acumulado na
parte aérea aos 38 DAE. No entanto, não há diferenças estatísticas
foram observadas no rendimento dos tratamentos inoculados em comparação
ao controle não inoculado, mas o tratamento coinoculado
com Azospirillum no sulco melhorou o rendimento em 103 kg haÿ1
(Tabela 7).
Quando uma análise estatística incluindo os cinco experimentos
com feijão comum, inoculação de sementes com R.
tropici resultou em um aumento médio de 98 kg ha-1
8,3% quando comparado ao tratamento não inoculado, com
um aumento adicional de 187 kg ha-1 (14,7%) com a co-inoculação
de A. brasilense no sulco (2,5×105 células
sementeÿ1 ) (Fig. 2). Em relação ao controle não inoculado, a co-
inoculação resultou no impressionante aumento de 285 kg
haÿ1, ou 19,6% (Fig. 2).
Discussão
A ideia de co-inocular leguminosas com rizóbios e PGPR
há muito é perseguido. Há relatos de experimentos
realizado com alfafa (Medicago sativa L.) (Itzigsohn et al.
1993), feijão comum (Burdman et al. 1997; Remans et al.
2008), grão de bico (Cicer arietinum L.), feijão (Vicia bean
Fig. 2 Efeitos da inoculação de sementes com Rhizobium e sulco
inoculação com Azospirillum na produtividade de grãos de feijão (em quilogramas
por hectare). Os tratamentos são representados por NI (não inoculados);
NI+N (não inoculado+20 kg N haÿ1 , aplicado fracionado como uréia na semeadura
e 60 kg de N fracionado aos 25 DAE); I Rhizo, inoculação de sementes com
Rhizobium, 1,2×106 células sementeÿ1 ; Azo, inoculação com Azospirillum
no sulco, na concentração de 2,5×105 células sementeÿ1 . Os dados representam o
meio de cinco experimentos de campo, cada um com seis repetições, realizados em
, ou dois locais (Londrina e Ponta Grossa) para três safras (2009/
2010, 2010 e 2010/2011). Letras diferentes indicam diferença estatística (pÿ0,05,
teste de Duncan)
L.) (Hamaoui et al. 2001), feijão-fradinho (Vigna unguiculata (L.)
Walp) (Lima et al. 2011), e lentilhas (Lens culinaris L.)
(Kumar e Chandra 2008), entre outros. No entanto, a maioria
estudos abordaram apenas aspectos iniciais do desenvolvimento da
relação simbiótica. No Brasil, pouquíssimos experimentos
foi realizado em condições de campo com co-inoculação de
rizóbio e PGPR, incluindo ambos positivos (por exemplo, Bacillus
subtilis e B. japonicum em soja) (Araújo e Hungria
1999) e neutro (por exemplo, A. brasilense e B. japonicum em
soybean) (Bárbaro et al. 2009) responses. Worldwide, there
também são poucos os relatos de experimentos realizados em campo
condições com coinoculação de microrganismos com

Tabela 7 Efeitos da inoculação com Rhizobium e Azospirillum em N na parte aérea, TNS) aos 38 DAE e produtividade de grãos na colheita final de
nodulação (número de nódulos, NN; e peso seco, NDW) aos 25 (início feijão comum. Experimentos foram realizados em Latossolos de Londrina, em
vegetativo) e 38 (floração) dias após a emergência (DAE), a estação chuvosa de 2010/2011
crescimento (peso seco da parte aérea, SWD) e acúmulo de N na parte aérea (total

Tratamento Londrina

25 DAE 38 DAE Colheita

NN (n ° pl ÿ 1 ) NDW (mg pl ÿ 1 ) SDW (g pl ÿ 1 ) TNS (mg N plÿ1 ) Rendimento (kg ha-1 )

