Machine Translated by Google

Vật liệu y sinh

Hiểu cơ chế kháng khuẩn của

Hạt nano CuO: Tiết lộ lộ trình cảm ứng
Căng thẳng oxy hóa

Guy Applerot, Jonathan Lellouche , Anat Lipovsky, Yeshayahu Nitzan, Rachel Lubart,
Aharon Gedanken ,* và Ehud Banin *

Cho đến nay, vẫn còn thiếu kiến thức rõ ràng về sự tương tác của các hạt
nano CuO với vi khuẩn và khả năng thẩm thấu của các hạt nano vào tế bào vi
khuẩn. Nghiên cứu này nhằm làm sáng tỏ hoạt tính kháng khuẩn phụ thuộc vào
kích thước (từ kích thước hiển vi đến kích thước nano nhỏ) của CuO. Hoạt
tính kháng khuẩn mạnh mẽ của các hạt nano CuO được phát hiện là do sự tạo
ROS bởi các hạt nano được gắn vào tế bào vi khuẩn, do đó làm tăng căng thẳng
oxy hóa nội bào. Mô hình này được xác định bằng một số thử nghiệm như quá
trình peroxy hóa lipid và các chủng phản ứng của stress oxy hóa. Hơn nữa,
kính hiển vi điện tử chỉ ra rằng các hạt nano nhỏ của CuO đã thâm nhập vào
các tế bào. Nói chung, các kết quả được báo cáo ở đây có thể dung hòa các
khái niệm còn tồn tại trong tài liệu liên quan đến cơ chế kháng khuẩn của
các hạt nano CuO, cũng như làm nổi bật tiềm năng phát triển các thiết bị
dựa trên hạt nano CuO bền vững để ức chế nhiễm trùng do vi khuẩn.

1. Giới thiệu Hơn nữa, việc nghiên cứu sâu về vật liệu nano và ống dẫn nano
là nguồn quan trọng để sản xuất các nguyên lý mới, kỹ thuật mới
Các hạt nano được sản xuất (NP) và các ứng dụng của chúng và phương pháp mới. [2] Một chủ đề chung nảy sinh từ việc
là một lĩnh vực công nghệ ngày càng mở rộng khi việc sử nghiên cứu vật liệu nano trong bối cảnh sinh học, đó là khi kích
dụng các vật liệu này không ngừng gia tăng. Khám phá các thước hạt giảm, tỷ lệ diện tích bề mặt tăng lên, dẫn đến hoạt
rials nano thể hiện chức năng là chìa khóa của công nghệ nano. tính
[1] sinh học tăng cường trên một khối lượng nhất định so với

các hạt lớn hơn. [3]

Tiến sĩ G. Applerot, J. Lellouche, Tiến sĩ A. Lipovsky, Các oxit kim loại vô cơ như ZnO, MgO, TiO Al O 3 đang 2 ,
và
Tiến sĩ R. Lubart, Giáo sư A. Gedanken được
sức sử dụng
2 xuyên,
cation
khỏe ngày
và
con
do đang
tác càng
người.thay
dụng nhiều
[4]
độc chocủa
thếhại
bạc cácnó
đượcthiết
sử bị kháng
đốidụng
với khuẩn và
thường
môi trường
Khoa Hóa học và Phòng thí nghiệm Kanbar về Vật
liệu nano tại Trung tâm Vật liệu Tiên tiến & Công
nghệ Nano của Đại học Bar-Ilan
Những ưu điểm chính của việc sử dụng oxit vô cơ so với các
Đại học Bar-Ilan
Ramat-Gan 52900, Israel chất chống vi khuẩn hữu cơ là tính ổn định, chắc chắn và
E-mail: gedanken@mail.biu.ac.il thời hạn sử dụng lâu dài. [4] Tuy nhiên, cơ chế cơ bản hoạt
J. Lellouche, GS Y. Nitzan, TS E. Banin động kháng khuẩn của các oxit kim loại này vẫn chưa được
Mina & Everard Goodman Khoa Khoa học Đời sống xác định rõ ràng, điều này có thể cản trở việc phát triển
Trung tâm Vật liệu Tiên tiến & Công nghệ Nano hợp lý các phương pháp tiếp cận giảm thiểu và khắc phục phù hợp.
Đại học Bar-Ilan Hơn nữa, vẫn chưa rõ các hạt oxit kim loại rất nhỏ (<50 nm) ảnh
Ramat-Gan 52900, Israel
hưởng đến hoạt tính kháng khuẩn ở mức độ nào. [5]
E-mail: ehud.banin@biu.ac.il
Trong số họ oxit kim loại lớn, oxit cupric
DOI: 10.1002 / smll.201200772 (CuO) là một vật liệu đa chức năng thú vị do

