Manual de Laboratorio de La OMS para El Examen y Procesamiento de

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Manual de laboratorio de la OMS para

el examen y procesamiento de
semen humano
Sexta Edición
Manual de laboratorio de la OMS para
el examen y procesamiento de
semen humano
Sexta Edición
Manual de laboratorio de la OMS para el examen y procesamiento de semen humano, sexta edición
ISBN 978-92-4-003078-7 (versión electrónica)

ISBN 978-92-4-003079-4 (versión impresa)
© Organización Mundial de la Salud 2021
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Cita sugerida.Manual de laboratorio de la OMS para el examen y procesamiento de semen humano, sexta edición. Ginebra: Organización Mundial de la
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Contenido
De la Organización Mundial de la Salud .............................................. .................................................... ...........

vii Agradecimientos ..................................... .................................................... .......................................... viii
Siglas y abreviaturas utilizadas en este manual................................................. ........................................ xiii
Capítulo 1 Introducción .............................................. .................................................... ...............................1
1.1 Alcance del manual ............................................... .................................................... .................................................... ...............1

1.2 Introducción.................................................. .................................................... .................................................... ..........................1
1.3 La sexta edición ............................................... .................................................... .................................................... .....................2
1.4 Metodología para la elaboración de la sexta edición delManual de laboratorio de la OMS para
el examen y procesamiento del semen humano.................................................... .................................................... ...........4
Capítulo 2: Examen básico .............................................. .................................................... ........................9
2.1 Introducción.................................................. .................................................... .................................................... ..........................9

2.2 Esquema temporal del examen básico del semen ........................................... .................................................... ..................12
2.3 Procedimientos previos al examen ............................................... .................................................... ..........................................13
2.4 Procedimientos de examen y post examen .................................................. .................................................... ..................15
2.5 Información adicional y comentarios ............................................... .................................................... .............................64
Capítulo 3: Examen ampliado ............................................... .................................................... ..........83
3.1 Índices de defectos espermáticos múltiples ........................................... .................................................... .......................................83

3.2 Fragmentación del ADN espermático ............................................... .................................................... .................................................... .86
3.3 Pruebas genéticas y genómicas ............................................... .................................................... .................................................... 105
3.4 Pruebas relacionadas con la inmunología y métodos inmunológicos ........................................... .......................................................108
3.5 Evaluación de interleucinas – marcador de inflamación del tracto genital masculino .................................. ......................... 116
3.6 Evaluación de células germinales inmaduras en el eyaculado .................................. .................................................... ........ 118
3.7 Pruebas para el recubrimiento de anticuerpos de los espermatozoides .................................. .................................................... ..................... 119
3.8 Ensayos bioquímicos para la función de las glándulas sexuales accesorias .................................. .................................................... ......125
3.9 Evaluación de la secuencia de la eyaculación........................................... .................................................... .............................135
Capítulo 4: Exámenes avanzados.................................................... .................................................... ............139
4.1 Estrés oxidativo seminal y pruebas de especies reactivas de oxígeno .................................. ..........................................140
4.2 Evaluación de la reacción del acrosoma ............................................... .................................................... ...............................144
4.3 Evaluación de la cromatina espermática........................................... .................................................... ..........................................149
4.4 Flujo y transporte de iones transmembrana en los espermatozoides .................................. .................................................... ..............152
4.5 Análisis de esperma asistido por computadora (CASA) ....................................... .................................................... .............................155
4.6 Tecnologías emergentes ............................................... .................................................... .................................................... ....159
iii
Capítulo 5: Técnicas de preparación de esperma ........................................... .................................................... ... 161
5.1 Introducción.................................................. .................................................... .................................................... ....................... 161

5.2 Principios generales .................................................. .................................................... .................................................... .............163
5.3 Lavado sencillo .............................................. .................................................... .................................................... ..........164
5.4 Natación directa.................................................... .................................................... .................................................... ....................165
5.5 Gradientes de densidad discontinuos ............................................... .................................................... ..........................................166
5.6 Clasificación de células de activación magnética (MACS) .................................. .................................................... .............................166
5.7 Preparación de muestras de semen infectado por el VIH .................................. .................................................... ............................. 167
5.8 Preparación de espermatozoides testiculares y epididimarios ........................................... .................................................... ........ 167
5.9 Preparación de muestras de eyaculación retrógrada.................................... .................................................... ......................169
5.10 Preparación de muestras de eyaculación asistida.................................... .................................................... ..........................170
Capítulo 6: Criopreservación de espermatozoides ........................................... .......................................... 171
6.1 Introducción.................................................. .................................................... .................................................... .......................171

6.2 Razones para la crioconservación de espermatozoides........................................... .................................................... ..........172
6.3 Evaluación de riesgos de la crioconservación y el almacenamiento de semen humano .................................. ............................. 174
6.4 Protocolos de criopreservación de semen......................................... .................................................... ....................................177
6.5 Vitrificación................................................... .................................................... .................................................... ........................182
Capítulo 7: Garantía de calidad y control de calidad........................................... .............................................185
7.1 Control de calidad en el laboratorio de andrología ........................................... .................................................... ..........185

7.2 La naturaleza de los errores en el examen del eyaculado ....................................... .................................................... ...................188
7.3 El programa de garantía de la calidad........................................... .................................................... .................................................... ...........190
7.4 Gráficas de control de calidad para valores numéricos .................................. .................................................... ..........................................193
7.5 Gráficas de control de calidad para porcentajes .................................. .................................................... .................................................... 197
7.6 EvaluaciónXySbar
gráficos .................................................. .................................................... ............................................197
7.7 Procedimientos estadísticos para analizar y reportar la variabilidad entre técnicos........................................... ........199
7.8 Control de calidad externo y aseguramiento de la calidad ........................................... .................................................... ............... 204
7.9 Frecuencia y prioridad del control de calidad ........................................... .................................................... .......................... 205
7.10 Entrenamiento .................................................. .................................................... .................................................... ............................. 206
Capítulo 8: Apéndices ............................................... .................................................... ............................. 211
8.1 Interpretación de los resultados del examen de semen .................................. .................................................... ................... 211
8.2 Equipo y seguridad ............................................... .................................................... .................................................... .......214
8.3 Microscopía para el examen básico del eyaculado ........................................... .................................................... .....................221
8.4 Soluciones madre y medios ............................................... .................................................... .................................................... 226
8.5 Plantilla para un formulario de registro de análisis de semen .................................. .................................................... .......... 233
8.6 Material de CC ............................................... .................................................... .................................................... ....................... 235
8.7 Programas nacionales de control externo de calidad para análisis de semen .................................. ............................... 246
Capítulo 9: Referencias .............................................. .................................................... .............................247
IV
Lista de tablas
Tabla 2.1 Volúmenes suficientes de eyaculados – volúmenes finales de suspensiones espermáticas diluidas para un manejo adecuado..........20
Cuadro 2.2 Diferencias aceptables (basadas en un intervalo de confianza del 95 %) entre dos porcentajes para un promedio determinado,
determinadas a partir de recuentos repetidos de 200 espermatozoides (total 400 contados) ............... ...............26
Cuadro 2.3 Comparación de la diferencia entre los recuentos repetidos y la relación con la incertidumbre del resultado..........................33
Tabla 2.4 Cálculo de la concentración de espermatozoides a partir del conteo de espermatozoides .................................. .............................................35
Cuadro 2.5 Pasos de fijación y tinción de Papanicolaou ............................................... .................................................... ...............47

Cuadro 2.6 Clasificación de la morfología de los espermatozoides ............................................... .................................................... ........................51
Tabla 2.7 Placa Papanicolaou 1 ............................................... .................................................... ..........................................................56

Cuadro 2.8 Placa Papanicolaou 2 ............................................... .................................................... ..........................................................58
Tabla 2.9 Placa Papanicolaou 3 ............................................... .................................................... .............................................60
Tabla 2.10 Placa de Papanicolaou 4 ............................................... .................................................... .................................................... .61
Tabla 2.11 Placa de Papanicolaou 5 ............................................... .................................................... .................................................... .61
Tabla 2.12 Probabilidad de espermatozoides no detectados al escanear preparaciones húmedas.................................... ...............66
Tabla 2.13 Probabilidad de espermatozoides no detectados después de la centrifugación ........................................... ....................................66
Tabla 2.14 Placa corta ............................................... .................................................... .................................................... ..........73
Tabla 2.15 Placa DiffQuick ............................................... .................................................... .................................................... ...........76
Cuadro 2.16 Errores muestrales redondeados (%) y límites del intervalo de confianza del 95%, según
al número total de espermatozoides contados ............................................... .................................................... ...............78
Tabla 3.1 Cálculo de índices de múltiples defectos espermáticos ........................................... .................................................... .....85
Cuadro 3.2 Índices de defectos espermáticos para hombres de parejas fértiles e infértiles .................................. ...............................86
Tabla 3.3 Niveles básicos de disomía cromosómica espermática de hombres sanos y fértiles .................................. .......................107
Tabla 3.4 Cuánto semen usar para una prueba de inmunoesferas .................................. .................................................... ..122
Tabla 3.5 Normas recomendadas para las evaluaciones de zinc ........................................... .................................................... ..127
Tabla 3.6 Estándares recomendados para las evaluaciones de fructosa.................................... .............................................130
Tabla 3.7 Estándares recomendados para la evaluación de la actividad de la α-glucosidasa .................................. .....................133
Tabla 7.1 Terminología de garantía de calidad y control de calidad ............................................... ............................................187
Tabla 7.2 Cálculos de valores para unXcuadro
bar
................................................. .................................................... ..............194
Tabla 7.3 Los factores necesarios para el cálculo de los límites de advertencia y acción para elXgráfico..................................195
bar
Tabla 7.4 El cálculo de los límites de advertencia y acción para elScuadro ................................................. ..........................196
Cuadro 7.5 Reglas básicas de control para gráficos de control de calidad .................................. .................................................... .............................198
Tabla 7.6 Concentraciones espermáticas (x106/ml) estimado por tres miembros del personal en cinco muestras de control de calidad ........... 202
Cuadro 7.7 Diferencias de la media de la muestra calculada restando la media de la muestra de semen de cada observación ... 202
Tabla 7.8 Media, DE y el error medio/estándar de estas diferencias calculadas
por cada miembro del personal (n = número de muestras) ...................................... .................................................... .................... 202
Tabla 7.9 Media, DE y el error medio/estándar de estas diferencias calculadas
por cada miembro del personal (n = número de muestras) ...................................... .................................................... ... 202
Tabla 7.10 La prueba F del ANOVA bidireccional para técnicos y muestras de control de calidad .................................. ......................... 203
Tabla 7.11 Un resumen de las principales características de los procedimientos IQC.................................. .................................................... ...... 203
Tabla 7.12 Calendario de tiempo para QC ........................................... .................................................... .......................................... 206

Tabla 7.13 Resumen de las pruebas de control de calidad ............................... .................................................... .......................................... 206
Tabla 7.14 Fuentes de variación (error) en la evaluación de la concentración de espermatozoides .................................. ............................. 208
Tabla 7.15 Fuentes de variación (error) en la evaluación de la morfología de los espermatozoides.................................. .................................... 209
Tabla 7.16 Fuentes de variación (error) en la evaluación de la motilidad de los espermatozoides .................................. ..........................................210
Tabla 7.17 Fuentes de variación (error) en la evaluación de la vitalidad de los espermatozoides .................................. .............................................210
Tabla 8.1 Definición de población de referencia en Campbell et al.(5).................................................... ....................................212

Tabla 8.2 Origen de los datos para la distribución de resultados(5).................................................... ..........................................................212
Tabla 8.3 Distribución de los resultados del examen de semen de hombres en parejas que inician un embarazo dentro del
año posterior a la relación sexual sin protección que dio lugar a un nacimiento vivo.
De Campbell et al.(5); quinto percentil dado con variabilidad (intervalo de confianza del 95 %) ...........213
Tabla 8.4 Plantilla de ejemplo para un formulario de informe de análisis de semen ........................... ............................................. 233
v
Lista de Figuras
Figura 2.1 Agregación inespecífica de espermatozoides en el semen ........................................... .................................................... ..21
Figura 2.2 Diagrama esquemático de diferentes grados de aglutinación de espermatozoides ........................................... ..........................22
Figura 2.3 Ayudas para evaluar la motilidad de los espermatozoides .................................. .................................................... ..........................25
Figura 2.4 Frotis de eosina-nigrosina observado en óptica de campo claro ........................................... .................................................... .27
Figura 2.5 El hemocitómetro con regla de Neubauer mejorada ........................................... .............................................30
Figura 2.6 Qué espermatozoides contar en los cuadrados de la cuadrícula .................................. .................................................... ........31
Figura 2.7 Exploración de todo el cubreobjetos para detectar la presencia de espermatozoides móviles .................................. ......................37
Figura 2.8 Espermatozoides morfológicamente "ideales" ............................................... .................................................... .........................43
Figura 2.9 Preparación de un frotis de semen normal ............................................... .................................................... ..............................44
Fig. 2.10 Dibujos esquemáticos de algunas formas anormales de espermatozoides humanos ............................... ..........................50
Fig. 2.11 Orden estructurado para la evaluación de la morfología del esperma humano .................................. .............................53
Fig. 2.12 Placa de Papanicolaou 1 ........................................... .................................................... .................................................... .....55
Fig. 2.14 Placa de Papanicolaou 3........................................... .................................................... .................................................... .....59
Fig. 2.17 Representación esquemática de los cambios morfológicos típicos en los espermatozoides humanos
sometido a estrés hipoosmótico .................................................. .................................................... ..........................70
Fig. 2.18 Fotomicrografías bajo microscopio de contraste de fase de espermatozoides sometidos a estrés hipoosmótico .......71
Fig. 2.19 Placa corta ............................................... .................................................... .................................................... .....................72
Fig. 2.20 Placa DiffQuick.................................................... .................................................... .................................................... ...............75
Figura 3.1 Ensayo de portaobjetos TUNEL para fragmentación de ADN mediante fluorescencia .................................. ..........................88
Figura 3.2 Citometría de flujo para análisis de yoduro de propidio y fluorescencia verde ........................................... ...............90
Figura 3.3 Esperma con (ADN intacto, flecha) y sin halo (ADN fragmentado, puntas de flecha) .................................. .......98
Figura 3.4 Ensayo de cometa de esperma de un anormal con extensa fragmentación de ADN y
macho normal sin daño visible en el ADN teñido con bromuro de etidio ........................................... .............102
Figura 3.5 Cometa visto al microscopio, puntuación posterior con el software CASP (ADN de la cola = 88 %) ...............102
Figura 3.6 Células peroxidasa positivas en semen humano ........................................... .................................................... ............. 110
Figura 3.7 Leucocitos en el semen ............................................... .................................................... .......................................... 115
Figura 3.8 Dos ejemplos de dispositivos de recolección de eyaculación dividida .................................. .................................................... .136
Figura 3.9 Ejemplo de representación gráfica de los resultados de una eyaculación fraccionada normal en cuatro fracciones,
mostrando la distribución de volumen, espermatozoides, motilidad progresiva, zinc y fructosa .......................137

