Machine Translated by Google

Bài báo nghiên cứu

Nhận: ngày 7 tháng 6 năm 2015, Sửa đổi: ngày 8 tháng 7 năm 2015, Được chấp nhận: ngày 10 tháng 7 năm 2015 Xuất bản trực tuyến trong Thư viện trực tuyến Wiley: ngày 19 tháng 8 năm 2015

(wileyonlinelibrary.com) DOI 10.1002/bio.2996

Liên kết của caffein với axit caffeic và axit

chlorogenic bằng cách sử dụng phương pháp dập tắt huỳnh quang,
Kỹ thuật quang phổ UV / vis và FTIR

Abebe Belay, a, b * Hyung Kook Kima và Yoon-Hwae Hwanga *

TÓM TẮT: Sự tương tác của caffein (CF) với axit chlorogen (CGA) và axit caffeic (CFA) đã được nghiên cứu bằng kỹ thuật dập tắt huỳnh quang, UV/
vis và quang phổ hồng ngoại biến đổi Fourier (FTIR). Kết quả của nghiên cứu chỉ ra rằng quá trình dập tắt huỳnh quang giữa caffein và axit
hydroxycinnamic có thể được hợp lý hóa theo cách dập tắt tĩnh hoặc sự hình thành phức hợp CF–CFA và CF–CGA không phát huỳnh quang. Từ phân tích
quang phổ dập tắt huỳnh quang, hằng số dập tắt (KSV), hằng số tốc độ dập tắt (kq), số lượng vị trí liên kết (n), tính chất nhiệt động lực học
và sự thay đổi về hình dạng của tương tác đã được xác định. Hằng số dập tắt (KSV) giữa CF và CGA, CFA là 1,84 × 104 và 1,04 × 104 L/mol ở 298
K và vị trí liên kết n của chúng là ~ 1. Các thông số nhiệt động được xác định bằng phương trình Van't Hoff chỉ ra rằng các liên kết hydro và
Lực của van der Waal có vai trò chính trong phản ứng của caffein với axit caffeic và axit chlorogenic.

Phổ huỳnh quang 3D, UV / vis và FTIR cũng cho thấy rằng liên kết của CF với CFA và CGA gây ra những thay đổi về cấu trúc trong CFA và CGA. Bản
quyền © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.

Từ khóa: dập tắt huỳnh quang; hằng số ràng buộc; axit hydroxycinnamic; cafein; FTIR

Giới thiệu dung dịch nước sử dụng phép đo quang phổ UV / vis (35–37). Gần đây,
sự liên kết dị của caffein với axit 3-O-caffeoylquinic (38) và các
Axit chlorogen (CGA) và axit caffeic (CFA) là các axit hydroxycinnamic
đồng phân axit di-O-caffeoylquinic gần đây đã được xác định bằng
phong phú nhất có sẵn tự nhiên trong đồ uống có nguồn gốc thực vật,
phương pháp quang phổ NMR (39). Tuy nhiên, theo hiểu biết tốt nhất
chẳng hạn như cà phê (1,2) và trong các sản phẩm nông nghiệp khác
của chúng tôi, ảnh hưởng của CF đến các đặc tính cấu trúc và phổ của
như trái cây, rau, ngũ cốc và các loại đậu ( 3–6). Chúng có nhiều tác
CFA và CGA, các khía cạnh nhiệt động lực học của quá trình liên kết
dụng sinh học khác nhau như chống oxy hóa (7–9), kháng khuẩn (10),
và đặc điểm của các vị trí liên kết vẫn chưa được nghiên cứu.
chống đột biến, chống ung thư (11,12), kháng vi-rút (13) chống tăng
cholesterol máu (14) chống tăng huyết áp (15,16) ) và hoạt động chống
Do đó, trong nghiên cứu này, cơ chế tương tác của CF với CGA và
bệnh tiểu đường (17) và hoạt động chống viêm (18).
CFA đã được nghiên cứu bằng cách sử dụng phương pháp dập tắt huỳnh
Caffeine (1,3,7-trimethylxanthine, CF) là một alkaloid purine được
quang, FTIR và quang phổ UV/vis. Sử dụng phân tích thông số kỹ thuật
tìm thấy trong lá, hạt và quả của 63 loài thực vật. Nguồn caffein
dập tắt huỳnh quang, các hằng số liên kết, vị trí liên kết, thông số
phổ biến nhất là hạt cà phê, hạt ca cao, hạt cola và lá chè (19–22).
nhiệt động lực học, lực liên kết hoạt động giữa các hợp chất và sự
Nó là một thành phần trong thuốc mê, thuốc hạ sốt và thuốc ăn kiêng
thay đổi về hình dạng đã được nghiên cứu.
và là hợp chất được tiêu thụ nhiều nhất (23–27). Ở Hoa Kỳ, lượng
caffein trung bình ước tính cho người tiêu dùng trưởng thành là 165
Thực nghiệm
mg/ngày (28). Sự phong phú của caffeine trong chế độ ăn uống của con
người và các loại thuốc, cũng như các đặc tính sinh học của nó đã
Thuốc thử và thiết bị
thu hút sự quan tâm của nhiều nhà nghiên cứu.
Sự tương tác của caffein với các axit hydroxycinnamic đã thu hút Caffeine, CGA và CFA (Hình 1) được mua từ Sigma-Aldrich Co. và được

sự quan tâm vì chúng được tìm thấy trong các nguồn thực phẩm và thuốc sử dụng mà không cần thêm bất kỳ quá trình thanh lọc nào. Dung dịch

khác nhau. Hiểu được liên kết của chúng trong một hệ thống sinh học đệm natri photphat được sử dụng để giữ giá trị pH ở 6,80. Tất cả các

