INSTRUMENTASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUSLIM INDONESIA

TUGAS INSTRUMENTASI

“ELEKTROFORESIS &PCR”

OLEH :

NAMA :YUKIAYUMIARRIDWAN

STAMBUK 15020190003

KELAS :C4

DOSENPENGAMPU :Apt.NurmayaEffendi,S.Si.,M.Sc.,Ph.D

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUSLIM INDONESIA

MAKASSAR

2021
1. Prinsip kerjaelektroforesis
Jawaban:
MenurutGeorgeStokesbesarnyagayagesekpadafluidadisebabkanviskositasfluida.Semakinbesar
viskositas(kekentalan)fluidamakaakansemakinsulitsuatufluidauntukmengalirdanjugamenunjukkan
semakinsulitsuatubendabergerakdalamfluidatersebut.Didalamzatcairviskositasdihasilkanolehgaya
kohesiantaramolekulzatcair.GayainidisebutgayaStoke.SuatumolekulbermuatanQdalammedan
listrikberkekuatanxakanbergerakdengankecepatanvkarenamengalamigayasebesarqx.Jikaf
merupakankoefisiengesekan(friksi),makamolekultersebutakanmengalamigayahambatsebesarvf,
sehinggaqx=vf.Makakoefisiengesekan(f)adalahsebagaiberikut:

PadaelektroforesismediapemisahnyaberupagelAgarosaataulainnyayangmemilikitingkatviskositas
tinggi.Dengandemikiandapatdihitunglajumolekulnyaadalahsebagaiberikut:

Lajudalamelektroforesissangatbergantungpadakekentalanmedium(n),ukuranataubentuk(r),dan
muatanmolekul(q).Kekuatanasampadamediumjugamempengaruhibesarmuatanpadasaationisasi
berlangsungsehinggadiperlukanlarutanbufferuntukmengatasimasalahini.Danjugaperludilakukan
analisis terhadap kemampuan media untuk memisahkan molekul- molekul agar lebih efektif dan
maksimal.
Alatelektroforesisterdiridarimediumpemisahyangterhubungdenganduaelektrodadankertassaring.
MediapemisahdapatberupagelAgarosa,patiataupoliakrilamida.Mediaterdiridariduabagianyang
dihubungkandengansumbuasbes;satubagianberisielektrodaplatinadanyanglainkontakdengan
mediumelektroforesis.

2. KomponenElektroforesisdanPCR
Jawab:
a. KomponenElektroforesis
Elektroforesis terdiri dari beberapa komponen utama dalam penggunaanya. Yang pertama adalah
larutanelektrolityangberfungsisebagaipembawakomponen.Umumnyaberupalarutanbuffer
dengan pH tertentu sesuai dengan karakteristik senyawa yang akan dipisahkan. Berikutnya media
pemisah merupakan tempat proses pemisahan terjadi. Media pemisah ini berupa kertas (selulosa
asetat,selulosanitrat),gelkanji,gelpolikrilamid,busapoliuretanatauagar-agar.Selanjutnyayang
palingpentingadalahelektrodayangberfungsisebagaipenghubungaruslistrikdenganmedia
pemisahdanbateraiatauaruslistriksebagaisumberenergi(source)padarangkaianalat.
Penggunaan Medium
PemisahKeberhasilandariteknikelektroforesisdipengaruhipemilihanmediumpemisahnya.Adadua
mediumyangseringdigunakandalammenggunakanelektroforesis.YangpertamagelAgarosa.
Merupakanmetodestandaruntukmengidentifikasisertamemurnikanfragmen-fragmenDeoxyribo
NucleicAcid(DNA)danRiboseNucleicAcid.Senyawaantersebutmerupakanpembawagenetikapada
makhlukhidup-dilakukanpadamedanlistrikhorizontal.Kelebihandarigelinilebihmudah,sederhana
danlajupemisahannyalebihcepatmembentukfragmenfragmendantidakbersifattoksik.Hanyasaja
 kelemahannyagelinimemilikisensitifitastinggidanmudahrusaksehinggamemerlukanketelitiandan
kehati-hatianpadaprosespengerjaannya.Yangkeduagelpoliakrilamida.Gelinimemilikimemiliki
resolusi tinggi pada hasil pemisahannya. Membutuhkan tegangan listrik yang tinggi pada
pengerjaannyadandilakukanpadamedanlistrikvertical.Persiapanpengerjaanmembutuhkanwaktu
relatiflama,mahaldanmemilikilajupemisahanyanglebihlambatdibandingkangelAgarosa(Rita
Elfianis)