Figura 4.1 Ejemplos de acrosoma intacto teñido con FITC-PNA y acrosoma reaccionado,
Espermatozoides viables e inviables ............................................... .................................................... ..........................147
Figura 4.2 Ejemplo de espermatozoides AB positivos (a) y AB negativos (b) a nivel óptico
microscopía (×1000, inmersión en aceite) ........................................... .................................................... .............................150
Figura 4.3 Ejemplos de espermatozoides CMA3 positivos (a) y CMA3 negativos (b) (panel izquierdo) ............................... ..........152
Figura 4.4 Terminología estándar para las variables medidas por los sistemas CASA ........................................... ..........................157
Figura 4.5 Ejemplos de expresiones gráficas de diferentes aplicaciones CASA........................................... .........................160
Figura 7.1 UnXgráfico
bar
basado en datos de la Tabla 7.1 ........................................... .................................................... ...............195
Figura 7.2 UnSgráfico de concentración de espermatozoides ............................................... .................................................... .......................197
Figura 7.3 Un gráfico de Bland-Altman de estimaciones manuales y CASA del porcentaje de motilidad progresiva de los espermatozoides ........... 200
Figura 7.4 Una gráfica de Youden de estimaciones de la concentración de espermatozoides .................................. .............................201
Figura 8.1 Nomograma para determinar la fuerza centrífuga a partir del radio del rotor y la velocidad de rotación ..........................218
Figura 8.2 Sección de un microscopio .............................................. .................................................... ............................................. 222
Figura 8.3 Ayudas para evaluar la motilidad de los espermatozoides .................................. .................................................... ............................. 237
Figura 8.4 Ver a través de un ocular con retícula (rejilla roja) ........................................... .................................................... ............ 239
Figura 8.5 Vista de la imagen grabada en video del micrómetro de la platina en el monitor y la superposición dibujada .......... 239
vi
De la Organización
Mundial de la Salud
El acceso a servicios de salud asequibles, basados en evidencia y de alta calidad es clave para la
Cobertura Universal de Salud (UHC), incluso para la salud sexual y reproductiva. El acceso universal a
los servicios de laboratorio es esencial para garantizar que las poblaciones interesadas puedan evitar
las consecuencias socioeconómicas y de salud adversas de la mala salud sexual y reproductiva.
losManual de laboratorio de la OMS para el examen de semen y esperma humanos –

interacción del moco cervicalse publicó por primera vez en 1980, en respuesta a la
creciente necesidad de estandarizar los procedimientos para el examen del semen
humano. Posteriormente, el manual se revisó cuatro veces (en 1987, 1992, 1999 y 2010) y
se tradujo a varios idiomas.
El manual es un documento de referencia para los procedimientos y métodos para el análisis y

procesamiento de semen humano en laboratorio, cuyo objetivo es mantener y sostener la
calidad del análisis y la comparabilidad de los resultados de diferentes laboratorios. De hecho,
durante los últimos 40 años, el manual se ha convertido en un estándar reconocido y es
ampliamente utilizado por laboratorios clínicos y de investigación en todo el mundo.
Es un manual estándar no solo para quienes son nuevos en el análisis de semen, sino también para todos los
que procesan y examinan el semen para definir sus parámetros para uso clínico o estudios de investigación. El
manual proporciona información importante sobre el examen y la preparación del semen para la evaluación
clínica, ensayos especializados, criopreservación, control de calidad en el laboratorio de análisis del semen y
examen de laboratorio en la investigación de la infertilidad masculina. Estos también son fundamentales para
monitorear la respuesta al tratamiento y otras intervenciones que tienen como objetivo mejorar la salud
sexual y reproductiva masculina.
Esta sexta edición del manual será una fuente esencial de la información más reciente basada en
evidencia para los procedimientos de laboratorio necesarios para el cuidado de la fertilidad. Esta
edición tiene secciones nuevas y ampliadas sobre preparación de muestras de semen, determinación
de marcadores de infección, análisis de esperma asistido por computadora y categorías básicas
ampliadas y avanzadas.
La sexta edición de laManual de la OMS para el examen y procesamiento de laboratorio de

semen humanobeneficiará a los programas que buscan mejorar la salud sexual y reproductiva,
incluida la atención y el acceso a la fertilidad, especialmente entre los hombres, apoyando así
los esfuerzos de los países para alcanzar el ODS 3.7 (acceso universal a los servicios de atención
de la salud sexual y reproductiva, incluida la planificación familiar). El manual también apoyará
el logro de ODS 3.8 (cobertura universal de salud, incluida la protección contra riesgos
financieros y acceso a servicios de atención médica esenciales de calidad).
La OMS y el HRP quisieran agradecer a los muchos expertos técnicos de todo el mundo
que contribuyeron a la revisión y revisión de este manual.
Dr. Ian Askew

Director, Departamento de Salud e Investigación Sexual y Reproductiva, incluido el
Programa Especial sobre Reproducción Humana del PNUD/UNFPA/UNICEF/OMS/Banco
Mundial
Organización Mundial de la Salud
viii
Agradecimientos
Esta publicación fue producida por el Departamento de Salud e Investigación Sexual y
Reproductiva de la Organización Mundial de la Salud (que incluye el Programa Especial de
Investigación, Desarrollo y Capacitación en Investigación en Reproducción Humana (HRP)
del PNUD/UNFPA/UNICEF/OMS/Banco Mundial). Se agradece enormemente la
participación de las siguientes personas en la preparación, edición y revisión de este
manual.
Editor en jefe:
Dr. Lars Björndahl, MD, PhD
Medicina de laboratorio
Director del Laboratorio de Andrología
ANOVA, Clínica de Endocrinología, Hospital Universitario Karolinska y Departamento de

Medicina, Huddinge, Karolinska Institutet, Estocolmo, Suecia
Consejo editorial:
Profesor Oleg Apolikhin, MD, PhD
Andrología
Profesor y Director, Instituto de Investigación de Urología y Radiología Intervencionista
que lleva el nombre de NA Lopatkin, rama del Centro Nacional de Investigación Médica
de Radiología del Ministerio de Salud de la Federación Rusa
Moscú, Federación Rusa
Profesora Elisabetta Baldi, Doctora en Biología

Profesor Asociado de Patología Clínica, Departamento de Medicina Experimental y Clínica,
Universidad de Florencia
Responsable del centro de criopreservación de semen, Azienda Ospedaliero-
Universitaria Careggi (AOUC)
Florencia, Italia
Profesor Christopher LR Barratt PhD, DSc, FRSE

Jefe de División de Medicina de Sistemas, Profesor de Medicina Reproductiva
Facultad de Medicina, Universidad de Dundee
Dundee, Reino Unido
Profesor Mario Philip R. Festin, MD, MSc, MHPEd

Obstetricia y ginecología, epidemiología clínica, educación en profesiones de la salud, planificación
familiar
Profesor, Departamento de Obstetricia y Ginecología y Departamento de
Epidemiología Clínica, Facultad de Medicina, Universidad de Filipinas Manila
Coordinador, Grupo de Estudio Filipino sobre Salud Reproductiva, Institutos Nacionales
de Salud, Universidad de Filipinas
Manila, Filipinas
Consultor de la Secretaría de la OMS
Dr. Jackson C. Kirkman-Brown, MBE, PhD Ciencia reproductiva,

andrología, ciencia del cuidado de la salud, fertilidad
Lector universitario y director, Centro de Ciencias de la Reproducción Humana (ChRS),
Facultad de Ciencias Médicas y Dentales, Universidad de Birmingham
Persona responsable de HFEA y líder científico, Centro de Fertilidad de Mujeres de Birmingham,
Fideicomiso de la Fundación NHS de Mujeres y Niños de Birmingham
Birmingham, Reino Unido
viii
Profesora Dolores J. Lamb, MS, PhD, HCLD (ABB)
Andrología/urología, química clínica (Registro Nacional de Química Clínica) Director
de Laboratorio de Alta Complejidad (HCLD, American Board of Bioanalysts) Profesor
Dow de Urología
Vicepresidente de Investigación (Urología)
Departamento de Urología de la Fundación James Buchanan Brady, Director, Centro de
Genómica Reproductiva, Instituto Englander de Medicina de Precisión
Weill Cornell Medical College Nueva York, Estados
Unidos de América Sociedad Americana de
Medicina Reproductiva
Dr. Michael Mbizvo, PhD

Andrología y epidemiología reproductiva
Profesor, Ciencias de la Salud Reproductiva, Universidad de Zimbabue
Director de País/Asociado Principal, Consejo de Población
Lusaka, Zambia
Prof. Dr. Stefan Schlatt, PhD

Biología reproductiva, andrología
Profesor Universitario y Director, Centro de Medicina Reproductiva y Andrología,
Universidad de Münster, Alemania
Centro Colaborador de la OMS para la Investigación en Reproducción Masculina
Dr. Igor Toskin, MD, PhD, DSc

Salud pública, ITS, VIH/SIDA, urología, dermatología, epidemiología, salud
sexual y reproductiva
Científico, Departamento de Salud e Investigación Sexual y Reproductiva
Organización Mundial de la Salud
Ginebra, Suiza
Secretaría de la OMS
Dra. Christina Wang, MD

Endocrinología, andrología (reproducción masculina y anticoncepción)
Profesor de Medicina, Facultad de Medicina David Geffen, UCLA
División de Endocrinología, Departamento de Medicina, Centro Médico Harbor-UCLA
y el Instituto Lundquist
TorranceCalifornia, Estados Unidos de América
Colaboradores
Karel Blondeel, MSc, MA Prevención
del VIH/ITS y salud sexual
Estudiante de doctorado, Departamento de Medicina y Ciencias de la Salud, Universidad de Gante
Gante, Bélgica
Consultor de la Secretaría de la OMS
MUDr. petr huska

Estudiante de doctorado, ANOVA, Clínica de Endocrinología, Hospital Universitario Karolinska y
Departamento de Medicina, Huddinge, Karolinska Institutet
Estocolmo, Suiza
ix
Dr. Stepan Krasnyak, MD
Andrología, urología
Científico asociado, Departamento de Andrología y Reproducción Humana, Instituto de
Investigación de Urología y Radiología Intervencionista que lleva el nombre de NA Lopatkin,
rama del Centro Nacional de Investigación Médica de Radiología del Ministerio de Salud de la
Federación Rusa
Moscú, Federación Rusa
El equipo desea agradecer a Ian Askew, James Kiarie y Thabo Matsaseng por su
apoyo en las reuniones y discusiones en el departamento.
Un agradecimiento especial a la Sra. Natalie Narkie Maurer, Asistente y Secretaria

del Departamento de Salud e Investigación Sexual y Reproductiva, Organización
Mundial de la Salud, Ginebra, Suiza.
Se agradece mucho el apoyo, el asesoramiento y la asistencia de Susan Norris, Rebekah

Thomas e Ian David Coltart de la OMS.
Un agradecimiento especial a la Dra. Kirsten Vogelsong, ex miembro del personal de la OMS, por su
excelente mantenimiento de registros de las ediciones anteriores del manual, lo que facilitó la revisión
de la última edición, y al editor de la quinta edición del manual, Dr. Trevor Cooper, por ayudar con los
datos y otros elementos que fueron importantes en la continuidad de esta nueva edición.
El Departamento de Investigación y Salud Sexual y Reproductiva de la Organización

Mundial de la Salud (que incluye el Programa Especial de Investigación, Desarrollo y
Capacitación en Investigación en Reproducción Humana (HRP) del PNUD/UNFPA/UNICEF/
OMS/Banco Mundial) desea reconocer a todos los participantes en la opinión pública por
sus contribuciones.
Agradecimiento adicional a:
• Dr. Christoph Brenker, Científico Postdoctoral, Centro de Medicina Reproductiva y

Andrología, Universidad de Münster (para asistencia con protocolos de tinción, toma de
micrografías y placas para documentación de patologías de espermatozoides)
• Dr. Meurig Gallagher, Investigador, Centro de Modelado de Sistemas y Biomedicina Cuantitativa,

Universidad de Birmingham (para obtener ayuda en la redacción de las secciones CASA y motilidad
de los espermatozoides)
• Dra. Monica Muratori, asistente de investigación, Departamento de Medicina Clínica y Experimental,

Universidad de Florencia (por su asistencia en la redacción del protocolo Tunel para la
fragmentación del ADN espermático)
• Dra. Sara Marchiani, asistente de investigación, Departamento de Medicina Experimental y Clínica,

Universidad de Florencia (por su ayuda en la redacción del protocolo para la evaluación del estado
de la cromatina espermática).
X
Esta es la sexta edición delManual de la OMS para el examen y procesamiento del semen
humano. El manual ha sido uno de los documentos más descargados del sitio web de la
OMS en los últimos años.
La Dra. Christina Wang ha estado involucrada con el manual desde su primera edición en 1980
(cuando era elManual de laboratorio de la OMS para el examen del semen humano y la
interacción entre el esperma y el moco cervical) y continúa siendo parte de la presente sexta
edición, como miembro activo del consejo editorial del manual.
El Dr. Wang es profesor de medicina en la Escuela de Medicina David Geffen de la

Universidad de California en Los Ángeles. Ella está en la División de Endocrinología, en el
Departamento de Medicina, y es Directora de Sitio del Instituto de Ciencias Clínicas y
Traslacionales en el Instituto Lundquist en el Centro Médico Harbor-UCLA.
La Dra. Wang es una investigadora reconocida internacionalmente en biología y medicina

reproductiva masculina, y durante muchos años ha continuado liderando los esfuerzos para
Dra. Christina Wang, MD desarrollar un anticonceptivo hormonal masculino seguro, efectivo y reversible, métodos óptimos de
terapia de reemplazo hormonal masculino y nuevo reemplazo de andrógenos para hombres
hipogonadales. Además de todo lo anterior, el Dr. Wang ha liderado varios otros proyectos e
iniciativas de investigación impactantes, que van desde la investigación básica hasta los ensayos
clínicos, que tienen como objetivo mejorar los resultados de la salud reproductiva.
La Organización Mundial de la Salud desea reconocer la destacada contribución del Dr.

Wang al desarrollo de las seis ediciones delManual de la OMS para el examen y
procesamiento del semen humano. Su contribución aseguró tanto un alto nivel de
experiencia técnica en el desarrollo del manual como también la continuidad institucional
a lo largo de todas las ediciones de este importante documento.
xi
Acrónimos y
abreviaturas utilizadas en este
manual
ARTE tecnología de reproducción asistida
BSA albúmina de suero bovino
BWW Análisis de esperma asistido por computadora de
CASA Biggers, Whitten y Whittingham
CASMAevaluación morfométrica de espermatozoides asistida por computadora
CD45 grupo de determinación 45 (pan-marcador leucocitario)

CD46 grupo de determinación 46 (antígeno acrosomal)
CMA3 cromomicina A3
DGC Ácido desoxirribonucleico por
ADN centrifugación en gradiente de densidad
ADNasa desoxirribonucleasa
DPBS Ditiotreitol salino tamponado con fosfato
TDT de Dulbecco
EBSS Solución salina equilibrada de Earle
EDTA ácido etilendiaminotetraacético
EQA evaluación externa de la calidad control
EQC externo de la calidad
FITC isotiocianato de fluoresceína glicerol-
GEYC yema de huevo-citrato virus de
VIH inmunodeficiencia humana campo de
HPF alta potencia
HSA albúmina de suero humano
HTF líquido tubárico humano
ICSI inmunoglobulina para inyección
Yo G intracitoplasmática de espermatozoides
CCI unidad internacional de
IU control de calidad interna
IIU inseminación intrauterina

FIV fecundación in vitro
N/A apertura numérica
control de calidad control de calidad
SEBSS Desviación estándar de la solución salina equilibrada de
Dakota del Sur Earle complementada
SDF Fragmentación del ADN espermático
COMPENSACIÓN procedimiento operativo estándar
TZI índice de teratozoospermia
OMS Organización Mundial de la Salud
xi
1. Introducción
Capítulo 1:
Introducción
examen
2. Básico
1.1 Alcance del manual.................................................... ..........................................1

1.2 Introducción.................................................... .................................................... ............1
1.3 La sexta edición.................................................... .................................................... ..2
1.4 Metodología para la elaboración de la sexta edición del
examen
3. Extendido
manual de laboratorio de la OMS para el examen

y procesamiento de semen humano.................................................... .............4
1.1 Alcance del manual

El objetivo general del manual es describir métodos de laboratorio para el examen de la
examenes
4. Avanzado
eyaculación, para contribuir a la mejora global en la evaluación de la función reproductiva

masculina y el tratamiento de la subfertilidad masculina.
Los métodos proporcionados aquí se pueden utilizar como procedimientos operativos estándar no
solo para laboratorios de andrología sino también para cualquier laboratorio que realice análisis de
semen. Los métodos básicos descritos en el Capítulo 2, cuando se adoptan y practican en los
laboratorios, pueden mejorar la calidad del análisis del semen y la comparabilidad de los resultados
tecnicas
5. Preparación de esperma
entre muchos laboratorios. Los métodos extendidos de evaluación de semen y las pruebas de
investigación que se describen en los capítulos siguientes se incluyen para tecnólogos, científicos y
médicos que requieren más información sobre la capacidad funcional de los espermatozoides y los
órganos reproductores masculinos. Esta información puede ser útil para investigar la subfertilidad por
factor masculino, así como para monitorear los parámetros espermáticos durante el uso de métodos
anticonceptivos masculinos y en estudios epidemiológicos sobre la salud reproductiva masculina.
de espermatozoides
6. Criopreservación
1.2 Introducción
losManual de laboratorio de la OMS para el examen de la interacción entre el semen humano y

el moco cervical.se publicó por primera vez en 1980, en respuesta a la creciente necesidad de
estandarizar los procedimientos para el examen del semen humano. El manual fue revisado
cuatro veces.(1-5), ampliamente leído y traducido a varios idiomas. De hecho, durante los
y control de calidad
7. Garantía de calidad
últimos 40 años, el manual se convirtió en un estándar reconocido, utilizado ampliamente por

laboratorios clínicos y de investigación en todo el mundo. Es una guía de procedimientos no
solo para quienes son nuevos en el análisis de semen, sino también un texto de referencia para
todos los que procesan semen y necesitan analizar y definir parámetros espermáticos para la
práctica clínica o estudios de investigación clínica y epidemiológica.
El examen de semen es importante por diferentes razones:

8. Apéndices
• evaluación de la función reproductiva masculina y la permeabilidad del tracto genital para permitir el
tratamiento adecuado de la subfertilidad masculina y monitorear la respuesta al tratamiento;
• evaluación del potencial de fertilidad y elección de la modalidad de tratamiento adecuada para una
pareja infértil;
9. Referencias
1
1. Introducción
• medir la eficacia de la anticoncepción masculina (p. ej., oclusión de los conductos deferentes e
intervenciones que incluyen la anticoncepción masculina hormonal y otros posibles métodos).
La evaluación clínica del varón junto con los análisis de semen pueden guiar al médico para
determinar cómo proceder con una mayor investigación y manejo de la pareja subfértil. La edición
examen
2. Básico
anterior de este manual proporcionó rangos de referencia para las variables espermáticas
comúnmente medidas en base a datos que caracterizan los parámetros seminales de hombres cuyas
parejas tuvieron un embarazo de 12 meses o menos. Estas distribuciones de valores se definieron de
acuerdo con métodos estándar utilizados en química clínica para la definición de rangos de referencia,
pero es importante que no se puedan usar como límites distintos entre hombres fértiles y subfértiles.(
6). Aunque los parámetros de semen y esperma no se derivaron de muchas áreas geográficas que
permitieran la representatividad de los hombres de la mayoría de las poblaciones, estas distribuciones
examen
3. Extendido
de valores se han utilizado a nivel mundial. Además, muchos factores femeninos conocidos y
desconocidos dificultan el valor de utilizar únicamente los parámetros del examen del semen para
predecir el pronóstico de la pareja de fecundación espontánea o asistida. Se puede obtener un mejor
valor pronóstico del examen de semen usando la combinación de varios parámetros(7-9). Los métodos
actuales para el examen del semen pueden proporcionar muchas respuestas, pero hay muchas
preguntas que requieren otras investigaciones.(10). Para un paciente individual, un análisis de semen
nunca es un pronóstico de fertilidad, ya que es el potencial de fertilidad de la pareja lo que los define
examenes
4. Avanzado
como fértiles o subfértiles.
A pesar del éxito de los manuales anteriores, se ha hecho evidente que la

edición anterior no proporcionó el formato óptimo para que un técnico o
científico de laboratorio realice un procedimiento de análisis de semen
paso a paso en un laboratorio. Además, en los últimos 10 años se han
validado muchas pruebas nuevas basadas en espermatozoides con fines
tecnicas
clínicos y de investigación que deben discutirse en el manual. Impulsada

por estas consideraciones, la OMS estableció un comité editorial con el
apoyo de la Secretaría de la OMS para revisar todos los métodos descritos
en el manual, con miras a respaldarlos, cambiarlos o actualizarlos. Cuando
se obtuvieron datos insuficientes usando los métodos descritos en el
manual o no validados en más de un laboratorio, el comité editorial
desarrolló una posición de consenso después de evaluar la literatura
pertinente. Además,
de espermatozoides
La falta de instrucciones claras sobre el orden en que se deben realizar los análisis cuando se
entrega una muestra de semen al laboratorio llevó a algunos laboratorios a utilizar
metodologías descritas en otros recursos. Otros laboratorios desarrollaron sus propias
versiones de estos métodos, sin dejar de afirmar que realizan análisis de semen de acuerdo con
el manual de la OMS.(11). Para facilitar las comparaciones globales, esta nueva edición del
manual incluye procedimientos paso a paso y listas de verificación para garantizar que sea fácil
de usar para los técnicos de laboratorio y los científicos.
1.3 La sexta edición

La sexta edición consta de tres partes: examen de semen (Capítulo 2, 3y4), preparación y
criopreservación de semen (Capítulos 5y6) y evaluación y control de calidad (Capítulo 7).
8. Apéndices
Los procedimientos para el examen de semen se dividen en tres capítulos: exámenes

básicos, que son procedimientos de rutina robustos para determinar las variables del
semen que no solo la andrología sino cualquier laboratorio que realice un examen de
semen puede seguir; análisis extendidos, que pueden usarse en ciertas situaciones por
elección del laboratorio o por solicitud especial del médico; y exámenes avanzados, que
actualmente no se consideran de rutina para su uso en
9. Referencias
2
1. Introducción
Capítulo 1 Introducción
la evaluación inicial de un varón subfértil. Como el cultivo de semen no se realiza en un

laboratorio de andrología, esto se menciona solo en la sección de recolección estéril de semen.
La sección sobre preparación de esperma se extiende más allá del eyaculado para incluir
espermatozoides obtenidos de los testículos y el epidídimo. En particular, las pruebas de moco
cervical humano se eliminaron de esta nueva edición porque ya no se utilizan en la práctica
examen
2. Básico
clínica. Esta nueva edición está escrita como un manual de procedimiento fácil de seguir para
quienes realizan el examen de semen, con información básica y la justificación de la prueba
separada de la descripción del procedimiento.
A continuación se describen las principales características de esta sexta edición.
• Los capítulos sobreexamen de semenincluir detalles de cómo proceder con procedimientos,

examen
3. Extendido
cálculos e interpretación paso a paso, de modo que cualquier metodología dada esté
esencialmente completa, con referencias cruzadas mínimas a otras partes del manual.
• Exámenes básicos
• Evaluación del número de espermatozoides:
Las diluciones de semen se han simplificado, pero se deben contar 200 espermatozoides
examenes
4. Avanzado
por repetición.
Es importante que el laboratorio no deje de evaluar el número de espermatozoides a bajas
concentraciones (2 millones/ml), como se sugirió en la edición pasada, sino que informe de
concentraciones más bajas, teniendo en cuenta que los errores asociados con el conteo de un
número pequeño de espermatozoides pueden ser muy alto. Es posible que se necesiten
métodos adicionales descritos en este capítulo para mejorar la exactitud y la precisión de
cantidades muy bajas de espermatozoides.
tecnicas
El número total de espermatozoides por eyaculado (producción de espermatozoides) tiene más valor de
diagnóstico que la concentración de espermatozoides, pero para esto, el volumen de semen debe medirse con
precisión.
La secciónpara la evaluación de la azoospermiase conserva, yprocedimientos de centrifugacion

y usandotinciones para espermatozoides vivostambién se incluyen como métodos para la
detección de espermatozoides en muestras no fijadas para la evaluación del semen
posvasectomía o cuando los agentes anticonceptivos suprimen notablemente la producción de
espermatozoides.
de espermatozoides
• Evaluación de la motilidad de los espermatozoides.La categorización de la motilidad de los

espermatozoides se ha revertido a motilidad progresiva rápida, motilidad progresiva lenta,
motilidad no progresiva e inmóvil (grado a, b, c o d) porque la presencia (o ausencia) de
espermatozoides de progresión rápida es clínicamente importante.(12).
• Evaluación de la morfología espermática.El procedimiento para evaluar la morfología de los

espermatozoides utilizando un enfoque sistemático se describe y debe seguirse. En esta edición

se incluyen micrografías de más y mejor calidad de espermatozoides de muestras de semen sin
procesar consideradas normales, dudosas o anormales, acompañadas de explicaciones de por
qué cada espermatozoide ha sido clasificado de la forma en que lo ha sido. Esto debería ayudar a
capacitar a los técnicos para definir de manera consistente las características sutiles de la
morfología de los espermatozoides.
8. Apéndices
• Exámenes extendidos.Este capítulo se revisó ampliamente y ahora contiene no solo

procedimientos para detectar leucocitos, células germinales inmaduras, anticuerpos de esperma,
índices de múltiples defectos de esperma y ensayos bioquímicos para la función de órganos
accesorios, sino también métodos para detectar aneuploidía de esperma y genética de esperma, así
como ADN. fragmentación.
9. Referencias
3
1. Introducción
• Exámenes avanzados.Esta sección incluye tanto exámenes que se clasifican como centrados en
métodos muy especializados como principalmente de investigación y otras tecnologías emergentes.
Este capítulo fue ampliamente revisado. Se han eliminado las pruebas obsoletas, como la unión de
ovocitos humanos y zona pelúcida humana y las pruebas de penetración de ovocitos de hámster.
Las descripciones de estas pruebas están disponibles a partir de la quinta edición. Las pruebas de
examen
2. Básico
investigación de esta edición incluyen la evaluación de las especies reactivas de oxígeno y el estrés
oxidativo, los canales iónicos de membrana, la reacción del acrosoma y la cromatina espermática.
Análisis de esperma asistido por computadora (CASA)ha sido reescrito para describir los principios
de CASA y su uso como tecnología de investigación. Además, los nuevos métodos emergentes que
utilizan el movimiento de los espermatozoides o los cambios en la luz pueden constituir la base
para medir la motilidad de los espermatozoides sin necesidad de un microscopio.
examen
3. Extendido
• Los capítulos sobre el espermapreparaciónycrioconservaciónde espermatozoides fueron

actualizados.
• Control de calidad.Este capítulo ha sido revisado para que sea más fácil de abordar para quienes
no son estadísticos. El mantenimiento riguroso de la calidad del examen del semen es necesario
para que los métodos analíticos sean sólidos. Deben practicarse procedimientos de calidad tanto
internos como externos. Se dan consejos y sugerencias sobre cómo mejorar el rendimiento del
examenes
4. Avanzado
laboratorio cuando los resultados del control de calidad no son satisfactorios.
• Límites de decisión más precisos que rangos de referencia y límites de referencia.

La distribución de resultados de presuntos hombres fértiles no es suficiente para
establecer límites de decisión clínicamente útiles. Se revisaron los datos que
caracterizan las características del semen de una población de referencia (hombres
cuyas parejas tuvieron un embarazo de 12 meses o menos) (Sección 8.1 en la página
tecnicas
221). Se incorporaron datos no informados previamente y de poblaciones más diversas,

y estos análisis validaron la distribución de resultados definida en la quinta edición del
manual. La distribución de los datos de la población se presenta con intervalos
unilaterales (extremos de los datos de la población de referencia), aunque estos
percentiles no representan límites distintos entre hombres fértiles y subfértiles.
1.4 Metodología para la elaboración de la sexta

de espermatozoides
edición delmanual de laboratorio de la OMS para el

examen y procesamiento de semen humano
Por Mario Philip R. Festin e Igor Toskin
losmanual de laboratorio de la OMS para el examen y procesamiento de semen humano ya va

por su sexta edición. La quinta edición ha sido una de las publicaciones de la OMS más
populares desde que salió a la luz en 2010, con descargas en constante aumento incluso en los
últimos años (95 975 en 2018, 120 803 en 2019 y 132 765 en 2020).
Ha sido el manual estándar utilizado por los laboratorios de andrología, pero también por otros
laboratorios que realizan análisis de semen, clínicas e instituciones de investigación en todo el
mundo. Para 2021, se había citado en más de 3000 artículos y revisiones revisados por pares.
8. Apéndices
El manual se ha difundido en congresos y reuniones científicas internacionales y en programas

de formación de centros colaboradores de la OMS, sociedades profesionales y otras
instituciones académicas.
Para la presente revisión, el proceso incluyó lo siguiente. La secretaría del manual fue
convocada por el Departamento de Salud Reproductiva e Investigación (RHR) de la OMS,
9. Referencias
4
1. Introducción
en base a una lista derivada del equipo editorial anterior, y previa consulta con las
instituciones colaboradoras del departamento. Se elaboró un plan para elaborar
una lista de miembros del consejo editorial propuesto.
Esta lista de posibles colaboradores para la próxima edición se derivó de un análisis

examen
2. Básico
de oradores en congresos de andrología, una revisión de los colaboradores de la

quinta edición del manual y un análisis de la literatura médica mundial revisada por
pares sobre andrología y análisis de semen. La base para la selección final incluyó
un historial de investigación y práctica en análisis de semen, publicaciones revisadas
por pares y experiencia técnica reconocida internacionalmente, con un equilibrio
entre la práctica clínica y la experiencia de laboratorio. Se intentó obtener un
balance de andrólogos, laboratoristas, urólogos, científicos, epidemiólogos y otros.
examen
3. Extendido
Se formó un equipo editorial central de ocho personas para comenzar la organización del equipo más
grande de escritores si fuera necesario. El equipo editorial central fue seleccionado en base a la
colaboración activa con el departamento en los últimos años y la experiencia previa en el manual de
semen. El equipo editorial principal nominó al resto de los miembros del equipo de colaboradores más
importantes, según fuera necesario. No se proporcionan honorarios ni honorarios a los miembros del
consejo editorial ni a los colaboradores.
examenes
4. Avanzado
Una vez finalizada la lista de editores principales, la OMS los invitó a convertirse en miembros del
consejo editorial, con términos de referencia específicos. Sus CV, acuerdos individuales y declaraciones
de posibles conflictos de interés fueron presentados y archivados. La mayoría de las comunicaciones
se realizarían inicialmente a través de teleconferencias, para luego incluir también reuniones
presenciales en Ginebra o en otros lugares.
tecnicas
Las tareas propuestas del equipo editorial central de ocho personas fueron:
• sugerir otros miembros del equipo de colaboradores, según sea necesario
• establecimiento de criterios para la selección de los contribuyentes generales
• identificar los temas para revisión o actualización

de espermatozoides
• diseñar el proceso para definir el alcance de esta edición.
Los miembros del consejo editorial de la sexta edición de lamanual de laboratorio de la

OMS para el examen y procesamiento de semen humanofueron:
• Oleg Apolikhin –https://ecuro.ru/en/node/3485

• Elisabetta Baldi-https://www.unifi.it/p-doc2-0-0-A-3f2a3d2a393028.html
• Christopher Barratt-https://www.dundee.ac.uk/people/christopher-barratt
• Lars Bjorndahl-https://ki.se/en/people/larsbjor
• Jackson Kirkman-Brown -https://www.birmingham.ac.uk/staff/

8. Apéndices
profiles/metabolism-systems/kirkman-brown-jackson.aspx
• Dolores Cordero -https://urology.weillcornell.org/dolores-lamb
• Michael Mbizvo –https://www.popcouncil.org/research/expert/michael-mbizvo

9. Referencias
5
1. Introducción
• Stefan Schlatt-https://www.medizin.uni-muenster.de/cera/
ceraforschung/experimentelle-und-translationale-forschung-zum-
hoden/ arbeitsgruppe/univ-prof-dr-rer-nat-stefan-schlatt-1.html
• Cristina Wang-https://lundquist.org/christina-chung-lun-wang-md
examen
2. Básico
En la OMS, la secretaría del manual incluía a Igor Toskin y Mario Festin.
Se agregaron miembros adicionales para apoyar a los miembros senior del equipo
editorial y serán reconocidos como colaboradores:
• petr huska
examen
3. Extendido
• Stepan Krasniak
• Karel Blondeel.
Los términos de referencia incluían:

examenes
4. Avanzado
• revisar la clasificación y presentación de los procedimientos para mejorar la

comprensión entre el personal técnico;
• preparar una presentación más clara de las ilustraciones y fotografías;
• optimizar el uso del contenido que actualmente se encuentra en los recuadros insertados en el
texto principal, incorporándolo al texto principal donde corresponda;
tecnicas
• para verificar y actualizar los valores estándar de referencia de la edición anterior.
La Secretaría de RHR de la OMS consultó con el Comité de Revisión de Directrices de la

OMS (GRC), que decide si una publicación debe seguir el proceso de documentación,
revisión y aprobación de las directrices. Tras la revisión, el GRC señaló que las ediciones
anteriores del manual habían abordado cómo recolectar y preparar especímenes, cómo
analizar especímenes e interpretación, incluidos valores de referencia para números,
de espermatozoides
morfología, motilidad y otras características. No hubo recomendaciones sobre si, cuándo

y cómo tratar las anomalías.
El manual solo ha proporcionado procedimientos estandarizados a seguir para

realizar pruebas y exámenes de laboratorio, por lo que no ha hecho
recomendaciones clínicas o prácticas, lo cual está fuera del alcance del manual,
como lo menciona el GRC. Se aconsejó que las conclusiones y la información del
manual aún se basen en la mejor evidencia disponible, incluidas las citas

disponibles. El manual tendría que cumplir con los estándares de la OMS para el
desarrollo y publicación de documentos, incluida la declaración de conflictos de
intereses, la gestión de comités externos, el estilo de la OMS, el proceso de
autorización y otros. Tendría que estar vinculado a las directrices actuales de la
OMS sobre el manejo de la infertilidad y la anticoncepción, según corresponda.
El manual mantendría su objetivo de describir procedimientos y cómo
8. Apéndices
establecer estándares locales para valores de referencia.
También en la OMS, se realizaron comunicaciones adecuadas con el Departamento de Normas de Laboratorio
para obtener orientación sobre el contenido y los procedimientos, especialmente sobre el establecimiento de
normas en un manual.
9. Referencias
6
1. Introducción
Se obtuvo la autorización de planificación con el Comité de Documentos del

Departamento de Salud Reproductiva e Investigación de la OMS, y se otorgó la
autorización ejecutiva antes de la publicación, una vez que se completó el documento.
Otras publicaciones de las revisiones y discusiones en la preparación del manual serán
decididas y acordadas por el consejo editorial.
examen
2. Básico
El equipo central editorial identificó posibles temas relacionados con los factores que afectan
los parámetros del semen. Se realizó una revisión de la literatura sobre temas de investigación
específicos como parte de la preparación del manual. Si se discutían ciertos asuntos o temas, la
decisión se tomaba por consenso o por votación abierta. Para facilitar el proceso de
intercambio, revisión y actualización de datos, se estableció una plataforma electrónica. El
equipo editorial también consideró otros temas para ser incluidos, modificados o eliminados de
examen
3. Extendido
la presente versión del manual. Se tomaron varias decisiones con respecto al formato, los
temas de inclusión, los temas de exclusión y los plazos. Entre 2017 y 2020 se llevaron a cabo
una serie de teleconferencias, intercambios de correos electrónicos individuales y grupales y
dos reuniones en persona.
Se requirió una revisión de la literatura sobre ciertos temas identificados. Esto apoyó al
consejo editorial en temas sobre los que puede haber cierta incertidumbre, ya sea por
examenes
4. Avanzado
tratarse de un desarrollo tecnológico muy reciente o por falta de evidencia o experiencia.