ở cấp độ phân tử là rất hữu ích. Nhiều phương pháp khác nhau như thẩm vật liệu đều thuộc loại thuốc thử phân tích và nước khử ion được sử

phân cân bằng, điện cực chọn lọc ion (29,30), UV / vis (31), huỳnh dụng xuyên suốt.

quang (32,33) và quang phổ hồng ngoại biến đổi Fourier (FTIR) đã được
sử dụng trong các nghiên cứu liên kết. Trong số các phương pháp này,
* Liên hệ với: A. Belay và Y.-H. Hwang, Khoa Kỹ thuật vật liệu nano và Công
thẩm tách cân bằng được sử dụng rộng rãi; tuy nhiên, nó đòi hỏi phải
nghệ hội tụ nano, Đại học Quốc gia Pusan, Miryang, 627-706, Hàn Quốc. E-
phân tích nồng độ phối tử tự do và tổng và tốn nhiều thời gian (34). mail: abebebelay96@gmail.com; yhwang@pusan.ac.kr
Điện cực chọn lọc ion thiếu tính chọn lọc đối với caffeic và CGA
Khoa Kỹ thuật Vật liệu nano và Công nghệ Hội tụ Nano,
một

(29,30). Tuy nhiên, các phương pháp quang phổ có nhiều ưu điểm khác
Đại học Quốc gia Pusan, Miryang, 627-706, Hàn Quốc
nhau: chúng nhạy, dễ sử dụng và thời gian phân tích ngắn.
Hằng số cân bằng cho sự tạo phức của CF với các thành phần poly b
Khoa Vật lý, Trường Khoa học Tự nhiên, Đại học Khoa học và Công nghệ Adama,
phenolic của hạt cà phê xanh được xác định trong POBox 1888, Adama, Ethiopia
565
Phát quang 2016; 31: 565–572 Bản quyền © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.
Machine Translated by Google

A. Belay và cộng sự.

7000
một

6000
một. Caffeine
5000

4000

b. Axit Caffeic
quang
huỳnh
Cường
độ

3000 g

2000

c. Axit chlorogenic 1000

0
Hình 1. Cấu trúc phân tử của (a) caffein, (b) axit caffeic và (c) axit chlorogen.
400 450 500 550
Bước sóng/nm

Tất cả các phổ huỳnh quang được ghi lại trên máy quang phổ huỳnh Hình 2. Phổ phát xạ của CFA (λex = 300 nm) với sự có mặt của caffeine ở 298 K.

quang F-7000 (Hitachi, Nhật Bản) được trang bị tế bào thạch anh Nồng độ caffeine tăng từ trên xuống dưới (1,66, 2,73, 3,27, 4,07, 5,08, 6,69,
9,89 × 10–5 M), trong khi nồng độ CFA được cố định ở 1,39 × 10–5 M.
1,0 cm. Các phép đo hấp thụ UV / vis được thực hiện bằng máy quang
phổ UV / nhìn thấy / NIR và phổ hồng ngoại được ghi lại bằng máy
1600
quang phổ FTIR 6300 / IRT 3000 (Jasco, Nhật Bản).
một

Độ pH của dung dịch được đo bằng máy đo pH có xử lý HI8314 (Hanna, 1400

Hoa Kỳ).
1200

Phương pháp đo lường 1000

Dung dịch gốc của CFA (1,05 × 10–3 mol / L) và CGA (4,97 × 10–4 800
g
mol / L) được chuẩn bị trong dung dịch đệm natri phosphat để đo
600
huỳnh quang ở trạng thái ổn định và hấp thụ UV / vis.
quang
huỳnh
Cường
au
độ /

Dung dịch gốc của CF (2,08 × 10-3 mol / L) được chuẩn bị trong 400
nước ion deion. Phép đo huỳnh quang được thực hiện bằng cách bổ
sung liên tiếp CF C (CF) = (1,66–9,89) × 10–5 mol / L vào một lượng 200
cố định CFA (1,39 × 10–5 mol / L) và CGA (1,60 × 10 –5 mol / L)
0
dung dịch. Thể tích cuối cùng của dung dịch hỗn hợp là 2,0 mL. Các
400 450 500 550 600
thu được quang phổ của dãy dung dịch này chứa lượng CF khác nhau Bước sóng / nm
và lượng CFA và CGA xác định. Các

bước sóng kích thích cho CFA và CGA là λex 300 và 315 nm, và sự Hình 3. Phổ phát xạ của CGA (λex = 315 nm) khi có mặt của caffeine ở 298 K.

phát xạ tương ứng của chúng được ghi lại trên một phạm vi lần lượt
là λem 350–580 và 365–600 nm. Độ rộng khe kích thích và phát xạ, và
tốc độ quét được đặt ở 10 nm và 240 nm/phút. Từ phân tích quang phổ
phát xạ, hằng số tốc độ dập tắt (kq), hằng số Stern–Volmer (KSV)
và các đặc tính nhiệt động của các tương tác đã được xác định.
Tương tự, phổ hấp thụ UV/vis được đo bằng cách thêm liên tiếp nồng
độ CF vào một lượng dung dịch CFA và CGA cố định
trong mỗi ống. Đối với phép đo FTIR, các mẫu được chuẩn bị ở dạng
bột bằng cách làm bay hơi nước bằng máy khuấy từ nóng. Phổ của các
mẫu bột được ghi lại trong khoảng 600–4000 cm – 1 ở nhiệt độ phòng
(296 K).
Nồng độ caffeine tăng từ trên xuống dưới (1,66, 2,05, 3,27, 4,07, 6,69, 9,89 ×
10–5 M), trong khi nồng độ CGA được cố định ở 1,60 × 10–5 M.
nồng độ. Dữ liệu chỉ ra rằng CF dập tắt cường độ huỳnh quang nội
tại của hai phân tử. Các hiệu ứng dập tắt mạnh mẽ cho thấy rõ ràng
sự tồn tại của liên kết giữa các nốt ruồi. Có hai cơ chế dập tắt
huỳnh quang: dập tắt động và tĩnh. Hai cơ chế dập tắt có thể được
xác định bởi các xu hướng khác nhau trong sự dao động thời gian
tồn tại của sate bị kích thích khi nhiệt độ tăng lên (40). Chất
làm nguội giảm dần khi nhiệt độ tăng đối với quá trình dập tắt tĩnh.
Ngược lại, nó được tăng lên khi nhiệt độ tăng đối với quá trình
dập tắt động vì nhiệt độ cao hơn dẫn đến hệ số khuếch tán cao hơn.