nhỏ 2012, © 2012 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim wileyonlinelibrary.com 1
DOI: 10.1002 / smll.201200772
Machine Translated by Google
giấy tờ đầy đủ
ứng dụng đầy hứa hẹn trong phương tiện lưu trữ từ tính, chuyển đổi
năng lượng mặt trời, điện tử, cảm biến, pin và xúc tác. Oxit cupric
rẻ hơn bạc, dễ trộn với các polyme và tương đối ổn định về cả tính
chất hóa học và vật lý. [6]
Một trong những sản phẩm dựa trên CuO đầu tiên được sản xuất
bởi một công ty tư nhân, Cupron. Rm fi này kết hợp các hạt CuO có
kích thước micromet thành các polyme được chế tạo thành băng vết
thương. Những loại băng này có hiệu quả ngăn ngừa nhiễm trùng và
tăng tốc độ chữa lành vết thương, so với các phương pháp điều trị
tiêu chuẩn. [7] Nhóm của chúng tôi cũng đã báo cáo về một tại chỗ
tạo ra các NP CuO và sự lắng đọng tiếp theo của chúng trên vải trong
phản ứng một bước sử dụng chiếu xạ siêu âm. [số 8]
Tuy nhiên, mặc dù có tiềm năng to lớn của vật liệu gốc CuO, cho đến
nay, chỉ có một số nghiên cứu hạn chế kiểm tra hoạt tính của các
chế phẩm nano CuO. Trong những nghiên cứu này, cơ chế kháng khuẩn
của các NP CuO là do sự giải phóng các ion Cu. [9–11]
Cũng cần lưu ý rằng để thúc đẩy sự lựa chọn phát triển an toàn
của một loại vật liệu mới, điều cần thiết là phải đánh giá những
hậu quả có hại cho sức khỏe liên quan đến sự phơi nhiễm của con
người. Về mặt này, đồng được coi là một trong một nhóm tương đối
nhỏ các nguyên tố kim loại cần thiết cho sức khỏe con người. [12]
Ngoài ra, mô người (da hoặc cơ thể khác) cho thấy khả năng chống
lại đồng được tăng cường so với vi sinh vật. [9–11]
Nhiều phương pháp đã được phát triển để chế tạo các NP CuO với
các hình thái khác nhau. [13]
Trong số các phương pháp này, nhiều phương pháp dựa trên các quá
trình nhiệt độ cao, ví dụ như quá trình oxy hóa lưới đồng, lá và
dây dẫn trong không khí hoặc oxy ở nhiệt độ cao. [14] Các phương
pháp khác, chẳng hạn như: micelle đảo ngược, khuôn mẫu chất hoạt
2 dây nano
động bề mặt và chuyển vớicác
hóa từ dâytion
nanoCuCuO, phản
(OH), cácứng
contrạng thái
đường
tổng
hợp thủy nhiệt và phân hủy nhiệt cũng đã được công bố. [15]
Chiếu xạ siêu âm đã được chứng minh là hiệu quả
kỹ thuật tổng hợp vật liệu pha nano, [16]
cũng như sự lắng đọng của chúng trên các ma trận cao phân tử khác
nhauđáp
quy trình một bước. diation [17–19] Hơncầu
ứng yêu nữa, irra
giảm hóa chất
thiểu việc trong
sử dụng
các hóa chất độc hại, dung môi, năng lượng, v.v., và do đó được
coi là một phương pháp tiếp cận hóa học “xanh”. [18,19] Các hiệu
ứng hóa học của sóng siêu âm phát sinh từ sự tạo ra tiếng động âm
thanh, tức là sự hình thành, sự phát triển và sự sụp đổ của các
bong bóng trong môi trường lỏng. Việc nén các bong bóng trong quá
trình xâm thực diễn ra nhanh hơn so với quá trình vận chuyển nhiệt,
tạo ra các bong bóng điểm nóng cục bộ, tồn tại trong thời gian ngắn
đạt nhiệt độ cao tới 5000 K, áp suất khoảng 1000 atm và tốc độ làm
nóng và làm mát trên 1 × 10 10 K / S. [16]
Ôxy cần thiết cho hầu hết các sinh vật sống, nhưng cũng là tiền
chất của các loại ôxy phản ứng (ROS), có thể làm hỏng các thành
phần tế bào như protein, lipid và axit nucleic. ROS là các ion hoặc
phân tử nhỏ
tain peroxide (ví dụ: hydrogen peroxide; H ( . 2 O 2 ), gốc tự do
2-
OH), hoặc các ion oxy (ví dụ, superoxide;. O ). Những ROS này là
các loài phản ứng mạnh được hình thành trong quá trình metabo bình
thường
lism. cũng được coi [20]
là [21] Bên điều
Trong cạnh kiện
ROS như
sinhvậy, oxy đơn,
lý bình oxyO
thường,
ROS rất quan trọng đối với tín hiệu tế bào.
2 www.small-journal.com © 2012 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim
G. Applerot và cộng sự.
Các tế bào có thể giải độc ROS bằng cách sử dụng các enzym (ví dụ:
catalase và superoxide dismutase) hoặc các phân tử nhỏ (ví dụ, axit
ascorbic). Tuy nhiên, hoạt động chống oxy hóa này có giới hạn và sự
hình thành và tích tụ ROS sẽ tăng lên đáng kể nếu tế bào tiếp xúc
với căng thẳng oxy hóa. [22]
Trong điều tra trước đây của chúng tôi, [23] ảnh hưởng của kích
thước ngang bằng của ZnO như một chất kháng khuẩn đã được chứng minh.
Các thí nghiệm kháng khuẩn này được thực hiện với nanoc rystalline
ZnO. Các thử nghiệm vi khuẩn học được thực hiện trên hai chủng từ
các loài khác nhau là đại diện của các loại vi khuẩn khác nhau:
Escherichia coli ( E. coli; Gram-neg ative) và Staphylococcus aureus
( S. aureus; Gram-dương).
Kết quả cho thấy hoạt tính kháng khuẩn của các NP ZnO tăng lên khi
kích thước các NP giảm. Các vi khuẩn nhỏ hơn cũng xâm nhập vào tế
bào vi khuẩn gây ra sự phân chia vô tổ chức của màng tế bào. Chúng
tôi cũng chỉ ra rằng hoạt tính kháng khuẩn của ZnO là kết quả của
ROS, cụ thể là các gốc hydroxyl, ( . OH), được tạo ra trên bề mặt
của các NP ZnO, và chúng tôi coi những loài này tạo ra hiệu ứng
kháng khuẩn rial.
Được truyền cảm hứng từ những kết luận cuối cùng này, chúng tôi
tiếp tục nỗ lực hướng tới cuộc điều tra CuO. Trong nghiên cứu này,
chúng tôi đã sử dụng sonochemistry để tổng hợp các NP CuO và đặc
trưng cho sự gia tăng của kích thước hạt đối với tác dụng kháng
khuẩn, do đó làm sáng tỏ cơ chế cơ bản của hoạt động kháng khuẩn
CuO. Kết quả của chúng tôi cho thấy rằng hoạt động kháng khuẩn của
các NP CuO được thực hiện thông qua việc sản xuất ROS. Kính hiển
vi điện tử cũng chứng minh rằng các NP xâm nhập và tạo điều kiện
cho các thay đổi hình thái trong tế bào vi khuẩn.
2. Kết quả và thảo luận
rắn
2.1. Tổng hợp và đặc tính NP CuO
Các điều kiện tổng hợp hóa chất của các NP CuO tương tự như các
bằng
điều kiện trước đây được sử dụng để tổng hợp các NP ZnO (xem chi
tiết trong tài liệu tham khảo [23] ). Tóm lại, các NP ôxít đồng
được hình thành bằng cách cho dung dịch nước của Cu (CH và thêm
3 COO)
dung dịch amoniac
2 vào
sau:trong quá trình phản ứng, theo các phản ứng
2+
Cu2 +
(aq) + 4NH3 (aq) [Cu (NH3) 4](aq) (1)
2+
[Cu (NH3) 4](aq) + H2O CuO (s) + 2NH + 4 (aq) + 2NH3 (aq) (2)
Sự hình thành oxit đồng diễn ra thông qua
2 +
phức amin, Cu [(dung dịch NH 3 )4 ] . Các ion đồng phản ứng với
của amoniac tạo thành dung dịch màu xanh lam đậm chứa các ion phức
của amin. Phức chất này bị thủy phân và thu được các NP CuO kết
tinh.
Hình S1 minh họa các dạng nhiễu xạ tia X (XRD) của các NP CuO
đã được điều chế sẵn (được mã hóa là CuO-1). Các dạng XRD của bột
CuO kích thước nanomet và micrometric thương mại (được mã hóa lần
1
2 , lượt là CuO-2 và CuO-3; Aldrich) cũng được minh họa trong Hình S1.
Các phản hồi tham chiếu XRD khớp với phản hồi của thẻ JCPDS số 48–
1548.
nhỏ 2012,
DOI: 10.1002 / smll.201200772
Machine Translated by Google
Tìm hiểu cơ chế kháng khuẩn của các hạt nano CuO
Không phát hiện thấy các vạch nhiễu xạ kết hợp với tạp chất.
Kết quả phân tích nguyên tố C, H, N cho thấy sản phẩm phát hiện
chỉ chứa đồng, ôxy và một lượng cacbon và hyđrô (đo được ở mức
<3%).
Sử dụng công thức Scherrer, có thể ước tính kích thước trung
bình của các phần tử. [24] Bản chất quy mô nanomet của các sản
phẩm tổng hợp cũng được minh họa trong kết quả cụ thể về diện
tích khuôn mặt, sử dụng phương pháp Brunauer – Emmett – Teller
(BET). Đường kính tương đương biểu kiến của các hạt có thể được
ước tính từ diện tích bề mặt cụ thể được đo bằng phương pháp BET
bằng cách giả sử các hạt là hình cầu theo biểu thức sau:
dBET = 6 / (ρ × SBET),
trong đó dBET là đường kính của các hạt, là khối ρlượng riêng
của chất rắn (6,3 g cm - 3 đối với biệt
CuO) cvà
đadiện
điểmtích
S được
bề CÁmặt
đo. là
CƯỢC đặc
Tuy nhiên, các phương pháp này (Scherrer và BET) để tính kích
thước hạt trung bình chỉ nên được sử dụng như một hướng dẫn sơ
bộ để so sánh.
Một minh chứng rõ ràng về bản chất ở quy mô nanomet của sản
phẩm tổng hợp đã thu được từ kính hiển vi điện tử xuyên nhiệm vụ
(TEM) và hình ảnh TEM có độ phân giải cao (HRTEM) của các mẫu.
Hình S2 (a, b) cho thấy ảnh TEM của các NP CuO đã được điều chế
(CuO-1) và các NP CuO thương mại (CuO-2). Rõ ràng là từ kết quả
này cho thấy kích thước hạt của CuO-2 là khoảng 30 nm (theo tiêu
chuẩn của nhà sản xuất, tức là <50 nm), trong khi CuO-1 rất nhỏ
với sự phân bố kích thước hẹp được ước tính khoảng 2 nm (Hình
S2). Các đường viền Lat tice cũng được quan sát rõ ràng. Theo
TEM, cả hai mẫu, ở một mức độ nào đó, đã tạo thành một kết cấu
tổng hợp, do kích thước nanomet của chúng và lực tương tác mạnh
van der Waals. [25]
Kích thước hạt trung bình được tính toán bởi XRD và BET phù
hợp với phạm vi tỷ lệ thu được từ các nghiên cứu TEM cũng như với
các phép đo tán xạ ánh sáng động (DLS). Bảng 1 tóm tắt kích thước
hạt trung bình của ba mẫu CuO được tính bằng XRD, BET, DLS và
được hiển thị bằng TEM / HRTEM. Phân tích thống kê sự phân bố kích
thước hạt theo TEM / HRTEM cũng được thực hiện, sử dụng phần mềm
hình ảnh Scion (Scion 2.0, Scion Corporation) để xử lý hình ảnh và
chương trình Microcal Origin để phân tích dữ liệu (Origin 7.0,
OriginLab, Hình S2c).
Bước tiếp theo của chúng tôi là đánh giá độc tính của CuO đối
với hai vi khuẩn gây bệnh phổ biến ( E. coli và S. aureus ).
Một số thử nghiệm khả năng sống của vi khuẩn đã được thực hiện theo thứ tự
Bảng 1 . Đặc điểm kích thước hạt CuO. Kích thước hạt thu được từ
công thức Debye – Scherer, TEM / HRTEM và BET diện tích bề mặt đa
điểm của các mẫu ôxít đồng khác nhau.
Mẫu vật XRD ĐẶT DLS TEM / HRTEM
[nm] CƯỢC [nm] [nm]
CuO-1 6,5 7,5 5 2
CuO-2 22 37 45
CuO-3 720 685 900
nhỏ 2012, © 2012 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim
DOI: 10.1002 / smll.201200772
để đánh giá phản ứng của tế bào đối với việc tiếp xúc với CuO NP,
thông tin có lợi về quá trình chết, tồn tại và các hoạt động trao đổi
chất của tế bào.
2.2. Hoạt tính kháng khuẩn
2.2.1. Khả năng di động
Chúng tôi xử lý vi khuẩn với mỗi mẫu trong số ba mẫu (như được
ghi nhãn trong Bảng 1) của huyền phù nước CuO ở các nồng độ khác
nhau, từ 0,05 đến 10 mg / ml. Các nồng độ này nằm trong thang nồng
độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC) của các NP CuO như đã được ước
tính trước đây đối với các loại vi khuẩn khác nhau. [9] Để giảm
(3)
xu hướng kết tụ của các NP [25] và để đảm bảo sự phân tán NP tối
ưu, quá trình ủ được thực hiện trên giàn quay.
Các kết quả đại diện về khả năng sống sót của từng chủng vi
khuẩn sau một thời gian ngắn tương đối (tức là 3 giờ) xử lý bằng
huyền phù CuO (ở nồng độ 0,1 mg /
mL) được trình bày trong Bảng 2 . Các vi khuẩn sống sót được làm
săn bằng cách mạ và đếm số lượng đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU)
(Hình S3). Các mẫu cấy đối chứng không được xử lý không cho thấy
bất kỳ sự thay đổi nào về khả năng sống sót trong suốt quá trình
thử nghiệm. Như có thể thấy ,từ Bảng
giảm khả2,năng
tất sống
cả các
sótmẫu
ít CuO
nhấtđều
36%
sau khi tiếp xúc trong 3 giờ. Các hoạt động kháng khuẩn rial của
các hạt CuO được phát hiện có liên quan đến kích thước của chúng,
với các NP nhỏ nhất có hoạt tính cao nhất trên cơ sở hàm lượng
CuO tương đương. Chúng tôi cũng kiểm tra phương pháp điều trị
kéo dài 1 giờ và hoạt động kháng khuẩn tốt nhất (phương pháp điều
trị bằng CuO-1) đã làm mất hoạt tính của S. aureus tới 48% và sau
3 giờ điều trị là 97%. E coli
cũng cho thấy một xu hướng nhạy cảm tương tự liên quan đến thời
gian điều trị nhưng ở mức độ lớn hơn. Có nghĩa là, trong cùng
điều kiện chỉ có 10% dân số sống sót sau 1 giờ, và sau 3 giờ điều
trị, ít hơn 0,1% người sống sót được phát hiện. Như được trình
bày trong Bảng 2, việc tăng kích thước tính
hạt CuO dẫnkhuẩn
đến giảm hoạtS.
kháng đối với
aureus . Tuy nhiên, đối với E. coli , ảnh hưởng của kích thước
hạt lên
hoạt tính kháng khuẩn ít rõ rệt hơn, nhưng nó vẫn tồn tại.
2.2.2. Nội dung ATP
Adenosine triphosphate (ATP) là một coenzyme quan trọng giúp
truyền năng lượng và có thể chỉ ra tình trạng của tế bào. [26] Do
đó, mức ATP trong tế bào vi khuẩn sau khi xử lý CuO cũng được xác
định. Hình S4 cho thấy rằng việc xử lý kháng khuẩn CuO-1 gây ra sự
mất mát lớn
hàm lượng ATP nội bào của cả hai tế bào vi khuẩn, dường như là
do tổn thương màng tế bào. Sự cạn kiệt nhanh chóng và nhanh chóng
của ATP cũng có thể là dấu hiệu của sự kích thích quá trình oxy
hóa ATP còn lại bởi ROS. Đối với cả hai chủng vi khuẩn, mức ATP
sau 80 phút thấp hơn 10% so với đối chứng không được xử lý. Điều
quan trọng cần lưu ý là chủng vi khuẩn E. coli được xử lý cho
thấy ảnh hưởng nổi bật hơn.
[nm]
2.2.3. Kiểm tra kính hiển vi điện tử
30
Dựa trên kết quả kháng khuẩn, chúng tôi tiếp tục giải quyết
800
cơ chế hoạt động của các NP CuO trên hai vi khuẩn
www.small-journal.com 3
Machine Translated by Google
giấy tờ đầy đủ
G. Applerot và cộng sự.