Estas fueron la base de las discusiones para tomar algunas de las decisiones vitales.
Algunos de los temas de revisión incluyeron:
• nuevos procedimientos para la evaluación de la calidad del esperma; y
• factores que afectan la calidad del esperma: factores ambientales, uso de medicamentos, factores
tecnicas
relacionados con la edad, factores relacionados con la salud y otros (como parte del manual o como
documentos de revisión separados para su publicación).
Se prepararon cronogramas para cada capítulo y para el manual completo. Ellos incluyeron:
• esbozar el contenido de los capítulos
•
de espermatozoides
presentación del primer borrador
• revisión por el grupo central editorial
• presentación del segundo borrador
• revisión por el grupo central editorial

• aprobación por el editor en jefe
• revisión por el editor principal para la consistencia en todos los capítulos
• revisión interna por la OMS
• revisión externa por otros técnicos expertos en andrología o análisis de semen

8. Apéndices
• revisión pública (como parte de los procedimientos estándar en la preparación de documentos de la OMS)
• finalización del documento después de la recopilación y síntesis de todas las revisiones y comentarios.
9. Referencias
7
1. Introducción
Expertos de 43 países en las 6 Regiones de la OMS participaron en la revisión pública.
Si bien el apéndice del manual describe la distribución de los resultados de los hombres cuyas
parejas quedaron embarazadas dentro de los 12 meses posteriores al intento (Sección 8.1 en
p211), para presentar una descripción más detallada de los esfuerzos para reexaminar y
examen
2. Básico
actualizar las distribuciones de referencia, un grupo separado de autores, que incluía a algunos
de los miembros del consejo editorial, preparó un documento separado, con hallazgos clave
mencionados en el Apéndice 8 (ver referencia más abajo). Otros temas que están fuera del
alcance del manual también se publicarán por separado, incluido un análisis panorámico de las
tecnologías emergentes.
Referencia al papel de distribución del valor de referencia:

examen
3. Extendido
Campbell MJ, Lotti F, Baldi E, Schlatt S, Festin MPR, Björndahl L, Toskin I, Barratt CLR. Distribución de
los resultados del examen de semen 2020: un seguimiento de los datos recopilados para el manual de
análisis de semen de la OMS 2010. Andrología. 2021 mayo;9(3):817-822. doi: 10.1111/andr.12983.
Epub 2021 17 de marzo.
examenes
4. Avanzado
tecnicas
de espermatozoides
8. Apéndices
9. Referencias
8
1. Introducción
Capitulo 2:
examen basico
examen
2. Básico
2.1 Introducción.................................................... .................................................... ............9

2.2 Esquema temporal del examen básico del semen.............................12
2.3 Procedimientos previos al examen.................................................... ...................13
2.4 Procedimientos de examen y post examen..........................15
examen
3. Extendido
2.5 Información adicional y comentarios..........................................................64
Los exámenes básicos son aquellos que se espera que realice cualquier laboratorio que
investigue eyaculados humanos. Las técnicas descritas aquí están diseñadas para proporcionar
la mejor combinación de la más alta confiabilidad y la ejecución más práctica. Aunque puede
haber técnicas alternativas con resultados similares, es imperativo que se utilicen métodos
examenes
4. Avanzado
comparables para lograr la estandarización clínica y científica. Este enfoque proporciona la base
para el desarrollo adecuado de la ciencia detrás del cuidado reproductivo masculino.
Todos los aspectos de la recolección y el examen de la

tecnicas
eyaculación deben evaluarse utilizando procedimientos
estandarizados adecuados para que los resultados
brinden información confiable.

de espermatozoides
2.1 Introducción
En contraste con la mayoría de las otras secreciones corporales examinadas con fines de diagnóstico o
seguimiento del tratamiento, la eyaculación es una mezcla heterogénea de secreciones que no existe
dentro del cuerpo antes de ser expulsada. El eyaculado se produce a partir de una suspensión
concentrada de espermatozoides, almacenados en los epidídimos emparejados, mezclados y diluidos

principalmente con el líquido prostático en la uretra, seguido del vaciado de la secreción de las
vesículas seminales.(13). Por lo tanto, las fracciones secuenciales del eyaculado no están igualmente
compuestas. La comparación del volumen de eyaculado antes y después de la vasectomía revela que
aproximadamente el 90 % del volumen está compuesto por secreciones de los órganos accesorios.(14)
, principalmente la próstata y las vesículas seminales, con contribuciones menores de las glándulas
bulbouretrales (de Cowper) y los epidídimos.
8. Apéndices
La eyaculación tiene dos atributos cuantificables principales.
• El número de espermatozoidesrefleja la producción de espermatozoides por los testículos, la
permeabilidad del sistema de conductos postesticulares, la eficacia de las contracciones del músculo liso en
los epidídimos y conductos deferentes para transportar activamente los espermatozoides al

9. Referencias
9
1. Introducción
uretra, y la eficiencia eréctil y de eyaculación para expulsar una eyaculación rica en

espermatozoides. Estos últimos aspectos se ven afectados por la excitación sexual (duración
y calidad) y se efectúan a través de señales nerviosas a las células del músculo liso (vasa
deferentia, glándulas, esfínter de la vejiga urinaria), así como a las células del músculo liso
que controlan el flujo de sangre que entra y sale del cuerpo eréctil. tejidos del pene, y los
examen
2. Básico
músculos estriados bulbocavernosos y perineales.
• El volumen de líquido aportado por las diversas glándulas accesorias.refleja la actividad

secretora de las glándulas y las siguientes contracciones del músculo liso que vacía cada
glándula. Estas actividades son respuestas a la estimulación nerviosa autónoma provocada
por la excitación sexual y como preparación para la eyaculación.
examen
3. Extendido
La naturaleza de los espermatozoides (su vitalidad, motilidad y morfología) y la composición de

los fluidos del eyaculado también son importantes para la función espermática. Sin embargo,
existen diferencias significativas con respecto a la exposición de los espermatozoides a los
fluidos eyaculatorios entre la situación in vivo y la que ocurre in vitro.
Como resultado de las relaciones sexuales, es probable que la fracción prostática inicial rica en
espermatozoides de la eyaculación entre en contacto con el moco cervical que se extiende hacia la
examenes
4. Avanzado
vagina.(15)sin ningún contacto significativo con el resto del eyaculado. Por el contrario, en el entorno
de laboratorio, toda la eyaculación se recoge en un recipiente, donde los espermatozoides quedan
atrapados en un gel desarrollado a partir de proteínas de origen vesicular seminal. In vitro, este gel se
licua posteriormente por la acción de las proteasas prostáticas, tiempo durante el cual se eleva su
osmolalidad.(13, 16-18).
Existe alguna evidencia de que el volumen total y el contenido de espermatozoides de los eyaculados
tecnicas
varían según las circunstancias en las que se produce el eyaculado. Los eyaculados producidos por la
masturbación y recolectados en recipientes en una habitación cercana al laboratorio pueden resultar
en un rendimiento menor que los recuperados de los condones no espermicidas utilizados durante las
relaciones sexuales en el hogar.(19). Esta diferencia puede reflejar un nivel y una duración diferentes
de la excitación sexual, ya que el tiempo dedicado a producir una muestra mediante la masturbación
también influye en el volumen y el contenido de la eyaculación.(20).
En determinadas condiciones de recogida, las características del eyaculado dependen de factores que
de espermatozoides
normalmente no se pueden modificar, como la producción de espermatozoides por parte de los testículos, las
secreciones de órganos accesorios y enfermedades recientes (especialmente febriles), así como otros factores,
como la abstinencia de eyaculación, que deben tenerse en cuenta. registrados y considerados en la
interpretación de los resultados.
Los resultados de las mediciones de laboratorio de las características del eyaculado dependerán de lo
siguiente.
• Si se recolecta una eyaculación completa. Durante la eyaculación, las primeras fracciones

expulsadas son principalmente fluidos prostáticos ricos en espermatozoides, mientras que las
fracciones posteriores están dominadas por fluido vesicular seminal.(13). Por lo tanto, perder la
primera porción (rica en esperma) de la eyaculación tiene más influencia en los resultados del
análisis que perder la última porción.
8. Apéndices
• La actividad de las glándulas sexuales accesorias, cuyos fluidos diluyen los espermatozoides epididimarios
concentrados en la eyaculación.(21). Por lo tanto, la concentración de espermatozoides no es una medida
directa de la producción de espermatozoides testiculares, ya que está influenciada por el funcionamiento
de la secreción de otros órganos. El número total de espermatozoides eyaculados (concentración de
espermatozoides multiplicada por el volumen de semen) es, por tanto, un mejor reflejo de la capacidad de
producción de espermatozoides.(22). Por ejemplo, las concentraciones de espermatozoides en

9. Referencias
10
1. Introducción
Capítulo 2: Examen básico
las eyaculaciones de hombres jóvenes y viejos pueden ser las mismas, pero el número total de espermatozoides
puede diferir, ya que tanto el volumen de líquido seminal como la producción total de espermatozoides disminuyen
con la edad, al menos en algunas poblaciones(23).
• El tiempo entre la eyaculación examinada y la eyaculación anterior más reciente (período de

examen
2. Básico
abstinencia eyaculatoria - "tiempo de abstinencia", a veces denominado menos

específicamente abstinencia sexual). Los espermatozoides se acumulan en los epidídimos
hasta que están llenos, luego se desbordan hacia la uretra y se eliminan en la orina.(24, 25);
Como los epidídimos nunca se vacían por completo con una eyaculación(24), quedan algunos
espermatozoides del momento de la eyaculación anterior. Esto influye en el rango de edad y
calidad de los espermatozoides en el eyaculado.(26). La vitalidad y la cromatina de los
espermatozoides no se ven afectadas por una mayor duración de la abstinencia(27, 28)a
examen
3. Extendido
menos que la función del epidídimo esté alterada(29). Además, extensos estudios para
determinar la producción diaria de espermatozoides han indicado que se necesitan de 2 a 3
días de eyaculaciones diarias para agotar el almacenamiento de espermatozoides en el
epidídimo.(30, 31). Así, la recomendación, basada en la experiencia clínica, de pedir a los
hombres que recojan el eyaculado para examinarlo después de un período de 2 a 7 días de
abstinencia puede contribuir a la variabilidad y a un límite indistinto entre resultados
normales y subfértiles. El alcance de esta influencia es difícil de determinar y rara vez se
examenes
4. Avanzado
considera.
Los factores clave del paciente que influyen en la eyaculación incluirán:
• El tamaño de los testículos, que influye en la cantidad total de espermatozoides producidos por día y, por lo
tanto, indirectamente en la producción por eyaculado.(2, 32-34). El tamaño testicular refleja el nivel de
capacidad espermatogénica, que también está relacionado con la morfología de los espermatozoides(35).
tecnicas
• Estado endocrino(36)
• Medicamentos que el hombre está tomando. Por ejemplo, el transporte de espermatozoides desde
los epidídimos hasta la uretra depende de la activación de los receptores alfa-1 en las células del
músculo liso de los conductos deferentes. El tratamiento con bloqueadores alfa (fármacos
antihipertensivos y tratamiento sintomático de la hipertrofia prostática) o antidepresivos
de espermatozoides
inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina (ISRS) (p. ej., sertralina, fluoxetina,

amitriptilina) pueden inhibir la motilidad del conducto deferente.(37)y también vaciado de glándulas
sexuales accesorias.
• Suplementos o medicamentos no recetados como los esteroides anabólicos.
Estos factores variables y en gran medida incontrolables contribuyen a la conocida variación en

la composición del semen entre los individuos.(38, 39).
Existe evidencia de que los resultados de un solo examen de eyaculación son suficientes para
decidir los pasos posteriores de una investigación de infertilidad del hombre.(9). Por otro lado,
para definir una línea de base exacta para un individuo, puede ser necesario examinar dos o
tres eyaculados(40-44).
8. Apéndices
Si bien las mediciones realizadas sobre toda la población de espermatozoides eyaculados no

pueden definir la capacidad fecundante de los pocos que llegan al lugar de la fecundación, el
análisis del eyaculado proporciona información esencial sobre el estado funcional de los
órganos reproductivos del individuo. Todos los aspectos de la recolección y el examen de la
eyaculación deben evaluarse mediante procedimientos estandarizados adecuados si se desea
que los resultados brinden información confiable, es decir, válida y útil. Los métodos
9. Referencias
11
1. Introducción
descritos en este capítulo son procedimientos aceptados que constituyen los pasos esenciales en la
evaluación del semen.
2.2 Esquema temporal del examen básico del semen

examen
2. Básico
El examen de semen básico implica los siguientes pasos (que se describen en detalle en
las secciones siguientes)(45, 46).
2.2.1 Preparativos – Procedimientos previos al examen

examen
3. Extendido
Los procedimientos de pre-examen comprenden:
• Información del paciente
• coleccion de muestra
• recepción de muestras
examenes
4. Avanzado
• manipulación inicial de muestras.
2.2.1.1 En los primeros 5 minutos – Manipulación inicial de la muestra
Por razones prácticas, es conveniente determinar el volumen de la muestra mediante el pesaje

tecnicas
durante la fase previa al examen.
• La medición del volumen de semen por peso se puede realizar preferiblemente en el momento en que se
recibe la muestra y antes de la licuefacción.
• Deje tiempo para que ocurra la licuefacción (generalmente no más de 30 minutos).

de espermatozoides
2.2.2 Procedimientos de examen
Los procedimientos para el examen del eyaculado se dividen entre la evaluación que no puede
retrasarse sin riesgo de introducción de anomalías inducidas por el laboratorio y aquellas que
pueden realizarse más tarde sin dicho riesgo. Esto permite que el laboratorio organice un flujo
de trabajo eficiente sin poner en peligro la calidad del examen.
2.2.2.1 Entre 30 y 60 minutos después de la recolección del eyaculado
• Evaluar la licuefacción y el aspecto macroscópico del semen.
• Prepare una preparación húmeda para evaluar la apariencia microscópica, la motilidad de los espermatozoides y la
8. Apéndices
dilución requerida para evaluar la concentración de espermatozoides.
• Mida el pH del semen (si está indicado).
• Evaluar la vitalidad de los espermatozoides (si el porcentaje de células móviles es bajo).
• Hacer diluciones para evaluar la concentración de espermatozoides.

