Pràctica 6: preparació mostres per

posterior sembra i/o incubació

La preparació de la mostra és una de les passes crucials i més importants per a dur a terme els
posteriors anàlisis microbiològics, sobretot en el cas dels aliments.

La primera dilució que es realitza és la dilució mare (10 -1) i de vegades aquesta dilució mare
té un nombre massa gran de microorganismes, per la qual cosa necessitem fer un banc de
dilucions. De forma general, es pot contar el nombre de colònies en placa si es troba entre 30
i 300ufc. En cas de ser major, es diu que es incontable (>300ufc/ ml o per g). Això vol dir que
si volem quantificar exactament el nombre de bactèries que hi ha, hauré de fer dilucions i
després extrapolar-lo.

MATERIALS I REACTIUS

- Mostra (llet en pols o alguna - Balança

mostra que porteu de casa) - Vòrtex
- Aigua de peptona - Autoclau
- TSA - Plaques de petri.
- Tubs d’assaig
- Pipetes
- ...

PROCEDIMENT

A. APRIMERA PART: preparar medis

- NOMÉS UN GRUP: preparar 1L d’aigua de peptona segons indicacions
- NOMÉS UN GRUP: preparar 500mL de TSA.
- TOTS ELS GRUPS:
- Preparar la quantitat d’aigua de peptona que es necessitarà per preparar un
banc de dilucions d’11 tubs. A cada tub hi posarem 9mL EXACTES.
- Aprox. cada grup prepara 120-150mL d’aigua de peptona seguint
indicacions
 - Es reparteixen el 120-150mL en els diferents tubs i es tapen segons
indicacions
- Es prepara la gradeta per anar a l’autoclau
- Autoclavar
B. Realitzar les primeres passes d’un anàlisi d’aliments (dilució mare, banc de
dilucions…)
- Preparar la dilució mare: Pesa 10 g de la mostra i afegeix-la en 90 mL d’aigua de
peptona. Homogeneïtza-la amb l’stomacher.
- Cada grup: agafa dos tubs d’assaig amb aigua de peptona ja estèrils i etiqueta’ls amb
un -2 i un -3. Sempre que sigui possible, treballar dins campana o devora d’una
encenedor.
- Agafar 1 mL de la dilució mare i afegeix-lo en el tub -2.
- Homogeneïtza el primer tub amb vòrtex i, seguidament, agafa 1 mL del primer tub i
passa’l al segon tub. Homogeneïtza de nou.
- Ara ja tenim el banc de dilucions fetes.
- Agafa dues plaques de TSA
- Rotula les plaques amb la informació necessària: dilució, grup...
- Afegeix 0.1 mL de cada dilució a cada una de les plaques (alerta a equivocar-se i
rotular adequadament)
- Agafa una nansa digralsky y fer la sembra segons indicacions.
- Incubar les plaques a 31ªC durant 18-24hores.
- Acabada la incubació, fes el recompte de bactèries de cada placa.

RESULTATS

En base a aquesta formula i depenent de la dilució utilitzada, digués el nombre de unitats

formadores de colònia que hi ha en la mostra. Si la mostra és sòlida, el resultat es dóna en
UFC/g.