SESLVELEVVVITTVVVVTVVEEr ye beeuese Guia Prctica de Laboratorio de Micolgla Mésiea Tarea 1 9) lnvestigar qué medios de cultivo se utiizan para el aislamiento de hongos. y qué Caracteristicas 0 componentes los hacen ser selectivos. Tomando en cuenta su composicién ‘Quimica e indicar oval es la fuente de carbono y nitrégeno (lenar taba). ) Realizar un resumen de las medidas de seguridad e higiene que se requieren y que son ‘obigatorias para trabajar en un Laboratorio de Microbiologia (anctar datos). ©) Hacer un diagrama de flujo INDICANDO: los medios y las condiciones de cultvo; asi como las técnicas de siembra que ulilizaria para aisiar e identficar a un hongo flamentoso del género Aspergilus@ partir de una muestra de un futo en descomposicién, 1 requiere anoxa hojas extras. ‘Tabla 1. Medios de cultvo utlizados en el aislamiento e identificacién de hongos PARA QUE TIPO FUENTE DE AGENTE QUE LO MEDIO DE CULTIV| —‘Gargono | PEMVESTRASSE | cr sececrivO Vanspswpones| pao 7 Fon. Glucose Byers a8 SDA eka o 5 Claverticat micobiotn ue aro yeros = Kenda areto y aay i Duteencial | © Parosenos | Clore ‘Agar Rosa de Hongos Cloranmprcol Bengala Giese Saprobios 2) RESUMEN DE MEDIDAS DE SEGURIDAD EMPLEADAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA. Usor bea “Usor panialon 4 2aeai0 conede: No Camer » Montener la Ventana c3orradas Usa Z z ae May r S(Gua Préctica de Laboratorio de Micologia Médica DIAGRAMADE FLUO ‘C9 ar hosta | Esegpeel Sustato cmtmndd Guardario en on Cnrenedor lime > Sa & une 5 tequire forte Trebojor en = —aalel = Esientizar class Se eiiaeoher- Pequdo fragmento Swen vor eSpace. cent ed Si @ e qoRonia _— ties dete Traunor o alsa Sembrar de 7 @iaca at tube de ae aes : connate FEE aa is — om ey a Ser mbar od siestor cape Sr < esxesth Gms Beipor fi MBC de Ya Sdias @oo@a eq eee eTerrerrrrrrrrrrnrnnecnecece «P forol £07 nS 4-7-0 aay Colocar colome eae Quin foo 4 ee gt, eam macnsainrne desig MSS raaTa cube Seeds ae, Explicacién general de la practica Modiante lluvia de ideas analizar los siguientes puntos: 1. Fuentes de aislamiento de hongos saprobics y patégenos. 2. Condiciones ambientales que favorecen el desarrollo de os hongos, 3. Técnicas que se utilizan para el aislamiento de hongos. Aislamiento de hongos de diversos sustratos A) Siembra de sustratos solidos: 1. Limpiar la mesa de trabajo y colocar los substratos solides (quayeba, naranja,jitomate, papa, calabaza, hojas, granos, insectos, papel periédico, etc.) en cajas de Petr 2. Flamear el bisturly las pinzas de diseccién y cortar los substratos en fragmentos pequefos. 3. Con ayuda del asa micolégica 0 con las pinzas previamente flameadas, sembrar los fagmentos en los medios de Papa Dextrosa Agar (PDA) y Rosa de Bengala (RB), por la técnica de punto o impronta en caja. 4. Incubar a 28°C por 48 a 72h 8) Siembra de sustratos liquidos 0 semisélido: 1. Enel caso de leche, jugo de pita o crema se realizara la siembra por la técnica de estia cruzada 0 por siembra masiva dependiendo de la carga microbiana de la muestra, Esta se realizara con el asa bacteriolégica en medios de PDA o RB. Incubar a 28°C por 48 a 72h. ©) Siombra de suelo: 1. Colocar una pequefia porcién de suelo 1 g en un tubo que contiene 9 mL de agua destilada estéril (dilucién 10.) 