9. Referencias
12
1. Introducción
• Realice frotis para evaluar la morfología de los espermatozoides y frotis de fijación.
• Realice la prueba de reacción de antiglobulina mixta (MAR) para anticuerpos antiespermatozoides (si es
necesario).
examen
2. Básico
• Evaluar la presencia de células leucocitarias (si es necesario).
• Centrifugar las alícuotas de semen (si se van a analizar marcadores bioquímicos).
2.2.2.2 Dentro de las 3 horas posteriores a la recolección de la eyaculación

examen
3. Extendido
• Determinar la concentración de espermatozoides (se puede hacer más tarde, preferiblemente el mismo día).
• Enviar muestras al laboratorio de microbiología (si se requiere).
2.2.2.3 Más tarde, el mismo día o en un día posterior

examenes
4. Avanzado
• Teñir y evaluar frotis para determinar la morfología de los espermatozoides.
• Análisis bioquímico de marcadores de glándulas accesorias (opcional).
2.2.3 Procedimientos posteriores al examen

tecnicas
• Cálculos
• Presentación de resultados
• Aprobación de resultados para publicación.
2.3 Procedimientos previos al examen

de espermatozoides
Esta sección describe todos los pasos necesarios antes de que puedan comenzar los análisis reales.
2.3.1 Información del paciente
• El hombre debe recibir instrucciones claras escritas y habladas con respecto a la

recolección de la muestra de semen. El médico debe dar la misma información al

paciente.
• La recomendación principal es la recolección de eyaculación por masturbación. No se

recomienda el coitus interruptus y solo debe usarse en casos excepcionales debido al
riesgo de recolección incompleta y contaminación con fluidos y células vaginales.
8. Apéndices
Los condones especiales para estudios de fertilidad pueden ser una alternativa en
circunstancias excepcionales, pero la eyaculación completa no estará disponible para su
examen y es probable que la muestra esté contaminada por el contacto con la piel del
pene y, en cierta medida, también con el fluido vaginal y las células del pene. el exterior
del preservativo. No se pueden usar condones anticonceptivos debido a la
9. Referencias
13
1. Introducción
presencia de agentes espermicidas. Los condones de látex ordinarios no deben usarse para la
recolección de semen porque contienen agentes que interfieren con la motilidad de los
espermatozoides.(47).
Se deben evitar los lubricantes, ya que pueden contaminar el eyaculado y cambiar sus
propiedades. Si es absolutamente necesario, se deben utilizar lubricantes no
examen
2. Básico
espermatotóxicos validados.
• La eyaculación debe recolectarse por completo y el hombre debe informar cualquier pérdida de
cualquier fracción de la muestra.
• El eyaculado debe recogerse tras un mínimo de 2 días y un máximo de 7 días de

abstinencia eyaculatoria.
examen
3. Extendido
• Para evitar la exposición del semen a fluctuaciones de temperatura y controlar el tiempo entre la
recolección y el análisis, se recomienda que la muestra sea recolectada en una habitación privada
cercana al laboratorio. Idealmente, las investigaciones deben comenzar dentro de los 30 minutos
posteriores a la recolección, pero al menos dentro de los 60 minutos.
Por supuesto, pueden ser necesarias excepciones individuales, y cada individuo debe recibir el
asesoramiento adecuado sobre las posibilidades y los riesgos.

examenes
4. Avanzado
Si no se recoge en las proximidades del laboratorio, el transporte no debe permitir que la temperatura de la
muestra descienda por debajo de los 20 °C ni por encima de los 37 °C.
Si el paciente por alguna razón debe recolectar la eyaculación en otro lugar, el

contenedor de la muestra debe mantenerse cerca del cuerpo debajo de la ropa, por
ejemplo, en la axila, durante el transporte y debe entregarse al laboratorio
preferiblemente dentro de los 30 minutos posteriores a la recolección. y al menos no
más de 50 minutos después de la recolección.
tecnicas
2.3.2 Recogida de muestras
• Antes de la recolección del eyaculado, el recipiente de la muestra debe mantenerse a temperatura

ambiente, entre 20 °C y 37 °C, para evitar grandes cambios de temperatura que puedan afectar a
los espermatozoides.
de espermatozoides
• El recipiente de la muestra debe ser un recipiente de plástico limpio y de boca ancha,

de un lote que se haya confirmado que no es tóxico para los espermatozoides (Sección
2.5.10 en la página 67).
• El contenedor de muestras, así como las hojas de trabajo manuales correspondientes, deben estar
etiquetados con identificadores que, en combinación con los procedimientos para la recepción de muestras
y su posterior manipulación, eliminen el riesgo de confusión de muestras y hojas de trabajo. Los requisitos
legales para los marcadores de identidad de contenedores pueden diferir. Podría ser el nombre y el
número de identificación del hombre, la fecha y la hora de la recolección o los números únicos de
identificación de la muestra.
• La siguiente información debe registrarse en la recepción de la muestra y presentarse en el

informe final (Sección 8.5 en la página 233):
8. Apéndices
• identidad del hombre (por ejemplo, nombre, fecha de nacimiento y número de código personal) e
idealmente su confirmación de que la muestra es suya;
• el período de abstinencia eyaculatoria previa;
• la fecha y hora de recogida;

9. Referencias
14
1. Introducción
• la integridad de la muestra y cualquier dificultad para producir la muestra (por

ejemplo, si la recolección no se realizó en el laboratorio); y
• volumen de eyaculación.
examen
2. Básico
• Se aplican condiciones especiales para algunas situaciones específicas:
• colección estéril para reproducción asistida o crioalmacenamiento (Sección 2.5.11 en la

página 68)
• colección estéril para análisis microbiológicos (Sección 2.5.12 en la página 68).

examen
3. Extendido
2.3.3 Manipulación inicial de muestras
• El eyaculado recogido debe dejarse licuar sin demora innecesaria, preferiblemente en

una incubadora a 37 °C y, si es posible, en una plataforma de mezcla orbital, para
facilitar la licuefacción y la mezcla de la muestra.
examenes
4. Avanzado
• El tiempo entre la recolección y el inicio del examen del eyaculado debe registrarse al inicio
de la evaluación macroscópica y presentarse en el informe final. Preferiblemente, la
evaluación debe comenzar dentro de los 30 minutos posteriores a la recolección y no más de
60 minutos después de la recolección.
• La exposición in vitro prolongada al líquido de eyaculación licuado afectará cualidades

como la motilidad y la morfología.
tecnicas
• Los eyaculados pueden contener agentes infecciosos peligrosos (p. ej., virus de la inmunodeficiencia
humana (VIH), virus de la hepatitis o virus del herpes simple) y, por lo tanto, deben tratarse como un peligro
biológico. Pautas de seguridad como se describe enSección 8.2 en la página 214 debe seguirse
estrictamente; Las buenas prácticas de laboratorio son fundamentales para la seguridad del laboratorio.(
48).
de espermatozoides
2.4 Procedimientos de examen y post examen
2.4.1 Evaluación del volumen del eyaculado
La medición precisa del volumen es esencial en cualquier evaluación de la eyaculación porque

brinda información sobre las funciones secretoras de las glándulas sexuales auxiliares.
También es necesaria una evaluación confiable del volumen del eyaculado para calcular el
número total de espermatozoides, el número total de células no espermáticas en el eyaculado y
las cantidades totales de marcadores bioquímicos.
2.4.1.1 Volumen por peso

8. Apéndices
El volumen se mide mejor pesando la muestra en el recipiente en el que se ha recogido. Esto se

puede hacer preferiblemente en la recepción del recipiente de eyaculación antes de la
incubación para la licuefacción. Otros métodos introducen una mayor imprecisión (Cooper et
al., 2007).
9. Referencias
15
1. Introducción
1. Use un recipiente previamente pesado para recolectar la eyaculación, con el peso anotado en
el recipiente y la tapa.
• Los recipientes de muestras vacíos suelen tener diferentes pesos, por lo que cada recipiente
con tapa debe pesarse previamente de forma individual. El peso debe anotarse en el
examen
2. Básico
recipiente y su tapa con un rotulador permanente antes de dárselo al paciente.

Si se utilizan etiquetas, por ejemplo, para marcadores de identidad, su peso debe incluirse en
el peso vacío. Los recipientes estériles no deberían requerir, y no requieren, apertura para
esto.
2. Pese el vaso con la eyaculación en él.

examen
3. Extendido
3. Reste el peso del contenedor vacío.
4. Calcular el volumen a partir del peso de la muestra, suponiendo que la densidad del
semen sea de 1 g/ml (Auger et al., 1995). (Se ha informado que la densidad del semen
varía entre 1,03 y 1,04 g/ml(49), 1,00 y 1,01 g/ml(50), y una media de 1,01 g/ml(51)).
examenes
4. Avanzado
2.4.2 Evaluación macroscópica
La evaluación macroscópica comprende una serie de observaciones importantes que tal vez no sea
posible evaluar en un valor numérico exacto (y, por lo tanto, controlarlas mediante métodos
cuantitativos tradicionales), pero que aún pueden tener una gran importancia clínica.
tecnicas
2.4.2.1 Aspecto macroscópico del eyaculado
Un eyaculado licuado normal tiene un aspecto macroscópicamente homogéneo, crema/gris-

palescente. Puede parecer menos opaco si la concentración de espermatozoides es muy baja; el color
también puede ser diferente, es decir, ligeramente amarillento después de tiempos de abstinencia
más prolongados, marrón rojizo cuando hay glóbulos rojos (hemospermia) o amarillo más claro en un
paciente con ictericia o que toma ciertas vitaminas o medicamentos. Si la eyaculación parece viscosa,
totalmente clara e incolora, entonces puede ser pre-eyaculación únicamente de las glándulas de
de espermatozoides
Cowper, que los hombres producen en cantidades variables durante la excitación; en este escenario,
esto debe discutirse con el paciente para establecer si se produjo una eyaculación asociada al
orgasmo.
2.4.2.2 Licuefacción
Inmediatamente después de la eyaculación en el recipiente de recolección, la eyaculación suele ser

una masa coagulada semisólida o una masa similar a un gel. Por lo general, la eyaculación comienza a
licuarse (volverse más delgada) en unos pocos minutos a temperatura ambiente, momento en el que
se verá una mezcla heterogénea de grumos semisólidos en el líquido. A medida que continúa la
licuefacción, el eyaculado se vuelve más homogéneo y más acuoso pero aún con una viscosidad más
alta que el agua. En las etapas finales de la licuefacción solo quedan pequeñas áreas de coagulación.
8. Apéndices
Una temperatura de 37 °C facilitará la licuefacción. Además, un movimiento lento y giratorio del

recipiente de la muestra ayudará a que se complete la licuefacción. Si no se utiliza una bandeja móvil
(mezclador orbital) durante la licuefacción, es esencial que el recipiente se agite lentamente durante
15 a 30 segundos antes de comenzar la evaluación macroscópica de la licuefacción.
9. Referencias
dieciséis
1. Introducción
La licuefacción completa de la eyaculación normalmente se logra en 15 a 30 minutos a temperatura

ambiente.
• Si la licuefacción no se completa en 30 minutos, esto debe registrarse y anotarse en el

informe final. Luego, el eyaculado podría dejarse a 37 °C durante otros 30 minutos.
examen
2. Básico
• Si la licuefacción no se completa después de 60 minutos, esto también debe incluirse en el

informe final.
• Los eyaculados licuados normales pueden contener algunos gránulos gelatinosos (cuerpos
gelatinosos) que no se licuan y no parecen tener ningún significado clínico. Sin embargo, la
presencia de hebras de moco puede interferir con el examen de la eyaculación y, por lo
examen
3. Extendido
tanto, debe anotarse en el informe final.
Más información sobreproblemas de licuefacciónse proporciona en la última parte de este capítulo.
2.4.2.3 Viscosidad del eyaculado

examenes
4. Avanzado
Después de la licuefacción, la viscosidad del eyaculado se puede estimar al aspirarlo suavemente en una
pipeta desechable de plástico de calibre ancho (aproximadamente 1,5 mm de diámetro) (verificada como no
tóxica para los espermatozoides y, si es necesario, estéril), permitiendo que el semen caiga por gravedad y
observando la longitud de cualquier hilo.
Un eyaculado licuado normal cae como pequeñas gotas discretas. Si la viscosidad es anormal, la
gota formará un hilo de más de 2 cm de largo.
tecnicas
2.4.2.4 Olor del eyaculado
Existe una variabilidad considerable en la capacidad de diferentes individuos para percibir el

olor normal de una eyaculación humana.(45). La información sobre un fuerte olor a orina o
putrefacción puede tener importancia clínica; por lo tanto, es importante señalar esto en el
informe.
de espermatozoides
2.4.2.5 pH del eyaculado
El pH en la eyaculación depende de la contribución relativa de la secreción prostática ácida y la

secreción vesicular seminal alcalina. En el eyaculado no existe un control eficaz del pH del
fluido. In vitro, habrá una pérdida continua de CO que provoca un aumento gradual del pH. El
2
interés clínico del pH del eyaculado es un valor bajo. Si se va a evaluar el pH, debe hacerse en
un tiempo uniforme, preferiblemente 30 minutos después de la recolección, pero en cualquier
caso, dentro de la hora de la eyaculación.
Para muestras normales, se deben usar tiras de prueba de pH en el rango de 6.0 a 10.0.
8. Apéndices
1. Mezclar bien la muestra de semen.
2. Esparza una gota de semen uniformemente sobre la tira de pH.
3. Esperar a que se homogeneice el color de la zona impregnada (< 30 segundos).
4. Compare el color con la tira de calibración para leer el pH.

9. Referencias
17
1. Introducción
Un valor de pH inferior a 7,2 puede ser indicativo de una falta de líquido vesicular seminal alcalino. También
puede ser debido a la contaminación de la orina.
2.4.3 Preparación para la investigación microscópica

examen
2. Básico
Para obtener resultados fiables de la investigación microscópica, es esencial que las alícuotas
examinadas sean representativas de todo el eyaculado. La naturaleza del eyaculado licuado,
que aún es más viscoso que el agua, hace que tomar una muestra representativa de semen
para su análisis sea muy problemático. Si la muestra no está bien mezclada, es poco probable
que el análisis de dos alícuotas separadas sea representativo de todo el eyaculado y puede
mostrar marcadas diferencias en la concentración, motilidad, vitalidad y morfología de los
examen
3. Extendido
espermatozoides. Incluso si el eyaculado licuado es macroscópicamente homogéneo, pequeñas

alícuotas pueden tener una composición muy diferente.
2.4.3.1 Mezcla del eyaculado
Antes de retirar una alícuota de semen para cualquier evaluación, mezcle bien la muestra en el
examenes
4. Avanzado
recipiente original, pero no tan vigorosamente que se creen burbujas de aire. La mezcla se puede
lograr colocando el recipiente de la muestra en una bandeja móvil durante la licuefacción en una
incubadora a 37 °C. En ausencia de un mezclador orbital, se podría lograr una mezcla básica con
aproximadamente 15 a 30 segundos de agitación manual (Sección 2.4.2.2 en la página 16).
2.4.3.2 Muestreo representativo

tecnicas
Aunque macroscópicamente los eyaculados licuados pueden parecer completamente homogéneos,

todavía puede haber compartimentos pequeños pero significativos con diferente composición de
esperma y secreciones. Por lo tanto, es esencial:
• use alícuotas repetidas de al menos 50 µl para la dilución para la evaluación de la concentración de esperma
•
de espermatozoides
use alícuotas repetidas de al menos 10 µl para la evaluación de la motilidad de los espermatozoides.
La comparación de dichas alícuotas repetidas es necesaria para reducir el riesgo de errores

debido a un muestreo no representativo. Los métodos de comparación se describen en cada
técnica de evaluación.
2.4.3.3 Elaboración de una preparación húmeda
Inmediatamente después de que el eyaculado se haya mezclado correctamente (Sección 2.4.3.1), retire
el volumen apropiado, sin dejar tiempo para que los espermatozoides se asienten fuera de la
suspensión. Siempre vuelva a mezclar la muestra de semen antes de retirar las alícuotas duplicadas.
Se deben realizar evaluaciones de motilidad replicadas en dos preparaciones húmedas diferentes,
recién preparadas (verPrincipios de preparación húmeda en la página 65para el fondo).
8. Apéndices
1. Coloque una alícuota bien mezclada de 10 µl en un portaobjetos de microscopio limpio que, preferiblemente, esté
precalentado a 37 °C (p. ej., en la incubadora de muestras).
• Tenga cuidado de evitar la formación y el atrapamiento de burbujas de aire entre el cubreobjetos y el
portaobjetos.
9. Referencias
18
1. Introducción
2. Coloque un cubreobjetos de 22 mm × 22 mm dejándolo caer con cuidado horizontalmente

sobre la gota. El peso del cubreobjetos esparce la muestra (así que use un cubreobjetos de
peso #1½).
3. Evalúe la preparación húmeda recién hecha tan pronto como el contenido ya no se

examen
2. Básico
desplace.
• Si el flujo no ha cesado dentro de 1 minuto después de la aplicación del cubreobjetos, se debe realizar una
nueva preparación húmeda.
2.4.4 Evaluación bajo el microscopio

examen
3. Extendido
Es necesario un microscopio óptico equipado con óptica de contraste de fase para todos los exámenes
de preparaciones no teñidas de semen fresco (Sección 8.3 en la página 221 para saber cómo
configurar un microscopio).
2.4.4.1 Bajo aumento

examenes
4. Avanzado
Un examen microscópico inicial de la alícuota de eyaculación implica escanear la preparación

con un aumento total de ×100 (es decir, una combinación de una lente objetivo ×10 con un
ocular ×10).
Esto proporciona una visión general de la muestra para revelar si los espermatozoides están
distribuidos uniformemente en la preparación, si hay hebras de moco visibles y si hay agregación o
tecnicas
aglutinación de espermatozoides. En caso de distribución desigual, la razón podría ser:
• mezcla insuficiente
• alta viscosidad
• licuefacción insuficiente
de espermatozoides
• aglomeración de espermatozoides.
2.4.4.2 Gran aumento
A continuación, la preparación debe evaluarse con un aumento total de ×200 o ×400 (es decir,
una combinación de un objetivo ×20 o ×40 con un ocular ×10). Esto permite:
• evaluación de la motilidad de los espermatozoides;
• determinación de la dilución requerida para una evaluación precisa del número de

espermatozoides (Sección 2.4.4.3);
• determinación de la presencia de células redondas que requiere una evaluación adicional;

8. Apéndices
• determinación de la presencia de células distintas de los espermatozoides (por ejemplo, células epiteliales)
o “células redondas” (leucocitos y células germinales inmaduras).