b. KomponenPCR
1) DNAcetakan,yaitufragmenDNAyangakandilipatgandakan.DNAcetakanyangdigunakan
sebaiknyaberkisarantara105–106molekul.Duahalpentingtentangcetakanadalahkemurnian
dankuantitas.
2) Oligonukleotidaprimer,yaitusuatusekuenoligonukleotidapendek(18–28basanukleotida)yang
digunakanuntukmengawalisintesisrantaiDNA.DanmempunyaikandunganG+Csebesar50–
60%.
3) Deoksiribonukelotidatrifosfat(dNTP),terdiridaridATP,dCTP,dGTP,dTTP.dNTPmengikation
Mg2+ sehingga dapat mengubah konsentrasi efektif ion. Ini yang diperlukan untuk reaksi
polimerasi.
4) EnzimDNAPolimerase,yaituenzimyangmelakukankatalisisreaksisintesisrantaiDNA.Enzimini
diperolehdariEubacteriumyangdisebutThermusaquaticus,spesiesinidiisolasidaritaman
Yellowstonepadatahun1969.Enzimpolimerasetaqtahanterhadappemanasanberulang-ulang
yangakanmembantumelepaskanikatanprimeryangtidaktepatdanmeluruskanwilayahyang
mempunyai struktursekunder.
5) Komponenpendukunglainadalahsenyawabuffer.LarutanbufferPCRumumnyamengandung10
–50mMTris-HClpH8,3-8,8(suhu20oC);50mMKCl;0,1%gelatinatauBSA(BovineSerum
Albumin);Tween20sebanyak0,01%ataudapatdigantidenganTritonX-100sebanyak0,1%;
disampingituperluditambahkan1,5mMMgCl2.

3. Tuliskan dan jelaskan jenis-jenis elektroforesis!

Jawab:
Adabeberapajeniselektroforesisyangdapatdigunakandalamprosespemisahansuatumolekul,
diantaranya:
1. Elektroforesis kertas dan selulosaasetat
Prinsipelektroforesiskertasdanelektroforesisselulosaasetathampirsama,hanyaberbedapada
mediumpenyanggayangdigunakan.Elektroforesisberperandalamprosespemisahanprotein
berdasarkanmobilitaspadapHtertentu.PadatitikisolistrikyaitukeadaanpHsaatmuatanpositif
samadenganmuatannegatifsehinggapadapHisolisterikmolekulproteintidakbergerakdalam
medanlistrik.
Elektroforesis selulosa asetat memiliki medium penyangga berupa selulosa asetat,sehingga
absorpsiyangterjadisangatrendahdanpemisahanyangjelasdarisuatucampurankedalamdaerah
yabfterpisah.Senyawamudahterelusidengabrecoveryyangbaik.Padaelektroforesisselulosa
asetathanyadiperlukansampeldalamjumlahyangsangatkecildanpemisahandapatdiselesaikan
dalamwaktu1jam.Sedangkanpadaelektroforesiskertasmembutuhkanwaktuselamasatumalam.

2. Elektroforesis Gel Poliakrilamida Sodium Dodesilsulfat (SDSGel)

ElektroforesisSDSgelpoliakrilamida(SDSPAGE)adalahsalahsatujeniselektroforesisyangbanyak
digunakan secara luas pada saat ini. SDS PAGE memiliki keuntungan yang lebih besar dari
elektroforesis kertas dan selulosa. Hal tersebut berhubungan dengan besarnya pori medium
penyangga,perbandingankonsentrasiakrilamidadanbismetilenakrilamida.Selainhaltersebutgel
tidakmenimbulkanaliranpanassecarakonveksidanbersifattransparan.

3. Elektroforesis TeganganTinggi
Adaduamacamteknikelektrifiresistegangantinggiyangviasadigunakanyaituelektroforesisfree
boundary dan elektroforesis zona. Pada elektroforesis zona,pita protein lebih stabil dengan
menggunakanmediumpenyanggaberupakertas.Waktuyangdigunakanuntukelektroforesiskertas
samasepertikromatografikertas(biasanta18-20jam)denganteganganlistriknormalsebesar100-
500V.Namunkualitasspotyangdihasilkantidaksebaikkromatografukarenapengaruhdifusidan
resonansidarisenyawayangmemilikimobilitasserupasangatsulitdicapai.Padakondisiyangsesuai
protein memiliku muatan listrik yang tinggi dan mobilitas seperti ion dengan bobot molekul
rendah,sehinggasetelah16janpitaproteinmasihcukuptajamdanmemilikiresolusiyangbaik.