kết quả và thảo luận Tương tự, nhiệt độ cao hơn cũng có khả năng làm giảm độ ổn định
của phức chất và do đó làm giảm giá trị của hằng số dập tắt tĩnh.

Sự dập tắt huỳnh quang của axit caffeic và axit chlorogenic

Để giải thích cơ chế dập tắt của các phân tử phân tử, hằng số
Dập tắt huỳnh quang liên quan đến việc giảm cường độ huỳnh quang
dập tắt huỳnh quang được phân tích theo phương trình Stern–Volmer
của một chất nhất định. Các quá trình khác nhau dẫn đến quá trình
(41,42):
dập tắt, ví dụ, phản ứng ở trạng thái kích thích, truyền năng
lượng, hình thành phức chất ở trạng thái cơ bản và dập tắt do va chạm (40).
F0 ¼ 1 þ kqτ0½ ¼ Q 1 þ KSV ½ Q (1)
Hình 2 và 3 cho thấy phổ huỳnh quang của CFA và CGA khi có mặt CF. F
Phổ huỳnh quang cực đại của CFA và CGA lần lượt được quan sát ở
bước sóng 412 và 442 nm. Cường độ huỳnh quang của cả hai phân tử trong đó F0 và F là cường độ huỳnh quang ở trạng thái ổn định khi
giảm khi tăng CF không có và có mặt của chất dập tắt; [Q] là chữ cái đầu

wileyonlinelibrary.com/journal/luminescence Bản quyền © 2015 John Wiley & Sons, Ltd. Hoa phát quang 2016; 31: 565–572
Machine Translated by Google
Dập tắt huỳnh quang, axit hydroxycinnamic và caffein

nồng độ của CF; KSV là hằng số dập tắt động; kq là Bảng 1. Hằng số Stern–Volmer, hằng số tốc độ dập tắt đối với
hằng số tốc độ dập tắt; KSV = kqτ0; và τ0 là huỳnh quang sự tương tác của CFA và CGA với CF ở nhiệt độ
thời gian tồn tại của CFA và CGA khi không có CF. Giá trị của KSV là 298, 303 và 310 K
được xác định bằng hồi quy tuyến tính của phương trình Stern – Volmer.
Hình 4 và 5 là biểu đồ Stern – Volmer để dập tắt Phân tử T (K) KSV (L/mol) kq (L/mol/s) R

CFA và CGA bằng CF ở các nhiệt độ khác nhau. Các đồ thị là tuyến tính
Axit caffeic 298 1,04 × 104 303 1,04 × 1013 0,99
và độ dốc giảm khi nhiệt độ tăng, cho thấy
9,62 × 103 310 8,61 9,62 × 1012 0,98
rằng quá trình dập tắt là quá trình dập tắt tĩnh chứ không phải
× 103 Axit 8,61 × 1012 0,98
năng động. Tuổi thọ huỳnh quang, τ0, của axit hydroxycinnamic
chlorogenic 298 1,84 × 104 303 1,60 × 104 1,84 × 1013 0,99
được giả định là 1 ns, như đã báo cáo trước đây (43), và các giá trị
310 1,18 × 104 1,60 × 1013 0,99
KSV thu được từ phương trình Stern – Volmer được vẽ trong
1,18 × 1013 0,99
quả sung. 4 và 5. Các giá trị của hằng số tốc độ tôi, kq, được xác định
ở ba nhiệt độ khác nhau được cho trong Bảng 1. Các giá trị kq thu được

nằm trong khoảng 1012–1013 và 1013 L /mol/s đối với

Ràng buộc các vị trí liên tục và ràng buộc
CFA và CGA tương ứng. Các giá trị vượt xa sự khuếch tán
hằng số tốc độ được kiểm soát trong dung dịch nước, có giá trị trung bình Khi các phân tử được liên kết độc lập với một tập hợp tương đương
2,0 × 1010 L / mol / s (44,45), xác nhận rằng quá trình dập tắt không vị trí trên các đại phân tử, trạng thái cân bằng giữa tự do và
không liên quan đến quá trình khuếch tán động, mà xảy ra do các phân tử liên kết được cho bởi eqn (2) (46):
sự hình thành phức chất của CF-CGA và CF-CFA. Hơn thế nữa,
F0 F
trong tất cả các nhiệt độ, các ô thể hiện mối quan hệ tuyến tính tốt, trong đó (2)
Nhật ký ¼ LogK a þ nLog CF ½
F
cũng chỉ ra sự thống trị của các cơ chế dập tắt tĩnh tại
nồng độ được nghiên cứu.
trong đó Ka là hằng số liên kết và n là số vị trí liên kết trong mỗi
298K phân tử. Giá trị của Ka và n được xác định
303K từ độ dốc và giao điểm của sự phù hợp tuyến tính của eqn (2) với
310 nghìn
số liệu thực nghiệm. Các giá trị của hằng số liên kết của CF với
2.1
CFA và CGA ở 298, 303 và 310 K được liệt kê trong Bảng 2. Mạnh
hằng số liên kết đã được quan sát giữa CF và

