MODULO 2: Ejercicio Y Diabetes

Transporte de Glucosa Mediado por Contracción

MSc. Cristian Contador C.

Director Carrera Kinesiología
Universidad San Sebastián - Santiago
Richter EA, Hargreaves M. Exercise, GLUT4, and Skeletal Muscle Glucose
Uptake. Physiol Rev 93: 993–1017, 2013
Adaptado de David C. Wright, Paige C. Geiger, John O. Holloszy, and Dong-Ho Han Contraction- and hypoxia-
stimulated glucose transport is mediated by a Ca2+ dependent mechanism in slow-twitch rat soleus muscle Am J
Physiol Endocrinol Metab 288: E1062–E1066, 2005.
Role of AMPK in skeletal muscle metabolic regulation and adaptation in
relation to exercise. Sebastian B. Jørgensen, Erik A. Richter and Jørgen F.
P.Wojtaszewski. J Physiol 574.1 (2006) pp 17–31.
Ojuka EO, Goyaram V, Smith JA. The role of CaMKII in regulating GLUT4
expression in skeletal muscle. Am J Physiol Endocrinol Metab 303: E322–E331,
2012
 AMPK Sensor de energía

• AMPK (1994)
– Heterotrímero
• α (α1, α2) àcatalítica 12 combinaciones
• β (β1, β2)àregulatoria
• γ (γ1, γ2, γ3)àregulatoria

Upstreams :
LKB1
CamKKα
CamKKβ
 5´AMP-Activated Protein Kinase

AMP
AMP
AMPP
AM

AM
Kinase AM P
P
domain AMP
aa g
b

• b1 and b2
• a1 and a2
• g1, g2 and g3
JFPW 2001
Ruta AMPK

Upstreams
Downstreams
 AMPK Downstreams
• AICAR (5 aminoimidazole – 4- carboxamide
Ribosa)

h AMP ZMP

Downstreams
-ACC (Acetil Co A Carboxilasa à (-) Sintesis AF,Col
-Glicógeno sintasa à (-) Sintesis de glicógeno)
-mTOR à (-) Síntesis proteica
-Torc 2 à gluconeogénesis
-p53 Detiene ciclo celular G1
 LKB1

Sakamoto K, Goodyear LJ. Invited review: intracellular signaling in contracting skeletal

muscle. J Appl Physiol. 2002 Jul;93(1):369-83.
Ruta p38 MAPK

Upstreams
Downstreams
 ISOFORMAS DE p38

• Las isoformas a y b son expresadas en la mayoría

de los tejidos.
• La isoforma g está expresada fundamentalmente en
músculo esquelético.
• La isoforma d se xpresa predominantemente en los
pulmones, testículos, riñones e intestino delgado.
 p38 MAPK blanco de AMPK
• 1996. Primera evidencia
que el ejercicio activa p38
en músculo esquelético de
rata.
Goodyear LJ, Chang PY, Sherwood DJ, Dufresne
SD, Moller DE.Effects of exercise and insulin on
mitogen-activated protein kinase signaling
pathways in rat skeletal muscle. Am J Physiol.
1996 Aug;271(2 Pt 1):E403-8 Laurie J. Goodyear, Ph.D.
180 182

Sakamoto K, Goodyear LJ. Invited review:

intracellular signaling in contracting skeletal
muscle. J Appl Physiol. 2002 Jul;93(1):369-
83.
Fujii N, Jessen N and Goodyear L. AMP-activated Protein Kinase and the Regulation of Glucose
Transport.. Am J Physiol Endocrinol Metab 291: E867 – E877. 2006
AMP-activated protein kinase kinase activity and phosphorylation
of AMP-activated protein kinase in contracting muscle of sedentary
and endurance-trained rats
Denise Hurst, Eric B. Taylor, Troy D. Cline, Lyle J. Greenwood,
Cori L. Compton, Jeremy D. Lamb, and William W. Winder
Am J Physiol Endocrinol Metab 289: E710–E715, 2005.
Fujii N, Jessen N and Goodyear L. AMP-activated Protein Kinase and the Regulation of Glucose
Transport.. Am J Physiol Endocrinol Metab 291: E867 – E877. 2006
Taku Hamada, Edward B. Arias, and Gregory D. Cartee. Increased submaximal
insulin-stimulated glucose uptake in mouse skeletal muscle after treadmill exercise.
J Appl Physiol 101: 1368–1376, 2006.
Exercise-induced metabolic fluctuations influence AMPK, p38-MAPK and CaMKII phosphorylation in human
skeletal muscle. Adrien Combes, Jeanne Dekerle, Nick Webborn, Peter Watt, Valerie Bougault & Frederic N.
Daussin. Physiol Rep, 3 (9), 2015, e12462
Fujii N, Jessen N and Goodyear L. AMP-activated Protein Kinase and the Regulation of Glucose
Transport.. Am J Physiol Endocrinol Metab 291: E867 – E877. 2006
AS160 phosphorylation is associated with activation of 221- but not 223-AMPK trimeric complex
in skeletal muscle during exercise in humans. Jonas T. Treebak, Jesper B. Birk, Adam J. Rose,
Bente Kiens, Erik A. Richter, and Jørgen F. P. Wojtaszewski. Am J Physiol Endocrinol Metab
292: E715–E722, 2007.
Fujii N, Jessen N and Goodyear L. AMP-activated Protein Kinase and the Regulation of Glucose
Transport.. Am J Physiol Endocrinol Metab 291: E867 – E877. 2006
Activation of AMP kinase enhances sensitivity
of muscle glucose transport to insulin
Jonathan S. Fisher, Jiaping Gao, Dong-ho Han,
John O. Holloszy, And Lorraine A. Nolte
Am J Physiol Endocrinol Metab
282: E18–E23, 2002.
Fujii N, Jessen N and Goodyear L. AMP-activated Protein Kinase and the Regulation of Glucose
Transport.. Am J Physiol Endocrinol Metab 291: E867 – E877. 2006
Acute exercise and GLUT4 expression in
human skeletal muscle: influence of
exercise intensity. Giorgos N. Kraniou, David
Cameron-Smith, and Mark Hargreaves. J
Appl Physiol 101: 934–937, 2006.
AS160
Son replicables estos efectos en
pacientes diabéticos