DENTRO 11,1 bb 9,7 b 2,29 b 51.1b 2039 b

NI + N 6,8b 5.3b 2,97 a 85,2 a 2259 a

Eu (Rhiz) 22,3 a 24,5 a 2,87 a 82,9 a 2040 ab

I+Sulco Azo 2,5×105 células sementeÿ1 29,6 a 29,2 a 2,88 a 86,1 a 2142 ab
NI+Sulco Azo 2,5×105 células sementeÿ1 13.1b 11.3b 2,39 a 71,5 ab 1988 b
I+Azo semente 1,2×105 células sementeÿ1 23,4 a 24,7 a 2,86 a 82,6 a 2018 b

uma

As médias (n=6) de uma mesma coluna seguidas de letras diferentes são significativamente diferentes (pÿ0,05, teste de Duncan)

bNI não inoculado e sem N-fertilizante; NI+N não inoculado com 20 kg de N haÿ1 , aplicado fracionadocomo uréia na semeadura e 60 kg de N aplicado fracionado
aos 25 DAE; I inoculação de sementes de Rhizo com Rhizobium, 1,2×106 células sementeÿ1 ; Azo inoculação com Azospirillum no sulco ou na semente
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Biol Solos Férteis (2013) 49:791–801
funções diferentes. Em nosso relato, os experimentos tiveram como objetivo
avaliar a nodulação, o crescimento das plantas e a produtividade de grãos
como resultado da coinoculação, e todos foram realizados em locais
representativos das áreas cultivadas com soja e feijão no Brasil. As linhagens
elite utilizadas nos experimentos foram selecionadas no Brasil para a soja
(Peres et al. 1993), feijão comum (Hungria et al. 2000) e de A. brasi lense
(Hungria et al. 2010) e compõem os inoculantes comerciais em Brasil para
as culturas estudadas.
As culturas cultivadas em função da fixação biológica de nitrogênio
devem ser bem noduladas por bactérias eficazes para obter o máximo de
benefícios da associação simbiótica. Uma vez que os nódulos de
leguminosas são iniciados a partir de pêlos radiculares, a estimulação da
produção de pêlos radiculares pela atividade da azospirilla pode resultar em
mais nódulos nas raízes das leguminosas. Efeitos positivos da co-inoculação
de rizóbio e azospirilla no número de pêlos radiculares e consequentemente
na nodulação foram observados em alfafa (Itzigsohn et al. 1993). Burdman
et ai. (1997) não mediram a produção de pêlos radiculares, mas também
observaram aumento da nodulação e fixação de nitrogênio quando feijão-
comum foi co-inoculado com rizóbio e azospirila. Remans et ai. (2008)
determinaram que o efeito da co-inoculação de Azospirillum dependia do
genótipo de feijão. O aumento da nodulação como resultado da co-inoculação
com Azospirillum também foi observado em grão de bico (Hamaoui et al.
2001), galega (Galega orientalis Lam.) (Egamberdieva et al. 2010) e lentilhas
(Kumar e Chandra 2008). Em nossos experimentos, não medimos a
produção de pêlos radiculares em resposta à presença de Azospirillum, mas
a nodulação da soja e do feijão concorda com os relatos acima de aumento
da nodulação quando ambos os inoculantes são empregados. A melhora na
nodulação observada pode ter resultado em maiores teores de N na parte
aérea e, por sua vez, em maiores rendimentos de grãos. No entanto, foi
interessante notar que os benefícios do PGPR não foram observados
quando doses maiores de Azospirillum foram aplicadas no sulco. PGPR
pode produzir uma variedade de hormônios vegetais em mecanismos ainda
não totalmente compreendidos, e em concentrações mais altas, hormônios
vegetais, ou etileno, ou outros compostos podem inibir o crescimento das
plantas (Bhattacharyya e Jha 2012; Martínez-Viveros et al. 2010).
Não está claro, no entanto, se os benefícios da inoculação de
leguminosas com rizóbios e azospirila são apenas devido ao aumento da
nodulação e fixação de nitrogênio. O gênero Azospirillum pertence ao amplo
grupo das PGPR, que podem atuar por diferentes mecanismos, em conjunto,
resultando em estímulo ao crescimento das plantas. Esses tipos de
benefícios foram observados para não leguminosas, como bananas (Musa
spp.)
(Baset Mia et al. 2010), onde a inoculação com PGPR resultou em efeito
sinérgico no crescimento e desenvolvimento das raízes, aumento da
produtividade, melhoria dos atributos físicos de qualidade dos frutos e início
precoce da floração. Situação semelhante foi relatada com trigo (Triticum
aestivum L.) co-inoculado com A. brasilense e Rhizobium meliloti, com
799
melhoria não só do rendimento, mas também da qualidade dos grãos
(Askary et al. 2009).
A inoculação com PGPR também provou ser benéfica para leguminosas.