Ban 2 . Hoạt động kháng khuẩn của hạt CuO. Số lượng vi khuẩn E. coli và S. aureus tiếp xúc với hạt CuO 1-3 ở nồng độ 0,1 mg mL -1 . N / N
biểu thị tỷ lệ sống sót tương đối.
0

E coli S. aureus

Mẫu vật Thời gian điều trị [h] CFU N / N 0 Giảm khả năng tồn tại CFU N / N 0 Giảm khả năng tồn tại
[mL - 1 ] [%] [mL - 1 ] [%]

CuO-1 0 7 4,8 × 10 1 0 7 1,0 × 10 1 0

1 6 4,7 × 10 1,0 × 10 - 1 90 6 5,2 × 10 5,2 × 10 - 1 48

2 5 9,4 × 10 2.0 × 10 - 2 98 6 1,1 × 10 1,1 × 10 - 1 89

4 5
3 4,9 × 10 1,0 × 10 - 3 99,9 3.0 × 10 3.0 × 10 - 2 97

CuO-2 0 7 4,8 × 10 1 0 7 1,0 × 10 1 0

7 6
1 1,5 × 10 3.0 × 10 - 1 70 8,2 × 10 8,2 × 10 - 1 18

2 6 2,4 × 10 4,9 × 10 - 2 95 6 4,8 × 10 4,8 × 10 - 1 52

5 5
3 9,6 × 10 2,0 × 10 - 3 98 6,0 × 10 6,0 × 10 - 2 94

CuO-3 0 4,8 × 10 7 1 0 1,0 × 10 7 1 0

7 6
1 3,2 × 10 6,7 × 10 - 2 34 9,3 × 10 9,3 × 10 - 1 7

2 7 2,0 × 10 4,2 × 10 - 2 58 6 7,7 × 10 7,7 × 10 - 1 23

7 6
3 1,5 × 10 3.0 × 10 - 1 70 6,4 × 10 6,4 × 10 - 1 36

loài. Kỹ thuật hiển vi điện tử là công cụ hữu ích để điều tra những các cụm trên màng / vách tế bào cũng như các khối phân biệt

thay đổi về hình thái tế bào khi tiếp xúc với chất kháng sinh. Kính các vị trí ganization trong màng. Cation nhận dạng của các chấm đen

hiển vi điện tử quét môi trường (ESEM) giúp bạn có thể kiểm tra hình trong ảnh TEM là các NP CuO được xác định thêm bởi EDS và bằng quang

thái của các mẫu vật ngậm nước mà không để chúng tiếp xúc với chân phổ tổn thất năng lượng điện tử (EELS) và phù hợp với kết quả EDS thu

không cao. được bởi SEM (dữ liệu không được hiển thị). Tỷ lệ liên kết của các
Các cấu trúc bề mặt của cả tế bào vi khuẩn chưa được xử lý và đã NP CuO đối với tế bào rial của vi khuẩn có thể bắt nguồn từ bề mặt tế

được xử lý đều được kiểm tra chặt chẽ sau khi xử lý kháng thể rial bào vi khuẩn tích điện âm phản ứng với các NP CuO có thế Zeta dương.

với hai mẫu CuO (CuO-1 và CuO-2) và kết quả ngụ ý rằng các tế bào vi [25b] Đối với CuO-1, một lượng nhỏ NPs cũng được phát hiện bên trong

khuẩn được xử lý hầu như không thay đổi, với tổn thương do hậu quả tế bào chất của vi khuẩn. Có thể thấy rõ rằng các NP có thể đã xâm

chính được quan sát thấy trong màng / thành tế bào. Hơn nữa, NP tích nhập vào do hậu quả của sự phá vỡ màng tế bào. Nhìn chung, có khả năng
lũy trên màng có thể được thấy rõ trong hình ảnh ESEM ( Hình 1 ). Sự là sự vô tổ chức của siêu cấu trúc màng vi khuẩn và rò rỉ nội dung tế

tích lũy NPs rõ ràng ở cả hai loài bac teria. bào cùng với sự giảm mức ATP sau khi tiếp xúc với nano-CuO, chắc chắn

sẽ làm mất khả năng sống của tế bào.

Quang phổ tia X phân tán năng lượng (EDS) cũng được sử dụng để

xác định danh tính hóa học của các NP gắn với tế bào vi khuẩn. Thông
tin định tính về nguyên tố của các vùng giàu hạt được mô tả trong phổ

EDS (Hình 1 g) cho thấy sự hiện diện của một lượng đồng không đáng

kể. Không có dấu vết của cooper được phát hiện trong các ô chưa được 2.3. Thử nghiệm ứng suất oxy hóa

xử lý (dữ liệu không được hiển thị). Kính hiển vi điện tử truyền qua

(TEM) giúp bạn có thể hình dung sự bám dính của NP trên vi khuẩn ở độ Khả năng phản ứng cao của hầu hết các gốc tự do làm cho việc phát

phân giải cao hơn SEM. Hình ảnh TEM của các phần siêu mỏng của tế bào hiện chúng trở nên khác biệt. Về mặt này, cộng hưởng spin điện tử

vi khuẩn cho phép cả quan sát các thay đổi hình thái cũng như phát (ESR) và xét nghiệm độ sáng (bộ SuperLuminol; WPI) mang lại những lợi

hiện các NP nội bào. Hơn nữa, chế độ TEM của kính hiển vi điện tử thế kết hợp giữa tính đơn giản và độ nhạy, cung cấp một đánh giá tổng

quét trường tối hình khuyên góc cao hình khuyên góc cao (HAADF-STEM) hợp hợp lệ về việc sản xuất ROS.

có thể tiết lộ sự hiện diện của pha kim loại trong độ tương phản mạnh
2.3.1. ESR và Luminol
hơn, do đó cho phép các đặc điểm cấu trúc tổng thể của mẫu trở nên rõ

rệt. [27] ESR là một kỹ thuật quang phổ theo dõi điện tử chưa ghép đôi có trong

một gốc tự do. [28] Bẫy spin là một kỹ thuật nique trong đó gốc tự do

phản ứng, tồn tại trong thời gian ngắn kết hợp với một phân tử nghịch

từ (“bẫy spin”) để tạo thành một gốc tự do ổn định hơn (“gốc tự do”

Hình 2 và S5 lần lượt cho thấy các quan sát TEM và HAADF STEM hoặc “chất cộng spin”) có thể được phát hiện bằng cộng hưởng spin

về cấu trúc tế bào vi khuẩn sau khi xử lý kháng khuẩn bằng các NP CuO điện tử. Bẫy gốc hữu ích nhất đối với các gốc tự do tập trung vào oxy

(CuO-1 và CuO-2). là 5,5-dimethyl 1-pyrroline N-oxide (DMPO). DMPO phản ứng với ROS, cụ

Các kết quả phù hợp với những kết quả thu được bằng cách bỏ qua kỳ thể là gốc hydroxyl hoặc gốc anion superoxide, để

thi SEM, cho thấy sự tích lũy đáng kể của các NP

4 www.small-journal.com © 2012 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim nhỏ 2012,
DOI: 10.1002 / smll.201200772
Machine Translated by Google

Tìm hiểu cơ chế kháng khuẩn của các hạt nano CuO

Hình 1 . Kính hiển vi điện tử quét môi trường phân tích tế bào xử lý . ảnh TEM của E. coli và S. aureus mặt cắt mỏng. Hình ảnh TEM của
Hình 2 Hình
CuO. (a) Tế bào vi khuẩn E. coli và (b) S. aureus không được xử lý sau E. coli và S. aureus các đoạn mỏng: (a) E. coli và (b) S. aureus chưa được
khi phát triển qua đêm; (c, e) E. coli và (d, f) S. aureus được xử lý xử lý . (c) Xử lý E. coli bằng CuO-2. (d) S. aureus được xử lý bằng CuO-2.
với (c, d) CuO-2 và với (e, f) CuO-1, tương ứng. Mũi tên màu đen cho (e) E. coli được xử lý bằng CuO-1. (f) S. aureus được xử lý bằng NP của
biết các NP CuO. (g) Quang phổ nguyên tố của CuO-1 sau.khi
Na có
xử nguồn
lý E.coli
gốc CuO-1. (g) ảnh phóng đại của (f). Mũi tên màu đen cho biết các NP CuO. Các
từ môi trường muối. vạch chia độ là: (a, e) 500 nm; (b, g) 50 nm; (c, d, f) 100 nm.

tạo ra DMPO – OH, một chất thuận từ tương đối ổn định với kích thước có lượng ROS lớn hơn. Các kết quả này được suy
tín hiệu ESR đặc trưng của bộ tứ 1: 2: 2: 1. [29] Nó 2 - ra từ sự tích hợp trên các đỉnh tín hiệu sau lực kéo phụ của
đầu cần được lưu ý rằng trong trường
không
phần
hợp
ổnbổ
.định
Otrợ
làvà
spin
DMPO-OOH
cuối
bancùng mức cơ sở. Mối quan hệ gần đúng giữa diện tích tích hợp của
phân rã tạo thành sản phẩm cộng DMPO-OH. CuO-1, CuO-2 và CuO-3 lần lượt là 9: 7,5: 4, biểu thị lượng
ROS được tạo ra (cần lưu ý rằng không phát hiện thấy vạch
2 +
Luminol phản ứng với ROS để tạo ra quang phổ có cực đại nào tương ứng với từ tính của Cu) . Phù hợp chặt chẽ vớipara
dữ
phát xạ ở bước sóng 425. Cường độ phát quang tỷ lệ với liệu ESR, xét nghiệm Luminol cho thấy rằng các NP có kích
lượng superoxide hoặc ROS khác trong mẫu. thước nhỏ hơn tạo ra gấp đôi lượng gốc so với các hạt có
kích thước micromet (Hình 3 b).
Các phép đo ESR cho thấy ( Hình 3 a) ROS có trong huyền
phù nước của CuO, số lượng của chúng liên quan chặt chẽ đến Ảnh hưởng của bùn CuO trong huyền phù vi khuẩn đã được
kích thước của các hạt CuO, với kích thước nhỏ hơn kiểm tra đối với hàm lượng ROS. Kết quả,

nhỏ 2012, © 2012 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.small-journal.com 5
DOI: 10.1002 / smll.201200772
Machine Translated by Google
giấy tờ đầy đủ G. Applerot và cộng sự.