4. Elektroforesis GelSlab
Elektroforesisgelslabadalahsalahsatuteknikpemisahanuntumkarakterisasimakromolekul dan
penentuan tingkat kemurnian suatu makromolekul. Elektroforesis tersebut berdasarkanpada
 muatanmolekulsepertiDNA,RNAdanproteinmemilikumuatansehinggadapatbergerakjika
ditempatkanpadasuatumedanlistrik.Padaelektroforesisgelslab,akrilamidayangdigunakan
dipolimerisasikedalamslabberbentuksegiempatdiantaraduapelatkaca.

5. Elektroforesis GelAgarosa
Gelyangdigunakandibentukdariagarosaataypoliakrilamida.Agarosadapatdigunakanuntuk
pemisahanfragmenDNAdenganukuranbeberaparatushinggasekitar20.000kb.Agarosadibuat
dengancaramelarutkanbubukagarosadalancairanbuffermendidihsehinggapadasuhu38derajat
celciusmembentukgel.Padakonsentrasi1%w/vgeldalambuffermengandungairtinggi,struktur
seratbaik,ukuranporibesardantahangesekan.Penggunaanelektroforesisgelagarosaberlangsung
sangatcepatterutamaterhadappemisahanmakromolekul.

4. Faktor-faktoryangmempengaruhihasilpengukuranmenggunakanelektroforesisdanPCR!
Jawab:

Adapun Faktor-faktor yang mempengaruhi hasil pengukuran menggunakan elektroforesis :

Metodastandaryangdigunakanuntukmemisahkan,mengidentifikasidanmemurnikanfragmendna
adalahelektroforesisgelagorose.teknikinisederhana,cepatterbentuk,danmampumemisahkan
campuran potongan dna sesuai dengan ukurannya secara akurat, dibanding dengan densitas gradient
sentrifugasi. selanjutnya, lokasi dna dalam gel tersebut dapat diidentifikasi secara langsung dengan
menggunakan pewarnaberfluorescen.

adabeberapafaktoryangsangatmempengaruhikeberhasilanproseselektroforesisdalamanalisisini.
menurutardhana(2011)faktor-faktortersebutdiantaranyaadalahukuranmolekuldna,konsentrasigel
agarosa,konformasidna,voltase,keberadaanpewarnadna,komposisibufferelektroforesisElektroforesis
migration rate selama dna bergerak menembus gel agarose dipengaruhi oleh beberapa factor utama,
sebagaiberikut:

1. ukuran molekulDNA
molekulyanglebihbesarakanbergeraklebihlambat,missaldnalinierlebihcepatdibanding
dnasirkuler.jarakmigrasimolekuldnapadageladalahlajuterbalikproporsionallog-10dari
jumlah pasanganbasa2.
 2. konsentrasi gelagarose
fragmendnayangbervariasiukuranmolekulnyaakanberberaksesuaidengankonsentrasidari
gelagaroseyangdigunakan.rumusnyaadalah:logm=logmo-krtdimanamoadalahfree
electrophoresismobility,kradalahretardationcoefficient,dantadalahgelkonsentrasiserta
madalahelectrophoreticmobilitydna

3. konformasiDNA
lajumigrasijugatergantungpadabentuk/konformasidna,kitatahubahwaada3macam
bentukdnayaitusuper-helixcircular(i),circular-opened(ii),danlinier(iii).meskipunketiga
bentukitumempunyaiberatyangsamatetapilajumigrasipadagelelektroforesisberbeda.
perbedaanlajumigrasiinikarena:
terutamakonsentrasigelagarosekekuatanaruslistrikdanionikbufferyangdigunakan
densitaskembaransuperhelikspadabentukIpadabeberapakondisibentukIlebihcepat
dibanding bentuk III tergantung juga kenaikan kuantitas etbr: konsentrasi etbrmeningkat,
pengikatandnameningkatpulasehinggamobilitasmeningkattajam,contohuntukbentukI
konsentrasietbrkritisantara0.1mg/ml-0.5ml/mg

4. Penggunaan Voltage Dan Arah Dari BidangElektris

voltagerendahmenyebabkanlajumigrasidnalinierproporsional.idealnyauntukdna±2kb
padagelagarosebergerak±5v/cm.arahdaribidangelektriskonstansuntukdna50-100kb
bergerakdenganlajuyangsama,akanberubahsecaraperiodiksesuaikecepatanpergerakan
dnaakanberubahjuga.