2. Agitar euidadosamente y dejar sedimentar 3. Con ayuda de una pipeta estéri hacer dluciones hasta 1 x 10 4. De la dilucién 1 x 10.4y 1 x 103 tomar 100 iL con una pipeta estéril y colocar el inoculo en tuna caja con medio de RB y otra de PDA 5. Extender el inoculo con una varila acodada 6. Incubar a 28°C por 48 a 72 h. D) Exposicién de placas al ambiente: BVIVILITIIITVTTUVDUDUTUU OOO CeO’ iia Prictica de Laboratorio de Micologla Média 1. Revisar las cajas de PDA y RB, en caso de que ain no haya desarrollo, evar a incubar @ 28°C hasta la aparicitn de colonias sospechosas de hongos (crecimiento radial, filamentoso, on pigmento). 2. Una vez que se encuentran estas colonias en las cajas, se seleccionan aquellas que llamen su atencién y se descriven las caracteristcas morfolégicas de la misma, por ejemplo: color, aspecto y superficie. 3. Dela colonia seleccionada s realiza una resiembra en tubo con medio de PDA, por la técnica de punto. Es conveniente que se ponga suficiente indculo, Incubar a 28°C de 48 a 72h 4, De la colonia seleccionada también s ealizaré una preparacién directa con azul de algodén lactofenol y se observara al micrascopio con objetivo de 10 y 40X, lo que consttuye la morfologia microsedpica 5. Realiza un dibujo con nombres de todas las estructuras observadas tanto en la colonia, como fen el microscopio y consulta la bibiografia, BB) Rovisi6n de cajas y tubos sembrados con muestras cl faringoo) a8: (pelo, piel, utas y exudado 1. Revisar los tubos de SDA y Micobidtico, sino hay crecimiento seguir incubando, 2. Com especto al CULTIVO DE EXUDADO FARINGEO, se revisard el tubo de Biggy, asi como las placas de SDA y GS, se seleccionarén aquellas colonias sospechosas de ser levaduras, esto se levard a cabo con ayuda del profesor y siguiendo sus indicaciones. 3. Una vez seleccionade la colonia se reaizard un frotis y se hard lating de Gram. Observar ‘al microscopic @ 40 y 100X y hacer un dibujo con nombres de todas las estructuras ‘observadas y consulta la bibliografia 4. Si se comprueba que la colonia corresponde a una levadura se sembraré por estia abierta ‘en un tubo que contiene SDA, Incubar a 28°C por 48 a 72 h. Tarea2 2) Consultar como se describe la morfologia colonial de los hongos. ) Definir ita, micelio y consultar algunas estructuras de reproduccién asexual que presentan los hongos (cons). \ m ‘i Micelio Conjunto d@hifas i a SS ee 5ula Prctica de abocatorio de Mlcoogia Mésica 1. Eliminar el glicerol al 10% de los microculivs hechos por la técnica tradicional usando tuna jeringa de 10 mi. 2. Adicionar formol al 10% para la inactvacién del hongo e incubar por 1 hora y media temperatura ambiente A 3. Usar azul de algodn lactotenol para hacer las preparaciones fas, usando tanto el cubre ‘como el portaobjeto, B) Induccién de estructuras de reproduccién sexual Las estructuras de reproduccién sexual de algunos hongos se pueden inducir usando medios de cultivo especifices que favorezcan su desarrollo ‘ 1 1. Sembrar la levadura Saccharomyces cerevisiae (ascomiceto) por la técnica de estria cruzada len los medios de agar ascospora, agar Gorodkowa y PDA a pH. Incubar a 28°Cpor 72 h 2. Sembrar en el centro de una caja de