9. Referencias
19
1. Introducción
2.4.4.3 Estimación de la dilución adecuada para el recuento de espermatozoides
La dilución de la eyaculación requerida para permitir que la concentración de esperma se mida

con precisión se estima a partir del número de espermatozoides observados en todo un campo
microscópico de gran aumento. Se deben usar al menos 50 µl de eyaculado bien mezclado y el
volumen total de la suspensión de esperma debe ser de al menos 200 µl. El cálculo del área de
examen
2. Básico
campo se describe enSección 2.5.9 en la página 67).
Si no se observan espermatozoides, examine la preparación húmeda duplicada. Si no se encuentran

espermatozoides en la segunda preparación, proceder como enSección 2.4.8.8 en la página 35. La
Tabla 2.1 ha sido desarrollada para asegurar el uso de volúmenes suficientes de eyaculados y obtener
volúmenes finales de suspensiones de esperma diluidas para un manejo adecuado.
examen
3. Extendido
Tabla 2.1 Volúmenes suficientes de eyaculados – volúmenes finales de suspensiones de semen diluidos para un manejo adecuado
Espermatozoide Espermatozoide
Dilución Eyaculado (µl) Fijador (µl)
por campo ×400 por campo ×200
> 200 > 800 1 : 50 (1 + 49) 50 2 450

examenes
4. Avanzado
40–200 160–800 1 : 20 (1 + 19) 50 950

16–40 64–160 1 : 10 (1+ 9) 50 450
2–15 8–64 1 : 5 (1 + 4) 50 200
<2 <8 1 : 2 (1 + 1) 100 100
tecnicas
2.4.4.4 Fijador para diluir alícuotas de eyaculado

Prepare, por ejemplo, 1 litro de una solución acuosa que contenga bicarbonato de sodio 0,595 M y
formalina aproximadamente 0,14 M (cualquier solución líquida de formaldehído se denomina
formalina). La concentración final de formalina es una décima parte de la utilizada en los laboratorios
de patología y citología. En comparación con la situación en dichos laboratorios, la evaporación de
formalina de las preparaciones de la cámara de conteo es extremadamente baja. Se deben seguir las
normas locales sobre el manejo de formalina, pero es probable que el manejo en campanas de
de espermatozoides
ventilación sea obligatorio solo para la preparación de la solución madre de baja concentración.
1. Disuelva 50 g de bicarbonato de sodio (NaHCO ) en aproximadamente

3
500 ml de agua destilada,
agregue 10 ml de solución de formaldehído al 36–40 % y agregue agua hasta un volumen final de
1000 ml.
2. Si lo desea, agregue 0,25 g de azul tripán (índice de color 23859) o 5 ml de violeta de genciana
saturada (> 4 mg/ml) (índice de color 42555) para resaltar las cabezas de los espermatozoides y
facilitar la carga adecuada de las cámaras de recuento.
3. Conservar a 2–8 °C durante un máximo de 12 meses. Si se forman cristales en la solución, pásela por un
filtro de 0,45 µm antes de usarla.

8. Apéndices
2.4.4.5 Dilución para la evaluación del número de espermatozoides
Es necesaria la dilución con un fijador para inmovilizar los espermatozoides. Los espermatozoides inmóviles
son mucho más fáciles de contar con precisión que los espermatozoides móviles. La dilución también es
importante para crear una muestra que sea más acuosa para obtener resultados más confiables.
9. Referencias
20
1. Introducción
carga en el hemocitómetro. Deben mezclarse al menos 50 µl de semen con la solución

diluyente para garantizar una representatividad confiable y un volumen de suspensión
suficiente para una mezcla completa de la muestra (se puede agitar en vórtex después de la
fijación). La dilución apropiada se estima en el examen microscópico inicial.
examen
2. Básico
1. Utilice una pipeta de desplazamiento de aire para dispensar la cantidad adecuada de fijador en dos
viales de dilución.
2. Mezclar la muestra de semen cuidadosamente sin que se formen burbujas.
3. Use una pipeta de desplazamiento positivo para tomar un volumen exacto de semen para dilución.
examen
3. Extendido
4. Limpie el semen del exterior de la punta de la pipeta, teniendo cuidado de no tocar la abertura de la
punta. Asegúrese de que no haya burbujas de aire en la punta de la pipeta.
5. Dispense el semen en el fijador y enjuague la punta de la pipeta aspirando y exprimiendo el

fijador. Retire la punta de la pipeta con el émbolo completamente presionado y agite la
dilución inmediatamente para reducir el riesgo de formación de precipitados visibles que
harían que las evaluaciones no fueran confiables.
examenes
4. Avanzado
6. Mezcle bien la muestra de semen nuevamente y prepare la dilución replicada siguiendo los pasos
anteriores.
2.4.4.6 Evaluación de la acumulación de esperma

tecnicas
Hay dos tipos diferentes de aglutinación de espermatozoides que es esencial evaluar por
separado.
agregados de esperma
La adherencia de espermatozoides inmóviles entre sí o de espermatozoides móviles a hebras

de moco, células no espermáticas o desechos se define como agregación no específica (Fig.
2.1).
de espermatozoides
Fig. 2.1 Agregación no específica de espermatozoides en el semen
Vistas de espermatozoides agregados con una célula epitelial (a), desechos (b) o espermatozoides (c, d).
8. Apéndices
(a) (b) (C) (d)
Micrografías cortesía de C. Brasil.

9. Referencias
21
1. Introducción
el esperma se aglutina
La aglutinación se refiere específicamente a los espermatozoides móviles que se pegan entre sí, cabeza con
cabeza, cola con cola o de forma mixta. La motilidad suele ser vigorosa, con un movimiento de sacudida
frenético, pero a veces los espermatozoides están tan aglutinados que su movimiento es limitado. Debe
anotarse cualquier espermatozoide móvil que se pegue entre sí por la cabeza, la cola o las piezas intermedias.
examen
2. Básico
Los espermatozoides móviles adheridos a células o desechos o los espermatozoides inmóviles adheridos entre
sí (agregación) no deben calificarse como aglutinación.
Debe registrarse el tipo principal de aglutinación (que refleja el grado y el sitio

de unión).(52)(figura 2.2).
examen
3. Extendido
Fig. 2.2 Diagrama esquemático de diferentes grados de aglutinación de esperma
Grado de aglutinación
4. Asqueroso
1. aislado 2. Moderado 3. Grande
(todos los espermatozoides
Partes involucradas
(< 10 espermatozoides/ (10-50 espermatozoides/ (aglutina
aglutinado,
aglutinar, aglutinar, > 50 espermatozoides, algunos
y aglutina
examenes
4. Avanzado
muchos espermatozoides libres) esperma libre) espermatozoides todavía libres)

interconectado)
A. Cara a cara
tecnicas
B. Se ve que las cabezas de cola a
cola están libres y se separan de los
aglutinados
de espermatozoides
C. Punta de cola a punta de cola

D. Mixto (aglutinaciones claras de

cabeza a cabeza y de cola a cola)
8. Apéndices
E. Maraña (cabezas y colas

enredadas. Las cabezas no están
libres de aglutinados ya que están en
aglutinación cola con cola)
Reimpreso de Rose et al. (1976) con permiso.

9. Referencias
22
1. Introducción
2.4.5 Elementos celulares distintos de los espermatozoides
El eyaculado contiene células distintas de los espermatozoides, algunas de las cuales pueden ser
clínicamente relevantes. Estos incluyen células epiteliales del tracto genitourinario, así como leucocitos
y células germinales inmaduras, las dos últimas denominadas colectivamente "células redondas".(53).
Sin embargo, no es posible distinguir entre leucocitos y células germinales inmaduras con un alto
examen
2. Básico
grado de certeza.(54)mediante el examen de un frotis teñido con un aumento de × 1000 (verFigura

2.16 en la página 63,Figura 2.17 en la página 70y Sección 3.7 en la página 119). Otras técnicas para
identificar células inflamatorias activas se describen en (Sección 3.5 en la página 116). El valor clínico
de estas pruebas no está claro, por lo que no existen límites basados en la evidencia.(55-57). Ver
tambiénSección 2.4.8 en la página 28.
examen
3. Extendido
2.4.6 Motilidad de los espermatozoides
El grado de motilidad progresiva de los espermatozoides está relacionado con las tasas de embarazo(58-60). El
número total de espermatozoides progresivamente móviles en el eyaculado tiene importancia biológica. Se
obtiene multiplicando el número total de espermatozoides en el eyaculado por el porcentaje de células
progresivamente móviles. Los métodos de evaluación de la motilidad que involucran el análisis de esperma
asistido por computadora (CASA) se describen enSección 4.5.1 en la página 155.

examenes
4. Avanzado
Si la licuefacción del eyaculado se completa dentro de los 30 minutos, entonces se deben iniciar las
investigaciones. En caso de licuefacción incompleta después de 30 minutos, el eyaculado se puede
dejar en la incubadora a 37 °C durante otros 30 minutos y luego se deben iniciar las investigaciones.
La información sobre el retraso o la falla de la licuefacción debe anotarse en el informe.
La velocidad de los espermatozoides móviles depende de la temperatura. Por lo tanto, es esencial

tecnicas
estandarizar la temperatura durante la evaluación de la motilidad. A menudo es más fácil controlar

una temperatura similar a la temperatura corporal, pero eso requiere que el microscopio esté
equipado con una platina de objeto de temperatura controlada, que los portaobjetos y cubreobjetos
del microscopio estén precalentados, y que la muestra también se caliente a 37 °C antes de la
evaluación. . Estos aspectos se cumplen fácilmente cuando la muestra se licua en una incubadora a 37
°C. Usar la temperatura ambiente es más problemático, sobre todo porque la temperatura ambiente
no está definida y, por lo tanto, puede variar sustancialmente.
de espermatozoides
El uso de una retícula ocular con rejilla (Figura 2.3 en la página 25) para facilitar la
delimitación del área evaluada. Esto es muy útil en muestras con un alto número de
espermatozoides en cada campo.
• Comience siempre a escanear varios campos sin contar para obtener una impresión de qué tan
bien distribuidos están los espermatozoides. Esto se puede hacer con un aumento más bajo (100–
200 aumentos totales).
• Evite evaluar áreas cercanas (< 5 mm) al borde del cubreobjetos para evitar artefactos de
secado que afecten la evaluación de la motilidad.
• La elección de campo debe ser aleatoria; evite elegir campos basados en el número de
espermatozoides observados.
8. Apéndices
• Escanee la diapositiva sistemáticamente para evitar ver repetidamente la misma área. Se

deben evaluar al menos 5 campos diferentes, incluso si se han contado más de 200
espermatozoides en menos de 5 campos.
• Inicie la puntuación de un campo determinado en un instante aleatorio (no espere a que los espermatozoides naden
en el campo o la cuadrícula para comenzar a puntuar).

9. Referencias
23
1. Introducción
• Evalúe la motilidad de todos los espermatozoides dentro de un área definida del campo. Seleccione la parte
del campo o cuadrícula que se va a calificar según la concentración de espermatozoides, es decir, califique
solo la fila superior de la cuadrícula si la concentración de espermatozoides es alta; puntúe toda la
cuadrícula si la concentración de espermatozoides es baja.

examen
2. Básico
• Cuente sistemáticamente, comenzando con los espermatozoides de progresión rápida y lenta para
evitar sobrestimar el número de espermatozoides progresivos. El objetivo es contar todos los
espermatozoides progresivamente móviles en la sección de cuadrícula al instante; evite también
contar aquellos que nadan hacia la sección de parrilla durante la puntuación. En un segundo
recuento, se cuentan los espermatozoides no progresivos e inmóviles que quedan dentro de la
sección de cuadrícula.
examen
3. Extendido
• Evalúe aproximadamente 200 espermatozoides por repetición; cada réplica es una preparación
húmeda fresca separada.
• Si se logra un conteo de 200 espermatozoides antes de que se hayan puntuado todas las categorías de
motilidad de un área, el conteo debe continuar más allá de los 200 espermatozoides hasta que se hayan
contado todas las categorías, para evitar sesgos hacia la categoría de motilidad puntuada primero.
examenes
4. Avanzado
• Compare los valores replicados para verificar si son aceptablemente cercanos. Si es así, proceda con
los cálculos; si no, prepare nuevas muestras. Si tres conjuntos de réplicas no han dado resultados
aceptablemente cercanos, se da como resultado un promedio de las seis evaluaciones, con un
comentario en el informe de que el resultado es el promedio de evaluaciones altamente variables
(lo que indica la incertidumbre inusual que podría ser el resultado). resultado de alícuotas
incongruentes).
tecnicas
• Para evaluar la solución de problemas de motilidad, consulteSección 7.10.3 en la página 207.
2.4.6.1 Categorías de movimiento de esperma
Se recomienda un sistema de cuatro categorías para clasificar la motilidad.

de espermatozoides
Los datos clínicos de la evaluación manual de la motilidad de los espermatozoides y del análisis de
espermatozoides asistido por computadora demuestran que la identificación de los espermatozoides
rápidamente progresivos es importante(12, 61-70). Por lo tanto, las categorías recomendadas son (con
límites de velocidad aproximados):
• rápidamente progresivo (25 µm/s) – espermatozoides que se mueven activamente, ya sea linealmente o en
un gran círculo, cubriendo una distancia, desde el punto inicial hasta el punto final, de al menos 25 µm (o ½
de la longitud de la cola) en un segundo;
• lentamente progresivo (5 a < 25 µm/s) – espermatozoides moviéndose activamente, ya sea linealmente o en
un gran círculo, cubriendo una distancia, desde el punto inicial hasta el punto final, de 5 a < 25 µm (o al
menos una longitud de cabeza a menos de la mitad de la longitud de la cola) en un segundo;
• no progresivo (< 5 µm/s) – todos los demás patrones de movimientos activos de la cola con
8. Apéndices
ausencia de progresión – es decir, nadar en círculos pequeños, la fuerza flagelar desplaza la

cabeza menos de 5 µm (una longitud de cabeza), desde el punto de partida hasta el punto
final; y
• inmóvil: sin movimientos activos de la cola.