axit hydroxycinnamic. Hơn nữa, các giá trị cũng giảm

với nhiệt độ tăng dần, cho thấy sự hình thành của
1,8 hợp chất không ổn định phân hủy một phần ở mức tương đối cao hơn
F0/
F
nhiệt độ. Số trang web ràng buộc được tính n là ~ 1,
chỉ ra sự tồn tại của một trang web duy nhất để ràng buộc CF

sang CFA và CGA. Một kết quả tương tự đã được báo cáo trước đây (46),

1,5 cho sự liên kết của các axit hydroxycinnamic và các phân tử thuốc.
Sự liên kết của CF với các phân tử này được mong đợi là do

thành các nhóm carboxylate và hydroxyl và thông qua hydro

sự liên kết. Người ta cũng nhận thấy rằng hằng số liên kết của
2.0x10-5 4,0x10-5 6,0x10-5 8.0x10-5 1,0x10-4 CGA cao hơn CFA ở mọi nhiệt độ vì hydroxyl

[CF] / M các nhóm có sẵn trên CGA hơn CFA. Một kết quả tương tự là

đã quan sát và báo cáo ở những nơi khác, cụ thể là CGA đó (với hai
Hình 4. Biểu đồ Stern – Volmer để dập tắt CFA bằng CF tại 298, 303 và 310 K. và ba hydroxyl trên vòng thơm và vòng cyclohexane) có giá trị cao hơn
ái lực liên kết hơn các axit hydroxycinnamic ít thay thế khác
đối với các phân tử protein (46).
298 K
2,8 303 K
310K
Các thông số nhiệt động lực học và bản chất của các lực liên kết

2,4
Sự hình thành liên kết có thể được mô tả bởi một số lý sinh học
các tham số như hằng số liên kết và các tham số khác

2.0
F0/
F
Bảng 2. Hằng số liên kết (Ka), số vị trí liên kết (n)
và hệ số tương quan (R) của CF với CFA và CGA tại

1,6
nhiệt độ 298, 303 và 310 K

Phân tử T (K) Ka (L / mol) N R

1.2
Axit caffeic 298 2,43 × 103 0,82 0,99
303 7,85 × 102 0,71 0,99

0,0 2.0x10-5 4.0x10-5 6.0x10-5 8.0x10-5 1.0x10-4 310 2,43 × 102 0,61 0,98

[CF]/M axit clorogen 298 4,75 × 104 1.11 0,99

303 1,67 × 104 1,00 0,99

Hình 5. Biểu đồ của Stern – Volmer cho quá trình dập tắt CGA bằng caffeine ở 298, 303 và
310 K.
310 2,46 × 103 0,83 567
0,97

Hoa phát quang 2016; 31: 565–572 Bản quyền © 2015 John Wiley & Sons, Ltd. wileyonlinelibrary.com/journal/luminescence
Machine Translated by Google

A. Belay et al.

tính chất nhiệt động lực học. Các lực tác dụng giữa các
phân tử và đại phân tử chủ yếu là liên kết hydro, lực cản elec, lực
van der Waal và tương tác kỵ nước.
Để có được cái nhìn sâu sắc hơn về các tương tác yếu liên quan đến
sự phức hợp của CF với CGA và CFA, chúng tôi đã nỗ lực để
xác định các thông số nhiệt động bằng Van't Hoff
phương trình. Nếu sự thay đổi entanpi (ΔH) không thay đổi đáng kể
trong phạm vi nhiệt độ của nghiên cứu, sau đó là nhiệt động lực học
các tham số đã thu được và được liệt kê trong Bảng 3. Dấu hiệu và
cường độ của các tham số nhiệt động lực học liên quan đến các loại
tương tác riêng lẻ khác nhau đã được mô tả trước đây
(47). Theo đó, các giá trị âm của ΔH và ΔS chỉ ra rằng
liên kết hydro và lực van der Waal đóng một vai trò quan trọng trong
phản ứng giữa CF và CFA và CGA, trong khi phản ứng tiêu cực
ký hiệu ΔG cho biết tính tự phát của liên kết đối với CF với
CFA và CGA. Kết quả thu được cũng tương tự như kết quả của một

các tham số có thể được xác định bằng eqn (3): báo cáo trước (48) nghiên cứu sự tương tác của chloramphenicol
với albumin huyết thanh bò, liên quan đến liên kết hydro và
ΔH ΔS Lực Van der Waals.
lnK một
¼
thứ tự (3)
RT R

Sự thay đổi năng lượng tự do (ΔG) có thể được tính toán ở mỗi thời điểm
Phổ huỳnh quang ba chiều của CF–CFA và
ature sử dụng eqn (4):
CF-CGA

ΔG ¼ RTlnK a ¼ ΔH TΔS (4) Để hiểu tác động có thể có của ràng buộc CF đối với CFA
và CGA, phổ huỳnh quang 3D của hai hợp chất là
được đo khi không có và có CF. Hình 7 và 8 là
Trong đó, Ka là hằng số liên kết tại nhiệt độ tương ứng, R là hằng
phổ huỳnh quang 3D với sự có mặt của CF. Trên bổ sung của
số khí và T là nhiệt độ thực nghiệm.
CF, thay đổi vị trí đỉnh của kích thích và phát xạ
Từ mối quan hệ tuyến tính giữa ln (Ka) và nghịch đảo của
bước sóng, sự thay đổi của Stokes và những thay đổi trong cường độ
nhiệt độ tuyệt đối (Hình 6) các giá trị của nhiệt động lực học
huỳnh quang của CFA và CGA đã được nhận thấy. Các giá trị tóm tắt là
trình bày trong Bảng 4 Ngoài ra, khi không có CF, phổ huỳnh quang 3D

của CFA và CGA chứa một đỉnh duy nhất (λex/λem), nhưng
11.0 CFA
CGA quang phổ tương ứng cho CF–CFA và CF–CGA có hai
10,5
đỉnh ở các vị trí khác nhau. Tất cả những hiện tượng này bộc lộ những thay đổi
10,0
trong vi môi trường florophore của axit hydroxycinnamic
9.5