Không có ROS nào được phát hiện trong huyền phù vi khuẩn
nguyên sinh và không thể quan sát thấy sự gia tăng nồng độ ROS

trong các thí nghiệm đối chứng, bao gồm dịch phân ly của vi
khuẩn hoặc các phân đoạn màng tế bào vi khuẩn thay vì vi khuẩn sống.
Cách tốt nhất để phân biệt giữa các gốc hydroxyl và các gốc
superoxide là thực hiện các thí nghiệm cạnh tranh với các chất
nhặt gốc hydroxyl. Nếu phát hiện cả chất cộng gốc có nguồn gốc
từ máy tính scav và sự giảm tương ứng của nồng độ chất phụ gốc
DMPO-OH

được tìm thấy, sau đó các gốc hydroxyl là loài chính trong hệ
thống. [30] Nếu không, có thể kết luận rằng các gốc superoxide
là loài phổ biến.
Kết quả ban đầu của chúng tôi đã chứng minh rằng việc bổ
sung dimethyl sulfoxide (DMSO) đóng vai trò là chất thu gom gốc
hydroxyl, không dẫn đến việc giảm DMPO–
OH và hầu như không có tính năng nào tương ứng với DMPO–
3 tín adduct
hiệu
yếu bắt DMPO
có thể
– từ
nguồn OHđược
quan phát
việc sát .được
bẫy hiện (khi
O DMSO Hình
không
cho 4phép
),cócho
DMSO
táchthấy
2 -rằng
các chủ CH
sản
phẩm cộng spin DMPO: DMPO-OH, DMPO-CH DMPO-OOH thu được sau khi
bẫy . OH , . CH
theo DMPO, tương ứng. . Việc bổ sung

3 ,

2- và . O
3
Để nhận dạng cation của các sản phẩm bổ sung DMPO khác nhau được hình thành trong

sự đình chỉ, mô phỏng của quang phổ được ghi lại đã được hình
thành bằng cách sử dụng một thuật toán được cung cấp trong
chương trình WINSIM (xem phần thử nghiệm để biết thêm chi
tiết). Từ phổ mô phỏng, chúng tôi đã tính toán (không được hiển
thị) rằng đặc điểm kỹ thuật được ghi lại của các NP CuO đại
diện cho sự kết hợp
5%,
khi tuyến
DMPO
đặt tính
bẫy– .OOH; của:
95%
CH 2- và3 .nồng. độ
OH tương
vàÔ DMPO-OH; đối
thu DMPO
bằng5%DMPO được– sau
tương CH
ứng.
3 ,

2.3.2. Nồng độ ROS nội bào

2.3.2.1. Thử nghiệm DCFH. Để xác định sự tồn tại của ROS bên
′ ′
trong tế bào vi khuẩn ,27 -dichlorofl uorescin-diacetate (DCFH

Hình 3. Ảnh hưởng của kích thước hạt CuO và sự hiện diện của tế bào
vi khuẩn trong quá trình tạo ROS. Lượng ROS tương đối được tạo ra
trong huyền phù nước của CuO (mẫu 1–3) được đánh giá bằng (a) phổ ESR
và (b) xét nghiệm SuperLuminol. Đường cong CuO-1 (in a) được dịch
chuyển theo chiều ngang để rõ ràng hơn. (c) Phổ ESR và (d) Thử nghiệm
SuperLuminol chứng minh những thay đổi về nồng độ ROS khi xử lý kháng
khuẩn bằng huyền phù CuO-1 trong nước.
được trình bày trong Hình 3 c đối với CuO-1, khá nổi bật và phù
hợp với kết quả xét nghiệm SuperLuminol (Hình 3 d): kết hợp
huyền phù E. coli và CuO-1 tăng cường tín hiệu gốc ESR lên đến
khoảng 90% (trong 1 h). Xu hướng tương tự cũng thu được đối
với S. aureus nhưng ở cường độ nhỏ hơn đáng
, kể.
DA) được sử dụng như một chỉ thị trực quan về tình trạng oxy
hóa tổng thể của tế bào sinh học. DCFH-DA có thể đi qua màng tế
bào mem vào tế bào và thủy phân bởi các esterase nội bào thành
DCFH không huỳnh quang. Với sự có mặt của ROS, DCFH bị oxy hóa
thành dichlorofl uorescein có độ phát quang cao (DCF).
Do đó, nồng độ ROS trong tế bào tỷ lệ trực tiếp với cường độ
huỳnh quang của DCF. [31] Hình 5 minh họa nồng độ ROS sau khi
xử lý CuO-1 với sự hiện diện của DCFH. Thiết bị fi gure cho thấy
sự gia tăng cường độ huỳnh quang ( 8 lần) đối với các tế bào
được xử lý CuO-1 so với đối chứng không được xử lý. Điều này
là hiển nhiên đối với cả hai loài rial vi khuẩn (dữ liệu chỉ
được hiển thị cho E. coli ). Đáng chú ý là đối với E. coli , sự
phát quang huỳnh quang màu lục phát ra đã tăng lên, ở một mức
độ nào đó ( 20%), sau 10 phút tái phát quang (Hình 5 a). Do
đó, có thể kết luận rằng lượng tế bào ROS cao hơn, một số trong
số đó được tạo ra trong tế bào, có liên quan đến tác dụng kháng
khuẩn.
2.3.2.2. Thử nghiệm Chủng loại Phóng viên. Một số chủng E.
coli phản ứng với stress oxy hóa đã được Belkin và các đồng
nghiệp thiết kế và cấu trúc. [32] Các chủng phóng xạ này phát
ra ánh sáng khi bị stress oxy hóa. Một nhóm trong số các chủng
này, đáp ứng với sự hiện diện của các gốc superoxide và các ROS
khác, cũng đã được phát triển bởi Belkin và có thể hoạt động
như một cảm biến sinh học đáp ứng ROS. Tóm lại, các chủng E. coli này mang

6 www.small-journal.com © 2012 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim nhỏ 2012,
DOI: 10.1002 / smll.201200772
Machine Translated by Google

Tìm hiểu cơ chế kháng khuẩn của các hạt nano CuO

các gen lux phát quang sinh học của plasmid

được hợp nhất với các chất xúc tiến cụ thể c
chẳng hạn như gen chỉ định catalase ( katG ),
và được biểu hiện quá mức trong điều kiện
stress oxy hóa (xem thêm chi tiết trong Hình
5 b). Như thể hiện trong Hình 5 b, mức độ
phát quang gây ra của mỗi chủng được xử lý là

cao hơn xấp xỉ ba lần so với kiểm soát tế

bào không được điều trị của nó. Điều này hỗ
trợ thêm cho giả thuyết của chúng tôi rằng
ROS được tạo ra bởi các NP CuO gây ra stress
oxy hóa đối với vi khuẩn tiếp xúc.

Hinh 4 . Anion Superoxide được tạo ra bởi CuO NP. (Đường màu đen) Phổ ESR của sản phẩm cộng DMPO
2.3.3. Tổn thương qua trung gian ROS:
được hình thành trong huyền phù CuO-1 NPs với sự có mặt của DMSO. (Đường màu xám) Một quang phổ mô Lipid Peroxy hóa
phỏng; các thông số mô phỏng là: 50% DMPO-OOH: a = 12,06 G, 45% DMPO-OOH:n a= =13,96
27,44G,G.a H
= 13,88 G, a = 12,21 G, 5% DMPO-CH :
a 3 = 16,00 G, a Quá trình peroxy hóa lipid, một dấu hiệu của
n H n H

tổn thương ROS, có thể được phát hiện bằng

cách xét nghiệm tìm malondialdehyde ( MDA),
một sản phẩm bị oxy hóa của các axit béo
không bão hòa đa mà ở đó có khả năng phát hiện.

các giao thức. MDA tạo thành sản phẩm cộng

với axit thiobarbituric (TBA), tạo ra sản
phẩm màu hồng với độ hấp thụ tăng ở [33] Để
xác định ảnh hưởng của CuO 535 nm.

NP trên quá trình peroxy hóa lipid màng,

chúng tôi đã theo dõi quá trình sản xuất phụ
gia MDA (làm chất đánh dấu cho quá trình
peroxy hóa lipid) ở E. coli và S. aureus có và không có

tiếp xúc với các NP CuO. Chúng tôi đã chọn

tiến hành thí nghiệm này với nồng độ CuO-1
NPs thấp hơn đáng kể (0,01 mg / ml) để làm
mất khả năng của bản thân các NP CuO tương
tác với TBA và có lẽ là oxy hóa nó để mang

lại màu sắc tương tự như màu hấp thụ của sản
phẩm bổ sung TBA-MDA do đó cản trở hoạt động
bình thường của xét nghiệm này.

Như có thể thấy trong Hình S6, việc bổ sung

các NP CuO đã dần dần làm tăng nồng độ MDA ở
cả hai chủng và rõ ràng hơn là ở các tế bào
E. coli .

