Dr. BOUCHEKRIT M.

Travaux pratiques TAB, M1/BC

Centre universitaire Abd-Elhafid BOUSSOUF, Mila

Département des Sciences de la Nature et de la Vie

TP N. 02 Méthodes d’Analyses

Centrifugation en gradient de densité

Manipulation

1. Homogénéisation
On doit d’abord broyer le matériel biologique. Cette approche se fait dans de l’eau
physiologique pour briser les cellules et en libérer le contenu. Le tissu est coupé en petits
morceaux et mis dans le tube de l’homogénéisateur, l’ensemble est ensuite broyé. L’échantillon
est déposé entre les côtés du tube et le pilon.
- Allumer l’homogénéisateur et augmenter la vitesse du pied broyeur progressivement ;
- Enfoncer, puis lever le pilon jusqu’à l’obtention d’un lysat où il y a le minimum de grosses
particules ;
- Filtrer plusieurs fois.

2. Préparation des dilutions

- A partir de la solution mère de 60 %, préparer 2 ml (ou 1ml) de 4 dilutions comme suit : 50%,
40%, 30 % et 10% ;
- Déposer les dilutions, délicatement, une par une selon un ordre décroissant ;
- Ne pas mélanger

3. Centrifugation
- Prendre le tube de centrifugation et le soumettre à une centrifugation de 3000 rpm pendant 10
min
- Equilibrer le poids autour de l’axe de rotation. On veille pour que le poids des tubes qui sont
face à face dans le rotor soit identique.

Compte rendu
- But, principe, matériel et méthode ;
- Décrire le résultat trouvé (nombre de couche et de couleurs) ;
- Expliquer ; que contient chaque couche.