9. Referencias
24
1. Introducción
2.4.6.2 Comparación de réplicas y cálculo de resultados

• Calcule las proporciones (%) de las cuatro categorías de motilidad para las dos réplicas
por separado y las proporciones de progresiva y móvil.
• Luego calcule el promedio de las dos réplicas para el grupo dominante (inmóvil o
examen
2. Básico
móvil).
• Calcular la diferencia entre las réplicas del grupo dominante.
• Determine la aceptabilidad de la diferencia deTabla 2.2 en la página 26(la diferencia

máxima entre dos porcentajes que se espera que ocurra en el 95% de las muestras
debido a causas aleatorias. Si la diferencia es mayor que el valor de la tabla, hay menos
examen
3. Extendido
del 5% de probabilidad de que la diferencia se deba a causas aleatorias).
• Si la diferencia entre los porcentajes es aceptable, informe el porcentaje promedio para

cada grado de motilidad: (a) progresiva rápida; (b) lento progresivo; (c) no progresivo;
(d) inmóvil. Si la diferencia es demasiado alta, tome dos nuevas alícuotas de la muestra
de semen, haga dos nuevas preparaciones y repita la evaluación.
Si las réplicas difieren más de la diferencia aceptable, la evaluación no debe repetirse
examenes
4. Avanzado
más de dos veces. Se puede dar como resultado un resultado final del promedio de las
seis evaluaciones, junto con un comentario de que el resultado es incierto debido a la
alta variabilidad entre las evaluaciones repetidas.
• Reporte el porcentaje promedio para cada grado de motilidad al número entero más
cercano.
tecnicas
• La suma de los cuatro grados debe ser 100. Si es 99 o 101, el valor del grupo
dominante se ajusta para dar la suma de 100. Si la suma es < 99 o > 101, se debe
eliminar un error de conteo o cálculo .
Fig. 2.3 Ayudas para evaluar la motilidad de los espermatozoides
(a) Una retícula ocular facilita el recuento de espermatozoides móviles e inmóviles. (b) Selección sistemática de campos para la evaluación de la
de espermatozoides
motilidad de los espermatozoides, al menos a 5 mm de los bordes del cubreobjetos.
> 5mm
8. Apéndices
(a) (b)
9. Referencias
25
1. Introducción
Tabla 2.2 Diferencias aceptables (basadas en un intervalo de confianza del 95 %) entre dos porcentajes para un promedio determinado,
determinadas a partir de recuentos repetidos de 200 espermatozoides (total 400 contados)
Promedio (%)
81–86
56–72
87–90
97–98
20–27
94–96
73–80
45–55
28–44
14–19
10–13
91–93
7–9
2–3
4–6
examen
2. Básico
99
1
Aceptable
2 3 4 5 6 7 8 9 10 9 8 7 6 5 4 3 2
diferencia
examen
3. Extendido
2.4.7 Vitalidad del esperma
La vitalidad de los espermatozoides, estimada mediante la evaluación de la integridad de la membrana de las
células, se puede determinar de forma rutinaria en todos los eyaculados, pero no es necesario cuando al
menos el 40 % de los espermatozoides son móviles. En muestras con poca motilidad, la prueba de vitalidad es
importante para discriminar entre espermatozoides muertos inmóviles y espermatozoides vivos inmóviles. La
presencia de una gran proporción de células vivas pero inmóviles puede ser indicativa de defectos
examenes
4. Avanzado
estructurales en el flagelo.(71, 72); un alto porcentaje de células inmóviles y muertas puede indicar patología
del epidídimo (73, 74) o una reacción inmunológica debida a una infección.
El porcentaje de espermatozoides vivos se evalúa identificando aquellos con una membrana celular
intacta, por exclusión del colorante (las células muertas tienen membranas plasmáticas dañadas que
permiten la entrada de colorantes impermeables a la membrana) o por hinchazón hipotónica. La
prueba recomendada para uso diagnóstico es la prueba de eosina-nigrosina.Prueba de vitalidad
tecnicas
alternativase describen al final de esta sección.
La vitalidad de los espermatozoides debe evaluarse lo antes posible después de la licuefacción de la muestra de semen,
preferiblemente a los 30 minutos, pero en cualquier caso, dentro de la primera hora de la eyaculación, para limitar los
efectos nocivos de la deshidratación o los cambios de temperatura sobre la vitalidad.
2.4.7.1 Test de vitalidad mediante eosina-nigrosina

de espermatozoides
Esta técnica de tinción de un solo paso utiliza nigrosina para aumentar el contraste entre el fondo y las
cabezas de los espermatozoides, lo que los hace más fáciles de distinguir. También permite que los
portaobjetos se almacenen con fines de reevaluación, capacitación y control de calidad.(75, 76).
Preparando los reactivos

1. Eosina Y: disolver 0,67 g de eosina Y (índice de color 45380) y 0,9 g de cloruro de sodio (NaCl)
en 100 ml de agua purificada con calentamiento suave.
2. Eosina-nigrosina: añadir 10 g de nigrosina (índice de color 50420) a los 100 ml de solución de eosina
Y.
3. Hierva la suspensión, luego deje que se enfríe a temperatura ambiente.

8. Apéndices
4. Filtre a través de papel de filtro (p. ej., 90 g/m2) para eliminar los precipitados gruesos y gelatinosos,
y guárdelo en una botella de vidrio oscuro sellada.
9. Referencias
26
1. Introducción
Procedimiento
1. Mezclar bien la muestra de semen.
2. Extraiga una alícuota de 50 µl de semen, mezcle con un volumen igual de suspensión de eosina-
nigrosina (p. ej., en una placa de porcelana o en un tubo de ensayo) y espere 30 segundos.
examen
2. Básico
3. Haga un frotis en un portaobjetos de vidrio y déjelo secar al aire.
4. Examinar inmediatamente después del secado (con riesgo de contaminación del objetivo con
nigrosina), o más tarde después del montaje con un medio de montaje no acuoso
permanente.
examen
3. Extendido
5. Examine el portaobjetos con óptica de campo claro con un aumento de ×1000 e inmersión en aceite.
6. Cuente el número de células teñidas (muertas) o no teñidas (vivas) con la ayuda de un

contador de laboratorio.
7. Evaluar al menos 200 espermatozoides, para lograr un error de muestreo aceptablemente bajo(77).
examenes
4. Avanzado
8. Para solucionar problemas de evaluaciones de vitalidad, consulteSección 7.10.4 en la página 208.
Fig. 2.4 Frotis de eosina-nigrosina observado en óptica de campo claro
Los espermatozoides con cabezas de color rojo o rosa oscuro se consideran muertos (D), mientras que los espermatozoides con cabezas blancas (L) se consideran vivos.
tecnicas
de espermatozoides
Micrografía cortesía de L. Björndahl.

8. Apéndices
Puntuación
1. La nigrosina proporciona un fondo oscuro que facilita la identificación de los

espermatozoides ligeramente teñidos.
2. Con la óptica de campo claro, los espermatozoides vivos tienen cabezas blancas y los espermatozoides
muertos tienen cabezas teñidas de rojo o rosa. Los espermatozoides con una ligera tinción rosada en la
cabeza se evalúan como muertos.

9. Referencias
27
1. Introducción
3. Si la mancha se limita solo a una parte de la región del cuello y el resto del área de la cabeza no está
manchada, esto se considera una "membrana del cuello con fugas", no un signo de muerte celular
ni de desintegración total de la membrana. Estas células deben evaluarse como vivas.
examen
2. Básico
2.4.7.2 Cálculos
1. Calcular el porcentaje de células vivas.
2. Reporte el porcentaje de espermatozoides vitales, redondeado al número entero más

cercano.
examen
3. Extendido
2.4.7.3 Interpretación de los resultados de vitalidad
La información clínicamente interesante se encuentra en muestras con pocos o ningún espermatozoide móvil.
• Determine la proporción de espermatozoides que están vivos e inmóviles.

examenes
4. Avanzado
• Reste la proporción móvil (suma de rápido, lento y no progresivo) de la

proporción en vivo.
• ¿Es la proporción de espermatozoides vivos e inmóviles más del 25-30% de todos los
espermatozoides?
No existe un límite exacto, pero si más del 25-30% de todos los espermatozoides están vivos e
inmóviles, la causa puede ser un problema ciliar genético y, por lo tanto, es probable que no sea
tecnicas
posible mejorar la motilidad de los espermatozoides con ningún tratamiento médico.
2.4.8 Recuento de espermatozoides y otras células
El número total de espermatozoides por eyaculado y la concentración de espermatozoides están

relacionados tanto con el tiempo hasta el embarazo(78)y tasas de embarazo(59, 79), y son predictores
de la concepción(60, 80). Sin embargo, se justifican más datos que correlacionen el número total de
de espermatozoides
espermatozoides con el resultado reproductivo.
El número de espermatozoides en el eyaculado se calcula a partir de la concentración de

espermatozoides y el volumen del eyaculado. Para eyaculaciones normales, cuando el tracto
masculino no está obstruido y el tiempo de abstinencia es breve, el número de espermatozoides se
correlaciona con el volumen testicular.(2, 32, 34, 81)y por lo tanto es una medida de la capacidad de
los testículos para producir espermatozoides(82), la permeabilidad del tracto masculino y,
potencialmente, el número de espermatozoides transferidos a la hembra durante el coito.
La concentración de espermatozoides en el eyaculado, si bien está relacionada con las tasas de

fertilización y embarazo, está influenciada por el volumen de las secreciones de las vesículas
seminales y la próstata.(83)y no es una buena medida de la función testicular.
8. Apéndices
El término “densidad de espermatozoides” (masa por unidad de volumen) no debe usarse cuando se quiere decir
concentración de espermatozoides (número por unidad de volumen).

9. Referencias
28
1. Introducción
2.4.8.1 Resumen del recuento de espermatozoides
• Elija la dilución más apropiada del examen de la preparación húmeda (Sección

2.4.4.3 en la página 20).
• Prepare diluciones mezclando volúmenes exactos de eyaculado y fijador (Tabla 2.1 en la

examen
2. Básico
página 20;Sección 2.4.4.3 en la página 20).
• Si se toma una alícuota de 50 µl de semen con una pipeta de desplazamiento positivo y se diluye
adecuadamente, solo se necesita hacer una dilución.(84, 85). Es necesario examinar y comparar
alícuotas replicadas de la suspensión de esperma.
• Preparar la cámara de recuento (hemocitómetro).

examen
3. Extendido
• Cargue la cámara del hemocitómetro y déjela en una cámara húmeda para permitir que los
espermatozoides se asienten en el fondo de la cámara de recuento.
• Evalúe el número de espermatozoides inmediatamente después de retirarlos de la cámara húmeda (para
evitar los efectos negativos de la evaporación de la cámara de recuento).

examenes
4. Avanzado
• Cuente al menos 200 espermatozoides por réplica.
• Compare los recuentos repetidos para ver si son aceptablemente cercanos. Si es así, proceda con
los cálculos; si no, preparar nuevas diluciones.
• Para solucionar problemas de conteo de espermatozoides, consulteTabla 7.14 en la página 208.

tecnicas
• Calcular la concentración en espermatozoides por ml.
• Calcular el número de espermatozoides por eyaculado.
2.4.8.2 El hemocitómetro con regla de Neubauer mejorada
Se recomienda el uso de cámaras de hemocitómetro con regla de Neubauer mejorada.

de espermatozoides
Los factores de dilución para la cámara de hemocitómetro de Neubauer mejorada se dan

enSección 2.4.4.3 en la página 20. Se pueden usar otras cámaras de hemocitómetro,
pero si tienen diferentes patrones de cuadrícula y áreas, se requieren otros factores de
cálculo. Los hemocitómetros desechables con regla de Neubauer deben ser validados(86).
El hemocitómetro de Neubauer mejorado tiene dos cámaras de recuento separadas, cada una de las
cuales tiene un patrón microscópico de líneas de cuadrícula de 3 mm × 3 mm grabado en la superficie

de vidrio. Se utiliza con un cubreobjetos especial y grueso (grosor n.º 4, 0,44 mm), que se encuentra
sobre las rejillas y está sostenido por pilares de vidrio a 0,1 mm (100 µm) por encima del suelo de la
cámara. Cada área de conteo se divide en nueve cuadrículas de 1 mm × 1 mm. Se hará referencia a
estas cuadrículas con los números que se muestran en la Fig. 2.5.
Según la dilución y el número de espermatozoides contados, se utilizan diferentes áreas de la

8. Apéndices
cámara para determinar la concentración de espermatozoides. En general, la cuadrícula central

se utiliza para contar. Las ocho cuadrículas periféricas se utilizan cuando se han contado menos
de 200 espermatozoides en la cuadrícula central.
9. Referencias
29
1. Introducción
Fig. 2.5 El hemocitómetro con regla de Neubauer mejorada
Ilustración del área inscrita que muestra: las nueve cuadrículas en una cámara del hemocitómetro (panel izquierdo), la rejilla central (C) y ocho rejillas
periféricas (P). La cuadrícula central consta de 25 cuadrados grandes (panel central); y una micrografía de parte de una cámara llena (panel derecho),
que muestra uno de los 25 cuadrados de la cuadrícula central (el cuadrado dentro de un círculo en el panel central) delimitado por líneas triples y que
examen
2. Básico
contiene 16 cuadrados más pequeños. Las ocho cuadrículas periféricas tienen el mismo tamaño que la cuadrícula central, pero los tamaños y números
de los rectángulos más pequeños varían. Con una profundidad de 100 µm, cada una de las nueve rejillas contiene 100 nl.
examen
3. Extendido
examenes
4. Avanzado
Gráficos y micrografía cortesía de L. Björndahl.
Principios para contar en una rejilla de hemocitómetro

tecnicas
• Cuente sólo los espermatozoides enteros (con cabeza y cola).
• Si hay muchas colas de espermatozoides sin cabeza (los llamados espermatozoides

"cabeza de alfiler") o cabezas sin cola, su presencia debe registrarse en el informe. La
concentración se puede estimar en relación con los espermatozoides completos (por
ejemplo, “45 colas sin cabeza por 100 espermatozoides”).
• Si las cabezas de espermatozoides con más de una cola son más de uno de cada cinco (20 por
de espermatozoides
100 espermatozoides contados), se debe informar la frecuencia relativa.
• El límite de un cuadrado grande está indicado por la línea media de los tres.
• El hecho de que un espermatozoide se cuente o no está determinado por la ubicación de su

cabeza; la orientación de su cola no es importante.
Se cuentan todos los espermatozoides sin contacto con los límites (medio de la línea triple) de
un cuadrado grande (Fig. 2.6 panel izquierdo: círculos blancos – contados)

Solo se cuentan los espermatozoides en contacto con los límites inferior o izquierdo; no
aquellos en contacto con los límites superior o derecho (Fig. 2.6 panel central: círculos
blancos - contados; panel derecho: círculos negros - contados).
8. Apéndices
9. Referencias
30
1. Introducción
Fig. 2.6 Qué espermatozoides contar en los cuadrados de la cuadrícula
El centro de las tres líneas define el límite del cuadrado (línea negra, panel izquierdo). Se cuentan todos los espermatozoides dentro del cuadrado
central (círculos blancos). Un espermatozoide con la cabeza en la línea media se cuenta solo si esa línea es el límite inferior o izquierdo del cuadrado (
círculos blancos, panel central), pero no si es la línea superior o derecha del cuadrado (círculos negros, panel derecho).
examen
2. Básico
examen
3. Extendido
examenes
4. Avanzado
Micrografías cortesía de C. Brasil.
2.4.8.3 Preparación y carga de las cámaras del hemocitómetro

1. Humedezca ligeramente la superficie de fijación del cubreobjetos del hemocitómetro ("pilares de la
cámara").
tecnicas
2. Fije el cubreobjetos en las cámaras de recuento presionándolo firmemente sobre los pilares
de la cámara. La iridiscencia (múltiples anillos de Newton) entre las dos superficies de vidrio
confirma la posición correcta del cubreobjetos. Cuantas más líneas, mejor será el ajuste; solo
una o dos líneas indican que las superficies de vidrio no están lo suficientemente cerca y
provocarán una profundidad de cámara incorrecta. Asegúrese de que el cubreobjetos esté
bien sujeto y no se mueva al tocarlo suavemente con la punta de una pipeta.
de espermatozoides
3. Mezcle bien la primera dilución agitando en vórtex durante 15 segundos a alta velocidad. Para evitar
la sedimentación de los espermatozoides, retire inmediatamente un volumen de la suspensión fija
suficiente para llenar toda el área debajo del cubreobjetos sobre una cámara de recuento
(normalmente, aproximadamente 10 µl).
4. Toque con cuidado la punta de la pipeta contra el borde del cubreobjetos de una de las
cámaras.
5. Presione lentamente el émbolo de la pipeta, permitiendo que la cámara se llene por acción
capilar. El cubreobjetos no debe moverse durante el llenado, y la cámara no debe llenarse en
exceso ni por debajo (cuando el aire ocupa parte del área de la cámara).
6. Mezcle la segunda dilución, como se indicó anteriormente, y extraiga inmediatamente una segunda
8. Apéndices
alícuota. Cargue la segunda cámara del hemocitómetro siguiendo los pasos anteriores.
7. Guarde el hemocitómetro horizontalmente durante al menos 10–15 minutos (para permitir la

sedimentación completa de los espermatozoides en la cámara de 100 µm de profundidad) a
temperatura ambiente en una cámara húmeda (p. ej., en papel de filtro saturado de agua en una
placa de Petri cubierta) para evitar la desecación.
9. Referencias
31
1. Introducción
2.4.8.4 Evaluación del número de espermatozoides en las cámaras de recuento
El número de espermatozoides debe evaluarse en ambas cámaras del hemocitómetro. Si los

dos valores concuerdan suficientemente, las alícuotas tomadas pueden considerarse
representativas de la muestra (Sección 2.4.3.2 en la página 18). Es importante recordar que la
ausencia de espermatozoides de la alícuota examinada no significa necesariamente que estén
examen
2. Básico
ausentes del resto del eyaculado.
1. Examine el hemocitómetro con óptica de contraste de fase con un aumento de ×200 (o ×400
si la óptica del microscopio lo permite).
2. El objetivo es contar al menos 200 espermatozoides en cada repetición, para lograr un error de
muestreo aceptablemente bajo.
examen
3. Extendido
3. Primero evalúe el cuadrado grande superior izquierdo en la cuadrícula central de un lado de la

cámara de Neubauer mejorada. Use este número para decidir cuántos cuadrados grandes de la
cuadrícula central evaluar:
• <10 espermatozoides: contar toda la cuadrícula (25 cuadrados grandes)

examenes
4. Avanzado
• 10–40 espermatozoides: contar 10 cuadrados grandes
• > 40 espermatozoides: cuente 5 cuadrados (por ejemplo, 4 esquinas y el centro).
Nota:Si se cuentan menos de 200 espermatozoides en el número predeterminado

de cuadrados grandes, extienda el conteo al siguiente número mayor de cuadrados
grandes arriba. Si se han evaluado los 25 cuadrados grandes de la cuadrícula
tecnicas
central sin llegar a los 200 espermatozoides, considere contar también de 1 a 8 de

las cuadrículas periféricas (Fig. 2.5).
4. Tome nota del número de cuadrados o cuadrículas grandes evaluados para llegar a por lo
menos 200 espermatozoides. Se debe contar el mismo número de cuadrados grandes o
cuadrículas desde la otra cámara del hemocitómetro.
5. Contar el número de espermatozoides con la ayuda de un contador de laboratorio.

de espermatozoides
6. Cambie a la segunda cámara del hemocitómetro y realice el recuento de réplicas en el

mismo número de cuadrados o cuadrículas que la primera réplica, incluso si arroja
menos de 200 espermatozoides.
7. Calcula la suma y la diferencia de los dos números.