9,0

8.5

8,0
Bảng 3. Các đặc tính nhiệt động được xác định bằng quá trình dập
tắt huỳnh quang của CF bằng CFA và CGA
(Ka)
ln

7,5

7.0
Phân tử T (K) ΔH (kJ/mol) ΔS ( J/mol/K) ΔG (kJ/mol)
6,5
Axit cafeic: 298 –145,08 –422,64 –19,26
6.0
303 –16,76
5,5
310 –14,13
3.2x10-3 3.2x10-3 3.3x10-3 3.3x10-3 3.3x10-3 3.3x10-3 3.3x10-3 3.4x10-3 Axit chlorogenic: 298 –183,22 –524,89 –26,61
1 / T / K-1
303 –24,44
310 –20,70
Hình 6. Biểu đồ của Van't Hoff về sự liên kết của caffein với axit caffeic và axit chlorogenic.

Hình 7. Giản đồ phổ huỳnh quang ba chiều của CFA (a) và CF–CFA (b), C(CF) = 1,39 × 10–5 M và C(CFA) 4,07 × 10–5 M ở pH = 6,68 và T = 298 K .

wileyonlinelibrary.com/journal/luminescence Bản quyền © 2015 John Wiley & Sons, Ltd. Phát quang 2016; 31: 565–572
Machine Translated by Google

Dập tắt huỳnh quang, axit hydroxycinnamic và caffein

Hình 8. Giản đồ quang phổ huỳnh quang ba chiều của CGA (a) và CF – CGA (b), C (CGA) = 1,6 × 10–5 M và C (CF) = 4,07 × 10–5 M ở pH = 6,68 và T = 298 K.

Bảng 4. Các đặc tính quang phổ huỳnh quang ba chiều (bước sóng
kích thích / phát xạ và sự dịch chuyển của Stoke) đối với CFA,
3.0
Hệ thống CF–CFA và CGA, CF–CGA
một

2,5
Đỉnh cao λex / λem Δλ (nm) λex / λem Δλ (nm)

CFA CF – CFA 2.0

Tôi
- 320/360 60
1,5
II 370/460 370/460 90
au /
thụ
hấp
Sự

CGA CF-CGA
1.0
Tôi
220/330 110 220/445 225
II
- 225/350 130
0,5

một
h
0,0
250 300 350 400
gây ra bởi CF. Điều này khẳng định thêm về sự tồn tại của liên kết
Bước sóng / nm
giữa các axit CF và hydroxycinnamic.

Hình 9. Phổ hấp thụ UV/Vis của axit caffeic khi có mặt caffein (a) C
(CFA) = 4,07 × 10–5 mol / L chỉ; (b – h) C (CF) 7,96, 9,40, 11,0, 12,9, 18,80, 23,0, 29,5
Quang phổ hấp thụ UV / vis
(×10–5 mol/L).

Phổ hấp thụ UV / vis của CFA và CGA và tương tác của chúng với CF
được đo để xác nhận nism cơ tương tác. Trong quá trình dập tắt 1,5
một
động, quang phổ của phân tử sẽ không
j

thay đổi, tuy nhiên, trong quá trình dập tắt tĩnh do sự hình thành của tion

phản ứng, những thay đổi phổ đã được quan sát thấy trong các hợp chất. Hình 9

và 10 cho thấy sự hấp thụ UV / vis của CFA và CGA trong 1.0

có và không có CF. Trong trường hợp không có CF, UV / vis

phổ hấp thụ của CFA và CGA được đặc trưng bởi bốn
các dải hấp thụ tương ứng với HOMO LUMO, chủ yếu là do
sang chuyển tiếp quỹ đạo π π* (49,50). Khi bổ sung các giải pháp CF, 0,5
thụ/
hấp
au

j
một sự thay đổi màu xanh và giảm cường độ ở cực đại là
quan sát thấy trong CFA và CGA. Ngoài ra, điểm đẳng tích là
quan sát ở các bước sóng khác nhau. Các hiệu ứng xác nhận một

tồn tại sự ràng buộc của CF với CFA và CGA do trạng thái cơ bản 0,0

sự hình thành phức tạp. Đây cũng là bằng chứng cho thấy huỳnh quang
250 300 350 400 450
dập tắt hydroxycinnamic gây ra bởi CF chủ yếu là Bước sóng / nm
do dập tắt tĩnh gây ra.
Hình 10. Phổ hấp thụ UV / Vis của axit chlorogenic khi có mặt của caffeine
(a) C (CGA) = 2,36 × 10–5 mol / L chỉ; (b – j) C (CF) 2,05, 2,73, 3,27, 4,07, 5,06, 6,67, 7,98,

Quang phổ FTIR 9,89, 12,98 (× 10–5 mol / L).

Quang phổ FTIR là một kỹ thuật khác để hiểu các kết quả. Hình 11
và 12 là phổ dao động của CF, CFA,
CGA và CF – CFA và CF – CGA tương ứng. Như thể hiện trong
quả sung. 11 và 12, CF có các dải dao động khác nhau do C – H
Phát quang 2016; 31: 565–572
trải dài đối xứng và không đối xứng tọa lạc tại 2972 và
2897 cm – 1 (51). Các dải hấp thụ khác là do dao động kéo giãn đối
xứng và bất đối xứng của C = O nằm trong vùng của
569
Bản quyền © 2015 John Wiley & Sons, Ltd. wileyonlinelibrary.com/journal/luminescence
Machine Translated by Google
A. Belay et al.