5. Komposisi Basa Dna AtauTemperature

Baikkomposisibasamaupuntemperaturetidakbegituberpengaruh,mobilitasdnastabilpada
temp.4-30°c.Danelektroforesisgelagarosedilakukanpadasuhukamar

6. Keberadaan pewarnaDNA
Intercalatingagentethidiumbromide(etbr)adalahpewarnafluoresenuntukdeteksiasam
nukleat,etbriniakanmengikatpadasela-selapasanganbasadna.Etbrdapatmengurangi
mobilitasdnaliniersampai15%.Hanyasedikitdna±1ngdapatdideteksisecaralangsung
dengancarageldiletakkanpadamediauv-transilluminator.Etbrdapatdigunakanuntuk
mendeteksisingle-ataudouble-strandedasamnukleat(dnaataurna).Meskipun,affinitydari
etbr-dye ini untuk single-stranded asam nukleat relative rendah dan pendaran fluorensen
minimum.Perhatian!Etbrinipowerful mutagen,penggunaharusselalumemakaisarung
tangan pada saat bekerja, dan lindungi mata anda dengan kaca pelindung pada saat
mengamatidiatasuv-transilluminator.

7. Komposisi BufferElektroforesis
Bufferelektroforesisyangdigunakanharussesuaidenganpelarutyangdigunakanuntuk
pembuatangelagarose.misal:
a. tris-acetate; umum dipakai untuk preparative, kemampuannya paling rendah, tetapi efektif
untukisolasidnadarigelagarosebaikelektroelusimaupungelekstraksi.
b. tris-borat; resolusi cukup baik, tapi untuk mengisolasi kembali dna dari agarose kurang
effektif,karenaadainteraksidenganagarose

( Ann Sinaga dkk,.2017 )

Adapun Faktor-faktor yang mempengaruhi hasil pengukuran menggunakan PCR :

Keberhasilan PCR ditentukan oleh beberapa faktor, antara lain:

 (1) deoksiribonukleotidatrifosfat(dNTP).LarutanstokdNTPyangakandigunakandalamPCR
sebaiknya dinetralkan menjadi pH 7,0. Untuk menentukan konsentrasinya, dapat digunakan
spektrofotometer. Larutan stock tersebut perlu dituang dalam volume kecil (aliquot) dengsn
konsentrasi 1mM dan disimpan pada suhu -20oC. Konsentrasi masing-masing dNTP yang
diperlukandalamPCRberkisarantara20-200µMdankeempatdNTPyangdigunakansebaiknya 14

(2)oligonukleotidaprimer,

(3)DNAtemplate,dan

(4)komposisi larutanbuffer,

(5) jumlah siklusreaksi,

(6)enzimyangdigunakan,dan

(7) faktorteknisdanfaktornonteknislainnya,misalnyakontaminasi.

( Dinda Eling K.Sasmito , dkk.2014 )

5. BerikancontohdatahasilanalisismenggunakanElektroforesisdanbagaimanamenginterpretasikandata
tersebut!

Jawab:

 ISOLASIDNADENGANELEKTROFORESISAGAROSE
HasilpitaDNAdidapatkanmelaluibeberapatahapdiantaranyaisolasiDNAdarahdanDNA
epitelkemudianmelakukanelektroforesisgelagarose,elektroforesisgeluntukmengetahuiukuran
fragmenDNAdariprodukPCR,memisahkanprodukDNAdarihasildigestiyangberbedaukuran,lalu
dapatdisequencing,danjugauntukpemurnianataupurifikasiDNAreaksiPolimeraseBerantaiatau
dikenalsebagaiPolymeraseChainReaction(PCR),merupakansuatuprosessintesisenzimatikuntuk
mengamplifikasi nukleotida secara in vitro.Metoda PCR dapat meningkatkan jumlah urutan DNA
ribuanbahkanjutaankalidarijumlahsemula,Setiapurutanbasanukleotidayangdiamplifikasiakan
menjadiduakalijumlahnya.PCRadalahmenemukanbagaimanacaraamplifikasihanyapadaurutan
DNAtargetdanmeminimalkanamplifikasiurutannon-target.ProsesPCRmerupakanprosessiklus
yangberulangmeliputidenaturasi,annealingdanekstensiolehenzimDNApolimerase.Berikutadalah
tabelsiklusPCRyangberulangdenganwaktuyangdibutuhkanadalah01.33.54’(satujamtigapuluh
tigamenitlimapuluhempatdetik.
SetelahmelakukanPCRberulangmakaselanjutnyamelakukanelektroforesisgelmenggunakangelagarosa.
DNAmarkeryangdigunakansaatpraktikumadalahleadingdye2danDNAleader5mikro(100bp).Hasil
pengamatan elektroforesis pada sampel darah dan sampel epitel didapatkan melalului Praktikum
elektroforesisgeldimulaidenganpembuatangelagarosa.prosespembuatangelagarosadilakukandengan
caramencampurkanbubukagarosa1gdenganlarutan1XTBEbuffersolutionsebanyak12mLyangberperan
untuk memudahkan migrasi dari fragmen DNA berdasarkan perbedaan kekuatan ionik,bubuk
dipanaskan,kemudiandinginkansampai60oCdantambahkanetidiumbromida,dituangkankedalamcetakan
yang telah disiapkan dengan comb-nya dan tunggu sampai mengeras.Penambahan etidium bromida
dilakukan dengan tujuan mewarnai asam nukleat.Etidium bromida adalah mutagen dan harus ditangani
denganhati-hati.Setelahgelmengeras,geldimasukkankedalamruangelektroforesisdandilakukan
penambahan running buffer.Penambahan running buffer dilakukan dengan tujuan mempermudah
pengerasangelsaatdilakukanpemanasan.Runningelektroforesisdilakukanpadategangan70Voltselama
120menit.TahapselanjutnyaadalahmencampurkanDNAhasilamplifikasilewatprosesPCRdenganloading
bufferyangmemilikifungsimembantusampelturunkedalamwelldanmembantumemonitorberapalama
proseselektroforesistelahberlangsung.DNAmemilikimuatannegatif(DNAmengandunggugusPO4)
sehinggadiharapkanakanbergerakmenujukutubpositif.Praktikumdilanjutkandenganmemasangpenutup
ruangelektroforesisdandiberikanaruslistrik.Geldikeluarkandariruangelektroforesissetelahmengalami
perubahanwarnadandilihatdengansinarUV.Hasildokumentasidilakukandengangeldoc.Komponengel
docterdiridarilampuUV,kameradankomputer.LampuUVberfungsimenerangibagiandalamdalamdarigel
doc, kamera berfungsi memotret hasil elektroforesis dan komputer berfungsi menjalankan proses
dokumentasilewatbantuansoftware.
DariHasilPitaDNASetelahElektroforesispadaMediumAgaroseterlihatbahwapadasumurstandarDNA
darahtampakmengandungDNA,padasumurke8tampakDNAnyahancurdanpadasumur14tidaktampak
DNAdarah.Padasumur2DNAepiteltidaktampakmunculpitaDNA.
  PembahasanElektroforesisgelAgarose,
Hasilelektoforesisgelagaroseyangbandbandnyatidakterlihatdankurangjelasnya
band-band yang terbentuk, menyebabkan hasil tersebut tidak dapat digunakan untuk mengukur
ukuranfragmenDNA.Haltersebutkemungkinandikarenakanbanyakfaktor,antaralainproses
pengisolasianyangtidakbenar,prosesPCRyangkurangbekerja,keterbatasanfasilitasyangtersedia,
dantelahterkontaminasinyasampelDNA.Kekurangtelitianpraktikandalamprosespengerjaannya
punmenjadifaktorketidakberhasilanpraktikumpadabandDNAisolasiseldarahurutankedelapan,
hasiltidaktampakkemungkinankarenapadasaatisolasiDNAhancursehinggatampakbayangan
panjang,padabandDNAisolasiseldarahurutankeempatbelas,hasiltidaktampakkemungkinan
karenapadasaatisolasiDNAkurangtepat.padabandDNAisolasiselepitelurutankedua,hasiltidak
tampakkemungkinankarenapadasaatisolasiDNAkurangtepat,padabanddnaisolasiselepitel
urutankedua,hasiltidaktampakkemungkinankarenapadasaatisolasiDNAkurangtepat,jarakbase
paretidakjelasatautidaktampakkarenavoltase70vyangdigunakantidakmampumengisolasiDNA
kemungkinan dibutuhkan 120 volt supaya jaraknya lebih jelas base pare, analing suhu yang
digunakan52ocmempengaruhipelekatanisolasidnapadaagarsehingga,mempegaruhijarakbase
pairs,jadiisolasiDNAberhasilmakaprimeharustepat,isolasiDNAtidakberhasilkarenavoltasetidak
tepat,konsentrasiagarterlalutinggi,suhutidakterkontrol.diperolehjarakmigrasidariprotein‐
proteinstandardenganbandstandarpemisahanproteinpadagelmenggunakanprinsip
penghambatan terhadap laju migrasi dari protein ‐protein tersebut sehingga pemisahan karena
perbedaanberatmolekulmengakibatkanterbentuknyapita‐pitapadajarakmigrasiyangberbeda
satusamalaindanjaraktersebutjadidarihubunganmarker,standardapatdiperolehmodelregresi
liniernya,yaituDNAepitely=38313e-0.90xR²=0.987danDNAdarahy=1E+06e-1.06xR²=0.996