8. Determine si la diferencia entre los recuentos repetidos es aceptable a partir de la

Sección 2.4.8.5.
• Si la diferencia es aceptable, calcule la concentración (Sección 2.4.8.6 en la página 34) y

número total de espermatozoides por eyaculado (Sección 2.4.8.7 en la página 35).
•
8. Apéndices
Si la diferencia es demasiado alta:
• Primero, cargue un hemocitómetro nuevo a partir de las diluciones duplicadas y cuente. Si la diferencia
sigue siendo demasiado alta, cuente una tercera vez.
• Si la diferencia sigue siendo demasiado alta después de tres recuentos de réplicas, se calcula el
promedio de todas las cuentas y se incluye un comentario sobre la mayor incertidumbre del
resultado en el informe final.
9. Referencias
32
1. Introducción
2.4.8.5 Comparación de diferencia entre recuentos repetidos

Encuentra la fila que contiene tu suma de espermatozoides contados en la columna con
el rango de sumas. Si la diferencia encontrada entre los recuentos de réplicas es menor o
igual que el límite de diferencia en la columna a la derecha del rango de sumas, puede
aceptar las evaluaciones de réplicas y calcular el resultado final.
examen
2. Básico
La tercera columna da una indicación de la incertidumbre del resultado final en función del número de
observaciones (número de espermatozoides evaluados). Con pocas observaciones, se pueden aceptar
recuentos repetidos con una diferencia menor, pero el resultado final es aún menos seguro debido al
número limitado de observaciones (verSección 8.6 en la página 234).
examen
3. Extendido
Tabla 2.3 Comparación de la diferencia entre recuentos repetidos y relación con la

incertidumbre del resultado
Error del resultado final basado

Rango de sumas Limite la diferencia
en el número de observaciones
969–1000 61 3,2%
examenes
4. Avanzado
938–968 60 3,3%
907–937 59 3,3%
876–906 58 3,4%
846–875 57 3,4%
817–845 56 3,5%
788–816 55 3,6%
tecnicas
760–787 54 3,6%
732–759 53 3,7%
704–731 52 3,8%
678–703 51 3,8%
651–677 50 3,9%
625–650 49 4,0%
de espermatozoides
600–624 48 4,1%
576–599 47 4,2%
551–575 46 4,3%
528–550 45 4,4%
504–527 44 4,5%
482–503 43 4,6%
460–481 42 4,7%
438–459 41 4,8%
417–437 40 4,9%
396–416 39 5,0%
8. Apéndices
376–395 38 5,2%
357–375 37 5,3%
338–356 36 5,4%
319–337 35 5,6%
9. Referencias
33
1. Introducción
Error del resultado final basado

Rango de sumas Limite la diferencia
en el número de observaciones
301–318 34 5,8%
284–300 33 5,9%
examen
2. Básico
267–283 32 6,1%
251–266 31 6,3%
235–250 30 6,5%
219–234 29 6,8%
206–218 28 7,0%
190–205 27 7,3%
examen
3. Extendido
176–189 26 7,5%
163–175 25 7,8%
150–162 24 8,2%
138–149 23 8,5%
126–137 22 8,9%
examenes
4. Avanzado
115–125 21 9,3%
105–114 20 9,8%
94–104 19 10,3%
85–93 18 10,8%
76–84 17 11,5%
tecnicas
67–75 dieciséis 12,2%
59–66 15 13,0%
52–58 14 13,9%
44–51 13 15,1%
38–43 12 16,2%
32–37 11 17,7%
de espermatozoides
27–31 10 19,2%
22–36 9 21,3%
17–21 8 24,3%
13–16 7 27,7%
10–12 6 31,6%
7–9 5 37,8%
5–6 4 44,7%
3–4 3 57,7%
2 2 70,7%
1 1 100,0%
8. Apéndices
2.4.8.6 Cálculo de la concentración de espermatozoides a partir del recuento de espermatozoides
La suma de los dos conteos repetidos aceptados se divide por un factor que está determinado
por la dilución y el número de cuadrados o cuadrículas grandes evaluados en ambas cámaras
de conteo (si se han realizado tres intentos sin llegar a un acuerdo suficiente entre los conteos
repetidos, el promedio de los se utilizan tres sumas).
9. Referencias
34
1. Introducción
Tabla 2.4 Cálculo de la concentración de espermatozoides a partir del conteo de espermatozoides
Número decuadrados grandes Número derejillascontados en cada cámara

contados en cada cámara
2 3 4 5 6 7 8 9
5 10 25
examen
2. Básico
Dilución
Valores del factor de corrección
1:2 20 40 100 200 300 400 500 600 700 800 900
15 8 dieciséis 40 80 120 160 200 240 280 320 360
1 : 10 4 8 20 40 60 80 100 120 140 160 180
examen
3. Extendido
1: 20 2 4 10 20 30 40 50 60 70 80 90
1: 50 0.8 1.6 4 8 12 dieciséis 20 24 28 32 36
Nota:Un hemocitómetro confallo de Neubauer mejoradotiene dos cámaras de conteo.

Cada cámara de conteo consta de nueve (3×3) rejillas de igual tamaño. El central
examenes
4. Avanzado
cuadrículaconsiste en25 cuadrados grandes, cada uno rodeado por una línea de triplete,
mientras que los 8 campos periféricos constan cada uno de 16 a 20 rectángulos.
Si se cuentan menos de 25 espermatozoides en cada cámara, la concentración será < 55 555

espermatozoides/ml si se utiliza una dilución 1+1 (1 : 2)(87). El error estimado del resultado es
superior al 14% (Tabla 2.3) (a mayor dilución, el resultado de la concentración será mayor pero
con el mismo alto error estimado, > 14%). Indique el número de espermatozoides observados
tecnicas
con el comentario "Se contaron muy pocos espermatozoides para una determinación precisa
de la concentración (< 56 000/ml)". Ver tambiénSección 2.4.8.8 a continuación cuando se
requiere una evaluación precisa del bajo número de espermatozoides.
2.4.8.7 Cálculo del número total de espermatozoides
• Es fundamental calcular e informar el número total de espermatozoides por eyaculado, ya

de espermatozoides
que este parámetro proporciona una medida mucho mejor de la producción de

espermatozoides testiculares y del número de espermatozoides transferidos a la hembra
durante el coito. Esto se obtiene multiplicando la concentración de esperma por el volumen
de toda la eyaculación.
• El número total de espermatozoides debe informarse como un número entero (sin lugares
decimales) de millones de espermatozoides, con la única excepción de números inferiores a
10 millones, donde un lugar decimal puede ser aceptable en aras de la claridad en el rango
inferior de resultados, aunque la variabilidad analítica justifica el uso de un lugar decimal.
2.4.8.8 Bajo número de espermatozoides

8. Apéndices
Si no se observan espermatozoides en las preparaciones húmedas duplicadas, se puede

sospechar una falta total de espermatozoides (azoospermia). Aunque se ha sugerido que la
definición debería cambiar(88, 89), la azoospermia sigue siendo una descripción de los
hallazgos en el eyaculado y no un diagnóstico o una base para la terapia. En general, se acepta
que el término azoospermia solo puede usarse si no se encuentran espermatozoides en el
sedimento de una muestra centrifugada.(90).
9. Referencias
35
1. Introducción
Sin embargo, se debe tener en cuenta que:
• el hecho de que se encuentren o no espermatozoides en el sedimento depende del tiempo y

la velocidad de centrifugado(91, 92)y en cuanto de la pastilla se examina;
examen
2. Básico
• la centrifugación a 3000 g durante 15 minutos no sedimenta todos los espermatozoides de una

muestra(93); y
• después de la centrifugación, se puede perder la motilidad(46), y la concentración será

subestimada(87); si se han realizado recuentos en una muestra centrifugada, esto debe
indicarse claramente en el informe final.
examen
3. Extendido
La forma en que se manipulan estas muestras depende de si los datos cualitativos sobre la presencia y
la motilidad de los espermatozoides son suficientes o si se necesita un número exacto de
espermatozoides (verExamen de eyaculados no centrifugados para detectar espermatozoides
móvilesabajo yExamen de muestras centrifugadas para detectar espermatozoides
independientemente de su motilidad en la página 41) cuando se requiere la evaluación de un bajo
número de espermatozoides.
examenes
4. Avanzado
Aunque se pueden obtener estimaciones aproximadas de bajas concentraciones de espermatozoides usando
una dilución 1+1 (1 : 2) si se examinan las nueve cuadrículas, el error estimado es alto. Además, el análisis de
eyaculados diluidos tan poco puede mostrar una gran cantidad de fondo bajo el microscopio. La exploración
de cámaras grandes puede llevar de 10 a 20 minutos, pero la detección rápida de espermatozoides puede
facilitarse mediante el uso de un tinte fluorescente(87). Debe tenerse en cuenta que los valores obtenidos por
los métodos a continuación deben considerarse una estimación porque se cuentan muy pocos
espermatozoides y los volúmenes pueden ser inexactos.

tecnicas
Examen de eyaculados no centrifugados para detectar espermatozoides móviles

Cuando la detección de espermatozoides móviles es esencial, es importante determinar si los procedimientos
de centrifugación utilizados pueden dañar los espermatozoides y afectar la motilidad de los espermatozoides
y, por lo tanto, causar resultados falsos. Si se utilizan muestras centrifugadas, el laboratorio debe asegurarse
de que sus procedimientos no perjudiquen la motilidad de los espermatozoides o la capacidad de fertilización.

de espermatozoides
Estimación de la concentración escaneando preparaciones húmedas

1. Use dos preparaciones húmedas consecutivas (Sección 2.4.3.3 en la página 18).
2. Escanee todo el cubreobjetos sistemáticamente campo por campo. Comience en una esquina y
escanee a lo largo del eje x hacia el lado opuesto; luego mueva un campo a lo largo del eje y y
escanee hacia atrás a lo largo de todo el ancho. Continúe de esta manera en zig-zag para realizar
una búsqueda completa y sistemática de toda la alícuota (Fig. 2.7). Siga observando la diapositiva
mientras cambia de campo.
• Con un objetivo ×20 y un ocular ×10 de 20 mm de apertura, el campo del microscopio tiene un
diámetro de aproximadamente 1000 µm (Sección 2.5.9 en la página 67). Por lo tanto, habrá
aproximadamente 484 campos por cubreobjetos de 22 mm × 22 mm para examinar.
3. A partir del número de espermatozoides móviles e inmóviles observados en 10 µl o 20 µl, se

8. Apéndices
puede calcular una concentración aproximada multiplicando el volumen total de eyaculación

por el número de espermatozoides observados y un factor:
N = número observado de espermatozoides
Vol = volumen de eyaculación (ml)
Factor (100 para 10 µl examinados, 50 para 20 µl
examinados) Concentración (esperma/ml) = N × Vol × factor
9. Referencias
36

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Manual de laboratorio de la OMS para

ISBN 978-92-4-003078-7 (versión electrónica)

© Organización Mundial de la Salud 2021

Propiedad Intelectual (World Intellectual Property Organization) (http://www.wipo.int/amc/en/mediation/rules/ ).

Diseño gráfico por Lushomo

De la Organización Mundial de la Salud .............................................. .................................................... ...........

Capítulo 1 Introducción .............................................. .................................................... ...............................1

1.1 Alcance del manual ............................................... .................................................... .................................................... ...............1

Capítulo 2: Examen básico .............................................. .................................................... ........................9

2.1 Introducción.................................................. .................................................... .................................................... ..........................9

Capítulo 3: Examen ampliado ............................................... .................................................... ..........83

3.1 Índices de defectos espermáticos múltiples ........................................... .................................................... .......................................83

Capítulo 4: Exámenes avanzados.................................................... .................................................... ............139

5.1 Introducción.................................................. .................................................... .................................................... ....................... 161

Capítulo 6: Criopreservación de espermatozoides ........................................... .......................................... 171

6.1 Introducción.................................................. .................................................... .................................................... .......................171

Capítulo 7: Garantía de calidad y control de calidad........................................... .............................................185

7.1 Control de calidad en el laboratorio de andrología ........................................... .................................................... ..........185

Capítulo 8: Apéndices ............................................... .................................................... ............................. 211

Capítulo 9: Referencias .............................................. .................................................... .............................247

Cuadro 2.5 Pasos de fijación y tinción de Papanicolaou ............................................... .................................................... ...............47

Tabla 2.7 Placa Papanicolaou 1 ............................................... .................................................... ..........................................................56

Tabla 7.12 Calendario de tiempo para QC ........................................... .................................................... .......................................... 206

Tabla 8.1 Definición de población de referencia en Campbell et al.(5).................................................... ....................................212

mostrando la distribución de volumen, espermatozoides, motilidad progresiva, zinc y fructosa .......................137

losManual de laboratorio de la OMS para el examen de semen y esperma humanos –

El manual es un documento de referencia para los procedimientos y métodos para el análisis y

sexual y reproductiva masculina.

La sexta edición de laManual de la OMS para el examen y procesamiento de laboratorio de

Dr. Ian Askew

ANOVA, Clínica de Endocrinología, Hospital Universitario Karolinska y Departamento de

Profesora Elisabetta Baldi, Doctora en Biología

Profesor Christopher LR Barratt PhD, DSc, FRSE

Profesor Mario Philip R. Festin, MD, MSc, MHPEd

Dr. Jackson C. Kirkman-Brown, MBE, PhD Ciencia reproductiva,

Dr. Michael Mbizvo, PhD

Prof. Dr. Stefan Schlatt, PhD

Dr. Igor Toskin, MD, PhD, DSc

Dra. Christina Wang, MD

MUDr. petr huska

Un agradecimiento especial a la Sra. Natalie Narkie Maurer, Asistente y Secretaria

Se agradece mucho el apoyo, el asesoramiento y la asistencia de Susan Norris, Rebekah

El Departamento de Investigación y Salud Sexual y Reproductiva de la Organización

• Dr. Christoph Brenker, Científico Postdoctoral, Centro de Medicina Reproductiva y

• Dr. Meurig Gallagher, Investigador, Centro de Modelado de Sistemas y Biomedicina Cuantitativa,

• Dra. Monica Muratori, asistente de investigación, Departamento de Medicina Clínica y Experimental,

• Dra. Sara Marchiani, asistente de investigación, Departamento de Medicina Experimental y Clínica,

El Dr. Wang es profesor de medicina en la Escuela de Medicina David Geffen de la

La Dra. Wang es una investigadora reconocida internacionalmente en biología y medicina

La Organización Mundial de la Salud desea reconocer la destacada contribución del Dr.

CASA Biggers, Whitten y Whittingham

CASMAevaluación morfométrica de espermatozoides asistida por computadora

CD45 grupo de determinación 45 (pan-marcador leucocitario)

ADN centrifugación en gradiente de densidad

GEYC yema de huevo-citrato virus de

VIH inmunodeficiencia humana campo de

HPF alta potencia

HSA albúmina de suero humano

HTF líquido tubárico humano

ICSI inmunoglobulina para inyección

CCI unidad internacional de

IU control de calidad interna