0,02

0,00

-0,02

au /
thụ
hấp
Sự -0.04

-0.06

-0,08

-0,10

0,03
b
0,02

thụ/
hấp
au

0,01

0,00

0,018
c
0,012

0,006
au /
thụ
hấp
Sự

0,000

-0,006

1000 1500 2000 2500 3000 3500

Wavenumber / cm-1

Hình 11. Phổ FTIR đo từ mẫu bột: (a) CF – CFA, (b) CF và (c) CFA.

0,04

một
0,03

0,02

0,01
au /
thụ
hấp
Sự

0,00

-0.01

0,03
b
0,02

0,01
au /
thụ
hấp
Sự

0,00

0,010 c

0,008

0,006
au /
thụ
hấp
Sự

0,004

0,002

1000 1500 2000 2500 3000 3500

Wavenumber / cm-1

Hình 12. Phổ FTIR đo từ mẫu bột: (a) CF – CGA, (b) CF và (c) CGA.

wileyonlinelibrary.com/journal/luminescence Bản quyền © 2015 John Wiley & Sons, Ltd. Phát quang 2016; 31: 565–572
Machine Translated by Google
Dập tắt huỳnh quang, axit hydroxycinnamic và caffein
1550–1700 cm – 1 . Các dải này dễ dàng được nhận ra do cường độ
cao và vùng giao thoa tương đối tự do của chúng (52).
Các đỉnh nhỏ khác do N – CH3 kéo dài của vibra tion chuỗi bên
nằm ở 1029 và 968 cm – 1 . Ngược lại, CGA
các hầu
phânhết
tử được
của CFA
đặc và
trưng
bởi các nhóm chức hydroxyl và cacbonyl. Hai đỉnh song song tương
ứng với dao động của nhóm O – H gắn với vòng benzen nằm ở 1200–
1270 cm – 1 và một dải hấp thụ mạnh khác do C = O kéo dài được
quan sát ở 1600–1700 cm-1 (51,52 ). Ngược lại, trong các phổ
tương ứng cho CF – CFA và CF – CGA, người ta đã quan sát thấy
sự xuất hiện của dao động O – H gắn với vòng benzen và sự hình
thành một dải rộng mới ở 3397 cm – 1 .
Theo một báo cáo tài liệu, đoạn OH liên kết với H thường xuất
hiện dưới dạng phổ rộng trong vùng 3200–3570 cm–1 do sự hình
thành liên kết hydro (51). Tương tự như vậy, trong nghiên cứu
này, việc quan sát thấy một đỉnh như vậy là do sự liên kết của
axit hydroxycinnamic và phân tử CF thông qua liên kết hydro.
Đây cũng là sự xác nhận về sự tương tác giữa CF và axit hydroxycinnamic.aldosterone
kết luận
Sự liên kết của CF với axit hydroxycinnamic đã được nghiên cứu
bằng cách sử dụng kỹ thuật dập tắt huỳnh quang, UV / vis và
quang phổ FTIR. Từ kết quả thí nghiệm, CF cho thấy liên kết với
CGA mạnh hơn CFA, và liên kết hydro và lực van der Waals đóng
vai trò chính trong phản ứng liên kết. Người ta cũng nhận thấy
rằng hằng số liên kết của CGA cao hơn của CFA ở mọi nhiệt độ vì
nhiều nhóm hydroxyl có sẵn trên CGA hơn CFA. Kết quả nghiên cứu
giúp chúng tôi hiểu cơ chế liên kết của các hợp chất hoạt tính
sinh học có sẵn tự nhiên trong các loại thực vật khác nhau.
Lời cảm ơn Các tác
giả chân thành cảm ơn BK21, Pusan National Univer sity đã hỗ
trợ tài chính để thực hiện nghiên cứu này. Chúng tôi cũng cảm
ơn Giáo sư Jaebeom Lee Khoa Nano Fusion, và Cogno-Mechatronics
Engineering, Đại học Quốc gia Pusan đã cho phép chúng tôi sử
dụng các cơ sở thí nghiệm của ông.
Người giới thiệu
1. Trugo LC, Macrae RA. Nghiên cứu ảnh hưởng của quá trình rang đến thành phần axit
chlorogenic của cà phê sử dụng HPLC. Food Chem 1984; 15: 219–27.
2. Clifford MN. Axit chlorogen – bản chất phức tạp của chúng và xác định thường xuyên
trong hạt cà phê. Food Chem 1979;4:63–71.
3. Jiang RW, Lau KM, Hon PM, Mak TCW, Woo KS, Fung KP. Các hoạt động hóa học và sinh
học của các dẫn xuất axit caffeic từ Salvia miltiorrhiza.
Curr Med Chem 2005; 12: 237–46.
4. Iglesias J, Pazos M, Andersen ML, Skibsted LH, Medina I. Axit caffeic như chất
chống oxy hóa trong cơ cá: cơ chế hiệp đồng với axit ascorbic nội sinh và alpha-
tocopherol. J Agric Food Chem 2009;57:675–81.
5. Sakakibara H, Honda Y, Nakagawa S, Ashida H, Kanazawa K. Simulta xác định công
khai tất cả các polyphenol trong rau, trái cây và trà.
J Agric Food Chem 2003; 51: 571–81.
6. Perez-Ilzarbe X, Hernandez T, Estrella I. Các hợp chất phenolic trong táo: sự khác
biệt về giống. Z Lebensm Unters Forsch 1991; 192: 551–4.
7. Sato Y, Itagaki S, Kurokawa T, Ogura J, Kobayashi M, Hirano T, et al. Tính chất
chống oxy hóa in vitro và in vivo của axit chlorogenic và axit caffeic. Int J
Pharm 2011; 403: 136–8.
8. Svilaas A, Sakhi AK, Andersen LF, Svilaas T, Ström EC, Jacobs DR Jr, et al.
Lượng chất chống oxy hóa trong cà phê, rượu vang và rau quả có tương quan với các