6. Berikan contoh data hasil analisis menggunakan Elektroforesis dan bagaimana menginterpretasikan
data tersebut!

Jawab:

 ISOLASIPROTEINDENGANELEKTROFORESISSDSPAGE
Salah satu metode PAGE yang umumnya digunakan untuk analisa campuran
proteinsecarakualitatifadalahSDS‐PAGE(SodiumDodecylSulfatePolyacrilamideGelElectroforesis).
Prinsip penggunaan metode ini adalah migrasi komponen akril amida dengan N.N`
bisakrilamida.Elektroforesisdilakukandenganmenempatkanlarutansampelyangsudahdipreparasi
danjugamarker,kedalamsumurSDSPAGE.Elektroforsisdilakukanselamakuranglebih4jam
dilanjutkanpewarnaanselamalebih10jamsampaiterlihatpitaDNAnyadengantegangankonstan
sebesar70voltpadapengecatandenganmenggunakanperaknitratdianalisajarakmigrasipita‐pita
proteinyangterbentukpadagelpemisah.jarakmigrasidiukurdandibandingkandenganjarakyang
ditempuholehpewarnabirubromofenol.Berikutadalahhasilpengamatan:Sampeldarahdari:laki-
lakiPerempuanJumlahdarahyangdiambil:5ccWaktuyangdiambil:08.00WIB
DarifotohasilSDSPAGEpita-pitaDNAtidakterpisahdenganbaikdantidakjelasperbedaansetiappita
DNAnya.Pita-pitaDNAtidakterpisahkemungkinanakibatakrilamidatidakbereaksidengansampeldantidak
membentukmatriksdengansampel,sehinggamenghambatpergerakansampelyangmemungkinkan
pemisahanproteinsecarasempurna.
 PembahasanElektroforesisSDSPAGE
Dariisolasiproteindiperolehsampel,yaitusampelproteinplasma(P),sampel
proteinmembran(M),sampelproteinpengendapangaramtinggi(Gp),Sampelproteinsupernatan
garamtinggi(Gs),sampelproteinsupernatanetanol(Es),sampelproteinpengendapanetanoltinggi
(Ep)dansampelproteinsitoplasmik(S).DarianalisaSDSPAGEmakadiprolehmolekulproteinyang
terdapatpadaband1jarakdenganplasma0,7cmdenganberatmolekulprotein200.000nama
proteinMyosin,band2βGalactosidase3Glycogenphosporilaseb,4Bovineserumalbumin,5
ovalbumindan9AprotinintidaktampakterisiolehDNA,jarakband6denganplasma4,2cmdengan
beratmolekul31.000,jarakband7denganplasma4,7beratmolekul21.500namaproteinsoyben
trypsininhibitor,jarakband8denganplasma5.0mberatmolekul14.400namaproteinadalah
Lysozyme.Jarakband1denganmemmbran1,2,3,4,5,8tidaktampakproteinnya,jarakband6
4,7cm dengan berat molekul 31.000 nama protein Carbonicanhydrase. Jarak band 7 dengan
memmbran4,3cmdenganberatmolekul21.500namaproteinSoybeanTrypsininhibitordanjarak
band9denganmembran6.2cmdenganberatmolekul6.500namaproteinAprotinin.Jarakband6
dengansitoplasmik4.2cmdenganberatmolekul31.000namaproteincarbonicanhydrase,Jarakband
7dengansitoplasmik4.6cmdenganberatmolekul21.500namaproteinsoybentrypsininhibitor,
jarakband9dengansitoplasmik6.1cmdenganberatmolekul6.500namaproteinAprotinin.Jarak
band1,2,3,4,8,9denganEStidaktampak,jarakband5denganES2.5cmberatmolekul66.200