Hình 5. Sự bộc lộ NP của CuO gây ra stress oxy hóa vi khuẩn (được mô tả ở đây cho E. coli ). (a) Ứng
2.4. Mô hình ứng suất oxy hóa vi

suất oxy hóa được đo bằng kính hiển vi huỳnh quang fl sử dụng DCFH-DA. Khi DCFH-DA bị oxy hóa bởi khuẩn
các loại oxy phản ứng (ROS), nó được chuyển đổi thành DCF và phát ra tia huỳnh quang màu xanh lục.
Cường độ huỳnh quang fl liên quan đến lượng nồng độ ROS trong tế bào và được kiểm tra sau 10 và 20
Tổng hợp lại, các kết quả cuối cùng của chúng
phút xử lý CuO-1. Mỗi điểm màu xanh lá cây đại diện cho một tế bào vi khuẩn. Sau khoảng thời gian hơn
tôi chỉ ra những điều sau: 1) Số lượng vi
30 phút, một nền huỳnh quang màu xanh lục mạnh được phát hiện do rò rỉ nội dung tế bào và do DCF
khuẩn bị diệt trừ có liên quan chặt chẽ đến
khuếch tán ra khỏi tế bào. Vi khuẩn chưa được điều trị được coi là đối chứng âm tính. (b) Sự biểu
kích thước hạt của cả E. coli và S. aureus
, với
hiện quá mức của các gen liên quan đến căng thẳng với sự có mặt của các NP CuO-1. Các chủng vi khuẩn
E. coli mang phản ứng tổng hợp promoter (tức là micF- lux , sodA-lux, katG-lux và fabA-lux ) được các NP nhỏ hơn có hoạt động chống vi khuẩn
tiếp xúc với
, đo nồng độ 0,1
độ phát mg /Các
quang. ml kết
NP CuO-1 trongtrình
quả được 1 giờ.
bàySựdưới
biểu dạng
hiện hợp
của nhất
gen được theo dõi
phát quang bằngđối
tương cách hiệu quả hơn và độ nhạy cao hơn đối với tế
(RLU) như một hàm của tăng trưởng (OD bào vi khuẩn. 2) Các NP CuO được gắn vào bề
595 ). Các thanh lỗi đại diện mặt vi khuẩn, và ở một mức độ nào đó, xuyên
độ lệch chuẩn của ba thí nghiệm độc lập. gen sodA mã hóa superoxide 2 - thành H dismutase (SOD)
qua màng tế bào khi được xác định được khai
chuyển
HO và O 2 . fabA mã hóa một enzym tham đổi
gia vào . O đường
con Gen katG mã hợp
tổng hóa axit
catalase,
béo 2 gen nàynosẽkỵchuyển
không đổi
khí. Các
2 2 . sản phẩm của gen micF có liên quan đến các chức năng
Ô

củaO màng thác bằng kỹ thuật hiển vi điện tử.

2 đến (cụ
H2
thể là protein màng ngoài điều hòa phản ứng ARN antisense) và phản ứng với stress oxy
hóa.
3) E. coli nhạy cảm với CuO hơn S. aureus đối
với việc xử lý kháng khuẩn.

4) Các NP CuO tạo ra ROS. 5) Một số

nhỏ 2012, © 2012 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.small-journal.com 7
DOI: 10.1002 / smll.201200772
Machine Translated by Google
giấy tờ đầy đủ G. Applerot và cộng sự.

Hình 6. Sơ đồ minh họa cơ chế kháng khuẩn của các NP CuO và cấu trúc tế bào tương đối của (a) E. coli (Gram âm) và (b) S. aureus (Gram
dương). Sự khác biệt chính về cấu trúc giữa hai tế bào nằm ở độ dày của lớp peptidoglycan cứng và sự hiện diện của màng ngoài trong tế bào
Gram âm. Trong tế bào Gram âm, lớp peptidoglycan rất mỏng, chỉ dày vài phân tử, trong khi ở tế bào Gram dương lớp này rất dày. Các sắc tố
Carotenoid của S. aureus cung cấp tính toàn vẹn cho màng tế bào và tăng khả năng bảo vệ chống lại stress oxy hóa. Thiệt hại đối với tế bào
vi khuẩn là trung gian của các anion superoxide có hại được hình thành bởi /
các NP trong CuO.

các xét nghiệm chỉ ra rằng những ROS này kích hoạt ứng suất oxy hóa /
thiệt hại trong vi khuẩn.
Cần lưu ý rằng khả năng hòa tan nhẹ của đồng CuO
oxit, có thể được giải thích bởi K rất thấp sp
( 10 - 20 ), cho biết nồng độ rất thấp của Cu 2 + trong dung dịch. Để
Theo những gì chúng tôi được biết, không có báo cáo rõ ràng
nào chứng nhận cơ chế mà ROS được hình thành trên bề mặt oxit kim
loại, mặc dù có báo cáo rằng hiện tượng hút pro ROS bắt nguồn từ
bản chất tặng điện tử trên bề mặt của những đồ gốm này. [34] Hơn
nữa, người ta còn biết rất ít về bản chất của các vị trí khuyết

kiểm tra mức độ tràn vào của các ion đồng đối với tác dụng chống vi tật trên bề mặt oxit kim loại ướt. [34]

khuẩn, chúng tôi đã thực hiện một thử nghiệm kháng khuẩn bằng cách sử
dụng- Ksự tập trung ra lệnh. Sau khi ủ vi khuẩn
sp
với Cu Các ion 2 + của dung dịch bão hòa trong 3 giờ ở 37 °
C, không quan sát thấy khả năng sống sót của vi khuẩn. Kết quả này
chỉ ra rằng Cu là các ion 2 + không quan tâm, hoặc nhiều
nhất, có rất ít ảnh hưởng đến hoạt động kháng khuẩn. Có nghĩa là,
rõ ràng yếu tố quan trọng quyết định hoạt động kháng khuẩn là do
sự tồn tại của sản xuất ROS bởi các NP CuO chứ không phải là các
ion đồng hòa tan. Tuy nhiên, chúng ta không thể loại trừ một số
mức độ vi khuẩn có khả năng hòa tan các ion 2 + . CuO kèm theo và
do đồng
để chiết xuất Cu có hại Trên thực tế, những kết quả này không đó
nhất với [10] Kết quả trung tâm mà Gunawan et al đã báo cáo trước
đâykhuẩn
của mô hình của họ là sự xuất hiện của độc tế bào vi . Nguyên lý
CuO NPs
bắt nguồn từ việc rửa trôi đồng ở trạng thái hòa tan trong môi
trường nuôi cấy, làm phát sinh quá trình tạo ROS tế bào ở E.
Tuy nhiên, có thể tưởng tượng rằng một lượng lớn ROS (rất có thể
là anion superoxide) được tạo ra trực tiếp từ các vị trí khuyết
tật bề mặt trong CuO tinh thể nano.
Do đó, chúng tôi đề xuất rằng các hành động kết hợp của sự bám
dính mạnh mẽ của các hạt CuO vào màng màng tế bào vi khuẩn, cũng
như sự tạo ROS trên bề mặt của các hạt, gây ra sự gia tăng tính
thấm của tế bào, dẫn đến sự vận chuyển không bị xáo trộn của các
hạt CuO qua màng tế bào chất và cuối cùng là tế bào chết. Chế độ
hoạt động này chủ yếu tăng trong trường hợp các hạt CuO quy mô
nanomet nhỏ do tỷ lệ bề mặt trên thể tích cao hơn, dẫn đến việc
hình thành nhiều ROS hơn trên một đơn vị trọng lượng và xác suất
vượt qua màng tế bào của chúng cao hơn.
Về sự khác biệt trong tính nhạy cảm của S. aureus
và E. coli đối với CuO, một số yếu tố có thể được lưu ý để giải

coli . Rõ ràng, họ đã bỏ qua các NP CuO là nguồn chính của ROS.
Cần lưu ý rằng chúng tôi đã tiến hành các thử nghiệm khả năng
thích tại sao E. coli bị ảnh hưởng nhiều hơn S. aureus bằng cách
xử lý kháng khuẩn: i) Sự khác biệt giữa vi khuẩn Gram âm và Gram
dương trong bản chất của thành tế bào ; ở vi khuẩn Gram dương,
,bức tường tế
chẳng hạn như S. aureus dày, bao gồm một lượng lớn mucopeptit bào

kháng khuẩn trong điều kiện nước chứ không phải trong môi trường cũng như các thành phần bề mặt của axit lipoteichoic (LTA). Mặt
tăng trưởng để loại trừ khả năng tạo phức của CuO với các thành khác, vi khuẩn Gram âm (như E. coli ) có thành tế bào tương đối
phần hữu cơ tự do, do đó rửa trôi các ion đồng hòa tan như mỏng. [35] ii) Chủng S. aureus được thử nghiệm
một hệ quả.

8 www.small-journal.com © 2012 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim nhỏ 2012,
DOI: 10.1002 / smll.201200772
Machine Translated by Google

Tìm hiểu cơ chế kháng khuẩn của các hạt nano CuO

chứa các sắc tố vàng carotenoid cung cấp tính toàn vẹn cho màng tế bào và bị can thiệp bởi ROS được tạo chính như vậy. [40] Ví dụ, Karlsson et al .

thúc đẩy khả năng chống oxy hóa mạnh mẽ hơn. [36] Điều này có thể giải kết luận liên quan đến hiệu quả độc tố cao của các NP CuO đối với tế bào

thích, ví dụ, tín hiệu ESR của chủng này yếu hơn so với E. coli , khi xét nhân chuẩn [41] nên được đánh giá lại dựa trên dữ liệu mới của chúng tôi.

nghiệm terial kháng thể. iii) Vi khuẩn E. coli được khoang

trang bị
quanh
bên plasmic
trong Trong cuộc điều tra của chúng tôi, mọi xét nghiệm đo màu tế bào được lựa

với superoxide dismutase (SOD) có thể 2 - được tạo ra bởi CuO, dẫn đến sự chọn đều được kiểm tra kỹ lưỡng với các thí nghiệm đối chứng mở rộng để

hình thành 2- và thấm vào tế bào dễ dàng hơn . O loại trừ các nhiễu loạn của ROS không phụ thuộc vào tế bào do NP gây ra.
Hỡi hành động
.

của H O Trong Hình S7, chúng tôi trình bày kết quả sơ bộ về khả năng sống của
2 2
do đó oxy hóa các hệ thống hoạt động của tế bào. [37] tế bào được đánh giá bằng xét nghiệm (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphe

Một vấn đề khác cần được giải quyết là sau khi bắt đầu điều trị kháng nyltetrazolium bromide (MTT). Xét nghiệm này đo hoạt động men khử của ty

khuẩn, các thử nghiệm của chúng tôi, được thực hiện bằng phương pháp quang thể. [42] Ảnh hưởng của các mẫu CuO đối với một số loại khả năng tồn tại

phổ SuperLuminol và ESR, đã theo dõi sự gia tăng đáng kể của stress oxy của tế bào động vật có vú được mô tả trong Hình S7 và có thể thấy, ở nồng

hóa, vượt quá mức do chính CuO mang lại. Một phe nomenon tăng cường ROS độ CuO là 10 mg / ml chỉ có thể thấy rõ tác dụng gây độc tế bào vừa phải,

tương tự cũng đã được quan sát thấy trong nghiên cứu trước đây của chúng lên đến 20 % giảm khả năng sống của các tế bào được thử nghiệm với CuO-1

tôi về hoạt tính kháng khuẩn của các NP ZnO. [23] Về vấn đề này, sự bùng nổ (tuy nhiên, cần lưu ý rằng nồng độ hiệu quả dự kiến sẽ giảm dần trong thời

ROS có thể được tạo ra do sự tiếp xúc giữa các khoảng trống tinh thể CuO gian thử nghiệm, vì như đã chỉ ra ở đây, các NP CuO có xu hướng để kết tụ

và một số chất mang điện tử của vi khuẩn, hoặc do sản xuất ATP giảm dần. và lắng đọng). Đối với CuO-2 và CuO-3, chỉ có thể quan sát thấy hiệu ứng

biên trên các tế bào được thử nghiệm. Kết quả của chúng tôi phù hợp tốt

với báo cáo được xuất bản bởi Mahapatra et al. điều đó cho thấy các NP CuO

Tuy nhiên, một kịch bản có chiều sâu hơn có thể được xem xét dựa trên các có khả năng đi qua màng tế bào của vi khuẩn, tuy nhiên, ở tế bào nhân thực,

kết luận tương đối mới đã được nâng cao gần đây, tức là độc tính của cyto không đạt đến mức đáng kể. [43] Về vấn đề này, có báo cáo

Phản ứng tự tử của vi khuẩn [38] và tế bào chết theo chương trình (PCD). rằng khi xâm nhập vào bên trong tế bào người, các NP chủ yếu bị giữ lại

[39] Thông thường, PCD được kết hợp với các sinh vật đa tế bào nhân chuẩn. trong các lysosome, cho thấy chu kỳ màng endo cytic-exocytic. [44] Những

Tuy nhiên, hệ thống PCD gần đây cũng đã được quan sát thấy ở vi khuẩn. bằng chứng này ám chỉ rằng một chiến lược thoát lysosome như vậy để phân

Người ta đã đề xuất rằng ROS có thể dẫn đến một loạt các phản ứng sinh phối NPs sẽ là một cách hiệu quả để giảm thiểu độc tố lâu dài. Hơn nữa, bản

học, tùy thuộc vào sự phong phú tương đối của nồng độ ROS cục bộ, và một chất có tính axit của lysosome cũng có thể ngăn chặn việc sản xuất ROS bởi

số loại con đường tế bào được tham gia bởi stress oxy hóa gây ra quá trình các NP. Gần đây, Kim et al . đã báo cáo, trong một nghiên cứu tiên phong,

apoptosis ở vi khuẩn. Trong báo cáo trước đây, chúng tôi đã liên kết mô sự hấp thụ NP của các tế bào cũng bị ảnh hưởng bởi giai đoạn chu kỳ tế bào

hình kích hoạt phản ứng tự sát của vi khuẩn với hoạt tính kháng khuẩn của của chúng. Mặc dù các tế bào ở các pha khác nhau của chu kỳ tế bào được

các NP ZnO. [23] Cùng dòng, Gunawan và cộng sự cũng đề xuất khái niệm kích phát hiện là nội hóa NP với tốc độ tương tự, nhưng sau 24 giờ nồng độ NP

hoạt mô-đun di truyền độc tố-kháng độc tự sát sau khi xử lý CuO NPs. [10] trong tế bào có thể được xếp hạng theo các pha khác nhau: G2 / M> S> G0 /

Về vấn đề này, có thể gợi ý rằng khi các cơ chế bảo vệ của vi khuẩn bị lấn G1. [45] Tức là, liều lượng NP được nội hóa trong mỗi tế bào khác nhau khi

át bởi ROS do CuO gây ra, mô-đun di truyền PCD được kích hoạt, do đó kích tế bào tiến bộ trong chu kỳ tế bào.

thích sự bùng phát của stress oxy hóa, và đó là sự bùng phát của các gốc

điều đó gây chết tế bào hơn là gây ra ROS ban đầu do CuO gây ra. [38] Hình

6 minh họa ngắn gọn cơ chế được đề xuất làm cơ sở cho hoạt động kháng khuẩn

của CuO.

Tuy nhiên, trong trường hợp của các NP CuO, người ta vẫn phải xác định ảnh

hưởng lâu dài của các bào quan tế bào và môi trường tăng trưởng đối với

cả stress oxy hóa và các ion đồng rửa trôi từ các NP CuO và kết quả gây độc

tế bào sau đó.

2.5. Độc tính trong hệ thống sinh vật nhân chuẩn

3. Kết luận
Các sản phẩm sử dụng NP để xử lý kháng khuẩn gợi lên nhu cầu về một nghiên

cứu chi tiết nhằm tránh những tác động xấu đến môi trường và sức khỏe có Bài báo này đã thiết lập lộ trình cơ học nền tảng cho hoạt tính kháng khuẩn

thể xảy ra đối với NP được sản xuất. Mặc dù phương pháp tiếp cận độc chất của CuO liên quan đến các đặc tính phụ thuộc vào kích thước. Bằng cách sử

học truyền thống để kiểm tra hóa chất liên quan đến các nghiên cứu trên dụng hệ thống chiếu xạ siêu âm, chúng ta có thể thu được các NP có kích

động vật như là phương tiện chính để đánh giá mối nguy, nhưng chiến lược thước nhỏ. Trong số các NP CuO được thử nghiệm, các NP nhỏ được tìm thấy

này lại tốn kém và sử dụng nhiều công sức. là gây ra tác dụng gây độc tế bào có hại nhất đối với vi sinh vật mô hình.

Do đó, để đánh giá độc tính tế bào cấp tính, một số phương pháp dựa trên Kiểm tra quang phổ điện tử cho thấy các NP CuO có xu hướng bám vào bề mặt

thuốc nhuộm đã được phát triển có thể áp dụng và được mô tả kỹ trong y tế bào và phá vỡ tính toàn vẹn của màng tế bào.

văn. Tuy nhiên, trong trường hợp của chúng tôi, nhận thấy rằng các NP CuO

cũng là nhà sản xuất ROS trong các hệ thống không có tế bào, nên bắt buộc Từ kết quả của nghiên cứu này, rõ ràng là các kim loại oxy radi, cụ

phải áp dụng một cách tiếp cận cẩn thận hơn, vì việc sử dụng rộng rãi các thể là các anion superoxide, được tạo ra trong huyền phù nước CuO với các

thử nghiệm thuốc nhuộm có thể có nhiều dấu hiệu giả do hạn chế trong số các hạt có kích thước nhỏ hơn tạo ra một lượng lớn hơn các gốc. Các NP CuO

xét nghiệm dựa trên thuốc nhuộm này là cũng gây ra

nhỏ 2012, © 2012 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.small-journal.com 9
DOI: 10.1002 / smll.201200772
Machine Translated by Google
giấy tờ đầy đủ G. Applerot và cộng sự.

7
tạo ROS nội bào được thúc đẩy từ phản ứng của tế bào đối với việc điều trị Số lượng tế bào ban đầu trong lọ nằm trong khoảng 10 Để đảm CFU / ml.

kháng khuẩn. bảo rằng bất kỳ sự sụt giảm nào về số lượng vi sinh vật đều có thể là do
Vì sự cần thiết phải tránh ảnh hưởng của NPs tiếp xúc với phương pháp xử lý bằng băng tráng, một dung dịch muối không

tổng hợp, kiểm tra định lượng đầy đủ các gốc được tạo ra xứng đáng với nỗ có CuO đã được đưa vào thử nghiệm như một chất đẩy bổ sung. Huyền phù

lực nghiên cứu thêm. Tuy nhiên, các thử nghiệm độc lập khác nhau mà chúng vi khuẩn được ủ trên bệ quay ở 180 lắc min - 1 ° C trong tối đa 3 giờ.

tôi áp dụng trong công việc hiện tại đã củng cố mô hình của chúng tôi liên Khả năng sống của tế dung
bào được
dịch đo
bằng ở 37tiếp
muối,
cách độ loãng
pha tuổi
theo tại
là các
nốimạ thời
tiếp
trêncác
môiđiểm cụtrong
chủng
trườngthể
rắn

quan đến phương thức hoạt động terial kháng thể của các NP CuO. Về điểm cuối vô trùng của NB, đổ vào các đĩa Petri có đáy, trong 24 giờ. Số lượng tế

cùng, các kết quả ban đầu cho thấy rằng các NP CuO có độc tính tế bào hạn bào sống được được ghi lại bằng cách đếm số lượng khuẩn lạc vi khuẩn

chế đối với các dòng tế bào động vật có vú khác nhau. Những kết quả này ngụ phát triển trên đĩa, nhân với hệ số pha loãng và được biểu thị bằng

ý rằng các tế bào của động vật có vú được thực hiện với một dòng thác mạnh CFU / ml. Các thí nghiệm được lặp lại ít nhất ba lần cho mỗi chủng.

hơn, bao gồm các ponents com enzym và không enzym, làm cho chúng có khả năng

kháng cự tinh vi đối với stress oxy hóa và hiệu lực độc hại của NPs.