chất carotenoid trong huyết tương ở người. J Nutr 2004; 134: 562–7.
9. Yukawa GS. Ảnh hưởng của việc tiêu thụ cà phê đến tính nhạy cảm với chất oxy hóa
của protein lipo mật độ thấp và mức độ lipid huyết thanh ở người. J Biochem 2004;
1: 70–4.
Phát quang 2016; 31: 565–572 Bản quyền © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.
10. Almeida AA, Farah A, Silva DAM, Nunam EA, Glória MBA. Hoạt động kháng khuẩn của
chất chiết xuất từ cà phê và các hợp chất hóa học được chọn trong cà phê chống lại
vi khuẩn đường ruột. J Agric Food Chem 2006;54:8738–43.
11. Jin UH, Lee JY, Kang SK, Kim JK, Park WH, Kim JG, et al. Một hợp chất phe nolic,
axit 5-caffeoylquinic (axit chlorogen), là một loại chất ức chế metallicoproteinase-9
mới và ma trận mạnh: Phân lập và nhận dạng từ chiết xuất metanol của Euonymus
alatus. Khoa học đời sống 2005;77:2760–9.
12. Gomes CA, Cruz TG, Andrade JL, Milhazes N, Borges F, Marques MP.
Hoạt động chống ung thư của axit phenolic có nguồn gốc tự nhiên hoặc tổng hợp: một
nghiên cứu về cấu trúc - hoạt động. J Med Chem 2003; 46: 5395–401.
13. Wang GF, Shi LP, Ren YD, Liu QF, Liu HF, Zhang RJ, et al. Hoạt động chống vi rút
viêm gan B của axit chlorogenic, axit quinic và axit caffeic in vivo và in vitro.
Chống vi-rút Res 2009; 83: 186–90.
14. Wan CW, Wong CN-Y, Pin WK, Wong MH-Y, Kwok CY, Chan RY-K, et al.
Axit chlorogenic thể hiện đặc tính làm giảm cholesterol và gan nhiễm mỡ bằng cách
điều chỉnh tăng sự biểu hiện gen của PPAR-α ở chuột tăng cholesterol máu gây ra
với chế độ ăn nhiều cholesterol.
Phytother Res 2013; 27: 545–51.
15. Bhullar KS, Lassalle-Claux G, Touaibia M, Rupasinghe HP. Tác dụng hạ huyết áp của
axit caffeic và các chất tương tự của nó thông qua ức chế hệ thống renin–angiotensin–
kép. Eur J Pharmacol 2014;730:125–32.
16. Kozuma K, Tsuchiya S, Kohori J, Hase T, Tokimitsu I. Tác dụng hạ huyết áp của chiết
xuất hạt cà phê xanh đối với các đối tượng tăng huyết áp nhẹ.
Hypertens Res 2005, 28: 711–8.
17. Van Dam RM. Tiêu thụ cà phê và nguy cơ mắc bệnh tiểu đường loại 2, các bệnh tim
mạch và ung thư. Appl Physiol Nutr Metab 2008; 33: 1269–83.
18. Santos MD, Almeida MC, Lopes NP, Souza GEP. Đánh giá hoạt động chống viêm, giảm đau
và hạ sốt của axit chlorogen polyphenol tự nhiên. Biol Pharm Bull 2006;29:2236–40.
19. GA tràn. Đồ uống và thực phẩm methylxanthine: hóa học, sự tắc nghẽn và ảnh hưởng
đến sức khỏe. Alan R. Liss Inc: New York, 1984.
20. Liguori A, Hughes JR, Grass JA. Sự hấp thụ và tác dụng chủ quan của caffeine từ cà
phê, cola và viên nang. Pharmacol Biochem Behav 1997;58:721–6.
21. Ashihara H, Crozier A. Sinh tổng hợp và chuyển hóa caffeine và các alkaloid purine
có liên quan trong thực vật. Adv Bot Res 1999; 30: 118–205.
22. Ashihara H, Suzuki T. Phân phối và sinh tổng hợp caffein trong thực vật.
Front Biosci 2004; 9: 1864–76.
23. Barone JJ, Roberts H. Mức tiêu thụ caffein của con người. Trong: biên tập viên Dews
PB. Caffeine: quan điểm từ nghiên cứu gần đây. Mùa xuân: Béc-lin, 1984.
24. Hiệp sĩ CA, Hiệp sĩ I, Mitchell DC, Zepp JE. Đồ uống có lượng caffein ở U.
S. người tiêu dùng và tiểu quần chúng quan tâm: ước tính từ cuộc khảo sát Chia sẻ
của Bảng điều chỉnh Intake. Thực phẩm Chem Toxicol 2004; 42: 1923–30.
25. Nam tước JJ, Roberts Nhân sự. Tiêu thụ caffein. Hóa chất độc hại thực phẩm
1996;34:119–29.
26. Carrillo JA, Benitez J. Tương tác dược động học có ý nghĩa lâm sàng giữa caffeine
trong chế độ ăn và thuốc. Clin Pharmacokinet 2000; 39 (2): 127–53.
27. Dlugosz L, Bracken MB. Tác dụng tái tạo của caffeine: một đánh giá và phân tích lý
thuyết. Epidemiol Rev 1992; 14: 83–100.
28. Mitchell DC, Hiệp sĩ CA, Hockenberry J, Teplansky R, Hartman TJ.
Đồ uống có lượng caffeine hấp thụ ở US Food Chem. Độc chất học 2014; 63: 136–42.
29. Ayranci E, Duman O. Liên kết của florua, bromide và iodide với albumin huyết thanh
bò được nghiên cứu với các điện cực chọn lọc ion. Food Chem 2004;84:539–43.
30. Ayranici E, Duman O. Liên kết của ion chì với albumin huyết thanh bò được nghiên