dengannamaproteinBovineserumAlbumin,jarakband6denganES4.3cmberatprotein31.000
namaproteinCarbonicanhydrase,jarakband7denganES4.6cm,beratprotein21.500namaprotein
Soybeantrypsininhibitor.Jarakband1,2,3,4,8,9dengansupernatanpengendapangaram(GS)
tidaktampak,jarakband5denganGS3.2cmberatmolekul45.000namaproteinovalbumin,jarak
band6denganGS4.2cmberatmolekul31.000namaproteinCarbonicanhydrasedanjarakband7
denganGS4.7cmberatmolekul21.500namaproteinSoybeantrypsininhibitor.Jarakband
1,2,3,5,7,8,dan9denganendapanpengendapangaram(GP)tidaktampak,jarakband4denganGP
2.3cm,beratmolekul66.200namaproteinBovineserumalbumin,jarakband6denganGP4.4cm
beratmolekul31.000namaproteinCarbonicanhydrase.Jarakband1,2,3,5,7,8,9denganendapan
pengendapanetanol(EP)tidaktampak,jarakband4denganEP2.7cmdenganberatmolekul66.200
namaproteinBovineserumalbumin,jarakband6denganEP4.3cmdenganberatmolekul31.000
namaproteinCarbonicanhydrase.PenggunaanSDSberfungsiuntukmendenaturasiproteinkarena
SDSbersifatsebagaideterjenyangmengakibatikatandalamproteinterputusmembentukprotein
yangdapatterelusidalamgelbegitujugamercaptoetanol.Ammoniumpersulfateberfungsisebagai
inisiatoryangmengaktifkanakrilamidaagarbereaksidenganmolekulakrilamidayanglainnya
membentukrantaipolimeryangpanjang.TEMEDberfungsisebagaikatalisatorreaksipolimerisasi
akrilamidmenjadigelpoliakrilamidsehinggadapatdigunakandalampemisahanprotein.Dari
elektroforesis SDS SPG diperoleh jarak migrasi dari protein‐protein standar dengan band standar
pemisahanproteinpadagelmenggunakanprinsippenghambatanterhadaplajumigrasidariprotein‐
proteintersebutsehinggapemisahankarenaperbedaanberatmolekulmengakibatkanterbentuknya
pita‐pitapadajarakmigrasiyangberbedasatusamalaindanjaraktersebutjadidarihubungan
marker,standar,beratmolekulproteindapatdiperolehmodelregresiliniernya,yaituy=1E+06e-
1.75xR²=0.125
 DAFTAR PUSTAKA

Bangun, Seri Rayani, dkk. 2017. Isolasi DNA Dari Darah Dan Ephitel, PCR, Elektroforesis Agarose Dan SDS-
PAGE.
Bintang, Maria., dkk. 2020. Biokimia Fisik. Bogor: PT. IPB Press
K. Sasmito , Dinda Eling, dkk.2014. Karakteristik Primer pada Polymerase Chain Reaction (PCR) untuk
Sekuensing DNA: Mini Review. Jurusan Teknik Informatika, Universitas Islam Indonesia,
Yogyakarta.
K. Yusuf Zuhriana. 2010. Polymerase Chain Reaction (PCR). Saintek, Vol.5, No.2
Ridwan, Harahap M. 2018. Elektroforesis : Analisis Elektronika Terhadap Biokimia Genetika. Jurnal Ilmiah
PendidikanTeknikElektro,Vol.2,No.1.ISSN:2549-3698(printed).ISSN:2549-3701(online)
Sinaga,Ann dkk,.2017. Analisis Pola Pita Andaliman (Zanthoxylum Acanthopodium D.C) Berdasarkan Primer
OPD03,OPD20,OPC07,OPM20,OPN09.ProgramStudiAgroekoteknologi,FakultasPertanian,
USU, Medan 20155. E-ISSN No. 2337- 6597.