No Egito, Massoud et al. (2009) observaram que uma mistura contendo
fungos micorrízicos arbusculares, simbiótico Rhizobium sp., associativo
Azospirillum sp. e Bacillus cir culans aumentaram a altura de plantas,
número de ramos, número de nódulos por planta e produtividade fresca de
feijão, quando comparados com plantas testemunhas. Resultados
semelhantes, mas utilizando uma mistura de Rhizobium e Pseudomonas sp.
ou Bacillus sp. resultou em melhor peso seco da parte aérea, teores de N e
P em plantas de feijoeiro (Stajkoviÿ et al. 2011). Esses autores também
observaram atividade solubilizadora de fosfato in vitro, ácido indol acético,
amônia e produção de sideróforos por Pseudomonas sp., que em conjunto
poderiam explicar a promoção do crescimento do feijoeiro. Yadegari e Asadi
Rahmani (2010) observaram que a co-inoculação com Rhizobium e P.
fluores cens aumentou significativamente o rendimento e os componentes
do rendimento, como número de vagens por planta, número de sementes
por vagem, peso de 100 sementes, massa de sementes por planta , massa
de vagens por planta, matéria seca total em R6, bem como produtividade de
grãos e teor de proteína no feijão.
Em não leguminosas, também podem ser observados efeitos sinérgicos.
Em tomates (Lycopersicon esculentum Mill.), por exemplo, a inoculação
com Azospirillum e outro PGPR fixador de nitrogênio compensa de alguma
forma as perdas de rendimento causadas pela aplicação de RNA satélite
viral para induzir resistência sistêmica e proteger as plantas de danos
causados por cepas virulentas de mosaico de pepino vírus (Dashti et al.
2007). Esses achados demonstram que Azospirillum contribui para melhorar
o crescimento das plantas e o rendimento das culturas por uma série de
mecanismos, e podem explicar os resultados que obtivemos em nossos
experimentos de campo.
Em nossos experimentos, para a cultura da soja e em geral para o feijão,
não foram observados benefícios na produtividade de grãos com a aplicação
do fertilizante nitrogenado. Embora algumas vezes possam ser observadas
respostas aos fertilizantes nitrogenados minerais, especialmente para a
cultura do feijão (eg Vargas et al. 2000), a relação custo/benefício deve ser
levada em consideração. No Brasil, onde cerca de 70% dos fertilizantes
nitrogenados são importados, os custos de aplicação do N mineral são
muito elevados e situação semelhante é encontrada em vários outros
países. Os inoculantes microbianos são muito baratos e considerando
apenas a cultura da soja, estima-se que o Brasil economize cerca de US$ 7
bilhões anoÿ1 com a fixação biológica de nitrogênio. Além disso, os custos
ambientais dos fertilizantes N devem ser considerados, uma vez que o uso
de 100 kg de N-fertilizante corresponde a cerca de 950 kg de CO2
equivalente. Portanto, o uso de fixadores de nitrogênio eficazes e
microrganismos PGPR na agricultura é economicamente viável e
ambientalmente correto. O aumento de rendimento associado à inoculação
microbiana representará, portanto, um alto ganho de caixa para o agricultor
e contribuirá para os compromissos governamentais de redução das
emissões de gases de efeito estufa. Os resultados relatados neste trabalho
corroboram a recomendação de sementes
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inoculação (e reinoculação a cada ano) para soja e feijão na
semeadura com linhagens elite de Bradyrhizobium e
Rhizobium, respectivamente, e com ganhos adicionais quando
se utiliza A. brasilense na coinoculação em sulco. Considerando
todos os ensaios de campo, a co-inoculação de rizóbios em
sementes e A. brasilense no sulco resultou em aumentos
expressivos na produtividade de grãos, em média 16,1 %
para soja e 19,6 % para feijão em comparação com a
população de rizóbios naturalizados/indígenas, e de 7,1 e
14,7 %, respectivamente, em comparação à inoculação
exclusivamente com rizóbios.
Acknowledgments The study was partially supported by CNPq (Conselho Nacional
de Desenvolvimento Científico e Tecnológico, Brazil), CNPq-Microrganismos
Facilitadores (557746/2009-4), CNPq-Repensa (562008/2010-1) and CNPq-CAPES-
Science without Borders (UEL-Embrapa Soja- ICGEB). M. Hungria, M. A. Nogueira,
and R. S. Araujo are also research fellows from CNPq.
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