Kính hiển vi điện tử quét môi trường của vi khuẩn sam ples: Các mẫu

nuôi cấy vi khuẩn E. coli và S. aureus được xử lý trong 1 giờ với các

hạt nano CuO (0,1 mg / ml) được trộn với glutaralde hyde và

4. Phần thực nghiệm paraformaldehyde trong 1 giờ. Sau khi ủ này, các mẫu được rửa ba lần

bằng dung dịch muối đệm photphat (PBS). Sau đó, các mẫu được ngâm trong
Tổng hợp : đồng (II) axetat khử nước (0,4 gam; Aldrich 98%) được
1 giờ trong axit titanic và dung dịch glutamat ở nồng độ tỷ lệ 4: 5,
hòa tan trong 100 mL nước 10% v / v – N, N-dimetyl formamit (DMF; Aldrich
tương ứng. Sam ples sau đó được rửa ba lần bằng PBS và tiếp xúc với
99,8%) và được chiếu xạ bằng siêu âm cường độ cao sừng (Ti-horn, 20
dung dịch osmium tetraoxit trong 1 giờ. Để khử nước các mẫu, chúng được
2
kHz, 100 W / cm argon ở nhiệt độ phòng trong 3 giờ. Các) sản
dưới mộtthu
phẩm loạt
rửa tuần tự bằng nước – etanol và etanol–
được lần đầu tiên được rửa kỹ bằng nước cất kép và sau đó bằng etanol

tuyệt đối trong hộp găng tay trơ (O <1 ppm) và sấy khô
Dung dịch Freon (nồng độ từ 50% đến 100% cho mỗi dung môi). Cuối cùng,
2
các mẫu được làm khô trong không khí ít nhất 24 giờ và sau đó được phủ
máy hút bụi.
một lớp carbon và kiểm tra bằng kính hiển vi điện tử quét môi trường FEI
Đặc điểm : Các phép đo XRD được thực hiện với
Quanta 200 FEG.
λ = 1,5418
một máy đo nhiễu xạ Bruker D8 có bức xạ Cu K α (Đỉnh fi tting và refiÅ).
Phân tích vi tia X được thực hiện bằng hệ thống tia X eXL Linx tích hợp
nement tham số mạng được tính toán bằng cách sử dụng chương trình Topas
sẵn.
và Metric (Bruker Analytical X-Ray Systems).
Kính hiển vi điện tử truyền qua của các mẫu vi khuẩn: Các mẫu cấy
Hàm lượng cacbon và hydro được đo bằng phân tích C, H, N (Eager
vi khuẩn Sam ples của E. coli và S. aureus được ly tâm và rửa sạch ngay
200). Diện tích bề mặt được đo bằng máy phân tích Micromeritics (Gemini
sau khi xử lý không có và với các hạt nano CuO (0,1 mg / ml). Sau đó,
2375) và được tính toán từ phần tuyến tính của đồ thị BET của đường
các mẫu được xử lý trong 25% glutaraldehyde / paraformaldehyde trong
đẳng nhiệt hấp phụ / giải hấp N của2 các
lặp sản
lại phẩm CuO.
ba lần và Các
kết phép đo được
quả được tìm
dung dịch đệm cacodylate ở nhiệt độ phòng trong 1 giờ. Sau đó, các mẫu
thấy là có thể lặp lại.
được rửa bằng dung dịch đệm cacodylate và pha trong 1% osmium tetraoxide.

Nhúng mẫu được thực hiện bằng cách sử dụng một giao thức chuẩn; Các lát
Các hình thái và cấu trúc vi mô hoặc nano của các sản phẩm được đặc
dày 60 nm được cắt bằng dao kim cương (LBR ultratome III). Các lát được
trưng thêm với kính hiển vi điện tử truyền qua JEM-1200EX (TEM) và thiết
đặt trên lưới 200 mesh trần, và được nhuộm bằng uranyl axetat 2% trọng
bị HRTEM JEOL-2010 sử dụng điện áp gia tốc lần lượt là 80 kV và 200 kV.
lượng trong 5 phút. Cuối cùng, các lưới được làm khô trong cator hút

ẩm và được kiểm tra bằng cách sử dụng vi phạm vi truyền điện tử Tecnai
Các mẫu để phân tích TEM và HRTEM được chuẩn bị bằng cách phân tán
F20 với bộ lọc năng lượng sau cột Gatan Tridiem tích hợp sẵn, chụp ảnh
cally ultrasoni các sản phẩm vào cồn isopropyl, sau đó đặt một giọt huyền
STEM với máy dò Fischione HAADF và máy dò Gatan BF / DF và máy dò EDS /
phù này lên một lưới đồng và sau đó làm khô lưới trong chân không.
EELS.

Tán xạ ánh sáng động (DLS) được nghiên cứu bằng cách sử dụng Malvern
Các phép đo ESR được thực hiện như đã mô tả trước đó [23] ở các
Thiết bị Zetasizer nano ZS.
nồng độ được chỉ định. Mô phỏng quang phổ được ghi lại, tương ứng với
Thử nghiệm kháng khuẩn: Hoạt tính kháng khuẩn của CuO parti cles đã
việc bổ sung 100% dime thyl sulfoxit, được thực hiện bằng cách sử dụng
được thử nghiệm chống lại vi khuẩn Gram âm E. coli 1313 và chống lại vi
một thuật toán do chương trình WINSIM cung cấp, có sẵn từ trang web
khuẩn Gram dương S. aureus 195 (mỗi loại đều từ các chủng được phân lập
NIEHS (National Insti tutes of Health) (http: //epr.niehs .nih.gov /
lâm sàng). [46] Các vi khuẩn được nuôi cấy qua đêm trong môi trường canh
pest_mans /
thang dinh dưỡng (NB) ở 37 ° C có sục khí và chuyển vào sáng hôm môi
sau vào
winim.html).
trường mới ở mật độ quang học (OD) ban đầu là 0,1 ở bước sóng 660 nm.
Các xét nghiệm ATP và Luminol được thực hiện theo hướng dẫn của
Khi dịch cấy đạt mật độ quang OD 0,3 (660 nm) trong pha log, tế bào được
nhà sản xuất (BioThema và WPI, tương ứng).
thu hoạch bằng cách ly tâm và rửa hai lần bằng dung dịch muối ở pH 6,5.
Tỷ lệ ROS nội bào trong tế bào vi khuẩn được kiểm tra bằng cách theo
Mỗi mẫu CuO được tái huyền phù trong dung dịch muối để đạt được nồng độ
dõi phản ứng của chúng với 2 ′, 7'-dichlo rofl orofl uorescin diacetate
thích hợp, sau đó 4,5 ml huyền phù được đổ vào lọ có đường kính trong
không huỳnh quang (DCFH-DA) trong máy đo quang phổ.
là 2,5 cm. Sau đó, các tế bào biến dạng được dùng pipet (500 l) cho vào
Dung dịch nước muối của E. coli và của các chủng S. aureus đã được
lọ. chuẩn bị như mô tả ở trên cho các thử nghiệm kháng khuẩn. NP sau đó
μ được bổ sung ở nồng độ chỉ định. Một giải pháp gốc của DCFH-DA

10 www.small-journal.com © 2012 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim nhỏ 2012,
DOI: 10.1002 / smll.201200772
Machine Translated by Google

Tìm hiểu cơ chế kháng khuẩn của các hạt nano CuO

(2 mg / ml) trong etanol được giữ ở - 20 ° C trong bóng tối. Đối [9] G. Ren , D. Hu , EWC Cheng, Int. MA Vargas-Reus, P. Reip, 33
với các thí nghiệm, dung dịch gốc được pha loãng 100 lần trong PBS, RP Allaker , J. Chất kháng khuẩn. Đại lý , 587, - 590.

và 10% v / v thuốc nhuộm được thêm vào các mẫu thử nghiệm. Các mẫu [10] C. Gunawan , WY Teoh R. Amal , ACS Nano 2011
, 2009 CP Marquis, ,
9 , 7214 - 7225.
được ủ trong 15 phút ở 37 ° C, và kính
bằng rửa sạch. Các
hiển vi mẫu được
huỳnh quang kiểm tra
(Leica
[11] M. Heinlaan , A. Ivask , I. Blinova ,H. Bubourguier, A. Kahru ,
SPE).
, 71 , 1308 - 1316.
Che bầu không khí 2009
Nuôi cấy tế bào và xét nghiệm độc tính tế bào : HeLa, thận phôi B. Lönnerdal , R. Uauy, J.
[12] M. Olivares , F. Pizarro, H. Speisky,
thai người 293 và dòng tế bào nguyên bào sợi phôi phôi chuột được Nhi khoa. Gastr. Nutr. 1998, 26 ,
251 -
257.
nuôi cấy trong đĩa Petri trong Môi trường thiết yếu tối thiểu [13] WW Wang, YJ Zhu 609 , GF Cheng, YH Huang, Matter. Để cho. 2006 ,

(DMEM) của Dulbecco được bổ sung với 10% huyết thanh bê thai (FCS), 60 , - 612.

1% peni cillin / streptomycin và 1% glutamine. Các tế bào được gieo [14] X. Jiang, T. Herricks, Y. Xia , Nano Lett. 2002 , 2 , 1333 - 1338.
[15] a) JS Wang, JK Yang, JQ Sun 625 , Y. Bảo , Mater. Des. 2004 , 25 ,
với mật độ 10 000 tế bào mỗi giếng trong các đĩa nuôi cấy mô 24
, Chèm.
- 629; b) MH Cao CW Hu EB Wang. Guo
, YH Wang, YHCX , 1884 - 1885;
Guo,
giếng (Greiner) và cho tiếp xúc với các mẫu CuO (tức là CuO-1,
Commun. 2003 XY Kong, XG Wen SH , c) ZL Wang,
CuO-2, CuO-3) ở nồng độ 10 mg / mL. Các tế bào được ủ ở 37 ° C , 107 ,
Yang, J. Phys.
8280;
Chèm.
d) BC.2003
Xu Y.
8275
Liu- G. Xu G. Wang, Mater.
trong môi trường ẩm ướt 5% CO trong 24 2giờ.
hạt Sau
CuO bation
(với các
incu,
tế bào
các Res. Bò đực. , , ,
đính kèm) được loại bỏ để phân tích thêm, như được mô tả bên , 37
Năm 2002 2365
, - 2372.

dưới. Các tế bào được phân tích khả năng sống sót của tế bào bằng [16] JH Bang, KS Suslick ,Tiến lên Mater. 2010 , 22 , 1039 - 1059.
[17] G. Applerot, R. Abu-Mukh , A. Irzh , J. Charmet , H. Keppner, E. Laux ,
cách sử dụng xét nghiệm MTT so màu, như được mô tả bởi Mos [42]
G. Guibert ,1052 - 1059
A. Gedanken , ACS Appl. Mater. Các giao diện. 2010 , 2 ,
mann. Xét nghiệm này dựa trên khả năng chuyển hóa có hoạt tính
[18] R. Gottesman A.
tế bào giảm phân 3- (4,5-Dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazo
, S. AV
Gedanken, Langmuir 2011 Shukla , N. Perkas , LA Solovyov, Y. Nitzan ,
lium bromua; một muối tetrazolium màu vàng, thành một formazan màu Ghule BJ Chen , 27 , 720 - 726.
tím. Tóm lại, sau 24 giờ ủ, 100 μ L hỗn hợp ghi nhãn MTT (5 mg / [19] K. Ghule , , , YC Ling, Green Chem. 2006 , ,
số 8

mL) được thêm vào mỗi giếng và vi tấm được ủ trong 15 đến 45 phút. 1034 - 1031.