Efectos del ejercicio en pacientes

diabéticos tipo 2
Koistinen H, Galuska D, Chibalin A, Yang J,Zierath J,
Holman G,5 and Wallberg-Henriksson. 5-Amino-
Imidazole Carboxamide Riboside Increases Glucose
Transport and Cell-Surface GLUT4 Content in Skeletal
Muscle From Subjects With Type 2 Diabetes. Diabetes
52:1066–1072, 2003
Koistinen H, Galuska D, Chibalin A, Yang J,Zierath J,
Holman G,5 and Wallberg-Henriksson. 5-Amino-
Imidazole Carboxamide Riboside Increases Glucose
Transport and Cell-Surface GLUT4 Content in Skeletal
Muscle From Subjects With Type 2 Diabetes. Diabetes
52:1066–1072, 2003
• Entendiendo lo clave del
conocimiento sobre los
efectos dosis/respuesta al
entrenamiento.
• El propósito de esta
investigación es conocer los
efectos de la intensidad del
entrenamiento sobre la ruta
de señalización AMPK/p38
MAPK
 Hipótesis

• “La intensidad del ejercicio modula de

manera diferencial las rutas de señalización
molecular de AMPK y p38 MAPK, en músculo
esquelético de ratas”.
 Objetivo General

• Identificar los efectos de la

dosificación del entrenamiento,
sobre la actividad y expresión de la
ruta de señalización molecular
AMPK/p38 MAPK
 Objetivos específicos
1.-Identificar los efectos de un
ejercicio de alta intensidad sobre
la actividad y expresión de
AMPK/p38 MAPK

2.-Identificar los efectos de un

ejercicio de baja intensidad sobre
la actividad y expresión de
AMPK/p38 MAPK

3.-Evaluar los cambios provocados

por estas dos intensidades,
analizando las mejores respuestas
 Material y Métodos
1. Animales de experimentación:

Se utilizarán 30 ratas macho de la variedad Sprague-

Dawley (200-250 grs). Todos los animales serán
hospedadas en cajas individuales, en una sala
acondicionada con ciclos de luz/oscuridad de 12 horas y
con temperatura controlada (20-22 ºC).
Las ratas serán distribuidas aleatoriamente en tres
grupos:

• Grupo control.

• Grupo de entrenamiento de baja intensidad.

• Grupo de entrenamiento de alta intensidad.

– Por un período de entrenamiento de 8 semanas

 Material y Métodos
3. Protocolo de entrenamiento.

• Test de Velocidad Máxima

– Test incremental con intervalos

– Se prescribirá el entrenamiento de
manera individual.

Grupo Alta Intensidad:

• Frecuencia de 3 veces semana.

•Intensidad base 60% V máx y sprint de 30
segundos de 80% Velocidad máx.
•Hasta la fatiga
•Se registra distancia recorrida.
• Grupo Baja Intensidad:

• Frecuencia 3 veces semana.

• Velocidad de 60% V max.
• Tiempo necesario para recorrer
distancia promedio grupo alta
intensidad.
 Procedimiento para evaluar la expresión y
Actividad de AMPK y p38 MAPK
• Extracción del tejido
muscular
– Se extraerá para su
análisis los Músculos
Extensor Digitorum
Longus y Soleus los
cuales serán
almacenados y
conservados en
nitrógeno líquido -
80ºC hasta su análisis
 Procedimiento para evaluar la expresión y
Actividad de AMPK y p38 MAPK

• Homogenización del
tejido

• Precipitación de
proteínas

• Concentración de
proteínas
 Procedimiento para evaluar la expresión y
Actividad de AMPK y p38 MAPK
• Electroforesis
– Treinta microgramos de
proteína del músculo serán
separados con el uso de SDS-
PAGE estándar y serán
transferidos a las membranas
(Immobilon polyvinylidene
difluoride; Bio-Rad) por
transferencia semiseca (20 V,
20 minutos)
 Procedimiento para evaluar la expresión y
Actividad de AMPK y p38 MAPK
• Inmunoblotting
– Las membranas serán luego
incubadas con los anticuerpos
primarios y secundarios,
según las indicaciones de los
fabricantes. Las señales de
Immunoblot serán generadas
por medio de
quimioluminicencia y
capturadas en una placa
autoradiográfica. La
cuantificación se realizará
utilizando densitometría y
analizado con el software de
Image J
 A

B Control de carga

Figura 8. Efectos de 8 semanas de entrenamiento sobre la fosforilación del residuo de Tre 172 de AMPK en músculo EDL. A)
Imagen representativa de la señal del western blot. B) Control de carga . C) El eje y del gráfico muestra, en unidades arbitrarias,
la relación entre la señal de western blott y carga de proteínas control para cada carril, para el grupo control y experimental de
baja y alta intensidad. Los valores corresponden a la media ± EEM de 5 animales diferentes. *P<0.05.
Figura 9. Efectos de 8 semanas de entrenamiento sobre la actividad de AMPK en músculo EDL expresada
como la relación "p-AMPK (Tre 172) / AMPK tot". Los valores corresponden a la media ± EE de 5 animales
diferentes. b p<0.05.