Petri con medio PDA la cepa del hongo homotalico Zygorrhynchus sp, incubar @ 28°C de 48 0 72. Para la préxima sesién de laboratorotraer un hongo basidiomiceto por equipo (adquiito en ‘el mercado, bosque o centro comercial por ejemplo: Agaricus bisporxs “champinén’), ademas traer su equipo de diseccién ) Siombra de muestras clinicas para la practica de micosis superficiales ‘Tabla 3. Deseripcién de la morfologia colonial y microsc6pica de cepas tipo HONGOS LEVADURIFORMES Morfologia colonial Morfologia microscépica Blasio Kontcos, Género canta sp Bianco Cremasa rodotoute sp Noranye Cremoser Blastoconichos LUVfa yptococcus sp ‘Saccharomyces cerevisiae Blancer Opaces, Pichia sp Bianos opuce> HONGOS DE MICELIO CONTINUO Género Morfologia colonial Rhizopus sp ‘Zygorrhynchus sp ‘Mucor sp Bianca alyoredosa color srs Qtgpndoso _ Morfologia microscépica eseoiangsio Ewpdrangyoeo tas es Porans\etoro Cunninghamella sp Bianca espotansio als doles Columne Wa es Paran 510 folo esPoranstas rar cy) Cafe alsonodoses espotanyi Oph. d espocansio exerci Ble Soe Gl = seiAbsidia sp Blanca A \sonodosa ‘Syncephalastrum sp ae janco~ ans -P es poring bes roionsiospor a. Lb column la SPO langothO cs POI Vol PEE any ol spore Peseoianyio HONGOS FILAMENTOSOS PIGMENTADOS, “llernaria sp | Tamar lwwtadO Nesa Atercopelaca seca Cladosporium sp Tent a cabin, sec Neyia aa Rireraopelada Aureobasidium sp Nesta arteaoee icdla Curvularia sp Nesra ov1euopelada Stachyboiys sp Re Tae ces ec) ParUlenra Género Morfologia colonial _ Morfologia microscépica DuctocomdioS onidio ior 6 idiotFTIUEFIFFIFFIVIFHSEEEEKELEKEVEPECEPEEY Guia Prictca de Laboratorio de Micolgla Média Tioctedium sp Negi0~ Cate Ariedopeiada BE acca comdiotar| Género Fusarium sp Blanca -amariltas A teraopetada Fusarium oxysporum toler Ve tose Pismento dus bY ‘Aspergilus toreas Anverso narenyes Fevers bianco Puiu rola | Aspergitus flavus | camvetso Vercle Yeverso blanco Pulveru una Pracioconigsos Ferwocones fp tratetes wesicela, condiokk, Mctoconvaos| Houde “Aspergills niger ONVeE Tso Negro fevers bianco Polovrrenra, Melanicos Panicum 3p anverse verde Teverso bla Ptveruunra Geatichum sp Bianca Letlose, ATE condos 2Gula Préctca de Laboratorio de Micologla Médica Trichoderma sp ellos aaverso [vede are Ineo Yeverso Ibianco, Peon fae COMA LO 10 ‘Neurospora sp Orsonina Gianuioset Gliocladium sp \ )eteetsO letde exe150 planco \osa Paeclomyces kinverso: bee Neve rs0: blanco Veto sa tengoueo— ‘Scopularopsis 8p Blanco Uellosa Pleurotus sp Macromiceto “Agaricus sp Macromiceto a rdio conti fohtie g Mier conidos, sombre ro| 24 SOeee eee HH HHT HTT TTT TTT TCT TTTORIGEN DEL CONIDO CARACTERISTICAS NOMBRE DE CONIDIO YNYO9O Pp 00 O oO Sen conidios gue se Iman Por Semacisr] B Vastoconichos AIOCe MeO entor Carico Son comicios que Se 4Ofman por fiaSmentacon de Va niga Artiocomclios Paaowe Son umaiutares » Diesentan Oiferemtes Tomas, se presenta de forma catenutedas Microcondios SOerformas cle tests fendia, nacen enon) Arciones aduersas* Se creon apart del Engrosamiento de \o' Nos: Clamidlatan chins Somer Ge dal Yes) eolvmorfos 4 de mauor tamato Que \os riciccon doy Maciacomchos SDReRGNEOS multi Id\Ates Que Se dividen tanto Vanscersal como Wooutumddlmeme- Dictoconictios