Sau khi ủ, môi trường chứa MTT được loại bỏ khỏi vi tấm và chất [20] a) W. Droge, Physiol. Rev. 2002 , 82 , 47 - 95; b) SG Rhee, Exp.
, 31
Mol. Med. Năm 1999 53,- 59.
không hòa tan đối với mazan được hòa tan trong 50 μ L DMSO. Khả
[21] JJ Lee , A. Goncalves , BA Smith , R. Palumbo , AG trắng ,
năng sống sót của tế bào được xác định bằng cách đo độ hấp thụ ở
BD Smith ,Áo J. Chèm. 2011 , 64 , 604 - 610.
mật độ quang học (đầu đọc kính siêu nhỏ OD (Synergy 2, BioTek
570) sử dụng một
, N. -Kuleva
[22] M. Fedorova 2516 2526. R. Hoffmann , J. Proteome Res. 2010 ,9,
Instruments).

[23] G. Applerot, A. Lipovsky, R. Dror , N. Perkas , Y. Nitzan , R. Lubart ,

A. Gedanken ,Tiến lên Funct. Mater. 2009 , 19 , 842 - 852.
[24] Nhiễu xạ bột tia X trong phòng thí nghiệm trong xác định cấu trúc
từ dữ liệu nhiễu xạ bột ( International Union of Crystallog raphy
Monographs on Crystallography ) Oxford University Press 2002 13 , ,
Thông tin hỗ trợ trang ,29 -Publishers,
48. [25] a)Inc.
Nanotechnology , Z. Wang,
(Eds: Z. X. Zu trang
Bartul
Hauppauge, J.JNLiTrenor)
in Advances
379 b)inL.
Science
- 393;
Fedele N. 2010 , , Tập 2 ,
Thông tin Hỗ trợ có sẵn từ Thư viện Trực tuyến Wiley hoặc từ tác ,

giả. , L. Colla, S. Bobbo , S. Barison ,

F. Agresti, Độ phân giải kích thước nano. Lett. 2011 , 6 , 1 - 8.
[26] RM Stroud , Cấu trúc bản chất. Biol. 1996 , 3 , 567 - 569.
[27] C. Kuebel TC, A. Voigt, D. R. Schoenmakers
Su A. , M. Otten
Carlsson J. Bradley, Microsc., Hệ vi ,
[1] C. Burda , XB Chen , N. Narayanan, MAE Sayed, Chem. Rev. Lee , sinh vật . 2005
, , 11 ,
2005 105
, , 1025 - 1102. 378 - 400.
[2] S. Guo , E. Wang, Acc. Chèm. Res. 2011 , 44 , 491 - 500. [28] S. Rana , R. Chawla , R. Kumar , S. Singh, A. Zheleva , Y. Dimitrova ,
[3] AA Ansari MS , MN Khan , M. Alhoshan , AS Aldwayyan, GT V. Gadjeva, R. Arora , S. Sultana ,RK Sharma ,J. Pharm. Được tráng men sinh học.

Alsalhi , Trong: Hạt nano (Số đăng ký: AE Kestell

, DeLorey), Sci. 2010 , 2 , 80 - 87.

Nhà xuất bản Khoa học Nova, Inc. Hauppauge, NY 2010 , trang 1 - [29] K. Makino , T. Hagiwara, A. Murakami , Int. J. Rad. Appl. Hướng dẫn
, S.
78. [4] a) QL Li DY Mahendra
Lyon, D. Li, 42 L. Brunet , MV Liga, , [C]. 1991 , 37 , 657 - 665.
Người hâm mộ PJJ , Nước Res . 2008 , , 4591 - 4602; b) N. Ma , [30] RP Mason , PM Hanna , MJ Burkitt , MB Kadiiska , Môi trường.

, X.
Alvarez X. Quán , Y. Zhang, J. Khoa học về , 336 , 109 - 117; Quan điểm sức khỏe. , 102 , 33 - 36.
c) NR Panyala, màng . 2009 EM Pena-Mendez
, J. Havel, J. Appl. Sinh học. , Mr Wilson
1994 [31] L. Foucaud 2007 , DM Brown , V. Đá , Toxicol. Lett.
2008 6, , 117 - 129; d) RR Khaydarov, RA Khaydarov, 174 [32]
, RA a)
LaRossa,
, 1S.- 9.
Belkin
,
S. Evgrafova, S. Wagner, SY Cho In: Enviromental Security and Appl. Môi trường. ,ViDRmô.
Smulski , AC Vollmer , TK Van Dyk, 67
Ecoterrorism (NATO Science for Peace and Security Series C: Envi 1996 b) S. Belkin
Lee JH
2010 , 2252
, -- 212;
2256;c)206
T.
ronmental Security) (Eds. H. Alpas, I.
2011
Ermakova),
, trang SM ,- Springer,
117Berkowicz
127. [5] a) , Curr. Opin. Vi sinh. 2003 , 6 , Elad ,
X. Hu P. Wang, HM Hwang, In. Khoa học. Tổng môi trường. , MB Gu , S. Belkin , Tiến lên Hóa sinh. Engin./Biotechnol.
, S. Cook , , 117 , 85 - 108.
407 ,157
2009 B., Xing, 3070
Sci.
- 3072;
Tiến b)
lênW.
Tấm lót . 2010 H. Mashayekhi,
Jiang, [33] F. Michel , D. Bonnefont-Rousselot , E. Mas , J. Drai, P. Therond ,
Môi trường. Ô nhiễm. 2009 , , 1619 - 1625. Ann. Biol. Clin. (Paris) , 66 , 605 - 620.
[6] DP Singh, N. Ali , , 2 , 295 - 335. ,VE A.
2008 [34] GE Jr. Brown Henrich
Felmy, , WH Casey, DL Clark , C. Eggleston,
[7] J. Gabbay, G. Borkow Y. , J. Mishal , E. Magen, R. Zatcoff , DW Goodman KH Nealson , M. Graetzel , G. Maciel , MI McCarthy,
Shemer-Avni , 35 , 323 - 335.
,J. Ind. Văn bản. 2006 , DA Sverjensky, MF Toney, 77 JM Zachara , Chèm.
, G.
[8] I. Perelshtein G. Applerot, N. Perkas , E. Wehrschuetz-Sigl, A.
Guebitz A. Hasmann Rev. 1999 , 99 , - 174.
, , Gedanken, Lướt sóng. Áo choàng. Technol. 2009, [35] M. Rautenberg, T. Kohler , G. Xia, E. Kulauzovic , A. Peschel , bên trong

204 , 54 - 57. Phong bì tế bào Gram dương trong: Hợp chất thành tế bào nhân sơ:

nhỏ 2012, © 2012 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.small-journal.com 11
DOI: 10.1002 / smll.201200772
Machine Translated by Google
giấy tờ đầy đủ G. Applerot và cộng sự.

Cấu trúc và Hóa sinh (Số đăng: H. Konig, H. Claus , A. Varma) [41] HL Karlsson , P. Cronholm , J. Gustafsson , L. Moller, Chèm. Res.
Springer, Heidelberg, 2010 , trang 253 - 270. Toxicol. 2008 , 21 , 1726 - 1732.

[36] a) GY Liu , A. Essex , JT Buchanan J. , V. Datta , HM Hoffman , [42] T. Mosmann ,J. Immunol. Các phương pháp. 1983, 65 , 55 - 63.
, Fierer , V. Nizet,Exp. Med. 2005 CC , 202 , 209 - 215;
JF Bastian J. [43] O. Mahapatra, M. Bhagat, C. Gopalakrishnan, KD Arunachalam ,
b) NN Mishra J. , GY Liu , ÔNG Yeaman , Nast , R. A Proctor , , a), 185 - 193.
J. Exp. Nano. 2008 3 [44]
McKinnell AS ,Bayer,
526 - 531. Chất kháng khuẩn. Đặc vụ Che mẹ. 2011 , Z. Chen JJ Yin S., Hu N. Gu , YT Zhou , Y. Zhang, L. Song, M. Song,
55 , , , ACS Nano 2012 , 6 , 4001 - 4012; b) C. Schumann A. ,
[37] AM Gort , M. Daniel , DM Ferber , JA Imlay, Mol. Vi sinh. Chương 117 - 127 , C. Cavelius , Kraegeloh, J. Biophoton. 2012 5 , ,
, 32 -, 191.
1999 179 của S. Schübbe.

[38] a) TG Aldsworth , RL Sharman , CER Dodd , Tủ. Mol Khoa học đời sống. [45] JA Kim , C. Åberg, A. Salvati , KA Dawson , Nat. Công nghệ nano.
1999 , 56 , 378 - 383; b) CER Dodd 120 , PJ Richards , TG Alds 2012 , 7 , 62 - 68.
đáng giá , Int. J. Microbiol thực phẩm. 2007, , 46 - 50. [46] Y. Nitzan , M. Kauffman , Lasers Med. Khoa học. 1999, 14 , 269 -
[39] a) H. Engelberg-Kulka, S. Amitai , I. Kolodkin-Gal , R. Hazan , PLoS 277.
Genet. 2006 , 2 ,781430
1518 - ,1526; b) M. Hu , X. Zhang, E. Li, YJ Feng,
tr 10.
Int. J. Microbiol. 2010,
Nhận: ngày 9 tháng 4 năm 2012
[40] JM Woerle-Knirsch , K. Pulskamp, HF Krug, Nano Lett. 2006 ,6, Sửa đổi: ngày 15 tháng 6 năm 2012
1261 - 1268. Đã xuất bản trực tuyến:

12 www.small-journal.com © 2012 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim nhỏ 2012,
DOI: 10.1002 / smll.201200772