cứu bằng điện cực chọn lọc ion. Protein Peptide Lett 2004; 11: 331–7.
31. Tunc S, Duman O, Bozoglan BK. Các nghiên cứu về tương tác của thuốc chloro quine
diphosphate và phenelzine sulfate với albumin huyết thanh người và protein huyết
sắc tố người bằng kỹ thuật quang phổ.
J Lumin 2013; 140: 87–94.
32. Tunc S, Duman O, Soylu I, Bozoglan BK. Nghiên cứu sự gắn kết của thuốc diệt cỏ
dichlorprop và diquat dibromide với albumin huyết thanh người bằng phương pháp
quang phổ. J Hazard Mater 2014;273:36–43.
33. Bozoglan BK, Tunc S, Duman O. Khảo sát sự gắn kết của neohesperidin dihydrochalcone
với albumin huyết thanh người bằng phương pháp quang phổ. J Lumin 2014; 155: 198–
204.
34. Duman O, Tunc S, Bozoglan BK. Đặc điểm của sự gắn kết của metoprolol tartrat và
thuốc guaifenesin với albumin huyết thanh người và protein huyết sắc tố của người
bằng phương pháp quang phổ huỳnh quang và quang phổ lưỡng sắc hình tròn. J Fluoresc
2013; 23: 659–69.
571
wileyonlinelibrary.com/journal/luminescence
Machine Translated by Google
35. Sondheimer E, Covitz F, Marquisee MJ. Sự liên kết của các hợp chất vòng tự
nhiên, axit chlorogenic, phức hợp caffeine. Arch Biophys Biochem 1961, 93: 63–
71.
36. Horman I, Viani R. Bản chất và sự tạo phức hợp caffeine– chlorogenate của cà
phê. J Food Sci 1972; 37: 925–7.
37. Belay A. Dị liên kết của cafein với axit 5-caffeoylquinic và ethidium bromide.
J Biol Phys Chem 2013; 13: 30–5.
38. D'Amelio N, Fontanive L, Uggeri F, Suggi-Liverani F, Navarini L. Nghiên cứu lại
NMR của phức hợp caffeine-chlorogenate trong dung dịch nước và trong cà phê
pha. Sinh học Thực phẩm 2009;4:321–30.
39. D'Amelio N, Papamakods G, Dreyer J, Carloni P, Navarini L. NMR nghiên cứu về sự
liên kết dị của caffeine với các đồng phân axit di-O-caffeoylquinic trong dung
dịch nước. Food Biophys 2014. DOI: 10.1007 / s11483-014-9368.
40. Lakowicz JR. Nguyên lý của quang phổ huỳnh quang. Plenum Press: Mới
York, 1999.
41. Bowen EJ. Sự phát huỳnh quang của các dung dịch. Longmans: Luân Đôn, năm 1953.
42. Parker CA. Sự phát quang của các dung dịch. Elsevier: New York, 1968.
43. Morales F, Cartelat A, Alvarez-Fernández A, Moya I, Cerovic ZG. Nghiên cứu
quang phổ phân tích thời gian về huỳnh quang xanh lam của lá atisô (Cynara
cardunculus L. var. Scolymus): xác định axit chloro genic là một trong những
flo chính và những thay đổi qua trung gian tuổi. J Agric Food Chem 2005; 53:
9668–78.
44. Atkins P. Hóa lý. Ấn bản thứ 6. Freeman: New York, 1998.
wileyonlinelibrary.com/journal/luminescence Bản quyền © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.
A. Belay và cộng sự.
45. Châu KC, Giang SP. Các nghiên cứu về tốc độ của các phản ứng khuếch tán được
kiểm soát bởi các enzyme. Yếu tố không gian và yếu tố trường lực. Khoa học tội
lỗi 1974;27:664–80.
46. Kang JL, Liu Y, Xie MX, Li S, Jiang M, Wang YD. Tương tác của albumin huyết
thanh người với axit chlorogenic và axit ferulic. Biochim Biophys Acta 2004,
1674: 205–14.
47. Ross PD, Subramanian S. Nhiệt động lực học của các phản ứng liên kết protein:
các lực góp phần vào sự ổn định. Hóa sinh 1981;20:3096–102.
48. Zhang J, Chen L, Zeng B, Kang Q, Dai L. Nghiên cứu sự gắn kết của Chloroamphenicol
với albumin huyết thanh bò bằng phương pháp quang phổ huỳnh quang và UV-vis.
Spectrochim Acta A 2013; 105: 74–9.
49. Cornard JP, Lapougue C, Danglerre L, Allet-Bodelot C. Sự tạo phức của chì (II)
bằng axit chlorogenic: nghiên cứu thực nghiệm và lý thuyết. J Phys Chem A
2008; 112: 12475–84.
50. Cornard JP, Lapougue C. Phổ hấp thụ của axit caffeic, caffeate và phức 1: 1 của
chúng với Al (III): lý thuyết hàm mật độ và nghiên cứu lý thuyết hàm mật độ
phụ thuộc thời gian. J Phys Chem A 2006; 110: 7159–66.
51. Coates J. Giải thích quang phổ hồng ngoại, một cách tiếp cận thực tế. Wiley:
Bách khoa toàn thư về hóa học phân tích. Chichester, 2000.
52. Gunasekaran S, Sankari G, Ponnusamy S. Nghiên cứu quang phổ rung động trên
xanthine và các dẫn xuất của nó-theophylline, caffeine và theo bromine.
Spectrochim Acta A 2005;61:117–27.
Phát quang 2016; 31: 565–572